CN112409234A - 一种左旋氟吡咯酮的晶型a及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种左旋氟吡咯酮的晶型A及其制备方法。所述晶型A的其粉末X射线衍射图中，在衍射角2θ处具有特征峰，其中，衍射角2θ的值为5.52°±0.2°、11.06°±0.2°、14.84°±0.2°、15.78°±0.2°、16.64°±0.2°、17.28°±0.2°、18.34°±0.2°、19.19°±0.2°、20.12°±0.2°、20.67°±0.2°、22.57°±0.2°、23.24°±0.2°、23.80°±0.2°、25.24°±0.2°、25.86°±0.2°、27.08°±0.2°、27.82°±0.2°、28.60°±0.2°、30.16°±0.2°、30.94°±0.2°、32.26°±0.2°、33.66°±0.2°、34.14°±0.2°、35.32°±0.2°、36.21°±0.2°、37.16°±0.2°、38.06°±0.2°。本发明提供的左旋氟吡咯酮的晶型A，具有化学稳定性好，无吸湿性，热力学稳定等优点，能够用于后续晶型研究开发。

Description

一种左旋氟吡咯酮的晶型A及其制备方法
技术领域
本发明涉及一种左旋氟吡咯酮的晶型A及其制备方法，属于药物晶型领域。
背景技术
左旋氟吡咯酮，其化学式为C18H16FNO2，中文名称为(S)-5-苯甲基-4-((4-氟苯甲基) 氧代)-1H-吡咯-2(5H)-酮。左旋氟吡咯酮为Rac1(Ras-related C3 botulinum toxinsubstrate 1，Ras相关的C3肉毒素底物1)活性抑制剂，其可能通过结合细胞质中的F-actin，阻止RhoGDI、Coronin1A和Pak-1复合体的形成，以此抑制近膜域Rac1激活，从而挽救记忆缺陷。多项药效学试验表明，其疗效优于多奈哌齐。
阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease，AD)是痴呆的常见病因，也是老龄化人群中并发症和死亡的主要原因之一。AD的神经病理学标志包括细胞外Aβ蛋白沉积形成的淀粉样蛋白斑块以及细胞内磷酸化Tau蛋白聚集形成的神经纤维缠结。并且，患者大脑中炎症反应加剧，代谢速率降低，出现神经元死亡和脑萎缩。严重的大脑损伤导致了患者的认知障碍和活动缺陷，并大幅度地降低了患者的寿命。由于认知功能和活动能力的丧失，患者的生活无法自理，只能接受专业的护理，这给家庭和社会带来了极大的经济负担。
AD的患病率随着年龄增长而增加，一般而言，60岁以后，年龄每增加10岁，痴呆的发病率就会翻倍，治疗负担也逐渐加重。随着中国老龄化程度的加剧，AD患者逐年攀升，目前中国已有超600万名患者。首都医科大学宣武医院贾建平教授团队对 2015年中国AD患者的人均年花费调查发现，我国AD患者的总花费已达1677.4亿美元，占中国GDP的1％，而这一数字到2030年可能会增加至5074.9亿美元。
自百余年前报道首例AD患者以来，无数科学家针对该疾病进行了药物研发，并上市了两类治疗药物，即胆碱酯酶抑制剂和谷氨酸受体拮抗剂，然而这些临床药物疗效均较为微弱。此外，科学家针对毒性蛋白Aβ和tau蛋白的抗体大都宣告失败，针对炎症反应的药物大都惨遭淘汰。近期，中国药监部门有条件批准了通过肠道菌群，降低大脑炎症的抗AD新药GV-971，但可能因其对患者认知的改善较弱，故仍要求其上市后补充进行安全性有效性研究，AD患者依然面临无特效药可用的局面。
前期研究发现，Rac1蛋白参与了主动遗忘的生理调控，该蛋白的活性越高，记忆遗忘的速度就越快，而活性越低记忆维持的就越好。此外，在临床研究中发现，AD 患者的脑组织(海马脑区)中Rac1蛋白活性显著异常升高，且与记忆损伤直接相关，提示患者Rac1活性的升高造成了记忆的加速遗忘，进而导致记忆损伤。在相关基础研究中发现，Rac1活性的升高导致了AD果蝇和AD小鼠的空间记忆缺陷，抑制Rac1 活性可以改善AD动物模型的认知障碍。基于此，利用果蝇和双转基因小鼠两种AD 模型对大批量的活性化合物进行药效学评估，发现JKF-012抑制了遗忘分子Rac1的活性，也在动物模型上具有优异的疗效和巨大的深入开发价值。基于JFK-012进行结构改造，合成200个衍生物，利用果蝇和双转基因小鼠两种AD模型进行评估后，找到数个疗效最佳的新化学实体。对其中6个进行成药性，药代动力学和体外体内毒理评价后，左旋氟吡咯酮凭借其优异的药代特性，血脑屏障通透性和较低的毒性脱颖而出。左旋氟吡咯酮在拯救果蝇和小鼠模型的记忆缺陷方面具有积极的作用。由于左旋氟吡咯酮属于新化学实体，因此目前尚不确定其以何种晶型存在，不同晶型的稳定性如何，因此有必须要对其进行晶型研究。
发明内容
本发明的目的是提供一种左旋氟吡咯酮的晶型A，所述晶型A为粒径约为50μm 的块状晶体，具有良好的物理和化学稳定性。
本发明所提供的左旋氟吡咯酮的晶型A，其粉末X射线衍射图中，在衍射角2θ处具有特征峰，其中，衍射角2θ的值为5.52°±0.2°、11.06°±0.2°、14.84°±0.2°、 15.78°±0.2°、16.64°±0.2°、17.28°±0.2°、18.34°±0.2°、19.19°±0.2°、20.12°±0.2°、 20.67°±0.2°、22.57°±0.2°、23.24°±0.2°、23.80°±0.2°、25.24°±0.2°、25.86°±0.2°、27.08°±0.2°、27.82°±0.2°、28.60°±0.2°、30.16°±0.2°、30.94°±0.2°、32.26°±0.2°、 33.66°±0.2°、34.14°±0.2°、35.32°±0.2°、36.21°±0.2°、37.16°±0.2°、38.06°±0.2°；
Figure BDA0002806498240000021
所述晶型A的差示扫描量热法分析图谱(DSC)在117℃～119℃之间具有一个吸热峰；
所述晶型A加热到110℃时失重仅为1.4％，因此晶型A为无水晶型。
所述晶型A在H2O中的平衡溶解度为0.077mg/mL左右，且所述晶型未发生转变；DVS测试结果显示，所述晶型A样品无引湿性；在PLM测试中，所述晶型A为粒径约为50μm的块状晶体，同时有团聚现象；稳定性试验表明所述晶型A具有良好的物理和化学稳定性。
本发明还提供了左旋氟吡咯酮的晶型A的制备方法，具体为下述几种：
本发明的提供的第一种制备晶型A的方法包括如下步骤：
将左旋氟吡咯酮溶解于良溶剂得到澄清溶液，然后向所述澄清溶液中逐滴加入反溶剂，在搅拌的条件下进行析晶，经过滤和干燥后即得所述左旋氟吡咯酮的晶型A；
若加入约10.0mL所述反溶剂后仍无固体析出则停止试验；
所述良溶剂和所述反溶剂为下述1)-4)中任一种：
1)良溶剂为甲醇、4-甲基-2-戊酮、乙酸乙酯、1,4-二氧六环和二氯甲烷中任一种；反溶剂为正庚烷；
2)良溶剂为异丙醇、乙腈、二甲基亚砜、N-甲基吡咯烷酮、甲醇和N,N-二甲基乙酰胺中任一种；反溶剂为水；
3)良溶剂为三氯甲烷、乙酸异丙酯和2-甲基四氢呋喃中任一种，反溶剂为正己烷；
4)良溶剂为甲苯、丙酮和四氢呋喃中任一种，反溶剂为环己烷；
所述良溶剂的用量为0.1～0.4mL/15mg左旋氟吡咯酮。
本发明的提供的第二种制备晶型A的方法包括如下步骤：
将左旋氟吡咯酮溶解于良溶剂得到澄清溶液，然后将所述澄清溶液逐滴加入至反溶剂中，在搅拌的条件下进行析晶，经过滤和干燥后即得所述左旋氟吡咯酮的晶型A；
所述良溶剂和所述反溶剂为下述1)-3)中任一种：
1)良溶剂为三氯甲烷和甲苯中任一种，反溶剂为正庚烷；
2)良溶剂为甲醇、1,4-二氧六环和丙酮中任一种；反溶剂为水；
3)良溶剂为二氯乙烷和乙酸异丙酯中任一种，反溶剂为环己烷；
所述良溶剂的用量为0.2～0.4mL/15mg左旋氟吡咯酮；
所述良溶剂与所述反溶剂的体积比为0.2～0.4：5。
本发明的提供的第三种制备晶型A的方法包括如下步骤：
将左旋氟吡咯酮溶解于有机溶剂，超声或震荡后取上清液；将所述上清夜置于瓶中并用薄膜密封，所述薄膜上设有3～5个针孔，然后置于室温下缓慢挥发析晶，经过滤和干燥后即得所述左旋氟吡咯酮的晶型A；
所述有机溶剂为甲醇、乙醇、异丙醇、乙腈、丙酮、乙酸乙酯、甲苯、四氢呋喃、 2-甲基四氢呋喃、乙酸异丙酯、甲基叔丁基醚、二氯甲烷和三氯甲烷中任一种；
所述有机溶剂的用量为0.1～0.6mL/15mg左旋氟吡咯酮。
本发明的提供的第四种制备晶型A的方法包括如下步骤：
将左旋氟吡咯酮溶解于有机溶剂，搅拌后取上清液；将所述上清液以0.1℃/min速度从50℃降温至5℃并在5℃恒温至析出固体，经过滤和干燥后即得所述左旋氟吡咯酮的晶型A；
所述有机溶剂为甲基叔丁基醚、乙醇与正庚烷体积比为1:9的混合液、丙酮与环己烷体积比为1：9的混合液、乙酸乙酯与环己烷体积比为1：9的混合液和乙腈与水体积比为1：4的混合液中的至少一种；
所述有机溶剂的用量为0.2～0.4mL/15mg左旋氟吡咯酮，优选0.3mL/15mg左旋氟吡咯酮。
本发明的提供的第五种制备晶型A的方法包括如下步骤：
将左旋氟吡咯酮溶解于有机溶剂Ⅰ或有机溶剂Ⅱ中，室温下搅拌9～11天或50℃下搅拌6～11天，离心收集固体即为所述左旋氟吡咯酮的晶型A；
所述有机溶剂Ⅰ为正庚烷、正己烷、环己烷、水、甲基叔丁基醚、甲醇与水体积比为1：9的混合液、乙醇与水体积比为1：9的混合液、丙酮与水体积比为1：9的混合液、乙腈与水体积比为1：9的混合液、异丙醇与正庚烷体积比为1：9的混合液、乙酸异丙酯与正庚烷体积比为1：9的混合液、甲苯与正庚烷体积比为1：9的混合液、甲基叔丁基醚与环己烷体积比为1：9的混合液、甲苯与环己烷体积比为1：9的混合液和2-甲基四氢呋喃与环己烷体积比为1：9的混合液中任一种；
采用所述有机溶剂Ⅰ时，在室温下进行搅拌；
所述有机溶剂Ⅱ为正庚烷、正己烷、环己烷、水、异丙醇与正庚烷体积比为1：9 的混合液、乙醇与正庚烷体积比为1：9的混合液、乙腈与正庚烷体积比为1：9的混合液、乙酸乙酯与环己烷体积比为1：9的混合液；
采用所述有机溶剂Ⅱ时，在50℃的条件下进行搅拌；
所述有机溶剂Ⅰ或所述有机溶剂Ⅱ的用量为0.2～0.4mL/15mg左旋氟吡咯酮，优选0.3mL/15mg左旋氟吡咯酮。
本发明的提供的第六种制备晶型A的方法包括如下步骤：
将左旋氟吡咯酮置于小瓶中，然后将所述小瓶放置于盛有有机溶剂的容器中，密封所述容器后于室温下静置11～18天，经过滤和干燥后即得所述左旋氟吡咯酮的晶型 A；
所述有机溶剂为水、丙酮、甲基叔丁基醚、乙酸乙酯、异丙醇、四氢呋喃、2-甲基四氢呋喃、1,4-二氧六环、乙腈和二氯甲烷中任一种。
本发明的提供的第七种制备晶型A的方法包括如下步骤：
将左旋氟吡咯酮溶剂于良溶剂中，搅拌后取上清液；然后将所述小瓶放置于盛有反溶剂的容器中，密封所述容器后于室温下静置11～18天，经过滤和干燥后即得所述左旋氟吡咯酮的晶型A；
所述良溶剂和所述反溶剂为下述1)-3)中任一种：
1)所述良溶剂为异丙醇、甲基异丁酮、1,4-二氧六环和乙酸异丙酯中任一种，所述反溶剂为正庚烷；
2)所述良溶剂为丙酮、乙醇、乙腈和甲醇中任一种，所述反溶剂为水；
3)所述良溶剂为2-甲基四氢呋喃或三氯甲烷，所述反溶剂为环己烷；
所述良溶剂的用量为0.2～0.4mL/15mg左旋氟吡咯酮；
所述良溶剂与所述反溶剂的体积比为0.2～0.4：4。
本发明的提供的第八种制备晶型A的方法包括如下步骤：
将左旋氟吡咯酮溶解于良溶剂得到澄清溶液，然后向所述澄清溶液中加入聚合物，置于室温下缓慢挥发析晶，经过滤和干燥后即得所述左旋氟吡咯酮的晶型A；
所述良溶剂和所述聚合物为下述1)-2)中任一种：
1)所述良溶剂为丙酮、三氯甲烷、异丙醇和乙腈中任一种；所述聚合物为聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、聚醋酸乙烯酯、聚氯乙烯、聚醋酸乙烯酯或羟丙基甲基纤维素和甲基纤维素的混合物(质量比可为1：1)；
2)所述良溶剂为甲醇、乙酸异丙酯、甲基叔丁基醚和甲苯中任一种；所述聚合物为聚己酸内酯、聚乙二醇、聚甲基丙烯酸甲酯或海藻酸钠和羟乙基纤维素的混合物 (质量比可为1：1)。
本发明提供的左旋氟吡咯酮的晶型A，具有化学稳定性好，无吸湿性，热力学稳定等优点，能够用于后续晶型研究开发。
附图说明
图1为本发明实施例采用的左旋氟吡咯酮样品的粉末衍射XRPD谱图。
图2为本发明实施例采用的左旋氟吡咯酮样品的DSC谱图。
图3为本发明实施例采用的左旋氟吡咯酮样品的TGA谱图。
图4为晶型A和晶型B的XRPD对比图。
图5为晶型A的XRPD图。
图6为晶型A的TGA/DSC图。
图7为晶型B的XRPD图。
图8为晶型B 5℃干燥后的XRPD图。
图9为晶型B干燥前后的XRPD对比图。
图10为晶型B5℃干燥后的TGA/DSC图。
图11为无水晶型A/B混悬竞争分离固体的XRPD叠图。
图12为晶型A在稳定性放置前后的XRPD叠图。
图13为晶型A的DVS图。
图14为晶型A测试DVS前后晶型对比图。
图15为晶型A的PLM图。
图16为晶型A在纯水中平衡24小时后的XRPD对比图。
图17为晶型B在纯水中平衡24小时后的XRPD对比图。
具体实施方式
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
下述实施例中，XRPD图谱在PANalytical的X射线粉末衍射分析仪上采集，XRPD 测试参数如表1所示。
表1 XRPD测试参数
Figure BDA0002806498240000061
下述实施例中，TGA和DSC图谱分别在TAQ500/5000热重分析仪和TAQ200/2000 差示扫描量热仪上采集，测试参数如表2所示。
表2 DSC和TGA测试参数
Figure BDA0002806498240000062
下述实施例中，偏光显微镜(PLM)偏光显微镜数据通过Axio Lab.A1正置式显微镜在室温下进行采集。
下述实施例中，动态水分吸附(DVS)曲线在SMS(Surface Measurement Systems)的DVS Intrinsic上采集。在25℃时的相对湿度用LiCl，Mg(NO3)2和KCl的潮解点校正。DVS测试参数如表3所示。
表3 DVS测试参数
Figure BDA0002806498240000071
下述实施例中，高效液相色谱(HPLC)高效液相色谱在Agilent 1260HPLC上采集，仪器和测试参数如表4所示。
表4纯度及溶解度测试的HPLC参数
Figure BDA0002806498240000072
下述实施例中，采用的左旋氟吡咯酮样品按照下述方法制备：
1)中间体1的制备
Figure BDA0002806498240000081
将L-苯丙氨酸(20g,121.07mmol)溶于500mL四氢呋喃和水的混合溶液中(v/v 1:1)，冰浴下搅拌10分钟，分批加入氢氧化钠(10.7g,266.4mmol)和二碳酸二叔丁酯 (29.1g,133.2mmol)，加入完毕后室温下搅拌10小时，TLC监测显示反应完全。减压蒸去四氢呋喃，并加入500mL二氯甲烷，搅拌下滴加2N盐酸水溶液至水层pH值为 5左右，分取有机层并用200mL饱和食盐水洗1次，无水硫酸镁干燥，过滤并减压蒸干溶剂得粗产品，产率99％，无需进行进一步纯化即可进行下一步反应。
2)中间体2的制备
Figure BDA0002806498240000082
将中间体1(25g,94.2mmol)溶于500mL无水二氯甲烷中，依次加入米氏酸 (14.9g,103.7mmol)，4-二甲氨基吡啶(17.3g,141.3mmol)，冰浴下搅拌10分钟，滴加二环己基碳二亚胺(21.4g,103.7mmol)的二氯甲烷溶液(100mL)，滴加完毕后，反应液继续在冰浴下搅拌10小时，TLC监测反应完毕。过滤，滤液用5％的硫酸氢钾水溶液洗6次，每次200mL，饱和食盐水洗1次，无水硫酸钠干燥，减压蒸干溶剂得淡黄色固体，加入500mL石油醚搅拌后过滤得目标产物为白色固体(30g,产率77％)，无需进行进一步纯化即可进行下一步反应。
3)中间体3的制备
Figure BDA0002806498240000083
将中间体2(25g，63.9mmol)溶于400mL乙酸乙酯中，回流反应5小时。冷却至室温，减压蒸干乙酸乙酯得白色固体即为目标产物(17.6g,95％)，产物无需进行进一步纯化。
4)中间体15的制备
Figure BDA0002806498240000091
将中间体3(289mg,1.0mmol)溶于5mL乙腈中，室温下依次加入K2CO3(207mg,1.5mmol)，4-氟苄溴(227mg,1.2mmol)，回流反应5小时。冷却至室温，过滤除去固体，蒸干滤液，柱层析纯化得中间体15为无色油状物(158mg，产率40％)。分子量： 397.45.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.34(dd,J＝8.2,5.4Hz,2H),7.19(m,3H),7.10(t, J＝8.5Hz,2H),6.98(m,2H),4.91(s,1H),4.84(m,2H),4.71(dd,J＝5.3,3.0Hz,1H), 3.43(dd,J＝14.0,5.2Hz,1H),3.14(dd,J＝14.0,2.8Hz,1H),1.59(s,9H).13C NMR(100 MHz,CDCl3)δ174.79,168.75,163.06(d,J＝248.3Hz),149.47,134.24,130.21(d,J＝8.4 Hz),130.05(d,J＝3.3Hz),129.59,128.35,127.11,115.93(d,J＝21.7Hz),96.18,82.78, 72.65,60.38,35.55,28.30.19F NMR(376MHz,CDCl3)δ-112.20.
5)左旋氟吡咯酮的制备
Figure BDA0002806498240000092
将中间体15(397mg,1.0mmol)溶于10mL二氯甲烷中，冰浴下加入三氟乙酸 (223μL,3.0mmol)，反应液在室温下搅拌反应5小时。反应完毕后，加入90mL二氯甲烷稀释反应液，10％NaHCO3水溶液洗1洗，饱和食盐水洗1次，无水硫酸钠干燥，过滤，蒸干溶剂，柱层析分离纯化得式1：白色固体360mg，产率为82％。分子量： 297.33.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.37(dd,J＝8.4,5.3Hz,2H),7.27(m,3H),7.18(m, 2H),7.11(t,J＝8.5Hz,2H),5.77(s,1H),5.06(s,1H),4.95(m,2H),4.27(dd,J＝9.2,3.6 Hz,1H),3.21(dd,J＝13.7,3.7Hz,1H),2.67(dd,J＝13.7,9.0Hz,1H).13C NMR(100 MHz,CDCl3)δ175.94,173.55,163.04(d,J＝247.8Hz),136.55,130.64(d,J＝3.5Hz), 130.06(d,J＝8.4Hz),129.27,128.79,127.17,115.91(d,J＝21.7Hz),95.23,72.60,58.86, 38.77.19F NMR(376MHz,CDCl3)δ-112.58.
左旋氟吡咯酮样品的粉末衍射XRPD、DSC谱图和TGA谱图分别如图1-图3所示。
实施例1、晶型的制备
本发明采用反溶剂添加、反-反溶剂添加、缓慢挥发、缓慢降温、悬浮搅拌、气固渗透和气液渗透的方法设置了96个多晶型筛选试验，具体试验方法及结果如表5所示，共发现了2种晶型，命名为晶型A和晶型B。
表5多晶型筛选试验方法及结果
Figure BDA0002806498240000101
1、反溶剂添加试验
共设置了17个反溶剂添加试验。称取约15mg每份的左旋氟吡咯酮样品于20mL 的小瓶内，用0.1～0.4mL的良溶剂溶解后，向该澄清溶液中逐滴加入表6中的反溶剂，边滴加边搅拌至有固体析出。若加入约10.0mL反溶剂后仍无固体析出则停止试验，收集固体并进行XRPD测试。试验结果如表6所示，反溶剂添加试验得到晶型A。
表6反溶剂添加试验方法及结果
Figure BDA0002806498240000102
Figure BDA0002806498240000111
2、反反溶剂添加试验
共设置了8个反反溶剂添加试验。称取约15mg每份的左旋氟吡咯酮样品于3mL 的小瓶内，用0.2～0.4mL的良溶剂溶解后，将上述溶液快速加入装有5mL表7中的反溶剂的20mL玻璃瓶中，边滴加边搅拌至有固体析出。未析出固体的溶液，转移至 5℃条件下放置，若仍无固体析出则转移至-20℃条件下静置。试验结果如表7所示，反反溶剂添加试验得到晶型A/B。
表7反反溶剂添加试验方法及结果
Figure BDA0002806498240000112
*：溶液澄清，转移5℃搅拌未有固体析出，后置于室温敞口挥发析出固体。
3、缓慢挥发
共设置了13个缓慢挥发试验。称量约15mg每份的左旋氟吡咯酮样品至3mL小瓶中，分别加入0.1～0.6mL的溶剂，超声或震荡使样品完全尽可能地溶解，过滤后取其清液。用封口膜密封小瓶并在上面扎3～5个针孔，置于室温下缓慢挥发，收集所得固体并进行XRPD测试。试验结果如表8所示，缓慢挥发结晶试验中得到晶型A。
表8缓慢挥发试验方法及结果
Figure BDA0002806498240000121
4、缓慢降温
共设置了6个缓慢降温试验。称取约15mg每份的左旋氟吡咯酮样品于1.5mL小瓶中，加入0.3mL表9中的溶剂，在50℃下搅拌约2小时后过滤取上清液，将所得上清液以0.1℃/min速度从50℃降温至5℃并在5℃恒温，收集析出的固体并进行 XRPD测试，转移未析出固体的样品至-20℃条件下搅拌。试验结果见表9，缓慢降温试验得到晶型A。
表9缓慢降温试验方法及结果
Figure BDA0002806498240000122
*：-20℃搅拌4天未析出固体，转移至室温挥发3天，A4、A6析出固体，A3成油。
5、室温悬浮搅拌
共设置了15个室温悬浮搅拌试验。称量约15mg每份的左旋氟吡咯酮样品至 HPLC小瓶中，分别加入0.3mL表10中所列的溶剂，得到的悬浮液置于室温下搅拌约9～11天后，离心收集固体并进行XRPD测试。试验结果见表10，悬浮搅拌试验得到晶型A。
表10室温悬浮试验方法及结果
Figure BDA0002806498240000131
6、50℃悬浮搅拌
共设置了9个50℃悬浮搅拌试验。称量约15mg每份的左旋氟吡咯酮样品至 HPLC小瓶中，分别加入0.3mL表11中所列的溶剂，得到的悬浮液在50℃下搅拌 6～11天后，离心收集固体并进行XRPD测试。试验结果见表11，悬浮搅拌试验中得到晶型A。
表11 50℃悬浮搅伴试验方法及结果
Figure BDA0002806498240000132
*：50℃搅拌溶液澄清，814901-12-A8置于室温后析出固体，814901-12-A9室温未析晶，转移到5℃环境后析出固体。
#：该样品的XRPD图与晶型A对比，于～6.3°处多一衍射峰。
7、气固渗透
共设置了10个气固扩散试验。称取约15mg每份的左旋氟吡咯酮样品于3mL小瓶中，另取20mL小瓶并向其中加入约4mL溶剂，将装有起始样品的3mL小瓶敞口置于含不同溶剂的20mL小瓶中，密封20mL小瓶并于室温下静置11～18天。收集固体并进行XRPD测试。试验结果如表12所示，气固渗透试验中得到晶型A。
表12气固渗透试验方法及结果
Figure BDA0002806498240000141
*：无可见固体，将溶液置于室温挥发析晶。
#：该样品的XRPD图与晶型A对比，于～6.3°处多一衍射峰。
8、气液扩散
共设置了10个气液扩散试验。称取约15mg每份的左旋氟吡咯酮样品溶于0.2mL 良溶剂中，过滤取上清液于3mL小瓶中，另取20mL的小瓶并向其中加入约4mL的反溶剂，将上述3mL小瓶敞口置于20mL小瓶中，密封20mL小瓶并于室温下静置。当观察到有固体析出时，则取出固体测XRPD，若无固体析出，则取出后室温挥发至溶剂挥干，收集固体并进行XRPD测试。试验结果如表13所示，气液扩散试验得到晶型A。
表13气液扩散试验方法及结果
Figure BDA0002806498240000151
*：无可见固体，将溶液置于室温挥发析晶。
#：该样品的XRPD图与晶型A对比，于～6.3°处多一衍射峰。
共设置了8个高聚物诱导试验。称取约15mg每份的左旋氟吡咯酮样品溶于 0.1～0.6mL良溶剂中，并过滤得到澄清溶液。每份溶液中加入～2mg相应聚合物的混合物，置于室温条件下缓慢挥发，收集所得固体并进行XRPD测试。试验结果如表14 所示，聚合物诱导析晶试验中得到晶型A。
表14高聚物诱导试验方法及结果
Figure BDA0002806498240000152
本实施例得到的晶型A和晶型B的XRPD对比图如图4所示。
实施例2、晶型的表征
1、晶型A
晶型A(采用室温悬浮搅拌的方式制备，溶剂为水)的XRPD谱图如图5所示，可以看出，晶型A的XRPD谱图中在2θ处存在吸收峰：5.522、11.059、14.842、15.799、16.640、17.279、18.339、19.180、20.119、20.660、22.560、23.239、23.800、25.240、25.860、27.079、27.819、28.598、30.160、30.940、32.261、33.661、34.141、35.320、 36.205、37.160、38.060。
TGA/DSC结果如图6所示，可以看到，加热到110℃时失重1.4％，在117.8℃ (起始温度)处有一个吸热峰。根据加热至分解前较小的TGA失重，晶型A推测为无水晶型。
2、晶型B
晶型B的(814901-08-A1)的XRPD结果见图7。晶型B样品置于5℃干燥1小时后，开始向晶型A发生转变，XRPD结果见图8。室温放置过夜后部分转变成晶型 A，形成晶型A和晶型B的混合物，如图9所示。5℃干燥1小时后样品的TGA/DSC 结果(图10)显示加热到110℃时的失重为1.3％；该样品在86.8℃(峰值)处有一个较宽的放热峰，加热至118.0℃(起始温度)时有一个尖锐的吸热峰，结合XRPD图和晶型A的DSC结果，推测该放热峰为晶型B向晶型A转变的信号。根据加热至分解前较小的TGA失重，推测晶型B为无水晶型。
实施例3、热力学稳定性研究
对晶型A/B进行了室温及50℃下的混悬竞争试验。
称取约4.5mg的晶型B样品至含有饱和晶型A样品混悬液的HPLC小瓶中，在室温(25℃±3℃)和50℃下，磁力搅拌(～1000rpm)约4小时后分离固体并测试 XRPD。试验结果如表15所示，XRPD表征结果(图11)显示晶型A/B在H2O和MTBE 体系中搅拌后均转为晶型A。该试验结果表明，在室温至50℃范围内，相比于晶型 B，晶型A为热力学更稳定的无水晶型。
表15无水晶型A/B间的混悬竞争搅拌试验及结果
Figure BDA0002806498240000161
实施例4、晶型A的理化性质研究
对晶型A的理化稳定性、引湿性和颗粒形貌进行了测定，并测定了晶型A和晶型 B在纯水中的24小时平衡溶解度。
1、晶型A的理化稳定性
将晶型A的固体样品分别放置在80℃/24小时、25℃/60％RH/1周和 40℃/75％RH/1周，通过HPLC面积纯度和XRPD表征结果评估其化学纯度和固体晶型的变化，结果如表16所示。
晶型A样品在80℃条件下放置1天以及25℃/60％RH、40℃/75％RH条件下放置1周后的纯度/起始纯度(面积)％均为100.0％，三种条件下固体晶型未发生变化，表明晶型A具有较好的物理和化学稳定性。固体的XRPD叠图如图12所示。
表16晶型A理化稳定性结果
Figure BDA0002806498240000171
2、晶型A的引湿性
通过动态水分吸附(DVS)测试评估了晶型A的引湿性。
恒温25℃下，DVS测试结果如图13所示，图13显示，当湿度从0％增至80％RH 时，晶型A的样品吸湿增重0.03％，表明晶型A无引湿性。XRPD结果(图14)显示， DVS前后固体的XRPD基本一致。
3、晶型A的颗粒形貌大小表征
通过偏光显微镜(PLM)对晶型A表征测试，如图15所示，该批次晶型A样品为块状晶体，伴有团聚现象，粒径约为50μm。
4、无水晶型A/B在纯水中平衡溶解度
室温下，将2种晶型(晶型A/B)在纯水中磁力搅拌平衡24小时后，离心分离上层清液和下层固体。得到的清液通过0.22μm滤头过滤后测试溶解度，分离的固体则通过XRPD测试晶型是否变化。结果如表17所示，XRPD表征结果如图16和图17，可见，2种晶型在纯水中搅拌平衡24小时后，晶型均为晶型A。
表17无水晶型在纯水中24小时平衡溶解度
Figure BDA0002806498240000172
由上述试验结果可以看出，本发明制备得到的晶型A的稳定性好，有利于该原料药储存、制剂的开发；稳定性良好的晶型能够有效避免制剂开发过程中转晶现象以及因晶型转变造成生物利用度影响。

Claims (10)

1.式Ⅰ所示左旋氟吡咯酮的晶型A，其粉末X射线衍射图中，在衍射角2θ处具有特征峰，其中，衍射角2θ的值为5.52°±0.2°、11.06°±0.2°、14.84°±0.2°、15.78°±0.2°、16.64°±0.2°、17.28°±0.2°、18.34°±0.2°、19.19°±0.2°、20.12°±0.2°、20.67°±0.2°、22.57°±0.2°、23.24°±0.2°、23.80°±0.2°、25.24°±0.2°、25.86°±0.2°、27.08°±0.2°、27.82°±0.2°、28.60°±0.2°、30.16°±0.2°、30.94°±0.2°、32.26°±0.2°、33.66°±0.2°、34.14°±0.2°、35.32°±0.2°、36.21°±0.2°、37.16°±0.2°、38.06°±0.2°；
Figure FDA0002806498230000011
2.根据权利要求1所述的晶型A，其特征在于：所述晶型A差示扫描量热法分析图谱在117℃～119℃之间具有一个吸热峰。
3.权利要求1或2所述晶型A的制备方法，包括如下步骤：
将左旋氟吡咯酮溶解于良溶剂得到澄清溶液，然后向所述澄清溶液中逐滴加入反溶剂，在搅拌的条件下进行析晶，经过滤和干燥后即得所述左旋氟吡咯酮的晶型A；
所述良溶剂和所述反溶剂为下述1)-4)中任一种：
1)良溶剂为甲醇、4-甲基-2-戊酮、乙酸乙酯、1,4-二氧六环和二氯甲烷中任一种；反溶剂为正庚烷；
2)良溶剂为异丙醇、乙腈、二甲基亚砜、N-甲基吡咯烷酮、甲醇和N,N-二甲基乙酰胺中任一种；反溶剂为水；
3)良溶剂为三氯甲烷、乙酸异丙酯和2-甲基四氢呋喃中任一种，反溶剂为正己烷；
4)良溶剂为甲苯、丙酮和四氢呋喃中任一种，反溶剂为环己烷；
所述良溶剂的用量为0.1～0.4mL/15mg左旋氟吡咯酮。
4.权利要求1或2所述晶型A的制备方法，包括如下步骤：
将左旋氟吡咯酮溶解于良溶剂得到澄清溶液，然后将所述澄清溶液逐滴加入至反溶剂中，在搅拌的条件下进行析晶，经过滤和干燥后即得所述左旋氟吡咯酮的晶型A；
所述良溶剂和所述反溶剂为下述1)-3)中任一种：
1)良溶剂为三氯甲烷和甲苯中任一种，反溶剂为正庚烷；
2)良溶剂为甲醇、1,4-二氧六环和丙酮中任一种；反溶剂为水；
3)良溶剂为二氯乙烷和乙酸异丙酯中任一种，反溶剂为环己烷；
所述良溶剂的用量为0.2～0.4mL/15mg左旋氟吡咯酮；
所述良溶剂与所述反溶剂的体积比为0.2～0.4：5。
5.权利要求1或2所述晶型A的制备方法，包括如下步骤：
将左旋氟吡咯酮溶解于有机溶剂，超声或震荡后取上清液；将所述上清夜置于瓶中并用薄膜密封，所述薄膜上设有针孔，然后置于室温下缓慢挥发析晶，经过滤和干燥后即得所述左旋氟吡咯酮的晶型A；
所述有机溶剂为甲醇、乙醇、异丙醇、乙腈、丙酮、乙酸乙酯、甲苯、四氢呋喃、2-甲基四氢呋喃、乙酸异丙酯、甲基叔丁基醚、二氯甲烷和三氯甲烷中任一种；
所述有机溶剂的用量为0.1～0.6mL/15mg左旋氟吡咯酮。
6.权利要求1或2所述晶型A的制备方法，包括如下步骤：
将左旋氟吡咯酮溶解于有机溶剂，搅拌后取上清液；将所述上清液以0.1℃/min速度从50℃降温至5℃并在5℃恒温至析出固体，经过滤和干燥后即得所述左旋氟吡咯酮的晶型A；
所述有机溶剂为甲基叔丁基醚、乙醇与正庚烷体积比为1:9的混合液、甲苯与正庚烷体积比为1：9的混合液、丙酮与环己烷体积比为1：9的混合液、乙酸乙酯与环己烷体积比为1：9的混合液和乙腈与水体积比为1：4的混合液中的至少一种；
所述有机溶剂的用量为0.2～0.4mL/15mg左旋氟吡咯酮。
7.权利要求1或2所述晶型A的制备方法，包括如下步骤：
将左旋氟吡咯酮溶解于有机溶剂Ⅰ或有机溶剂Ⅱ中，室温下搅拌9～11天或50℃下搅拌6～11天，离心收集固体即为所述左旋氟吡咯酮的晶型A；
所述有机溶剂Ⅰ为正庚烷、正己烷、环己烷、水、甲基叔丁基醚、甲醇与水体积比为1：9的混合液、乙醇与水体积比为1：9的混合液、丙酮与水体积比为1：9的混合液、乙腈与水体积比为1：9的混合液、异丙醇与正庚烷体积比为1：9的混合液、乙酸异丙酯与正庚烷体积比为1：9的混合液、甲基叔丁基醚与环己烷体积比为1：9的混合液、甲苯与环己烷体积比为1：9的混合液和2-甲基四氢呋喃与环己烷体积比为1：9的混合液中任一种；
所述有机溶剂Ⅱ为正庚烷、正己烷、环己烷、水、异丙醇与正庚烷体积比为1：9的混合液、乙醇与正庚烷体积比为1：9的混合液、乙腈与正庚烷体积比为1：9的混合液、乙酸乙酯与环己烷体积比为1：9的混合液；
所述有机溶剂Ⅰ或所述有机溶剂Ⅱ的用量为0.2～0.4mL/15mg左旋氟吡咯酮。
8.权利要求1或2所述晶型A的制备方法，包括如下步骤：
将左旋氟吡咯酮置于小瓶中，然后将所述小瓶放置于盛有有机溶剂的容器中，密封所述容器后于室温下静置11～18天，经过滤和干燥后即得所述左旋氟吡咯酮的晶型A；
所述有机溶剂为水、丙酮、甲基叔丁基醚、乙酸乙酯、异丙醇、四氢呋喃、2-甲基四氢呋喃、1,4-二氧六环、乙腈和二氯甲烷中任一种。
9.权利要求1或2所述晶型A的制备方法，包括如下步骤：
将左旋氟吡咯酮溶剂于良溶剂中，搅拌后取上清液；然后将所述小瓶放置于盛有反溶剂的容器中，密封所述容器后于室温下静置11～18天，经过滤和干燥后即得所述左旋氟吡咯酮的晶型A；
所述良溶剂和所述反溶剂为下述1)-3)中任一种：
1)所述良溶剂为异丙醇、甲基异丁酮、1,4-二氧六环和乙酸异丙酯中任一种，所述反溶剂为正庚烷；
2)所述良溶剂为丙酮、乙醇、乙腈和甲醇中任一种，所述反溶剂为水；
3)所述良溶剂为2-甲基四氢呋喃或三氯甲烷，所述反溶剂为环己烷；
所述良溶剂的用量为0.2～0.4mL/15mg左旋氟吡咯酮；
所述良溶剂与所述反溶剂的体积比为0.2～0.4：4。
10.权利要求1或2所述晶型A的制备方法，包括如下步骤：
将左旋氟吡咯酮溶解于良溶剂得到澄清溶液，然后向所述澄清溶液中加入聚合物，置于室温下缓慢挥发析晶，经过滤和干燥后即得所述左旋氟吡咯酮的晶型A；
所述良溶剂和所述聚合物为下述1)-2)中任一种：
1)所述良溶剂为丙酮、三氯甲烷、异丙醇和乙腈中任一种；所述聚合物为聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、聚醋酸乙烯酯、聚氯乙烯、聚醋酸乙烯酯或羟丙基甲基纤维素和甲基纤维素的混合物；
2)所述良溶剂为甲醇、乙酸异丙酯、甲基叔丁基醚和甲苯中任一种；所述聚合物为聚己酸内酯、聚乙二醇、聚甲基丙烯酸甲酯或海藻酸钠和羟乙基纤维素的混合物。
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