CN112400692A - 一种海棠的组培快繁方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种海棠的组培快繁方法，属于植物组织培养技术领域。包括以下步骤：1)选取外植体与消毒处理；2)外植体防褐化培养处理；3)将消毒后的外植体接种到诱导培养基中进行腋芽诱导培养，直至外植体腋芽萌发长成2～3cm的植株；4)在无菌环境下剪下步骤3)所获得的植株并接种到增殖培养基中进行培养，将长出的丛生芽接种到增殖培养基中进行增殖生长；5)剪下高为2～3cm的丛生芽接种到生根培养基中进行生根培养。本发明组织培养操作步骤简单，成本低，能够快速增殖产生大量不定芽，高效繁育大量苗木，繁殖后代保留母株优良性状且性状一致，缩短了繁殖周期，有利于观赏海棠新品种在市场上的推广。

Description

一种海棠的组培快繁方法

技术领域

本发明属于植物组织培养技术领域，更具体地说，涉及一种海棠的组培快繁方法。

背景技术

海棠(Malus spp.)，别名海棠花，为蔷薇科(Rosaceae)苹果属(Malus) 落叶灌木或小乔木，观赏海棠叶色丰富多样，随季节呈现出不同的颜色，景观价值丝毫不输于花。观赏海棠集观花观叶观果于一身，品种丰富，观赏周期长，具有较高的观赏价值、生态价值和经济价值，具有生长迅速、适应性强的特点，常用作园林景观植物。

在我国园林应用中，海棠已有两千多年的历史。海棠常常作为主景、配景和其他树种共同搭配在现代园林中，形成相对稳定、色彩丰富的植物群落，创造出优美的园林植物景观。

海棠具有一定的药用价值，海棠果中含有丰富的维生素、糖类等营养物质，能够解毒生津、止渴降火，对小儿尿道有一定的特效，是一宗纯正的保健品。海棠的嫩叶富含茶多酚、蛋白质等人体所需要的微量元素，制作的茶清香可口，具有增强体质、降血糖的作用。

‘橙之梦’海棠是国家林业和草原局2019年认定的新品种，该品种以果量大、果色橘红、光泽度强且观果期长等为主要观赏特性。该品种对高温表现出较好的适应性，病虫害发生的情况少，可作为道路和庭院绿化和公园造景，在园林绿化中有非常大的潜力。海棠的繁殖主要有种子繁殖、压条、扦插、嫁接与植物组织培养这几种方法。传统的扦插、压条繁殖系数低，生长缓慢，受气候等因素影响较大，对带有病毒的繁殖材料很难彻底消毒且海棠的优良性状的稳定遗传无法保证。所以想要获得大量的‘橙之梦’海棠，并保持它的优良性状，发明一种实现海棠良好的培育效果的培育方法显得尤为重要。

发明内容

针对现有技术存在的上述问题，本发明所要解决的技术问题在于提供一种海棠新品种‘橙之梦’的组培快繁方法。

为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案如下：

一种海棠新品种‘橙之梦’的组培快繁方法，包括如下步骤：

1)将当年生的幼嫩枝条剪成带1～2个腋芽的茎段，进行消毒处理；

2)将消毒处理过的茎段接种到防褐化培养基中培养；

3)将防褐化处理的外植体接种到芽诱导培养基中进行不定芽诱导培养，直至外植体腋芽萌发长成2～3cm的不定芽；

4)在无菌环境下剪下步骤2)所获得的不定芽并接种到增殖培养基中进行增殖培养，获得丛生芽；

5)剪下高为2～3cm的丛生芽接种到生根培养基中进行生根培养，获得小苗。

进一步地，步骤1)具体为：将枝条剪成带1～2个腋芽的1～2cm的茎段，用10％的洗洁精浸泡30min，流水冲洗2h，放置在超净工作台中用75％的乙醇浸泡30s，无菌水冲洗3～5次，之后用0.1％氯化汞进行处理8min，用无菌水冲洗6～8次，剪掉茎段两端与消毒溶液接触的部分，用于下一步培养。

进一步地，步骤2)具体为：将消毒处理过的茎段接种到防褐化培养基中培养，所述防褐化培养基为：MS+蔗糖30g/L+琼脂7g/L+6-BA1.0 mg/L+NAA0.1mg/L+PVP 2g/L

进一步地，步骤3)具体为：将防褐化处理后的外植体接种到诱导培养基上，所述诱导培养基为：MS+蔗糖30g/L+琼脂7g/L+6-BA 1.5mg/L+NAA 0.3 mg/L。

进一步地，步骤4)具体为：待诱导出来的不定芽长到1.5～2cm时，将其接种到增殖培养基上培养获得丛生芽，所述的增殖培养基为：MS+6-BA 1.5mg/L +NAA 0.3mg/L。

进一步地，步骤5)具体为：以增殖培养生长到2cm以上的带叶片的粗壮苗作为材料，接种到生根培养基中进行生根培养，获得小苗，所述的生根培养基为：1/2MS+蔗糖20g/L+琼脂7g/L+IBA 1.0mg/L。

进一步地，步骤2)～5)的培养条件具体为：培养温度为25±2℃，空气相对湿度70-80％，光照采用白炽灯光源，光照时间14-16h/d，光强为2000～4000 Lx。

相比于现有技术，本发明的有益效果为：

1)本发明方法培育的‘橙之梦’海棠生长发育好，株高且健壮，品质优，叶片鲜亮，极少出现玻璃化枯萎等现象，并能保持母本的优良性状；

2)本发明操作步骤简单，成本低，能够快速增殖产生大量不定芽，高效繁育大量苗木，繁殖后代保留母株优良性状且性状一致，缩短了繁殖周期，有利于‘橙之梦’海棠新品种在市场上的推广。

附图说明

图1为‘橙之梦’海棠的组培快繁过程图；A～B：芽诱导；C～D：增殖培养；E：NAA对试管苗生根的影响；F：IBA对试管苗生根的影响。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明进一步进行描述。

实施例1：

一种海棠新品种‘橙之梦’的组培快繁方法，具体如下：

1)外植体消毒：将当年生的幼嫩枝条剪成带1～2个腋芽的1～2cm的茎段，用10％的洗洁精(体积百分数)浸泡30min，流水冲洗2h，放置在超净工作台中用75％的乙醇浸泡35s，无菌水冲洗3～5次，之后分别用0.1％氯化汞(6、8、10min)和0.5％、2％次氯酸钠(6、8、10、12min)进行处理，用无菌水冲洗 6～8次待用，剪掉茎段两端与消毒溶液接触的部分，用于下一步培养。

结果表明：0.1％氯化汞的杀毒后，外植体成活率较高，褐化率、污染率也较低，消毒8min的外植体成活率最高，为85.55％，而2％次氯酸钠消毒后的污染率和褐化率均高于1％氯化汞。最终发现，最适合‘橙之梦’海棠茎段的消毒的最佳方式为75％乙醇30s+0.1％氯化汞8min。

2)防褐化处理：将消毒处理过的茎段接种到：

添加不同浓度PVP(1、1.5、2、2.5g/L)的MS+蔗糖30g/L+琼脂7g/L+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.1mg/L培养基上(pH为5.8±0.2)，每个处理30瓶，每瓶1个外植体；

添加不同浓度AC(1.5、2、2.5g/L)的MS+蔗糖30g/L+琼脂7g/L+6-BA 1.0 mg/L+NAA0.1mg/L培养基上(pH为5.8±0.2)，每个处理30瓶，每瓶1个外植体。

以上防褐化处理的培养条件为：培养温度为25±2℃，空气相对湿度70-80％，光照采用白炽灯光源，光照时间14-16h/d，光强为2000～4000Lx，培养30之后观察。

结果表明：从试验数据看，添加PVP 2g/L的防褐效果最好，褐化率为11.25％，虽然PVP 2.5g/L的褐化率较2g/L低，但是会产生少量愈伤，综合考虑，添加PVP 2g/L的防褐化效果好。因此，最佳防褐化培养基为MS+蔗糖30g/L+琼脂7 g/L+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L+PVP2g/L。

3)芽诱导培养：将防褐化处理后的外植体接种到：

添加不同浓度6-BA(0.5、1.0、1.5mg/L)与NAA(0.1、0.3、0.5mg/L) 的MS+蔗糖30g/L+琼脂7g/L培养基上(pH为5.8±0.2)的芽诱导培养基上，每个处理30瓶，每瓶接种1个茎段，重复3次。

以上芽诱导培养的培养条件为：培养温度为25±2℃，空气相对湿度70-80％，光照采用白炽灯光源，光照时间14-16h/d，光强为2000～4000Lx，培养30天之后观察。

结果表明：‘橙之梦’海棠茎段均能不同程度的诱导出芽，诱导率均高于50％，在激素浓度组合中，6-BA 1mg/L+NAA 0.1mg/L可使茎段有效的诱导出芽，诱导率达85.5％，而高浓度的NAA抑制芽的生长并且会有愈伤的产生。适合‘橙之梦’海棠芽诱导培养的培养基为MS+蔗糖30g/L+琼脂7g/L+6-BA 1.0mg/L +NAA 0.1mg/L，不定芽启动率为85.5％。

4)增殖培养：待诱导出来的不定芽长到1.5～2cm时，将其接种到：

添加不同浓度的6-BA(0.5、1.0、1.5mg/L)和NAA(0.05、0.1、0.5mg/L) 的MS+蔗糖30g/L+琼脂7g/L增殖培养基上(pH为5.8±0.2)，每个处理30瓶，每瓶接种3个芽。

以上增殖培养的培养条件为：培养温度为25±2℃，空气相对湿度70-80％，光照采用白炽灯光源，光照时间14-16h/d，光强为2000～4000Lx，培养30天之后观察。

结果表明：激素浓度的不同对‘橙之梦’海棠不定芽的增殖有所影响。接种 10d左右无菌苗的底部切口处开始出现少量愈伤，15d左右开始出现丛生芽，在一定浓度范围内，丛生芽的数量随着6-BA浓度的增加而增加，而芽的高度随着 6-BA浓度的增加而降低。在6-BA浓度一定的情况下，随着NAA浓度的增加，不定芽的增殖会减弱，增殖系数降低。由此可知，最适合‘橙之梦’海棠增殖的培养基为MS+蔗糖30g/L+琼脂7g/L+6-BA 1.5mg/L+NAA0.3mg/L，增殖系数为8.54。

5)生根培养：以继代培养生长到2cm以上的带叶片的粗壮苗作为试验材料，分别接种到：

添加不同浓度NAA(0.1、0.3、0.5、0.7mg/L)的1/2MS+蔗糖20g/L+琼脂 7g/L的生根培养基中(pH为5.8±0.2)，每个处理30瓶，每瓶接种3个苗；

添加不同浓度IBA(0.1、0.3、0.5、0.7、1.0、1.2mg/L)的1/2MS+蔗糖20g/L+ 琼脂7g/L的生根培养基中(pH为5.8±0.2)，每个处理30瓶，每瓶接种3个苗；

添加不同浓度NAA(0.1、0.3、0.5mg/l)的1/2MS+蔗糖20g/L+琼脂7g/L 的生根培养基中(pH为5.8±0.2)，7d以后接种到不添加任何激素的1/2MS+蔗糖20g/L+琼脂7g/L培养基中，每个处理30瓶，每瓶接种3个苗(二步生根法)。

以上不同生根培养的培养条件为：培养温度为25±2℃，空气相对湿度70-80％，光照采用白炽灯光源，光照时间14-16h/d，光强为2000～4000Lx，培养30天之后观察。

结果表明：

添加NAA的试管苗根系粗短、茂密，但是基部会有愈伤产生，且随着NAA 浓度的增大，愈伤越多。添加不同浓度的NAA，试管苗生根率均能达到100％，证明‘橙之梦’易生根，NAA浓度为0.1mg/L时，‘橙之梦’海棠的生根系数较高，达到15.78；

添加IBA的试管苗根系细长、茂密，有须根，且根从芽苗茎基部直接产生，无愈伤，这种根移栽成活率高。当IBA浓度为1mg/L时，‘橙之梦’海棠的生根系数达到18.00；

二步生根法不适合‘橙之梦’海棠的生根，生根晚且生根慢，生根系数低；

最适合‘橙之梦’海棠的生根的培养基为1/2MS+蔗糖20g/L+琼脂7g/L+IBA 1.0mg/L。

Claims (7)

1.一种海棠的组培快繁方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)将当年生的幼嫩枝条剪成带1～2个腋芽的茎段，进行消毒处理；

2)将消毒处理过的茎段接种到防褐化培养基中培养；

3)将防褐化处理后的外植体接种到芽诱导培养基中进行不定芽诱导培养，直至外植体腋芽萌发长成2～3cm的不定芽；

4)在无菌环境下剪下步骤2)所获得的不定芽并接种到增殖培养基中进行增殖培养，培养获得丛生芽；

5)剪下高为2～3cm的丛生芽接种到生根培养基中进行生根培养，获得小苗。

2.根据权利要求1所述的海棠的组培快繁方法，其特征在于，步骤1)具体为：将枝条剪成带1～2个腋芽的1～2cm的茎段，用10％的洗洁精浸泡30min，流水冲洗2h，放置在超净工作台中用75％的乙醇浸泡30s，无菌水冲洗3～5次，之后用0.1％氯化汞进行处理8min，用无菌水冲洗6～8次待用。

3.根据权利要求1所述的海棠的组培快繁方法，其特征在于，步骤2)具体为：将消毒处理过的茎段接种到防褐化培养基中培养，所述防褐化培养基为：MS+蔗糖30g/L+琼脂7g/L+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L+PVP 2g/L。

4.根据权利要求1所述的海棠的组培快繁方法，其特征在于，步骤3)具体为：将将防褐化处理后的外植体接种到诱导培养基上，所述诱导培养基为：MS+蔗糖30g/L+琼脂7g/L+6-BA 1.5mg/L+NAA 0.3mg/L。

5.根据权利要求1所述的海棠的组培快繁方法，其特征在于，步骤4)具体为：待诱导出来的不定芽长到1.5～2cm时，将其接种到增殖培养基上获得丛生芽，所述的增殖培养基为：MS+6-BA 1.5mg/L+NAA 0.3mg/L。

6.根据权利要求1所述的海棠的组培快繁方法，其特征在于，步骤5)具体为：以增殖培养生长到2cm以上的带叶片的粗壮苗作为材料，接种到生根培养基中进行生根培养，获得小苗，所述的生根培养基为：1/2MS+蔗糖20g/L+琼脂7g/L+IBA 1.0mg/L。

7.根据权利要求1所述的海棠的组培快繁方法，其特征在于，步骤2)～5)的培养条件具体为：培养温度为25±2℃，空气相对湿度70-80％，光照采用白炽灯光源，光照时间14-16h/d，光强为2000～4000Lx。

Images