CN112391338A - 宫内膜干细胞提取 - Google Patents

宫内膜干细胞提取 Download PDF

Info

Publication number
CN112391338A
CN112391338A CN202011340816.0A CN202011340816A CN112391338A CN 112391338 A CN112391338 A CN 112391338A CN 202011340816 A CN202011340816 A CN 202011340816A CN 112391338 A CN112391338 A CN 112391338A
Authority
CN
China
Prior art keywords
stem cells
endometrial stem
centrifuge
collected
menstrual blood
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Withdrawn
Application number
CN202011340816.0A
Other languages
English (en)
Inventor
黄火能
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Guangdong Yuankang Regenerative Medicine Technology Development Co ltd
Original Assignee
Guangdong Yuankang Regenerative Medicine Technology Development Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Guangdong Yuankang Regenerative Medicine Technology Development Co ltd filed Critical Guangdong Yuankang Regenerative Medicine Technology Development Co ltd
Priority to CN202011340816.0A priority Critical patent/CN112391338A/zh
Publication of CN112391338A publication Critical patent/CN112391338A/zh
Withdrawn legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0681—Cells of the genital tract; Non-germinal cells from gonads
    • C12N5/0682—Cells of the female genital tract, e.g. endometrium; Non-germinal cells from ovaries, e.g. ovarian follicle cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/10—Growth factors
    • C12N2501/115—Basic fibroblast growth factor (bFGF, FGF-2)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2509/00—Methods for the dissociation of cells, e.g. specific use of enzymes
    • C12N2509/10—Mechanical dissociation

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本发明公开了宫内膜干细胞提取，包括以下步骤：S1：通过使用月事杯或卫生棉采集经血，采集的经血为5ml±0.1ml，将采集的经血注入至离心管中，并通过离心机对经血进行离心，(离心机的离心力控制在1500g 8min)，对离心后的经血收集宫内膜干细胞；S2：将收集的宫内膜干细胞，加入适量的DPBS混匀，且宫内膜干细胞与DPBS之间配比为1:2混合，对混合的液体通过100目筛网过滤，对过滤后的液体再次通过离心机进行离心。本发明通过对宫内膜干细胞的提取，并通过培养箱进行培养宫内膜干细胞，通过培养的宫内膜干细胞能够对女性的子宫内膜进行修复中发挥重要作用,降低女性性疾病的发病机制，延缓女性的衰老。

Description

宫内膜干细胞提取
技术领域
本发明涉及一种细胞提取，特别涉及宫内膜干细胞提取，属于生物技术领域。
背景技术
在人类子宫内膜功能层和基底层中存在着一种子宫内膜干细胞，女性发育成熟后，每隔一个月左右，子宫内膜发生一次自主增厚，血管增生，通常在排卵后14天，若无卵子受精，子宫内膜便开始脱落并伴随出血，即月经。月经中含有脱落的子宫内膜，其中含有丰富的子宫内膜干细胞。
目前在宫内膜干细胞的培养机制已逐渐成熟，但是宫内膜干细胞的提取较为困难，只能从女性的子宫中提取宫内膜干细胞，无法实现从女性的经血中提取，给宫内膜干细胞的培养带来了受阻。
发明内容
本发明的目的在于提供宫内膜干细胞提取，以解决上述背景技术中提出的目前在宫内膜干细胞的培养机制已逐渐成熟，但是宫内膜干细胞的提取较为困难，只能从女性的子宫中提取宫内膜干细胞，无法实现从女性的经血中提取的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：包括以下步骤：
S1：通过使用月事杯或卫生棉采集经血，采集的经血为5ml±0.1ml，将采集的经血注入至离心管中，并通过离心机对经血进行离心，(离心机的离心力控制在1500g 8min)，对离心后的经血收集宫内膜干细胞；
S2：将收集的宫内膜干细胞，加入适量的DPBS混匀，且宫内膜干细胞与DPBS 之间配比为1:2混合，对混合的液体通过100目筛网过滤，对过滤后的液体再次通过离心机进行离心；
S3：对步骤2中的过滤离心后的宫内膜干细胞均匀缓慢的加入淋巴分离液，并通过离心机对液体进行离心分层(离心机的离心力控制在离心力1200g 20min)；
S4：对离心分层后的液体，收集分层液中层白雾状细胞，并再次加入DPBS清洗离心(离心机的离心力控制在离心力离心力1000g 8min)；
S5：对步骤S4中的离心收集底部细胞，加入DPBS混匀后过滤，离心收集宫内膜干细胞(离心机的离心力控制在离心力离心力800g 8min)；
S6：将收集的宫内膜干细胞加入至培养基中进行清理、离心并再次收集宫内膜干细胞(离心机的离心力控制在离心力离心力600g 8min)；
S7：对离心收集的宫内膜干细胞加入至完全培养基，接着转移宫内膜干细胞到培养瓶或培养袋，标记好后放入培养箱中培养。
作为本发明的一种优选技术方案，所述DPBS可以为生理盐水加庆大霉素 150U/ml或双抗2％。
作为本发明的一种优选技术方案，所述完全培养基内部成分为：FBS(胎牛清血)20％，2.5ug/ml两性霉素B，庆大霉素80U/ml或双抗1-2％，bFGF (高活性细胞因子)15ng/ml。
作为本发明的一种优选技术方案，所述步骤S1中收集的经血放置在4℃条件下进行存放运输。
作为本发明的一种优选技术方案，所述步骤S7中转动与培养瓶或培养袋培养时，通过高压灭菌法对培养瓶或培养袋进行无菌处理，在培养箱中培养时，控制培养箱的温度为37～38℃。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
本发明宫内膜干细胞提取，通过对宫内膜干细胞的提取，并通过培养箱进行培养宫内膜干细胞，通过培养的宫内膜干细胞能够对女性的子宫内膜进行修复中发挥重要作用,降低女性性疾病的发病机制，延缓女性的衰老。
具体实施方式
下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明提供了宫内膜干细胞提取的技术方案：包括以下步骤：
S1：通过使用月事杯或卫生棉采集经血，采集的经血为5ml±0.1ml，将采集的经血注入至离心管中，并通过离心机对经血进行离心，(离心机的离心力控制在1500g 8min)，对离心后的经血收集宫内膜干细胞；
S2：将收集的宫内膜干细胞，加入适量的DPBS混匀，且宫内膜干细胞与DPBS 之间配比为1:2混合，对混合的液体通过100目筛网过滤，对过滤后的液体再次通过离心机进行离心；
S3：对步骤2中的过滤离心后的宫内膜干细胞均匀缓慢的加入淋巴分离液，并通过离心机对液体进行离心分层(离心机的离心力控制在离心力1200g 20min)；
S4：对离心分层后的液体，收集分层液中层白雾状细胞，并再次加入DPBS清洗离心(离心机的离心力控制在离心力离心力1000g 8min)；
S5：对步骤S4中的离心收集底部细胞，加入DPBS混匀后过滤，离心收集宫内膜干细胞(离心机的离心力控制在离心力离心力800g 8min)；
S6：将收集的宫内膜干细胞加入至培养基中进行清理、离心并再次收集宫内膜干细胞(离心机的离心力控制在离心力离心力600g 8min)；
S7：对离心收集的宫内膜干细胞加入至完全培养基，接着转移宫内膜干细胞到培养瓶或培养袋，标记好后放入培养箱中培养。
DPBS可以为生理盐水加庆大霉素150U/ml或双抗2％。
完全培养基内部成分为：FBS(胎牛清血)20％，2.5ug/ml两性霉素B，庆大霉素80U/ml或双抗1-2％，bFGF(高活性细胞因子)15ng/ml。
步骤S1中收集的经血放置在4℃条件下进行存放运输。
步骤S7中转动与培养瓶或培养袋培养时，通过高压灭菌法对培养瓶或培养袋进行无菌处理，在培养箱中培养时，控制培养箱的温度为37～38℃。
在本发明的描述中，需要理解的是，指示的方位或位置关系为基于所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本发明和简化描述，而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本发明的限制。
在本发明中，除非另有明确的规定和限定，例如，可以是固定连接，也可以是可拆卸连接，或成一体；可以是机械连接，也可以是电连接；可以是直接相连，也可以通过中间媒介间接相连，可以是两个元件内部的连通或两个元件的相互作用关系，除非另有明确的限定，对于本领域的普通技术人员而言，可以根据具体情况理解上述术语在本发明中的具体含义。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。

Claims (5)

1.宫内膜干细胞提取，其特征在于，包括以下步骤：
S1：通过使用月事杯或卫生棉采集经血，采集的经血为5ml±0.1ml，将采集的经血注入至离心管中，并通过离心机对经血进行离心，(离心机的离心力控制在1500g 8min)，对离心后的经血收集宫内膜干细胞；
S2：将收集的宫内膜干细胞，加入适量的DPBS混匀，且宫内膜干细胞与DPBS之间配比为1:2混合，对混合的液体通过100目筛网过滤，对过滤后的液体再次通过离心机进行离心；
S3：对步骤2中的过滤离心后的宫内膜干细胞均匀缓慢的加入淋巴分离液，并通过离心机对液体进行离心分层(离心机的离心力控制在离心力1200g20min)；
S4：对离心分层后的液体，收集分层液中层白雾状细胞，并再次加入DPBS清洗离心(离心机的离心力控制在离心力离心力1000g 8min)；
S5：对步骤S4中的离心收集底部细胞，加入DPBS混匀后过滤，离心收集宫内膜干细胞(离心机的离心力控制在离心力离心力800g 8min)；
S6：将收集的宫内膜干细胞加入至培养基中进行清理、离心并再次收集宫内膜干细胞(离心机的离心力控制在离心力离心力600g 8min)；
S7：对离心收集的宫内膜干细胞加入至完全培养基，接着转移宫内膜干细胞到培养瓶或培养袋，标记好后放入培养箱中培养。
2.根据权利要求1所述的宫内膜干细胞提取，其特征在于：所述DPBS可以为生理盐水加庆大霉素150U/ml或双抗2％。
3.根据权利要求1所述的宫内膜干细胞提取，其特征在于：所述完全培养基内部成分为：FBS(胎牛清血)20％，2.5ug/ml两性霉素B，庆大霉素80U/ml或双抗1-2％，bFGF(高活性细胞因子)15ng/ml。
4.根据权利要求1所述的宫内膜干细胞提取，其特征在于：所述步骤S1中收集的经血放置在4℃条件下进行存放运输。
5.根据权利要求1所述的宫内膜干细胞提取，其特征在于：所述步骤S7中转动与培养瓶或培养袋培养时，通过高压灭菌法对培养瓶或培养袋进行无菌处理，在培养箱中培养时，控制培养箱的温度为37～38℃。
CN202011340816.0A 2020-11-25 2020-11-25 宫内膜干细胞提取 Withdrawn CN112391338A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202011340816.0A CN112391338A (zh) 2020-11-25 2020-11-25 宫内膜干细胞提取

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202011340816.0A CN112391338A (zh) 2020-11-25 2020-11-25 宫内膜干细胞提取

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN112391338A true CN112391338A (zh) 2021-02-23

Family

ID=74604023

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202011340816.0A Withdrawn CN112391338A (zh) 2020-11-25 2020-11-25 宫内膜干细胞提取

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN112391338A (zh)

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105586308A (zh) * 2016-02-04 2016-05-18 杭州易文赛生物技术有限公司 干细胞培养基及培养宫内膜干细胞的方法
CN105624099A (zh) * 2016-02-03 2016-06-01 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 经血源宫内膜干细胞的分离培养方法
CN107441481A (zh) * 2017-08-11 2017-12-08 成都远山博桥生物科技有限公司 一种治疗单纯皮肤损伤的经血干细胞制剂及其制备方法
CN109280635A (zh) * 2018-11-23 2019-01-29 北京太东生物科技有限公司 一种子宫内膜干细胞分离方法

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105624099A (zh) * 2016-02-03 2016-06-01 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 经血源宫内膜干细胞的分离培养方法
CN105586308A (zh) * 2016-02-04 2016-05-18 杭州易文赛生物技术有限公司 干细胞培养基及培养宫内膜干细胞的方法
CN107441481A (zh) * 2017-08-11 2017-12-08 成都远山博桥生物科技有限公司 一种治疗单纯皮肤损伤的经血干细胞制剂及其制备方法
CN109280635A (zh) * 2018-11-23 2019-01-29 北京太东生物科技有限公司 一种子宫内膜干细胞分离方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
周云帆等: "经血源性子宫内膜间充质干细胞的分离、培养与鉴定", 中国组织工程研究与临床康复 *
赵蕾等: "月经血子宫内膜间充质干细胞向子宫内膜上皮细胞分化的实验研究", 中国妇产科临床杂志 *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Edwards et al. Observations on preovulatory human ovarian follicles and their aspirates
CN102784267B (zh) 中药复方药物组合物的新用途
US20140249364A1 (en) Oocytes derived from ovarian culture initially containing no oocytes
Roberts et al. Ultrastructural evidence of stromal/epithelial interactions in the human endometrial cycle
CN110613737A (zh) 一种子宫内膜干细胞制剂的制备方法及其应用
CN113244272A (zh) 用于改善卵巢早衰的组合物及其制备方法和应用
CN109652363A (zh) 胎盘壁蜕膜间充质干细胞分化为子宫内膜上皮细胞的方法
CN109439616A (zh) 一种干细胞外泌体在促进胚胎卵裂和增加孵化率的方法
CN108853146A (zh) 一种修复眼部损伤细胞因子的滴眼液及制备方法
CN112569261A (zh) 一种改善卵巢功能的组合物及其应用
CN110042078A (zh) 卵母细胞体外成熟培养液及其制备方法和应用
CN112391338A (zh) 宫内膜干细胞提取
Luginbuhl Electron microscopic study of the effects of tissue culture on human endometrium
CN117384822B (zh) 一种大鼠牙龈组织来源的凋亡囊泡的制备方法及其应用
CN112569260A (zh) 用于治疗宫腔粘连的干细胞制剂
CN112280735B (zh) 脐带来源的间充质干细胞及其制备方法和应用
CN100512821C (zh) 一种羊膜提取液的制备方法及用途
CN108785354A (zh) 可提高卵巢颗粒细胞活性的蒲公英提取物的制备及其应用
CN112717203A (zh) 一种仿生子宫内膜及其制备方法
WO2021038543A1 (en) Treatment of diminished ovarian reserve using menstrual blood stromal cells
CN113476477A (zh) 间充质干细胞在制备治疗糖尿病患者种植牙创口愈合药物中的应用
EP3888666A1 (en) Composition
CN114081926A (zh) 一种用于卵巢储备功能降低的中药黎药组合物及其制备方法和应用
CN109182260A (zh) 一种体外培养胎膜间充质干细胞的方法
CN112587550B (zh) 使用干细胞治疗宫腔粘连的方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
WW01 Invention patent application withdrawn after publication

Application publication date: 20210223

WW01 Invention patent application withdrawn after publication