CN112315878A - 一种抗敏舒缓修复的中药复合提取物及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种抗敏舒缓修复的中药复合提取物及其制备方法和应用，包括以下质量份的原料：铁皮石斛5～90份、苦参5～90份、小檗5～90份、粉防己5～90份、藤茶5～90份、甘草5～90份，其制备方法包括以下步骤：将上述原料粉碎备用，按重量份数称取上述原料、混匀；加入水、碳链为C1～C4的低级醇或碳链为C1～C4的低级醇水溶液作为提取溶剂提取，然后过滤分离，得提取物。本专利从天然植物及中药复方中寻找抗过敏活性成作用机制具有多靶点、多层次的特点，表现在过敏介质理论的多个环节上，主要分为三方面，主动提升皮肤屏障功能，镇静神经功能和缓解炎症因子致敏，且副作用少，临床用于防治过敏性疾病也取得较好疗效。

Description

一种抗敏舒缓修复的中药复合提取物及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及化妆品生产技术领域，具体涉及一种具有抗敏舒缓修复功效的外用中药复合提取物及其制备方法，以及使用该中药复合提取物制备得到的护肤制剂。
背景技术
自2019年7月起，我们跟踪研究面部护理套装相关产品，共计调研了约一百三十万套，而根据评价反馈，过敏率是千分之三，感官多数为面部紧绷感、刺痛感、麻痒感、灼烧感、麻刺感、疼痛，以及持续性的痒感，症状表现为红斑和皮肤潮红、水肿症状。60％的消费者认为一旦出现过敏情况就必须马上停止使用任何产品，虽消费者在护肤上不乏有很多的误区，但偏高的过敏率使公司的声誉和品牌蒙受损失。
具有敏感性肌肤症状的人群现正出现显著增加的趋势，特别是在男性群体中。越来越多的人群认为自己具有敏感性肌肤；例如在欧洲、美国和日本，约50％的女性和约30％的男性认为自己是敏感性肌肤，而在中国，这一比例达到约36％。由此可见，肌肤敏感成为全球化的潜在趋势，是消费者关注的肌肤问题。
市场上也有植物类的抗敏组分，主要集中在洋甘菊，马齿苋，黄芩，其添加量和最佳配伍组合的研究较少，人体过敏是个复杂的过程，是全身性多环节的反应，单味药材的堆砌是根本上没法解决皮肤过敏脆弱的问题。
如何消除顾客已发生的皮肤过敏症状，提升皮肤屏障功能，提升皮肤耐受阈值，是需要亟待解决的问题。
发明内容
为克服所述不足，本发明的目的在于提供一种具有抗敏舒缓修复功效的外用中药提取物及其制备方法，以及使用该中药提取物制备得到的护肤制剂。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是一种具有抗敏舒缓修复功效的外用中药提取物，所述提取物包括以下质量份的原料：铁皮石斛5～90份、苦参5～90份、小檗5～90份、粉防己5～90份、藤茶5～90份、甘草5～90份。
优选的，所述提取物包括以下质量份的原料：铁皮石斛15～45份、苦参15～45份、小檗10～45份、粉防己10～45份、藤茶5～45份、甘草10～45份。
一种具有抗敏舒缓修复功效的外用中药提取物的制备方法，包括以下步骤：
(1)将上述原料粉碎备用，按重量份数称取上述原料、混匀；
(2)加入水、碳链为C1～C4的低级醇或碳链为C1～C4的低级醇水溶液作为提取溶剂提取，然后过滤分离，得提取物。
优选的，在所述步骤(2)中，提取时条件为：加热在40℃以上提取或者室温提取或者20℃以下低温提取，提取条件不受气候和温度限制。
优选的，所述提取溶剂为水，这样生产成本更低、效果更佳。
优选的，在所述步骤(2)中，提取条件优选低温高压差法提取，其包括以下步骤：在粉碎后的混合粉末中加入其体积10～30倍的水混匀，然后泵入高压差提取器中，在-0.1～35MPa条件下提取1次，然后离心分离，收集离心液，离心液用膜浓缩分离，得到含抗过敏功效成分的浓缩提取物。
一种具有抗敏舒缓修复功效的中药提取物，采用上述重要提取物以及制备方法制备所得的提取物。
一种具有抗敏舒缓修复功效的外用护肤品，采用所述中药提取物以及常规辅料制成的护肤品。
本发明具有以下有益效果：本专利以中医的君臣佐使的统领大局的用兵思想，结合现在免疫学，从天然植物及中药复方中寻找抗过敏活性成作用机制具有多靶点、多层次的特点，表现在过敏介质理论的多个环节上，主要分为三方面，主动提升皮肤屏障功能，镇静神经功能和缓解炎症因子致敏，且副作用少，临床用于防治过敏性疾病也取得较好疗效。
附图说明
图1为本发明的实施例4的使用产品使用前后皮肤瘙痒的柱状图。
图2为本发明的实施例4的使用产品使用前后皮肤红肿的柱状图。
图3为本发明的实施例4的产品使用前后经皮水分流失量的柱状图
图4为本发明的实施例4的产品使用后经皮水分流失量变化率的柱状图。
图5为本发明的实施例4的产品使用前后角质层水分含量的柱状图。
图6为本发明的实施例4的产品使用后角质层水分含量变化率的柱状图。
具体实施方式
现在结合附图对本发明作进一步详细的说明。
实施例1
一种抗敏舒缓修复的中药复合提取物及其制备方法，下述原料药高速粉碎成200目后，按重量份配比称取原料分别为：铁皮石斛15g、小檗10g、苦参25g、藤茶15g、粉防己10g、甘草25g，混匀得混合粉末，在混合粉末中加入其体积10～30倍的水混匀，然后泵入高压差提取器中，在-0.1～35MPa条件下提取1次，然后离心分离，收集离心液，离心液用膜浓缩分离，得到含抗过敏功效成分的提取物1。
实施例2
下述原料药高速粉碎成200目后，按重量份配比称取原料分别为：铁皮石斛15g、小檗20g、苦参15g、藤茶15g、粉防己25g、甘草10g，混匀得混合粉末，在混合粉末中加入其体积10～30倍的水混匀，然后泵入高压差提取器中，在-0.1～35MPa条件下提取1次，然后离心分离，收集离心液，离心液用膜浓缩分离，得到含抗过敏功效成分的提取物2。
实施例3
下述原料药高速粉碎成200目后，按重量份配比称取原料分别为：铁皮石斛25g、小檗12g、苦参17g、藤茶6g、粉防己10g、甘草30g，混匀得混合粉末，在混合粉末中加入其体积10～30倍的水混匀，然后泵入高压差提取器中，在-0.1～35MPa条件下提取1次，然后离心分离，收集离心液，离心液用膜浓缩分离，得到含抗过敏功效成分的提取物3。
实施例4
一种具有抗敏舒缓修复功效的外用护肤品，包括以下组分，组分及用量见表1。
Figure BDA0002776309600000051
外用护肤品的制备方法，包括以下步骤：
(1)B相：将丁二醇、甘油与黄原胶搅拌均匀，待用；B相其他原料加入水中，搅拌均
匀后加入丁二醇、甘油与黄原胶混合物，加热80℃，混匀；
(2)A相：按照配比要求称量A相各原料，加热80℃，混匀；
(3)将步骤(2)A相全部加入到步骤(1)B相中，3000r/min，均质5min；加入C相305后用均质机在2500r/min，均质1min；30r/min，搅拌5min后，开始搅拌降温，搅拌速率30r/min，降温速率为2℃/min；
(4)当温度降到45℃时，加入D相防腐剂和实施例1制备的中药提取物，搅拌均匀，继续降温至40℃以下，即得具有抗敏舒缓修复功效的膏霜状外用护肤产品。
试验验证：
一、实施例1、实施例2、实施例3所得中药提取物1、2、3对透明质酸酶抑制作用
1、实验试剂配制：
(1)醋酸缓冲溶液(pH＝5.6)：量取1155μL冰乙酸稀释至100mL混匀后取其中4.8mL为A溶液；称取2.72g乙酸钠结晶加水溶解并定容至100mL混匀后取其中45.2mL为B溶液；混合溶液A、B，以水定容至100mL混匀。精密测定其pH值，用溶液A或B调至5.6即可；
(2)透明质酸酶溶液：称取透明质酸酶0.0100g置于烧杯中加入4mL醋酸缓冲溶液,最终工作浓度为1250u/mL；
(3)0.5mg/mL透明质酸钠溶液：称取透明质酸钠0.0050g置于烧杯中加入10mL醋酸缓冲溶液；
(4)埃尔利希试剂(Ehrlich reagent)：称取0.8g对-二甲氨基苯甲醛溶于15mL浓盐酸和15mL无水乙醇中，可保存两个月；
(5)乙酰丙酮溶液：取乙酰丙酮3.5mL溶于50mL1.0mol/L的碳酸钠溶液中，此溶液在用前配制。
2、实验方法
采用透明质酸酶体外抑制实验Elson-Morgan法进行，取0.1mL0.25mmol/L的CaCl2溶液和0.5mL透明质酸酶液37℃保温培养20min；加入中药提取物0.5mL，继续37℃保温培养20min；加入0.5mL透明质酸钠液37℃保温30min，常温放置5min；加入0.1mL0.4mol/LNaOH溶液和0.5mL乙酰丙酮溶液，置于沸水浴中加热15min后立即用冰水进行冷却5min；加入埃尔利希试剂1.0mL并用3.0mL无水乙醇进行稀释，放置20min显色，用分光光度计测定其吸光度值。
3、抗过敏活性计算公式：
Figure BDA0002776309600000071
式中：A——对照溶液ABS值(用醋酸缓冲溶液代替样品溶液)；
B——对照空白溶液ABS值(用醋酸缓冲溶液代替样品溶液及酶液)；
C——试样溶液ABS值；
D——试样空白溶ABS值(用醋酸缓冲溶液代替酶液)；
Figure BDA0002776309600000072
Figure BDA0002776309600000081
实验时先对1组试样进行450～700nm范围的波长扫描，以确定最大吸收波长，然后以去离子水作为参比，在该最大吸收波长处分别进行ABS值测定。各提取物体外对透明质酸酶抑制作用详见表2。
二、实施例1、实施例2、实施例3所得中药提取物1、1、2对UVB诱导的Keratinocyte细胞，PGE2，IL-6，IL-8的影响
1、试验原理
(1)实验原理IL-6是一种多功能细胞因子，血液中活化的单核巨噬细胞是其主要来源。它也是启动全身性炎症反应最强的细胞因子，能够诱导T细胞和B细胞的增值分化，刺激肝细胞产生急性期蛋白等，通过级联反应使炎症作用放大。病毒、细菌感染均能诱导体内IL-6表达增加。
(2)实验原理前列腺素E 2(Prostaglandin E 2,PGE 2),是一种极其重要的脂质代谢产物,前列腺素是一组重要脂质介质，由细胞膜磷脂释放的游离花生四烯酸经过级联酶促反应代谢合成。在受到生理或病理的各种刺激,尤其是有害刺激时被释放,它们通过旁分泌或自分泌的方式,和靶细胞上的特异受体结合而发挥作用。尤其在发热、炎症和血压调节中均发挥着重要作用，可以偶联G蛋白，参与了许多生理和病理过程，例如哮喘、疼痛和炎症等。
(3)IL-8是由Th1细胞分泌的细胞因子，主要介导细胞毒和局部炎症有关的免疫应答辅助抗体生成，参与细胞免疫及迟发型超敏型炎症的发生，主要生物学作用是趋化并激活中性粒细胞，促进中性粒细胞的溶酶体酶活性和吞噬作用,对嗜碱性粒细胞和T细胞也有一定的趋化作用，中性粒细胞与IL-8接触后发生形态变化，定向游走到反应部位并释放一系列活性产物，这些作用可导致机体局部炎症反应，达到杀菌和损伤细胞的目的。
(4)对炎症因子IL-6、PGE2和IL-8的抑制表明中药提取物具有抑制由紫外线损伤、自由基氧化、环境污染、皮脂分泌过多、细菌感染等导致的皮肤炎症，如泛红、瘙痒等。
2、实验材料：
Keratinocyte细胞由中国医学科学院基础医学研究所提供；DMEM培养基及青霉素、链霉素和磷酸缓冲溶液(PBS，PH＝7.4))均购自Gibco公司；胎牛血清购自HyClone公司；DMSO购自Sigma公司；IL-6、IL-8、PGE2试剂盒购自江苏酶标科技有限公司；Spectramax i3多功能酶标仪购自美国Molecular Devices公司。
4、样品配制：
以DMSO或双蒸水配制阳性药及实施例1、实施例2、实施例3所得中药提取物1、2、3，并使用0.22μm滤膜过滤细菌，用时以含10％胎牛血清培养基稀释，低、中、高浓度为25mg/mL、50,mg/mL和100mg/mL。
5、实验方法：用含10％胎牛血清的DMEM培养基将Keratinocyte细胞密度调整为5×105个/mL的细胞悬液，接种于透明96孔板，200μL/孔。分别设细胞空白对照组、模型组、阳性药物组及受试药物组，每组设3个平行孔，放置37℃、5％CO2培养箱培养静置12H待细胞贴壁。观察细胞贴壁后将阳性药组和受试药物组分别加入阳性药及受试药物，空白对照组和模型组加入等量终浓度的培养基，置培养箱中预温孵48H。使用CL-1000M型紫外交联仪对细胞进行照射处理，空白组采用锡箔纸遮挡光线，各组细胞受到的UVB照射光剂量为80mj/cm2，最后更换含10％FBS的DMEM继续培养24H，细胞空白组加入同体积含等浓度DMSO培养基。24H后离心分离细胞，收集细胞上清液，测定上清液中IL-6、PGE2和IL-8和含量。
实验结果计算组合物A低、中、高浓度对PGE-2抑制率分别为：13.75％、20.95％、30.74％；组合物B低、中、高浓度对PGE-2抑制率分别为：6.78％、11.65％、21.70％；组合物C低、中、高浓度对PGE-2抑制率分别为：9.09％、20.71％、29.67％；组合物A低、中、高浓度对IL-6抑制率分别为：5.48％、20.73％、35.34％；组合物B低、中、高浓度对IL-6抑制率分别为：8.41％、24.64％、33.33％；组合物C低、中、高浓度对IL-6抑制率分别为：6.43％、24.72％、35.68％；组合物A低、中、高浓度对IL-8抑制率分别为：37.31％、50.05％、63.90％；组合物B低、中、高浓度对IL-8抑制率分别为：27.20％、39.93％、57.15％；组合物C低、中、高浓度对IL-8抑制率分别为：30.55％、43.29％、63.90％。表明实施例1、实施例2、实施例3所得中药提取物1、2、3可以通过抑制IL-6发挥抑制Ⅰ型超敏反应(速发型超敏反应)的作用，可以通过抑制PGE2发挥抑制Ⅰ型超敏反应(速发型超敏反应)的作用，通过抑制IL-8发挥抑制Ⅳ型超敏反应(迟发型超敏反应)的作用。且通过抑制IL-6、PGE2和IL-8可以起到治疗紫外线损伤的功效。
具体实验数值见表3，样品IL-6、PGE2和IL-8测定结果如下：
Figure BDA0002776309600000111
Figure BDA0002776309600000121
三、实施例4制备的护肤膏霜功效实验
1、试验原理
辣椒素能够通过刺激神经细胞和皮肤角质形成细胞，促使细胞释放降钙素基因相关肽(Calcitonin Gene Related Peptide，CGRP)。CGRP是广泛分布于神经系统的一种神经肽，其在外周及脊髓参与伤害性信息的传递及痛敏化的形成，与兴奋性氨基酸、辣椒素I型受体、趋化因子、激活素、糖皮质激素等生物活性物质或受体在痛觉调制过程中存在相互影响。CGRP是使皮肤产生炎症、瘙痒以及痛觉的重要因素。
2、研究目的：评估皮肤正常人群使用测试样品后，护肤膏霜减轻皮肤瘙痒，降低皮肤的不适感的效果。
3、研究设计：单中心、随机、受试者自身前后对照临床研究。
4、受试者：已签署知情同意书，男女不限，年龄18-45岁。
5、测试时间：2020年5月10日
6、测试部位：手臂内侧。
7、测试仪器：功能皮肤检测仪
Figure BDA0002776309600000131
Combo
8、实验方法
实验采用5.0％的辣椒素刺激志愿者皮肤，致使皮肤过敏，然后涂抹含有5.0％中药提取物1的护肤膏霜，通过主诉瘙痒程度来判断不同时期皮肤的相关状态。
9、实验结果
(1)减轻瘙痒
试验结果表明，在涂抹含5.0％中药提取物A的护肤膏霜10分min时，瘙痒程度减少至75％，具有很好的消炎效果。在涂抹30min和60min后，分别减少至55％和45％，如图1所示。
(2)减轻皮肤红肿
通过多功能皮肤检测仪
Figure BDA0002776309600000141
Combo测试皮肤在不同时期的红斑值E，反映皮肤红肿现象的变化。在评价过程中发现，辣椒素刺激使皮肤发生明显红肿。涂抹含5.0％中药提取物A膏霜后，皮肤的红肿现象消退明显，在60min左右，皮肤红斑消退率达到53％，红斑值在皮肤正常红斑值范围内。作为对照的空白区域，其红肿约180min左右才能自行消退，恢复至正常水平。说明5.0％中药提取物A可以有效消除因外界刺激造成的皮肤表面泛红现象。
且在实验过程中，涂抹含5.0％中药提取物A的膏霜能明显减轻皮肤瘙痒，降低皮肤的不适感，说明中药提取物A对敏感性皮肤具有优异的抗敏止痒护理作用，如图2所示。
四、实施例4制备的护肤膏霜功效临床验证。
1、研究目的：评估皮肤干燥、粗糙、乳酸反应阳性人群使用测试样品后，护肤膏霜修复皮肤屏障、保湿、细腻肌肤的效果。
2、研究设计：单中心、随机、受试者自身前后对照临床研究。
3、受试者：已签署知情同意书，女性，年龄18-55岁，面部皮肤干燥、粗糙，乳酸反应阳性。
4、测试时间：2020年3月27日-2020年4月26日。
5、测试部位：脸颊，全脸。
6、测试仪器：Tewameter TM300(皮肤水分流失TEWL测试仪)德国CK。
7、测试指标：经皮水分流失量TEWL——测量经表皮蒸发的水分量，以此来衡量皮肤表面水分流失情况，数值越低代表皮肤表面水分流失越少，单位g/(h·m2)。测量3次取平均值，产品使用后，TEWL显著性低于使用前，表示该产品具有修复皮肤屏障效果。如图3、图4所示，结果描述：连用产品14天、28天后，经皮水分流失量显著性降低(p＜0.05)说明测试产品具有修复皮肤屏障效果。如图5、图6所示，结果描述：连用产品14天、28天后，角质层水分含量显著性提升(p＜0.05)肌肤干燥情况得到了缓解，水润肌肤、提高皮肤水合能力效果明显。
8、总结：连续使用测试产品14天后，受试者脸颊角质层水分含量显著提升25.11％，脸颊经皮水分流失量显著改善2.78％，说明测试产品14天连用具有保湿、修复皮肤屏障效果。
连续使用测试产品28天后，受试者脸颊角质层水分含量显著提升25.88％，脸颊经皮水分流失量显著改善11.48％，说明测试产品28天连用具有保湿、修复皮肤屏障效果。
本发明不局限于所述实施方式，任何人应得知在本发明的启示下作出的结构变化，凡是与本发明具有相同或相近的技术方案，均落入本发明的保护范围之内。
本发明未详细描述的技术、形状、构造部分均为公知技术。

Claims (7)

1.一种具有抗敏舒缓修复功效的外用中药提取物，其特征在于：所述提取物包括以下质量份的原料：铁皮石斛5～90份、苦参5～90份、小檗5～90份、粉防己5～90份、藤茶5～90份、甘草5～90份。
2.根据权利要求1所述的一种具有抗敏舒缓修复功效的外用中药提取物，其特征在于：所述提取物包括以下质量份的原料：铁皮石斛15～45份、苦参15～45份、小檗10～45份、粉防己10～45份、藤茶5～45份、甘草10～45份。
3.根据权利要求1所述的一种具有抗敏舒缓修复功效的外用中药提取物的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
(1)将上述原料粉碎备用，按重量份数称取上述原料、混匀；
(2)加入水、碳链为C1～C4的低级醇或碳链为C1～C4的低级醇水溶液作为提取溶剂提取，然后过滤分离，得提取物。
4.根据权利要求3所述的一种具有抗敏舒缓修复功效的外用中药提取物的制备方法，其特征在于：在所述步骤(2)中，提取时条件为：加热在40℃以上提取或者室温提取或者20℃以下低温提取。
5.根据权利要求3所述的一种具有抗敏舒缓修复功效的外用中药提取物的制备方法，其特征在于：所述提取溶剂为水。
6.根据权利要求3所述的一种具有抗敏舒缓修复功效的外用中药提取物的制备方法，其特征在于：在所述步骤(2)中，提取条件优选低温高压差法提取，其包括以下步骤：在粉碎后的混合粉末中加入其体积10～30倍的水混匀，然后泵入高压差提取器中，在-0.1～35MPa条件下提取1次，然后离心分离，收集离心液，离心液用膜浓缩分离，得到含抗过敏功效成分的提取物。
7.根据权利要求1所的一种具有抗敏舒缓修复功效的中药提取物在护肤品中的应用，其特征在于：采用所述中药提取物以及辅料制成的护肤品。
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