CN112313212A

CN112313212A - Oga抑制剂化合物

Info

Publication number: CN112313212A
Application number: CN201980041118.XA
Authority: CN
Inventors: J·M·巴托洛梅-内布雷达; A·A·特拉班科-苏亚雷斯; G·J·特列萨登; C·马丁尼兹拉门卡; J·E·利纳茨; D·欧赫里希; P·J·J·A·伯恩斯特斯; A·I·韦尔特; Y·E·M·范罗斯布鲁克
Original assignee: Janssen Pharmaceutica NV
Current assignee: Janssen Pharmaceutica NV
Priority date: 2018-06-21
Filing date: 2019-06-20
Publication date: 2021-02-02
Anticipated expiration: 2039-06-20
Also published as: EP3810586A1; AU2019291101A1; JP2021528404A; MA52942A; CN112313212B; US20210277003A1; CA3103049A1; WO2019243535A1

Abstract

本发明涉及具有式(I)的O‑GlcNAc水解酶(OGA)抑制剂。本发明还涉及包含此类化合物的药物组合物、用于制备此类化合物和组合物的方法、以及此类化合物和组合物用于预防和治疗其中OGA的抑制是有益的障碍的用途，这些障碍是例如tau病变，特别是阿尔茨海默氏病或进行性核上性麻痹；和伴有tau病理学的神经退行性疾病，特别是由C90RF72突变引起的肌萎缩侧索硬化或额颞叶痴呆。

Description

OGA抑制剂化合物

技术领域

本发明涉及具有式(I)所示结构的O-GlcNAc水解酶(OGA)抑制剂

其中这些基团是如在说明书中所定义的。本发明还涉及包含此类化合物的药物组合物、用于制备此类化合物和组合物的方法、以及此类化合物和组合物用于预防和治疗其中OGA的抑制是有益的障碍的用途，这些障碍是例如tau病变，特别是阿尔茨海默氏病或进行性核上性麻痹；和伴有tau病理学的神经退行性疾病，特别是由C9ORF72突变引起的肌萎缩侧索硬化或额颞叶痴呆。

背景技术

O-GlcN酰化是蛋白质的可逆修饰，其中N-乙酰基-D-葡糖胺残基被转移至丝氨酸残基和苏氨酸残基的羟基基团，产生O-GlcN酰化蛋白。已经在真核生物的胞质溶胶和细胞核中鉴定了超过1000种这样的靶蛋白。该修饰被认为调节大范围的细胞过程，包括转录、细胞骨架过程、细胞周期、蛋白酶体降解和受体信号传导。

O-GlcNAc转移酶(OGT)和O-GlcNAc水解酶(OGA)是描述的向靶蛋白添加(OGT)或从靶蛋白去除(OGA)O-GlcNAc的仅有的两种蛋白质。OGA最初于1994年从脾脏制剂中纯化，1998年鉴定为由脑膜瘤表达的抗原，并且称为MGEA5，由作为细胞胞质区室中的单体的916个氨基酸(102915道尔顿)组成。它与ER相关的和高尔基体相关的糖基化过程(其对于蛋白质的运输和分泌是重要的)不同，并且不同于OGA具有酸性pH最佳值，而OGA在中性pH下显示出最高活性。

具有双天冬氨酸催化中心的OGA催化结构域位于该酶的n-末端部分，该酶的侧翼是两个柔性结构域。C-末端部分由其前面是茎结构域的推定的HAT(组蛋白乙酰转移酶结构域)组成。尚未证明HAT结构域具有催化活性。

O-GlcN酰化蛋白以及OGT和OGA本身在脑和神经元中特别丰富，表明这种修饰在中枢神经系统中起重要作用。实际上，研究证实O-GlcN酰化代表了促进神经元通讯、记忆形成和神经退行性疾病的关键调节机制。此外，已经显示OGT对于几种动物模型中的胚胎发生是必需的，并且ogt无效小鼠是胚胎致死的。OGA对于哺乳动物的发育也是必不可少的。两项独立研究表明，OGA纯合无效小鼠在出生后存活不过24-48小时。Oga缺失导致幼崽中糖原动员的缺陷，并且它在源自纯合敲除胚胎的MEF中导致基因组不稳定性相关的细胞周期停滞。杂合动物存活至成年期，但它们在转录和代谢方面均表现出改变。

已知O-GlcNAc循环中的扰动影响慢性代谢疾病，例如糖尿病以及癌症。Oga杂合性抑制了Apc-/+小鼠癌症模型中的肠道肿瘤发生，并且Oga基因(MGEA5)是一种有记录的人糖尿病易感基因位点。

此外，O-GlcNAc修饰已经在几种参与神经退行性疾病的发展和进展的蛋白质上被鉴定，并且已表明O-GlcNAc水平的变化与Tau在阿尔茨海默氏病中形成神经原纤维缠结(NFT)蛋白的相关性。此外，已经描述了帕金森病中α-突触核蛋白的O-GlcN酰化。

在中枢神经系统中已经描述了六种tau剪接变体。Tau在17号染色体上编码，并且其中在中枢神经系统中表达的最长剪接变体由441个氨基酸组成。这些同种型的不同之处在于两个N-末端插入物(外显子2和3)和位于微管结合结构域内的外显子10。在tau病变中外显子10是值得考虑的目标，因为它具有多个突变，使得tau易于聚集，如下所述。Tau蛋白结合并稳定神经元微管细胞骨架，这对于调节细胞器沿轴突区室的细胞内运输是重要的。因此，tau在轴突的形成和维持其完整性中起重要作用。此外，还提出了树突棘生理学中的作用。

Tau聚集是多种所谓的tau病变的潜在原因之一，例如PSP(进行性核上性麻痹)、唐氏综合征(DS)、FTLD(额颞叶痴呆)、FTDP-17(伴有帕金森综合征-17的额颞痴呆)、皮克氏病(Pick’s disease，PD)、CBD(皮质基底节变性)、嗜银颗粒疾病(agryophilic graindisease，AGD)和AD(阿尔茨海默氏病)。此外，tau病理学伴随着其他神经退行性疾病，例如由C9ORF72突变引起的肌萎缩侧索硬化(ALS)或FTLD。在这些疾病中，tau通过过度磷酸化进行翻译后修饰，这被认为是使tau从微管分离并使其易于聚集。tau的O-GlcN酰化调节磷酸化的程度，因为携带O-GlcNAc残基的丝氨酸或苏氨酸残基不适于磷酸化。这有效地使得tau不易于从微管分离并且减少聚集成神经毒性缠结，这最终导致神经毒性和神经元细胞死亡。这种机制还可以减少神经元通过脑中相互连接的回路释放的tau聚集体的细胞间扩散，最近已经讨论这会加速tau相关性痴呆的病理学。实际上，从AD患者的脑中分离的过度磷酸化的tau显示出显著降低的O-GlcN酰化水平。

施用于JNPL3 tau转基因小鼠的OGA抑制剂成功地减少了NFT形成和神经元损失而没有明显的副作用。该观察结果已在另一种tau病变啮齿动物模型中得到证实，其中可诱导FTD中发现的突变tau的表达(tg4510)。OGA的小分子抑制剂的给药在减少tau聚集的形成方面是有效的，并且减弱了皮质萎缩和脑室扩大。

此外，淀粉样蛋白前体蛋白(APP)的O-GlcN酰化有利于通过非淀粉样蛋白生成途径加工以产生可溶性APP片段并避免导致AD相关淀粉样蛋白-β(Aβ)形成的切割。

通过抑制OGA维持tau的O-GlcN酰化代表了减少上述神经退行性疾病中的tau-磷酸化和tau-聚集从而减弱或阻止神经退行性tau病变-疾病的进展的潜在方法。

WO 2012/117219(英国顶峰公司(Summit Corp.plc.)，2012年9月7日公开)描述了N-[[5-(羟甲基)吡咯烷-2-基]甲基]烷基酰胺和N-烷基-2-[5-(羟甲基)吡咯烷-2-基]乙酰胺衍生物作为OGA抑制剂；WO 2016/0300443(神经内科公司(Asceneuron S.A.)，2016年3月3日公开)、WO 2017/144633和WO 2017/0114639(神经内科公司，2017年8月31日公开)披露了1,4-双取代的哌啶或哌嗪作为OGA抑制剂；WO 2017/144637(神经内科公司，2017年8月31日公开)披露了，更特别地，4-取代的1-[1-(1,3-苯并二氧杂环戊烯-5-基)乙基]-哌嗪；1-[1-(2,3-二氢苯并呋喃-5-基)乙基]-；1-[1-(2,3-二氢苯并呋喃-6-基)乙基]-；和1-[1-(2,3-二氢-1,4-苯并二噁英-6-基)乙基]-哌嗪衍生物作为OGA抑制剂；WO 2017/106254(默沙东公司(Merck Sharp&Dohme Corp.)描述了取代的N-[5-[(4-亚甲基-1-哌啶基)甲基]噻唑-2-基]乙酰胺化合物作为OGA抑制剂。

仍然需要具有有利的特性平衡的OGA抑制剂化合物，例如具有改善的效力、良好的生物利用度、药代动力学、和脑渗透和/或更好的毒性谱。因此，本发明的目的是提供克服这些问题中的至少一些问题的化合物。

发明内容

本发明涉及具有式(I)的化合物

及其互变异构体和立体异构形式，其中

R¹选自由以下组成的组：任选地被各自独立地选自下组的一个或多个取代基取代的C_1-6烷基，该组由以下组成：卤代、-CN、-OC_1-3烷基、-OH、-SO₂NR^5aR^6a、和任选地被一个或多个独立选择的卤代取代基取代的C_3-6环烷基；被氧杂环丁烷基取代的C_1-6烷基；以及其中两个偕氢被氧杂环丁烷亚基替换的C_1-6烷基；其中R^5a和R^6a各自独立地选自由氢和C_1-3烷基组成的组；条件是-OC_1-3烷基或-OH取代基在存在时是远离1H-吡咯并[3.2-c]吡啶的氮原子的至少两个碳原子；

R²、R³和R⁵各自独立地选自由以下组成的组：氢、卤代和C_1-3烷基；

R⁴是选自下组的一价基团，该组由以下组成：(a)、(b)、(c)和(d)：

其中

R^1a、R^2a、R^1b和R^2b各自独立地选自由以下组成的组：卤代、C_1-3烷基、单卤代C_1-3烷基、多卤代C_1-3烷基、C_1-3烷氧基、单卤代C_1-3烷氧基、多卤代C_1-3烷氧基、和C_3-6环烷基；

R^3a选自由以下组成的组：氢、卤代、-C(O)-OC_1-3烷基、-C(O)-NR’R”和-N(R”’)-C(O)-C_1-3烷基；

R^4a选自由以下组成的组：氢、卤代、-CN、C_1-3烷基、单卤代C_1-3烷基、多卤代C_1-3烷基、-C(O)-OC_1-3烷基、-C(O)-NR’R”、-N(R”’)-C(O)-C_1-3烷基、和Het；条件是R^3a和R^4a不同时为-C(O)-OC_1-3烷基、-C(O)-NR’R”、或-N(R”’)-C(O)-C_1-3烷基；

R’和R”各自独立地选自由以下组成的组：氢和C_1-3烷基；或R’和R”连同它们所附接的氮原子一起形成选自下组的杂环基环，该组由以下组成：氮杂环丁基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、和吗啉基；

R”’选自由以下组成的组：氢和C_1-3烷基；

Het是任选地被一个或多个独立选择的C_1-3烷基取代基取代的吡唑基或咪唑基；

X¹和X²各自独立地选自N和CH，条件是X¹或X²中的至少一个是N；

R^1c、R^2c和R^1d各自独立地选自由以下组成的组：卤代、C_1-3烷基、单卤代C_1-3烷基、多卤代C_1-3烷基、C_1-3烷氧基、单卤代C_1-3烷氧基、多卤代C_1-3烷氧基、和C_3-6环烷基；

X³表示CH或N；

并且由如下表示的环中的每一个：

形成

(i)5元或6元不饱和杂环，该5元或6元不饱和杂环具有各自独立地选自氮和氧的一个、两个或三个杂原子，并且任选地被各自独立地选自卤代、C_1-3烷基和氧代的一个或多个取代基取代；或

(ii)芳香族杂环，该芳香族杂环具有各自独立地选自氮、氧和硫的一个、两个或三个杂原子，并且任选地被各自独立地选自卤代、-CN、C_1-3烷基、单卤代C_1-3烷基、和多卤代C_1-3烷基的一个或多个取代基取代；

及其药学上可接受的盐和溶剂化物。

本发明例证了包含药学上可接受的载体以及上述化合物中的任一种的药物组合物。本发明例证了通过混合上述化合物中的任一种与药学上可接受的载体而制备的药物组合物。本发明例证了用于制备药物组合物的方法，该方法包括将上述化合物中的任一种与药学上可接受的载体混合。

本发明例示了预防或治疗由O-GlcNAc水解酶(OGA)的抑制介导的障碍的方法，该方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的上述化合物或药物组合物中的任一种。

本发明进一步例示了抑制OGA的方法，该方法包括向有需要的受试者施用预防或治疗有效量的上述化合物或药物组合物中的任一种。

本发明的一个实例是预防或治疗选自tau病变的障碍的方法，特别是选自下组的tau病变，该组由以下组成：阿尔茨海默氏病、进行性核上性麻痹、唐氏综合征、额颞叶痴呆、伴有帕金森综合征-17的额颞痴呆、皮克氏病、皮质基底节变性、和嗜银颗粒疾病；或伴有tau病理学的神经退行性疾病，特别是选自由C9ORF72突变引起的肌萎缩侧索硬化或额颞叶痴呆的神经退行性疾病，该方法包括向有需要的受试者施用预防或治疗有效量的上述化合物或药物组合物中的任一种。

本发明的另一个实例是上述化合物中的任一种用于在有需要的受试者中预防或治疗tau病变，特别是选自下组的tau病变，该组由以下组成：阿尔茨海默氏病、进行性核上性麻痹、唐氏综合征、额颞叶痴呆、伴有帕金森综合征-17的额颞痴呆、皮克氏病、皮质基底节变性、和嗜银颗粒疾病；或伴有tau病理学的神经退行性疾病，特别是选自由C9ORF72突变引起的肌萎缩侧索硬化或额颞叶痴呆的神经退行性疾病。

具体实施方式

本发明涉及如上文所定义的具有式(I)的化合物及其药学上可接受的加成盐和溶剂化物。具有式(I)的化合物是O-GlcNAc水解酶(OGA)的抑制剂，并且可用于预防或治疗tau病变，特别是选自下组的tau病变，该组由以下组成：阿尔茨海默氏病、进行性核上性麻痹、唐氏综合征、额颞叶痴呆、伴有帕金森综合征-17的额颞痴呆、皮克氏病、皮质基底节变性、和嗜银颗粒疾病；或者可用于预防或治疗伴有tau病理学的神经退行性疾病，特别是选自由C9ORF72突变引起的肌萎缩侧索硬化或额颞叶痴呆的神经退行性疾病。

在一个特定的实施例中，本发明涉及如上文所定义的具有式(I)的化合物及其互变异构体和立体异构形式，其中R¹选自由以下组成的组：任选地被各自独立地选自下组的一个、两个或三个取代基取代的C_1-6烷基，该组由以下组成：卤代，-CN，-OC_1-3烷基，-OH，-SO₂NR^5aR^6a，和任选地被一个、两个或三个独立选择的卤代取代基取代的C_3-6环烷基；被氧杂环丁烷基取代的C_1-6烷基；以及其中两个偕氢被氧杂环丁烷亚基替换的C_1-6烷基；其中R^5a和R^6a各自独立地选自由氢和C_1-3烷基组成的组；条件是-OC_1-3烷基或-OH取代基在存在时是远离1H-吡咯并[3.2-c]吡啶的氮原子的至少两个碳原子；

R⁴是选自下组的一价基团，该组由以下组成：(a)、(b)、(c)和(d)，其中

R^1a、R^2a、R^1b和R^2b各自独立地选自由以下组成的组：卤代、C_1-3烷基、单卤代C_1-3烷基、多卤代C_1-3烷基、和C_3-6环烷基；

R^3a选自由以下组成的组：氢、卤代、-C(O)-NR’R”、和-N(R”’)-C(O)-C_1-3烷基；

R^4a选自由以下组成的组：氢、卤代、C_1-3烷基、单卤代C_1-3烷基、多卤代C_1-3烷基、-C(O)-OC_1-3烷基、-C(O)-NR’R”、-N(R”’)-C(O)-C_1-3烷基、和Het；条件是R^3a和R^4a不同时为-C(O)-OC_1-3烷基、-C(O)-NR’R”、或-N(R”’)-C(O)-C_1-3烷基；

R”’选自由以下组成的组：氢和C_1-3烷基；

R^1c、R^2c和R^1d各自独立地表示卤代或

C_1-3烷基；

X³表示CH或N；

并且由如下表示的环中的每一个：

形成

(i)5元或6元不饱和杂环，该5元或6元不饱和杂环具有各自独立地选自氮和氧的一个、两个或三个杂原子，并且任选地被各自独立地选自卤代、C_1-3烷基和氧代的一个或两个取代基取代；或

(ii)芳香族杂环，该芳香族杂环具有各自独立地选自氮和氧的一个、两个或三个杂原子，并且任选地被各自独立地选自C_1-3烷基的一个或两个取代基取代；

及其药学上可接受的盐和溶剂化物。

在一个特定的实施例中，本发明涉及如在本文中提及的具有式(I)的化合物及其互变异构体和立体异构形式，其中

R¹选自由以下组成的组：任选地被各自独立地选自下组的一个、两个或三个取代基取代的C_1-6烷基，该组由以下组成：卤代和任选地被一个、两个或三个独立选择的卤代取代基取代的C_3-6环烷基；被氧杂环丁烷基取代的C_1-6烷基；以及其中两个偕氢被氧杂环丁烷亚基替换的C_1-6烷基；

R^3a选自由以下组成的组：氢、卤代、和-C(O)-NR’R”；

R^4a选自由以下组成的组：氢、卤代、C_1-3烷基、单卤代C_1-3烷基、多卤代C_1-3烷基、-C(O)-OC_1-3烷基、-C(O)-NR’R”、-N(R”’)-C(O)-C_1-3烷基、和Het；

条件是R^3a和R^4a不同时为-C(O)-OC_1-3烷基、-C(O)-NR’R”、或-N(R”’)-C(O)-C_1-3烷基；

R’和R”各自独立地选自由以下组成的组：氢和C_1-3烷基；或R’和R”连同它们所附接的氮原子一起形成选自下组的杂环基环，该组由以下组成：吡咯烷基和吗啉基；

R”’选自由以下组成的组：氢和C_1-3烷基；

R^1c、R^2c和R^1d各自独立地表示卤代或C_1-3烷基；

X³表示CH或N；

并且由如下表示的环中的每一个：

形成

及其药学上可接受的盐和溶剂化物。

在另一个实施例中，本发明涉及如在本文中提及的具有式(I)的化合物，其中R¹是任选地被各自独立地选自下组的一个、两个或三个取代基取代的C_1-6烷基，该组由以下组成：卤代和

任选地被一个、两个或三个独立选择的卤代取代基取代的C_3-6环烷基，或者R¹是被氧杂环丁烷基取代的C_1-6烷基，或其中两个偕氢被氧杂环丁烷亚基替换的C_1-6烷基。

在一个特定的实施例中，本发明涉及如在本文中提及的具有式(I)的化合物，其中R¹是任选地被各自独立地选自下组的一个、两个或三个取代基取代的C_1-6烷基，该组由以下组成：卤代和

任选地被一个、两个或三个独立选择的卤代取代基取代的C_3-6环烷基。

在另一个实施例中，本发明涉及如在本文中提及的具有式(I)的化合物，其中R¹是被氧杂环丁烷基取代的C_1-6烷基，或其中两个偕氢被氧杂环丁烷亚基替换的C_1-6烷基。

在另一个实施例中，本发明涉及如在本文中提及的具有式(I)的化合物，其中R¹是

在另一个实施例中，本发明涉及如在本文中提及的具有式(I)的化合物及其互变异构体和立体异构形式，其中

R⁴是选自下组的一价基团，该组由以下组成：(a)、(b)和(c)，其中

R^1a、R^2a、R^1b和R^2b各自独立地选自由以下组成的组：卤代和C_1-3烷基；

R^3a是氢；

R^4a选自由以下组成的组：氢、-C(O)-NR’R”、和-N(R”’)-C(O)-C_1-3烷基；

R”’是氢；

X¹是N并且X²是CH；

R^1c和R^2c各自独立地表示卤代或C_1-3烷基；

X³表示CH；

并且

形成任选地被一个或两个独立选择的C_1-3烷基取代基取代的咪唑；

及其药学上可接受的盐和溶剂化物。

在另一个实施例中，本发明涉及如在本文中提及的具有式(I)的化合物，其中R²和R³各自独立地选自氢和氟。

在另一个实施例中，本发明涉及如在本文中提及的具有式(I)的化合物，其中R⁵是氢、氟或甲基。

定义

“卤代”应当表示氟、氯以及溴，特别是氟或氯；“氧代”应当表示＝O，即双键键合至碳原子的氧原子；“C_1-3烷基”应当表示分别具有1个、2个或3个碳原子的直链或支链饱和烷基基团，例如甲基、乙基、1-丙基、2-丙基；“C_1-6烷基”应当表示分别具有1个、2个、3个、4个、5个或6个碳原子的直链或支链饱和烷基基团，例如甲基、乙基、1-丙基、2-丙基、丁基、1-甲基-丙基、2-甲基-1-丙基、1,1-二甲基乙基等；“C_1-3烷氧基”应当表示醚基团，其中C_1-3烷基如前所定义；如本文单独所用或用作另一个基团的一部分的“单卤代-C_1-3烷基、多卤代-C_1-3烷基”应当表示被1个、2个、3个或在有可能的情况下被如前所定义的更多个卤代原子取代的如前所定义的C_1-3烷基；如本文所用，“C_3-6环烷基”应当表示饱和的、具有从3个至6个碳原子的环状烃基团，如环丙基、环丁基、环戊基和环己基。特定的C_3-6环烷基基团是环丙基。

5元或6元不饱和杂环(其具有各自独立地选自氮、氧和硫的一个、两个或三个杂原子，并且任选地被各自独立地选自卤代、C_1-3烷基和氧代的一个或两个取代基取代)的实例包括但不限于，四氢呋喃、四氢吡喃、1,4-二噁烷、吡咯烷、哌啶、哌嗪、吗啉、内酰胺(例如，吡咯烷酮、哌啶酮)等。

芳香族杂环(其具有各自独立地选自氮和氧的一个、两个或三个杂原子，并且任选地被各自独立地选自C_1-3烷基的一个或两个取代基取代)的实例包括但不限于，吡咯、吡唑、咪唑、三唑等。

每当术语“取代”用于本发明时，除非另外指示或上下文中是明确的，否则意在指示在使用“取代”的表述中指示的原子或基团上的一个或多个氢(优选从1个至3个氢、更优选从1个至2个氢、更优选1个氢)被来自所指示基团的选择项替换，条件是未超过正常的化合价，并且该取代导致了化学稳定的化合物(即，足够稳健以承受从反应混合物分离至有用程度的纯度并且配制成治疗剂的化合物)。

如本文所用的术语“受试者”是指动物，优选地是哺乳动物，最优选地是人类，该受试者是或已经成为治疗、观察或实验的对象。因此，如本文所用，术语“受试者”涵盖患者、以及具有发展如本文所定义的疾病或病症风险的无症状或症前个体。

如本文所用的术语“治疗有效量”意指由研究员、兽医、医师或其他临床医生寻找的，在组织系统、动物或人类中引起生物学或医学应答的活性化合物或药物试剂的量，该应答包括正在被治疗的疾病或障碍的症状的减轻。如本文所用的术语“预防有效量”意指显著降低要预防的疾病或障碍发作可能性的活性化合物或药物试剂的量。

如本文所用，术语“组合物”旨在涵盖包含处于特定量的特定成分的产品，以及直接或间接地源于处于特定量的特定成分的组合的任何产品。

在上下文中，术语“具有式(I)的化合物”意指包括其加成盐、溶剂化物以及立体异构体。

在上下文中，术语“立体异构体”或“立体化学异构形式”可互换地使用。

本发明包括呈纯立体异构体形式或呈两种或更多种立体异构体的混合物的具有式(I)的化合物的所有立体异构体。

对映异构体为彼此不可重叠的镜像的立体异构体。对映异构体对的1:1混合物是外消旋体或外消旋混合物。非对映体(或非对映异构体)为不是对映异构体的立体异构体，即它们并非为镜像关系。如果化合物含有双键，则这些取代基可以呈E或Z构型。如果化合物含有双取代的环烷基基团，则这些取代基可以呈顺式或反式构型。因此，本发明包括对映异构体、非对映体、外消旋体、E异构体、Z异构体、顺式异构体、反式异构体及其混合物。

绝对构型是根据卡恩-英戈尔德-普雷洛格(Cahn-Ingold-Prelog)系统指定的。不对称原子处的构型由R或S指定。绝对构型未知的已拆分的化合物可以根据它们旋转平面偏振光的方向而由(+)或(-)指定。

当鉴定特定的立体异构体时，这意指所述立体异构体基本上不含其他异构体，即与小于50％、优选地小于20％、更优选地小于10％、甚至更优选地小于5％，特别是小于2％并且最优选地小于1％的其他立体异构体相关联。因此，当具有式(I)的化合物例如被指定为(R)时，这意指该化合物基本上不含(S)异构体；当具有式(I)的化合物例如被指定为E时，这意指该化合物基本上不含Z异构体；当具有式(I)的化合物例如被指定为顺式时，这意指该化合物基本上不含反式异构体。

用于在医学中使用，本发明的化合物的加成盐是指无毒性“药学上可接受的加成盐”。然而，其他盐可以适用于制备根据本发明的化合物或其药学上可接受的加成盐。化合物的合适的药学上可接受的加成盐包括可以例如通过将化合物的溶液与药学上可接受的酸的溶液混合而形成的酸加成盐，该药学上可接受的酸如盐酸、硫酸、富马酸、马来酸、琥珀酸、乙酸、苯甲酸、柠檬酸、酒石酸、碳酸或磷酸。此外，在本发明的化合物携带酸性部分时，其合适的药学上可接受的加成盐可以包括碱金属盐，例如钠盐或钾盐；碱土金属盐，例如钙盐或镁盐；以及与合适的有机配体形成的盐，例如季铵盐。

可以在药学上可接受的加成盐的制备中使用的代表性酸包括但不限于以下：乙酸、2,2-二氯乙酸、酰化氨基酸、己二酸、海藻酸、抗坏血酸、L-天冬氨酸、苯磺酸、苯甲酸、4-乙酰氨基苯甲酸、(+)-樟脑酸、樟脑磺酸、癸酸、己酸、辛酸、肉桂酸、柠檬酸、环拉酸、乙烷-1,2-二磺酸、乙磺酸、2-羟基-乙磺酸、甲酸、富马酸、半乳糖二酸、龙胆酸、葡庚糖酸、D-葡糖酸、D-葡萄糖醛酸、L-谷氨酸、β-氧代-戊二酸、乙醇酸、马尿酸、氢溴酸、盐酸、(+)-L-乳酸、(±)-DL-乳酸、乳糖酸、马来酸、(-)-L-苹果酸、丙二酸、(±)-DL-扁桃酸、甲磺酸、萘-2-磺酸、萘-1,5-二磺酸、1-羟基-2-萘甲酸、烟酸、硝酸、油酸、乳清酸、草酸、棕榈酸、双羟萘酸、磷酸、L-焦谷氨酸、水杨酸、4-氨基-水杨酸、癸二酸、硬脂酸、琥珀酸、硫酸、单宁酸、(+)-L-酒石酸、硫氰酸、对甲苯磺酸、三氟甲基磺酸以及十一碳烯酸。可以用于制备药学上可接受的加成盐的代表性碱包括但不限于以下：氨、L-精氨酸、苯乙苄胺、苯乍生、氢氧化钙、胆碱、二甲基乙醇胺、二乙醇胺、二乙胺、2-(二乙氨基)-乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-甲基-葡糖胺、海巴明、1H-咪唑、L-赖氨酸、氢氧化镁、4-(2-羟乙基)-吗啉、哌嗪、氢氧化钾、1-(2-羟乙基)吡咯烷、仲胺、氢氧化钠、三乙醇胺、缓血酸胺以及氢氧化锌。

化合物的名称根据由化学文摘社(Chemical Abstracts Service)(CAS)商定的命名规则或者根据由国际纯粹与应用化学联合会(International Union ofPure andApplied Chemistry)(IUPAC)商定的命名规则来产生。

最终化合物的制备

根据本发明的这些化合物通常可以通过一系列步骤进行制备，其中的每个步骤是本领域技术人员所已知的。特别地，这些化合物可以根据以下合成方法进行制备。

具有式(I)的化合物能以对映异构体的可以遵循领域已知的拆分程序与彼此分离的外消旋混合物形式合成。具有式(I)的外消旋化合物可以通过与合适的手性酸反应而转化为相应的非对映盐形式。所述非对映盐形式随后例如通过选择性或分步结晶而分离，并且对映异构体通过碱由其释放。分离具有式(I)的化合物的对映异构形式的替代性方式涉及使用手性固定相的液相色谱法。所述纯立体化学异构形式还可以来源于适当起始材料的相应的纯立体化学异构形式，条件是反应立体定向地发生。

实验程序1

根据反应方案1，可以通过使具有式(II-a)的中间体化合物与具有式(III)的化合物进行反应来制备具有式(I)的最终化合物。反应在合适的反应惰性溶剂(例如像，^tBuOH)中，在碱(如Cs₂CO₃或K₃PO4)的存在下，在催化剂(如Pd(OAc)₂或Pd₂dba₃)和合适的磷配体(如XantPhos)的存在下，在热条件(例如像，110℃-130℃)下进行合适的时间段，以驱使反应完成。在反应方案1中，所有变量都如在式(I)中所定义的，并且卤代表示卤素，特别是溴或氯。

实验程序2

可替代地，根据反应方案2，可以通过使具有式(II-b)的中间体化合物与具有式(IV)的化合物进行反应来制备具有式(I)的最终化合物。反应在与如实验程序1中描述的相同条件下进行。

实验程序3

可替代地，根据反应方案3，可以通过使具有式(II-c)的中间体化合物与具有式(V)的化合物进行反应来制备具有式(I)的最终化合物。反应在合适的反应惰性溶剂(例如像，DMF)中，在合适的碱(例如像，NaH)的存在下，在合适的温度(例如像，0℃至室温)下进行合适的时间段，以驱使反应完成。在反应方案3中，所有变量都如在式(I)中所定义的，并且卤代表示卤素，特别是溴或氯。

实验程序4

根据反应方案4，可以通过使具有式(VI)的中间体化合物与N-氟苯磺酰亚胺在技术人员已知的反应条件(例如像，在THF中，在-78℃至RT至预先形成碳负离子)下进行反应来制备其中R²是氟的具有式(II-a)的中间体化合物，在本文中称为(II-a1)。在反应方案4中，所有变量都如在式(I)中所定义的，并且卤代表示卤素，特别是溴或氯。

实验程序5

根据反应方案5，可以通过使具有式(VII)的中间体化合物与

在技术人员已知的反应条件(例如像，在硝基乙烷，在0℃)下进行反应来制备具有式(II-a)的中间体化合物(其中R³是氟)，在本文中称为(II-a2)。在反应方案5中，所有变量都如在式(I)中所定义的，并且卤代表示卤素，特别是溴或氯。

具有式(II-a)、(II-b)、(II-c)和(VI)的中间体化合物是可商购的或可以根据技术人员已知的反应程序来合成。

药理学

本发明的化合物及其药学上可接受的组合物抑制O-GlcNAc水解酶(OGA)并且因此可以用于治疗或预防涉及tau病理学(也称为tau病变)的疾病，以及具有tau包涵体的疾病。此类疾病包括但不限于：阿尔茨海默氏病、肌萎缩侧索硬化和帕金森综合征-痴呆复合征、嗜银颗粒疾病、慢性创伤性脑病、皮质基底节变性、弥散性神经原纤维缠结伴钙化、唐氏综合征、家族性英国型痴呆、家族性丹麦型痴呆、连锁于17号染色体的伴帕金森综合征的额颞痴呆(由MAPT突变引起)、额颞叶变性(某些病例由C9ORF72突变引起)、吉斯特曼-斯召斯列疾病(Gerstmann-

-Scheinker disease)、瓜德罗普岛帕金森综合征(Guadeloupeanparkinsonism)、强直性肌营养不良、神经退行性病变伴有脑铁沉积、C型尼曼-皮克病(Niemann-Pick disease,type C)、具有神经原纤维缠结的非关岛运动神经元疾病、皮克氏病、脑炎后帕金森综合征、朊病毒蛋白脑淀粉样血管病、进行性皮层下神经胶质增生、进行性核上性麻痹、SLC9A6相关的精神发育迟滞、亚急性硬化性全脑炎、仅缠结痴呆、以及具有球状胶质包涵体的白质tau病变。

如本文所用，术语“治疗”旨在是指其中可能存在一种疾病的进展的减慢、中断、遏制或阻止或者症状的减轻的所有过程，但未必指示所有症状的全部消除。如本文所用，术语“预防”旨在是指其中可能存在一种疾病的发作的减慢、中断、遏制或阻止的所有过程。

本发明还涉及根据通式(I)的化合物、其立体异构形式或其药学上可接受的酸或碱加成盐，用于治疗或预防选自下组的疾病或病症，该组由以下组成：阿尔茨海默氏病、肌萎缩侧索硬化和帕金森综合征-痴呆复合征、嗜银颗粒疾病、慢性创伤性脑病、皮质基底节变性、弥散性神经原纤维缠结伴钙化、唐氏综合征、家族性英国型痴呆、家族性丹麦型痴呆、连锁于17号染色体的伴帕金森综合征的额颞痴呆(由MAPT突变引起)、额颞叶变性(某些病例由C9ORF72突变引起)、吉斯特曼-斯召斯列疾病、瓜德罗普岛帕金森综合征、强直性肌营养不良、神经退行性病变伴有脑铁沉积、C型尼曼-皮克病、具有神经原纤维缠结的非关岛运动神经元疾病、皮克氏病、脑炎后帕金森综合征、朊病毒蛋白脑淀粉样血管病、进行性皮层下神经胶质增生、进行性核上性麻痹、SLC9A6相关的精神发育迟滞、亚急性硬化性全脑炎、仅缠结痴呆、以及具有球状胶质包涵体的白质tau病变。

本发明还涉及根据通式(I)的化合物、其立体异构形式或其药学上可接受的酸或碱加成盐，用于治疗、预防、改善、控制选自下组的疾病或病症或者降低其风险，该组由以下组成：阿尔茨海默氏病、肌萎缩侧索硬化和帕金森综合征-痴呆复合征、嗜银颗粒疾病、慢性创伤性脑病、皮质基底节变性、弥散性神经原纤维缠结伴钙化、唐氏综合征、家族性英国型痴呆、家族性丹麦型痴呆、连锁于17号染色体的伴帕金森综合征的额颞痴呆(由MAPT突变引起)、额颞叶变性(某些病例由C9ORF72突变引起)、吉斯特曼-斯召斯列疾病、瓜德罗普岛帕金森综合征、强直性肌营养不良、神经退行性病变伴有脑铁沉积、C型尼曼-皮克病、具有神经原纤维缠结的非关岛运动神经元疾病、皮克氏病、脑炎后帕金森综合征、朊病毒蛋白脑淀粉样血管病、进行性皮层下神经胶质增生、进行性核上性麻痹、SLC9A6相关的精神发育迟滞、亚急性硬化性全脑炎、仅缠结痴呆、以及具有球状胶质包涵体的白质tau病变。

特别地，这些疾病或病症可特别选自tau病变，更特别是选自下组的tau病变，该组由以下组成：阿尔茨海默氏病、进行性核上性麻痹、唐氏综合征、额颞叶痴呆、伴有帕金森综合征-17的额颞痴呆、皮克氏病、皮质基底节变性、和嗜银颗粒疾病；或者这些疾病或病症可特别是伴有tau病理学的神经退行性疾病，更特别是选自由C9ORF72突变引起的肌萎缩侧索硬化或额颞叶痴呆的神经退行性疾病。

阿尔茨海默氏病和tau病变疾病的临床前状态：

近年来，美国(US)国家老龄化研究所和国际工作组已经提出了更好地定义AD的临床前(无症状)阶段的指南(Dubois B等人,Lancet Neurol.[柳叶刀神经病学],2014；13:614-629；Sperling,RA等人,Alzheimers Dement.[阿尔茨海默氏病与痴呆],2011；7:280-292)。假设模型假定Aβ累积和tau聚集在明显的临床损害发作前许多年开始。升高的淀粉样蛋白累积、tau聚集和AD发展的关键风险因素是年龄(即65岁或以上)、APOE基因型和家族史。大约三分之一的75岁以上的临床正常老年人表现出PET淀粉样蛋白和tau成像研究(后者目前不太先进)中Aβ或tau累积的证据。此外，观察到CSF测量中降低的Aβ水平，而CSF中未修饰的和磷酸化的tau的水平升高。在大型尸检研究中可以看到类似的发现，并且已经表明早在20岁及更年轻时就在脑中检测到tau聚集体。淀粉样蛋白阳性(Aβ+)临床上正常的个体一致地展示出在其他生物标志物上的“AD样内表型”的证据，包括功能性磁共振成像(MRI)和静息态连接两者中扰乱的功能性网络活性、氟脱氧葡萄糖¹⁸F(FDG)代谢减退、皮质变薄以及加速萎缩。累积的纵向数据也强烈地表明Aβ+临床上正常的个体认知减退和进展为轻度认知损害(MCI)和AD痴呆的风险增加。阿尔茨海默氏病的科学界达成共识，即这些Aβ+临床上正常的个体代表AD病理学连续体中的早期阶段。因此，有人认为，如果在广泛的神经退行性病变已发生之前的疾病阶段开始，用降低Aβ产生或tau聚集的治疗剂进行干预可能更有效。许多医药公司目前正在测试在前驱AD中的BACE抑制作用。

由于不断发展的生物标志物研究，现在可以在第一症状发生之前的临床前阶段识别出阿尔茨海默氏病。所有与临床前阿尔茨海默氏病相关的不同问题，如定义和词汇、限制、自然史、进展标志物和在无症状阶段检测疾病的伦理后果，都在Alzheimer’s&Dementia[阿尔茨海默氏病与痴呆]12(2016)292-323中进行了综述。

在临床前阿尔茨海默氏病或tau病变中可以识别两类个体。在PET扫描中明显具有淀粉样蛋白β或tau聚集，或者在CSF Aβ、tau和磷酸化tau方面发生改变的认知上正常的个体被定义为处于“阿尔茨海默氏病的无症状风险状态(AR-AD)”或处于“tau病变的无症状状态”。据说患有家族性阿尔茨海默氏病的完全渗透性显性常染色体突变的个体患有“症前阿尔茨海默氏病”。已经针对多种形式的tau病变描述了tau蛋白内的显性常染色体突变。

因此，在一个实施例中，本发明还涉及根据通式(I)的化合物，其立体异构形式或其药学上可接受的酸或碱加成盐，用于控制或降低临床前阿尔茨海默氏病、前驱性阿尔茨海默氏病、或在不同形式的tau病变中观察到的与tau相关的神经退行性病变的风险。

如在上文已经提及的，术语“治疗”未必指示所有症状的全部消除，而是还可以指在上面提及的任何障碍中的对症治疗。鉴于具有式(I)的化合物的效用，提供治疗罹患任一种上文中提及的疾病的受试者如温血动物(包括人类)的方法，或防止受试者如温血动物(包括人类)罹患任一种上文中提及的疾病的方法。

所述方法包括向受试者如温血动物(包括人类)施用，即，全身施用或局部施用，优选口服施用预防或治疗有效量的具有式(I)的化合物、其立体异构形式、其药学上可接受的加成盐或溶剂化物。

因此，本发明还涉及用于预防和/或治疗任何上文中提及的疾病的方法，该方法包括向有需要的受试者施用预防或治疗有效量的根据本发明的化合物。

本发明还涉及用于调节O-GlcNAc水解酶(OGA)活性的方法，该方法包括向有需要的受试者施用预防或治疗有效量的根据本发明的和如权利要求书中所定义的化合物或根据本发明的和如权利要求书中所定义的药物组合物。

治疗方法还可包括以每天一到四次摄入之间的方案施用活性成分。在这些治疗方法中，根据本发明的化合物优选地在施用之前进行配制。如在下文中所述的，合适的药物配制品通过已知程序使用熟知并且容易可得的成分来制备。

可适合于治疗或预防上面提及的任何障碍或其症状的本发明的化合物可以单独施用或与一种或多种另外的治疗剂组合施用。联合疗法包括：含有具有式(I)的化合物以及一种或多种另外的治疗剂的单个药物剂量配制品的施用，以及具有式(I)的化合物和以其自身分开的药物剂量配制品存在的每种另外的治疗剂的施用。例如，可以向患者施用一起处于单个口服剂量组合物(如片剂或胶囊)中的具有式(I)的化合物和治疗剂，或可以将每种药剂以分开的口服剂量配制品施用。

技术人员将熟悉本文提及的疾病或病症的替代性命名、疾病分类学以及分类系统。例如，美国精神病学协会(American Psychiatric Association)精神障碍诊断和统计手册(Diagnostic&Statistical Manual ofMental Disorders，DSM-5^TM)第五版采用神经认知障碍(NCD)(重度和轻度)，特别是由于阿尔茨海默氏病的神经认知障碍等术语。技术人员可以使用此类术语作为用于一些本文提及的疾病或病症的替代性命名。

药物组合物

本发明还提供了用于预防或治疗其中O-GlcNAc水解酶(OGA)的抑制是有益的疾病的组合物，这些疾病如阿尔茨海默氏病、进行性核上性麻痹、唐氏综合征、额颞叶痴呆、伴有帕金森综合征-17的额颞痴呆、皮克氏病、皮质基底节变性、嗜银颗粒疾病、由C9ORF72突变引起的肌萎缩侧索硬化或额颞叶痴呆，所述组合物包含治疗有效量的根据式(I)的化合物以及药学上可接受的载体或稀释剂。

虽然活性成分可以单独施用，但优选地其作为药物组合物呈现。因此，本发明进一步提供了药物组合物，该药物组合物包含根据本发明的化合物以及药学上可接受的载体或稀释剂。载体或稀释剂必须在与组合物的其他成分相容的意义上是“可接受的”并且对其接受者是无害的。

可以通过制药领域所熟知的任何方法来制备本发明的药物组合物。治疗有效量的呈碱形式或加成盐形式的作为活性成分的特定化合物与药学上可接受的载体组合成紧密混合物，该载体可以取决于施用所希望的制剂形式而采用多种多样的形式。令人希望的是这些药物组合物处于适合于，优选适合于全身施用，如口服、经皮或肠胃外施用；或局部施用，如经由吸入、鼻喷雾、滴眼剂或经由霜剂、凝胶剂、洗发剂等施用的单位剂型。例如，在制备呈口服剂型的组合物时，可使用任何常见的药物介质，在口服液体制剂(如悬浮液、糖浆、酏剂和溶液)的情况下是例如水、二醇、油、醇等；或在粉末、丸剂、胶囊和片剂的情况下是固体载体例如淀粉、糖、高岭土、润滑剂、粘合剂、崩解剂等。片剂和胶囊由于其施用简易性而代表了最有利的口服单位剂型，在这种情况下显然使用固体药物载体。对于肠胃外组合物而言，载体通常将至少在很大程度上包含无菌水，但也可以包括其他成分例如以辅助溶解性。例如可制备可注射溶液，其中载体包含盐溶液、葡萄糖溶液或盐水和葡萄糖溶液的混合物。也可以制备可注射悬浮液，在这种情况下可以使用适当的液体载体、悬浮剂等。在适合于经皮施用的组合物中，载体任选地包含渗透增强剂和/或合适的可湿润剂，任选地与小比例的具有任何性质的合适的添加剂组合，这些添加剂不会对皮肤造成任何显著有害作用。所述添加剂可促进向皮肤施用和/或可有助于制备期望的组合物。这些组合物能够以不同方式，例如作为透皮贴剂、作为滴剂或作为软膏剂施用。

尤其有利的是，将上述药物组合物以单位剂型配制，以实现施用的简易性和剂量的均匀性。如本说明书和权利要求书中所用的单位剂型在本文中是指适合作为单位剂量的物理离散单位，每一单位含有经计算以与所需的药物载体结合而产生所希望的治疗作用的预定量的活性成分。此类单位剂型的实例是片剂(包括刻痕或包衣片剂)、胶囊、丸剂、粉末包、糯米纸囊剂、可注射溶液或悬浮液、茶匙剂(teaspoonful)、汤匙剂(tablespoonful)等，以及分离的多个这些单位剂型。

如本领域的技术人员所熟知的，施用的确切剂量和频率取决于所使用的具有式(I)的特定化合物，所治疗的特定病症，所治疗的病症的严重程度，特定患者的年龄、体重、性别、障碍程度以及总体身体健康状况，以及个体可以服用的其他药物。此外，显而易见的是，所述有效日用量可以降低或提高，这取决于所治疗的受试者的应答和/或取决于给出本发明的化合物处方的医师的评估。

取决于施用模式，该药物组合物将包含按重量计从0.05％至99％，优选地按重量计从0.1％至70％，更优选地按重量计从0.1％至50％的活性成分，以及按重量计从1％至99.95％，优选地按重量计从30％至99.9％，更优选地按重量计从50％至99.9％的药学上可接受的载体，所有的百分数都基于该组合物的总重量。

本发明的化合物可以用于全身性施用，如口服、经皮或肠胃外施用；或局部施用，如经由吸入、鼻喷雾、滴眼剂或经由霜剂、凝胶剂、洗发剂等施用。化合物优选地口服施用。如本领域的技术人员所熟知的，施用的确切剂量和频率取决于所使用的根据式(I)的特定化合物，所治疗的特定病症，所治疗的病症的严重程度，特定患者的年龄、体重、性别、障碍程度以及总体身体健康状况，以及个体可以服用的其他药物。此外，显而易见的是，所述有效日用量可以降低或提高，这取决于所治疗的受试者的应答和/或取决于给出本发明的化合物处方的医师的评估。

可以与载体材料组合以产生单一剂型的具有式(I)的化合物的量将取决于治疗的疾病、哺乳动物种类以及特定施用模式而变化。然而，作为一般指导，本发明的化合物的合适单位剂量可以例如优选地含有0.1mg至约1000mg之间的活性化合物。优选的单位剂量是在1mg至约500mg之间。更优选的单位剂量是在1mg至约300mg之间。甚至更优选的单位剂量是在1mg至约100mg之间。此类单位剂量可以每天超过一次地被施用，例如一天2次、3次、4次、5次或6次，但是优选每天1次或2次，这样使得对于一个70kg的成人每次施用的总剂量是每kg受试者体重在0.001至约15mg的范围内。优选的剂量是每次施用每kg受试者体重0.01至约1.5mg，并且此类疗法可以持续多个星期或月，并且在一些情况中，持续多年。然而，如本领域技术人员充分理解的，将理解的是，针对任何特定患者的特定剂量水平取决于多种因素，包括所采用的特定化合物的活性；所治疗的个体的年龄、体重、总体身体健康状况、性别以及饮食；施用时间及途径；排泄率；先前已经施用的其他药物；以及经历治疗的特定疾病的严重程度。

典型剂量可以是一天服用一次或一天多次的一片1mg至约100mg片剂或1mg至约300mg，或者一天服用一次的、并且含有在比例上含量较高的活性成分的一粒延时释放(time-release)的胶囊或片剂。延时释放效应可以通过在不同的pH值下溶解的胶囊材料、通过经渗透压造成的缓慢释放的胶囊、或者通过控制释放的任何其他已知手段来获得。

如本领域技术人员将理解的，在一些情况下有必要使用这些范围外的剂量。此外，应当注意临床医生或治疗医师结合个体患者应答将知道如何以及何时开始、中断、调节或终止治疗。

本发明还提供了试剂盒，其包含根据本发明的化合物、处方信息(也称为“说明书”)、泡罩包装或瓶、以及容器。此外，本发明提供了试剂盒，其包含根据本发明的药物组合物、处方信息(也称为“说明书”)、泡罩包装或瓶、以及容器。处方信息优选包括关于施用根据本发明的化合物或药物组合物而给患者的建议或指导。特别地，处方信息包括如下给患者的建议或指导：关于根据本发明的所述化合物或药物组合物的施用，关于如何使用根据本发明的化合物或药物组合物，以预防和/或治疗有需要的受试者的tau病变。因此，在一个实施例中，本发明提供了套装试剂盒，其包含具有式(I)的化合物或其立体异构体，或其药学上可接受的盐或溶剂化物，或包含所述化合物的药物组合物，以及用于预防或治疗tau病变的说明书。本文提及的试剂盒特别地可以是适于商业销售的药物包装。

对于以上提供的组合物、方法以及试剂盒，本领域技术人员将理解，用于各个的优选化合物是根据以上优选提到的那些化合物。用于组合物、方法和试剂盒的其他优选化合物是在以下非限制性实例中提供的那些化合物。

实验部分

在下文中，术语“AcOH”意指乙酸，“aq.”意指水性，“Boc”意指叔丁氧基羰基，“DAST”意指(二乙氨基)三氟化硫，“DCE”意指二氯乙烷，“DCM”意指二氯甲烷，“DMF”意指二甲基甲酰胺，“DIBAL”意指氢化二异丁基铝，“DIPE”意指二异丙醚，“DME”意指二甲醚，“DIPA”意指二异丙胺，“DMSO”意指二甲亚砜，“EtOAc”意指乙酸乙酯，“EtOH”意指乙醇，“Et₃N”意指三乙胺，“Et₂O”意指二乙醚，“HATU”意指N-[(二甲氨基)-1H-1,2,3-三唑并-[4,5-b]吡啶-1-基亚甲基]-N-甲基甲烷铵六氟磷酸盐N-氧化物，“HPLC”意指高效液相色谱法，“i-PrNH₂”意指异丙胺，“i-PrOH”意指异丙醇，“LC-MS”意指液相色谱法/质谱法，“LiHMDS”意指双(三甲基甲硅烷基)酰胺锂，“MeOH”意指甲醇，“[M+H]+”意指化合物的游离碱的质子化质量，“MIK”意指甲基异丁基酮，“m.p.”意指熔点，“min”意指分钟，“MW”意指微波，“NP”意指正相，“ol”或“OL”意指有机层，“org.”意指有机，“Pd/C”意指钯碳，“Pd(OAc)₂”意指乙酸钯(II)，“Pd₂dba₃”意指三(二亚苄基丙酮)二钯(0)，“Pd(dppf)Cl₂”意指[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯钯(II)，“Pd(PPh₃)₃”意指四(三苯基膦)钯(0)，“r.m.”意指反应混合物，“RP”意指反相，“Rt”意指保留时间(以分钟计)，“r.t.”或“RT”意指室温，“rac”或“RS”意指外消旋，“sat.”意指饱和，“SFC”意指超临界流体色谱法，“SFC-MS”意指超临界流体色谱法/质谱法，

意指1-氯甲基-4-氟-1,4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷双(四氟硼酸盐)，“sol.”意指溶液，“TBAF”意指四丁基氟化铵水合物，“TFA”意指三氟乙酸，“THF”意指四氢呋喃，“TLC”意指薄层色谱法，“t-BuOH”意指叔丁醇，“wt”意指重量，“XantPhos”意指4,5-双(二苯基膦)-9,9-二甲基呫吨，“XPhos”意指2-二环己基膦基-2’,4’,6’-三异丙基联苯。

无论何时在本文中表明符号“RS”，它都是指该化合物是在指定中心的一种外消旋混合物，除非另外指明。当将该一种或多种混合物分离时，已经将在一些化合物中心的立体化学构型指定为“R”或“S”；对于一些化合物，尽管该化合物本身已经作为单一的立体异构体被分离并且是对映异构体纯的/非对映体纯的，但是当绝对立体化学未确定时，已经将在指定中心的立体化学构型指定为“R*”或“S*”。通过由超临界流体色谱法(SFC)分析外消旋混合物，随后SFC比较该一种或多种分离的对映异构体，来确定在本文中报道的化合物的对映异构体过量。

微波辅助的反应是在单模式反应器Initiator^TM Sixty EXP微波反应器(拜泰齐公司(Biotage AB))中或在多模式反应器MicroSYNTH Labstation(迈尔斯通公司(Milestone,Inc.))中进行的。

使用试剂级溶剂，在硅胶60F254板(默克公司(Merck))上进行薄层色谱法(TLC)。使用标准技术，在硅胶上进行开口柱色谱法，粒度

网目＝230-400(默克公司)。

使用易连接柱，在不规则硅胶上，粒度15-40μm(正相一次性快速柱)，在以下不同的快速系统上进行自动快速柱色谱法：来自阿尔钦仪器公司(Armen Instrument)的SPOT或LAFLASH系统、或来自因特奇美拉公司(Interchim)的

430evo系统、或来自安捷伦公司(Agilent)的971-FP系统、或来自拜泰齐公司的Isolera 1SV系统。

中间体化合物的制备

中间体1

在0℃下，向溶于DMF(30.5mL，0.944g/mL，393.2mmol)中的4-氯-1H-吡咯并-[3,2-c]-吡啶[60290-21-3](2.0g，13.1mmol)的溶液中分批添加氢化钠(1.1g，28.8mmol)。允许反应混合物达到rt并搅拌45min，之后将其重新冷却至0℃，并逐滴添加1-溴丁烷(2.1mL，1.27g/mL，19.7mmol)。然后允许混合物达到rt并搅拌过夜。添加NaHCO₃饱和溶液，并且将水相用EtOAc萃取。将合并的有机萃取物用水和盐水洗涤，然后经MgSO₄干燥，并在真空中浓缩。将粗残余物通过柱色谱法(硅胶；梯度：庚烷/EtOAc从100/0至50/50)纯化，以产生呈黄色液体的I-1(2.7g，98.7％)。

中间体2

从4-溴-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶[1000342-68-6](2g，10.2mmol)和1-溴丁烷(1.65mL，15.2mmol)开始，以与I-1类似的方式制备I-2，以产生呈黄色液体的I-2(2.33g，91％)。

从所指示的起始材料4-溴-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶([1000342-68-6])或4-氯-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶([60290-21-3])开始以类似的方式制备以下中间体。

中间体28

将DAST[38078-09-0](1.04mL，8.49mmol)的溶液逐滴添加至I-20(465mg，1.98mmol)在干DCM(42.46mL)中的溶液中。将所得的溶液在35℃下搅拌48h，之后将反应通过添加碳酸氢钠饱和溶液淬灭。然后将RM用DCM萃取三次。将OL经Na₂SO₄干燥，过滤并在真空中浓缩。将粗残余物通过柱色谱法(硅胶，EtOAc在庚烷中，梯度从0至30％)纯化。将纯级分蒸发，产生呈粘性固体的I-28(164mg，32％)。

从所指示的起始材料以类似的方式合成以下中间体：

中间体33

在0℃下，向溶于DMF(51mL)中的4-氯-1H-吡咯并-[3,2-c]-吡啶[60290-21-3](1.0g，6.5mmol)的溶液中分批添加氢化钠(288mg，7.2mmol)。允许反应混合物达到rt并搅拌45min，之后将其重新冷却至0℃，并逐滴添加(3-溴丙氧基)-叔丁基二甲基硅烷[89031-84-5](2.5g，9.8mmol)。然后允许混合物达到rt并搅拌过夜。添加NaHCO₃饱和溶液，并且将水相用EtOAc萃取。将合并的有机萃取物用水和盐水洗涤，然后经MgSO₄干燥，并在真空中浓缩以得到。将残余物通过柱色谱法(硅胶；DCM/MeOH，梯度从100/0至95/5)纯化，以产生呈黄色液体的I-31(2.7g，98.7％)。

将I-31(1.67g，5.146mmol)溶于THF(41mL)中并添加TBAF(1M在THF中，6.7mL，6.69mmol)，并且将rm在室温下搅拌1h。将RM在真空中浓缩，并且将残余物在NaHCO₃的水溶液和DCM之间分配并用DCM萃取。将有机级分经MgSO₄干燥，并在真空中浓缩。将残余物通过柱色谱法(硅胶；DCM/MeOH，梯度从100/0至95/5)纯化，以产生I-32a(1g，92％)。

在0℃下，向I-32a(900mg，4.272mmol)在DCM(21mL)中的溶液中一次性添加戴斯-马丁高碘烷(Dess-Martin periodinane)(1.9g，4.486mmol)。将反应混合物在rt下搅拌1h。将反应混合物用NaHCO₃饱和水溶液淬灭，并添加Na₂S₂O₃饱和水溶液，并且将反应混合物搅拌30min。将有机层分离，用盐水洗涤，经MgSO₄干燥，并且将溶剂在真空下去除以得到I-32b(900mg，产率100％)，将其不经纯化而用于下一步骤。

将I-32b(891.34mg，4.3mmol)悬浮于DCM(178mL)中，并冷却至0℃。逐滴添加二乙氨基三氟化硫(1mL，4.3mmol)。然后将反应混合物首先在0℃下搅拌，然后允许其温热至rt。在rt下3h后，将反应混合物用水和NaHCO₃处理，并用DCM萃取。将合并的萃取物用水洗涤，经MgSO₄干燥，过滤并浓缩。将粗残余物通过柱色谱法(硅胶；洗脱液：DCM)纯化，以得到I-33(425mg，产率43％)。

中间体34

将甲基2-(溴甲基)-5-硝基-苯甲酸酯[90725-68-1](1g，3.65mmol)和甲胺(40％在水中，0.346mL，4.014mmol)在MeOH(8mL)中的溶液在rt搅拌16h。添加水，并且将混合物用EtOAc萃取。将合并的有机层经MgSO₄干燥，过滤并在真空中蒸发，以产生呈黄色固体的I-34(700mg，定量)。

中间体35

在氮气气氛下，将Pd/C(10％，96.911mg，0.0911mmol)添加至I-34(700mg，3.64mmol)在MeOH(8mL)和EtOH(8mL)中的搅拌溶液中。将混合物在rt下在H₂(大气压)下氢化18h。将混合物通过硅藻土垫过滤，并且将残余物用MeOH洗涤。将滤液在真空中蒸发，以产生呈黄色固体的I-35(590.78mg，定量)。

中间体36

将I-35(0.591g，3.643mmol)溶于乙酸(7.5mL)和CHCl₃(7.5mL)中。然后在剧烈搅拌下，添加Br₂(0.411mL，8.01mmol)在乙酸(2.5mL)和CHCl₃(2.5mL)中的溶液。将混合物在rt下搅拌16h。添加DCM，并且将溶液用水和饱和NaHCO₃洗涤。将有机相经MgSO₄干燥，过滤，并且将挥发物在真空中蒸发。将粗产物通过快速柱色谱法(硅胶；EtOAc在庚烷中，梯度从0/100至100/0)纯化。收集所希望的级分并将其在真空中浓缩，以产生呈黄色固体的I-36(373mg，32％)。

中间体37

将I-36(323mg，1.009mmol)和甲基硼酸(302.125mg，5.047mmol)添加至1,4-二噁烷(8mL)、水(2mL)和碳酸钠(641.93mg，6.06mmol)的搅拌溶液中。添加PdCl₂(dppf)(82.638mg，0.101mmol)。将反应混合物在105℃下搅拌过夜。然后添加水和EtOAc。将有机层分离，干燥(MgSO₄)并过滤，并且将溶剂在真空中蒸发。将粗混合物通过快速柱色谱法(二氧化硅；EtOAc在庚烷中，梯度从0/100至50/50)纯化。收集所希望的级分并将其在真空中浓缩，以产生呈橙色固体的I-37(107mg，56％)。

中间体38

将4-氨基-3-氟吡啶[2247-88-3](3g，26.76mmol)和N-碘代琥珀酰亚胺[516-12-1](6.081g，27.028mmol)溶于DMF(51.802mL，669.01mmol)中，并在rt下搅拌12h，然后在70℃下搅拌3天。然后，每天添加另外的N-碘代琥珀酰亚胺(3.0g，13.4mmol)，持续2天，并在50％转化后终止反应。将溶剂在真空中浓缩。将粗品溶于EtOAc中并用NaHSO₃的饱和溶液洗涤。将有机层干燥(MgSO₄)，过滤并浓缩。通过快速柱色谱法(二氧化硅，庚烷/EtOAc，梯度从100/0至50/50)进行第二次纯化，以产生呈白色固体的I-38(1.7g，27％)。

中间体39

将I-38(350mg，1.471mmol)、异戊二烯基硼酸频哪醇酯[126726-62-3](414.632μL，2.21mmol)和Pd(PPh₃)₄(169.937mg，0.15mmol)在NaHCO₃饱和溶液(2mL)和1,4-二噁烷(3.76mL，44.1mmol)中的混合物搅拌，并在MW中在氮气气氛下在130℃加热15min。将混合物用饱和NaHCO₃处理并用EtOAc萃取。将有机层分离，干燥(MgSO₄)，过滤，并且将溶剂在真空中蒸发。将产物通过快速柱色谱法(二氧化硅，庚烷/EtOAc，梯度从100/0至50/50)纯化，以获得呈无色油状物的I-39(205mg，92％)。

从所指示的起始材料和试剂以类似的方式合成以下中间体：

中间体40

向I-39(205mg，1.347mmol)在EtOH(23.205mL)中的溶液中添加Pd/C(10％，1.434g，1.347mmol)。将混合物在氢气气氛下搅拌1h。将溶剂在真空中蒸发，以获得呈无色液体的I-40(202.5mg，产率97％)。

从所指示的起始材料和试剂以类似的方式合成以下中间体：

中间体41A

将2,3-二氢-7-甲基-1,4-苯并二噁英-6-胺[59820-84-7](0.3g，1.816mmol)溶于乙酸(10mL)中。然后将含有Br₂(0.102mL，1.998mmol)的乙酸(2mL)溶液在剧烈搅拌下滴入溶液中。将混合物在rt下搅拌4h。将CHCl₃(10mL)添加至混合物中。添加DCM，并且将溶液用水洗涤。将合并的有机萃取物干燥(MgSO₄)，过滤，并且将所有的挥发物在真空中蒸发。将粗产物通过快速柱色谱法(二氧化硅；EtOAc在庚烷中，梯度从0/100至20/80)纯化。收集所希望的级分并将其在真空中浓缩，以产生呈黄色固体的I-41(333mg，75％)。

中间体41B

将2,3-二氢-7-甲基-1,4-苯并二噁英-6-胺[59820-84-7](0.3g，1.816mmol)溶于乙酸(10mL)中。然后添加N-氯代琥珀酰亚胺(266.76mg，1.998mmol)，并且将混合物在RT下搅拌16h。添加DCM，并且将溶液用水洗涤。将有机相用NaHCO₃洗涤，经MgSO₄干燥，过滤，并且将所有的挥发物在真空中蒸发。将粗产物通过快速柱色谱法(二氧化硅；EtOAc在庚烷中，梯度从0/100至40/60)纯化。收集所希望的级分并将其在真空中浓缩，以产生呈黄色固体的I-41b(117mg，32％)。

中间体42

将I-41a(233mg，0.96mmol)和甲基硼酸(142.85mg，2.39mmol)添加至1,4-二噁烷(8mL)、水(2mL)和碳酸钠(303.52mg，2.86mmol)的搅拌溶液中。添加PdCl₂(dppf)(39.07mg，0.048mmol)。将反应混合物在100℃下搅拌过夜。然后，在rt下添加甲基硼酸(142.85mg，2.39mmol)、碳酸钠(303.52mg，2.86mmol)和PdCl₂(dppf)(39.07mg，0.048mmol)，并且将反应混合物在105℃下搅拌16h。添加水和EtOAc，将有机层分离，干燥(MgSO₄)并过滤，并且将溶剂在真空中蒸发。将粗品通过快速柱色谱法(二氧化硅；EtOAc在庚烷中，梯度从0/100至50/50)纯化。收集所希望的级分并将其在真空中浓缩，以产生呈固体的I-42(94mg，55％)。

中间体43

将4-溴-2,6-二甲基-苯胺(400mg，2.0mmol)、1-甲基-1H-吡唑-4-硼酸(302.098mg，2.40mmol)和碳酸钠(1M水溶液，1.999mL，1.999mmol)在1,4-二噁烷(10mL)中的溶液用N₂鼓泡5min。然后添加PdCl₂(dppf)(81.63mg，0.1mmol)，并且将混合物反应在100℃下搅拌6h。然后添加水，并且将混合物用EtOAc萃取。将合并的有机层经MgSO₄干燥，过滤并在真空中蒸发。将粗品通过快速色谱法(二氧化硅；EtOAc在庚烷中，梯度从0/100至60/40)纯化，以产生呈白色固体的I-43(160mg，40％)。

中间体44

将HATU[148893-10-1](503.1mg，1.323mmol)添加至3-氨基-2,4-二甲基-苯甲酸[64289-45-8](154mg，0.932mmol)、吡咯烷[123-75-1](110μL，1.305mmol)和三乙胺(260μL，1.865mmol)在DCM(3mL)中的溶液中，同时在rt下搅拌，并且将反应混合物搅拌48h。将混合物倾倒入K₂CO₃溶液中，并且将有机层分离。将水相用DCM萃取两次。将有机层合并，经MgSO₄干燥，过滤并浓缩。将粗中间体经由制备型HPLC(固定相：RP XBridge Prep C18 OBD-10μm，30x 150mm，流动相：0.25％NH₄HCO₃水溶液，MeOH)纯化，以产生呈黄色油状物的I-44(139.6mg，产率68.597％)。

从所指示的起始材料和试剂以类似的方式合成以下中间体。

中间体49

向1-(苯磺酰基)-4-溴-5-氮杂吲哚[1257294-40-8](1g，2.9mmol)在叔丁醇(12mL)中的溶液中添加3,5-二甲基吡啶-4-胺(398.5mg，3.3mmol)和碳酸铯(2.2g，6.5mmol)，并且将所得的溶液用氮气脱气。向此反应混合物中添加Pd(OAc)₂(67mg，0.297mmol)和Xantphos(171.6mg，0.297mmol)，并且将所得的溶液在120℃下加热1h。将溶剂在真空中去除，并且将粗品用水稀释，用DCM萃取，经MgSO₄干燥，并在真空中浓缩。将粗混合物通过快速柱色谱法(二氧化硅，DCM/(NH₃在MeOH中)，梯度从100/0至97/3)纯化，以得到I-49(43mg，6％)。

从所指示的起始材料和试剂以类似的方式合成以下中间体。

中间体51

将叔丁基N-(7-氯-2,3-二氢-[1,4]二噁英并[2,3-b]吡啶-8-基)氨基甲酸酯[1346447-03-7](480mg，1.67mmol)在HCl(6M在i-PrOH中，15mL，90mmol)中的混合物在rt下搅拌2h。将溶剂蒸发，并且将残余物溶于水中，吸收进水中，并用K₂CO₃碱化。将溶液用DCM萃取，经MgSO₄干燥，过滤并蒸发，以得到呈无色油状物的I-51(307mg，98％)。

中间体52

向3,5-二氯哒嗪-4-胺[53180-76-0](1000mg，6.1mmol)在DME(25mL)和K₂CO₃水溶液(12.5mL)中的混合物中添加异戊二烯硼酸频哪醇酯[126726-62-3](1.13g，6.7mmol)和Pd(PPh₃)₄(422.79mg，0.37mmol)。在120℃在氮气气氛下，在压力管中，将所得的混合物搅拌并加热90min。将溶剂蒸发，并且将残余物吸收进水中，并用DCM萃取。将合并的有机萃取物经MgSO₄干燥，过滤并蒸发。将残余物通过快速柱色谱法(二氧化硅，庚烷/EtOAc，梯度从100/0至50/50)纯化。将纯级分蒸发，以得到呈棕色固体的I-52(930mg，89.9％)。

中间体53

将I-52(810mg，4.78mmol)、甲基氯化锌[5158-46-3](4.78mL，2M，9.55mmol)和Pd(t-Bu₃P)₂[53199-31-8](366.09mg，0.72mmol)在干THF(20mL)中的混合物在室温下搅拌2h。将反应通过添加NH₄Cl饱和溶液淬灭，并且将混合物蒸发直至水。将水相用DCM萃取，经MgSO₄干燥，过滤并蒸发。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，DCM/MeOH，梯度从100/0至90/10)纯化。将纯级分在蒸发，产生呈白色固体的I-53(126mg，28.65％)。

中间体54

向I-53(126mg，0.85mmol)在MeOH(22mL)中的溶液中添加Pd/C(10％，90mg，0.085mmol)。将混合物在氢气气氛下搅拌1h。将溶剂在真空中蒸发，以获得呈白色固体的I-54(120mg，94％)。

中间体55

将N-氯代琥珀酰亚胺(266mg，1.8mmol)添加至2,3-二氢-7-甲基-1,4-苯并二噁英-6-胺([59820-84-7]，300mg，1.8mmol)在乙酸(10mL)和CHCl₃(10mL)中的溶液中。将混合物在室温下搅拌16h。添加DCM，并且将溶液用水、NaHCO₃洗涤，并经MgSO₄干燥。将溶液过滤，并且将所有的挥发物在真空中蒸发。将粗产物通过快速柱色谱法(二氧化硅；EtOAc在庚烷中，梯度从0/100至40/60)纯化。收集所希望的级分并将其在真空中浓缩，以呈黄色固体的I-55(117mg，32％)。

中间体56

向I-51(207mg，1.11mmol)在THF(10mL)中的溶液中添加甲基氯化锌[5158-46-3](2M，1.11mL，2.22mmol)和Pd(t-Bu₃P)₂(85.04mg，0.17mmol)，并且将混合物在室温下搅拌2h。添加另外的甲基氯化锌(2M，1.11mL，2.22mmol)，并且将混合物在rt下搅拌过夜。将反应用饱和NH₄Cl溶液淬灭，并用EtOAc萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经MgSO₄干燥，过滤并蒸发。将残余物通过SFC(固定相：Chiralpak Daicel IC 20x 250mm；流动相：CO₂，EtOH+0.4iPrNH₂)纯化，以得到呈无色油状物的I-56(10mg，5.3％)。

中间体57

向在-40℃搅拌的BuLi(2.5M在己烷中，0.63mL，1.58mmol)在干THF(5.1mL)中的溶液中添加DIPA(0.28mL，1.98mmol)，并且将混合物在-40℃下搅拌15min。将RM冷却至-78℃，并逐滴添加I-2(250mg，0.99mmol)在THF(10mL)中的溶液。将反应混合物在-78℃下搅拌30min。然后逐滴添加N-氟苯-磺酰亚胺[133745-75-2](498.29mg，1.58mmol)在THF(10mL)中的溶液，并且将反应混合物在-78℃下搅拌1h，然后经1h的时间段缓慢温热至室温。将反应混合物通过添加水分解，并蒸发直至剩余水。将水相用DCM萃取，经MgSO₄干燥，过滤并蒸发。将残余物通过RP色谱法纯化，产生呈粘性油状物的I-57(98mg，36.6％)。

中间体58

在0℃下，向溶于硝基乙烷(10mL)中的I-1(500mg，2.4mmol)的溶液中分批添加

(1697.55mg，4.79mmol)。将反应混合物搅拌98h。将混合物用冰水(20mL)淬灭，并用NaOH(1M水溶液，1mL)中和。将此混合物用EtOAc萃取(两次)。将合并的有机层经MgSO₄干燥，过滤并蒸发。将残余物通过快速柱色谱法(庚烷/EtOAc，梯度从90/10至50/50)纯化。将级分蒸发，以得到呈澄清油状物的I-58(125mg，23％)。

中间体59

在-15℃下，向N-(4-氟-2,6-二甲基苯基)-乙酰胺[16643-18-8](572mg，3.16mmol)在浓硫酸(1mL)中的溶液中逐滴添加发烟硝酸(136μL，3.18mmol)，同时维持反应温度在-15℃。添加后，将反应搅拌30min，然后倾倒入冰水中。形成白色固体沉淀物，将其通过过滤分离以提供产物I-59(714mg，3.157mmol)。

中间体60

在65℃下，将I-59和甲胺(299μL，3.47mmol)在EtOH(10mL)中的溶液搅拌16h。然后，在rt下添加另外的甲胺(299μL，3.47mmol)并在100℃下搅拌16h。将溶剂蒸发。将粗产物通过快速柱色谱法(二氧化硅；EtOAc在庚烷中，梯度从0/100至100/0)纯化。收集所希望的级分并将其在真空中浓缩，以产生呈黄色固体的I-60(621mg，2.6mmol)。

中间体61

在氮气下，将I-60(621mg，2.6mmol)添加至Pd/C(10％，69.64mg，0.065mmol)在MeOH(5mL)中的搅拌溶液中。将混合物在室温下氢化(大气压)18h。将混合物通过硅藻土垫过滤，并且将残余物用MeOH洗涤。将滤液在真空中蒸发，以产生呈白色固体的I-61(534mg，98％)。

中间体62

将甲酸(9mL)添加至I-61(534mg，2.6mmol)中。将反应混合物在100℃下搅拌4h。将溶剂在真空中蒸发，以产生呈黄色固体的I-62(553mg，98％)。

中间体63

在40℃下，将I-62和HCl(4M在二噁烷中，1.27mL，5.1mmol)在MeOH(10mL)中的溶液搅拌16h。然后，在rt下添加另外的HCl(4M在二噁烷中，1.27mL，5.1mmol)，然后将混合物在80℃下再搅拌16h。每天添加HCl(4M在二噁烷中，1.27mL，5.1mmol)，持续10天，并且将反应混合物搅拌并在80℃下加热。将溶剂蒸发。添加NaHCO₃，并且将混合物用EtOAc萃取。将合并的有机层经MgSO₄干燥，过滤并在真空中蒸发。将粗产物通过快速柱色谱法(二氧化硅；EtOAc在庚烷中，梯度从0/100至100/0；然后是DCM/MeOH(10:1)在DCM中，梯度从0/100至50/50)纯化。收集所希望的级分并将其在真空中浓缩，以得到呈棕色油状物的I-63(50mg，11％)。

中间体64

在氮气气氛下，将I-1(100mg，0.48mmol)和乙酰胺(31mg，0.52mmol)添加至Pd(OAc)₂(4.3mg，0.019mmol)、XantPhos(24mg，0.043mmol)和碳酸铯(0.3g，0.96mmol)在二噁烷(8mL)中的搅拌溶液中。将混合物在90℃下搅拌18h。将残余物溶于EtOAc和水中。将有机层用水洗涤，干燥(MgSO₄)，过滤，并且将溶剂在真空中蒸发。将粗产物通过快速柱色谱法(二氧化硅，EtOAc在庚烷中，梯度从0/100至100/0)纯化。收集所希望的级分并将其在真空中浓缩，以产生呈粘性固体的I-64(48mg，43％)。

从所指示的起始材料以与针对I-64所述类似的方式获得以下中间体。

中间体65

在50℃下，将I-64(322mg，1.39mmol)和盐酸(2.27mL，2.78mmol)在MeOH(2mL)中的溶液搅拌16h。然后，在rt下添加另外的盐酸(2.27mL，2.78mmol)，并且将混合物在50℃下搅拌16h。将溶剂蒸发。添加NaHCO₃，并且将混合物用EtOAc萃取。将合并的有机层经MgSO₄干燥，过滤并在真空中蒸发。将粗产物通过快速柱色谱法(二氧化硅；EtOAc在庚烷中，梯度从0/100至100/0；然后是DCM/MeOH(10:1)在DCM中，梯度从0/100至0/100)纯化。收集所希望的级分并将其在真空中浓缩，以产生呈黄色油状物的I-65(100mg，38％)。

从所指示的起始材料以与针对I-65所述类似的方式获得以下中间体。

中间体66

向1,6-二甲基-1H-吲唑-5-胺([1780910-53-3]，430mg，2.7mmol)在DCM(15mL)中的溶液中添加溴(150μL，2.94mmol)在DCM(5mL)中的溶液。将混合物在室温下搅拌16h。添加DCM(30mL)，并且将溶液用水洗涤。将合并的有机萃取物经MgSO₄干燥，过滤，并且将所有的挥发物在真空中蒸发。将粗产物通过柱色谱法(二氧化硅；EtOAc在庚烷中，梯度从0/100至50/50)纯化。收集所希望的级分并将其在真空中浓缩，以产生呈白色固体的I-66(610mg，95％)。

中间体67

在氮气气氛下，将I-66(610mg，2.54mmol)和甲基硼酸(380mg，6.35mmol)添加至碳酸钠(807mg，7.6mmol)在水(2mL)和二噁烷(8mL)中的搅拌混合物中。添加PdCl₂(dppf)(103mg，0.12mmol)。将反应混合物在105℃下搅拌过夜。添加水和EtOAc。将有机层分离，干燥(MgSO₄)，过滤，并且将溶剂在真空中蒸发。将粗品通过快速柱色谱法(二氧化硅；EtOAc在庚烷中，梯度从0/100至50/50)纯化。收集所希望的级分并将其在真空中浓缩，以产生呈黄色固体的I-67(330mg，74％)。

中间体68

将五氧化二磷(1.79g，12.6mmol)在甲磺酸(14.9mL，229mmol)中的溶液搅拌5h，之后在氮气气氛下添加N-甲基-3-硝基-苯乙酰胺[19281-10-8](1.79g，12.6mmol)和多聚甲醛(387.7mg，12.6mmol)，并且将反应混合物在80℃下搅拌48h。将反应混合物冷却至0℃，并且添加水。将残余物溶于EtOAc中，并且将混合物的pH用NaOH(5M)调节至8，并用EtOAc萃取。将有机相分离，干燥(MgSO₄)，过滤，并且将溶剂在真空中蒸发。将粗品通过快速柱色谱法(二氧化硅，EtOAc在庚烷中，梯度从0/100至100/0)纯化。收集所希望的级分并将其在真空中浓缩，以产生呈白色固体的I-68(495mg，24％)。

中间体69

在氮气气氛下，将Pd/C 10％(74.8mg，0.07mmol)添加至I-68(580mg，2.8mmol)在MeOH(10mL)中的搅拌溶液中。将混合物在室温下氢化(大气压)18h。将混合物通过硅藻土垫过滤，并且将残余物用MeOH洗涤。将滤液在真空中蒸发，以产生呈棕色固体的I-69(452mg，53％)。

中间体70

将I-69(456mg，2.6mmol)溶于CHCl₃(7.5mL)和乙酸(7.5mL)中。然后将含有溴(292μL，5.6mmol)的CHCl₃(2.5mL)和乙酸(2.5mL)溶液在剧烈搅拌下滴入混合物中。将混合物在室温下搅拌5h。添加DCM，并且将溶液用水和饱和NaHCO₃洗涤，经MgSO₄干燥，过滤，并且将所有的挥发物在真空中蒸发。将粗产物通过快速柱色谱法(二氧化硅；EtOAc在庚烷中，梯度从0/100至50/50)纯化。收集所希望的级分并将其在真空中浓缩，以产生呈黄色固体的I-70(452mg，52％)。

中间体71

将I-70(452mg，1.35mmol)和甲基硼酸(405mg，6.7mmol)添加至二噁烷(8mL)、水(2mL)和碳酸钠(860mg)的搅拌溶液中。添加PdCl₂(dppf)(110mg，0.135mmol)，并且将反应混合物在105℃下搅拌过夜。添加水和EtOAc。将有机层分离，干燥(MgSO₄)并过滤，并且将溶剂在真空中蒸发。将粗品通过快速柱色谱法(二氧化硅；EtOAc在庚烷中，梯度从0/100至100/0)纯化。收集所希望的级分并将其在真空中浓缩，以产生呈黄色固体的I-71(151mg，54％)。

中间体72

在rt下，向化合物编号(Co.No.)64(200mg，0.569mmol)在THF(19mL)和DMF(18mL)中的溶液中添加NaH(60％分散体在矿物油中，25mg，0.626mmol)。然后将反应混合物搅拌直至气体逸出停止。分批添加二碳酸二叔丁酯(136mg，0.626mmol)，并且将反应混合物在rt下搅拌4h并在80℃下搅拌1h。然后将混合物用水稀释并用DCM萃取。将有机层分离，干燥(MgSO₄)，过滤，并且将溶剂在真空中蒸发。将粗混合物通过快速柱色谱法(硅胶；DCM/MeOH，梯度从100/0至100/0)纯化，以获得I-72(182mg，71％)。

中间体73

在0℃下，将硼氢化锂(2M在THF中，236μL，0.473mmol)添加至I-72(178mg，0.394mmol)在THF(5mL)中的搅拌溶液中。将反应混合物在rt下搅拌12h。添加另外的硼氢化锂(98.5μL)，并且将反应混合物在rt下搅拌4h。然后添加Na₂SO₄.10H₂O，并且将混合物在rt下搅拌1h。将溶液通过硅藻土过滤并用EtOAc洗涤。将溶剂在真空中蒸发，以得到I-73，将其不经进一步纯化而用于下一步骤。

中间体74

将I-73(170mg，0.401mmol)悬浮于DCM(17mL)中，并冷却至0℃。逐滴添加DAST(59μL，0.482mmol)，并且将反应混合物首先在0℃下搅拌，然后在rt下搅拌15h。添加另外的DAST(14.7μL)，并且将反应混合物搅拌12h。将反应混合物用水处理并用DCM萃取。将合并的有机萃取物用水洗涤，干燥(MgSO₄)，过滤并在真空中浓缩。将粗混合物通过制备型HPLC(固定相：XBridge Prep C183.5μm，4.6x 100mm；流动相：0.2％NH₄HCO₃水溶液，MeOH)纯化，以得到I-74(74mg，43％)。

中间体97

将4-氯-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶[60290-21-3](1.00g，6.55mmol)溶于DMF(52mL)中。在0℃下添加NaH(60％分散体在矿物油中，288mg，7.21mmol)，并且将反应混合物在室温下搅拌。当气体逸出停止时，在0℃下添加(2-溴乙氧基)-叔丁基二甲基硅烷(2.1mL，9.83mmol)。将反应混合物在室温下搅拌3h，并用水淬灭。将混合物用EtOAc稀释。将水层用EtOAc萃取(3次)。将合并的有机层用盐水洗涤，干燥(MgSO₄)，过滤并在真空中浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(二氧化硅，DCM/MeOH，梯度从100:0至98:2)纯化，以得到I-97(1.6g，79％)。

中间体98

将I-97(1.60g，5.15mmol)溶于THF(41mL)中，并添加TBAF(1M在THF中，6.7mL，6.70mmol)。将反应混合物在室温下搅拌1h，并在真空中浓缩。将残余物用NaHCO₃(饱和水溶液)吸收，并用DCM萃取。将有机层干燥(MgSO₄)，过滤并在真空中蒸发。将粗混合物通过快速柱色谱法(二氧化硅，DCM/MeOH，梯度从100:0至95:5)纯化，以得到I-98(950mg，94％)。

中间体99

将I-98(300mg，1.53mmol)在DCM(20mL)和DMF(5mL)中的搅拌溶液冷却至0℃。添加Et₃N(0.28mL，1.98mmol)，随后添加MsCl(0.13mL，1.68mmol)。将反应混合物在此温度下搅拌1h，并用水淬灭。将水相用DCM萃取。将有机层干燥(MgSO₄)，过滤并在真空中浓缩，以得到I-99，将其原样用于下一步骤。

中间体100

将I-99(419mg，1.53mmol)、3,3-二氟氮杂环丁烷盐酸盐[288315-03-7](296mg，2.29mmol)、Et₃N(2.1mL，15.3mmol)和KI(253mg，1.53mmol)在DMF(10mL)中的混合物在60℃下搅拌。将反应混合物冷却至室温，并用EtOAc稀释。将混合物用水和盐水洗涤。将有机级分干燥(MgSO₄)，过滤并在真空中浓缩。将粗混合物通过快速柱色谱法(二氧化硅，DCM/MeOH，梯度从100:0至98:2)纯化，以得到I-100(90mg，22％)。

中间体101

将I-22(500mg，1.78mmol)溶于DMF(7mL)中。在0℃下添加NaH(60％分散体在矿物油中，78mg，1.96mmol)，并且将混合物在室温下搅拌。当气体逸出停止时，在0℃下添加MeI(222μL，3.56mmol)，并且将反应混合物在室温下搅拌6h，用水淬灭并用EtOAc稀释。将水层用EtOAc萃取(3次)。将合并的有机层用盐水洗涤，干燥(MgSO₄)，过滤并在真空中浓缩。将粗混合物通过快速柱色谱法(二氧化硅，庚烷/EtOAc，梯度从100:0至80:20)纯化，以得到I-101(300mg，28％)。

中间体102

在0℃下，向I-22(1.36g，6.05mmol)在DCM(30mL)中的溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(2.70g，6.54mmol)。将反应混合物在室温下搅拌1h。将反应用NaHCO₃(饱和水溶液)和Na₂S2O₃(饱和水溶液)淬灭。将混合物搅拌30min。将有机层分离，用盐水洗涤，干燥(MgSO₄)，过滤，并且将溶剂在真空中去除。将粗混合物通过快速柱色谱法(二氧化硅，DCM/MeOH，梯度从100:0至98:2)纯化，以得到I-102(416mg，31％)。

中间体103

在0℃下，将MeMgBr(3M溶液，0.3mL，0.9mmol)添加至I-102(100mg，0.45mmol)在THF(1mL)中的溶液中。将反应混合物搅拌3h，并添加NH₄Cl(饱和水溶液)。将混合物用EtOAc萃取。将合并的有机萃取物干燥(Na₂SO₄)，过滤并在真空中浓缩。将粗混合物通过快速柱色谱法(二氧化硅，DCM/MeOH，梯度从100:0至98:2)纯化，以得到I-103(57mg，53％)。

中间体104

将I-103(500mg，2.095mmol)悬浮于DCM(40mL)中，并且将溶液冷却至0℃。逐滴添加DAST(0.5mL，4.19mmol)，并且将反应混合物在0℃下搅拌，然后在室温下搅拌3h。将反应用水和NaHCO₃处理。将水相用DCM萃取。将合并的有机萃取物用水洗涤，干燥(MgSO₄)，过滤并在真空中浓缩。将粗混合物通过快速柱色谱法(二氧化硅，DCM)纯化，以得到I-104(450mg，89％)。

中间体105

在0℃下并且在N₂气氛下，将NaH(60％分散体在矿物油中，649mg，16.2mmol)添加至2-羟基-4-甲基-3-硝基吡啶[21901-18-8](1.00g，6.49mmol)在CH₃CN(70mL)中的浆料中。将混合物在室温下搅拌45min，并逐滴添加2,2-二氟-2-(氟磺酰基)乙酸[1717-59-5](0.89mL，8.37mmol)。将反应混合物在20℃下搅拌过夜。将反应用NH₄Cl(饱和水溶液)淬灭并用EtOAc萃取(两次)。将合并的有机萃取物用盐水洗涤，干燥(MgSO₄)，过滤并在真空中浓缩至干燥。将粗混合物通过快速柱色谱法(二氧化硅，庚烷/EtOAc，梯度从100:0至50:50)纯化，以得到I-105(670mg，51％)。

中间体106

将I-105(0.81g，3.97mmol)溶于EtOH(22mL)、THF(7.4mL)和水(7.4mL)中。添加铁(1.77g，31.7mmol)和氯化铵(2.55g，47.6mmol)。将反应混合物在密封管中在60℃下搅拌2h。将反应混合物用EtOH稀释并通过

过滤。将垫用EtOH洗涤，并且将滤液在真空中浓缩至约2mL。将溶液用DCM稀释，并用NaHCO₃(饱和水溶液)洗涤。将有机层干燥，过滤并在真空中蒸发，以得到I-106(685mg，79％，80％纯度)。

中间体107

向2-甲基-4-(三氟甲基)苯胺[67169-22-6](5.00g，28.5mmol)在DMF(50mL)中的搅拌溶液中分小份添加N-氯代琥珀酰亚胺(4.28g，31.4mmol)。将反应混合物在50℃下搅拌2h，冷却并在真空中浓缩。将残余物用DCM稀释，并用K₂CO₃(饱和水溶液)处理(两次)。将有机层干燥(MgSO₄)，过滤并在真空中浓缩。将粗混合物通过快速柱色谱法(二氧化硅，庚烷/EtOAc，梯度从100:0至60:40)纯化。将残余物溶于DIPE中，并用HCl(6M在i-PrOH中)处理，并搅拌过夜。将白色固体通过过滤收集并干燥，以得到I-107(5.6g，80％)。

从所指示的起始材料以与针对中间体I-107所述类似的方式合成以下中间体。

中间体110

将3-溴-5-甲基吡啶-4-胺[97944-43-9](5.00g，26.7mmol)、异丙烯基硼酸频哪醇酯(6.70g，39.9mmol)、Pd(PPh₃)₄(3.20g，2.71mmol)和NaHCO₃(饱和水溶液，50mL)在1,4-二噁烷(50mL)中的混合物在回流下搅拌16h。将悬浮液冷却，并用水和DCM稀释，直至清晰的相分离。将水相用DCM萃取。将合并的有机萃取物干燥(MgSO₄)，过滤并在真空中浓缩。将粗混合物通过快速柱色谱法(二氧化硅，DCM/(7NNH₃在MeOH中)，梯度从100:0至97:3)纯化。

将残余物与另一级分(10mmol)合并，并且将混合物溶于i-PrOH(20mL)中，并用HCl(6M在i-PrOH中，9mL，54mmol)处理。将混合物搅拌整个周末，冰冷却，并且将产物通过过滤收集，以得到呈白色固体的I-110(4.5g，76％)。

中间体111

将I-110(1.50g，8.12mmol)冷却至10℃，并且经10min逐滴添加H₂SO₄(50％在H₂O中，3.4mL)。将反应混合物在0℃下搅拌整个周末。将混合物添加至冰冷的NaOH溶液(100mL)中。添加K₂CO₃，并且将水相用CHCl₃萃取。将混合物在真空中浓缩。将残余物吸收进Et₂O中，并在室温下搅拌。将所得的固体滤出并干燥，以得到I-111(449mg，33％)。

中间体112

向密封管中装入3-溴-5-甲基吡啶-4-胺[97944-43-9](1.00g，4.26mmol)、异丙烯基硼酸频哪醇酯[126726-62-3](1.07g，6.34mmol)、Pd(PPh₃)₄(507mg，0.43mmol)、1,4-二噁烷(10mL)和NaHCO₃(饱和水溶液，10mL)。将反应混合物在回流下搅拌16h，冷却，并用水和DCM稀释，直至清晰的相分离。将水相用DCM萃取。将合并的有机萃取物干燥(MgSO₄)，过滤并在真空中浓缩，以得到I-112(1.77g，83％，39％纯度)，将其原样用于下一步骤。

中间体113

将I-112(1.77g，3.52mmol)溶于MeOH(20mL)、H₂O(10mL)和THF(20mL)中。添加铁(4.25g，76.1mmol)和NH₄Cl(5.24g，98.0mmol)，并且将反应混合物在63℃下搅拌2h。将混合物冷却，并用DCM和NaHCO₃(饱和水溶液)稀释。添加硅藻土。将混合物过滤，并且将滤饼用DCM洗涤。将有机层分离并在真空中蒸发。将残余物用HCl处理，并用DCM洗涤。将水层用NaHCO₃碱化，并用DCM萃取。将合并的有机萃取物干燥(MgSO4)，过滤并在真空中蒸发。将粗混合物通过快速柱色谱法(二氧化硅，庚烷/EtOAc，梯度从100:0至70:30)纯化，以得到I-113(467mg，80％)。

中间体114

向I-113(233mg，1.40mmol)在THF(17mL)中的溶液中添加铂(5.46mg，0.03mmol)，并且将反应混合物在H₂气氛下在室温下搅拌1h。将反应混合物过滤，并且将滤液在真空中蒸发。将残余物与另一级分(1.4mmol)合并，并通过快速柱色谱法(二氧化硅，DCM/MeOH，梯度从100:0至90:10)纯化，以得到I-114(224mg，48％)。

中间体115

将2,4-二溴-6-(三氟甲基)吡啶-3-胺[1214365-67-9](900mg，2.81mmol)溶于1,4-二噁烷(7.2mL)和水(0.9mL)中。将三甲基环硼氧烷[823-96-1](1.13mL，8.07mmol)、Pd(dppf)Cl₂ DCM(206mg，0.25mmol)和K₂CO₃(1.17g，8.47mmol)添加至溶液中，并且将反应混合物在140℃下在微波中搅拌1h。将粗混合物与另一级分(0.31mmol)合并，并用水和EtOAc稀释。将水层萃取。将合并的有机萃取物用盐水洗涤，干燥(MgSO₄)，过滤并在真空中蒸发。将粗混合物通过快速柱色谱法(二氧化硅，DCM)纯化，以得到I-115(424mg，71％)。

中间体116和117

将2-氨基-5-硝基-4,6-二甲基吡啶[22934-22-1](1.43g，8.55mmol)溶于HCl(15％在H₂O中，22.9mL，274mmol)中，然后冷却至0℃。逐滴添加亚硝酸钠(590mg，8.55mmol)的水溶液，并且将反应混合物在0℃下搅拌30min，然后在室温下搅拌过夜。将混合物用CHCl₃萃取。将有机相干燥(MgSO₄)，过滤并在真空中蒸发，以得到I-116和I-117的混合物(1.15g，80％)。

中间体118和119

在0℃下并且在N₂气氛下，将NaH(60％分散体在矿物油中，684mg，17.1mmol)添加至I-116和I-117(1.15g，6.84mmol)在CH₃CN(42.2mL)中的混合物中。将混合物在室温下搅拌45min，并逐滴添加2,2-二氟-2-(氟磺酰基)乙酸[1717-59-5](0.94mL，8.83mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜，并用NaHCO₃(饱和水溶液)淬灭，将水相用EtOAc萃取。将合并的有机萃取物干燥(MgSO₄)，过滤并在真空中蒸发。将粗混合物通过快速柱色谱法(二氧化硅，庚烷/EtAOc，梯度从100:0至90:10)纯化，以得到I-118和I-119的混合物(1.10g，74％)。

中间体120和121

将I-118和I-119的混合物(1.10g，5.04mmol)溶于EtOH(28mL)、THF(9.4mL)和水(9.38mL)中。添加铁(2.25g，40.3mmol)和氯化铵(3.24g，60.5mmol)。将反应混合物在60℃下搅拌2h。将反应混合物用EtOH稀释并通过

过滤。将

垫用EtOH洗涤，并且将滤液在真空中浓缩。将残余物用DCM稀释，并用NaHCO₃(饱和水溶液)洗涤。将有机层干燥，过滤并在真空中蒸发。将粗混合物通过快速柱色谱法(二氧化硅，庚烷/EtOAc，梯度从100:0至70:30)纯化，以得到I-121(290mg，31％)和I-120(250mg，26％)。

中间体122

在N₂气氛下，将Pd(PPh₃)₄(45.1g，39.03mmol)添加至2-溴-3-氨基-4-甲基吡啶[126325-50-6](73.0g，390mmol)和异丙烯基硼酸频哪醇酯[126726-62-3](78.7g，468mmol)在1,4-二噁烷(741mL)和NaHCO₃(1M在H₂O中，742mL，742mmol)中的混合物中。将反应混合物在100℃下搅拌过夜。将反应混合物冷却至室温并通过

过滤。将滤饼用EtOAc洗涤。分离各层。将水相用EtOAc萃取(两次)。将合并的有机萃取物用盐水洗涤，干燥(MgSO₄)，过滤并在真空中浓缩。将残余物溶于DCM中，并冷却至0℃。添加HCl(2M，400mL，800mmol)，并且将所得的混合物在0℃下搅拌20min。将水层分离并用DCM萃取(3次)。将水层用DCM(200mL)稀释，并冷却至0℃。分批添加Na₂CO₃(86.9g，820mmol)，并且将混合物搅拌5min。添加水(100mL)。将混合物再搅拌20min，并且将有机层分离。将水层用DCM萃取(两次)。将合并的有机萃取物干燥(MgSO₄)，过滤并在真空中蒸发，以得到I-122(55.7g，96％)。

中间体123

向I-122(24.0g，162mmol)在EtOH(687mL)中的溶液中添加Pd/C(10％，2.06g，1.94mmol)。将反应混合物在室温在H₂气氛下搅拌8h。将混合物通过

过滤，并且将滤液在真空中浓缩。将粗混合物通过快速柱色谱法(二氧化硅，DCM/MeOH，梯度从100:0至98:2)纯化，以得到I-123(18.8g，77％)。

中间体124

在120℃在N₂气氛下，在压力管中，将2-溴-4-氟-6-甲基苯胺[202865-77-8](2.00g，9.80mmol)、异戊二烯硼酸频哪醇酯[126726-62-3](1.81g，10.8mmol)、Pd(PPh₃)₄(680mg，0.59mmol)和K₂CO₃(饱和水溶液，25mL)在DME(40.2mL)中的混合物搅拌90min。将混合物在真空中浓缩。将残余物吸收进水和DCM中。将有机相分离，干燥(MgSO₄)，过滤并在真空中蒸发。将粗混合物通过快速柱色谱法(二氧化硅，庚烷/EtOAc，梯度从100:0至50:50)纯化，以得到呈黄色油状物的I-124(1.13g，70％)。

从所指示的起始材料和试剂以与针对I-124所述类似的方式获得以下中间体。

中间体126

在室温下在H₂气氛下，将I-124(1.13g，6.84mmol)和Pd/C(10％，728mg，0.68mmol)在MeOH(179mL)中的混合物搅拌72h。将混合物过滤，并且将滤液在真空中蒸发，以得到I-126(884mg，77％)。

从所指示的起始材料以与针对I-126所述类似的方式获得以下中间体。

中间体128

在0℃下，将N-溴代琥珀酰亚胺[128-08-5](3.26g，18.3mmol)溶于DMF(10mL)中，并逐滴添加至4,5-二氟-2-甲基苯胺[875664-57-6](2.50g，17.5mmol)在无水DMF(21.4mL)中的溶液中。将反应混合物经15min温热至室温，并倾倒入水中。将混合物用Et₂O萃取。将有机层干燥(MgSO₄)，过滤并在真空中蒸发。将粗混合物通过快速柱色谱法(二氧化硅，庚烷/EtOAc，梯度从100:0至70:30)纯化，以得到I-128(1.8g，46％)。

中间体129

在无水条件下并使用干燥的玻璃器皿进行反应。将I-128(650mg，2.93mmol)在无水THF(14.6mL)中的混合物用N₂吹扫10min。添加Pd(t-Bu₃)₂P(43.9mg，85.9mmol)，并用注射器添加甲基氯化锌(2M溶液，2.20mL，4.40mmol)，同时维持内部温度在室温附近。将反应混合物搅拌1，并添加水(10mL)。将混合物通过硅藻土过滤，并且将滤液在真空中蒸发(剩余水)。将混合物用水(20mL)稀释，并且将水相用DCM萃取。将合并的有机萃取物干燥(MgSO₄)，过滤并在真空中浓缩。将粗混合物通过快速柱色谱法(二氧化硅，庚烷/EtOAc，梯度从100:0至70:30)纯化，以得到I-129(430mg，93％)。

中间体130

向1,5-二氟-3-甲基-2-硝基苯[1616526-80-7]在EtOH(200mL)和THF(75mL)中的搅拌溶液中添加氯化铵(26g，0.49mol)在H₂O(75mL)中的溶液。然后添加铁(18g，0.32mol)，并且将黑色悬浮液在60℃下剧烈搅拌2h。将混合物冷却并经硅藻土过滤。将硅藻土塞用EtOH洗涤。将滤液用THF稀释，并经硅藻土小塞过滤。将滤液用盐水和Et₂O稀释。分离各层。将水相用Et₂O萃取(3次)。将合并的有机萃取物用盐水洗涤，干燥(MgSO₄)，过滤并在真空中浓缩。将残余物溶于EtOH中，用HCl(6N在i-PrOH中)处理并在真空中浓缩。将残余物悬浮于DIPE中，以得到呈白色固体的I-130(2.31g，32％)。

中间体131

将2,6-二溴-4-(三氟甲基)苯胺[72678-19-4](5.13g，16.1mmol)、三甲基环硼氧烷[823-96-1](5mL，35.3mmol)、Pd(PPh₃)₄(1.11g，1.00mmol)和K₂CO₃(饱和水溶液，74mL)在DME(74mL)中的混合物在150℃下搅拌2h。将混合物在真空中浓缩，并且将残余物吸收进水和DCM中。将有机相分离，干燥(MgSO₄)，过滤并在真空中蒸发。将粗混合物通过快速柱色谱法(二氧化硅，庚烷/EtOAc，梯度从100:0至50:50)纯化，以得到呈棕色油状物的I-131(1.86mg，61％)。

中间体177

将4-溴-2,6-二甲基苯基胺[24596-19-8](1.00g，5.00mmol)、1-甲基-1H-吡唑-4-硼酸[847818-55-7](974mg，5.99mmol)和碳酸钠(1.32g，12.5mmol)在1,4-二噁烷(17mL)中的混合物用N₂吹扫5min。添加PdCl₂(dppf)(204mg，0.25mmol)，并且将反应混合物在90℃下搅拌6h。将混合物用水稀释并用EtOAc萃取。将合并的有机层干燥(MgSO4)，过滤并在真空中蒸发。将粗混合物通过快速柱色谱法(二氧化硅；庚烷/EtOAc，梯度从100/0至50/50)纯化，以得到I-177(206mg，20％)。

中间体132

将2-氯-5-氟嘧啶[62802-42-0](370mg，2.79mmol)、4-溴-1H-吡咯并[2,3-d]吡啶[1000342-68-6](500mg，2.54mmol)和NaH(60％分散体在矿物油中，152mg，3.81mmol)在DMF(30mL)中的混合物在80℃下搅拌过夜。将反应用水(30mL)淬灭，并用DCM(3x50mL)萃取。将合并的有机层干燥(Na₂SO₄)，过滤并在真空中蒸发。将粗混合物通过快速柱色谱法(二氧化硅，石油醚/EtOAc，梯度从100:0至30:10)纯化，以得到I-132(230mg，31％)。

从所指示的起始材料和试剂以与针对I-132所述类似的方式制备以下中间体。

中间体135

在0℃下，将n-BuLi(2.5M溶液，5.16mmol，12.90mmol)添加至N-三苯甲基咪唑[15469-97-3](2.00g，6.44mmol)在THF(32mL)中的溶液中。将反应混合物在0℃下搅拌1.5h，并逐滴添加DMF(1.25mL，16.1mmol)。将反应混合物在0℃下搅拌1h，并用NH₄Cl(饱和水溶液)稀释。将水相用EtOAc萃取(两次)。将合并的有机层干燥(MgSO₄)，过滤，并且将溶剂在真空中蒸发。将粗混合物通过快速柱色谱法(二氧化硅，庚烷/EtOAc，梯度从100:0至60:40)纯化，以得到I-135(1.52g，69％)。

中间体136

将NaBH₄(510mg，13.5mmol)添加至I-135(1.52mg，4.49mmol)在MeOH(30mL)中的溶液中。将反应混合物在室温下搅拌16h。将白色沉淀物滤出并用CHCl₃洗涤，以得到呈白色固体的I-136(1.49g，98％)。

中间体137

将亚硫酰氯(0.48ml，6.60mmol)逐滴添加至I-136(1.50g，4.40mmol)和Et₃N(1.23mL，8.80mmol)在甲苯(41mL)中的混合物中。将反应混合物在室温下搅拌1h。将冰添加至混合物中，并且将水相用EtOAc萃取(两次)。将合并的有机相用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并在真空中浓缩。将粗混合物通过快速柱色谱法(二氧化硅，DCM/MeOH，梯度从100:0至90:10)纯化，以得到呈浅橙色固体的I-137(950mg，60％)。

中间体138

在0℃下在N₂气氛下，将NaH(60％分散体在矿物油中，88.2mg，2.21mmol)添加至4-溴-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶[1000342-68-6](435mg，2.21mmol)在无水DMF(15mL)中的溶液中。在0℃下，将混合物搅拌2h并添加I-137(950mg，2.65mmol)。将反应物混合物温热至室温并搅拌20h。将混合物用水稀释并用EtAOc萃取。将有机层干燥(MgSO₄)，过滤，并且将溶剂在真空中蒸发。将粗混合物通过快速柱色谱法(二氧化硅，庚烷/EtOAc，梯度从100:0至0:100)纯化，以得到I-138(854mg，54％，73％纯度)。

中间体183

在密封管中，将Pd₂dba₃(28.2mg，30.8μmol)、Xantphos(44.6mg，0.08mmol)和Cs₂CO₃(376mg，1.16mmol)添加至I-138(400mg，0.77mmol)在DMF(10mL)中的溶液中，同时将N₂鼓泡。10min后，添加2,6-二氯苯胺[608-31-1](162mg，1.00mmol)，并且将反应混合物在室温下搅拌10min并在100℃下搅拌20h。将混合物经

过滤，并且将滤液在真空中浓缩。将粗产物通过快速柱色谱法(二氧化硅，EtOAc在庚烷中，梯度从0/100至100/0)纯化。收集所希望的级分并将其在真空中浓缩，以得到I-183(152mg，33％)。

中间体139

将CuI(110mg，0.12mmol)、反式-N,N’-二甲基环己烷-1,2-二胺(37.9μL，0.24mmol)和K₂CO₃(332mg，2.40mmol)添加至4-氯-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶[60290-21-3](238mg，1.56mmol)和4-碘-1-甲基-1H-咪唑[71759-87-0](250mg，1.20mmol)在甲苯(5mL)中的搅拌溶液中。将反应混合物在105℃下搅拌24h，冷却至室温，并在NaHCO₃(饱和水溶液)和EtOAc之间分配。将水相用EtOAc萃取(两次)。将合并的有机相用盐水洗涤，干燥(MgSO₄)，过滤，并且将溶剂在真空中蒸发。将粗混合物通过快速柱色谱法(二氧化硅，庚烷/EtOAc，梯度从100:0至0:100)纯化，以得到I-139(120mg，43％)。

中间体140

在密封管中，将Pd₂dba₃(356mg，0.39mmol)、Xantphos(375mg，0.65mmol)和K₃PO₄(4.40g，20.7mmol)添加至2-氯-4-碘吡啶[153034-86-7](1.55g，6.47mmol)在无水DMF(25mL)中的溶液中，同时将N₂鼓泡。10min后，添加3,3,3-三氟丙胺盐酸盐[2968-33-4](997mg，6.67mmol)，并且将反应混合物在室温下搅拌10min并在70℃下搅拌20h。将混合物经

过滤，并且将滤液在真空中浓缩。将粗混合物通过快速柱色谱法(二氧化硅，庚烷/EtOAc，梯度从100:0至90:10)纯化，以得到I-140(1.06g，72％)。

中间体141

将乙酸钠(1.16g，14.1mmol)添加至I-140(1.06g，4.71mmol)在乙酸(40.7mL)中的搅拌溶液中。将混合物冷却至15℃，并且逐滴添加一氯化碘(236μL，4.71mmol)。将反应混合物在60℃下搅拌24h。将混合物用水稀释，然后将溶剂在真空中蒸发。将残余物用盐水稀释，并用EtOAc萃取。将有机层用NaOH(5M)洗涤直至pH14，干燥(MgSO₄)，过滤并在真空中浓缩。将粗混合物通过快速柱色谱法(二氧化硅，庚烷/EtOAc，梯度从100:0至85:15)纯化，以得到I-141(519mg，31％)。

中间体142

在室温下，将PdCl₂(dppf)·DCM(72.5mg，0.09mmol)添加至I-141(519mg，1.48mmol)、(EZ)-2-(2-乙氧基乙烯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷[1360111-87-0](323mg，1.63mmol)和LiOH·H₂O(186mg，4.44mmol)在DMF(5.8mL)中的混合物中，同时将N₂鼓泡。将反应混合物在室温下搅拌15min并在70℃下搅拌15h。将混合物用水稀释并用EtOAc萃取。将有机层用水洗涤，干燥(MgSO₄)，过滤，并且将溶剂在真空中蒸发。将粗混合物通过快速柱色谱法(二氧化硅，庚烷/EtOAc，梯度从100:0至40:60)纯化，以得到I-142(389mg，88％)。

中间体143

在N₂气氛下，将I-142(389mg，1.25mmol)溶于乙酸(10mL)中。将反应混合物在105℃下搅拌5h。将溶剂蒸发，并且将残余物与甲苯共蒸馏几次。将残余物溶于DCM和NaHCO₃中。将有机层分离，干燥(MgSO₄)，过滤并在真空中浓缩。将粗混合物通过快速柱色谱法(二氧化硅，庚烷/EtOAc，梯度从100:0至90:10)纯化，以得到I-143(220mg，70％)。

中间体144

将1-氨基-2-甲烷磺酰基-4-氯苯[102153-42-4](660mg，3.21mmol)溶于DCM(20mL)中。逐滴添加溴(181μL，3.53mmol)在DCM(20mL)中的溶液，同时剧烈搅拌。将反应混合物在室温下搅拌16h。将混合物用水稀释。将有机层分离并在真空中浓缩。将粗混合物通过快速柱色谱法(二氧化硅，庚烷/EtOAc，梯度从100:0至95:5)纯化，以得到I-144(822mg，90％)。

从所指示的起始材料以与针对I-144所述类似的方式制备以下中间体。

中间体146

将I-144(822mg，2.89mmol)添加至Na₂CO₃(918mg，8.66mmol)和PdCl₂(dppf)(118mg,0.14mmol)在1,4-二噁烷(8mL)和水(2mL)的混合物中的搅拌溶液中，同时将N₂鼓泡。将混合物在40℃下搅拌5min，然后添加甲基硼酸(432mg，7.22mmol)。将反应混合物在105℃下搅拌3h。将混合物用水稀释。将水相用EtOAc萃取。将合并的有机层干燥(MgSO₄)，过滤并在真空中浓缩。将粗混合物通过快速柱色谱法(二氧化硅，庚烷/EtOAc，梯度从100:0至50:50)纯化，以得到I-146(526mg，83％)。

从所指示的起始材料以与针对I-146所述类似的方式制备以下中间体。

中间体148

将Pd/C(10％，180mg，0.17mmol)添加至I-146(449mg，1.70mmol，83％纯度)和Et₃N(0.17mL，1.70mmol)在MeOH(7.60mL)中的搅拌混合物中。将反应混合物在H₂气氛下在室温下搅拌4h。将混合物经

过滤并用EtOAc洗涤。将滤液在真空中浓缩。将粗混合物通过快速柱色谱法(二氧化硅，庚烷/EtOAc，梯度从100:0至80:20)纯化，以得到I-148(291mg，93％)。

中间体149

将NaH(60％分散体在矿物油中，220mg，5.50mmol)添加至4-氯-5-氮杂吲哚[60290-21-3](841mg，5.23mmol)在DMF(30mL)中的溶液中。将反应混合物在室温下在N₂气氛下搅拌30min。逐滴添加1-溴-3-甲基-2-丁酮[19967-55-6](1.00g，5.76mmol)，并且将反应混合物搅拌16h。将残余物用EtOAc和水溶解。将有机层用水(两次)和盐水洗涤，干燥(MgSO₄)，过滤，并且将溶剂在真空中蒸发。将粗混合物通过快速柱色谱法(二氧化硅，庚烷/EtOAc，梯度从100:0至90:10)纯化，以得到I-149(953mg，76％)。

从所指示的起始材料开始以与针对I-149所述类似的方式制备以下中间体。

中间体150和184

在-78℃下在N₂气氛下，将DAST(1.97mL，16.1mmol)添加至I-149(953mg，4.03mmol)在无水DCM(30.2mL)中的搅拌溶液中。将反应混合物在室温下搅拌18h。添加NaHCO₃(饱和水溶液)，并且将混合物用DCM(3x 15mL)萃取。将合并的有机层干燥(MgSO₄)，过滤并在真空中浓缩。将粗混合物通过快速柱色谱法(二氧化硅，庚烷/EtOAc，梯度从100:0至80:20)纯化，以得到I-150和I-184的混合物(686mg，66％)。

将混合物与另一级分合并，并通过手性相(Lux Cellulose-1(150x 21.2mm，5um)柱，流动相：[正庚烷+0,1％DEA]/[2-丙醇+0,1％DEA]，从75/25至38/62)纯化。收集所希望的级分并将其在真空中浓缩，以得到I-184和I-150。

从所指示的起始材料开始以与针对I-150和I-184所述类似的方式制备以下中间体。

中间体151

在密封管中，将Cs₂CO₃(568mg，1.74mmol)添加至CuI(16.2mg，85.1μmol)和1,1,1-三(羟甲基)乙烷(10.2mg，85.1μmol)在无水1,4-二噁烷(45mL)和无水DMF(5mL)中的溶液中，同时将N₂鼓泡。10min后，添加4-氯-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶[60290-21-3](130mg，0.85mmol)和2-溴-1H-咪唑[16681-56-4](150mg，1.02mmol)。将反应混合物在室温下搅拌10min并在110℃下搅拌4天。将混合物通过

过滤，并且将溶剂在真空中蒸发。将粗混合物通过快速柱色谱法(二氧化硅，庚烷/EtOAc，梯度从100:0至60:40)纯化，以得到I-151(36mg，18％，35％纯度)。

中间体152和153

将NaH(60％分散体在矿物油中，837mg，9.39mmol)添加至5-硝基-4,6-二甲基-吡啶酮-2[22934-24-3](1.5g，3.48mmol，39％纯度)在CH₃CN中的搅拌溶液中。将混合物搅拌15min，并逐滴添加2,2-二氟-2-(氟磺酰基)乙酸(0.61mL，5.91mmol)。将反应混合物在室温下搅拌15min，并且将反应用水淬灭。将CH₃CN在真空中去除，并且将残余物用EtAOc稀释。将有机层干燥(MgSO₄)，过滤并在真空中浓缩。将粗混合物通过快速柱色谱法(二氧化硅，庚烷/EtOAc，梯度从100:0至0:100)纯化，以得到I-152和I-153的混合物(363mg，48％)。

中间体154和155

将铁(532mg，9.53mmol)添加至I-152和I-153(260mg，1.19mmol)在MeOH(13.3mL)和H₂O(2.86mL)中的搅拌混合物中。将反应混合物在70℃下搅拌2h。将混合物冷却至室温，并用DCM稀释。将混合物经

短垫过滤。将有机层分离，干燥(MgSO₄)，过滤，并且将溶剂在真空中蒸发。将粗混合物通过快速柱色谱法(二氧化硅，庚烷/EtOAc，梯度从100:0至85:15)纯化，以得到I-154(85mg，38％)和I-155(95mg，42％)。

中间体156

在密封管中，将反式-N,N'-二甲基环己烷-1,2-二胺(14.5μL，91.8μmol)和K₂CO₃(127mg，0.92mmol)添加至4-氯-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶[60290-21-3](70.0mg，0.46mmol)在1,4-二噁烷(6mL)和DMF(2mL)中的溶液中，同时将N₂鼓泡。将反应混合物在室温下搅拌10min，并且添加5-碘-1-甲基-1H-吡唑[34091-51-5](125mg，0.64mmol)和CuI(8.74mg，45.9μmol)。将反应混合物在室温下在110℃下搅拌16h。将混合物冷却至室温，并在NaHCO₃(饱和水溶液)和EtOAc之间分配。将水相用EtOAc萃取(两次)。将合并的有机相用盐水洗涤，干燥(MgSO₄)，过滤，并且将溶剂在真空中蒸发。将粗混合物通过快速柱色谱法(二氧化硅，庚烷/EtOAc，梯度从100:0至50:50)纯化，以得到I-156(66mg，65％)。

从所指示的起始材料和试剂以与针对I-156所述类似的方式制备以下中间体。

中间体159

在-78℃下，将LiHMDS(1M溶液，15mL，15.0mmol)添加至乙基5-噁唑甲酸酯[118994-89-1](1.26mL，10.0mmol)在THF(50mL)中的溶液中。将反应混合物在-78℃下搅拌1h，并逐滴添加ZnCl₂(0.7M溶液，22.8mL，16.0mmol)。将反应混合物温热至室温并搅拌30min。在-78℃下，逐滴添加I₂(5.13g，20.0mmol)在THF(5mL)中的溶液。将反应混合物在-78℃下搅拌15min并在室温下搅拌1h。将混合物用Na₂S₂O₃(饱和水溶液)稀释，并用Et₂O萃取(两次)。将合并的有机萃取物干燥(MgSO₄)，过滤并在真空中浓缩。将粗混合物通过快速柱色谱法(二氧化硅，庚烷/EtOAc，梯度从100:0至95:5)纯化，以得到I-159(2.2g，82％)。

中间体160

在密封管中，将K₂CO₃(362mg，2.62mmol)、CuI(49.9mg，0.26mmol)和反式-N,N'-二甲基环己烷-1,2-二胺(82.7μL，0.52mmol)添加至4-氯-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶[60290-21-3](200mg，1.31mmol)和I-159(420mg，1.57mmol)在甲苯(10mL)中的溶液中，同时将N₂鼓泡。将反应混合物在室温下搅拌10min并在110℃下搅拌18h。将混合物冷却至室温，并在NaHCO₃(饱和水溶液)和EtOAc之间分配。将水相用EtOAc萃取。将合并的有机相用盐水洗涤，干燥(MgSO₄)，过滤并在真空中浓缩。将粗混合物通过快速柱色谱法(二氧化硅，庚烷/EtOAc，梯度从100:0至85:15)纯化，以得到I-160(42mg，9％，86％纯度)。

中间体161

在-20℃下在N₂气氛下，将NaBH₄(32.7mg，0.86mmol)分批添加至CaCl₂(47.9mg，0.43mmol)在无水THF(1mL)和EtOH(1mL)中的悬浮液中。将混合物在-20℃下搅拌15min，并分批添加I-160(42.0mg，0.14mmol)在无水THF(1mL)中的溶液。将反应混合物在-10℃下搅拌1h，并允许其温热至室温。将反应混合物搅拌16h。将混合物冷却至0℃，并小心地用NH₄Cl(饱和水溶液)和DCM稀释。将混合物经

垫过滤。将滤液在真空中浓缩，以得到I-161，将其原样用于下一步骤。

中间体162

在室温下，将I-161(32.0mg，128μmol)添加至三乙基硅烷(71.7μL，0.45mmol)在TFA(2mL)中的搅拌溶液中。将反应混合物在55℃下搅拌18h。将溶剂在真空中去除。将残余物用NaHCO₃(饱和水溶液)稀释，并用DCM萃取。将合并的有机级分用盐水洗涤，干燥(MgSO₄)，过滤并在真空中浓缩。将粗混合物通过快速柱色谱法(二氧化硅，庚烷/EtOAc，梯度从100:0至60:40)纯化，以得到I-162(19mg，63％)。

中间体163

将N-溴代琥珀酰亚胺(594mg，3.34mmol)添加至4-甲基-6-(三氟甲基)吡啶-3-胺[944317-54-8](235mg，1.33mmol)在DMSO(5.6mL)和水(310μL)中的搅拌溶液中。将反应混合物在室温下搅拌48h，并用水淬灭。将水相用EtOAc萃取(两次)。将合并的有机层干燥(MgSO₄)，过滤并在真空中浓缩。将粗混合物通过快速柱色谱法(二氧化硅，庚烷/EtOAc，梯度从100:0至85:15)纯化，以得到I-163(209mg，61％)。

中间体164

将I-163(50mg，0.20mmol)和甲基硼酸(29.9mg，0.49mmol)添加至Na₂CO₃(62.3mg，0.59mmol)在1,4-二噁烷(4mL)和H₂O(1mL)中的混合物中。添加PdCl₂(dppf)(8.00mg，9.8μmol)，并且将反应混合物在100℃下搅拌16h。将反应混合物用水和EtOAc稀释。将有机层分离，干燥(MgSO₄)，过滤并在真空中浓缩。将粗混合物与另一级分(0.60mmol)合并，并通过快速柱色谱法(二氧化硅，庚烷/EtOAc，梯度从100:0至90:10)纯化，以得到I-164(122mg，80％)。

中间体165

向2-溴-4-甲基-3-硝基吡啶[23056-45-3](6.00g，27.6mmol)在甲苯(264mL)中的溶液中添加三丁基(1-乙氧基乙烯基)锡[97674-02-7](13.9mL，41.2mmol)和Pd(PPh₃)₄(3.20g，2.77mmol)。将反应混合物在100℃下搅拌16h。在0℃下添加HCl(37％在H₂O中，23mL，276mmol)，并且将混合物在室温下搅拌1h。添加NaHCO₃(饱和水溶液)，并且将水相用Et₂O萃取。将合并的有机萃取物用盐水洗涤，干燥(Na₂SO₄)，过滤并在真空中蒸发。将粗混合物通过快速柱色谱法(二氧化硅，庚烷/EtOAc，梯度从100:0至70:30)纯化，以得到I-165(3.13g，63％)。

中间体166

在0℃下，向I-165(3.13g，17.4mmol)在THF(41.5mL)中的溶液中逐滴添加MeMgBr(1.4M溶液，30mL，42mmol)。将反应混合物在室温下搅拌3h，并用NH₄Cl(饱和水溶液)淬灭。将水相用EtOAc萃取。将合并的有机萃取物干燥(Na₂SO₄)，过滤并在真空中浓缩。将粗混合物通过快速柱色谱法(二氧化硅，DCM/MeOH，梯度从100:0至99:1)纯化，以得到I-166(736mg，22％)。

中间体167

将I-166(736mg，3.75mmol)溶于EtOH(21mL)、THF(7mL)和水(7mL)中。添加铁(1.68g，30.0mmol)和氯化铵(2.41g，45.0mmol)，并且将反应混合物在密封管中在60℃下搅拌2h。将反应混合物用DCM稀释，并添加NaHCO₃(饱和水溶液)。将混合物通过

过滤。将

垫用DCM洗涤，并且将滤液干燥并在真空中蒸发，以得到I-167(744mg，82％，69％纯度)，将其原样用于下一步骤。

中间体168

将I-92(319mg，1.18mmol，85％纯度)、I-167(350mg，1.45mmol，69％纯度)和Cs₂CO₃(771mg，2.37mmol)在t-BuOH(3.3mL)中的混合物用N₂吹扫。添加Pd(OAc)₂(48.4mg，0.22mmol)和Xantphos(82.3mg，0.14mmol)，并且将反应混合物在110℃下搅拌1h并在130℃下搅拌2h。将混合物用DCM稀释并经

过滤。将滤液在真空中浓缩。将粗混合物通过快速柱色谱法(二氧化硅，DCM/MeOH，梯度从100:0至96:4)纯化，以得到I-168(269mg，32％，50％纯度)。

中间体169

将Et₃N(0.59mL，4.25mmol)添加至4-碘咪唑[71759-89-2](750mg，3.87mmol)在DCM(30mL)中的溶液中。将反应混合物在室温下搅拌5min，并添加三苯甲基氯(1.19g，4.25mmol)。将反应混合物在40℃下搅拌16h。将反应混合物用NaHCO₃(饱和水溶液)稀释，并用DCM萃取。将有机层干燥(MgSO₄)，过滤，并且将溶剂在真空中蒸发。将粗混合物通过快速柱色谱法(二氧化硅，庚烷/EtOAc，梯度从100:0至60:40)纯化，以得到I-169(976mg，58％)。

中间体170

在密封管中，将CuI(21.8mg，0.12mmol)、反式-N,N'-二甲基环己烷-1,2-二胺(36.1μL，0.23mmol)和K₂CO₃(317mg，2.29mmol)添加至I-169(500mg，1.15mmol)在甲苯(6.25mL)中的溶液中，同时将N₂鼓泡。10min后，添加4-氯-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶[60290-21-3](227mg，1.15mmol)。将反应混合物在室温下搅拌10min并在100℃下搅拌20h。将反应混合物冷却至室温，并用NaHCO₃(饱和水溶液)稀释，并用EtOAc萃取。将有机层干燥(MgSO₄)，过滤，并且将溶剂在真空中蒸发。将粗混合物通过快速柱色谱法(二氧化硅，庚烷/EtOAc，梯度从100:0至80:20)纯化，以得到I-170(430mg，81％)。

中间体171

在密封管中，将Pd₂dba₃(34.2mg，37.3μmol)、Xantphos(53.9mg，93.3μmol)和Cs₂CO₃(456mg，1.40mmol)添加至I-170(430mg，0.93mmol)在DMF(12mL)中的混合物中，同时将N₂鼓泡。10min后，添加2,6-二氯-4-氟苯胺[344-19-4](218mg，1.21mmol)，并且将反应混合物在室温下搅拌10min并在100℃下搅拌20h。将混合物经

过滤，并且将滤液在真空中浓缩。将粗混合物通过快速柱色谱法(二氧化硅，庚烷/EtOAc，梯度从100:0至0:100)纯化，以得到I-171(400mg，64％，90％纯度)。

中间体172

在N₂气氛下，将Cs₂CO₃(9.99g，30.7mmol)和4-甲氧基苄基氯(2.5mL，18.4mmol)添加至4-硝基-1H-吲唑[2942-40-7](2.50g，15.3mmol)在THF(60mL)中的溶液中。将反应混合物在室温下搅拌18h。添加另外的量的4-甲氧基苄基氯(2.50mL，18.4mmol)，并且将反应混合物再搅拌18h。将混合物溶于水中并用EtOAc萃取。将合并的有机层干燥(MgSO₄)，过滤并在真空中浓缩。将粗混合物通过快速柱色谱法(二氧化硅，庚烷/EtOAc，梯度从100:0至80:20)纯化，以得到I-172(2.15g，48％)。

中间体173

将铁(3.38g，60.4mmol)添加至I-172(2.14g，7.55mmol)和氯化铵(4.39g，82.1mmol)在MeOH(84.2mL)和H₂O(18.1mL)中的搅拌混合物中。将反应混合物在70℃下搅拌2h。将混合物冷却至室温，并用DCM稀释。将混合物经

短垫过滤。将有机层分离，干燥(MgSO₄)，过滤，并且将溶剂在真空中蒸发。将粗混合物通过快速柱色谱法(二氧化硅，庚烷/EtOAc，梯度从100:0至65:35)纯化，以得到I-173(1.40g，70％)。

中间体174

将N-溴代琥珀酰亚胺(1.09g，6.11mmol)逐滴添加至I-173(1.40g，5.53mmol)在CH₃CN(30mL)中的溶液中。将反应混合物在60℃下搅拌16h，冷却至室温，并用NaHCO₃(饱和水溶液)稀释。将水相用EtOAc萃取。将合并的有机萃取物干燥(MgSO₄)，过滤并在真空中浓缩。将粗混合物通过快速柱色谱法(二氧化硅，庚烷/EtOAc，梯度从100:0至80:20)纯化，以得到I-174(1.38g，74％)。

中间体175

在N₂气氛下，将I-174(500mg，1.51mmol)和甲基硼酸(450mg，7.53mmol)添加至Na₂CO₃(957mg，9.03mmol)在1,4-二噁烷(8mL)和H₂O(2mL)中的搅拌溶液中。添加PdCl₂(dppf)(123mg，0.15mmol)。将反应混合物在密封管中在105℃下搅拌18h。将混合物用NaHCO₃和EtOAc稀释。将有机层分离，干燥(MgSO₄)，过滤，并且将溶剂在真空中蒸发。将粗混合物通过快速柱色谱法(二氧化硅，庚烷/EtOAc，梯度从100:0至80:20)纯化，以得到I-175(288mg，41％，57％纯度)。

中间体176

在N₂气氛下，将I-175(174mg，0.65mmol)和I-2(150mg，0.59mmol)添加至Pd(OAc)₂(5.31mg，23.7μmol)、Xantphos(27.4mg，47.3μmol)和Cs₂CO₃(578mg，1.78mmol)在t-BuOH中的搅拌混合物中。将反应混合物在115℃下搅拌8h，并用EtOAC和水稀释。将有机层用水和盐水洗涤，干燥(MgSO₄)，过滤，并且将溶剂在真空中蒸发。将粗混合物通过快速柱色谱法(二氧化硅，庚烷/EtOAc，梯度从100:0至75:25)纯化，以得到I-176(121mg，43％，93％纯度)。

中间体178

将7-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-胺[59820-84-7](0.40g，2.42mmol)溶于DCM(10mL)中。逐滴添加溴(0.14mL，2.66mmol)在DCM(2mL)中的溶液。将反应混合物在室温下搅拌4h，并用DCM稀释。将混合物用水洗涤，干燥(MgSO₄)，过滤并在真空中浓缩。将粗混合物通过快速柱色谱法(二氧化硅，庚烷/EtOAc，梯度从100:0至80:20)纯化，以得到呈黄色固体的I-178(471mg，80％)。

中间体179

将I-179(471mg，1.93mmol)和甲基硼酸(289mg，4.82mmol)添加至Na₂CO₃(613mg，5.79mmol)在1,4-二噁烷(8mL)和水(2mL)中的搅拌混合物中。添加PdCl₂(dppf)(78.9mg，96.5μmol)。将反应混合物在100℃下搅拌过夜。将混合物冷却，并添加另外的量的甲基硼酸、Na₂CO₃和PdCl₂(dppf)。将反应混合物在105℃下再搅拌16h。将混合物用水和EtOAc稀释。将有机层分离，干燥(MgSO₄)，过滤并在真空中浓缩。将粗混合物通过快速柱色谱法(二氧化硅，庚烷/EtOAc，梯度从100:0至50:50)纯化，以得到呈黄色固体的I-179(200mg，58％)。

中间体180

在N₂气氛下，将Pd/C(10％纯度，69.6mg，65.4μmol)添加至1,5-二甲基-6-硝基-1H-吲唑[78416-45-2](500mg，2.62mmol)在EtOH(10mL)中的搅拌溶液中。在H₂气氛下，将混合物吹扫并在室温下搅拌18h。将混合物通过

垫过滤，并且将残余物用MeOH洗涤。将滤液在真空中蒸发，以得到I-180(299mg，71％)。

中间体181

将I-180(299mg，1.86mmol)溶于DCM(15mL)中。在剧烈搅拌下，逐滴添加溴(0.1mL，1.95mmol)在DCM(4mL)中的溶液。将反应混合物在室温下搅拌3h，并用DCM稀释。将混合物用水洗涤，干燥(MgSO₄)，过滤并在真空中浓缩。将粗产物通过快速柱色谱法(二氧化硅；AcOEt在庚烷中，梯度从0/100至20/80)纯化。收集所希望的级分并将其在真空中浓缩，以得到I-181(300mg，67％)。

中间体182

在N₂气氛下，将I-181(300mg，1.25mmol)和甲基硼酸(191mg，3.12mmol)添加至Na₂CO₃(397mg，3.75mmol)在1,4-二噁烷(4mL)和H₂O(1mL)中的搅拌溶液中。添加PdCl₂(dppf)(51.0mg，62.5μmol)，并且将反应混合物在105℃下搅拌16h。将混合物用水和EtOAc稀释。将有机层分离，干燥(MgSO₄)，过滤，并且将溶剂在真空中蒸发。将粗混合物通过快速柱色谱法(二氧化硅；EtOAc在庚烷中，梯度从0/100至20/80)纯化。收集所希望的级分并将其在真空中浓缩，以得到I-182(71mg，32％)。

中间体188和189

在0℃下在N2气氛下，将NaH(60％分散体在矿物油中，143mg，3.57mmol)添加至3-碘-1H-吡唑[4522-35-4](659mg，4.00mmol)在DMF(20mL)中的搅拌溶液中。将混合物在室温下搅拌30min。在0℃下添加2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基氯化物[76513-69-4](0.66mL，3.74mmol)，并且将反应混合物在室温下搅拌16h。将混合物用水稀释并用EtOAc萃取。将有机层干燥(MgSO4)，过滤，并且将溶剂在真空中蒸发。将粗产物通过快速柱色谱法(二氧化硅；EtOAc在庚烷中，梯度从0/100至10/90)纯化。收集所希望的级分并将其在真空中浓缩，以得到I-188和I-189的混合物(965mg，86％)。

中间体190和191

在密封管中，将CuI(28.3mg，0.15mmol)、N,N’-二甲基环己烷-1,2-二胺(46.9μL，0.30mmol)和K2CO3(411mg，2.98mmol)添加至I-188和I-189(965mg，2.98mmol)在1,4-二噁烷(10mL)中的溶液中，同时将氮气鼓泡。10min后，添加4-氯-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶[60290-21-3](227mg，1.49mmol)。将反应混合物在室温下搅拌10min并在100℃下搅拌20h。将混合物用水稀释并用EtOAc萃取。将合并的有机萃取物干燥(MgSO4)，过滤，并且将溶剂在真空中蒸发。将粗产物通过快速柱色谱法(二氧化硅；EtOAc在庚烷中，梯度从0/100至15/85)纯化。收集所希望的级分并将其在真空中浓缩，以得到I-190和I-191的混合物(270mg，51％)。

中间体I-192和I-193

在密封管中，将Pd₂dba₃(39.1mg，42.6μmol)、XantPhos(61.7mg，0.11mmol)和Cs₂CO₃(521mg，1.60mmol)添加至I-190和I-191(372mg mg，1.07mmol)在无水DMF(12mL)中的溶液中，同时将氮气鼓泡。10min后，添加2,6-二氯-4-氟苯胺[344-19-4](249mg，1.39mmol)。将反应混合物在室温下搅拌10min并在100℃下搅拌20h。将混合物经

垫过滤，并且将滤液在真空中浓缩。将粗产物通过快速柱色谱法(二氧化硅，EtOAc在庚烷中，梯度从0/100至100/0)纯化。收集所希望的级分并将其在真空中浓缩，以得到I-192和I-193的混合物(376mg，71％)。

最终化合物的制备

化合物1的制备

在0℃下，向I-49(39mg，0.16mmol)溶于DMF(1.3mL)中的溶液中添加氢化钠(60％分散体在矿物油中，7.2mg，0.18mmol)，并且允许反应混合物温热至RT，并搅拌直至气体逸出停止，此时在0℃下添加2-(溴甲基)-1,1-二氟环丙烷[77613-65-1](33.6mg，0.2mmol)。然后将反应混合物在rt下搅拌16h。然后将反应混合物用水淬灭，并添加EtOAc。将水层用EtOAc萃取三次。将合并的有机层用盐水洗涤，干燥(MgSO₄)，过滤并浓缩。然后将残余物通过快速柱色谱法(硅胶；DCM/7NNH₃在MeOH中，梯度从100/0至98/2)纯化，以得到化合物编号1(16.7mg，31％)。

从所指示的中间体和试剂以类似的方式合成化合物2：

化合物3的制备

将I-11(80mg，0.292mmol)、4-氨基-3,5-二氯吡啶([22889-78-7]，55.894mg，0.343mmol)和Cs₂CO₃(209.482mg，0.643mmol)在tBuOH(1.097mL)中的混合物用氮气脱气。添加Pd(OAc)₂(6.561mg，0.0292mmol)和Xantphos(16.91mg，0.0292mmol)，并且将混合物在110℃下加热24h。将溶剂在真空中去除，然后将粗品用水稀释并用DCM萃取。将合并的有机萃取物经MgSO₄干燥，过滤，并且将溶剂去除。将粗品通过反相色谱法(洗脱液：MeOH和NH₄CO₃)纯化，以获得呈白色粉末的化合物编号3(26.7mg，产率22.8％)。

化合物164的制备

化合物165的制备

在N₂气氛下，向I-134(50.0mg，0.17mmol)、XPhos(8.27mg，17.4μmol)、Cs₂CO₃(0.17g，0.52mmol)和2,6-二氯苯胺[608-31-1](30.9mg，0.19mmol)在甲苯(20mL)中的混合物中添加Pd₂dba₃(15.9mg，17.4μmol)。将反应混合物在90℃下搅拌12h。将混合物用DCM(3x10mL)萃取。将合并的有机层干燥(Na₂SO₄)，过滤并在真空中蒸发。将粗混合物通过制备型高效液相色谱法(柱：Gemini 150*255u，流动相：水(0.05％氢氧化氨v/v)/CH₃CN，梯度从25:75至45:55)纯化，以得到呈白色固体的化合物165(15.1mg，23％)。

从所指示的起始材料和试剂开始以与针对化合物165所述类似的方式制备以下化合物。

化合物167的制备

将Pd₂dba₃(18.7mg，20.4μmol)、XantPhos(29.5mg，51.0μmol)和Cs₂CO₃(249mg，0.77mmol)添加至6-二氯苯胺[608-31-1](107mg，0.66mmol)和I-139(118mg，0.51mmol)在DMF(5.1mL)中的搅拌混合物中。将反应混合物在密封管中在105℃下搅拌12h。将混合物冷却至室温，并在NaHCO₃(饱和水溶液)和EtOAc之间分配。将水相用EtOAc萃取(两次)。将合并的有机相用盐水洗涤，干燥(MgSO₄)，过滤并在真空中浓缩。将粗混合物通过快速柱色谱法(二氧化硅，庚烷/EtOAc，梯度从100:0至0:100)纯化，以得到呈白色固体的化合物167(117mg，64％)。

使用所指示的起始材料和试剂以与针对化合物167所述类似的方式制备以下化合物。

化合物190的制备

将HCl(4M在1,4-二噁烷中，4.9mL，19.6mmol)添加至I-171(200mg，0.33mmol)在MeOH(3.2mL)中的搅拌溶液中。将反应混合物在55℃下搅拌2h，并且将溶剂在真空中蒸发。将粗混合物通过反相色谱法(25mM NH₄HCO₃/(CH₃CN/MeOH 1:1)，梯度从81:19至45:55)纯化。将产物在Et₂O中研磨，以得到呈白色固体的化合物190(67mg，55％)。

从所指示的起始材料和试剂以与针对化合物190所述类似的方式获得以下化合物。

化合物192的制备

将4-甲基-6-丙-2-基嘧啶-5-胺[1368911-16-3](59.0mg，0.39mmol)和I-143(97.0mg，0.39mmol)添加至Pd(OAc)₂(3.50mg，15.6μmol)、XantPhos(18.1mg，31.2μmol)和Cs₂CO₃(381mg，1.17mmol)在1,4-二噁烷(10mL)中的搅拌溶液中，同时将N₂鼓泡。将反应混合物在105℃下搅拌18h。将混合物用EtOAc和水稀释。将有机层用水(两次)和盐水洗涤，干燥(MgSO₄)，过滤，并且将溶剂在真空中蒸发。将粗混合物通过反相色谱法(25mM NH₄HCO₃/(CH₃CN/MeOH 1:1)，梯度从72:28至36:64)纯化。将产物在DIPE中研磨，以得到呈淡白色固体的化合物192(20mg，14％)。

从所指示的中间体和试剂以与针对化合物192所述类似的方式获得以下化合物。

化合物194的制备

将Pd₂dba₃(20.5mg，22.4μmol)、Xantphos(25.9mg，44.7μmol)和Cs₂CO₃(219mg，0.67mmol)添加至4-溴-3-甲基-5-(三氟甲基)吡啶[1211583-82-2](107mg，0.45mmol)在1,4-二噁烷(15mL)中的溶液中，同时将N₂鼓泡。10min后，添加I-90(90.0mg，0.45mmol)。在密封管中，将反应混合物在室温下搅拌10min并在90℃下搅拌12h。将混合物用水稀释并用EtOAc萃取(3次)。将合并的有机层干燥(MgSO4)，过滤并在真空中蒸发。将粗混合物通过反相(25mM NH₄HCO₃/(CH₃CN/MeOH 1:1)，梯度从59:41至17:83)纯化。将产物在DIPE中研磨，以得到呈白色固体的化合物194(15mg，9％)。

从所指示的起始材料和苯胺以与针对化合物194所述类似的方式获得以下化合物。

化合物198的制备

将I-176(120mg，0.27mmol)溶于TFA(1.99mL，26.8mmol)中。将反应混合物在95℃下搅拌12h，并且将溶剂在真空中蒸发。将混合物用NaHCO₃稀释并用DCM萃取。将有机层干燥(MgSO₄)，过滤并在减压下浓缩。将粗混合物通过快速柱色谱法(二氧化硅，庚烷/EtOAc，梯度从100:0至0:100)纯化。通过反相(25mM NH₄HCO₃/(CH₃CN/MeOH 1:1)，梯度从70:30至27:73)进行第二次纯化。将产物在Et₂O中研磨，以得到呈米色固体的化合物198(11.2mg，13％)。

化合物199的制备

将Pd₂dba₃(24.8mg，27μmol)、Xantphos(26.1mg，45μmol)和K₃PO₄(275mg，1.30mmol)添加至I-143(112mg，0.45mmol)在1,4-二噁烷(10mL)中的溶液中，同时将N₂鼓泡。10min后，添加3-氨基-2,4-二甲基吡啶[1073-21-8](55.0mg，0.45mmol)。将反应混合物在室温下在密封管中搅拌10min并在90℃下搅拌16h。将混合物用水稀释并用EtOAc萃取。将有机层干燥(MgSO₄)，过滤，并且将溶剂在真空中蒸发。将粗混合物通过快速柱色谱法(二氧化硅，庚烷/EtOAc，梯度从100:0至75:25)纯化。将产物溶于DCM(3mL)中，并添加HCl(4M，1.0当量)。将混合物在真空中浓缩，并且将产物从Et₂O结晶。将残余物通过反相(25mM NH₄HCO₃/(CH₃CN/MeOH，1:1)，梯度从81:19至45:55)纯化。将产物在Et₂O中研磨，以得到呈白色泡沫的化合物199(22.5mg，15％)。

从所指示的起始材料和试剂以与针对化合物199所述类似的方式获得以下化合物。

化合物201的制备

在室温下，将HCl(12M溶液，0.82mL，9.9mmol)添加至I-192和I-193(325mg，0.66mmol)在EtOH(5mL)中的混合物中。将反应混合物在70℃下搅拌8h。添加另外的量的HCl(12M溶液，0.50mL，6.0mmol)，并且将反应混合物在70℃下再搅拌8h。将混合物冷却至室温，并且将溶剂在真空中浓缩。将粗混合物溶于EtOAc(30mL)中，并用NaHCO₃(饱和水溶液，10x5mL)洗涤。将合并的有机层干燥(MgSO₄)，过滤并在真空中浓缩。将粗混合物通过快速柱色谱法(二氧化硅，庚烷/EtOAc，梯度从100:0至65:35)纯化。将产物在DIPE中研磨，以得到化合物201(13.2mg，4％，95％纯度)。

化合物202和203的制备

将Pd₂dba₃(42.0mg，45.9μmol)、Xantphos(44.3mg，76.5μmol)和K₃PO₄(468mg，2.20mmol)添加至I-186(含50％的I-187，232mg，0.77mmol)在THF(10mL)中的混合物中，同时将N₂鼓泡。10min后，添加3-氨基-2,4-二甲基吡啶[1073-21-8](93.5mg，0.77mmol)。在密封管中，将反应混合物在室温下搅拌10min并在90℃下搅拌16h。将混合物用水稀释并用EtOAc萃取。将合并的有机层干燥(MgSO₄)，过滤，并且将溶剂在真空中蒸发。将粗混合物通过快速柱色谱法(二氧化硅，庚烷/EtOAc，梯度从100:0至70:30)纯化。通过反相(HCOOH(0.1％)/(CH₃CN/MeOH(1:1))，梯度从95:5至63:37)进行第二次纯化，以得到化合物202和化合物203。将残余物分别吸收进DCM中，并用HCl(4N在1,4-二噁烷(1当量)中)处理。将溶剂在真空中蒸发。最后将产物在Et₂O中研磨，以得到呈HCl盐的化合物202(29.7mg，10％)和呈HCl盐的化合物203(31.6mg，11％)。

化合物101的制备

化合物编号101

将HCl(4M在二噁烷中，0.352mL，1.41mmol)添加至I-74(60mg，0.141mmol)在1,4-二噁烷(1.2mL)中的搅拌溶液中，并且将混合物在rt下搅拌2h。然后添加另外的HCl(106μL)，并且将rm在rt下搅拌60h。然后再添加HCl(106μL)，并且将rm在rt下搅拌48h。将rm浓缩并通过柱色谱法(硅胶，洗脱液：DCM/7N NH₃在MeOH中，100/0至98/2)纯化，以得到38mg的化合物编号101，将其经由制备型SFC(固定相：Chiralpak Daicel IC 20x 250mm；流动相：CO₂，EtOH+0.4iPrNH₂)进一步纯化，以产生白色固体，将该白色固体在真空烘箱中在55℃下干燥以产生化合物编号101(17mg，37％)。

化合物102的制备

在0℃下在氮气下，向化合物编号62(152.4mg，0.435mmol)在DMF(1.5mL)中的溶液中分批添加NaH(60％分散体在矿物油中，20.2mg，0.505mmol)。允许反应混合物达到rt并搅拌30min。在0℃下，逐滴添加硫酸二甲酯(42μL，1.333g/mL，0.444mmol)，并且将混合物搅拌3h。添加NaHCO₃饱和溶液，并且将OL用EtOAc萃取，然后用水和盐水洗涤，然后经MgSO₄干燥，并且将溶剂去除。为了有助于去除DMF，将残余物在MIK中稀释两次，并在真空下共蒸发。然后将此级分经由制备型HPLC(固定相：RP XBridge Prep C18OBD-10μm，30x 150mm；流动相：0.25％NH₄HCO₃水溶液，CH₃CN)纯化，以产生呈淡褐色粉末的化合物编号102(23mg，产率14.51％)。

化合物204的制备

将I-50(36.8mg，0.15mmol)溶于DMF(1.2mL)中。在0℃下添加NaH(60％分散体在矿物油中，6.79mg，0.17mmol)，并且将混合物在室温下搅拌。当气体逸出停止时，在0℃下添加(1-氟环丙基)甲基甲烷磺酸酯(93.3mg，0.56mmol)。将反应混合物在室温下搅拌。将反应用水淬灭并用EtOAc稀释。将水层用EtOAc萃取(3次)。将合并的有机层用盐水洗涤，干燥(MgSO₄)，过滤并在真空中浓缩。将粗混合物通过制备型HPLC(固定相：XBridge PrepC183.5μm，4.6x 100mm，流动相：0.2％NH₄HCO₃(0.2％水溶液)/CH₃CN)纯化，以得到化合物204(11mg，23％)。

化合物205的制备

在0℃下，向I-168(269mg，0.37mmol，50％纯度)在DCM(2mL)中的混合物中添加DAST[38078-09-0](0.1mL，0.76mmol)。将反应混合物在0℃下搅拌1h，用NaHCO₃稀释并用DCM萃取。将合并的有机萃取物用水洗涤，干燥(MgSO₄)，过滤并在真空中浓缩。将粗混合物经由制备型SFC(固定相：Chiralpak Daicel AD 20x 250mm，流动相：CO₂，i-PrOH+0.4％i-PrNH₂)纯化，以得到化合物205(19mg，14％)。

化合物206的制备

在N₂气氛下，将化合物11(71.1mg，0.21mmol)溶于DMF(1mL)中。添加NaH(60％分散体在矿物油中，11.1mg，0.28mmol)，并且将混合物在室温下搅拌30min。逐滴添加MeI(36.3mg，0.26mmol)，并且将反应混合物在室温下搅拌1h。将反应用水淬灭。将有机层用DCM萃取，干燥(MgSO₄)，过滤并在真空中蒸发。将粗混合物通过反相纯化。将残余物经由制备型SFC(固定相：Chiralpak Daicel AD 20x 250mm，流动相：CO₂，EtOH+0.4％i-PrNH₂)纯化，以得到呈白色泡沫的化合物206(21.3mg，29％)。

化合物209的制备

将I-176(120mg，0.27mmol)溶于TFA(1.98mL)中。将反应混合物在95℃下搅拌13h，冷却，并且将溶剂在真空中蒸发。将混合物用NaHCO₃稀释并用DCM萃取。将合并的有机层干燥(MgSO₄)，过滤并在真空中浓缩。将粗混合物通过快速柱色谱法(二氧化硅；EtOAc在庚烷中，梯度从0/100至100/0)纯化。收集所希望的级分并将其在真空中浓缩。通过纯化通过反相([25mM NH₄HCO₃]/[MeCN:MeOH(1:1)]，梯度从70:30至27:73)进行第二次纯化。收集所希望的级分并将其在真空中浓缩。将产物在Et2O中研磨，以得到呈米色固体的化合物209(11.2mg，13％)。

分析部分

熔点

值是峰值或熔融范围，并且所获得的值具有通常与这种分析方法相关的实验不确定性。

DSC823e或DSC1 STAR(表示为(a))和梅特勒-托利多公司(Mettler-Toledo)MP50：对于多种化合物，熔点是用DSC823e或DSC1STAR(梅特勒-托利多公司)来测定的。使用10℃/分钟的温度梯度来测量熔点。最高温度是300℃。

对于多种化合物，熔点用MP50(梅特勒-托利多公司)(表示为(b))来测定的。使用10℃/分钟的温度梯度来测量熔点。

LCMS

通用程序

使用LC泵、二极管阵列(DAD)或UV检测器以及如在对应的方法中所指定的柱进行高效液相色谱法(HPLC)测量。如果必要的话，包括其他检测器(参见下文的方法表格)。

将来自柱的流带至配置有大气压离子源的质谱仪(MS)。设置调谐参数(例如扫描范围、停留时间等)以便获得允许鉴定化合物的标称单一同位素分子量(MW)的离子和/或准确质量单一同位素分子量的离子在技术人员的知识内。利用适当的软件进行数据采集。

通过其实验保留时间(R_t)和离子描述化合物。如果未在数据表中不同地指定，那么报道的分子离子对应于[M+H]⁺(质子化的分子)和/或[M-H]^-(去质子的分子)。在该化合物不是直接可电离的情况下，指定该加合物的类型(即[M+NH₄]⁺、[M+HCOO]^-、[M+CH₃COO]^-等)。对于具有多种同位素模式的分子(Br、Cl等)来说，报道的值是针对最低同位素质量获得的值。获得的所有结果具有通常与所使用的方法相关的实验不确定性。

在下文中，“SQD”单四极检测器、“MSD”质量选择检测器、“QTOF”四极杆飞行时间、“rt”室温、“BEH”桥接的乙基硅氧烷/二氧化硅杂合物、“HSS”高强度二氧化硅、“CSH”带电的表面杂化、“UPLC”超高效液相色谱法、“DAD”二极管阵列检测。

表1.LC-MS方法(以mL/min表示流速；以℃表示柱温(T)；以min表示运行时间)。

表2.分析数据-熔点(Mp)和LCMS：[M+H]⁺意指该化合物的游离碱的质子化质量，[M-H]^-意指该化合物的游离碱的去质子质量或指定的加合物的类型([M+CH₃COO]^-)。R_t意指保留时间(以min计)。对于一些化合物，确定准确质量。

SFCMS-方法

用于SFC-MS方法的通用程序

使用分析型超临界流体色谱法(SFC)系统来进行SFC测量，该系统由以下构成：用于递送二氧化碳(CO₂)和改性剂的二元泵、自动进样器、柱温箱、配备有经得起400巴的高压流动池的二极管阵列检测器。如果配置有质谱仪(MS)，来自该柱的流被引至该(MS)。设置调谐参数(例如扫描范围、停留时间等)以便获得允许鉴定化合物的标称单一同位素分子量(MW)的离子在技术人员的知识内。利用适当的软件进行数据采集。

表3.分析型SFC-MS方法(以mL/min表示流速；以℃表示柱温(T)；以分钟表示运行时间；以巴表示背压(BPR)。

表4.分析型SFC数据-R_t意指保留时间(以分钟计)，[M+H]⁺意指该化合物的质子化质量，方法是指用于对映异构体纯的化合物的(SFC)MS分析的方法。

药理学实例

1)OGA-生化测定

该测定基于重组人脑膜瘤表达的抗原5(MGEA5)(也称为O-GlcNAc酶(OGA))对荧光素单-β-D-N-乙酰基-葡糖胺(FM-GlcNAc)(Mariappa等人,2015,Biochem J[生物化学杂志]470:255)的水解的抑制。水解FM-GlcNAc(马克基因技术公司(Marker Genetechnologies)，目录号M1485)导致β-D-N-葡糖胺乙酸盐和荧光素的形成。后者的荧光可以在485nm的激发波长和538nm的发射波长下测量。酶活性的增加导致荧光信号的增加。在定向基因公司(OriGene)(目录号TP322411)购买全长OGA酶。将酶在-20℃下储存在25mMTris.HCl，pH 7.3，100mM甘氨酸，10％甘油中。作为参考化合物测试Thiamet G和GlcNAcStatin(Yuzwa等人,2008Nature Chemical Biology[自然化学生物学]4:483；Yuzwa等人.2012Nature Chemical Biology[自然化学生物学]8:393)。该测定在补充有0.005％吐温-20的200mM柠檬酸盐/磷酸盐缓冲液中进行。将35.6g Na₂HPO₄2 H₂O(西格玛公司(Sigma)，#C0759)溶于1L水中，以得到200mM溶液。将19.2g柠檬酸(默克公司，#1.06580)溶于1L水中，以得到100mM溶液。将磷酸钠溶液的pH用柠檬酸溶液调节至7.2。用于终止反应的缓冲液由500mM碳酸盐缓冲液(pH 11.0)组成。将734mg FM-GlcNAc溶于5.48mL DMSO中，以得到250mM溶液，并储存在-20℃。OGA以2nM浓度使用，并且FM-GlcNAc以100uM最终浓度使用。在测定缓冲液中制备稀释液。

将50nl溶于DMSO中的化合物分配到黑色Proxiplate TM 384Plus测定板(珀金埃尔默公司(Perkin Elmer)，#6008269)上，随后添加3μl fl-OGA酶混合物。将板在室温下预孵育60min，然后添加2μl FM-GlcNAc底物混合物。最终的DMSO浓度不超过1％。将板以1000rpm短暂离心1min，并在室温下孵育6h。为了终止反应，添加5μl STOP缓冲液并以1000rpm再次离心1min。在赛默科技公司(Thermo Scientific)Fluoroskan Ascent或珀金埃尔默公司EnVision中定量荧光，激发波长为485nm，发射波长为538nm。

对于分析，通过最小平方和方法拟合最佳拟合曲线。由此获得IC₅₀值和希尔系数。高对照(无抑制剂)和低对照(标准抑制剂的饱和浓度)用于定义最小值和最大值。

2)OGA-细胞测定

在杨森公司(Janssen)建立了可诱导P301L突变型人Tau(同种型2N4R)的HEK293细胞。Thiamet-G用于板验证(高对照)和作为参考化合物(参考EC₅₀测定验证)。通过如前所述使用检测O-GlcN酰化残基的单克隆抗体(CTD110.6；细胞信号传导公司(CellSignaling)，#9875)对O-GlcN酰化蛋白进行免疫细胞化学(ICC)检测来评估OGA抑制(Dorfmueller等人,2010Chemistry&biology[化学与生物学],17:1250)。OGA的抑制将导致O-GlcN酰化蛋白水平的增加，导致实验中的信号增加。细胞核用Hoechst染色以提供细胞培养物质量对照和粗略估计的即时化合物毒性(如果有的话)。ICC图片用珀金埃尔默公司Opera Phenix平板显微镜成像，并用提供的软件珀金埃尔默公司Harmony4.1进行定量。

按照标准程序，将细胞在DMEM高葡萄糖(西格玛公司，#D5796)中繁殖。细胞测定前2天将细胞分开，计数并接种于聚-D-赖氨酸(PDL)包被的96孔(葛莱娜公司(Greiner)，#655946)平板(细胞密度为12,000个细胞/cm²(4,000个细胞/孔))的100μl测定培养基中(低葡萄糖培养基用于降低GlcN酰化的基础水平)(Park等人,2014The Journal ofbiologicalchemistry[生物化学杂志]289:13519)。在化合物测试当天，从测定板中取出培养基并用90μl新鲜测定培养基补充。将10μl的10倍终浓度的化合物添加至孔中。在细胞孵育箱中孵育6小时之前不久将板离心。DMSO浓度设定为0.2％。通过施加真空丢弃培养基。为了细胞染色，除去培养基，并且用100μl D-PBS(西格玛公司，#D8537)洗涤细胞一次。从下一步开始，除非另有说明，否则测定体积总是50μl，并且在没有搅拌和室温下进行孵育。将细胞在50μl 4％多聚甲醛(PFA，阿法埃莎公司(Alpha aesar)，#043368)PBS溶液中在室温下固定15分钟。然后弃去PFA PBS溶液并在10mM Tris缓冲液(生命技术公司(LifeTechnologies)，#15567-027)、150mM NaCl(生命技术公司(LifeTechnologies)，#24740-0110)，0.1％Triton X(阿法埃莎公司，#A16046)(pH 7.5(ICC缓冲液))中洗涤细胞一次，之后在相同缓冲液中透化10分钟。随后将样品在含有5％山羊血清(西格玛公司，#G9023)的ICC中在室温下封闭45-60分钟。然后将样品与第一抗体(来自商业提供者的1/1000，参见上文)在4℃下孵育过夜，并且随后在ICC缓冲液中洗涤3次，持续5分钟。将样品与第二荧光抗体(1/500稀释，生命技术公司，#A-21042)一起孵育，并用在ICC(生命技术公司，#H3570)中终浓度为1μg/ml的Hoechst33342进行细胞核染色1小时。在分析之前，将样品在ICC碱缓冲液中手动洗涤2次，持续5分钟。

使用珀金埃尔默公司Phenix Opera使用水20x物镜并每孔记录9个视野进行成像。在488nm处的强度读数用作孔中总蛋白质的O-GlcN酰化水平的量度。为了评估化合物的潜在毒性，使用Hoechst染色计数细胞核。使用参数非线性回归模型拟合计算IC₅₀值。作为最大抑制，在每个平板上存在200uM浓度的Thiamet G。另外，在每个板上计算Thiamet G的浓度应答。

表5.生化测定和细胞测定中的结果。

Claims

1.一种具有式(I)的化合物

或其互变异构体或立体异构形式，其中

其中

R^4a选自由以下组成的组：氢、卤代、-CN、C_1-3烷基、单卤代C_1-3烷基、多卤代C_1-3烷基、-C(O)-OC_1-3烷基、-C(O)-NR’R”、-N(R”’)-C(O)-C_1-3烷基、和Het；

R”’选自由以下组成的组：氢和C_1-3烷基；

R^1c、R^2c和R^1d各自独立地选自由以下组成的组：卤代、

C_1-3烷基、单卤代C_1-3烷基、多卤代C_1-3烷基、C_1-3烷氧基、单卤代C_1-3烷氧基、多卤代C_1-3烷氧基、和C_3-6环烷基；

X³表示CH或N；

并且由如下表示的环中的每一个：

形成

或其药学上可接受的加成盐或溶剂化物。

2.如权利要求1所述的化合物，其中

R¹选自由以下组成的组：任选地被各自独立地选自下组的一个、两个或三个取代基取代的C_1-6烷基，该组由以下组成：卤代，-CN，-OC_1-3烷基，-OH，-SO₂NR^5aR^6a，和任选地被一个、两个或三个独立选择的卤代取代基取代的C_3-6环烷基；被氧杂环丁烷基取代的C_1-6烷基；以及其中两个偕氢被氧杂环丁烷亚基替换的C_1-6烷基；其中R^5a和R^6a各自独立地选自由氢和C_1-3烷基组成的组；条件是-OC_1-3烷基或-OH取代基在存在时是远离1H-吡咯并[3.2-c]吡啶的氮原子的至少两个碳原子；

R^3a选自由以下组成的组：氢、卤代、-C(O)-NR’R”和-N(R”’)-C(O)-C_1-3烷基；

R”’选自由以下组成的组：氢和C_1-3烷基；

R^1c、R^2c和R^1d各自独立地表示卤代或C_1-3烷基；

X³表示CH或N；

并且由如下表示的环中的每一个：

形成

(ii)芳香族杂环，该芳香族杂环具有各自独立地选自氮和氧的一个、两个或三个杂原子，并且任选地被一个或两个各自独立地选自C_1-3烷基的取代基取代。

3.如权利要求1或2所述的化合物，其中

R^3a选自由以下组成的组：氢、卤代、和-C(O)-NR’R”；

R”’选自由以下组成的组：氢和C_1-3烷基；

R^1c、R^2c和R^1d各自独立地表示卤代或C_1-3烷基；

X³表示CH或N；

并且由如下表示的环中的每一个：

形成

4.如权利要求1至3中任一项所述的化合物，其中

R¹是任选地被各自独立地选自下组的一个、两个或三个取代基取代的C_1-6烷基，该组由以下组成：卤代和任选地被一个、两个或三个独立选择的卤代取代基取代的C_3-6环烷基，或R¹是被氧杂环丁烷基取代的C_1-6烷基，或其中两个偕氢被氧杂环丁烷亚基替换的C_1-6烷基。

5.如权利要求1至4中任一项所述的化合物，其中R²和R³各自独立地选自氢和氟。

6.如权利要求1至5中任一项所述的化合物，其中R⁵是氢、氟或甲基。

7.一种药物组合物，该药物组合物包含预防或治疗有效量的如权利要求1至6中任一项所述的化合物和药学上可接受的载体。

8.一种用于制备药物组合物的方法，该方法包括：将药学上可接受的载体与预防或治疗有效量的如1至6中任一项所述的化合物混合。

9.如权利要求1至6中任一项所定义的化合物或如权利要求7所定义的药物组合物，用于用作药剂。

10.如权利要求1至6中任一项所定义的化合物或如权利要求7所定义的药物组合物，用于治疗或预防tau病变，特别是选自下组的tau病变，该组由以下组成：阿尔茨海默氏病、进行性核上性麻痹、唐氏综合征、额颞叶痴呆、伴有帕金森综合征-17的额颞痴呆、皮克氏病、皮质基底节变性、和嗜银颗粒疾病；或伴有tau病理学的神经退行性疾病，特别是选自由C9ORF72突变引起的肌萎缩侧索硬化或额颞叶痴呆的神经退行性疾病。

11.一种预防或治疗选自由tau病变组成的组的障碍的方法，特别是选自下组的tau病变，该组由以下组成：阿尔茨海默氏病、进行性核上性麻痹、唐氏综合征、额颞叶痴呆、伴有帕金森综合征-17的额颞痴呆、皮克氏病、皮质基底节变性、和嗜银颗粒疾病；或伴有tau病理学的神经退行性疾病，特别是选自由C9ORF72突变引起的肌萎缩侧索硬化或额颞叶痴呆的神经退行性疾病，该方法包括向有需要的受试者施用预防或治疗有效量的如权利要求1至6中任一项所述的化合物或如权利要求7所述的药物组合物。

12.一种用于抑制O-GlcNAc水解酶的方法，该方法包括向有需要的受试者施用预防或治疗有效量的如权利要求1至6中任一项所述的化合物或如权利要求7所述的药物组合物。