CN112285257A - 食用奶油中掺假植物奶油的检测方法 - Google Patents

食用奶油中掺假植物奶油的检测方法 Download PDF

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CN112285257A CN202011351831.5A CN202011351831A CN112285257A CN 112285257 A CN112285257 A CN 112285257A CN 202011351831 A CN202011351831 A CN 202011351831A CN 112285257 A CN112285257 A CN 112285257A
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Abstract

本发明提供了一种食用奶油中掺假植物奶油的检测方法。该检测方法采用高效液相色谱‑毛细管电泳‑激光荧光诱导联合检测法，首先合成荧光标记试剂，并对植物奶油特征脂肪酸标准样品和预处理后的待测试食用奶油中的脂肪酸样品进行衍生处理，得到荧光标记的特征脂肪酸衍生物标准样品和脂肪酸衍生物测试样品；然后进行色谱测定，将特征脂肪酸衍生物标准样品与脂肪酸衍生物测试样品的色谱图进行比对分析，确定脂肪酸衍生物测试样品色谱图中的色谱峰所代表的脂肪酸种类，并分析所述脂肪酸衍生物测试样品中脂肪酸的含量。该检测方法具备优异的检测灵敏度，还具有高选择性、高稳定性和低检出限的优点。

Description

食用奶油中掺假植物奶油的检测方法
技术领域
本发明涉及食品检测技术领域，尤其涉及一种食用奶油中掺假植物奶油的检测方法。
背景技术
食用动物奶油具有丰富的营养价值，但由于其原料高昂的成本，市面上常有不法商家将便宜的植物奶油来部分代替食用动物奶油的成分，即掺杂植物奶油来以次充好。掺假行为导致食用动物奶油的营养成分显著降低、影响其食用口感，进而影响以动物奶油为原料进行制作的产品质量。同时，植物奶油的制作中需要经过氢化处理，会产生反式脂肪酸，从而对人体健康造成一定的危害。
目前，尽管相关红外、气相色谱-质谱联用技术能用于检测食用动物奶油的真假，但其方法存在检测灵敏度和选择性不高的缺陷。此外，此类方法操作复杂繁琐，并且检测成本高昂。因此，急需开发出高灵敏度高选择性的食用奶油的快速检测方法。
申请号为CN201710854444.5的发明专利公开了一种稀奶油中掺假植脂奶油的核磁共振检测方法。该检测方法包括：1)收集奶油样品，并对样品进行真实性检查；2)采用通过真实性检查的奶油样品配制掺假奶油样品，采集样品的1H-NMR；3)采用经数据处理后的1H-NMR数据建立PLS-DA定性模型和PCA-SVM回归定量分析模型；4)采集未知掺假与否奶油样品的1H-NMR数据，利用建立的定性、定量模型进行检测，从而得到未知奶油样品的鉴定结果。
申请号为CN201810050813.X的发明专利公开了一种基于二维内源荧光光谱技术检测黄油掺假的方法。该方法以纯黄油和掺假不同比例的黄油为研究对象，使用二维内源荧光检测技术，采集激发和发射数据，获得样品的激发发射二维荧光图谱；结合主成分分析方法，得到黄油和掺假黄油的主成分得分图和载荷图，最终实现非目标性快速检测区分黄油和掺假黄油的目的。
但是，上述检测方法存在检测方法复杂或者检测灵敏度和选择性不高的缺陷。有鉴于此，有必要设计一种改进的食用奶油中掺假植物奶油的检测方法，以解决上述问题。
发明内容
本发明的目的在于提供一种食用奶油中掺假植物奶油的检测方法。
为实现上述发明目的，本发明提供了一种食用奶油中掺假植物奶油的检测方法，采用高效液相色谱-毛细管电泳-激光荧光诱导联合检测法，包括如下步骤：
S1，合成荧光标记试剂；将植物奶油特征脂肪酸进行皂化处理，得到植物奶油特征脂肪酸标准样品；将待测试食用奶油进行预处理，得到待测试食用奶油中的脂肪酸样品；
S2，将所述荧光标记试剂分别与所述植物奶油特征脂肪酸标准样品和预处理后的待测试食用奶油中的脂肪酸样品进行衍生处理，得到荧光标记的特征脂肪酸衍生物标准样品和脂肪酸衍生物测试样品；
S3，将步骤S2制备的荧光标记的特征脂肪酸衍生物标准样品和脂肪酸衍生物测试样品用滤膜过滤后装入样品瓶中，进行色谱测定；
S4，将特征脂肪酸衍生物标准样品与脂肪酸衍生物测试样品的色谱图进行比对分析，确定脂肪酸衍生物测试样品色谱图中的色谱峰所代表的脂肪酸种类；
S5，制备特征脂肪酸衍生物标准样品的标准曲线，分析所述脂肪酸衍生物测试样品中脂肪酸的含量。
作为本发明的进一步改进，在步骤S1中，所述荧光标记试剂的合成过程为：
P1，将9,10-菲醌、对乙酰氨基苯甲醛以及乙酸铵依次加入乙酸中，混合均匀得到混合溶液，将所述混合溶液在110～130℃下搅拌回流2～6h；然后，冷却至室温后，将混合溶液倒入水中，调节pH至7～8，过滤回收沉淀的粗产物，洗涤和干燥处理；接着，将粗产物进行重结晶处理，得到中间产物；
P2，将所述中间产物溶解二甲基亚砜中，得到共混液；然后向所述共混液中氢氧化钠混合均匀，并迅速将共混液升温至110～130℃并在油浴中回流8～16h，冷却并过滤回收，得到精产物，洗涤干燥处理；再将精产物进行重结晶处理，得到荧光标记试剂。
作为本发明的进一步改进，在步骤S2中，所述衍生处理的具体过程为：
A1，将所述荧光标记试剂溶于二甲基亚砜中，得到预定浓度的衍生物试剂溶液；将植物奶油特征脂肪酸标准样品和待测试食用奶油中的脂肪酸样品分别溶于二甲基甲酰胺中，得到标准样品溶液和测试样品溶液；
A2，将所述衍生物试剂溶液分别与所述标准样品溶液和测试样品溶液混合，并以1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐为偶联剂，4-二甲氨基吡啶为催化剂，得到反应体系；并将所述反应体系在30～50℃下反应15～45min，得到所述特征脂肪酸衍生物标准样品和所述脂肪酸衍生物测试样品。
作为本发明的进一步改进，所述反应体系中，所述1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐与所述棕榈油脂肪酸标准样品的质量比例为(3～5)：1；所述荧光标记试剂与所述植物奶油特征脂肪酸标准样品的摩尔比为(6～8)：1。
作为本发明的进一步改进，在步骤P1中，所述9,10-菲醌、对乙酰氨基苯甲醛和乙酸铵三者添加的质量比例为(1～3)：(1～3)：(14～16)；
在步骤P2中，所述中间产物与所述氢氧化钠的质量比例为(2～4)：(3～5)。
作为本发明的进一步改进，在步骤S1中，待测试食用奶油中的预处理过程分为脂肪酸提取过程和皂化过程；其中，所述待测试食用奶油的脂肪酸的提取过程为：
将待测试食用奶油置于比色管中，加入十一碳酸甘油三酯溶液和连苯三酚溶液，通过盐酸和氨水联合水解的方法进行待测试食用奶油中脂肪酸的提取；
提取液经无水硫酸钠脱水后，在55～65℃下，氮吹处理挥干提取溶剂，残留物即为待测试食用奶油的脂肪酸提取物。
作为本发明的进一步改进，所述皂化过程为：
将待测试食用奶油的脂肪酸提取物置于试管中，加入氢氧化钾-甲醇溶液，震荡处理并于60℃水浴中皂化反应20～40min，皂化反应结束后，冷却处理，加入预定量水并调节pH值至3～4；
接着，加入正己烷萃取处理，得到正己烷层，再用水反萃取正己烷；
最后，用氮气吹干正己烷，加入饱和氯化钠水溶液使之分层，取上清液经无水硫酸钠脱水后，得到皂化后的待测试食用奶油中的脂肪酸。
作为本发明的进一步改进，在步骤S4中，色谱测定采用含有激光诱导荧光检测器的高效液相色谱仪进行测定，其工艺参数设置为：
流动相A为乙腈，流动相B为二甲基甲醇，流速为0.2～0.6mL/min；测试温度为25～30℃，进样量为20～25μL；
梯度洗脱程序为：0～45min，A相由95％降至50％；45～60min，A相由50％降至30％；60～100min，B相保持30％；而后用初始梯度平衡15min；
相对应的，0～45min，B相由5％升至50％；45～60min，B相由50％升至70％；60～100min，B相保持70％；而后用初始梯度平衡15min。
作为本发明的进一步改进，毛细管管柱的管径为530μm，流速为0.2～0.4mL/min；
激光诱导荧光检测器的激发波长为420～460nm，发射波长为500～540nm。
作为本发明的进一步改进，所述掺假植物奶油的原料包括椰子油、棕榈油、大豆油、葵花油中的一种或多种；所述植物奶油特征脂肪酸标准样品包括但不限于为肉豆蔻酸、月桂酸中的一种。
本发明的有益效果是：
1、本发明提供的食用奶油中掺假植物奶油的检测方法，采用高效液相色谱-毛细管电泳-激光荧光诱导联合检测法，具备优异的检测灵敏度，还具有高选择性、高稳定性和低检出限的优点。
2、本发明提供的食用奶油中掺假植物奶油的检测方法，以菲醌为荧光基体，通过与对乙酰氨基苯甲醛反应，制备得到高选择性和高适用性的荧光标记试剂，使得菲醌母体环上得到了两个氮原子，能够很大程度上改善了荧光标记衍生物的亲水性和分散性能。该荧光标记试剂的化学性质稳定，不容易发生反应，本发明通过采用1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐为偶联剂，4-二甲氨基吡啶为催化剂的体系，使得脂肪酸甲酯样品得到较好的衍生反应和衍生效率。本发明将荧光标记试剂的荧光基团与被测脂肪酸甲酯分子进行反应，使没有荧光或者紫外吸收的待测食用奶油脂肪酸样品带上特定的可识别检测的荧光基团，从而大大提高了食用奶油样品检测的灵敏度，同时，荧光衍生化反应还能使被检测食用奶油脂肪酸衍生物的分离程度得到很大改善，由此提高检测的精确度和灵敏度。
3、本发明提供的食用奶油中掺假植物奶油的检测方法，通过设计具有较大共轭刚性分子结构的荧光标记菲醌母体，加强了分子的共轭程度，来以此增强其共轭效应，从而增加荧光化合物的摩尔吸光系数，进而提高荧光的灵敏度。同时，本发明以植物奶油中的特征脂肪酸种类为检测对象，检测目标明确，通过荧光标记试剂标记后，检测的选择性和灵敏度得到极大地提高。
附图说明
图1为本发明提供的食用奶油中掺假植物奶油的检测方法的流程示意图。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面具体实施例对本发明进行详细描述。
在此，还需要说明的是，为了避免因不必要的细节而模糊了本发明，在附图中仅仅示出了与本发明的方案密切相关的结构和/或处理步骤，而省略了与本发明关系不大的其他细节。
另外，还需要说明的是，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。
请参阅图1所示，本发明提供了一种食用奶油中掺假植物奶油的检测方法，采用高效液相色谱-毛细管电泳-激光荧光诱导联合检测法，包括如下步骤：
S1，合成荧光标记试剂；将植物奶油特征脂肪酸进行皂化处理，得到植物奶油特征脂肪酸标准样品；将待测试食用奶油进行预处理，得到待测试食用奶油中的脂肪酸样品；
S2，将所述荧光标记试剂分别与所述植物奶油特征脂肪酸标准样品和预处理后的待测试食用奶油中的脂肪酸样品进行衍生处理，得到荧光标记的特征脂肪酸衍生物标准样品和脂肪酸衍生物测试样品；
S3，将步骤S2制备的荧光标记的特征脂肪酸衍生物标准样品和脂肪酸衍生物测试样品用滤膜过滤后装入样品瓶中，进行色谱测定；
S4，将特征脂肪酸衍生物标准样品与脂肪酸衍生物测试样品的色谱图进行比对分析，确定脂肪酸衍生物测试样品色谱图中的色谱峰所代表的脂肪酸种类；
S5，制备特征脂肪酸衍生物标准样品的标准曲线，分析所述脂肪酸衍生物测试样品中脂肪酸的含量。
优选的，在步骤S1中，所述荧光标记试剂的合成过程为：
P1，将9,10-菲醌、对乙酰氨基苯甲醛以及乙酸铵依次加入乙酸中，混合均匀得到混合溶液，将所述混合溶液在110～130℃下搅拌回流2～6h；然后，冷却至室温后，将混合溶液倒入水中，调节pH至7～8，过滤回收沉淀的粗产物，洗涤和干燥处理；接着，将粗产物进行重结晶处理，得到中间产物；
P2，将所述中间产物溶解二甲基亚砜中，得到共混液；然后向所述共混液中氢氧化钠混合均匀，并迅速将共混液升温至110～130℃并在油浴中回流8～16h，冷却并过滤回收，得到精产物，洗涤干燥处理；再将精产物进行重结晶处理，得到荧光标记试剂。
所述荧光标记试剂的合成路线如下所示：
Figure BDA0002799576880000071
优选的，在步骤S2中，所述衍生处理的具体过程为：
A1，将所述荧光标记试剂溶于二甲基亚砜中，得到预定浓度的衍生物试剂溶液；将植物奶油特征脂肪酸标准样品和待测试的食用奶油中的脂肪酸样品分别溶于二甲基甲酰胺中，得到标准样品溶液和测试样品溶液；
A2，将所述衍生物试剂溶液分别与所述标准样品溶液和测试样品溶液混合，并以1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐为偶联剂，4-二甲氨基吡啶为催化剂，得到反应体系；并将所述反应体系在30～50℃下反应15～45min，得到所述特征脂肪酸衍生物标准样品和所述脂肪酸衍生物测试样品，合成路线如下所示：
Figure BDA0002799576880000072
优选的，所述反应体系中，所述1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐与所述棕榈油脂肪酸标准样品的质量比例为(3～5)：1；所述荧光标记试剂与所述植物奶油特征脂肪酸标准样品的摩尔比为(6～8)：1。
优选的，在步骤P1中，所述9,10-菲醌、对乙酰氨基苯甲醛和乙酸铵三者添加的质量比例为(1～3)：(1～3)：(14～16)；
在步骤P2中，所述中间产物与所述氢氧化钠的质量比例为(2～4)：(3～5)。
优选的，在步骤S1中，待测试食用奶油中的预处理过程分为脂肪酸提取过程和皂化过程；其中，所述待测试食用奶油的脂肪酸的提取过程为：
将待测试食用奶油置于比色管中，加入十一碳酸甘油三酯溶液和连苯三酚溶液，通过盐酸和氨水联合水解的方法进行待测试食用奶油中脂肪酸的提取；
提取液经无水硫酸钠脱水后，在55～65℃下，氮吹处理挥干提取溶剂，残留物即为待测试食用奶油的脂肪酸提取物。
优选的，所述皂化过程为：
将待测试食用奶油的脂肪酸提取物置于试管中，加入氢氧化钾-甲醇溶液，震荡处理并于60℃水浴中皂化反应20～40min，皂化反应结束后，冷却处理，加入预定量水并调节pH值至3～4；
接着，加入正己烷萃取处理，得到正己烷层，再用水反萃取正己烷；
最后，用氮气吹干正己烷，加入饱和氯化钠水溶液使之分层，取上清液经无水硫酸钠脱水后，得到皂化后的待测试食用奶油中的脂肪酸。
优选的，在步骤S4中，色谱测定采用含有激光诱导荧光检测器的高效液相色谱仪进行测定，其工艺参数设置为：
流动相A为乙腈，流动相B为二甲基甲醇，流速为0.2～0.6mL/min；测试温度为25～30℃，进样量为20～25μL；
梯度洗脱程序为：0～45min，A相由95％降至50％；45～60min，A相由50％降至30％；60～100min，B相保持30％；而后用初始梯度平衡15min；
相对应的，0～45min，B相由5％升至50％；45～60min，B相由50％升至70％；60～100min，B相保持70％；而后用初始梯度平衡15min。
优选的，毛细管管柱的管径为530μm，流速为0.2～0.4mL/min；
激光诱导荧光检测器的激发波长为420～460nm，发射波长为500～540nm。
优选的，所述掺假植物奶油的原料包括椰子油、棕榈油、大豆油、葵花油中的一种或多种；所述植物奶油特征脂肪酸标准样品包括但不限于为肉豆蔻酸、月桂酸中的一种。
线性关系测试：设置不同的标准样品浓度/mol/L(1.25×10-4、2.50×10-4、5.00×10-4、1.25×10-3、2.50×10-3)，进行色谱测定，将峰面积与其对应标准样品浓度分别取对数后进行线性回归并绘出标准曲线。
稳定性测试：将标准样品分别在不同的时间点/h(0、1.5、3、6、9、15)进样测定，最终得到各时间点的峰面积，从而判断该荧光衍生物溶液的稳定性。
精密度测试：将标准样品连续平行测定6次，最终得到各次的峰面积和平均值，从而判断该检测方法的精密度。
最低检测限测试：在信噪比为3的时候确定最低检测限。
实施例1
本发明实施例1提供了一种食用奶油中掺假植物奶油(椰子油)的检测方法，采用高效液相色谱-毛细管电泳-激光荧光诱导联合检测法，包括如下步骤：
S1，合成荧光标记试剂；将植物奶油特征脂肪酸进行皂化处理，得到植物奶油特征脂肪酸(肉豆蔻酸)标准样品；将待测试食用奶油进行预处理，得到待测试食用奶油中的脂肪酸样品。
S2，将所述荧光标记试剂分别与所述植物奶油特征脂肪酸标准样品和预处理后的待测试食用奶油中的脂肪酸样品进行衍生处理，得到荧光标记的特征脂肪酸衍生物标准样品和脂肪酸衍生物测试样品。
S3，将步骤S2制备的荧光标记的特征脂肪酸衍生物标准样品和脂肪酸衍生物测试样品用滤膜过滤后装入样品瓶中，进行色谱测定；
色谱测定采用含有激光诱导荧光检测器的高效液相色谱仪进行测定，其工艺参数设置为：
色谱柱：
Figure BDA0002799576880000091
C18色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)；
流动相A为乙腈，流动相B为二甲基甲醇，流速为0.2mL/min；测试温度为25℃，进样量为20μL；
梯度洗脱程序为：0～45min，A相由95％降至50％；45～60min，A相由50％降至30％；60～100min，B相保持30％；而后用初始梯度平衡15min；
相对应的，0～45min，B相由5％升至50％；45～60min，B相由50％升至70％；60～100min，B相保持70％；而后用初始梯度平衡15min。
毛细管管柱的管径为530μm，流速为0.2mL/min；
激光诱导荧光检测器的激发波长为440nm，发射波长为520nm。
S4，对特征脂肪酸衍生物标准样品的线性关系、稳定性、精密度、最低检测限和加标回收率进行测试和分析；在上述色谱条件下，脂肪酸(肉豆蔻酸)实现了良好的分离，且其线性关系良好(A＝1.91×1010C+698.23，R＝0.9987.线性范围为4.01×10-8～-6mol/L)；稳定性和精密度的相对标准偏差都在3％以内；肉豆蔻酸的最低检测限达到10-8mol/L。然后，将特征脂肪酸衍生物标准样品与脂肪酸衍生物测试样品的色谱图进行比对分析，确定脂肪酸衍生物测试样品色谱图中的色谱峰所代表的脂肪酸种类为肉豆蔻酸。
S5，根据上述特征脂肪酸衍生物标准样品的标准线性关系曲线，分析得到所述脂肪酸衍生物测试样品中脂肪酸的含量。
实施例2
本发明实施例2提供了一种食用奶油中掺假植物奶油(棕榈油)的检测方法，采用高效液相色谱-毛细管电泳-激光荧光诱导联合检测法，包括如下步骤：
S1，合成荧光标记试剂；将植物奶油特征脂肪酸进行皂化处理，得到植物奶油特征脂肪酸(月桂酸)标准样品；将待测试食用奶油进行预处理，得到待测试食用奶油中的脂肪酸样品；
S2，将所述荧光标记试剂分别与所述植物奶油特征脂肪酸标准样品和预处理后的待测试食用奶油中的脂肪酸样品进行衍生处理，得到荧光标记的特征脂肪酸衍生物标准样品和脂肪酸衍生物测试样品；
S3，将步骤S2制备的荧光标记的特征脂肪酸衍生物标准样品和脂肪酸衍生物测试样品用滤膜过滤后装入样品瓶中，进行色谱测定；
色谱测定采用含有激光诱导荧光检测器的高效液相色谱仪进行测定，其工艺参数设置为：
流动相A为乙腈，流动相B为二甲基甲醇，流速为0.2mL/min；测试温度为25℃，进样量为20μL；
梯度洗脱程序为：0～45min，A相由95％降至50％；45～60min，A相由50％降至30％；60～100min，B相保持30％；而后用初始梯度平衡15min；
相对应的，0～45min，B相由5％升至50％；45～60min，B相由50％升至70％；60～100min，B相保持70％；而后用初始梯度平衡15min。
毛细管管柱的管径为530μm，流速为0.2mL/min；
激光诱导荧光检测器的激发波长为440nm，发射波长为520nm。
S4，对特征脂肪酸衍生物标准样品的线性关系、稳定性、精密度、最低检测限和加标回收率进行制作和分析；在上述色谱条件下，脂肪酸(月桂酸)实现了良好的分离，且其线性关系良好(A＝6.82×1010C+132.27，R＝0.9999，线性范围为2.11×10-8～-6mol/L)；稳定性和精密度的相对标准偏差都在3％以内；月桂酸的最低检测限达到10-8mol/L。将特征脂肪酸衍生物标准样品与脂肪酸衍生物测试样品的色谱图进行比对分析，确定脂肪酸衍生物测试样品色谱图中的色谱峰所代表的脂肪酸种类为月桂酸。
S5，根据上述特征脂肪酸衍生物标准样品的标准线性关系曲线，分析所述脂肪酸衍生物测试样品中脂肪酸的含量。
综上所述，本发明提供了一种食用奶油中掺假植物奶油的检测方法。该检测方法采用高效液相色谱-毛细管电泳-激光荧光诱导联合检测法，首先合成荧光标记试剂，并对植物奶油特征脂肪酸标准样品和预处理后的待测试食用奶油中的脂肪酸样品进行衍生处理，得到荧光标记的特征脂肪酸衍生物标准样品和脂肪酸衍生物测试样品；然后进行色谱测定，将特征脂肪酸衍生物标准样品与脂肪酸衍生物测试样品的色谱图进行比对分析，确定脂肪酸衍生物测试样品色谱图中的色谱峰所代表的脂肪酸种类，并分析所述脂肪酸衍生物测试样品中脂肪酸的含量。该检测方法具备优异的检测灵敏度，还具有高选择性、高稳定性和低检出限的优点。
以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围。

Claims (10)

1.一种食用奶油中掺假植物奶油的检测方法，其特征在于：采用高效液相色谱-毛细管电泳-激光荧光诱导联合检测法，包括如下步骤：
S1，合成荧光标记试剂；将植物奶油特征脂肪酸进行皂化处理，得到植物奶油特征脂肪酸标准样品；将待测试食用奶油进行预处理，得到待测试食用奶油中的脂肪酸样品；
S2，将所述荧光标记试剂分别与所述植物奶油特征脂肪酸标准样品和预处理后的待测试食用奶油中的脂肪酸样品进行衍生处理，得到荧光标记的特征脂肪酸衍生物标准样品和脂肪酸衍生物测试样品；
S3，将步骤S2制备的荧光标记的特征脂肪酸衍生物标准样品和脂肪酸衍生物测试样品用滤膜过滤后装入样品瓶中，进行色谱测定；
S4，将特征脂肪酸衍生物标准样品与脂肪酸衍生物测试样品的色谱图进行比对分析，确定脂肪酸衍生物测试样品色谱图中的色谱峰所代表的脂肪酸种类；
S5，制备特征脂肪酸衍生物标准样品的标准曲线，分析所述脂肪酸衍生物测试样品中脂肪酸的含量。
2.根据权利要求1所述的食用奶油中掺假植物奶油的检测方法，其特征在于：在步骤S1中，所述荧光标记试剂的合成过程为：
P1，将9,10-菲醌、对乙酰氨基苯甲醛以及乙酸铵依次加入乙酸中，混合均匀得到混合溶液，将所述混合溶液在110～130℃下搅拌回流2～6h；然后，冷却至室温后，将混合溶液倒入水中，调节pH至7～8，过滤回收沉淀的粗产物，洗涤和干燥处理；接着，将粗产物进行重结晶处理，得到中间产物；
P2，将所述中间产物溶解二甲基亚砜中，得到共混液；然后向所述共混液中氢氧化钠混合均匀，并迅速将共混液升温至110～130℃并在油浴中回流8～16h，冷却并过滤回收，得到精产物，洗涤干燥处理；再将精产物进行重结晶处理，得到荧光标记试剂。
3.根据权利要求1所述的食用奶油中掺假植物奶油的检测方法，其特征在于：在步骤S2中，所述衍生处理的具体过程为：
A1，将所述荧光标记试剂溶于二甲基亚砜中，得到预定浓度的衍生物试剂溶液；将植物奶油特征脂肪酸标准样品和待测试食用奶油中的脂肪酸样品分别溶于二甲基甲酰胺中，得到标准样品溶液和测试样品溶液；
A2，将所述衍生物试剂溶液分别与所述标准样品溶液和测试样品溶液混合，并以1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐为偶联剂，4-二甲氨基吡啶为催化剂，得到反应体系；并将所述反应体系在30～50℃下反应15～45min，得到所述特征脂肪酸衍生物标准样品和所述脂肪酸衍生物测试样品。
4.根据权利要求3所述的食用奶油中掺假植物奶油的检测方法，其特征在于：所述反应体系中，所述1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐与所述棕榈油脂肪酸标准样品的质量比例为(3～5)：1；所述荧光标记试剂与所述植物奶油特征脂肪酸标准样品的摩尔比为(6～8)：1。
5.根据权利要求2所述的食用奶油中掺假植物奶油的检测方法，其特征在于：在步骤P1中，所述9,10-菲醌、对乙酰氨基苯甲醛和乙酸铵三者添加的质量比例为(1～3)：(1～3)：(14～16)；
在步骤P2中，所述中间产物与所述氢氧化钠的质量比例为(2～4)：(3～5)。
6.根据权利要求1所述的食用奶油中掺假植物奶油的检测方法，其特征在于：在步骤S1中，待测试食用奶油中的预处理过程分为脂肪酸提取过程和皂化过程；其中，所述待测试食用奶油的脂肪酸的提取过程为：
将待测试食用奶油置于比色管中，加入十一碳酸甘油三酯溶液和连苯三酚溶液，通过盐酸和氨水联合水解的方法进行待测试食用奶油中脂肪酸的提取；
提取液经无水硫酸钠脱水后，在55～65℃下，氮吹处理挥干提取溶剂，残留物即为待测试食用奶油的脂肪酸提取物。
7.根据权利要求6所述的食用奶油中掺假植物奶油的检测方法，其特征在于：所述皂化过程为：
将待测试食用奶油的脂肪酸提取物置于试管中，加入氢氧化钾-甲醇溶液，震荡处理并于60℃水浴中皂化反应20～40min，皂化反应结束后，冷却处理，加入预定量水并调节pH值至3～4；
接着，加入正己烷萃取处理，得到正己烷层，再用水反萃取正己烷；
最后，用氮气吹干正己烷，加入饱和氯化钠水溶液使之分层，取上清液经无水硫酸钠脱水后，得到皂化后的待测试食用奶油中的脂肪酸。
8.根据权利要求1所述的食用奶油中掺假植物奶油的检测方法，其特征在于：在步骤S4中，色谱测定采用含有激光诱导荧光检测器的高效液相色谱仪进行测定，其工艺参数设置为：
流动相A为乙腈，流动相B为二甲基甲醇，流速为0.2～0.6mL/min；测试温度为25～30℃，进样量为20～25μL；
梯度洗脱程序为：0～45min，A相由95％降至50％；45～60min，A相由50％降至30％；60～100min，B相保持30％；而后用初始梯度平衡15min；
相对应的，0～45min，B相由5％升至50％；45～60min，B相由50％升至70％；60～100min，B相保持70％；而后用初始梯度平衡15min。
9.根据权利要求8所述的食用奶油中掺假植物奶油的检测方法，其特征在于：毛细管管柱的管径为530μm，流速为0.2～0.4mL/min；
激光诱导荧光检测器的激发波长为420～460nm，发射波长为500～540nm。
10.根据权利要求1所述的食用奶油中掺假植物奶油的检测方法，其特征在于：所述掺假植物奶油的原料包括椰子油、棕榈油、大豆油、葵花油中的一种或多种；所述植物奶油特征脂肪酸标准样品包括但不限于为肉豆蔻酸、月桂酸中的一种。
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