CN112239471A - 一种汉防己甲素和汉防己乙素的提取方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于物质提取技术领域。本发明提供了一种汉防己甲素和汉防己乙素的提取方法，包括如下步骤：1)将汉防己粉末在乙醇溶液中进行提取处理，得到第一滤渣和第一滤液；2)将第一滤渣、水和酶制剂进行提取处理，得到第二滤渣和第二滤液；3)将第一滤液和第二滤液混合，得到浸膏；4)将浸膏和无水乙醇混合，采用氧化铝色谱柱进行层析纯化，即得汉防己甲素和/或汉防己乙素。本发明的提取方法得到的汉防己甲素和汉防己乙素纯天然，无刺激，无细胞毒性；本发明的提取方法显著提高了汉防己甲素和汉防己乙素的纯度和提取收率，汉防己甲素的收率达到0.88％以上，汉防己乙素的收率达到0.78％以上。
Description
技术领域
本发明涉及物质提取技术领域，尤其涉及一种汉防己甲素和汉防己乙素的提取方法。
背景技术
汉防己是防己科千金藤属植物粉防己的干燥块根，有效成分为生物碱，总生物碱含量可达2.3％，其中主要为汉防己甲素(又名粉防己碱)和汉防己乙素(又名防己诺林碱)，两者均为天然的双苄基异喹啉类生物碱。汉防己甲素具有镇痛、抗肿瘤、消炎、抗心律失常、抗菌、降压等作用，汉防己乙素具有抗肝缺血再灌注损伤、诱导人肺癌95D细胞凋亡等作用。
目前汉防己甲素、汉防己乙素的提取分离多采用乙醇提取，提取液经酸碱处理，再用氯仿或丙酮萃取，或者用氨水碱化等，操作过程比较繁琐，提取率低，并且使用毒性较大的溶剂，对环境和人体不利。因此，研究一种提高汉防己甲素和汉防己乙素的提取效率、纯度和安全性的提取方法，具有重要的意义。
发明内容
本发明的目的是针对现有技术的不足提供一种汉防己甲素和汉防己乙素的提取方法。本发明的提取方法得到的汉防己甲素和汉防己乙素纯天然，无刺激，无细胞毒性；本发明的提取方法显著提高了汉防己甲素和汉防己乙素的纯度和提取收率。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一种汉防己甲素和汉防己乙素的提取方法，包括如下步骤：
1)将汉防己粉末在乙醇溶液中进行提取处理，得到第一滤渣和第一滤液；
2)将第一滤渣、水和酶制剂进行提取处理，得到第二滤渣和第二滤液；
3)将第一滤液和第二滤液混合，得到浸膏；
4)将浸膏和无水乙醇混合，采用氧化铝色谱柱进行层析纯化，即得汉防己甲素和/或汉防己乙素。
作为优选，步骤1)所述提取处理前将汉防己粉末用水浸泡1～2h，所述汉防己粉末和水的质量比为1:0.8～1。
作为优选，步骤1)所述乙醇溶液的体积浓度为55～75％，所述汉防己粉末的粒度为45～55目，所述汉防己粉末和乙醇溶液的质量比为1:8～10。
作为优选，步骤1)所述提取处理采用超声振荡提取，所述超声振荡的时间为1.5～3h，温度为40～45℃。
作为优选，步骤1)所述提取方法中，当提取汉防己甲素时，所述乙醇溶液的体积浓度为66～75％；当提取汉防己乙素时，所述乙醇溶液的体积浓度为55～65％。
作为优选，步骤2)所述酶制剂为重量比为1:2～3的果胶酶和纤维素酶；所述第一滤渣、水和酶制剂的重量比为10:20～30：0.02～0.05；所述提取处理采用超声振荡提取，所述超声振荡的时间为1.5～3h，温度为40～45℃。
作为优选，步骤2)所述提取处理前在第一滤渣、水和酶制剂的混合液中加入醋酸调节pH值，将混合液的pH值调节为3.5～4.2。
作为优选，步骤4)所述浸膏和无水乙醇的质量比为1:5～8，所述层析纯化采用体积比为5～10:1的二氯甲烷和甲醇的混合液进行梯度洗脱。
作为优选，所述梯度洗脱中，二氯甲烷和甲醇的体积比顺次为9:1、7:1和5:1，所述洗脱的速率为2～3mL/min。
本发明的有益效果包括以下几点：
1)本发明的提取方法无有害性试剂参与，降低提取过程中对环境的污染，得到的汉防己甲素和汉防己乙素纯天然，无刺激，无细胞毒性。
2)本发明的提取方法操作简便，所用时间短，有利于缩短生产周期。
3)本发明的提取方法显著提高了汉防己甲素和汉防己乙素的纯度和提取收率，二者的纯度均达到99.5％以上，其中，汉防己甲素的提取收率达到0.88％以上，汉防己乙素的提取收率达到0.78％以上。
具体实施方式
本发明提供了一种汉防己甲素和汉防己乙素的提取方法，包括如下步骤：
1)将汉防己粉末在乙醇溶液中进行提取处理，得到第一滤渣和第一滤液；
2)将第一滤渣、水和酶制剂进行提取处理，得到第二滤渣和第二滤液；
3)将第一滤液和第二滤液混合，得到浸膏；
4)将浸膏和无水乙醇混合，采用氧化铝色谱柱进行层析纯化，即得汉防己甲素和/或汉防己乙素。
本发明步骤1)所述提取处理前优选将汉防己粉末用水浸泡1～2h，进一步优选1.5h；所述汉防己粉末和水的质量比优选为1:0.8～1，进一步优选为1:1。
本发明所述汉防己粉末先用水浸泡，使汉防己粉末的细胞充分膨胀，以利于汉防己粉末中有效活性成分的溶出；然后在乙醇溶液中进行提取，使汉防己粉末中的有效成分溶出的更加充分。
本发明步骤1)所述乙醇溶液的体积浓度优选为55～75％，进一步优选为60～70％；所述汉防己粉末用水浸泡前的粒度优选为45～55目，进一步优选为50目；所述汉防己粉末和乙醇溶液的质量比优选为1:8～10，进一步优选为1:9。
本发明步骤1)所述提取处理优选采用超声振荡提取，所述超声振荡的时间优选为1.5～3h，进一步优选为2～2.5h；所述超声振荡的温度优选为40～45℃，进一步优选为42～44℃。
本发明步骤1)所述提取方法中，当提取汉防己甲素时，所述乙醇溶液的体积浓度优选为66～75％，进一步优选为68～72％；当提取汉防己乙素时，所述乙醇溶液的体积浓度优选为55～65％，进一步优选为58～62％。
本发明步骤2)所述酶制剂优选为果胶酶和纤维素酶；所述果胶酶和纤维素酶的重量比优选为1:2～3，进一步优选为1:2.5；所述第一滤渣、水和酶制剂的重量比优选为10:20～30：0.02～0.05，进一步优选为10:23～27：0.03～0.04；所述提取处理优选采用超声振荡提取，所述超声振荡的时间优选为1.5～3h，进一步优选为2～2.5h；所述超声振荡的温度优选为40～45℃，进一步优选为42～44℃。
本发明步骤2)所述提取处理前优选在第一滤渣、水和酶制剂的混合液中加入醋酸调节pH值，将混合液的pH值优选调节为3.5～4.2，进一步优选为3.8～4.0。
本发明步骤4)所述浸膏和无水乙醇的质量比优选为1:5～8，进一步优选为1:6～7；所述层析纯化优选采用体积比为5～10:1的二氯甲烷和甲醇的混合液进行梯度洗脱；所述梯度洗脱中，二氯甲烷和甲醇的体积比顺次优选为9:1、7:1和5:1，所述洗脱的速率优选为2～3mL/min。
本发明所述氧化铝色谱柱，只需一次层析纯化便可显著提高汉防己甲素和汉防己乙素的提取收率和纯度，无需反复纯化。
下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
将100g汉防己粉末(粒度为45目)用100g水浸泡1h后，在800g体积浓度为68％的乙醇溶液中超声振荡提取，提取的温度为40℃，时间为3h，过滤得到第一滤渣和第一滤液。将重量比为10:20:0.02的第一滤渣、水和酶制剂(由重量比为1:2的果胶酶和纤维素酶组成)进行混合，得到的混合液中加入醋酸调节pH值至3.5，然后在40℃下超声振荡提取3h，过滤得到第二滤渣和第二滤液。将第一滤液和第二滤液混合，浓缩至浸膏。将质量比为1:5的浸膏和无水乙醇混合，采用氧化铝色谱柱进行层析纯化，层析纯化过程采用体积比顺次为9:1、7:1和5:1的二氯甲烷和甲醇的混合液进行梯度洗脱，洗脱速率为2mL/min。收集洗脱液，浓缩至干，得到汉防己甲素。
实施例1得到的汉防己甲素的纯度为99.5％，收率为0.88％。
实施例2
将汉防己粉末在体积浓度为55％的乙醇溶液中超声振荡提取，其他条件与实施例1均相同，得到汉防己乙素。
实施例2得到的汉防己乙素的纯度为99.5％，收率为0.78％。
实施例3
将100g汉防己粉末(粒度为50目)用100g水浸泡1.5h后，在900g体积浓度为70％的乙醇溶液中超声振荡提取，提取的温度为43℃，时间为2.5h，过滤得到第一滤渣和第一滤液。将重量比为10:25:0.03的第一滤渣、水和酶制剂(由重量比为1:2.5的果胶酶和纤维素酶组成)进行混合，得到的混合液中加入醋酸调节pH值至4.0，然后在43℃下超声振荡提取2.5h，过滤得到第二滤渣和第二滤液。将第一滤液和第二滤液混合，浓缩至浸膏。将质量比为1:7的浸膏和无水乙醇混合，采用氧化铝色谱柱进行层析纯化，层析纯化过程采用体积比顺次为9:1、7:1和5:1的二氯甲烷和甲醇的混合液进行梯度洗脱，洗脱速率为2.5mL/min。收集洗脱液，浓缩至干，得到汉防己甲素。
实施例3得到的汉防己甲素的纯度为99.5％，收率为0.9％。
实施例4
将汉防己粉末在体积浓度为60％的乙醇溶液中超声振荡提取，其他条件与实施例3均相同，得到汉防己乙素。
实施例4得到的汉防己乙素的纯度为99.5％，收率为0.79％。
实施例5
将100g汉防己粉末(粒度为55目)用90g水浸泡2h后，在1000g体积浓度为75％的乙醇溶液中超声振荡提取，提取的温度为45℃，时间为2h，过滤得到第一滤渣和第一滤液。将重量比为10:30:0.05的第一滤渣、水和酶制剂(由重量比为1:3的果胶酶和纤维素酶组成)进行混合，得到的混合液中加入醋酸调节pH值至4.0，然后在45℃下超声振荡提取2h，过滤得到第二滤渣和第二滤液。将第一滤液和第二滤液混合，浓缩至浸膏。将质量比为1:8的浸膏和无水乙醇混合，采用氧化铝色谱柱进行层析纯化，层析纯化过程采用体积比顺次为9:1、7:1和5:1的二氯甲烷和甲醇的混合液进行梯度洗脱，洗脱速率为3mL/min。收集洗脱液，浓缩至干，得到汉防己甲素。
实施例5得到的汉防己甲素的纯度为99.5％，收率为0.88％。
实施例6
将汉防己粉末在体积浓度为65％的乙醇溶液中超声振荡提取，其他条件与实施例5均相同，得到汉防己乙素。
实施例6得到的汉防己乙素的纯度为99.5％，收率为0.79％。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (9)
1.一种汉防己甲素和汉防己乙素的提取方法，其特征在于，包括如下步骤：
1)将汉防己粉末在乙醇溶液中进行提取处理，得到第一滤渣和第一滤液；
2)将第一滤渣、水和酶制剂进行提取处理，得到第二滤渣和第二滤液；
3)将第一滤液和第二滤液混合，得到浸膏；
4)将浸膏和无水乙醇混合，采用氧化铝色谱柱进行层析纯化，即得汉防己甲素和/或汉防己乙素。
2.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，步骤1)所述提取处理前将汉防己粉末用水浸泡1～2h，所述汉防己粉末和水的质量比为1:0.8～1。
3.根据权利要求1或2所述的提取方法，其特征在于，步骤1)所述乙醇溶液的体积浓度为55～75％，所述汉防己粉末的粒度为45～55目，所述汉防己粉末和乙醇溶液的质量比为1:8～10。
4.根据权利要求3所述的提取方法，其特征在于，步骤1)所述提取处理采用超声振荡提取，所述超声振荡的时间为1.5～3h，温度为40～45℃。
5.根据权利要求4所述的提取方法，其特征在于，步骤1)所述提取方法中，当提取汉防己甲素时，所述乙醇溶液的体积浓度为66～75％；当提取汉防己乙素时，所述乙醇溶液的体积浓度为55～65％。
6.根据权利要求4或5所述的提取方法，其特征在于，步骤2)所述酶制剂为重量比为1:2～3的果胶酶和纤维素酶；所述第一滤渣、水和酶制剂的重量比为10:20～30：0.02～0.05；所述提取处理采用超声振荡提取，所述超声振荡的时间为1.5～3h，温度为40～45℃。
7.根据权利要求6所述的提取方法，其特征在于，步骤2)所述提取处理前在第一滤渣、水和酶制剂的混合液中加入醋酸调节pH值，将混合液的pH值调节为3.5～4.2。
8.根据权利要求7所述的提取方法，其特征在于，步骤4)所述浸膏和无水乙醇的质量比为1:5～8，所述层析纯化采用体积比为5～10:1的二氯甲烷和甲醇的混合液进行梯度洗脱。
9.根据权利要求8所述的提取方法，其特征在于，所述梯度洗脱中，二氯甲烷和甲醇的体积比顺次为9:1、7:1和5:1，所述洗脱的速率为2～3mL/min。
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