CN111789785A - 一种抑制酪氨酸酶活性的植物提取物、制备方法及其在化妆品的应用 - Google Patents
一种抑制酪氨酸酶活性的植物提取物、制备方法及其在化妆品的应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种抑制酪氨酸酶活性的植物提取物，由榧根皮通过乙醇水溶液常温提取，然后通过大孔树脂吸附，采用不同浓度乙醇水溶液洗脱，收集80‑95%的乙醇水溶液洗脱物，干燥后得到。本发明通过常温提取及常温减压干燥，避免提取过程温度过高对榧根皮中有效活性成分的破坏，同时对于提取溶剂浓度的筛选，对于大孔树脂、洗脱溶剂的筛选，所得到的榧根皮提取物具有优异的抑制酪氨酸酶活性的效果，半数抑制率(IC50)达到0.63‑0.85mg/ml，可以作为美白活性成分应用于美白化妆品的制备。
Description
技术领域
本发明涉及日用化妆品领域，具体是涉及一种抑制酪氨酸酶活性的植物提取物、制备方法及其在化妆品的应用。
背景技术
近年来，随着生活水平和审美标准的提高，人们开始对美容和皮肤护理产生越来越高的追求，渴望白皙及洁润的肌肤，美白功效化妆品已成为护肤类化妆品的主流品种之一。因此，各国化妆品企业和研究人员越来越重视美白化妆品以及皮肤美白制剂的研究与开发。
近几年的研究证明，色素沉着是由紫外线激活表皮中的黑色素细胞内的黑色素生成酶产生色素所引起的。在黑色素生成过程中，酪氨酸酶将酪氨酸转化成多巴、多巴醌，经非酶氧化而聚合生成大分子的黑色素。因此，美白剂的作用是通过抑制酪氨酸酶活性或者阻断酪氨酸生成黑色素的氧化途径，从而减少黑色素生成达到美白皮肤的效果。目前市面上销售的美白化妆品所添加的功效原料主要包括有熊果苷、曲酸、抗坏血酸、细胞生长因子等原料中的一种或几种，含有上述原料的美白化妆品在具有美白效果的同时也对皮肤造成了一定的伤害，并且使得产品容易产生变色变味不稳定的现象。如熊果苷具有高度的光敏感性，在产品中大量添加时易变色不稳定；曲酸在添加量较大时容易导致接触性皮炎；抗坏血酸不利于皮肤吸收，且遇热、光时极易氧化变色而失去美白效果；细胞生长因子的活性保质期较短，不易长期保存。
皮肤美白剂应该符合两个标准：一是对酪氨酸酶活性有较高的抑制率，能显著的减少黑色素的生成；二是有较高的安全性，以人体皮肤无毒无刺激。随着人们对于不同功效化妆品的需求以及植物提取技术的不断提高，越来越多的植物提取物作为化妆品的有效活性成分应用于特定功效化妆品中。榧根皮为红豆杉科植物榧树Torreya grandis Fort. exLindl.的根皮，分布于江苏南部、浙江、福建北部、安徽南部及大别山区、江西北部、西至湖南西南部及贵州松桃等地的海拔1400m以下的山地。榧根皮具有祛风除湿之功效，因此作为常用中药用于风湿肿痛。但是，目前现有技术没有对于榧根皮进行提取并得到抑制酪氨酸酶活性的提取物的相关报道。
发明内容
针对现有技术存在的不足，本发明的目的是提供一种抑制酪氨酸酶活性的植物提取物及其在化妆品的应用。本发明具体是通过以下技术方案实现的：
一种抑制酪氨酸酶活性的植物提取物，由榧根皮通过乙醇水溶液常温提取得到。
优选地，所述榧根皮提取物通过体积浓度为70-95%的乙醇水溶液常温提取得到。
优选地，所述榧根皮提取物通过体积浓度为70-95%的乙醇水溶液常温提取，然后通过大孔树脂吸附，采用不同浓度乙醇水溶液洗脱，收集80-95%的乙醇水溶液洗脱物，干燥后得到。
优选地，所述大孔树脂为D101大孔树脂。
优选地，所述榧根皮提取物按以下方法提取：（1）取干燥的榧根皮粉碎为粗粉，按1kg：5-10L的料液比加入体积浓度为70-95%的乙醇水溶液，在室温下超声提取1-3h后过滤，滤液减压干燥回收溶剂，得到榧根皮粗提取物；（2）用榧根皮粗提取物5-10倍质量的水将其溶解，过D101大孔树脂，分别以水、体积分数为10-30%的乙醇水溶液、体积分数为45-70%的乙醇水溶液、体积分数为80-95%的乙醇水溶液按2-5倍的柱体积进行梯度洗脱，收集80-95%的乙醇水溶液洗脱物，减压干燥回收溶剂，得到榧根皮提取物。
优选地，所述减压干燥在真空度为0.02-0.09MPa、温度为30-40℃的条件下进行。
本发明还提供了上述榧根皮提取物在制备美白功效化妆品中的应用。
相比现有技术，本发明的有益效果在于：本发明的榧根皮提取物通过乙醇水溶液常温提取，然后通过大孔树脂吸附，采用不同浓度乙醇水溶液洗脱，收集80-95%的乙醇水溶液洗脱物，干燥后得到。本发明通过常温提取及常温减压干燥，避免提取过程温度过高对榧根皮中有效活性成分的破坏，同时对于提取溶剂浓度的筛选，对于大孔树脂、洗脱溶剂的筛选，所得到的榧根皮提取物具有优异的抑制酪氨酸酶活性的效果，半数抑制率(IC50)达到0.63-0.85mg/ml，可以作为美白活性成分应用于美白化妆品的制备。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的具体说明。
实施例1：
取干燥的榧根皮粉碎为粗粉，按1kg：8L的料液比加入体积浓度为80%的乙醇水溶液，在室温下、500w超声提取3h后过滤，滤液在真空度为0.05MPa、温度为40℃的条件下减压干燥回收溶剂，得到榧根皮粗提取物；（2）用榧根皮粗提取物5倍质量的水将其溶解，过D101大孔树脂，分别以水、体积分数为30%的乙醇水溶液、体积分数为70%的乙醇水溶液、体积分数为95%的乙醇水溶液按3倍的柱体积进行梯度洗脱，收集95%的乙醇水溶液洗脱物，在真空度为0.05MPa、温度为40℃的条件下减压干燥回收溶剂，得到榧根皮提取物。
实施例2：
取干燥的榧根皮粉碎为粗粉，按1kg：5L的料液比加入体积浓度为95%的乙醇水溶液，在室温下、500w超声提取3h后过滤，滤液在真空度为0.02MPa、温度为30℃的条件下减压干燥回收溶剂，得到榧根皮粗提取物；（2）用榧根皮粗提取物10倍质量的水将其溶解，过D101大孔树脂，分别以水、体积分数为20%的乙醇水溶液、体积分数为60%的乙醇水溶液、体积分数为85%的乙醇水溶液按2倍的柱体积进行梯度洗脱，收集85%的乙醇水溶液洗脱物，在真空度为0.02MPa、温度为30℃的条件下减压干燥回收溶剂，得到榧根皮提取物。
实施例3：
取干燥的榧根皮粉碎为粗粉，按1kg：10L的料液比加入体积浓度为70%的乙醇水溶液，在室温下、500w超声提取3h后过滤，滤液在真空度为0.09MPa、温度为40℃的条件下减压干燥回收溶剂，得到榧根皮粗提取物；（2）用榧根皮粗提取物8倍质量的水将其溶解，过D101大孔树脂，分别以水、体积分数为10%的乙醇水溶液、体积分数为45%的乙醇水溶液、体积分数为80%的乙醇水溶液按5倍的柱体积进行梯度洗脱，收集80%的乙醇水溶液洗脱物，在真空度为0.09MPa、温度为40℃的条件下减压干燥回收溶剂，得到榧根皮提取物。
对比例1：
取干燥的榧根皮粉碎为粗粉，按1kg：8L的料液比加入体积浓度为30%的乙醇水溶液，在室温下、500w超声提取3h后过滤，滤液在真空度为0.05MPa、温度为40℃的条件下减压干燥回收溶剂，得到榧根皮粗提取物；（2）用榧根皮粗提取物5倍质量的水将其溶解，过D101大孔树脂，分别以水、体积分数为30%的乙醇水溶液、体积分数为70%的乙醇水溶液、体积分数为95%的乙醇水溶液按3倍的柱体积进行梯度洗脱，收集95%的乙醇水溶液洗脱物，在真空度为0.05MPa、温度为40℃的条件下减压干燥回收溶剂，得到榧根皮提取物。
对比例1与实施例1的不同之处在于，对榧根皮进行醇提的溶剂为体积浓度为30%的乙醇水溶液。
对比例2：
取干燥的榧根皮粉碎为粗粉，按1kg：8L的料液比加入水，在室温下、500w超声提取3h后过滤，滤液在真空度为0.05MPa、温度为40℃的条件下减压干燥回收溶剂，得到榧根皮粗提取物；（2）用榧根皮粗提取物5倍质量的水将其溶解，过D101大孔树脂，分别以水、体积分数为30%的乙醇水溶液、体积分数为70%的乙醇水溶液、体积分数为95%的乙醇水溶液按3倍的柱体积进行梯度洗脱，收集95%的乙醇水溶液洗脱物，在真空度为0.05MPa、温度为40℃的条件下减压干燥回收溶剂，得到榧根皮提取物。
对比例2与实施例1的不同之处在于，对榧根皮进行醇提的溶剂为水。
对比例3：
取干燥的榧根皮粉碎为粗粉，按1kg：8L的料液比加入体积浓度为80%的乙醇水溶液，在60℃下、500w超声提取3h后过滤，滤液在真空度为0.05MPa、温度为40℃的条件下减压干燥回收溶剂，得到榧根皮粗提取物；（2）用榧根皮粗提取物5倍质量的水将其溶解，过D101大孔树脂，分别以水、体积分数为30%的乙醇水溶液、体积分数为70%的乙醇水溶液、体积分数为95%的乙醇水溶液按3倍的柱体积进行梯度洗脱，收集95%的乙醇水溶液洗脱物，在真空度为0.05MPa、温度为40℃的条件下减压干燥回收溶剂，得到榧根皮提取物。
对比例3与实施例1的不同之处在于，对榧根皮进行醇提的温度为60℃。
对比例4：
取干燥的榧根皮粉碎为粗粉，按1kg：8L的料液比加入体积浓度为80%的乙醇水溶液，在室温下、500w超声提取3h后过滤，滤液在真空度为0.05MPa、温度为60℃的条件下减压干燥回收溶剂，得到榧根皮粗提取物；（2）用榧根皮粗提取物5倍质量的水将其溶解，过D101大孔树脂，分别以水、体积分数为30%的乙醇水溶液、体积分数为70%的乙醇水溶液、体积分数为95%的乙醇水溶液按3倍的柱体积进行梯度洗脱，收集95%的乙醇水溶液洗脱物，在真空度为0.05MPa、温度为60℃的条件下减压干燥回收溶剂，得到榧根皮提取物。
对比例4与实施例1的不同之处在于，减压干燥在真空度为0.05MPa、温度为60℃的条件下进行。
对比例5：
取干燥的榧根皮粉碎为粗粉，按1kg：8L的料液比加入体积浓度为80%的乙醇水溶液，在室温下、500w超声提取3h后过滤，滤液在真空度为0.05MPa、温度为40℃的条件下减压干燥回收溶剂，得到榧根皮粗提取物；（2）用榧根皮粗提取物5倍质量的水将其溶解，过AB-8型大孔树脂，分别以水、体积分数为30%的乙醇水溶液、体积分数为70%的乙醇水溶液、体积分数为95%的乙醇水溶液按3倍的柱体积进行梯度洗脱，收集95%的乙醇水溶液洗脱物，在真空度为0.05MPa、温度为40℃的条件下减压干燥回收溶剂，得到榧根皮提取物。
对比例5与实施例1的不同之处在于，大孔树脂为AB-8型。
对比例6：
取干燥的榧根皮粉碎为粗粉，按1kg：8L的料液比加入体积浓度为80%的乙醇水溶液，在室温下、500w超声提取3h后过滤，滤液在真空度为0.05MPa、温度为40℃的条件下减压干燥回收溶剂，得到榧根皮粗提取物；（2）用榧根皮粗提取物5倍质量的水将其溶解，过DM130大孔树脂，分别以水、体积分数为30%的乙醇水溶液、体积分数为70%的乙醇水溶液、体积分数为95%的乙醇水溶液按3倍的柱体积进行梯度洗脱，收集95%的乙醇水溶液洗脱物，在真空度为0.05MPa、温度为40℃的条件下减压干燥回收溶剂，得到榧根皮提取物。
对比例6与实施例1的不同之处在于，大孔树脂为DM130型。
对比例7：
取干燥的榧根皮粉碎为粗粉，按1kg：8L的料液比加入体积浓度为80%的乙醇水溶液，在室温下、500w超声提取3h后过滤，滤液在真空度为0.05MPa、温度为40℃的条件下减压干燥回收溶剂，得到榧根皮粗提取物；（2）用榧根皮粗提取物5倍质量的水将其溶解，过D101大孔树脂，分别以水、体积分数为30%的乙醇水溶液、体积分数为70%的乙醇水溶液、体积分数为95%的乙醇水溶液按3倍的柱体积进行梯度洗脱，收集30%的乙醇水溶液洗脱物，在真空度为0.05MPa、温度为40℃的条件下减压干燥回收溶剂，得到榧根皮提取物。
对比例7与实施例1的不同之处在于，收集30%的乙醇水溶液洗脱物、减压干燥回收溶剂得到榧根皮提取物。
对比例8：
取干燥的榧根皮粉碎为粗粉，按1kg：8L的料液比加入体积浓度为80%的乙醇水溶液，在室温下、500w超声提取3h后过滤，滤液在真空度为0.05MPa、温度为40℃的条件下减压干燥回收溶剂，得到榧根皮粗提取物；（2）用榧根皮粗提取物5倍质量的水将其溶解，过D101大孔树脂，分别以水、体积分数为30%的乙醇水溶液、体积分数为70%的乙醇水溶液、体积分数为95%的乙醇水溶液按3倍的柱体积进行梯度洗脱，收集70%的乙醇水溶液洗脱物，在真空度为0.05MPa、温度为40℃的条件下减压干燥回收溶剂，得到榧根皮提取物。
对比例8与实施例1的不同之处在于，收集70%的乙醇水溶液洗脱物、减压干燥回收溶剂得到榧根皮提取物。
本发明榧根皮提取物抑制酪氨酸酶活性试验：
样品溶液的配制：取实施例1-3、对比例1-8的榧根皮提取物，分别加pH=6.8的磷酸缓冲溶液制成10mg/ml、5mg/ml、2.5mg/ml、1.25mg/ml、0.625mg/ml、0.3125mg/ml的溶液；
试验方法：在样品管和样品对照管中各加入1ml样品溶液，阳性和阴性对照管以磷酸缓冲液（pH=6.8）代替。在样品管和阳性对照管中加入0.5ml酪氨酸酶溶液（酶活单位125u/ml），样品对照和阴性对照管以0.5ml磷酸缓冲液（pH=6.8）代替，振摇所有试管，使样品和酪氨酸酶充分混匀，37℃水槽孵育10分钟，加入2ml的0.03wt％酪氨酸溶液，反应10分钟，即刻在475nm处测定吸光度。每种浓度的样品溶液重复测试三次后取平均值。
抑制率I(％)＝[1-(T-T0)/(C-C0)]×100％
式中，T：同时有酪氨酸酶溶液和样品溶液；T0：有样品溶液但没有酪氨酸酶溶液；C：有酪氨酸酶溶液但没有样品溶液；C0：既无酪氨酸酶溶液也无样品溶液。
计算半数抑制率(IC50)。IC50值定义为抑制率为50％时所需酪氨酸酶抑制剂的浓度。计算方法为以样品的浓度对酪氨酸酶的抑制率作图并进行拟合，读取计算IC50值。试验结果如表1所示：
表1：各样品抑制酪氨酸活性检测结果
| 样品 | IC50（mg /ml） |
| 实施例1 | 0.63 |
| 实施例2 | 0.78 |
| 实施例3 | 0.85 |
| 对比例1 | 3.85 |
| 对比例2 | 5.68 |
| 对比例3 | 6.45 |
| 对比例4 | 7.21 |
| 对比例5 | 2.16 |
| 对比例6 | 3.25 |
| 对比例7 | 1.98 |
| 对比例8 | 1.37 |
通过表1的试验结果可知，本发明实施例1-3的榧根皮提取物在抑制酪氨酸酶活性方面效果明显，IC50值为0.63-0.85 mg/ml，可以作为美白活性成分应用于美白化妆品的制备，其中最佳技术方案为实施例1，IC50值为0.63 mg/ml。而通过不同的提取方法得到的榧根皮提取物，如对比例1对榧根皮进行醇提的溶剂为体积浓度为30%的乙醇水溶液，对比例2对榧根皮进行醇提的溶剂为水，对比例3对榧根皮进行醇提的温度为60℃，对比例4减压干燥在真空度为0.05MPa、温度为60℃的条件下进行，对比例5的大孔树脂为AB-8型，对比例6的大孔树脂为DM130型，对比例7收集30%的乙醇水溶液洗脱物、减压干燥回收溶剂得到榧根皮提取物，对比例8收集70%的乙醇水溶液洗脱物、减压干燥回收溶剂得到榧根皮提取物，上述对比例1-8所得到的榧根皮提取物在抑制酪氨酸酶活性方面均呈现不同程度的降低。
Claims (7)
1.一种抑制酪氨酸酶活性的植物提取物，其特征在于，由榧根皮通过乙醇水溶液常温提取得到。
2.根据权利要求1所述的一种抑制酪氨酸酶活性的植物提取物，其特征在于，所述乙醇水溶液的体积浓度为70-95%。
3.根据权利要求1或2所述的一种抑制酪氨酸酶活性的植物提取物，其特征在于，所述榧根皮提取物通过乙醇水溶液常温提取，然后通过大孔树脂吸附，采用不同浓度乙醇水溶液洗脱，收集80-95%的乙醇水溶液洗脱物，干燥后得到。
4.根据权利要求3所述的一种抑制酪氨酸酶活性的植物提取物，其特征在于，所述大孔树脂为D101大孔树脂。
5.根据权利要求1-4任一项所述的一种抑制酪氨酸酶活性的植物提取物的制备方法，其特征在于，制备方法包括以下步骤：（1）取干燥的榧根皮粉碎为粗粉，按1kg：5-10L的料液比加入体积浓度为70-95%的乙醇水溶液，在室温下超声提取1-3h后过滤，滤液减压干燥回收溶剂，得到榧根皮粗提取物；（2）用榧根皮粗提取物5-10倍质量的水将其溶解，过D101大孔树脂，分别以水、体积分数为10-30%的乙醇水溶液、体积分数为45-70%的乙醇水溶液、体积分数为80-95%的乙醇水溶液按2-5倍的柱体积进行梯度洗脱，收集80-95%的乙醇水溶液洗脱物，减压干燥回收溶剂，得到榧根皮提取物。
6.根据权利要求5所述的一种抑制酪氨酸酶活性的植物提取物的制备方法，其特征在于，所述减压干燥在真空度为0.02-0.09MPa、温度为30-40℃的条件下进行。
7.权利要求1-4任一项所述的一种抑制酪氨酸酶活性的植物提取物的在制备美白功效化妆品中的应用。
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|---|---|---|---|---|
| CN115812889A (zh) * | 2022-11-14 | 2023-03-21 | 沈阳农业大学 | 刺五加提取物在制备酪氨酸酶抑制剂产品中的应用 |
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- 2020-08-11 CN CN202010801104.8A patent/CN111789785A/zh not_active Withdrawn
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| CN115812889A (zh) * | 2022-11-14 | 2023-03-21 | 沈阳农业大学 | 刺五加提取物在制备酪氨酸酶抑制剂产品中的应用 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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| WW01 | Invention patent application withdrawn after publication | ||
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Application publication date: 20201020 |