CN112237636B - 一种合成两性离子化的双亲性树状大分子并用其包载抗癌药物的方法 - Google Patents

一种合成两性离子化的双亲性树状大分子并用其包载抗癌药物的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN112237636B
CN112237636B CN202010976935.9A CN202010976935A CN112237636B CN 112237636 B CN112237636 B CN 112237636B CN 202010976935 A CN202010976935 A CN 202010976935A CN 112237636 B CN112237636 B CN 112237636B
Authority
CN
China
Prior art keywords
methanol
solution
dialysis
drug
mixing
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202010976935.9A
Other languages
English (en)
Other versions
CN112237636A (zh
Inventor
王龙刚
郭全领
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Yanshan University
Original Assignee
Yanshan University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Yanshan University filed Critical Yanshan University
Priority to CN202010976935.9A priority Critical patent/CN112237636B/zh
Publication of CN112237636A publication Critical patent/CN112237636A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN112237636B publication Critical patent/CN112237636B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
    • A61K47/6905—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a colloid or an emulsion
    • A61K47/6907—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a colloid or an emulsion the form being a microemulsion, nanoemulsion or micelle
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/337—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having four-membered rings, e.g. taxol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7028—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages
    • A61K31/7034—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin
    • A61K31/704—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin attached to a condensed carbocyclic ring system, e.g. sennosides, thiocolchicosides, escin, daunorubicin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G73/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming a linkage containing nitrogen with or without oxygen or carbon in the main chain of the macromolecule, not provided for in groups C08G12/00 - C08G71/00
    • C08G73/02—Polyamines
    • C08G73/0206—Polyalkylene(poly)amines
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G83/00—Macromolecular compounds not provided for in groups C08G2/00 - C08G81/00
    • C08G83/002—Dendritic macromolecules
    • C08G83/003—Dendrimers
    • C08G83/004—After treatment of dendrimers

Abstract

本发明提供一种合成两性离子化的双亲性树状大分子并用其包载抗癌药物的方法，其具体包括以下步骤：S1、将低代树状大分子进行马来酸酐修饰得到DM；S2、利用巯基化紫杉醇修饰改性低代树状大分子DM合成DMP；S3、利用巯基乙胺修饰DMP合成DMPC；S4、以DMPC包载疏水性小分子抗癌药物制备载药胶束。本发明制备了一个全新的以两性离子化树状大分子为亲水端，以改性紫杉醇为疏水端的双亲性树状大分子；该双亲性树状大分子自组装为纳米胶束，此纳米胶束通过包载多种疏水性小分子抗癌药物制备新型载药胶束，该载药胶束具有高载药量，粒径分布均匀，良好的稳定性，高生物相容性和优异的抗肿瘤性能的优点。

Description

一种合成两性离子化的双亲性树状大分子并用其包载抗癌药 物的方法
技术领域
本发明涉及生物医药纳米材料技术领域，特别涉及一种合成两性离子化的双亲性树状大分子并用其包载抗癌药物的方法。
背景技术
近年来，癌症的病死率和发病率不断升高，严重威胁人们的生命健康。目前，化疗仍是治疗癌症的最常用的方法。但是，大部分小分子药物，如紫杉醇、阿霉素和喜树碱等都具有水溶性低、毒副作用大和选择性低等缺点。为了克服这些缺点，开发了多种纳米药物递送系统用于提高小分子的抗肿瘤效果，降低药物对机体的毒副作用。
近年来，树状大分子是小分子药物的良好载体。树状大分子呈现树状结构，在水溶液中具有良好的单分散性，其独特的内部空腔用于包载小分子药物；其表面具有大量可修饰的官能团。但是，大部分树状大分子表面含有大量的正电荷基团，这使得与蛋白质具有明显的相互作用和显著的细胞毒性，进而限制了树状大分子在纳米药物递送方面的应用。为了克服这些问题，研究人员通过聚乙二醇化、乙酰化、糖基化和羟基化等反应降低树状大分子的细胞毒性。
目前，用两性离子材料修饰树状大分子是降低树状大分子细胞毒性的新方法。两性离子材料能显著提高树状大分子的水溶性，能在水中形成致密水化膜，提高树状大分子抗蛋白质吸附能力，降低树状大分子细胞毒性。目前，两性离子材料修饰树状大分子表面的正电荷基团，并利用树状大分子的空腔载药的载药方式是主要的载药方式，然而，这种载药方式的载药效率非常低，小分子抗癌药物也不容易从树状大分子内部空腔释放，这严重影响了树状大分子作为药物载体的性能。如何利用两性离子化树状大分子同时实现高载药量和在肿瘤部位处小分子抗癌药物的可控释放是亟需解决的问题。
发明内容
为了解决上述提到的现有技术的不足，本发明提供一种合成两性离子化的双亲性树状大分子并用其包载抗癌药物的方法。
具体地，本发明提供一种合成两性离子化的双亲性树状大分子并用其包载抗癌药物的方法，其具体包括以下步骤：
S1、将低代树状大分子进行马来酸酐化，其包括以下子步骤：
S11、在加有磁子的烧瓶中，将低代树状大分子的伯氨基和马来酸酐按摩尔比为1：1.2-10的比例加入，并用二甲基亚砜对混合物进行溶解，室温下利用磁子搅拌反应5-48h；
S12、将上述溶液装入截留分子量为400-1000的透析袋中，首先在硼酸-硼砂缓冲溶液中透析2次，每次硼酸-硼砂缓冲溶液用量0.5L，每次4-8h，之后在水中透析2次，每次水用量为0.5L，每次透析4-8h，透析完成后冷冻干燥得到马来酸酐修饰的改性低代树状大分子DM；
S2、利用巯基化紫杉醇(PTX-SH)修饰改性低代树状大分子DM合成DMP，其包括以下子步骤：
S21、将甲醇和DM按照1：0.00126-0.0126的质量比混合，配制浓度为1-10mg/mL的DM甲醇溶液；
S22、将甲醇和PTX-SH按照1：0.0063-0.0189的质量比混合，配制浓度为0.53×10-2-1.59×10-2mmol/mL的PTX-SH甲醇溶液；
S23、在加有磁子的烧瓶中，将步骤S21得到的DM甲醇溶液和步骤S22得到的PTX-SH甲醇溶液混合加入，其中两种溶液的溶质DM和PTX-SH的摩尔比为1：1-10；
S24、通入氮气并在室温下反应1-72h后，将混合溶液装入透析袋中对甲醇进行透析，然后旋转蒸发得到固体DMP；
S3、利用巯基乙胺修饰DMP合成DMPC，其包括以下子步骤：
S31、将甲醇和步骤S2得到的DMP按照1：0.00126-0.0126的质量比进行混合，配制1-10mg/mL的DMP甲醇溶液；
S32、将甲醇和巯基乙胺按照1：0.0063-0.025的质量比混合，配制浓度为6.48×10-2-2.6×10-1mmol/mL的巯基乙胺甲醇溶液；
S33、在装有磁子的圆底烧瓶中，将步骤S31得到的DMP甲醇溶液和步骤S32得到的巯基乙胺甲醇溶液混合加入，其中两种溶液的溶质DMP和巯基乙胺的摩尔比为1：3-100；
S34、通入氮气并在室温下反应6-72h后，将混合溶液装入透析袋中对水进行透析，然后旋转蒸发得到固体DMPC；
S4、以DMPC包载疏水性小分子抗癌药物制备载药胶束，其包括以下子步骤：
S41、以甲醇与小分子疏水性药物1：0.000126～0.01的质量比，配制成0.1～8mg/mL的小分子疏水性药物甲醇溶液；
S42、将甲醇和步骤S3得到的DMPC按照1：0.0025～0.01的质量比进行混合，配制2-8mg/mL的DMPC甲醇溶液；
S43、在加有磁子的烧瓶中，将步骤S41得到的小分子疏水性药物甲醇溶液和步骤S42得到的DMPC甲醇溶液混合加入，其中两种溶液的溶质小分子疏水性药物和DMPC的质量比为1：5-15；
S44、避光室温搅拌2-6h后，将混合溶液缓慢滴入水中，装入透析袋对水进行透析，得到载药胶束。
优选地，步骤S1中，树状大分子包括第一代聚丙烯亚胺树状大分子，第二代聚丙烯亚胺树状大分子，第三代聚丙烯亚胺树状大分子，第一代聚酰胺-胺树状大分子和第二代聚酰胺-胺树状大分子。
优选地，步骤S2中，透析袋截留分子量为300-3000，透析介质为甲醇，透析次数为2-6次，每次透析时间为2-8h。
优选地，步骤S3中，透析袋截留分子量为1000-10000，透析介质为水，透析次数2-6次，每次透析时间为2-8h。
优选地，步骤S41中，小分子疏水性药物包括阿霉素、紫杉醇、多西紫杉醇、喜树碱或者光敏剂二氢卟吩e6的至少一种。
优选地，步骤S41中，如果小分子疏水性药物为阿霉素，则以甲醇与小分子疏水性药物1：0.000126～0.01的质量比配制盐酸阿霉素甲醇溶液后，按盐酸阿霉素与三乙胺1：3-200的摩尔比，加入三乙胺，然后避光超声，得到阿霉素甲醇溶液。
优选地，步骤S44中，按混合溶液中的甲醇和水以1：0.5～15的质量比，将混合溶液逐滴加入水中，滴加速度为1～5mL/min。
优选地，步骤S44中，透析袋截留分子量300～10000，对水透析时间2～8，透析次数2～6。
本发明的效果如下：
1、本发明制备了一个全新的以两性离子化树状大分子为亲水端，以疏水性改性紫杉醇为疏水端的双亲性树状大分子，并利用此分子通过自组装包载疏水性小分子抗癌药物制备新型纳米载药胶束；
2、本发明制备的载药胶束具有高载药量，粒径分布均匀，良好的稳定性；
3、本发明制备的纳米载药胶束具有优异的抗蛋白质非特异性吸附性能，较长血液循环时间和良好的体内生物相容性；
4、本发明制备的纳米载药胶束能够在肿瘤部位实现小分子疏水药物的可控释放；
5、本发明制备的载药胶束在较低的剂量下具有优异的抑瘤效果。
附图说明
图1为本发明实施案例1获得的临界胶束浓度测定图；
图2为本发明实施案例1获得的PPIMPC-DOX纳米胶束和阿霉素(DOX)的全波长扫描图；
图3为本发明实施案例1获得的空白胶束的透射图；
图4为本发明实施案例1获得的空白胶束粒径分布直方图；
图5为本发明实施案例1获得的PPIMPC-DOX胶束在不同pH溶液的电位图；
图6为本发明实施案例1获得的空白胶束与蛋白质相互作用的粒径分布图；
图7为本发明实施案例1获得的PPIMPC-DOX胶束与蛋白质相互作用的粒径分布图；
图8为本发明实施案例1获得的PPIMPC-DOX胶束在小白鼠体内抗肿瘤过程中小白鼠的体重图；
图9为本发明实施案例1获得的PPIMPC-DOX胶束在小白鼠体内抗肿瘤过程中的肿瘤体积图；
图10为本发明实施案例1获得的PPIMPC-DOX胶束在小白鼠体内抗肿瘤14天后的肿瘤实物图；
图11为本发明实施案例1获得的PPIMPC-DOX胶束在小白鼠体内抗肿瘤14天后的小白鼠血液中谷丙转氨酶含量图；
图12为本发明实施案例1获得的PPIMPC-DOX胶束在小白鼠体内抗肿瘤14天后的小白鼠血液中谷草转氨酶含量图；
图13为本发明的两性离子化的双亲性树状大分子的制备示意图。
具体实施方式
以下，参照附图对本发明的实施方式进行说明。
具体地，本发明提供一种合成两性离子化的双亲性树状大分子并用其包载抗癌药物的方法，其具体包括以下步骤：
S1、将低代树状大分子进行马来酸酐化，其包括以下子步骤：
S11、在加有磁子的烧瓶中，将低代树状大分子的伯氨基和马来酸酐按摩尔比为1：1.2-10的比例加入，并用二甲基亚砜对混合物进行溶解，室温下利用磁子搅拌反应5-48h；
S12、将上述溶液装入截留分子量为400-1000的透析袋中，首先在硼酸-硼砂缓冲溶液中透析2次，每次硼酸-硼砂缓冲溶液用量0.5L，每次4-8h，之后在水中透析2次，每次水用量为0.5L，每次透析4-8h，透析完成后冷冻干燥得到马来酸酐修饰的改性低代树状大分子DM；
S2、利用巯基化紫杉醇(PTX-SH)修饰改性低代树状大分子DM合成DMP，其包括以下子步骤：
S21、将甲醇和DM按照1：0.00126-0.0126的质量比混合，配制浓度为1-10mg/mL的DM甲醇溶液；
S22、将甲醇和PTX-SH按照1：0.0063-0.0189的质量比混合，配制浓度为0.53×10-2-1.59×10-2mmol/mL的PTX-SH甲醇溶液；
S23、在加有磁子的烧瓶中，将步骤S21得到的DM甲醇溶液和步骤S22得到的PTX-SH甲醇溶液混合加入，其中两种溶液的溶质DM和PTX-SH的摩尔比为1：1-10；
S24、通入氮气并在室温下反应1-72h后，将混合溶液装入透析袋中对甲醇进行透析，然后旋转蒸发得到固体DMP；
S3、利用巯基乙胺修饰DMP合成DMPC，其包括以下子步骤：
S31、将甲醇和步骤S2得到的DMP按照1：0.00126-0.0126的质量比进行混合，配制1-10mg/mL的DMP甲醇溶液；
S32、将甲醇和巯基乙胺按照1：0.0063-0.025的质量比混合，配制浓度为6.48×10-2-2.6×10-1mmol/mL的巯基乙胺甲醇溶液；
S33、在装有磁子的圆底烧瓶中，将步骤S31得到的DMP甲醇溶液和步骤S32得到的巯基乙胺甲醇溶液混合加入，其中两种溶液的溶质DMP和巯基乙胺的摩尔比为1：3-100；
S34、通入氮气并在室温下反应6-72h后，将混合溶液装入透析袋中对水进行透析，然后旋转蒸发得到固体DMPC；
S4、以DMPC包载疏水性小分子抗癌药物制备载药胶束，其包括以下子步骤：
S41、以甲醇与小分子疏水性药物1：0.000126～0.01的质量比，配制成0.1～8mg/mL的小分子疏水性药物甲醇溶液；
S42、将甲醇和步骤S3得到的DMPC按照1：0.0025～0.01的质量比进行混合，配制2-8mg/mL的DMPC甲醇溶液；
S43、在加有磁子的烧瓶中，将步骤S41得到的小分子疏水性药物甲醇溶液和步骤S42得到的DMPC甲醇溶液混合加入，其中两种溶液的溶质小分子疏水性药物和DMPC的质量比为1：5-15；
S44、避光室温搅拌2-6h后，将混合溶液缓慢滴入水中，装入透析袋对水进行透析，得到载药胶束。
具体实施例1
S1、合成紫杉醇二聚体(PTX-S-S-PTX)：
在25mL圆底烧瓶中，加入3，3'-二硫代二丙酸(59mg,0.28mmol)和紫杉醇(573mg,0.67mmol)并溶解在二氯甲烷(10mL)中。在室温下搅拌1h，加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(138mg，0.67mmol)和4-二甲氨基吡啶(14mg，0.11mmol)，将混合物回流2天，然后浓缩，进行柱层析。层析液为乙酸乙酯：正己烷＝2：1，收集Rf＝0.36的物质。
S2、合成巯基化紫杉醇(PTX-SH)：
在5mL圆底烧瓶中，加入二硫苏糖醇(13mg，0.08mmol)和合成物PTX-S-S-PTX(75mg，0.04mmol)并溶解在二氯甲烷(1mL)中。在室温搅拌1h后，将三乙胺(16mg，0.16mmol)加入到反应混合物中并在氮气下搅拌12h。将反应混合物用饱和碳酸氢钠溶液(2mL)洗涤3次，有机相用无水MgSO4干燥，过滤，浓缩，用石油醚沉淀得到PTX-SH。
S3、第二代聚丙烯亚胺树状大分子(PPI)马来酸酐化：
在装有磁子的圆底烧瓶中，按PPI的伯氨基:马来酸酐为1：2.5的摩尔比溶于二甲基亚砜中，二者共混并在室温条件下反应24h。然后将混合溶液装入截留分子量为500的透析袋中，在硼酸-硼砂缓冲溶液中透析2次，每次硼酸-硼砂缓冲溶液用量0.5L，每次6h，之后对水透析2次，每次水用量0.5L，每次6h；然后冷冻干燥得到马来酸酐修饰的第二代聚丙烯亚胺树状大分子(PPIM)固体。
S4、PTX-SH修饰PPIM合成PPIMP：
取4mg PPIM溶于1mL甲醇，配制浓度为4mg/mL PPIM甲醇溶液；取10mg PTX-SH溶于1mL甲醇，配制浓度为1×10-2mmol/mL PTX-SH甲醇溶液；在圆底烧瓶中，将PPIM甲醇溶液和PTX-SH甲醇溶液混合加入，两种溶液的溶质PPIM和PTX-SH的摩尔比为1：4；通氮气室温下反应12h后，将混合溶液装入截留分子量为1500的透析袋中，透析介质为甲醇，透析3次，每次甲醇用量0.5L，每次透析时间3h，然后旋转蒸发得到固体PPIMP。
S5、巯基乙胺修饰PPIMP合成PPIMPC：
取2.5mg PPIMP溶于1mL甲醇，配制浓度为2.5mg/mL PPIMP甲醇溶液；取10mg巯基乙胺溶于1mL甲醇，配制浓度为1.3×10-1mmol/mL巯基乙胺甲醇溶液；在圆底烧瓶中，将PPIMP甲醇溶液和巯基乙胺甲醇溶液混合加入，两种溶液的溶质PPIMP和巯基乙胺的摩尔比为1：80，通氮气室温反应6h后，将混合溶液装入截留分子量为2000的透析袋中，对水透析3次，每次6h，然后旋转蒸发得到固体PPIMPC。
S6、以PPIMPC包载阿霉素(DOX)制备载药胶束：
取400μg盐酸阿霉素溶于0.267mL甲醇，加入12μL三乙胺，避光超声1h，得到DOX甲醇溶液；取PPIMPC(4mg)溶于1mL甲醇，得到PPIMPC甲醇溶液；在加有磁子的烧瓶中，将DOX甲醇溶液和PPIMPC甲醇溶液混合加入，两种溶液的溶质阿霉素和PPIMPC的质量比为1：10，将上述两种溶液在圆底烧瓶中混合均匀，避光室温下反应3h，按甲醇：水为1：1.5的质量比将混合溶液缓慢滴入1.5mL水中，滴加速度为1.5mL/min，然后装入截留分子量500的透析袋对水透析，每次用水0.5L，每次透析3h，透析3次，得到PPIMPC-DOX载药胶束。
应用荧光分光光度计对PPIMPC临界胶束浓度值进行测定，如图1所示，曲线的拐点就是PPIMPC空白胶束水溶液中临界胶束浓度值，计算得空白胶束的临界胶束浓度为31.6μg/mL，临界胶束浓度值的大小与亲水端和疏水端的比例有关。此时，PPIMPC中，一端是两性离子化的第二代聚丙烯亚胺树状大分子，另一端是改性紫杉醇，二者的摩尔比是1:1。
应用紫外-可见分光光度计对阿霉素和PPIMPC-DOX载药胶束分别进行全波长扫描，如图2所示，阿霉素的最高吸收峰为480nm左右，载药胶束最高吸收峰在500nm左右，阿霉素的吸收峰值发生红移，说明PPIMPC成功包载阿霉素。
应用透射电子显微镜对空白胶束进行形貌表征，如图3、图4所示，空白胶束形貌不规则，平均粒径为21.43nm左右，粒径分布比较均匀。
应用激光粒度仪测定不同pH对PPIMPC-DOX载药胶束电位的影响，如图5所示，在pH＝7.4时，PPIMPC-DOX胶束表面电位为-5mV；在pH＝6.5时，PPIMPC-DOX胶束表面电位为+4.8mV；在pH＝5.5时，PPIMPC-DOX胶束表面电位为+20.5mV。这些结果表明，与正常组织处的pH相比，PPIMPC-DOX胶束在肿瘤组织的弱酸性环境下其表面电位发生由负电到正电的翻转。这是因为在pH7.4下，羧基解离会使载药胶束带有少量的负电荷；在弱酸性pH下，羧基的解离受到抑制，氨基质子化，PPIMPC-DOX载药胶束的表面电位变正。带有正电荷的胶束与带有负电荷的肿瘤细胞膜具有较强的静电吸引，增强了肿瘤细胞对PPIMPC-DOX载药胶束的摄取能力。
应用激光粒度仪测定PPIMPC和PPIMPC-DOX胶束在蛋白质溶液中的稳定性，如图6所示，0.5mg/mL的纤维蛋白原水动力学粒径约为24nm，1mg/mL的PPIMPC溶液的水动力学粒径约为30nm，0.5mg/mL纤维蛋白原+1mg/mL PPIMPC混合溶液的水动力学粒径约为28nm。0.5mg/mL纤维蛋白原+1mg/mL PPIMPC混合溶液的水动力学粒径在两者之间，说明PPIMPC与蛋白质之间不发生聚集现象。如图7所示，1mg/mL的PPIMPC-DOX溶液的水动力学粒径约为58nm,0.5mg/mL纤维蛋白原+1mg/mL PPIMPC-DOX混合溶液的水动力学粒径约为36nm。0.5mg/mL纤维蛋白原+1mg/mL PPIMPC-DOX混合溶液的水动力学粒径在两者之间，说明PPIMPC-DOX载药胶束在蛋白质溶液中具有较高的稳定性。综上所述，形成的胶束在纤维蛋白原溶液是稳定的，有利于这些胶束降低网状内皮系统对其的捕获量并减少它们在免疫组织中的积累量，这是由胶束表面两性离子化树状大分子亲水层具有高密度的亲水性的氨基和羧基形式的两性离子基团，能够在胶束表面形成致密的水化膜。
对载药胶束进行小鼠体内抑瘤表征：如图8所示，在给药14天后，生理盐水组小鼠平均体重为33mg，PPIMPC-DOX胶束组小鼠平均体重为32mg，游离阿霉素组小鼠平均体重为27mg，通过对比可发现PPIMPC-DOX胶束组比游离阿霉素组有更低的体内生物毒性；如图9、图10所示，空白组小白鼠肿瘤体积约为690mm3，游离阿霉素组小白鼠肿瘤体积约为350mm3，PPIMPC-DOX胶束组小白鼠肿瘤体积约为20mm3，PPIMPC-DOX胶束组的小白鼠肿瘤体积仅为游离阿霉素组小白鼠肿瘤体积的3％，这非常明显地表明PPIMPC-DOX胶束组具有更好的体内抑瘤效果，此数据要优于大多数文献报道的数据(尾静脉注射方式注射纳米药物)。这种优异的性能是由于本发明制备的载药胶束的特殊的结构，以敏感的pH响应性两性离子化的第二代聚丙烯亚胺树状大分子为高密度亲水保护层，以疏水性的小分子抗癌药物紫杉醇为疏水端提高了药物载药量，亲疏水的共价键结构促使紫杉醇稳定地位于载药胶束的疏水内核，两性离子亲水保护层有效地屏蔽蛋白质分子吸附的干扰，使载药胶束在体内环境下也具有良好的稳定性。计算得到PPIMPC-DOX胶束中阿霉素的载药量为6.7％，PPIMPC-DOX胶束中紫杉醇的载药量为26.2％，PPIMPC-DOX的总载药量为32.9％，表明胶束具有较高的载药量。PPIMPC药物载体的疏水内核能够包载多种疏水小分子药物，实现多种不同抑制机制的小分子抗癌药物对肿瘤的协同治疗。最后，此PPIMPC载体的两亲性分子具有确定的结构和组成，避免了高分子在此方面的缺点。如图11、图12所示，小白鼠血液中谷丙转氨酶和谷草转氨酶的含量均在正常范围内，说明PPIMPC-DOX胶束对肝脏无毒性。综上所述，载药胶束能够不仅比阿霉素有更高的生物相容性，而且具有更好的抑瘤效果。
具体实施例2
S1、合成紫杉醇二聚体(PTX-S-S-PTX)：
在25mL圆底烧瓶中，加入3，3'-二硫代二丙酸(59mg,0.28mmol)和紫杉醇(573mg,0.67mmol)并溶解在二氯甲烷(10mL)中。在室温下搅拌1h，加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(138mg，0.67mmol)和4-二甲氨基吡啶(14mg，0.11mmol)，将混合物回流2天，然后浓缩，进行柱层析。层析液为乙酸乙酯：正己烷＝2：1，收集Rf＝0.36的物质。
S2、合成巯基化紫杉醇(PTX-SH)：
在5mL圆底烧瓶中，加入二硫苏糖醇(13mg，0.08mmol)和合成物PTX-S-S-PTX(75mg，0.04mmol)并溶解在二氯甲烷(1mL)中。在室温搅拌1h后，将三乙胺(16mg，0.16mmol)加入到反应混合物中并在氮气下搅拌12h。将反应混合物用饱和碳酸氢钠溶液(2mL)洗涤3次，有机相用无水MgSO4干燥，过滤，浓缩，用石油醚沉淀得到PTX-SH。
S3、将第二代聚丙烯亚胺树状大分子(PPI)马来酸酐化：
在装有磁子的圆底烧瓶中，按PPI的伯氨基:马来酸酐为1：5的摩尔比溶于二甲基亚砜中，并在室温条件下反应5h。然后将混合溶液装入截留分子量为500的透析袋中先对硼酸-硼砂缓冲溶液透析2次，每次硼酸-硼砂缓冲溶液用量为0.5L，每次透析4h，然后对水透析2次，每次水用量为0.5L每次4h；然后冷冻干燥得到PPIM固体。
S4、利用PTX-SH修饰PPIM合成PPIMP：
取1mg PPIM溶于1mL甲醇，配制浓度为1mg/mL PPIM甲醇溶液；取5mg PTX-SH溶于1mL甲醇，配制浓度为0.53×10-2mmol/mL PTX-SH甲醇溶液；在装有磁子的圆底烧瓶中，将PPIM甲醇溶液和PTX-SH甲醇溶液混合加入，两种溶液的溶质PPIM和PTX-SH的摩尔比为1：1；通氮气室温下反应1h后，将混合溶液装入截留分子量为300的透析袋中，透析介质为甲醇，透析2次，每次甲醇用量0.5L，每次透析时间8h，然后旋转蒸发得到固体PPIMP。
S5、利用巯基乙胺修饰PPIMP合成PPIMPC：
取1mg PPIMP溶于1mL甲醇，配制浓度为1mg/mL PPIMP甲醇溶液；取5mg巯基乙胺溶于1mL甲醇，配制浓度为6.48×10-2mmol/mL巯基乙胺甲醇溶液；在装有磁子的圆底烧瓶中，将PPIMP甲醇溶液和巯基乙胺甲醇溶液混合加入，两种溶液的溶质PPIMP和巯基乙胺的摩尔比为1：3，通氮气室温反应6h后，将混合溶液装入截留分子量为1000的透析袋中，对水透析2次，每次8h，然后旋转蒸发得到固体PPIMPC。
S6、以PPIMPC包载阿霉素(DOX)制备载药胶束：
取400μg盐酸阿霉素溶于0.5mL甲醇，加入19.4μL三乙胺，避光超声1h，得到阿霉素甲醇溶液；取PPIMPC(2mg)溶于1mL甲醇得到PPIMPC甲醇溶液；在加有磁子的烧瓶中，将阿霉素甲醇溶液和PPIMPC甲醇溶液混合加入，两种溶液的溶质阿霉素和PPIMPC的质量比为1：5,将上述两种溶液在装有磁子的圆底烧瓶中混合均匀，避光室温下反应2h，按甲醇：水为1：0.5的质量比将混合溶液缓慢滴入0.59mL水中，滴加速度为1mL/min然后装入截留分子量1500的透析袋对水透析，每次用水0.5L，每次透析8h，透析2次，得到PPIMPC-DOX载药胶束。
具体实施例3
S1、合成紫杉醇二聚体(PTX-S-S-PTX)：
在25mL圆底烧瓶中，加入3，3'-二硫代二丙酸(59mg,0.28mmol)和紫杉醇(573mg,0.67mmol)并溶解在二氯甲烷(10mL)中。在室温下搅拌1h，加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(138mg，0.67mmol)和4-二甲氨基吡啶(14mg，0.11mmol)，将混合物回流2天，然后浓缩，进行柱层析。层析液为乙酸乙酯：正己烷＝2：1，收集Rf＝0.36的物质。
S2、合成巯基化紫杉醇(PTX-SH)：
在5mL圆底烧瓶中，加入二硫苏糖醇(13mg，0.08mmol)和合成物PTX-S-S-PTX(75mg，0.04mmol)并溶解在二氯甲烷(1mL)中。在室温搅拌1h后，将三乙胺(16mg，0.16mmol)加入到反应混合物中并在氮气下搅拌12h。将反应混合物用饱和碳酸氢钠溶液(2mL)洗涤3次，有机相用无水MgSO4干燥，过滤，浓缩，用石油醚沉淀得到PTX-SH。
S3、将第三代聚丙烯亚胺树状大分子(PPI3)马来酸酐化：
在装有磁子的圆底烧瓶中，按PPI3的伯氨基:马来酸酐为1：1.2的摩尔比溶于二甲基亚砜中，并在室温条件下反应48h。然后将混合溶液装入截留分子量为400透析袋中先对硼酸-硼砂缓冲溶液透析2次，每次硼酸-硼砂缓冲溶液用量为0.5L，每次透析4h，然后对水透析2次，每次水用量0.5L每次4h；然后冷冻干燥得到马来酸酐修饰的第三代聚丙烯亚胺树状大分子(PPI3M)固体。
S4、利用PTX-SH修饰PPI3M合成PPI3MP：
取10mg PPI3M溶于1mL甲醇，配制浓度为10mg/mL PPI3M甲醇溶液；取15mg PTX-SH溶于1mL甲醇，配制浓度为1.59×10-2mmol/mL PTX-SH甲醇溶液；在装有磁子的圆底烧瓶中，将PPI3M甲醇溶液和PTX-SH甲醇溶液混合加入，两种溶液的溶质PPI3M和PTX-SH的摩尔比为1：10；通氮气室温下反应72h后，将混合溶液装入截留分子量为1000的透析袋中，透析介质为甲醇，透析6次，每次甲醇用量0.5L，每次透析时间2h，然后旋转蒸发得到固体PPI3MP。
S5、利用巯基乙胺修饰PPI3MP合成PPI3MPC：
取10mg PPI3MP溶于1mL甲醇，配制浓度为10mg/mL PPI3MP甲醇溶液；取20mg巯基乙胺溶于1mL甲醇，配制浓度为2.6×10-1mmol/mL巯基乙胺甲醇溶液；在装有磁子的圆底烧瓶中，将PPI3MP甲醇溶液和巯基乙胺甲醇溶液混合加入，两种溶液的溶质PPI3MP和巯基乙胺的摩尔比为1：100，通氮气室温反应72h后，将混合溶液装入截留分子量为2000的透析袋中，对水透析6次，每次2h，然后旋转蒸发得到固体PPI3MPC。
S6、以PPI3MPC包载阿霉素(DOX)和光敏剂二氢卟吩e6(Ce6)制备载药胶束：
取2mg盐酸阿霉素溶于0.5mL甲醇，加入1.4μL三乙胺，避光超声1h，得到阿霉素甲醇溶液；取2mg光敏剂二氢卟吩e6于3mL甲醇中，得到光敏剂二氢卟吩e6甲醇溶液；取PPI3MPC(20mg)溶于2.5mL甲醇得到PPI3MPC甲醇溶液；在加有磁子的烧瓶中，将阿霉素甲醇溶液、光敏剂二氢卟吩e6甲醇溶液和PPI3MPC甲醇溶液混合加入，前两种溶液的溶质阿霉素与二氢卟吩e6的总质量和第三种溶液的溶质PPI3MPC的质量比为1：5，将上述三种溶液在装有磁子的圆底烧瓶中混合均匀，避光室温下反应6h，按甲醇：水为1：6的质量比将混合溶液缓慢滴入28.5mL水中，速度为2mL/min然后装入截留分子量500的透析袋对水透析，每次用水0.5L，每次透析2h，透析6次，得到PPI3MPC-DOX-Ce6载药胶束。
具体实施例4
S1、合成紫杉醇二聚体(PTX-S-S-PTX)：
在25mL圆底烧瓶中，加入3，3'-二硫代二丙酸(59mg,0.28mmol)和紫杉醇(573mg,0.67mmol)并溶解在二氯甲烷(10mL)中。在室温下搅拌1h，加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(138mg，0.67mmol)和4-二甲氨基吡啶(14mg，0.11mmol)，将混合物回流2天，然后浓缩，进行柱层析。层析液为乙酸乙酯：正己烷＝2：1，收集Rf＝0.36的物质。
S2、合成巯基化紫杉醇(PTX-SH)：
在5mL圆底烧瓶中，加入二硫苏糖醇(13mg，0.08mmol)和合成物PTX-S-S-PTX(75mg，0.04mmol)并溶解在二氯甲烷(1mL)中。在室温搅拌1h后，将三乙胺(16mg，0.16mmol)加入到反应混合物中并在氮气下搅拌12h。将反应混合物用饱和碳酸氢钠溶液(2mL)洗涤3次，有机相用无水MgSO4干燥，过滤，浓缩，用石油醚沉淀得到PTX-SH。
S3、将第一代聚丙烯亚胺树状大分子(PPI1)马来酸酐化：
在装有磁子的圆底烧瓶中，按PPI1的伯氨基:马来酸酐为1：3的摩尔比溶于二甲基亚砜中，并在室温条件下反应48h。然后将混合溶液装入截留分子量为1000的透析袋中先对硼酸-硼砂缓冲溶液透析2次，每次硼酸-硼砂缓冲溶液用量为0.5L，每次透析8h，然后对水透析2次，每次水用量0.5L每次8h；然后冷冻干燥得到PPI1M固体。
S4、利用PTX-SH修饰PPI1M合成PPI1MP：
取8mg PPI1M溶于1mL甲醇，配制浓度为8mg/mL PPI1M甲醇溶液；取15mg PTX-SH溶于1mL甲醇，配制浓度为1.59×10-2mmol/mL PTX-SH甲醇溶液；在装有磁子的圆底烧瓶中，将PPI1M甲醇溶液和PTX-SH甲醇溶液混合加入，两种溶液的溶质PPI1M和PTX-SH的摩尔比为1：3；通氮气室温下反应1h后，将混合溶液装入截留分子量为300的透析袋中，透析介质为甲醇，透析3次，每次甲醇用量0.5L，每次透析时间3h，然后旋转蒸发得到固体PPI1MP。
S5、利用巯基乙胺修饰PPI1MP合成PPI1MPC:
取5mg PPI1MP溶于1mL甲醇，配制浓度为5mg/mL PPI1MP甲醇溶液；取20mg巯基乙胺溶于1mL甲醇，配制浓度为2.6×10-1mmol/mL巯基乙胺甲醇溶液；在装有磁子的圆底烧瓶中，将PPI1MP甲醇溶液和巯基乙胺甲醇溶液混合加入，两种溶液的溶质PPI1MP和巯基乙胺的摩尔比为1：60，通氮气室温反应12h后，将混合溶液装入截留分子量为2000的透析袋中，对水透析4次，每次4h，，然后旋转蒸发得到固体PPI1MPC。
S6、以PPI1MPC包载阿霉素(DOX)和紫杉醇制备载药胶束：
取400μg盐酸阿霉素溶于0.267mL甲醇，加入3μL三乙胺，避光超声1h，得到阿霉素甲醇溶液；取1mg紫杉醇溶于125μL甲醇中，得到紫杉醇甲醇溶液；取PPI1MPC(9.8mg)溶于2mL甲醇得到PPI1MPC甲醇溶液；在加有磁子的烧瓶中，将上述三种甲醇溶液混合加入，其中前两种溶液的溶质阿霉素与紫杉醇的总质量和第三种溶液的溶质PPI1MPC的质量比为1：7，将上述三种溶液在装有磁子的圆底烧瓶中混合均匀，避光室温下反应2h，按甲醇：水为1：10的质量比将混合溶液缓慢滴加18.9mL水中滴加速度为3mL/min，然后装入截留分子量3500的透析袋对水透析，每次用水0.5L，每次透析4h，透析4次，得到PPI1MPC-DOX载药胶束。
具体实施例5
S1、合成紫杉醇二聚体(PTX-S-S-PTX)：
在25mL圆底烧瓶中，加入3，3'-二硫代二丙酸(59mg,0.28mmol)和紫杉醇(573mg,0.67mmol)并溶解在二氯甲烷(10mL)中。在室温下搅拌1h，加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(138mg，0.67mmol)和4-二甲氨基吡啶(14mg，0.11mmol)，将混合物回流2天，然后浓缩，进行柱层析。层析液为乙酸乙酯：正己烷＝2：1，收集Rf＝0.36的物质。
S2、合成巯基化紫杉醇(PTX-SH)：
在5mL圆底烧瓶中，加入二硫苏糖醇(13mg，0.08mmol)和合成物PTX-S-S-PTX(75mg，0.04mmol)并溶解在二氯甲烷(1mL)中。在室温搅拌1h后，将三乙胺(16mg，0.16mmol)加入到反应混合物中并在氮气下搅拌12h。将反应混合物用饱和碳酸氢钠溶液(2mL)洗涤3次，有机相用无水MgSO4干燥，过滤，浓缩，用石油醚沉淀得到PTX-SH。
S3、将第一代聚酰胺-胺树状大分子(PAMAM1)马来酸酐化：
在装有磁子的圆底烧瓶中，按PAMAM1的伯氨基:马来酸酐为1：10摩尔比溶于二甲基亚砜中，并在室温条件下反应5h。然后将混合溶液装入截留分子量为500的透析袋中先对硼酸-硼砂缓冲溶液透析2次，每次硼酸-硼砂缓冲溶液用量为0.5L，每次透析5h，然后对水透析2次，每次水用量0.5L每次5h；然后冷冻干燥得到PAMAM1M固体。
S4、利用PTX-SH修饰PAMAM1M合成PAMAM1MP：
取6mg PAMAM1M溶于1mL甲醇，配制浓度为6mg/mL PAMAM1M甲醇溶液；取10mg PTX-SH溶于1mL甲醇，配制浓度为1.07×10-2mmol/mL PTX-SH甲醇溶液；在装有磁子的圆底烧瓶中，将PAMAM1M甲醇溶液和PTX-SH甲醇溶液混合加入，两种溶液的溶质PAMAM1M和PTX-SH的摩尔比为1：4；通氮气室温下反应24h后，将混合溶液装入截留分子量为1000的透析袋中，透析介质为甲醇，透析6次，每次甲醇用量0.5L，每次透析时间2h，然后旋转蒸发得到固体PAMAM1MP。
S5、利用巯基乙胺修饰PAMAM1MP合成PAMAM1MPC:
取4mg PAMAM1MP溶于1mL甲醇，配制浓度为4mg/mL PAMAM1MP甲醇溶液；取20mg巯基乙胺溶于1mL甲醇，配制浓度为2.6×10-1mmol/mL巯基乙胺甲醇溶液；在装有磁子的圆底烧瓶中，将PAMAM1MP甲醇溶液和巯基乙胺甲醇溶液混合加入，两种溶液的溶质PAMAM1MP和巯基乙胺为的摩尔比为1：30，通氮气室温反应12h后，将混合溶液装入截留分子量为5000的透析袋中，对水透析3次，每次5h，然后旋转蒸发得到固体PAMAM1MPC。
S6、以PAMAM1MPC包载光敏剂二氢卟吩e6(Ce6)制备载药胶束：
取1mg光敏剂二氢卟吩e6溶于1mL甲醇中；取PAMAM1MPC(6mg)溶于1mL甲醇；在加有磁子的烧瓶中，将上述得到的两种甲醇溶液混合加入，两种溶液的溶质二氢卟吩e6和PAMAM1MPC的质量比为1：6，将上述两种溶液在装有磁子的圆底烧瓶中混合均匀，避光室温下反应2h，按甲醇与水为1：8的质量比将混合溶液缓慢滴入12.6mL水中，滴加速度为3mL/min，然后装入截留分子量300的透析袋对水透析，每次用水0.5L，每次透析4h，透析4次，得到PAMAM1MPC-Ce6载药胶束。
具体实施例6
S1、合成紫杉醇二聚体(PTX-S-S-PTX)：
在25mL圆底烧瓶中，加入3，3'-二硫代二丙酸(59mg,0.28mmol)和紫杉醇(573mg,0.67mmol)并溶解在二氯甲烷(10mL)中。在室温下搅拌1h，加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(138mg，0.67mmol)和4-二甲氨基吡啶(14mg，0.11mmol)，将混合物回流2天，然后浓缩，进行柱层析。层析液为乙酸乙酯：正己烷＝2：1，收集Rf＝0.36的物质。
S2、合成巯基化紫杉醇(PTX-SH)：
在5mL圆底烧瓶中，加入二硫苏糖醇(13mg，0.08mmol)和合成物PTX-S-S-PTX(75mg，0.04mmol)并溶解在二氯甲烷(1mL)中。在室温搅拌1h后，将三乙胺(16mg，0.16mmol)加入到反应混合物中并在氮气下搅拌12h。将反应混合物用饱和碳酸氢钠溶液(2mL)洗涤3次，有机相用无水MgSO4干燥，过滤，浓缩，用石油醚沉淀得到PTX-SH。
S3、将第二代聚酰胺-胺树状大分子(PAMAM2)马来酸酐化：
在装有磁子的圆底烧瓶中，按PAMAM2的伯氨基:马来酸酐为1：3.8摩尔比溶于二甲基亚砜中，并在室温条件下反应30h。然后将混合溶液装入截留分子量为1000的透析袋中先对硼酸-硼砂缓冲溶液透析2次，每次硼酸-硼砂缓冲溶液用量为0.5L，每次透析7h，然后对水透析2次，每次水用量0.5L每次7h；然后冷冻干燥得到PAMAM2M固体。
S4、利用PTX-SH修饰PAMAM2M合成PAMAM2MP：
取6mg PAMAM2M溶于1mL甲醇，配制浓度为6mg/mL PAMAM2M甲醇溶液；取10mg PTX-SH溶于1mL甲醇，配制浓度为1.07×10-2mmol/mL PTX-SH甲醇溶液；在装有磁子的圆底烧瓶中，将上述两种甲醇溶液混合，两种甲醇溶液的溶质PAMAM2M和PTX-SH的摩尔比为1：4；通氮气室温下反应36h后，将混合溶液装入截留分子量为3000的透析袋中，透析介质为甲醇，透析3次，每次甲醇用量0.5L，每次透析时间3h，然后旋转蒸发得到固体PAMAM2MP。
S5、利用巯基乙胺修饰PAMAM2MP合成PAMAM2MPC:
取5mg PAMAM2MP溶于1mL甲醇，配制浓度为5mg/mL PAMAM2MP甲醇溶液；取20mg巯基乙胺溶于1mL甲醇，配制浓度为2.6×10-1mmol/mL巯基乙胺甲醇溶液；在装有磁子的圆底烧瓶中，将上述两种甲醇溶液混合加入，两种甲醇溶液的溶质PAMAM2MP和巯基乙胺的摩尔比为1：60，通氮气室温反应48h后，将混合溶液装入截留分子量为10000的透析袋中，对水透析4次，每次4h，然后旋转蒸发得到固体PAMAM2MPC。
S6、以PAMAM2MPC包载多西紫杉醇(DTX)制备载药胶束：
取400μg多西紫杉醇溶于66.7μL甲醇中；取PAMAM2MPC(4mg)溶于0.5mL甲醇；在加有磁子的烧瓶中，将将上述两种甲醇溶液混合加入，两种甲醇溶液的溶质多西紫杉醇和PAMAM2MPC的质量比为1：10，将上述两种溶液在装有磁子的圆底烧瓶中混合均匀，避光室温下反应2h，按甲醇：水为1：5的质量比将混合溶液缓慢滴入2.24mL水中滴加速度为5mL/min，然后装入截留分子量10000的透析袋对水透析，每次用水0.5L，每次透析2h，透析6次，得到PAMAM2MPC-DTX载药胶束。
具体实施例7
S1、合成紫杉醇二聚体(PTX-S-S-PTX)：
在25mL圆底烧瓶中，加入3，3'-二硫代二丙酸(59mg,0.28mmol)和紫杉醇(573mg,0.67mmol)并溶解在二氯甲烷(10mL)中。在室温下搅拌1h，加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(138mg，0.67mmol)和4-二甲氨基吡啶(14mg，0.11mmol)，将混合物回流2天，然后浓缩，进行柱层析。层析液为乙酸乙酯：正己烷＝2：1，收集Rf＝0.36的物质。
S2、合成巯基化紫杉醇(PTX-SH)：
在5mL圆底烧瓶中，加入二硫苏糖醇(13mg，0.08mmol)和合成物PTX-S-S-PTX(75mg，0.04mmol)并溶解在二氯甲烷(1mL)中。在室温搅拌1h后，将三乙胺(16mg，0.16mmol)加入到反应混合物中并在氮气下搅拌12h。将反应混合物用饱和碳酸氢钠溶液(2mL)洗涤3次，有机相用无水MgSO4干燥，过滤，浓缩，用石油醚沉淀得到PTX-SH。
S3、将第二代聚丙烯亚胺树状大分子(PPI)马来酸酐化：
在装有磁子的圆底烧瓶中，按PPI的伯氨基:马来酸酐为1：7的摩尔比溶于二甲基亚砜中，并在室温条件下反应25h。然后将混合溶液装入截留分子量为500的透析袋中先对硼酸-硼砂缓冲溶液透析2次，每次硼酸-硼砂缓冲溶液用量为0.5L，每次透析6h，然后对水透析2次，每次水用量0.5L每次6h；然后冷冻干燥得到PPIM固体。
S4、利用PTX-SH修饰PPIM合成PPIMP：
取10mg PPIM溶于1mL甲醇，配制浓度为10mg/mL PPIM甲醇溶液；取10mg PTX-SH溶于1mL甲醇，配制浓度为1.07×10-2mmol/mL PTX-SH甲醇溶液；在装有磁子的圆底烧瓶中，将PPIM甲醇溶液和PTX-SH甲醇溶液混合加入，两种溶液的溶质PPIM：PTX-SH的摩尔比为1：5；通氮气室温下反应24h后，将混合溶液装入截留分子量为2000的透析袋中，透析介质为甲醇，透析6次，每次甲醇用量0.5L，每次透析时间6h，然后旋转蒸发得到固体PPIMP。
S5、利用巯基乙胺修饰PPIMP合成PPIMPC:
取10mg PPIMP溶于1mL甲醇，配制浓度为10mg/mL PPIMP甲醇溶液；取6.67mg巯基乙胺溶于1mL甲醇，配制浓度为2.6×10-1mmol/mL巯基乙胺甲醇溶液；在装有磁子的圆底烧瓶中，将上述两种甲醇溶液混合加入，两种甲醇溶液的溶质PPIMP和巯基乙胺的摩尔比为1：40，通氮气室温反应36h后，将混合溶液装入截留分子量为3500的透析袋中，对水透析3次，每次3h，然后旋转蒸发得到固体PPIMPC。
S6、以PPIMPC包载喜树碱(CPT)制备载药胶束：
取100μg喜树碱溶于1mL甲醇中；取PPIMPC(1.5mg)溶于0.5mL甲醇；在加有磁子的烧瓶中，将上述两种甲醇溶液混合加入，两种甲醇溶液的溶质喜树碱和PPIMPC的质量比为1：15，将上述两种溶液在装有磁子的圆底烧瓶中混合均匀，避光室温下反应4h，按甲醇：水为1：15的质量比将混合溶液缓慢滴入17.8mL水中滴加速度为1.5mL/min，然后装入截留分子量8000的透析袋对水透析，每次用水0.5L，每次透析4h，透析3次，得到PPIMPC-CPT载药胶束。
以上所述的实施例仅是对本发明的优选实施方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案做出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。

Claims (6)

1.一种合成两性离子化的双亲性树状大分子并用其包载抗癌药物的方法，其特征在于：其具体包括以下步骤：
S1、将低代树状大分子进行马来酸酐化，其包括以下子步骤：
S11、在加有磁子的烧瓶中，将低代树状大分子的伯氨基和马来酸酐按摩尔比为1：1.2-10的比例加入，并用二甲基亚砜对混合物进行溶解，室温下利用磁子搅拌反应5- 48h；
S12、将上述溶液装入截留分子量为400-1000的透析袋中，首先在硼酸-硼砂缓冲溶液中透析2次，每次硼酸-硼砂缓冲溶液用量0.5 L，每次4-8 h，之后在水中透析2次，每次水用量为0.5 L，每次透析4-8h，透析完成后冷冻干燥得到马来酸酐修饰的改性低代树状大分子DM；
步骤S1中，树状大分子为第二代聚丙烯亚胺树状大分子;
S2、利用巯基化紫杉醇（PTX-SH）修饰改性低代树状大分子DM合成DMP，其包括以下子步骤：
S21、将甲醇和DM按照1：0.00126-0.0126的质量比混合，配制浓度为1-10mg/mL的 DM甲醇溶液；
S22、将甲醇和PTX-SH按照1：0.0063-0.0189的质量比混合，配制浓度为0.53x10-2-1.59x10-2 mmol/mL的PTX-SH甲醇溶液；
S23、在加有磁子的烧瓶中，将步骤S21得到的 DM甲醇溶液和步骤S22得到的PTX-SH甲醇溶液混合加入，其中两种溶液的溶质DM和PTX-SH的摩尔比为1：1-10；
S24、通入氮气并在室温下反应1-72 h后，将混合溶液装入透析袋中对甲醇进行透析，然后旋转蒸发得到固体DMP；
S3、利用巯基乙胺修饰DMP合成DMPC，其包括以下子步骤：
S31、将甲醇和步骤S2得到的DMP按照1：0.00126-0.0126的质量比进行混合，配制1-10mg/mL的 DMP 甲醇溶液；
S32、将甲醇和巯基乙胺按照1：0.0063-0.025的质量比混合，配制浓度为6.48x10-2-2.6x10-1mmol/mL的巯基乙胺甲醇溶液；
S33、在装有磁子的圆底烧瓶中，将步骤S31得到的 DMP 甲醇溶液和步骤S32得到的巯基乙胺甲醇溶液混合加入，其中两种溶液的溶质DMP和巯基乙胺的摩尔比为1：3-100；
S34、通入氮气并在室温下反应6-72 h后，将混合溶液装入透析袋中对水进行透析，然后旋转蒸发得到固体DMPC；
S4、以DMPC包载疏水性小分子抗癌药物制备载药胶束，所述疏水性小分子抗癌药物为阿霉素，其包括以下子步骤：
S41、以甲醇与小分子疏水性药物1：0.000126~0.01的质量比，配制成0.1~8mg/mL的小分子疏水性药物甲醇溶液；
S42、将甲醇和步骤S3得到的DMPC按照1：0.0025~0.01的质量比进行混合，配制2-8 mg/mL的 DMPC 甲醇溶液；
S43、在加有磁子的烧瓶中，将步骤S41得到的小分子疏水性药物甲醇溶液和步骤S42得到的DMPC 甲醇溶液混合加入，其中两种溶液的溶质小分子疏水性药物和DMPC的质量比为1：5-15；
S44、避光室温搅拌2-6 h后，将混合溶液缓慢滴入水中，装入透析袋对水进行透析，得到载药胶束；
在弱酸性pH下，羧基的解离受到抑制，氨基质子化，PPIMPC-DOX载药胶束的表面电位变正，带有正电荷的胶束与带有负电荷的肿瘤细胞膜具有较强的静电吸引。
2.根据权利要求1所述的合成两性离子化的双亲性树状大分子并用其包载抗癌药物的方法，其特征在于：步骤S2中，透析袋截留分子量为300-3000，透析介质为甲醇，透析次数为2-6次，每次透析时间为2-8 h。
3.根据权利要求1所述的合成两性离子化的树状大分子并用其包载抗癌药物的方法，其特征在于：步骤S3中，透析袋截留分子量为1000-10000，透析介质为水，透析次数2-6次，每次透析时间为2-8 h。
4.根据权利要求1所述的合成两性离子化的双亲性树状大分子并用其包载抗癌药物的方法，其特征在于：步骤S41中，以甲醇与小分子疏水性药物1：0.000126~0.01的质量比配制盐酸阿霉素甲醇溶液后，按盐酸阿霉素与三乙胺1：3-200的摩尔比，加入三乙胺，然后避光超声，得到阿霉素甲醇溶液。
5.根据权利要求1所述的合成两性离子化的双亲性树状大分子并用其包载抗癌药物的方法，其特征在于：步骤S44中，按混合溶液中的甲醇和水以1：0.5~15的质量比，将混合溶液逐滴加入水中，滴加速度为1~5 mL/min。
6.根据权利要求1所述的合成两性离子化的双亲性树状大分子并用其包载抗癌药物的方法，其特征在于：步骤S44中，透析袋截留分子量300~10000，对水透析时间2~8h，透析次数2~6次。
CN202010976935.9A 2020-09-16 2020-09-16 一种合成两性离子化的双亲性树状大分子并用其包载抗癌药物的方法 Active CN112237636B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010976935.9A CN112237636B (zh) 2020-09-16 2020-09-16 一种合成两性离子化的双亲性树状大分子并用其包载抗癌药物的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010976935.9A CN112237636B (zh) 2020-09-16 2020-09-16 一种合成两性离子化的双亲性树状大分子并用其包载抗癌药物的方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN112237636A CN112237636A (zh) 2021-01-19
CN112237636B true CN112237636B (zh) 2022-05-24

Family

ID=74171513

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202010976935.9A Active CN112237636B (zh) 2020-09-16 2020-09-16 一种合成两性离子化的双亲性树状大分子并用其包载抗癌药物的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN112237636B (zh)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114106297B (zh) * 2021-12-16 2024-01-05 香港中文大学（深圳） 含有两性离子基团的荧光聚合物及其制备方法和应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104922689A (zh) * 2015-05-27 2015-09-23 湘潭大学 一种可生物降解且具有pH响应性的抗肿瘤高分子键合药及其制备方法
CN111643678A (zh) * 2020-06-17 2020-09-11 燕山大学 基于含巯基的两性离子多肽修饰的阿霉素衍生物、纳米胶束及其制备方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104922689A (zh) * 2015-05-27 2015-09-23 湘潭大学 一种可生物降解且具有pH响应性的抗肿瘤高分子键合药及其制备方法
CN111643678A (zh) * 2020-06-17 2020-09-11 燕山大学 基于含巯基的两性离子多肽修饰的阿霉素衍生物、纳米胶束及其制备方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Poly(ethylene oxide)-block-Polyphosphoester-graft-Paclitaxel Conjugates with Acid-Labile Linkages as a pH-Sensitive and Functional Nanoscopic Platform for Paclitaxel Delivery;Zou, J et al.;《ADVANCED HEALTHCARE MATERIALS》;20130830;第3卷(第3期);第442页左栏第2段，第443页Scheme 2 *
基于树状大分子纳米药物的制备及其性能研究;朱林林;《中国优秀硕士学位论文全文数据库 电子期刊》;20200331;第11页引言第3段，第15页图2-2和第2-3段，第16页第1-2段，第17页倒数第2段 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN112237636A (zh) 2021-01-19

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Taghavi Pourianazar et al. Bioapplications of poly (amidoamine)(PAMAM) dendrimers in nanomedicine
Bai et al. Recent progress in dendrimer-based nanocarriers
Mekuria et al. PAMAM dendrimer based targeted nano-carrier for bio-imaging and therapeutic agents
US9757342B2 (en) Method for preparing protein cage, and in situ method for preparing hydrophobic additive-supported core-shell structured polymer-protein particles
TWI400088B (zh) 藥物載體原料及其製備方法和使用方法
JP2011524446A (ja) ポリグリコールで修飾されたキトサンオリゴ糖脂肪酸グラフト体、その調製方法およびその使用
CN111330014B (zh) 一种酸响应交联型聚合物前药及其制备方法和应用
CN112220931B (zh) 用于肿瘤主动靶向治疗的亲和体-细胞毒素偶联物及其纳米颗粒、制备方法、应用
Zeng et al. Synthesis, characterization, and evaluation of a novel amphiphilic polymer RGD-PEG-Chol for target drug delivery system
CN112237636B (zh) 一种合成两性离子化的双亲性树状大分子并用其包载抗癌药物的方法
CN110123785B (zh) 一种荷载化疗药物的双敏感型靶向纳米粒制剂及制备方法
Yang et al. Multifunctional mesoporous silica nanoparticles with different morphological characteristics for in vitro cancer treatment
CN112089845B (zh) 紫杉烷类药物-阿霉素前药自组装纳米粒及其应用
CN113827567B (zh) 载小分子药聚合物囊泡在制备治疗急性淋系白血病药物中的应用
CN111420068A (zh) 聚乙二醇-树枝状聚赖氨酸/酸酐-顺铂复合物及其制备方法和应用
Singh et al. Conclusion and future considerations of dendrimers
KR101914827B1 (ko) 알부민을 포함하는, 초분자 상호작용에 기초한 자가조립 나노복합체, 이의 제조방법 및 이의 용도
CN112603908B (zh) 一种基于氨基酸聚合物的纳米载药体系及其制备方法和应用
CN113633785A (zh) 一种智能响应性壳-核式聚电解质纳米凝胶的制备方法与应用
CN111643678B (zh) 基于含巯基的两性离子多肽修饰的阿霉素衍生物、纳米胶束及其制备方法
CN109675048B (zh) 一种抗癌前药脂质体及青蒿素类脂质体纳米药物
Semwal et al. Dendrimers: A novel approach for drug targeting
CN112402626B (zh) 一种靶向肿瘤的生物伪装纳米递药系统及其制备方法
CN111888460B (zh) 一种以达托霉素包载小分子疏水性药物的纳米载药胶束的制备方法
Trital et al. Development of an Integrated High Serum Stability Zwitterionic Polypeptide-Based Nanodrug with Both Rapid Internalization and Endocellular Drug Releasing for Efficient Targeted Chemotherapy

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant