CN112237597A - 附子的新用途 - Google Patents
附子的新用途 Download PDFInfo
- Publication number
- CN112237597A CN112237597A CN201910646188.XA CN201910646188A CN112237597A CN 112237597 A CN112237597 A CN 112237597A CN 201910646188 A CN201910646188 A CN 201910646188A CN 112237597 A CN112237597 A CN 112237597A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- tumor
- monkshood
- effect
- breast
- breast cancer
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 claims abstract description 58
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 58
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 57
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 34
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 claims abstract description 24
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 claims abstract description 23
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 claims abstract description 23
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 claims abstract description 22
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 19
- 241000173529 Aconitum napellus Species 0.000 claims abstract description 15
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 claims abstract description 12
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 claims abstract description 7
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 51
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 9
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 claims description 8
- 108090000397 Caspase 3 Proteins 0.000 claims description 4
- 108090000566 Caspase-9 Proteins 0.000 claims description 4
- 108010018242 Transcription Factor AP-1 Proteins 0.000 claims description 4
- 101150033527 TNF gene Proteins 0.000 claims description 3
- 239000008187 granular material Substances 0.000 claims description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims 1
- 241000227129 Aconitum Species 0.000 abstract description 52
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 abstract description 26
- 229940023019 aconite Drugs 0.000 abstract description 14
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 abstract description 12
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 abstract description 4
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 abstract description 4
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 abstract description 2
- 229940126680 traditional chinese medicines Drugs 0.000 abstract description 2
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 abstract 1
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000000034 method Methods 0.000 description 9
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 9
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 7
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 6
- 230000005740 tumor formation Effects 0.000 description 6
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 5
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 5
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 5
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 5
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 5
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 5
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 5
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 5
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 4
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 4
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 4
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 4
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 3
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 3
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 3
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 3
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 3
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 3
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 3
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 3
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010027458 Metastases to lung Diseases 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 2
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 238000007664 blowing Methods 0.000 description 2
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 2
- 239000012295 chemical reaction liquid Substances 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 238000005034 decoration Methods 0.000 description 2
- 238000002224 dissection Methods 0.000 description 2
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 2
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N hydrocortisone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000005075 mammary gland Anatomy 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 description 2
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 210000003470 mitochondria Anatomy 0.000 description 2
- 230000002438 mitochondrial effect Effects 0.000 description 2
- VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N n'-amino-n-iminomethanimidamide Chemical compound N\N=C\N=N VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N 0.000 description 2
- 230000004792 oxidative damage Effects 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 2
- 239000003642 reactive oxygen metabolite Substances 0.000 description 2
- BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N renifolin D Natural products CC(=C)[C@@H]1Cc2c(O)c(O)ccc2[C@H]1CC(=O)c3ccc(O)cc3O BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N 0.000 description 2
- 230000027756 respiratory electron transport chain Effects 0.000 description 2
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 2
- 102000009016 Cholera Toxin Human genes 0.000 description 1
- 108010049048 Cholera Toxin Proteins 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 102000009024 Epidermal Growth Factor Human genes 0.000 description 1
- 101800003838 Epidermal growth factor Proteins 0.000 description 1
- 238000012404 In vitro experiment Methods 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 description 1
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 1
- 238000010802 RNA extraction kit Methods 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 201000005389 breast carcinoma in situ Diseases 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 239000012930 cell culture fluid Substances 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 239000013553 cell monolayer Substances 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 238000001516 cell proliferation assay Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 230000009982 effect on human Effects 0.000 description 1
- 229940116977 epidermal growth factor Drugs 0.000 description 1
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 1
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 1
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 description 1
- 229960000890 hydrocortisone Drugs 0.000 description 1
- 230000005918 in vitro anti-tumor Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 210000004880 lymph fluid Anatomy 0.000 description 1
- 210000004216 mammary stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 1
- 238000007747 plating Methods 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 1
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 1
- 238000002791 soaking Methods 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N uroanthelone Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C(C)C)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N 0.000 description 1
- 238000009423 ventilation Methods 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
- A61K36/71—Ranunculaceae (Buttercup family), e.g. larkspur, hepatica, hydrastis, columbine or goldenseal
- A61K36/714—Aconitum (monkshood)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
- Public Health (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Oncology (AREA)
- Alternative & Traditional Medicine (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Botany (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
本发明涉及中药领域，特别涉及附子的新用途。本发明提供了附子在制备具有抗乳腺肿瘤作用的药物中的应用。本发明以人乳腺癌细胞株MDA‑MB‑231为研究对象，考察了附子体外抗癌作用，并通过体内实验考察了乳腺癌荷瘤小鼠以及附子对乳腺癌荷瘤小鼠的肿瘤生长及肺转移的抑制作用。结果表明，附子人乳腺癌细胞MDA‑MB‑231的增殖具有良好的抑制作用，对乳腺癌荷瘤小鼠的肿瘤生长和肺转移具有明显的抑制作用。表明，附子具有良好的抗乳腺肿瘤作用。
Description
技术领域
本发明涉及中药技术领域，具体涉及附子的新用途，尤其涉及附子在制备具有抗乳腺肿瘤作用的药物中的用途。
背景技术
女性乳腺是由皮肤、纤维组织、乳腺腺体和脂肪组成的，乳腺癌是发生在乳腺腺上皮组织的恶性肿瘤。乳腺癌中99％发生在女性，男性仅占1％。乳腺并不是维持人体生命活动的重要器官，原位乳腺癌并不致命；但由于乳腺癌细胞丧失了正常细胞的特性，细胞之间连接松散，容易脱落。癌细胞一旦脱落，游离的癌细胞可以随血液或淋巴液播散全身，形成转移，危及生命。目前乳腺癌已成为严重威胁女性生命的重大疾病之一。
基于“肿瘤即癌毒，癌毒乃热毒”的认识，目前中医药治疗乳腺癌多习惯用大量清热解毒类药物，此类药物在某一阶段确实可一定程度地控制和消除肿瘤及其周围的炎症、水肿，但也对很多患者的疗效不理想。而且，大多中药组方药味较多，成分较为复杂，毒副作用较大。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种抗乳腺肿瘤效果好、作用机制明确，且无毒副作用的中药药物。
为了实现本发明的目的，本发明采用如下技术方案：
本发明提供了附子在制备具有抗乳腺肿瘤作用的药物中的应用。
其中，所述抗乳腺肿瘤作用为抑制乳腺肿瘤细胞的增殖。
在一些实施方案中，所述乳腺肿瘤细胞为人乳腺癌细胞株MDA-MB-231。
在一个具体实施例中，本发明以人乳腺癌细胞株MDA-MB-231为材料，考察了附子体外抗肿瘤作用，结果表明，附子具有良好的抑制人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖的作用，可以破坏乳腺癌细胞线粒体内膜完整性，使ATP产生过程中的电子传递失偶联；产生大量活性氧，对线粒体造成氧化损伤，促进肿瘤细胞凋亡。
本发明提供的上述应用中，所述抗乳腺肿瘤作用为调控肿瘤相关基因的表达。
其中，所述肿瘤相关基因包括AKT基因、AP-1基因、Caspase3基因、Caspase9基因、HIF基因、p38基因和TNF基因。
在一个具体实施例中，本发明通过qPCR实验发现，附子可以显著上调Caspase3基因、Caspase9基因、HIF基因、p38基因和TNF基因，下调AKT基因、AP-1基因的表达，并通过MTT实验验证附子具有良好的抗肿瘤活性。
本发明提供的上述应用中，所述抗乳腺肿瘤作用为抑制乳腺肿瘤的生长和肺转移。
在一个具体实施例中，本发明通过体内实验考察了附子对乳腺癌荷瘤小鼠肿瘤生长及肺转移的影响，发现附子给药组的瘤体积和重量明显低于对照组，差异具有显著性(P<0.05)；附子给药组的肺转移结节数明显少于对照组，差异具有显著性(P<0.05)；说明附子能够抑制荷瘤小鼠的肿瘤生长及肺转移，具有良好的抗乳腺肿瘤的作用。
本发明中，所述药物可以为本领域临床可接受的口服给药剂型或注射给药剂型。
在一些实施方案中，所述药物为颗粒剂。
由上述技术方案可知，本发明提供了附子在制备具有抗乳腺肿瘤作用的药物中的应用。体内外实验表明，附子人乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖具有良好的抑制作用，对乳腺癌荷瘤小鼠的肿瘤生长和肺转移具有明显的抑制作用。表明附子具有良好的抗乳腺肿瘤作用。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。
图1～5示不同浓度的附子对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231和正常细胞株增殖的影响，其中，图1～5中附子浓度依次为0.05mg/ml、0.1mg/ml、0.2mg/ml、0.4mg/ml和0.8mg/ml；
图6示不同浓度附子对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231的活性氧水平的影响；
图7示附子对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231肿瘤相关基因表达水平的影响；“+”示阳性对照组，“-”示阴性对照组；阳性对照为50μM H2O2处理，阴性对照为DMSO处理24h；
图8示各组小鼠解剖后的瘤体；其中，8-A为种瘤第2天附子给药组，8-B为对照组A，8-C为成瘤14天后附子给药组，8-D为对照组B；
图9示实施16例中附子对乳腺癌荷瘤小鼠肿瘤体积的影响，其中，横坐标代表各处理组，纵坐标代表荷瘤小鼠的肿瘤体积，单位为mm3；
图10示实施16例中附子对乳腺癌荷瘤小鼠肿瘤重量的影响，其中，横坐标代表各处理组，纵坐标代表荷瘤小鼠的肿瘤重量，单位为mg；
图11示各组小鼠解剖后的离体肝脏；
图12示各组小鼠肺转移的节点数目，其中，横坐标代表各处理组，纵坐标代表肺转移的节点数目。
具体实施方式
本发明公开了附子在制备具有抗乳腺肿瘤作用的药物中的用途，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
对所公开的实施例的说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。
本发明采用的试材皆为普通市售品，皆可于市场购得。
下面结合实施例，进一步阐述本发明：
实施例1附子抗肿瘤作用的体外研究实验
1材料与方法
1.1试剂
DMEM-F12培养基、胎牛血清、青霉素-链霉素、0.25％胰蛋白酶均购自BI；中药附子颗粒购自江阴天江药业有限公司；总RNA提取试剂盒、逆转录试剂盒均购自天根；MTT细胞增殖试验试剂盒购自索来宝；SYBR Premin ExTaqTM GC试剂盒购自takara；MDA-MB-231细胞株和MCF10A细胞株购自中科院昆明动物所。
1.2细胞培养
MDA-MB-231在含10％胎牛血清的DMEM-F12培养液中，37℃，5％二氧化碳的温箱中培养，细胞生长满单层细胞瓶后，以0.25％胰蛋白酶消化传代2min后，待倒置显微镜下细胞圆缩时，加入含10％胎牛血清的DMEM-F12培养液终止消化，用滴管轻轻吹下贴壁生长细胞，吹打均匀后分至新细胞培养瓶，加培养液，放入37℃，5％二氧化碳的温箱中培养。
人正常乳腺细胞株MCF10A在含5％马血清、20ng/mL表皮生长因子、100ng/mL霍乱毒素、0.008mg/mL胰岛素以及500ng/mL氢化可的松的DMEM-F12培养基中，37℃，5％二氧化碳的温箱中培养，细胞生长满单层细胞瓶后，以0.25％胰蛋白酶消化传代12min后，待倒置显微镜下细胞圆缩时，加入含5％马血清的DMEM-F12培养液终止消化，用滴管轻轻吹下贴壁生长细胞，吹打均匀后分至新细胞培养瓶，加培养液，放入37℃，5％二氧化碳的温箱中培养。
1.3MTT细胞增殖试验
收集对数期细胞，调整细胞悬液浓度，每孔加入100ul，铺板使待测细胞密度为10000个/孔，(边缘孔用无菌PBS填充)；5％CO2，37℃孵育，至细胞单层铺满孔底(96孔平底板)，加入附子浓度分别为0.05mg/ml、0.1mg/ml、0.2mg/ml、0.4mg/ml和0.8mg/ml的药物，设3个复孔；时间梯度为5％CO2，37℃孵育2、4、6、12、24h。吸去孔内培养液，每孔加入10ul MTT溶液，90ul培养基,继续培养4h。终止培养，小心吸去孔内培养液。每孔加入110ul Formazan溶解液，置摇床上低速振荡10min，使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪OD490nm处测量各孔的吸光值。同时设置调零孔(培养基、MTT、Formazan溶解液)，对照孔(细胞、DMSO、培养液、MTT)。
1.4活性氧测定
将细胞以1×105个/孔铺于6孔板中，5％CO2，37℃孵育过夜；阳性对照为50uM过氧化氢、实验组附子浓度分别为0.05mg/ml和0.1mg/ml处理人乳腺癌细胞株MDA-MB-231。按照1∶1000用无血清培养液稀释DCFH-DA，使终浓度为10μmol/L。去除细胞培养液，加入适当体积稀释好的DCFH-DA。加入的体积以能充分盖住细胞为宜，通常对于六孔板的一个孔加入稀释好的DCFH-DA不少于1mL。37℃细胞培养箱内孵育20分钟。用无血清细胞培养液洗涤细胞三次，以充分去除未进入细胞内的DCFH-DA。收集细胞后用流式细胞仪检测。
1.5实时荧光定量PCR
分别提取阳性对照组、阴性对照组和用0.1mg/ml附子处理细胞后的RNA，再用逆转录试剂盒将RNA转为cDNA，以表1组分配制PCR反应液进行qPCR反应，反应液配制在冰上操作。
表1 PCR反应体系
其中，引物终浓度为0.2μM。
2结果
不同浓度的附子对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231增殖的影响，见图1～5。图1～5中附子浓度依次为0.05mg/ml、0.1mg/ml、0.2mg/ml、0.4mg/ml和0.8mg/ml。结果显示，0.05-0.2mg/ml附子对人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖均具有明显抑制作用，与对照组相比均有显著性差异(P<0.05)；0.4-0.8mg/ml附子对人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖均具有明显抑制作用，与对照组相比均有显著性差异(P<0.01)。0.05-0.8mg/ml附子对正常细胞株MCF10A的增殖没有影响。
不同浓度的附子对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231活性氧水平的影响见图6。结果显示，0.5mg/ml和0.1mg/ml的附子均能明显提高肿瘤细胞内的活性氧水平，与对照组相比均有显著性差异(P<0.05)。
qPCR结果见图7，“+”示阳性对照组，用50μM H2O2进行处理；“-”示阴性对照组，用DMSO处理24h。
结果显示，附子可以显著性上调Caspase3基因、Caspase9基因、HIF基因、p38基因和TNF基因基因，显著性下调AKT基因和AP-1基因，综合以上结果，附子具有良好的抑制人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖的作用，可以破坏乳腺癌细胞线粒体内膜完整性，使ATP产生过程中的电子传递失偶联；产生大量活性氧，对线粒体造成氧化损伤，最终促进肿瘤细胞凋亡，起到抑制肿瘤细胞增殖的作用。
实施例2附子抗肿瘤作用的体内研究实验
1实验材料
1.1实验细胞
本实验使用小鼠乳腺癌细胞株4T1(购自于中科院昆明动物所)。
1.2实验动物
本实验用购买自昆明医科大学实验动物中心SPF级的雌性Balb/c系小鼠，体重在18-22g之间。小鼠伺养于环境清洁、通风良好的房间里；自由饮食。
1.3主要试剂
DMEM-F12培养基、胎牛血清、青霉素-链霉素、0.25％胰蛋白酶均购自BI；中药附子颗粒购自江阴天江药业有限公司；多聚甲醛购自索来宝。
2实验方法
2.1制作细胞悬液取对数期生长的4T1细胞，0.25％胰酶消化，DMEM/F12培养液终止消化，800-1000r/min低速离心10min后去掉上清液，然后用PBS制成细胞悬液，调整细胞浓度为5*106个/ml。
2.2注射法种瘤
采取皮下注射的方法，1ml注射器6号针头接种细胞于小鼠的脖颈部，每只接种0.2ml。每日观察小鼠一般生活状况。
2.3给药
随机分为种瘤第二天附子给药组、成瘤14天后附子给药组、对照组。详细分组如下：
①种瘤第二天附子给药组：接种细胞第二天开始，附子浓度1mg/ml，用生理盐水配制，0.2ml/只，连续灌胃11天，21天后断椎处死；
②接种14天，附子给药组：接种细胞第14天开始，附子浓度1mg/ml，用生理盐水配制，0.2ml/只，连续灌胃11天，30天后断椎处死；
③对照组A：生理盐水，0.2ml/只，连续灌胃11天，21天后断椎处死；
对照组B：生理盐水，0.2ml/只，连续灌胃11天，30天后断椎处死；
3观察指标
3.1成瘤时间及体积
接种之日起观察各组成瘤时间，分别在21天后、30天后将小鼠断椎处死，剥取肿瘤，测量体积。定人每隔天用游标卡尺测量肿瘤最大直径a、横径b，计算公式为肿瘤体积＝a×b2/2的公式计算肿瘤体积。
3.2肿瘤重量
将小鼠断椎处死，剥离出瘤体，用滤纸将残留的血液吸干，记录瘤重。
3.3肺转移
分离各组小鼠的肺组织，将其放于固定液中固定，再用无水酒精浸泡至肺组织颜色恢复，观察肺转移灶肺转移灶为白色结节，在解剖显微镜下计数肺转移结节个数，并计算肺转移总数和肺转移抑制率。
4数据处理及统计学分析
实验数据需要分析其统计学意义，采用多组比较单因素方差分析P值，计量资料用
统一用SPSS17.0软件进行分析。
5实验结果
5.1附子抑制乳腺癌荷瘤小鼠的肿瘤生长
5.1.1附子对乳腺癌荷瘤小鼠肿瘤体积的影响解剖小鼠后测量瘤体积，附子给药组体积明显小于对照组，与对照组比较皆具有显著差异性(P值皆小于0.05)，实验结果如图8～9和表2所示。
表2附子对乳腺癌荷瘤小鼠肿瘤体积的影响
5.1.2附子对乳腺癌荷瘤小鼠肿瘤重量的影响及抑瘤率
表3附子对乳腺癌荷瘤小鼠肿瘤重量的影响及其抑瘤率
抑瘤率(％)＝[1－(附子组平均瘤重/对照组平均瘤重)]x100％
种瘤第二天附子给药组以对照组A为对照，计算抑瘤率；成瘤14天后附子给药组以对照组B为对照计算抑瘤率。实验结果如图10和表3所示。
结果显示，解剖小鼠后称量瘤重量，附子给药组瘤重量小于较对照组，与对照组比较皆具有显著差异性(P值皆小于0.05)。抑瘤率分别达到51.19％、87.29％。
5.2附子对乳腺癌荷瘤小鼠肺转移的抑制作用
表4肺转移结节计数及转移抑制率比较
注：抑制率＝(对照组肺转移总数－各附子组肺转移灶数)/对照组肺转移灶数*100％
种瘤第二天附子给药组以对照组A为对照，计算肺转移抑制率；成瘤14天后附子给药组以对照组B为对照计算肺转移抑制率。实验结果见图11～12和表4。
由图11～12和表4可知，附子给药组肺转移结节数少于对照组，与对照组比较皆具有显著差异性(P值皆小于0.05)，肺转移抑制率分别达到52.96％、67.41％。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (8)
1.附子在制备具有抗乳腺肿瘤作用的药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述抗乳腺肿瘤作用为抑制乳腺肿瘤细胞的增殖。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述乳腺肿瘤细胞为人乳腺癌细胞株MDA-MB-231。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述抗乳腺肿瘤作用为调控肿瘤相关基因的表达。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述肿瘤相关基因包括AKT基因、AP-1基因、Caspase3基因、Caspase9基因、HIF基因、p38基因和TNF基因。
6.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述抗乳腺肿瘤作用为抑制乳腺肿瘤的生长和肺转移。
7.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物包括附子和药学上可接受的载体。
8.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物的剂型为颗粒剂。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201910646188.XA CN112237597A (zh) | 2019-07-17 | 2019-07-17 | 附子的新用途 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201910646188.XA CN112237597A (zh) | 2019-07-17 | 2019-07-17 | 附子的新用途 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN112237597A true CN112237597A (zh) | 2021-01-19 |
Family
ID=74167055
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201910646188.XA Pending CN112237597A (zh) | 2019-07-17 | 2019-07-17 | 附子的新用途 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN112237597A (zh) |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101371890A (zh) * | 2007-08-23 | 2009-02-25 | 北京亚东生物制药有限公司 | 一种治疗乳腺增生、乳腺癌的中药组合物及其制备方法 |
-
2019
- 2019-07-17 CN CN201910646188.XA patent/CN112237597A/zh active Pending
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101371890A (zh) * | 2007-08-23 | 2009-02-25 | 北京亚东生物制药有限公司 | 一种治疗乳腺增生、乳腺癌的中药组合物及其制备方法 |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| 张亚平等: "附子总生物碱对乳腺癌小鼠的抗肿瘤作用", 《中草药》 * |
| 王刚: "《中西医结合肿瘤治疗学》", 28 February 2019, 上海交通大学出版社 * |
| 王立芳: "《抗肿瘤经方临床应用手册》", 30 June 2018, 中国中医药出版社 * |
| 谢东浩等: "《常用治疗肿瘤中药》", 31 October 2015, 中国医药科技出版社 * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN109837306A (zh) | 包载miRNA-204-5p的外泌体及其制备方法和应用 | |
| CN110982868B (zh) | 一种提高灵芝三萜含量的共培养方法及应用 | |
| CN113862193A (zh) | 一株嗜黏蛋白阿克曼氏菌及其在制备抗肿瘤药物中的应用 | |
| CN104593326A (zh) | 一种中药诱导增强型dc-cik细胞的制备方法及其应用 | |
| CN105296426B (zh) | 一种nk细胞的诱导培养方法 | |
| CN106943432A (zh) | 一种脐带间充质干细胞来源的外泌体及其在制备治疗肝癌药物中的应用 | |
| CN105176926A (zh) | 一种体外培养扩增nk细胞的方法 | |
| CN110029088A (zh) | 肿瘤细胞凋亡小体及其制备方法和应用 | |
| CN106834404B (zh) | 一种酶解多肽及用于制备治疗肺腺癌药物的用途 | |
| CN112237597A (zh) | 附子的新用途 | |
| CN111041102A (zh) | 一种对d-柠檬烯混合物抗肿瘤活性敏感患者的筛选方法 | |
| CN109260228A (zh) | 一种治疗肿瘤的复合物 | |
| CN110205293A (zh) | 一种加强型高效治疗肺癌的nk免疫细胞的制备方法及应用 | |
| CN101352448A (zh) | 短葶山麦冬c在制药中的应用 | |
| CN108452240B (zh) | 一种抗肿瘤的中药组合物及其应用 | |
| CN113897300A (zh) | 一株具有改善皮肤屏障功能损伤与皮肤敏感的动物双歧杆菌 | |
| KR100671762B1 (ko) | 암치료와 암예방을 위한 한약조성물 | |
| CN107050053A (zh) | 一种由川芎醇提物制备的含药血清及其制备方法和应用 | |
| CN112516157A (zh) | 红花多糖在制备治疗黑色素瘤疾病的药物中的应用 | |
| CN107090434A (zh) | 一种提高cik细胞培养效果的血液抗凝和保存方法 | |
| US20220000952A1 (en) | Method preparing antrodia cinnamomea extract and antrodia cinnamomea composition, and pharmaceutical composition | |
| CN107708728A (zh) | 一种用于治疗胃癌的肿瘤疫苗及其制备方法 | |
| CN104873493B (zh) | 2‑羟基泽兰内酯在制备抗肿瘤药物中的应用 | |
| US10004713B2 (en) | Uses of chlorogenic acid in the preparation of medicaments for treatment of oligodendroglioma | |
| CN111117963B (zh) | 组合物及其在神经干细胞培养上的应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20210119 |