CN112210595A - 一种检测微小残留病的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种检测微小残留MRD的方法，通过在cDNA 5’端添加一种Ω双链接头，使得所述方法相较于线性双链接头连接效率更高，建库时间更短且数据GC更稳定。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种检测微小残留病（Minimal ResidualDisease,MRD）的方法。
背景技术
淋系血液癌症主要包括T/B淋巴细胞白血病、淋巴瘤以及多发性骨髓瘤，而微小残留病(Minimal Residual Disease,MRD)是指白血病/淋巴瘤/骨髓瘤患者经诱导治疗缓解后，体内仍残留少量癌细胞的状态，最终可能会引起疾病复发。随着化疗、特异性靶向治疗、造血干细胞移植(HSCT)治疗等技术的不断改进，血液癌症的治疗效果甚至可达到血液学完全缓解(hematologic complete remission，HCR)，但获得HCR并不足以保证患者长期无病存活，因此复发仍是困扰癌症治愈的一个难点，究其原因主要与血液癌症细胞微小残留病(MRD)有关。近年来研究表明，血液癌症复发与MRD密切相关，MRD升高可提前预示血液癌症的全面复发。因此，采用灵敏度高、特异性强及稳定可靠的实验方法对血液癌症患者进行定期MRD检测，对评估疾病状态、判断疗效、预测复发、指导治疗具有重要的临床意义。血液癌症的治疗方案与新型有效的药物的配合，患者疾病缓解程度更深，MRD监测的时间点及检测灵敏度对于复发预测尤为重要。
目前检测微小残留病(MRD)的方法包括多参数流式细胞仪检测(FC)、聚合酶链反应(PCR)、融合基因检测实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)、等位基因寡核苷酸杂交法(AS0-PCR)和高通量二代测序(IG/TR NGS)等。其中最常用的是基于分子免疫学的流式细胞仪术(Flow Cytometry)，但其灵敏度仅可达10-4 数量级(0.01％)，且该方法对MRD结果判断的准确性在很大程度上取决于每个实验室的实验条件和操作者的个人经验，标准化程度低，而且有研究表明在化疗过程中由于化疗药物的影响使癌细胞的免疫表型发生变化，即“免疫漂移”现象，可影响MRD检测结果的可靠性和准确性。聚合酶链反应(PCR)的方法无法定量，只能看到IG/TCR的基因重排的情况。融合基因实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测方法只能应用于存在融合基因异常的急性白血病，不能提示白血病细胞的来源。等位基因寡核苷酸杂交法(AS0-PCR)的应用较普遍存在于欧洲，该方法需要根据每一位患者定制一套引物，容易出现非特异性扩增，实验条件和操作技术要求较高，耗时耗人力。
T细胞基因座上大量的V(可变区)、D(多变区)、J(连接区)基因片段在T细胞受体的形成中会产生各种多样性重组。这种V-D-J基因的重组赋予了每一种T细胞自己独特的T细胞受体(TCR)，从而使得每一个TCR的序列能有效的成为一个T细胞克隆的唯一生物标志物。因此对T细胞TCR基因的序列组成进行测序，可以很好的定位每一种T细胞，其中包括白血病癌变的T细胞，并且灵敏度最高可达10-6(0.0001％)。然而由于TCR基因的最大特点是V、D、J基因片段的随机重组，所以，针对未知基因序列，很难设计一个上游引物用于识别TCR基因的5’端序列，所以也无法利用PCR技术扩增TCR 基因和测序。
而另外一种TCR测序方法，即多重引物PCR的方法，只能测序TCR基因中的部分序列信息，这样使得测序基因信息不完整。另外，多重引物PCR方法的引物是根据已知V，J基因设计的，但在癌症病人中，癌细胞的基因突变是很常见的，如果白血病癌细胞的TCR产生了突变，那么已知序列的引物就有可能无法识别突变后的基因，对检测结果来说，就容易造成假阴性。
发明内容
针对现有技术中TCR RNA测序方案存在检测灵敏度、特异性较低，连接效率不高的技术问题，本发明提供了一种Ω双链接头序列，用于PCR扩增时5’端引物结合及UMI添加。Ω双链接头相较于现有技术中使用的illumina通用线性双链接头连接效率更高，时间更短且更稳定。
进一步的，本发明提供一种检测微小残留病的方法。更为具体的，所述方法包括如下技术步骤：
1、获取人血液样本10ml于EDTA抗凝管；
2、分离淋巴细胞并用Trizol提取RNA；
3、RNA反转录成cDNA。
4、在cDNA 5’端添加一种Ω双链接头，用于PCR扩增时5’端引物结合及UMI添加，其中，所述UMI为一段已知的序列用于区分测序后的目标区域数据。
5、PCR:通过单对引物的方式扩增重组TCR cDNA。
在一些实施方案中，步骤3中所用的反转录引物选自如下序列任一：
SEQ ID NO.1:GAATGGACTCCTCTGCCACTGGATTAAGACACAGTCGGAGGCCAAGCGGTCT
SEQ ID NO.2:GAATGGACTCCTCTGCCACTGGATTGAACCTTAGTCGGAGGCCAAGCGGTCT
SEQ ID NO.3:GAATGGACTCCTCTGCCACTGGATTGCTAAGTAGTCGGAGGCCAAGCGGTCT
SEQ ID NO.4:GAATGGACTCCTCTGCCACTGGATCTAATCGAAGTCGGAGGCCAAGCGGTCT
SEQ ID NO.5:GAATGGACTCCTCTGCCACTGGATCTAGAACAAGTCGGAGGCCAAGCGGTCT
SEQ ID NO.6:GAATGGACTCCTCTGCCACTGGATTAAGTTCCAGTCGGAGGCCAAGCGGTCT
SEQ ID NO.7:GAATGGACTCCTCTGCCACTGGATTAGACCTAAGTCGGAGGCCAAGCGGTCT
SEQ ID NO.8:GAATGGACTCCTCTGCCACTGGATAAGGTTCAAGTCGGAGGCCAAGCGGTCT
SEQ ID NO.9:GAATGGACTCCTCTGCCACTGGATACTTAGCAAGTCGGAGGCCAAGCGGTCT
在一些实施方案中，为了区分样本，步骤4中所使用的Ω双链接头由top序列和bottom序列组成，每个样本选用不同top序列接头，通过不同top序列接头中不一致的序列区域来实现区分样本的技术效果。
在一些实施方案中，所述Ω双链接头top序列为如下序列组成的组：
SEQ ID NO. 10: CAGAGGTCAGCTTCGGGCTGCCAGCACTAAAGCCCGATCGCTCGAGCTCG
SEQ ID NO. 11: CAGAGGTCAGCTTCGGGCTGCTGGTGACAAAGCCCGATCGCTCGAGCTCG
SEQ ID NO. 12: CAGAGGTCAGCTTCGGGCTGCACCTAGACAAGCCCGATCGCTCGAGCTCG
SEQ ID NO. 13: CAGAGGTCAGCTTCGGGCTGCGGCAAACAAAGCCCGATCGCTCGAGCTCG
SEQ ID NO. 14: CAGAGGTCAGCTTCGGGCTGCACGACCCAAAGCCCGATCGCTCGAGCTCG
SEQ ID NO. 15: CAGAGGTCAGCTTCGGGCTGCCTCCCCAAAAGCCCGATCGCTCGAGCTCG
SEQ ID NO. 16: CAGAGGTCAGCTTCGGGCTGCTCCAACCCAAGCCCGATCGCTCGAGCTCG
SEQ ID NO. 17: CAGAGGTCAGCTTCGGGCTGCCACACCACAAGCCCGATCGCTCGAGCTCG
SEQ ID NO. 18: CAGAGGTCAGCTTCGGGCTGCACCCAAAGAAGCCCGATCGCTCGAGCTCG
SEQ ID NO. 19: CAGAGGTCAGCTTCGGGCTGCACCAGTGTAAGCCCGATCGCTCGAGCTCG
SEQ ID NO. 20: CAGAGGTCAGCTTCGGGCTGCAACTGGGAAAGCCCGATCGCTCGAGCTCG
SEQ ID NO. 21: CAGAGGTCAGCTTCGGGCTGCGGTGAGGAAAGCCCGATCGCTCGAGCTCG
在一些实施方案中，所述Ω双链接头buttom序列为：
SEQ ID NO. 22: AGCGATCACCTCTG
与现有技术相比，本发明的技术方案具有如下突出的技术效果：
1. 使用的Ω双链接头方式相较于线性双链接头连接效率更高，时间更短且更稳定；
2. Ω接头序列中包含有不同的UMI序列，可显著提高检测灵敏度及准确性。
附图说明
附图用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本发明的实施例一起用于解释本发明，并不构成对本发明的限制。在附图中：
图1 使用Ω双链接头进行PCR扩增；
图2 本发明所用的Ω接头与传统线性双链接头（Y接头）的连接效率对比（泳道1-4:Ω双链接头；Lane 5:Y接头）。
具体实施方式
以下结合附图对本发明的优选实施例进行说明，应当理解，此处所描述的优选实施例仅用于说明和解释本发明，并不用于限定本发明。
实施例1
步骤1 按照本领域常规方法，从待检者血液里提取总RNA。
步骤2 利用反转引物序列将步骤1获得的RNA延伸成cDNA，通过反应条件控制延伸长度。
所述反转引物序列为：
SEQ ID NO.1:GAATGGACTCCTCTGCCACTGGATTAAGACACAGTCGGAGGCCAAGCGGTCT
反应体系为：
RNA (200ng) X ul
5x反转录缓冲液 5 ul
dNTP(10Mm) 1 ul
SEQ ID NO.1(20uM) 3 ul
Superscript II RT 1 ul
ddH2O (40-X) ul
反应程序为：
4°C 1min, 42°C 30min, 70°C 8min, 4°C 永久。
最终获得的cDNA用1.5x Axygen磁珠纯化并洗脱至50ul。
步骤3 在cDNA上连接Ω双链接头序列。
所述Ω双链接头序列由top序列和bottom序列组成，其中所述top序列为：
SEQ ID NO. 10: CAGAGGTCAGCTTCGGGCTGCCAGCACTAAAGCCCGATCGCTCGAGCTCG
所述buttom序列为：
SEQ ID NO. 22: AGCGATCACCTCTG
反应体系：
CPE cDNA 50 ul
Ligation buffer(10x) 8 ul
T4 ligase(5U/ul) 2 ul
Adapter 1(10uM) 10 ul
H2O 10 ul
反应程序：37°C 1hr, 65°C 15min, 4°C 永久。
DcDNA用1.5x Axygen磁珠纯化并洗脱至10ul。
步骤4 PCR
PCR引物为：
SEQ ID NO. 23: AGACAAGCTCGAGCTCGAGCGATCGGGCTT
SEQ ID NO. 24: TCCTAAGACCGCTTGGCCTCCGACT
反应体系：
Kappa 2x master mix 12.5 ul
Lig DNA 10 ul
SEQ ID NO.7 (10uM) 1 ul
SEQ ID NO.8 (10uM) 1 ul
H2O 0.5 ul
反应程序：
DNA用1x Axygen磁珠纯化并洗脱至20ul。
实施例2
步骤1 按照本领域常规方法，从待检者血液里提取总RNA。
步骤2 利用反转引物序列将步骤1获得的RNA延伸成cDNA，通过反应条件控制延伸长度。
所述反转引物序列为：
SEQ ID NO.2:GAATGGACTCCTCTGCCACTGGATTGAACCTTAGTCGGAGGCCAAGCGGTCT。
反应体系为：
RNA (200ng) X ul
5x反转录缓冲液 5 ul
dNTP(10Mm) 1 ul
SEQ ID NO.1(20uM) 3 ul
Superscript II RT 1 ul
ddH2O (40-X) ul
反应程序为：
4°C 1min, 42°C 30min, 70°C 8min, 4°C 永久。
最终获得的cDNA用1.5x Axygen磁珠纯化并洗脱至50ul。
步骤3 在cDNA上连接Ω双链接头序列。
所述Ω双链接头序列由top序列和bottom序列组成，其中所述top序列为：
SEQ ID NO. 11: CAGAGGTCAGCTTCGGGCTGCTGGTGACAAAGCCCGATCGCTCGAGCTCG
所述buttom序列为：
SEQ ID NO. 22: AGCGATCACCTCTG
反应体系：
CPE cDNA 50 ul
Ligation buffer(10x) 8 ul
T4 ligase(5U/ul) 2 ul
Adapter 1(10uM) 10 ul
H2O 10 ul
反应程序：37°C 1hr, 65°C 15min, 4°C 永久。
DcDNA用1.5x Axygen磁珠纯化并洗脱至10ul。
步骤4 PCR
PCR引物为：
SEQ ID NO. 23: AGACAAGCTCGAGCTCGAGCGATCGGGCTT
SEQ ID NO. 24: TCCTAAGACCGCTTGGCCTCCGACT
反应体系：
Kappa 2x master mix 12.5 ul
Lig DNA 10 ul
SEQ ID NO.7 (10uM) 1 ul
SEQ ID NO.8 (10uM) 1 ul
H2O 0.5 ul
反应程序：
DNA用1x Axygen磁珠纯化并洗脱至20ul。
实施例3
步骤1 按照本领域常规方法，从待检者血液里提取总RNA。
步骤2 利用反转引物序列将步骤1获得的RNA延伸成cDNA，通过反应条件控制延伸长度。
所述反转引物序列为：
SEQ ID NO.3:GAATGGACTCCTCTGCCACTGGATTGCTAAGTAGTCGGAGGCCAAGCGGTCT。
反应体系为：
RNA (200ng) X ul
5x反转录缓冲液 5 ul
dNTP(10Mm) 1 ul
SEQ ID NO.1(20uM) 3 ul
Superscript II RT 1 ul
ddH2O (40-X) ul
反应程序为：
4°C 1min, 42°C 30min, 70°C 8min, 4°C 永久。
最终获得的cDNA用1.5x Axygen磁珠纯化并洗脱至50ul。
步骤3 在cDNA上连接Ω双链接头序列。
所述Ω双链接头序列由top序列和bottom序列组成，其中所述top序列为：
SEQ ID NO. 12: CAGAGGTCAGCTTCGGGCTGCACCTAGACAAGCCCGATCGCTCGAGCTCG
所述buttom序列为：
SEQ ID NO. 22: AGCGATCACCTCTG
反应体系：
CPE cDNA 50 ul
Ligation buffer(10x) 8 ul
T4 ligase(5U/ul) 2 ul
Adapter 1(10uM) 10 ul
H2O 10 ul
反应程序：37°C 1hr, 65°C 15min, 4°C 永久。
DcDNA用1.5x Axygen磁珠纯化并洗脱至10ul。
步骤4 PCR
PCR引物为：
SEQ ID NO. 23: AGACAAGCTCGAGCTCGAGCGATCGGGCTT
SEQ ID NO. 24: TCCTAAGACCGCTTGGCCTCCGACT
反应体系：
Kappa 2x master mix 12.5 ul
Lig DNA 10 ul
SEQ ID NO.7 (10uM) 1 ul
SEQ ID NO.8 (10uM) 1 ul
H2O 0.5 ul
反应程序：
DNA用1x Axygen磁珠纯化并洗脱至20ul。
实施例4
步骤1 按照本领域常规方法，从待检者血液里提取总RNA。
步骤2 利用反转引物序列将步骤1获得的RNA延伸成cDNA，通过反应条件控制延伸长度。所述反转引物序列为：
SEQ ID NO.4:GAATGGACTCCTCTGCCACTGGATCTAATCGAAGTCGGAGGCCAAGCGGTCT。
反应体系为：
RNA (200ng) X ul
5x反转录缓冲液 5 ul
dNTP(10Mm) 1 ul
SEQ ID NO.1(20uM) 3 ul
Superscript II RT 1 ul
ddH2O (40-X) ul
反应程序为：
4°C 1min, 42°C 30min, 70°C 8min, 4°C 永久。
最终获得的cDNA用1.5x Axygen磁珠纯化并洗脱至50ul。
步骤3 在cDNA上连接Ω双链接头序列。
所述Ω双链接头序列由top序列和bottom序列组成，其中所述top序列为：
SEQ ID NO. 13: CAGAGGTCAGCTTCGGGCTGCGGCAAACAAAGCCCGATCGCTCGAGCTCG
所述buttom序列为：
SEQ ID NO. 22: AGCGATCACCTCTG
反应体系：
CPE cDNA 50 ul
Ligation buffer(10x) 8 ul
T4 ligase(5U/ul) 2 ul
Adapter 1(10uM) 10 ul
H2O 10 ul
反应程序：37°C 1hr, 65°C 15min, 4°C 永久。
DcDNA用1.5x Axygen磁珠纯化并洗脱至10ul。
步骤4 PCR
PCR引物为：
SEQ ID NO. 23: AGACAAGCTCGAGCTCGAGCGATCGGGCTT
SEQ ID NO. 24: TCCTAAGACCGCTTGGCCTCCGACT
反应体系：
Kappa 2x master mix 12.5 ul
Lig DNA 10 ul
SEQ ID NO.7 (10uM) 1 ul
SEQ ID NO.8 (10uM) 1 ul
H2O 0.5 ul
反应程序：
DNA用1x Axygen磁珠纯化并洗脱至20ul。
实施例5 （对比例）
步骤同实施例1-4，其中接头序列替换为现有技术已知的线性双链Y接头序列，其序列如下所示：
Top：
SEQ ID NO.25:Caagcagaagacggcatacgagattatacggcgtctcgtgggctgg
Buttom:
SEQ ID NO.26:aatgatacggcgaccaccgagatctacactagctacttcgtcgccagcgtc
实验结果：
1、电泳结果：
实施例1-5的电泳结果如图2所示，Lane 4亮度明显高于Lane1-3 and Lane 5。根据电泳结果可知本发明所用的Ω接头连接效率显著高于Y接头。
2、测序多样性：
如下表所示，本发明的欧米伽接头在对患者进行微小残留病相关基因测序过程中，在Reads数目接近的情况下，获得的unique reads数量远远多于普通Y接头，说明使用本发明的Ω接头序列进行测序检测到的基因多样性更高，这使得最终的鉴定结果更为准确，可有效避免假阳性结果或漏检。
显然，本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样，倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变型在内。
Claims (4)
1.一种检测微小残留病的Ω双链接头，其特征在于，所述Ω双链接头由top序列和bottom序列组成：
其中，所述top序列选自SEQ ID NO. 10-21任一所示的序列，所述bottom序列为SEQ IDNO. 22所示的序列。
2.一种检测微小残留病的试剂盒，所述试剂盒含有如权利要求1所述的Ω双链接头。
3.如权利要求1所述的Ω双链接头在制备用于检测微小残留病的试剂中的应用，其特征在于，所述试剂的使用方法为：
步骤1 按照本领域常规方法，从待检者血液里提取总RNA；
步骤2 利用反转引物序列将步骤1获得的RNA延伸成cDNA，通过反应条件控制延伸长度；
步骤3 在cDNA上连接所述Ω双链接头序列；
步骤4 PCR。
4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述反转引物序列选自SEQ ID NO.1-9任一所示序列。
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|---|---|---|---|
| CN202010801573.XA CN112210595A (zh) | 2020-08-11 | 2020-08-11 | 一种检测微小残留病的方法 |
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| CN202010801573.XA CN112210595A (zh) | 2020-08-11 | 2020-08-11 | 一种检测微小残留病的方法 |
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|---|---|
| CN (1) | CN112210595A (zh) |
Citations (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102605070A (zh) * | 2012-03-19 | 2012-07-25 | 中国人民解放军第二军医大学 | 淋巴细胞基因重排克隆性检测试剂盒及其检测方法 |
| CN105154440A (zh) * | 2015-08-14 | 2015-12-16 | 深圳市瀚海基因生物科技有限公司 | 一种基于高通量测序构建白血病微小残留病灶tcr文库的多重pcr引物和方法 |
| WO2016078096A1 (zh) * | 2014-11-21 | 2016-05-26 | 深圳华大基因科技有限公司 | 使用鼓泡状接头元件构建测序文库的方法 |
| CN106978479A (zh) * | 2016-12-23 | 2017-07-25 | 孙涛 | 一种基于高通量测序检测t细胞白血病微小残留病的方法 |
| CN107893068A (zh) * | 2017-10-20 | 2018-04-10 | 重庆天科雅生物科技有限公司 | 一种构建人TCRbetaCDR3区文库的方法 |
| CN108060191A (zh) * | 2017-11-07 | 2018-05-22 | 深圳华大基因科技有限公司 | 一种双链核酸片段加接头的方法、文库构建方法和试剂盒 |
| WO2018218332A1 (en) * | 2017-05-30 | 2018-12-06 | Of Health Network University | Hybrid-capture sequencing for determining immune cell clonality |
| CN109554440A (zh) * | 2018-12-26 | 2019-04-02 | 山东艾克韦生物技术有限公司 | 多重引物组及利用该引物组基于高通量测序构建人类t细胞免疫组库的方法 |
| CN109680062A (zh) * | 2018-12-18 | 2019-04-26 | 杭州艾沐蒽生物科技有限公司 | 一种检测微小残留病mrd的方法 |
| CN110246539A (zh) * | 2019-04-15 | 2019-09-17 | 成都益安博生物技术有限公司 | 一种免疫力水平评估的方法及装置 |
| CN111363783A (zh) * | 2018-12-26 | 2020-07-03 | 武汉康测科技有限公司 | 一种基于特有识别序列的t细胞受体库高通量测序文库构建及测序数据分析方法 |
-
2020
- 2020-08-11 CN CN202010801573.XA patent/CN112210595A/zh active Pending
Patent Citations (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102605070A (zh) * | 2012-03-19 | 2012-07-25 | 中国人民解放军第二军医大学 | 淋巴细胞基因重排克隆性检测试剂盒及其检测方法 |
| WO2016078096A1 (zh) * | 2014-11-21 | 2016-05-26 | 深圳华大基因科技有限公司 | 使用鼓泡状接头元件构建测序文库的方法 |
| CN105154440A (zh) * | 2015-08-14 | 2015-12-16 | 深圳市瀚海基因生物科技有限公司 | 一种基于高通量测序构建白血病微小残留病灶tcr文库的多重pcr引物和方法 |
| CN106978479A (zh) * | 2016-12-23 | 2017-07-25 | 孙涛 | 一种基于高通量测序检测t细胞白血病微小残留病的方法 |
| WO2018218332A1 (en) * | 2017-05-30 | 2018-12-06 | Of Health Network University | Hybrid-capture sequencing for determining immune cell clonality |
| CN107893068A (zh) * | 2017-10-20 | 2018-04-10 | 重庆天科雅生物科技有限公司 | 一种构建人TCRbetaCDR3区文库的方法 |
| CN108060191A (zh) * | 2017-11-07 | 2018-05-22 | 深圳华大基因科技有限公司 | 一种双链核酸片段加接头的方法、文库构建方法和试剂盒 |
| CN109680062A (zh) * | 2018-12-18 | 2019-04-26 | 杭州艾沐蒽生物科技有限公司 | 一种检测微小残留病mrd的方法 |
| CN109554440A (zh) * | 2018-12-26 | 2019-04-02 | 山东艾克韦生物技术有限公司 | 多重引物组及利用该引物组基于高通量测序构建人类t细胞免疫组库的方法 |
| CN111363783A (zh) * | 2018-12-26 | 2020-07-03 | 武汉康测科技有限公司 | 一种基于特有识别序列的t细胞受体库高通量测序文库构建及测序数据分析方法 |
| CN110246539A (zh) * | 2019-04-15 | 2019-09-17 | 成都益安博生物技术有限公司 | 一种免疫力水平评估的方法及装置 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| M A TURCHANINOVA: "High-quality full-length immunoglobulin profiling with unique molecular bacroding", 《NATURE PROTOCOL》 * |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20210112 |
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