CN112175039A - 一种绿色、广谱的蛋白质交联方法 - Google Patents
一种绿色、广谱的蛋白质交联方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN112175039A CN112175039A CN201911246752.5A CN201911246752A CN112175039A CN 112175039 A CN112175039 A CN 112175039A CN 201911246752 A CN201911246752 A CN 201911246752A CN 112175039 A CN112175039 A CN 112175039A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- protein
- collagen
- cross
- linked
- solution
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title claims abstract description 116
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims abstract description 116
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 51
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 title claims abstract description 47
- 239000000463 material Substances 0.000 claims abstract description 43
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 19
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 claims abstract description 12
- 239000002131 composite material Substances 0.000 claims abstract description 5
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 claims description 113
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 claims description 113
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 claims description 113
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 claims description 108
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 38
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims description 15
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 claims description 13
- 108010076119 Caseins Proteins 0.000 claims description 13
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 claims description 13
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 claims description 13
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 claims description 13
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 claims description 13
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 claims description 13
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 claims description 13
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 claims description 13
- 239000004365 Protease Substances 0.000 claims description 13
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 claims description 13
- 239000005018 casein Substances 0.000 claims description 13
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 claims description 13
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 claims description 13
- 229940055729 papain Drugs 0.000 claims description 13
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 claims description 13
- 230000001678 irradiating effect Effects 0.000 claims description 12
- QCVGEOXPDFCNHA-UHFFFAOYSA-N 5,5-dimethyl-2,4-dioxo-1,3-oxazolidine-3-carboxamide Chemical compound CC1(C)OC(=O)N(C(N)=O)C1=O QCVGEOXPDFCNHA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 235000014103 egg white Nutrition 0.000 claims description 10
- 210000000969 egg white Anatomy 0.000 claims description 10
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 claims description 9
- 230000008439 repair process Effects 0.000 claims description 9
- 102000011632 Caseins Human genes 0.000 claims description 7
- 239000012876 carrier material Substances 0.000 claims description 7
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 7
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 7
- 230000002439 hemostatic effect Effects 0.000 claims description 7
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 claims description 7
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 claims description 7
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 claims description 6
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 claims description 6
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 claims description 5
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 claims description 5
- 239000002473 artificial blood Substances 0.000 claims description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 3
- 230000003592 biomimetic effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 8
- -1 silver ions Chemical class 0.000 abstract description 8
- 239000012620 biological material Substances 0.000 abstract description 7
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 abstract description 4
- 230000003385 bacteriostatic effect Effects 0.000 abstract description 3
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 abstract description 3
- 229910052709 silver Inorganic materials 0.000 abstract description 3
- 239000004332 silver Substances 0.000 abstract description 3
- 231100000481 chemical toxicant Toxicity 0.000 abstract description 2
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 abstract description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 81
- SQGYOTSLMSWVJD-UHFFFAOYSA-N silver(I) nitrate Inorganic materials [Ag+].[O-]N(=O)=O SQGYOTSLMSWVJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 48
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 45
- 238000003917 TEM image Methods 0.000 description 29
- 238000001878 scanning electron micrograph Methods 0.000 description 26
- 238000002411 thermogravimetry Methods 0.000 description 13
- 101710134784 Agnoprotein Proteins 0.000 description 12
- 238000004833 X-ray photoelectron spectroscopy Methods 0.000 description 10
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 10
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- FOIXSVOLVBLSDH-UHFFFAOYSA-N Silver ion Chemical compound [Ag+] FOIXSVOLVBLSDH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000012295 chemical reaction liquid Substances 0.000 description 8
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 8
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 8
- 238000000825 ultraviolet detection Methods 0.000 description 7
- 238000010382 chemical cross-linking Methods 0.000 description 6
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 6
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 6
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 6
- 239000011664 nicotinic acid Substances 0.000 description 6
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 6
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 6
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 6
- 210000004087 cornea Anatomy 0.000 description 5
- 239000003431 cross linking reagent Substances 0.000 description 5
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 description 5
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 5
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical group O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 4
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 4
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 3
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 3
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 3
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 3
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 3
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 3
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 3
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 238000002441 X-ray diffraction Methods 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 239000000022 bacteriostatic agent Substances 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 2
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 2
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 2
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 2
- 238000005286 illumination Methods 0.000 description 2
- 238000001000 micrograph Methods 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 238000001757 thermogravimetry curve Methods 0.000 description 2
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000016942 Elastin Human genes 0.000 description 1
- 108010014258 Elastin Proteins 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N Silicon Chemical compound [Si] XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010073771 Soybean Proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 238000006065 biodegradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 229920001222 biopolymer Polymers 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000011449 brick Substances 0.000 description 1
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 description 1
- 210000000845 cartilage Anatomy 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 1
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 210000004207 dermis Anatomy 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 description 1
- 229920002549 elastin Polymers 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 210000003709 heart valve Anatomy 0.000 description 1
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 1
- 238000002188 infrared transmission spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 210000003041 ligament Anatomy 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 230000005499 meniscus Effects 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000002107 myocardial effect Effects 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000956 nontoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 230000004952 protein activity Effects 0.000 description 1
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 1
- 229910052710 silicon Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010703 silicon Substances 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 235000019710 soybean protein Nutrition 0.000 description 1
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 210000002435 tendon Anatomy 0.000 description 1
- 238000007669 thermal treatment Methods 0.000 description 1
- 239000002407 tissue scaffold Substances 0.000 description 1
- 238000009281 ultraviolet germicidal irradiation Methods 0.000 description 1
- 238000004804 winding Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/78—Connective tissue peptides, e.g. collagen, elastin, laminin, fibronectin, vitronectin or cold insoluble globulin [CIG]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/107—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length by chemical modification of precursor peptides
- C07K1/1072—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length by chemical modification of precursor peptides by covalent attachment of residues or functional groups
- C07K1/1075—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length by chemical modification of precursor peptides by covalent attachment of residues or functional groups by covalent attachment of amino acids or peptide residues
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08H—DERIVATIVES OF NATURAL MACROMOLECULAR COMPOUNDS
- C08H1/00—Macromolecular products derived from proteins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08H—DERIVATIVES OF NATURAL MACROMOLECULAR COMPOUNDS
- C08H1/00—Macromolecular products derived from proteins
- C08H1/06—Macromolecular products derived from proteins derived from horn, hoofs, hair, skin or leather
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Materials For Medical Uses (AREA)
Abstract
本发明属于医用生物材料技术领域，具体涉及一种绿色、广谱的蛋白质交联方法。所述方法采用复合波长的可见光光源照射含有蛋白质和银离子的混合溶液，即可获得形貌均一的交联蛋白材料。与传统的蛋白质交联方法相比，该制备方法不涉及有毒化学试剂，绿色环保；该方法可广谱地交联多种蛋白质；该制备方法能够最大程度地保证蛋白质的原有活性；该制备方法还具有步骤简单、易于操作等优势；并且以该方法制备的交联蛋白具有良好的生物活性和抑菌性能，应用前景巨大。
Description
技术领域
本发明属于医用生物材料技术领域，具体涉及一种绿色、广谱的蛋白质交联方法。
背景技术
蛋白质生物材料在组织工程领域中，可作为各组织及器官替代物的基底材料——砖块，具有生物活性及生物可降解性，能够修复、维持并改善受损组织，可用于伤口敷料、仿生皮肤、心脏血管组织(如血管，心脏阀门，心肌补丁等)、肌肉骨骼组织(如软骨，肌腱，韧带，半月板，骨等)、皮肤修复支架等组织工程领域及再生组织支架领域[1]。
但是，目前在蛋白质生物材料中所使用的蛋白质等生物活性材料的力学性能较差，不能为蛋白质生物材料提供足够的结构支撑，无法达到生物医学应用中所需要的力学性质和生物降解速率，限制了其在生物医用材料、组织工程等方面的应用。例如，中国专利CN105936671A指出未改性的胶原往往存在热稳定性差、降解速率过快和机械强度低、易变性等缺点，在很多情况下不能满足使用要求；中国专利CN103333508A指出未经交联的胶原蛋白在体内的降解速度较快，存留时间比较短，因此也限制了它在填充材料方向的应用。所以，在应用蛋白质前，往往需要对蛋白质进行一步或多步的交联，通过蛋白质交联技术，可以提高蛋白质的热稳定性和机械强度，降低包括胶原蛋白在内的多种生物活性蛋白质的降解速率，可广泛用于止血材料、药物缓释载体材料、组织工程支架材料、皮肤替代物、骨移植材料、角膜移植材料等多领域。
其中，蛋白质交联是指将两个或多个蛋白分子之间通过共价键结合以提高蛋白材料的力学性质，如韧性、抗拉伸及抗冲击，目前常用的交联方法主要包括化学交联法、酶交联法、高温热处理交联法、冷冻交联法、重度脱水交联法和紫外光(UV)照射交联法等，但是上述方法存在以下问题：①化学交联法需要添加化学交联剂，其中常用的化学交联剂为戊二醛(GA)或碳二酰亚胺(EDC)，具有一定的毒性，对环境不友好，并且在蛋白质交联过程中引用化学交联剂时，残留试剂有潜在的生物毒性，例如，中国专利CN101005865A以戊二醛进行交联，但产品中会有高浓度的戊二醛残留，会引起强烈的生物毒性从而危害人体健康；②高温交联法会使蛋白质功能结构发生变化甚至变性，丧失其生物活性，一般仅用于凝胶的交联，不适用于蛋白质的交联，例如中国专利CN109248337A公开了一种人工真皮修复材料的制备方法，需要在105℃高温真空条件下进行高温交联24h，但是，105℃高温容易导致蛋白结构和性能的破坏；③UV照射法一般需要添加光诱导剂，且交联蛋白质的范围有限；④重度脱水法也需要高温处理，容易导致蛋白活性的丧失；⑤酶交联法只适用于特定结构的蛋白质，广谱性较差，且中国专利CN109908405A指出一些酶交联剂因交联性能也使制备的骨支架材料出现力学性能差，易溶胀等缺点；⑥冷冻交联法的交联效果差，一般需要与化学交联法等配合进行，适用于多孔蛋白材料的制备[2]。
因此，非常有必要开发一种简单、易控、安全、绿色环保、广谱的蛋白质通用交联方法。发明人意外发现，用可见光(380-780nm)光源照射蛋白质和银离子的混合溶液，可制备出形貌均一、结构稳定的交联蛋白材料，该方法与其他方法相比，可以适用于多种蛋白质的交联，具有广谱性，且交联效果良好；制备的交联蛋白质，本身就具有良好的抑菌性能，不需额外添加其他抑菌剂；该方法具有条件温和、绿色环保，既能保持蛋白的生物活性，又可显著改善蛋白的力学性能，制备的交联蛋白可用于制备生物活性和力学性能同时兼备的止血材料、药物缓释载体材料、组织工程支架材料、人工皮肤、仿生牙齿、骨修复材料、角膜移植材料等。
参考文献
[1]Miranda-Nieves,David,Chaikof,Elliot L.Collagen and ElastinBiomaterials for the Fabrication of Engineered Living Tissues[J].AcsBiomaterials Science&Engineering:acsbiomaterials.6b00250.
[2]毕斌斌,林巧佳,郑培涛,et al.冷冻方式对醛交联大豆蛋白多孔材料结构及吸附特性的影响[J].农业工程学报,2016,v.32；No.284(07):317-322.
发明内容
针对上述技术问题，本发明的目的在于提供一种蛋白质的交联方法，所述方法为：用波长范围为380-780nm的复合波长光源或单一波长光源照射含有蛋白质和Ag+的混合溶液。
优选地，所述混合溶液中Ag+和蛋白质的浓度比为1:1-100。
优选地，所述混合溶液中Ag+和蛋白质的浓度比为1:10。
优选地，所述的照射温度为0-37℃。
优选地，所述照射时间为18min-24h。
优选地，所述照射时间为12h。
优选地，所述蛋白质包括胶原蛋白、牛血清白蛋白、人血清白蛋白、鸡蛋清白蛋白、酪蛋白、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶。
优选地，所述的蛋白质为胶原蛋白。
本发明的另一目的在于提供一种制备交联蛋白的方法，所述方法为：用波长范围为380-780nm的复合波长光源或单一波长光源照射含有蛋白质和Ag+的混合溶液，反应后离心，即得交联蛋白质。
优选地，所述混合溶液中Ag+和蛋白质的浓度比为1:1-100。
优选地，所述混合溶液中Ag+和蛋白质的浓度比为1:10。
优选地，所述的反应温度为0-37℃。
优选地，所述反应时间为18min-24h。
优选地，所述反应时间为12h。
优选地，所述蛋白质包括胶原蛋白、牛血清白蛋白、人血清白蛋白、鸡蛋清白蛋白、酪蛋白中、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶。
优选地，所述的蛋白质为胶原蛋白。
本发明的另一目的在于提供一种通过上述方法制备获得的交联蛋白质。
本发明的另一目的在于提供一种交联蛋白质在制备止血材料、药物缓释载体材料、组织工程支架材料、人工皮肤、仿生牙齿、人工血管、骨修复材料、角膜移植材料中的应用。
本发明的有益效果是：①本发明提供的方法不涉及有毒化学试剂，绿色环保；②本发明所述方法对胶原蛋白、牛血清白蛋白、人血清白蛋白、鸡蛋清白蛋白、酪蛋白，胃蛋白酶、木瓜蛋白酶等多种蛋白均具有良好的交联作用，适用广谱；③本发明所述方法可以最大程度的保证蛋白的原有活性，且制备的交联蛋白形貌均一、性质稳定；④本发明所述方法制备的交联蛋白质，本身具有良好的抑菌性能，不需额外添加其他抑菌剂；⑤本发明所述方法简单方便，易于操作等优点，应用前景巨大；⑥本发明制备的交联蛋白质具有安全无毒、具有较好的生物活性和力学性能，可广泛用于制备止血材料、药物缓释载体材料、组织工程支架材料、人工皮肤、仿生牙齿、骨修复材料、角膜移植材料。
附图说明
图1交联胶原蛋白的紫外色谱(UV)图、能量散射X射线分析(EDX)图及X射线光电子能谱(XPS)图，其中图1A(图中a-g分别为实施例1制备的交联胶原蛋白a-g)为UV检测图，图1B为实施例1制备的交联胶原蛋白a的EDX检测图，图1C和图1D为实施例1制备的交联胶原蛋白a的XPS检测图；
图2交联胶原蛋白的扫描电镜(SEM)图，透射电镜(TEM)图，红外色谱(IR)图及热重分析(TGA)图，其中图2a为SEM图，图2b为图2a的局部放大图，图2c为TEM图，图2d为图2c的局部放大图，图2e为IR检测图，图2f为TGA检测图；
图3不同交联时间制备的交联胶原蛋白的TEM图，其中图3a-f的交联时间分别为18min，30min，1h，3h，6h，10h；
图4不同交联时间制备的胶原蛋白的UV图和TGA图，其中图4a为UV图，图4b为TGA图；
图5不同浓度的胶原蛋白制备的交联胶原蛋白的SEM图和TEM图，其中图5a-d(蛋白浓度分别为1mg/ml，3mg/ml，5mg/ml和7mg/ml)为SEM图，图5e-h(蛋白浓度分别为1mg/ml，3mg/ml，5mg/ml和7mg/ml)为TEM图；
图6不同浓度的AgNO3制备的交联胶原蛋白的SEM图和TEM图，其中图6a-d(AgNO3浓度分别为0.1mg/ml，0.2mg/ml，0.5mg/ml和1mg/ml)为SEM图，图6e-h(AgNO3浓度分别为0.1mg/ml，0.2mg/ml，0.5mg/ml和1mg/ml)为TEM图；
图7不同pH制备的交联胶原蛋白的SEM图和TEM图，其中图7a-d(pH分别为3，5，7，9)为SEM图，图7e-h(pH分别为3，5，7，9)为TEM图；
图8其他交联蛋白的SEM图和TEM图，其中图8A-F(蛋白分别为牛血清白蛋白、酪蛋白、人血清白蛋白、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶和鸡蛋清白蛋白)为TEM图，图8a-f(蛋白分别为牛血清白蛋白、酪蛋白、人血清白蛋白、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶和鸡蛋清白蛋白)为SEM。
具体实施方式
为使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体实施方式，进一步阐述本发明。但本发明的保护范围并不局限于以下实施例。
以下一个或多个实施例中所使用的方法如无特殊说明均为常规方法；所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
以下一个或多个实施例中所述的蛋白包括胶原蛋白(CL)，牛血清白蛋白(BSA)，酪蛋白(Casein)，人血清白蛋白(HSA)，胃蛋白酶(Pepsin)，木瓜蛋白酶(Papain)和鸡蛋清蛋白(Egg White)。
以下一个或多个实施例中所述的胶原蛋白(CL)属于生物高分子，是动物结缔组织中的主要成分，也是哺乳动物体内含量最多、分布最广的功能性蛋白，由三条具有左手螺旋结构的多肽链相互缠绕形成右手螺旋结构。
以下一个或多个实施例中所述的胶原蛋白(CL)可以为天然胶原蛋白、重组胶原蛋白以及仿生胶原蛋白等各种天然来源或其他方式制备的胶原蛋白。
以下一个或多个实施例中所述的Ag+溶液为AgNO3溶液，任何以其他可溶性银盐配置的Ag+溶液均可用于蛋白质的交联。
以下一个或多个实施例中所述的可见光的波长为380-782nm，所述的光源为白炽灯，但不局限于白炽灯，其光源还可以为日光灯、手电筒、探照灯等任何可以发出波长为380-782nm的可见光的光源中的任一种。
以下一个或多个实施例均在室温条件下进行，但是需要说明的是，本发明在不影响蛋白质稳定性和活性的基础上实现了蛋白质的交联，因此，在能够维持蛋白质稳定性和活性的温度(0-37℃)下均可发生蛋白质的交联。
以下一个或多个实施例中未对反应pH值进行特殊说明的，反应pH值均为7。
以下所有实施例中所涉及到蛋白交联的蛋白种类、浓度、反应时间、光照条件等具体反应参数如下表1所示。
表1
以下一个或多个实施例中所述的交联蛋白质是指蛋白质和Ag+在可见光照射下发生交联后的形成的产物。
以下一个或多个实施例中所制备的交联蛋白质具有良好的力学性能，可用于制备止血材料、药物缓释载体材料、组织工程支架材料、人工皮肤、仿生牙齿、人工血管、骨修复材料、角膜移植材料等医疗器械。
以下一个或多个实施例中所述的可见光光源的功率为48W，照射距离为20cm，但是实施例中可见光光源的功率和照射距离并不是唯一选择，可以根据不同的实验操作对可见光光源的功率和照射距离进行相应的调整。
以下一个或多个实施例中所述的UV为紫外色谱，EDX为能量散射X射线分析，XPS为X射线光电子能谱，SEM为扫描电镜，TEM为透射电镜，IR为红外色谱，TGA为热重分析。
以下一个或多个实施例中所述的UV检测为：取制备的交联蛋白样品500ul，稀释至3ml，进行UV检测；所述EDX检测为：取制备的交联蛋白样品500ul，稀释至3ml，进行EDX检测；所述XPS检测为：取适量的交联蛋白样品冻干后，进行XPS检测；所述SEM检测为：取适量的交联蛋白反应液，滴于硅片上喷金，进行SEM测试；所述TEM检测为：取适量的交联蛋白反应液，滴加于铜网上晾干，进行TEM测试；所述IR检测为：取适量的交联蛋白样品冻干后，进行IR检测；所述TGA检测为：取适量的交联蛋白样品冻干后，进行TGA检测。
实施例1
1.1交联胶原蛋白的制备
胶原蛋白溶液的配置：将10mg胶原蛋白固体用1ml水溶解，配置成浓度为10mg/ml的胶原蛋白溶液，临用时用水稀释。
AgNO3溶液的配置：将100mg的AgNO3固体用1ml水溶解，配置成浓度为100mg/ml的AgNO3溶液，临用时用水稀释。
交联胶原蛋白的制备：
a.在室温下，于12孔板中加入胶原蛋白溶液，用功率为48W的可见光光源，在20cm距离下，照射胶原蛋白溶液，快速搅拌溶液并缓慢加入AgNO3溶液，得含5mg/ml胶原蛋白和0.5mg/ml AgNO3的终溶液，反应24h，得反应液a；
b.在室温下，于12孔板中加入胶原蛋白溶液，快速搅拌溶液并缓慢加入AgNO3溶液，得含5mg/ml胶原蛋白和0.5mg/ml AgNO3的终溶液，反应24h，得反应液b；
c.在室温下，于12孔板中加入胶原蛋白溶液，用功率为48W的可见光光源，在20cm距离下，照射胶原蛋白溶液，快速搅拌溶液并缓慢加入AgNO3溶液，得含5mg/ml胶原蛋白和0.5mg/mlAgNO3的终溶液，得反应液c；
d.在室温下，于12孔板中加入5mg/ml的胶原蛋白溶液，用功率为48W的可见光光源，在20cm距离下，照射胶原蛋白溶液24h，得反应液d；
e.在室温下，于12孔板中加入5mg/ml的胶原蛋白溶液，得反应液e；
f.在室温下，于12孔板中加入0.5mg/ml的AgNO3溶液，用功率为48W的可见光光源，在20cm距离下，照射AgNO3溶液24h，得反应液f；
g.在室温下，于12孔板中加入0.5mg/ml的AgNO3溶液，得反应液g。
交联蛋白的纯化：将上述反应液a-g于9500rpm离心，弃去上清液，留取沉淀，用去离子水洗涤离心3-5次，室温干燥后分别获得交联胶原蛋白a-g。
1.2交联胶原蛋白的结构检测
将交联胶原蛋白a-g分别进行UV检测；对交联胶原蛋白a进行EDX检测、XPS检测、SEM检测、TEM检测、IR检测及TGA检测。
UV检测结果如图1A所示(其中，图中a-g分别为上述制备的交联胶原蛋白a-g)，只有在胶原蛋白和Ag+同时存在，且在可见光光照条件下，反应体系在450nm左右出现明显的吸收峰，说明有银纳米粒子的形成；EDX检测如图1B所示，XPS检测如图1C和图1D所示，EDX及XPS检测峰进一步显示该条件下有银纳米粒子的生成；上述制备的交联胶原蛋白a的SEM、TEM、IR和TGA检测结果如图2所示，其中图2a为SEM图，图2b为图2a的局部放大图，图2c为TEM图，图2d为图2c的局部放大图；图2e为IR检测图，图2f为TGA检测图；SEM和TEM检测显示，反应液中有胶原纤维的生成；IR检测结果显示，胶原蛋白的三级结构仍然完整；TGA检测结果显示，反应体系中胶原蛋白占体系总量近一半；以上实验结果表明，只有在蛋白溶液、银离子溶液和可见光光照条件同时存在时，蛋白发生交联，且制备的交联蛋白的结构完整。
实施例2
2.1交联胶原蛋白的制备
胶原蛋白溶液和AgNO3溶液的配置如上述1.1所示。
交联胶原蛋白的制备：
在室温下，于12孔板中加入胶原蛋白溶液，用功率为48W的可见光光源，在20cm距离下，照射胶原蛋白溶液，快速搅拌溶液并缓慢加入AgNO3溶液，得含5mg/ml胶原蛋白和0.5mg/ml AgNO3的终溶液，分别反应18min，30min，60min，3h，6h和10h，得反应液。
交联蛋白的纯化：将上述反应液于9500rpm离心，弃去上清液，留取沉淀，用去离子水洗涤离心3-5次，室温干燥获得不同交联时间的交联胶原蛋白。
2.2交联胶原蛋白的结构检测
将上述交联胶原蛋白或反应液分别进行UV检测、TEM检测及TGA检测。
TEM检测结果如图3所示，不同交联时间的反应液中均有形貌均一的胶原纤维生成；UV检测结果如图4a所示，随着交联时间的延长，反应体系在450nm左右出现的吸收峰明显增高，说明随着交联时间的延长，银纳米粒子的形成逐渐增多；TGA检测如图4b所示，热重趋势线无变化，不同交联时间的反应体系中胶原蛋白占体系总量近一半；说明随着银纳米粒子的增多，体系中胶原纤维的含量也逐渐增加；以上结果说明，交联时间在18min以上均能形成交联胶原蛋白，且随着交联时间的延长，反应体系中胶原纤维的含量增多。
实施例3
3.1交联胶原蛋白的制备
胶原蛋白溶液和AgNO3溶液的配置如上述1.1所示。
交联胶原蛋白的制备：
在室温下，于12孔板中加入胶原蛋白溶液，用功率为48W的可见光光源，在20cm距离下，照射胶原蛋白溶液，快速搅拌溶液并缓慢加入AgNO3溶液，分别获得含不同浓度(1mg/ml、3mg/ml、5mg/ml、7mg/ml)胶原蛋白和0.5mg/mlAgNO3的终溶液，分别反应12h，得反应液。
交联蛋白的纯化：将上述反应液于9500rpm离心，弃去上清液，留取沉淀，用去离子水洗涤离心3-5次，室温干燥，获得不同胶原蛋白浓度的交联胶原蛋白。
3.2交联胶原蛋白的结构检测
将上述交联胶原蛋白或反应液分别进行TEM检测及SEM检测。
结果如图5所示，其中，图5a-d分别为胶原蛋白浓度为1mg/ml，3mg/ml，5mg/ml，7mg/ml的SEM图，图5e-h分别为胶原蛋白浓度为1mg/ml，3mg/ml，5mg/ml，7mg/ml的TEM图；结果显示，不同胶原蛋白浓度的反应液中均有形貌均一的胶原纤维生成，说明胶原蛋白浓度对于胶原蛋白交联的影响不大，在任何浓度下，均可形成形貌均一的胶原纤维。
实施例4
4.1交联胶原蛋白的制备
胶原蛋白溶液和AgNO3溶液的配置如上述1.1所示。
交联胶原蛋白的制备：
在室温下，于12孔板中加入胶原蛋白溶液，用功率为48W的可见光光源，在20cm距离下，照射胶原蛋白溶液，快速搅拌溶液并缓慢加入AgNO3溶液，得到含5mg/ml胶原蛋白和不同浓度(0.1mg/ml、0.2mg/ml、0.5mg/ml和1.0mg/ml)AgNO3的终溶液，分别反应12h，得反应液。
交联蛋白的纯化：将上述反应液于9500rpm离心，弃去上清液，留取沉淀，用去离子水洗涤离心3-5次，室温干燥，获得不同AgNO3浓度的交联胶原蛋白。
4.2交联胶原蛋白的结构检测
将上述交联胶原蛋白或反应液分别进行TEM检测及SEM检测。
结果如图6所示，其中，图6a-d分别为AgNO3浓度为0.1mg/ml，0.2mg/ml，0.5mg/ml，1mg/ml的SEM图，图6e-h分别为AgNO3浓度为0.1mg/ml，0.2mg/ml，0.5mg/ml，1mg/ml的TEM图；结果显示，不同AgNO3浓度的反应液中均有形貌均一的胶原纤维生成，说明AgNO3浓度对于胶原蛋白交联的影响不大，在任何浓度下，均可形成形貌均一的胶原纤维。
实施例5
5.1交联胶原蛋白的制备
胶原蛋白溶液和AgNO3溶液的配置如上述1.1所示。
交联胶原蛋白的制备：
分别调节胶原蛋白溶液pH至3，5，7和9，在室温下，于12孔板中加入不同pH值的胶原蛋白溶液，用功率为48W的可见光光源，在20cm距离下，照射胶原蛋白溶液，快速搅拌溶液并缓慢加入AgNO3溶液，得到含5mg/ml胶原蛋白和0.5mg/ml AgNO3的终溶液，分别反应12h，得反应液。
交联蛋白的纯化：将上述反应液于9500rpm离心，留取沉淀，用去离子水洗涤离心3-5次，室温干燥，获得不同pH反应的交联胶原蛋白。
5.2交联胶原蛋白的结构检测
将上述交联胶原蛋白或反应液分别进行TEM检测及SEM检测。
检测结果如图7所示，其中，图7a-d分别为pH为3，5，7，9时的SEM图，图7e-h分别pH为3，5，7，9时的TEM图，结果显示，不同pH反应液中均有形貌均一的胶原纤维生成，说明在不同pH反应体系下，均可形成交联胶原蛋白。
实施例6
6.1交联蛋白的制备
蛋白溶液和AgNO3溶液的配置如上述1.1所示，其中蛋白分别为BSA，Casein，HSA，Pepsin，Papain和Egg White。
交联蛋白的制备：
在室温下，分别于12孔板中加入上述蛋白溶液，用功率为48W的可见光光源，在20cm距离下，照射蛋白溶液，快速搅拌溶液并缓慢加入AgNO3溶液，得到含5mg/ml蛋白和0.5mg/ml AgNO3的终溶液，分别反应12h，得反应液。
交联蛋白的纯化：将上述反应液于9500rpm离心，弃去上清液，留取沉淀，用去离子水洗涤离心3-5次，室温干燥，获得蛋白种类不同的交联蛋白。
6.2交联蛋白的结构检测
将上述交联蛋白或反应液分别进行TEM检测及SEM检测。
检测结果如图8所示，其中，图8A-F分别为牛血清白蛋白(BSA)、酪蛋白(Casein)、人血清白蛋白(HSA)、胃蛋白酶(Pepsin)、木瓜蛋白酶(Papain)、鸡蛋清蛋白(Egg White)反应的TEM图，图8a-f分别为牛血清白蛋白(BSA)、酪蛋白(Casein)、人血清白蛋白(HSA)、胃蛋白酶(Pepsin)、木瓜蛋白酶(Papain)、鸡蛋清蛋白(Egg White)反应的SEM图，结果表明，不同蛋白的反应体系中均有形貌均一的纤维生产，说明该方法同样适用于其他蛋白的交联，具有广谱性。
综上，本发明通过蛋白质溶液和银离子溶液在可见光照射下交联获得了一种交联蛋白，该方法的条件温和，不需添加额外的交联剂，安全无毒；制备的交联蛋白具有良好的生物活性和抑菌性能，相比于其他交联方法制备的交联蛋白质，更适用于制备止血材料、药物缓释载体材料、组织工程支架材料、人工皮肤、仿生牙齿、人工血管、骨修复材料、角膜移植材料。
以上所述仅为本发明的个别示范性实施案例的细节，对于本领域的技术人员来说，本发明在实际应用过程中根据具体的制备条件可以有各种更改和变化，并不用于限制本发明。凡在本发明的精神和原则之内，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (11)
1.一种蛋白质的交联方法，其特征在于，所述方法为：用波长范围为380-780nm的复合波长光源或单一波长光源照射含有蛋白质和Ag+的混合溶液。
2.一种制备交联蛋白质的方法，其特征在于，所述方法为：用波长范围为380-780nm的复合波长光源或单一波长光源照射含有蛋白质和Ag+的混合溶液，反应后离心，即得交联蛋白质。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述混合溶液中Ag+和蛋白质的浓度比为1:1-100。
4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述混合溶液中Ag+和蛋白质的浓度比为1:10。
5.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述反应温度为0-37℃。
6.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述反应时间为18min-24h。
7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述反应时间为12h。
8.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的蛋白质包括胶原蛋白、牛血清白蛋白、人血清白蛋白、鸡蛋清白蛋白、酪蛋白、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶。
9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述的蛋白质为胶原蛋白。
10.根据权利要求2-9任一所述方法制备获得的交联蛋白质。
11.如权利要求10所述的交联蛋白质在制备止血材料、药物缓释载体材料、组织工程支架材料、人工皮肤、仿生牙齿、人工血管、骨修复材料、角膜移植材料中的应用。
Priority Applications (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201911246752.5A CN112175039B (zh) | 2019-12-08 | 2019-12-08 | 一种绿色、广谱的蛋白质交联方法 |
| PCT/CN2020/134395 WO2021115237A1 (zh) | 2019-12-08 | 2020-12-08 | 一种绿色、广谱的蛋白质交联方法 |
| US17/782,649 US20220389052A1 (en) | 2019-12-08 | 2020-12-08 | Green and broad-spectrum protein cross-linking method |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201911246752.5A CN112175039B (zh) | 2019-12-08 | 2019-12-08 | 一种绿色、广谱的蛋白质交联方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN112175039A true CN112175039A (zh) | 2021-01-05 |
| CN112175039B CN112175039B (zh) | 2021-08-31 |
Family
ID=73918852
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201911246752.5A Active CN112175039B (zh) | 2019-12-08 | 2019-12-08 | 一种绿色、广谱的蛋白质交联方法 |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20220389052A1 (zh) |
| CN (1) | CN112175039B (zh) |
| WO (1) | WO2021115237A1 (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114507364A (zh) * | 2022-02-15 | 2022-05-17 | 浙江大学 | 光固化酪蛋白水凝胶的制法及在止血和皮肤修复上的应用 |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113354839B (zh) * | 2020-08-26 | 2022-08-23 | 胶原蛋白(武汉)生物科技有限公司 | 一种胶原蛋白-银纳米粒子复合凝胶、制备方法及应用 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102698313A (zh) * | 2012-01-11 | 2012-10-03 | 北京大学 | 一种纳米银抗菌水凝胶及其制备方法 |
| CN104857551A (zh) * | 2015-06-18 | 2015-08-26 | 中国医学科学院生物医学工程研究所 | 一种含银抗菌敷料及制备方法 |
| WO2016028238A1 (en) * | 2014-08-22 | 2016-02-25 | Koç Üniversitesi | A ph responsive hybrid hydrogel and method of synthesis thereof |
| CN110452413A (zh) * | 2019-07-08 | 2019-11-15 | 南京中富先农生物科技有限公司 | 一种胶原蛋白交联剂组合物及其应用 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US9155799B2 (en) * | 2012-11-19 | 2015-10-13 | Mimedx Group, Inc. | Cross-linked collagen with at least one bound antimicrobial agent for in vivo release of the agent |
| WO2017139102A1 (en) * | 2016-02-11 | 2017-08-17 | Lifecell Corporation | Methods for stabilizing collagen-containing tissue products against enzymatic degradation |
| CN108752604B (zh) * | 2018-06-07 | 2021-02-02 | 北京大清生物技术股份有限公司 | 一种软组织填充材料及其制备方法与应用 |
-
2019
- 2019-12-08 CN CN201911246752.5A patent/CN112175039B/zh active Active
-
2020
- 2020-12-08 US US17/782,649 patent/US20220389052A1/en active Pending
- 2020-12-08 WO PCT/CN2020/134395 patent/WO2021115237A1/zh active Application Filing
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102698313A (zh) * | 2012-01-11 | 2012-10-03 | 北京大学 | 一种纳米银抗菌水凝胶及其制备方法 |
| WO2016028238A1 (en) * | 2014-08-22 | 2016-02-25 | Koç Üniversitesi | A ph responsive hybrid hydrogel and method of synthesis thereof |
| CN104857551A (zh) * | 2015-06-18 | 2015-08-26 | 中国医学科学院生物医学工程研究所 | 一种含银抗菌敷料及制备方法 |
| CN110452413A (zh) * | 2019-07-08 | 2019-11-15 | 南京中富先农生物科技有限公司 | 一种胶原蛋白交联剂组合物及其应用 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| HU ZHOU,ET AL.: "In-situ preparation of silver salts/collagen fiber hybrid composites and their photocatalytic and antibacterial activities", 《JOURNAL OF HAZARDOUS MATERIALS》 * |
| 梁淼等: "基于蛋白及其组装体的金属纳米复合材料构建", 《化工学报》 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114507364A (zh) * | 2022-02-15 | 2022-05-17 | 浙江大学 | 光固化酪蛋白水凝胶的制法及在止血和皮肤修复上的应用 |
| CN114507364B (zh) * | 2022-02-15 | 2022-07-26 | 浙江大学 | 光固化酪蛋白水凝胶的制法及在止血和皮肤修复上的应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US20220389052A1 (en) | 2022-12-08 |
| WO2021115237A1 (zh) | 2021-06-17 |
| CN112175039B (zh) | 2021-08-31 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DE69828665T2 (de) | Verfahren zur Herstellung von vernetztem Material auf Kollagenbasis und daraus hergestellte bioprothetische Vorrichtungen | |
| US7163965B2 (en) | Process for producing porous composite materials | |
| WO2013105665A1 (ja) | コラーゲン構造体、およびコラーゲン構造体の製造方法 | |
| CN112175039B (zh) | 一种绿色、广谱的蛋白质交联方法 | |
| US20030036636A1 (en) | Process for preparing porous collagen matrix from connective tissue | |
| CN1711113A (zh) | 含有自体组织化磷灰石/胶原复合体的交联磷灰石/胶原多孔体及其制备方法 | |
| CN103223190B (zh) | ε-聚赖氨酸-DOHA原位凝胶粘合材料及其制备方法 | |
| US20090074837A1 (en) | Bioresorbable Calcium-Deficient Hydroxyapatite Hydrogel Composite | |
| EP4108265A1 (en) | Functionalized biological matrix material, preparation method therefor and use thereof | |
| CN110172163A (zh) | 一种基于物理-化学双交联制备丝素蛋白-酪胺改性透明质酸水凝胶材料的方法 | |
| CN115087470A (zh) | 一种功能化生物基质材料及其制备方法和应用 | |
| JP5453690B2 (ja) | コラーゲン・キトサン複合繊維状多孔体及びその製造方法 | |
| CN109762184B (zh) | 一种胶原蛋白水凝胶的制备方法 | |
| CN109453430A (zh) | 一种羟基磷灰石涂层的胶原蛋白-氧化石墨烯仿生材料及其制备方法 | |
| JPH10501706A (ja) | 細胞−ゲル | |
| CN112717202A (zh) | 一种金属@茶多酚纳米颗粒自组装生物组织及其制备方法 | |
| CN112940302B (zh) | 金属离子介导的胶原蛋白凝胶、制备方法及应用 | |
| CN110227181A (zh) | 一种丝素蛋白复合羟基磷灰石材料的制备方法及其应用 | |
| CN102757625A (zh) | 一种壳聚糖-聚乳酸多孔复合材料及其制备方法 | |
| CN109337383A (zh) | 一种胶原基自修复水凝胶及其制备方法 | |
| KR20130134447A (ko) | 신규한 나노섬유막 및 이의 제조방법 | |
| CN107354800B (zh) | 一种基于造纸法制备具有ecm结构的人体组织代用材料的方法 | |
| CN113638221B (zh) | 一种具有生物活性的聚丙烯腈纤维及其制备方法 | |
| CN114870082B (zh) | 一种高强度复合胶原膜及其制备方法和应用 | |
| CN117887134B (zh) | 一种水凝胶仿生矿化支架及其制备方法和应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| TR01 | Transfer of patent right | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20211011 Address after: No. 249, Donggang West Road, Chengguan District, Lanzhou City, Gansu Province 730000 Patentee after: Gansu Tianji Biotechnology Co.,Ltd. Address before: 730000 No. 222 Tianshui South Road, Chengguan District, Gansu, Lanzhou Patentee before: LANZHOU University |
|
| TR01 | Transfer of patent right | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20211102 Address after: 430030 a413, No. 74, Baofeng Second Road, Qiaokou District, Wuhan City, Hubei Province Patentee after: Collagen (Wuhan) Biotechnology Co.,Ltd. Address before: No. 249, Donggang West Road, Chengguan District, Lanzhou City, Gansu Province 730000 Patentee before: Gansu Tianji Biotechnology Co.,Ltd. |