CN109337383A - 一种胶原基自修复水凝胶及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种胶原基自修复水凝胶及其制备方法，其由胶原溶液与瓜尔胶和双醛瓜尔胶的混合溶液混合均匀后，再加入硼砂溶液搅拌混合后，经真空脱泡制得，通过本发明方案为制备自修复型胶原基水凝胶提供了一种可行途径和新思路，另外，本发明方案所制得的自愈性水凝胶能够更好的满足可注射水凝胶的要求，在注射过程中被破坏的结构可在生物体内重建；并且，自愈性水凝胶作为三维细胞培养载体有着独特的优势，能够更好地模拟细胞生存环境，有助于细胞间的接触信息传递，实现多种、多层细胞的共培养等。

Description

一种胶原基自修复水凝胶及其制备方法
技术领域
本发明涉及胶原材料技术领域，尤其是一种胶原基自修复水凝胶及其制备方法。
背景技术
胶原是动物体内含量最多的蛋白质，约占动物体内总蛋白质的三分之一。胶原具有的低抗原性、良好的生物相容性和生物降解性等优良性能使其在生物医学材料、药物输送载体、组织工程、化妆品等各领域获得到了广泛的应用。近年来，蛋白质水凝胶作为一类重要的生物材料被大量应用于生物医药和组织工程领域。蛋白质水凝胶是由蛋白质分子、水及交联剂组成的具有三维网络结构的天然基质。胶原水凝胶因与天然组织性质相似且能够生物降解，相关研究吸引了越来越多科研工作者的关注，特别是对环境具有智能响应性的凝胶，已成为软物质科研领域的热点。
目前，胶原水凝胶的制备方法主要有物理法与化学法。物理水凝胶是由于分子链缠结和离子、氢键、疏水相互作用而形成的网络结构，如通过胶原聚集自组装、循环冻融、与其它物质共混等方法获取胶原水凝胶。化学水凝胶主要通过在胶原分子内或分子间的活性基团之间生成交联键而形成交联网络结构，常见的化学交联剂有碳化二亚胺、戊二醛等。物理型胶原水凝胶，往往力学性能和成形性较差，热稳定性与耐酶作用能力等稳定性不佳；而通过化学交联制备的胶原水凝胶，上述缺点可得到明显改善。
以现有技术制备的胶原水凝胶目前仍存在受外力作用时易破损的缺陷。对于物理方法所制备的胶原水凝胶来说，由于其分子间作用力较弱，遭受外力时易被破坏；而通过共价键交联形成的水凝胶，其网络结构稳定而使得凝胶的力学性能得到改善，但这同时也束缚了分子链的流动性，增加其脆性，且受到破坏后难以自主修复。这种不自愈性使得植入生物体内的胶原水凝胶因受外力或其他因素受损而破裂，且难以用人工的方法修复，进而缩短水凝胶植入体寿命、危及病人健康和安全。
发明内容
基于现有技术的情况，本发明的目的在于提供一种制备简单、具有优良力学性能且自修复性好的胶原基自修复水凝胶及其制备方法。
胶原作为一种天然蛋白质，其分子侧链含有大量的活性氨基，具备了形成席夫碱的条件。因此，本发明提出一种自修复型水凝胶的制备方法，将生物相容性较好的瓜尔胶改造成为醛基化交联剂，再与胶原的活性氨基进行反应生成交联键，然后加入硼砂，与胶原和瓜尔胶产生可逆离子交联作用，从而获得具有优良力学性能的自愈性胶原水凝胶。自愈性水凝胶能够更好的满足可注射水凝胶的要求，在注射过程中被破坏的结构可在生物体内重建。另外，自愈性水凝胶作为三维细胞培养载体有着独特的优势，能够更好地模拟细胞生存环境，有助于细胞间的接触信息传递，实现多种、多层细胞的共培养等。
为了实现上述的技术目的，本发明采用的技术方案为：
一种胶原基自修复水凝胶，其由胶原溶液与瓜尔胶和双醛瓜尔胶的混合溶液混合均匀后，再加入硼砂溶液搅拌混合后，经真空脱泡制得。
一种胶原基自修复水凝胶的制备方法，其包括如下具体步骤：
（1）将胶原溶解于浓度为0.01～0.1 mol/L的醋酸溶液中，然后搅拌均匀后，制得质量浓度为10～30 mg/mL的胶原溶液；
（2）按瓜尔胶与双醛瓜尔胶质量比浓度为0.5～4∶1的比值进行分别移取瓜尔胶与双醛瓜尔胶且同时溶解于去离子水中，然后在30～80 ℃温度条件下搅拌混合2～6 h，制得总质量浓度为10～30 mg/mL的瓜尔胶/双醛瓜尔胶复配溶液；
（3）将硼砂溶解于PBS缓冲液中，制得质量浓度为0.05～0.2 mol/L的硼砂溶液；
（4）将等质量浓度步骤（1）制得的胶原溶液与步骤（2）制得的瓜尔胶/双醛瓜尔胶复配溶液按比例共混，使胶原溶液与瓜尔胶/双醛瓜尔胶复配溶液的质量比为4∶1并搅拌混合均匀，然后再依序加入浓度为0.2～0.4 mol/L且pH为8的PBS缓冲液、0.5～2 mol/L的氢氧化钠溶液及氯化钠，并使最终混合均匀后的PBS缓冲液浓度为0.05～0.1 mol/L、氢氧化钠浓度为0.04～0.16 mol/L、氯化钠浓度为0.05～0.2 mol/L；
（5）将步骤（3）制得的浓度为0.05～0.2 mol/L的硼砂溶液加入的步骤（4）制得的混合体系中，经搅拌处理0.5～3 h后，再进行真空脱泡处理，然后静置处理0.5～12 h后，制得胶原基自修复水凝胶。
进一步，步骤（4）于4～37 ℃的环境下操作。
进一步，步骤（5）中硼砂溶液中的四硼酸根离子在混合体系中的终浓度为0.5～2mol/L。
进一步，步骤（1）中所述的胶原由如下步骤方法制成：
1) 将动物皮切块后，再经绞碎处理，然后加入相当于其3%湿重的胃蛋白酶和0.1～0.5mol/L的醋酸进行混合，再将混合体系放入温度为4℃的恒温摇床中振荡提取处理，摇床转速为180 r/min，处理时间为48～72 h，作为一种实施例，可以将10 g绞碎牛皮置于1 L锥形瓶中，然后加入相当于其3%湿重的胃蛋白酶和500 mL浓度为0.1～0.5 mol/L的醋酸进行混合；
2）将振荡提取处理后的溶液进行依序离心、盐析和再次离心后，将离心所得固形物溶于0.1～0.5 mol/L的醋酸中，然后将溶解好的溶液装入透析袋中对去离子水透析处理48～72 h，最后将处理所得产物进行真空冷冻干燥处理72 h后，制得海绵状酸溶胶原。
进一步优选的，步骤1）所述的动物皮为牛皮、猪皮或鱼皮。
进一步优选的，步骤2）还包括将制得的海绵状酸溶胶原置于4 ℃的恒温干燥环境中避光保存。
作为一种实施例，进一步，步骤（2）中的双醛瓜尔胶由如下步骤方法制得：
1）将5～10g瓜尔胶溶解于50mL乙醇溶液中，然后加入40mL浓度为0.1～0.5mol/L的NaIO4溶液进行混合，然后在室温下避光反应12～24 h；
2）步骤1）反应完成后，往混合体系中再加入0.5～2 mL乙二醇溶液且在常温下搅拌混合0.5～2 h；然后将反应产物取出并用叔丁醇进行洗涤处理至净，再把洗净后的反应产物进行真空冷冻处理12～24 h，最后将冷冻处理所得产物进行研磨后制得双醛瓜尔胶。
优选的，步骤2）中叔丁醇进行洗涤处理的次数为3～5次。
优选的，步骤2）中所制得的双醛瓜尔胶的醛化度为4%～18%。
采用上述的技术方案，本发明与现有技术相比，其具有的有益效果为：本发明通过加入低醛化度的醛基化瓜尔胶（即双醛瓜尔胶），其醛基与胶原的氨基生成部分化学交联键，形成网络结构，使水凝胶具有一定的强度与成型性；再引入离子作用，与瓜尔胶及胶原的羟基、羧基等基团形成离子键，生成大量可逆的结合位点，赋予能量耗散机制，使凝胶具有较好的韧性与自修复性；本发明方案为制备自修复型胶原基水凝胶提供了一种可行途径和新思路，另外，本发明方案所制得的自愈性水凝胶能够更好的满足可注射水凝胶的要求，在注射过程中被破坏的结构可在生物体内重建；并且，自愈性水凝胶作为三维细胞培养载体有着独特的优势，能够更好地模拟细胞生存环境，有助于细胞间的接触信息传递，实现多种、多层细胞的共培养等。
附图说明
下面结合附图和具体实施方式对本发明做进一步的阐述：
图1为本发明胶原基自修复水凝胶的自修复演示效果图。
具体实施方式
一种胶原基自修复水凝胶的制备方法，其包括如下具体步骤：
（1）将胶原溶解于浓度为0.01～0.1 mol/L的醋酸溶液中，然后搅拌均匀后，制得质量浓度为10～30 mg/mL的胶原溶液；
（2）按瓜尔胶与双醛瓜尔胶质量比浓度为0.5～4∶1的比值进行分别移取瓜尔胶与双醛瓜尔胶且同时溶解于去离子水中，然后在30～80 ℃温度条件下搅拌混合2～6 h，制得总质量浓度为10～30 mg/mL的瓜尔胶/双醛瓜尔胶复配溶液；
（3）将硼砂溶解于PBS缓冲液中，制得质量浓度为0.05～0.2 mol/L的硼砂溶液；
（4）在4～37 ℃环境温度条件下，将等质量浓度步骤（1）制得的胶原溶液与步骤（2）制得的瓜尔胶/双醛瓜尔胶复配溶液按比例共混，使胶原溶液与瓜尔胶/双醛瓜尔胶复配溶液的质量比为4∶1并搅拌混合均匀，然后再依序加入浓度为0.2～0.4 mol/L且pH为8的PBS缓冲液、0.5～2 mol/L的氢氧化钠溶液及氯化钠，并使最终混合均匀后的PBS缓冲液浓度为0.05～0.1 mol/L、氢氧化钠浓度为0.04～0.16 mol/L、氯化钠浓度为0.05～0.2 mol/L；
（5）将步骤（3）制得的浓度为0.05～0.2 mol/L的硼砂溶液加入的步骤（4）制得的混合体系中，经搅拌处理0.5～3 h后，使硼砂溶液中的四硼酸根离子在混合体系中的终浓度为0.5～2 mol/L，继而再进行真空脱泡处理，然后静置处理0.5～12 h后，制得胶原基自修复水凝胶。
其中，步骤（1）中所述的胶原由如下步骤方法制成：
1) 将动物皮（所述的动物皮可以为牛皮、猪皮或鱼皮）切块后，再经绞碎处理，然后加入相当于其3%湿重的胃蛋白酶和0.1～0.5 mol/L的醋酸进行混合，再将混合体系放入温度为4℃的恒温摇床中振荡提取处理，摇床转速为180 r/min，处理时间为48～72 h，作为一种实施例，可以将10 g绞碎牛皮置于1 L锥形瓶中，然后加入相当于其3%湿重的胃蛋白酶和500 mL浓度为0.1～0.5 mol/L的醋酸进行混合；
2）将振荡提取处理后的溶液进行依序离心、盐析和再次离心后，将离心所得固形物溶于0.1～0.5 mol/L的醋酸中，然后将溶解好的溶液装入透析袋中对去离子水透析处理48～72 h，最后将处理所得产物进行真空冷冻干燥处理72 h后，制得海绵状酸溶胶原，所制得的海绵状酸溶胶原需置于4 ℃的恒温干燥环境中避光保存。
另外，步骤（2）中的双醛瓜尔胶由如下步骤方法制得：
1）将5～10g瓜尔胶溶解于50mL乙醇溶液中，然后加入40mL浓度为0.1～0.5mol/L的NaIO4溶液进行混合，然后在室温下避光反应12～24 h；
2）步骤1）反应完成后，往混合体系中再加入0.5～2 mL乙二醇溶液且在常温下搅拌混合0.5～2 h；然后将反应产物取出并用叔丁醇进行洗涤处理3～5次至净，再把洗净后的反应产物进行真空冷冻处理12～24 h，最后将冷冻处理所得产物进行研磨后制得双醛瓜尔胶，所制得的双醛瓜尔胶的醛化度为4%～18%。
图1示出了本发明胶原基自修复水凝胶的自修复演示效果图，可以通过将圆形的胶原基自修复水凝胶对半割裂，然后其中一半进行染色处理后，再将其重新贴合，静置处理0.5～10min后，用镊子可整体悬空夹起，且贴合后的水凝胶两部分不会发生脱离，另外其结合的接触界面消失，染料弥漫至未染色的另一半，通过该现象可以证明本发明的胶原基自修复水凝胶具有优良的自愈合性能。
实施例1
（1）将5g瓜尔胶溶解于50 mL乙醇中，加入40 mL浓度为0.1 mol/L的NaIO4溶液，室温下避光反应12 h；氧化反应完成后，向混合溶液中再加入0.5 mL乙二醇溶液终止反应，并在常温下搅拌0.5 h后；用叔丁醇洗涤反应产物3次，洗净后对其进行真空冷冻处理12 h，然后将处理所得产物进行研磨后得粉末状醛基化瓜尔胶，其醛化度为4%。
（2）将牛皮切成小块，放入绞肉机中绞碎，再将湿重约10g的绞碎牛皮放入1 L的锥形瓶中，加入相当于牛皮湿重3% 的胃蛋白酶和500 mL浓度为0.1 mol/L的醋酸，然后将其放入4 ℃恒温摇床中振荡提取，转速为180 r/min，时间48 h。振荡提取后的溶液依序经离心、盐析、再次离心后溶于0.1 mol/L的醋酸中，将溶解好的胶原溶液装入透析袋中对去离子水透析48 h，最后对处理所得的产物进行真空冷冻干燥处理72 h；经冷冻干燥完成制得海绵状酸溶胶原，然后置于4℃恒温干燥环境中避光保存。
（3）胶原溶液制备：将胶原海绵溶解于0.01mol/L的醋酸溶液中，搅拌均匀，制得质量浓度为10mg/mL的胶原溶液；
（4）瓜尔胶/双醛瓜尔胶复配溶液制备：移取瓜尔胶与双醛瓜尔胶（按质量比为1/2）将其同时溶解于去离子水中，然后在30 ℃条件下下搅拌约2 h，制得总质量浓度为10mg/mL的瓜尔胶/双醛瓜尔胶复配溶液；
（5）硼砂溶液制备：将硼砂溶解于pH为6.0的PBS缓冲液中，制得质量浓度为0.05 mol/L的硼砂溶液；
（6）在4℃下，将同等浓度步骤（3）制得的胶原溶液与步骤（4）制得的瓜尔胶/双醛瓜尔胶复配溶液按比例共混，使胶原溶液与瓜尔胶/双醛瓜尔胶复配溶液的质量比为4/1，搅拌均匀，然后加入0.2mol/L的pH=8的PBS缓冲液，0.5mol/L氢氧化钠溶液，及氯化钠，最终PBS的浓度为0.05mol/L，氢氧化钠的浓度为0.04mol/L，氯化钠浓度为0.05 mol/L，搅拌均匀，最后加入0.05mol/L的硼砂溶液（最终四硼酸根离子浓度为0.5mol/L），再次搅拌0.5h后，经真空脱泡和静置处理0.5 h，制得胶原基自修复水凝胶。
实施例2
（1）将10 g瓜尔胶溶于50 mL乙醇中，加入40 mL的0.5 mol/L的NaIO4溶液，于室温下避光反应24 h；氧化反应完成后，向产物中加入2 mL乙二醇溶液终止反应，常温下搅拌2 h；用叔丁醇洗涤反应产物5次，洗净后对其进行真空冷冻处理24 h，然后将处理所得的产物进行研磨后得粉末状醛基化瓜尔胶，其醛化度为8%；
（2）将牛皮切成小块，放入绞肉机中绞碎，将湿重约10 g的绞碎牛皮放入1 L 的锥形瓶中，加入相当于牛皮湿重3% 的胃蛋白酶和500 mL 浓度为0.5 mol/L的醋酸，然后将其放入4 ℃恒温摇床中振荡提取，转速为180 r/min，时间72 h。振荡提取后的溶液经离心、盐析、再次离心后溶于0.5 mol/L的醋酸中，将溶解好的胶原溶液装入透析袋中对去离子水透析72 h，最后对处理所得的产物进行真空冷冻干燥处理72 h；经冷冻干燥完成制得海绵状酸溶胶原，然后置于4 ℃恒温干燥环境中避光保存；
（3）胶原溶液制备：将胶原海绵溶解于0.1 mol/L的醋酸溶液中，搅拌均匀，制得质量浓度为30 mg/mL的胶原溶液；
（4）瓜尔胶/双醛瓜尔胶复配溶液制备：移取瓜尔胶与双醛瓜尔胶（质量比为4/1）将其同时溶解于去离子水中，然后在80 ℃下搅拌6 h，制得总质量浓度为30 mg/mL的瓜尔胶/双醛瓜尔胶复配溶液；
（5）硼砂溶液制备：将硼砂溶解于pH为8的PBS缓冲液中，制得质量浓度为0.2 mol/L的硼砂溶液；
（6）在37℃下，将同等浓度步骤（3）制得的胶原溶液与步骤（4）制得的瓜尔胶/双醛瓜尔胶复配溶液按比例共混，使胶原溶液与瓜尔胶/双醛瓜尔胶复配溶液的质量比为4/1，搅拌均匀；然后加入0.4 mol/L的pH为8的PBS缓冲液、2mol/L氢氧化钠溶液及氯化钠，最终PBS缓冲液的浓度为0.1 mol/L，氢氧化钠的浓度为0.16 mol/L，氯化钠浓度为0.2 mol/L，搅拌均匀后，再加入0.2 mol/L的硼砂溶液（最终四硼酸根离子浓度2 mol/L），再次搅拌3 h后，经真空脱泡和静置处理12 h，制得胶原基自修复水凝胶。
实施例3
（1）将1 g瓜尔胶溶液于100 mL去离子水中，搅拌均匀，然后加入50 mL的0.05 mol/L的NaIO4溶液，于室温下避光搅拌反应6 h；氧化反应完成后，向产物中加入1 mL乙二醇溶液终止反应，常温下搅拌1 h；用叔丁醇洗涤反应产物4次，洗净后对其进行真空冷冻处理16 h，然后将处理所得的产物进行研磨后得粉末状双醛瓜尔胶，其醛化度为18%；
（2）将牛皮切成小块，放入绞肉机中绞碎；将湿重约10g的绞碎牛皮放入1 L的锥形瓶中，加入相当于牛皮湿重3% 的胃蛋白酶和500 mL浓度为0.25 mol/L的醋酸，然后将其放入4 ℃恒温摇床中振荡提取，转速为180 r/min，时间60 h；振荡提取后的溶液经离心、盐析、再次离心后溶于0.25 mol/L的醋酸中，将溶解好的胶原溶液装入透析袋中对去离子水透析60 h，最后真空冷冻干燥处理72 h；
（3）胶原溶液制备：将胶原海绵溶解于0.05 mol/L的醋酸溶液中，搅拌均匀，制得质量浓度为20 mg/mL的胶原溶液；
（4）瓜尔胶/双醛瓜尔胶复配溶液制备：移取瓜尔胶与双醛瓜尔胶（质量比为1/1）将其同时溶解于去离子水中，然后在40 ℃下搅拌3 h，制得总质量浓度为20 mg/mL的瓜尔胶/双醛瓜尔胶复配溶液；
（5）硼砂溶液制备：将硼砂溶解于pH为7的PBS缓冲液中，制得质量浓度为0.1 mol/L的硼砂溶液；
（6）在20℃下，将同等浓度步骤（3）制得的胶原溶液与步骤（4）制得的瓜尔胶/双醛瓜尔胶复配溶液按比例共混，使胶原溶液与瓜尔胶/双醛瓜尔胶复配溶液的质量比为1/1，搅拌均匀；然后加入0.3 mol/L的pH=8的PBS缓冲液，1.0 mol/L氢氧化钠溶液及氯化钠，最终PBS缓冲液的浓度为0.075 mol/L，氢氧化钠的浓度为0.1 mol/L，氯化钠浓度为0.1 mol/L，搅拌均匀，最后加入0.1 mol/L的硼砂溶液（最终四硼酸根离子浓度为1.0 mol/L），再次搅拌2h后，经真空脱泡和静置处理6 h，制得胶原基自修复水凝胶。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依照本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆属于本发明的涵盖范围。

Claims (10)

1.一种胶原基自修复水凝胶，其特征在于：其由胶原溶液与瓜尔胶和双醛瓜尔胶的混合溶液混合均匀后，再加入硼砂溶液搅拌混合后，经真空脱泡制得。
2.根据权利要求1所述的一种胶原基自修复水凝胶的制备方法，其特征在于：其包括如下具体步骤：
（1）将胶原溶解于浓度为0.01～0.1 mol/L的醋酸溶液中，然后搅拌均匀后，制得质量浓度为10～30 mg/mL的胶原溶液；
（2）按瓜尔胶与双醛瓜尔胶质量比浓度为0.5～4∶1的比值进行分别移取瓜尔胶与双醛瓜尔胶且同时溶解于去离子水中，然后在30～80 ℃温度条件下搅拌混合2～6 h，制得总质量浓度为10～30 mg/mL的瓜尔胶/双醛瓜尔胶复配溶液；
（3）将硼砂溶解于PBS缓冲液中，制得质量浓度为0.05～0.2 mol/L的硼砂溶液；
（4）将等质量浓度步骤（1）制得的胶原溶液与步骤（2）制得的瓜尔胶/双醛瓜尔胶复配溶液按比例共混，使胶原溶液与瓜尔胶/双醛瓜尔胶复配溶液的质量比为4∶1并搅拌混合均匀，然后再依序加入浓度为0.2～0.4 mol/L的PBS缓冲液、0.5～2 mol/L的氢氧化钠溶液及氯化钠，并使最终混合均匀后的PBS缓冲液浓度为0.05～0.1 mol/L、氢氧化钠浓度为0.04～0.16 mol/L、氯化钠浓度为0.05～0.2 mol/L；
（5）将步骤（3）制得的浓度为0.05～0.2 mol/L的硼砂溶液加入的步骤（4）制得的混合体系中，经搅拌处理0.5～3 h后，再进行真空脱泡处理，然后静置处理0.5～12 h后，制得胶原基自修复水凝胶。
3.根据权利要求2所述的一种胶原基自修复水凝胶的制备方法，其特征在于：步骤（1）中所述的胶原由如下步骤方法制成：
1) 将动物皮切块后，再经绞碎处理，然后加入相当于其3%湿重的胃蛋白酶和0.1～0.5mol/L的醋酸进行混合，再将混合体系放入温度为4℃的恒温摇床中振荡提取处理，摇床转速为180 r/min，处理时间为48～72 h；
2）将振荡提取处理后的溶液进行依序离心、盐析和再次离心后，将离心所得固形物溶于0.1～0.5 mol/L的醋酸中，然后将溶解好的溶液装入透析袋中对去离子水透析处理48～72 h，最后将处理所得产物进行真空冷冻干燥处理72 h后，制得海绵状酸溶胶原。
4.根据权利要求3所述的一种胶原基自修复水凝胶的制备方法，其特征在于：步骤1）所述的动物皮为牛皮、猪皮或鱼皮。
5. 根据权利要求3所述的一种胶原基自修复水凝胶的制备方法，其特征在于：步骤2）还包括将制得的海绵状酸溶胶原置于4 ℃的恒温干燥环境中避光保存。
6.根据权利要求2所述的一种胶原基自修复水凝胶的制备方法，其特征在于：步骤（2）中的双醛瓜尔胶由如下步骤方法制得：
1）将5～10g瓜尔胶溶解于50mL乙醇溶液中，然后加入40mL浓度为0.1～0.5mol/L的NaIO4溶液进行混合，然后在室温下避光反应12～24 h；
2）步骤1）反应完成后，往混合体系中再加入0.5～2 mL乙二醇溶液且在常温下搅拌混合0.5～2 h；然后将反应产物取出并用叔丁醇进行洗涤处理至净，再把洗净后的反应产物进行真空冷冻处理12～24 h，最后将冷冻处理所得产物进行研磨后制得双醛瓜尔胶。
7.根据权利要求6所述的一种胶原基自修复水凝胶的制备方法，其特征在于：步骤2）中叔丁醇进行洗涤处理的次数为3～5次。
8.根据权利要求6所述的一种胶原基自修复水凝胶的制备方法，其特征在于：步骤2）中所制得的双醛瓜尔胶的醛化度为4%～18%。
9. 根据权利要求2所述的一种胶原基自修复水凝胶的制备方法，其特征在于：步骤（4）于4～37 ℃的环境下操作。
10. 根据权利要求2所述的一种胶原基自修复水凝胶的制备方法，其特征在于：步骤（5）中硼砂溶液中的四硼酸根离子在混合体系中的终浓度为0.5～2 mol/L。
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