CN112154151A - 治疗或预防冠状病毒科感染 - Google Patents

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CN112154151A CN202080002719.2A CN202080002719A CN112154151A CN 112154151 A CN112154151 A CN 112154151A CN 202080002719 A CN202080002719 A CN 202080002719A CN 112154151 A CN112154151 A CN 112154151A
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崔健
胡名龙
喻耀
赵阿龙
张发明
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Waterstone Pharmaceuticals Wuhan Co Ltd
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Abstract

在受试者中治疗或预防冠状病毒科感染的方法，包括施用治疗有效量的式I化合物或其立体异构体、互变异构体、N‑氧化物、溶剂合物、代谢产物、药学上可接受的盐或前药，并且冠状病毒科包括选自2019‑nCov病毒、HCov 229E病毒、SARS病毒、MERS病毒的至少一种，

Description

治疗或预防冠状病毒科感染
技术领域
本发明涉及医药技术领域，特别是涉及在受试者中治疗或预防冠状病毒科感染。
背景技术
世界卫生组织最近宣布严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-Cov-2)为国际关注的公共卫生突发事件。截至2020年6月1日，全世界有超过600万例确诊病例和370,000多例死亡病例。
冠状病毒科(也称为“冠状病毒”)是有包膜的正义单链RNA病毒家族。冠状病毒科在哺乳动物和鸟类中造成疾病。在人类中，病毒引起呼吸系统感染，包括普通感冒，其通常是轻微的，然而罕见形式如SARS(包括引起COVID-19的)和MERS可能致命。
因此，越来越需要研究和开发更有效的方法来治疗或预防冠状病毒科感染。
发明内容
以下仅是本发明的一些方面的概述，但本发明不限于此。本说明书的所有参考文献通过引用整体并入本文。当本说明书的公开内容与引文不同时，以本说明书的公开内容为准。
在研究和开发过程中，发明人惊奇地发现，WS-635(式(I)化合物)在多种实验测试中显示出对于治疗或预防冠状病毒科感染的显著高的功效和活性。
在本公开内容的一个方面，提供了在受试者中治疗或预防冠状病毒科感染的方法，包括向有此需要的受试者施用治疗有效量的式I化合物或其立体异构体、互变异构体、N-氧化物、溶剂合物、代谢产物、药学上可接受的盐或前药，
Figure BDA0002775106710000011
并且所述冠状病毒科包括选自2019-nCov病毒、HCov 229E病毒、SARS病毒、MERS病毒的至少一种。
在本公开内容的另一方面，提供了用于治疗或预防冠状病毒科病毒感染的药物组合物，包含式I化合物或其立体异构体、互变异构体、N-氧化物、溶剂合物、代谢产物、药学上可接受的盐或前药，
Figure BDA0002775106710000021
并且所述冠状病毒科包括选自2019-nCov病毒、HCov 229E病毒、SARS病毒、MERS病毒的至少一种。
在本公开内容的另一方面，提供了用于在受试者中治疗或预防冠状病毒科感染的式I化合物或其立体异构体、互变异构体、N-氧化物、溶剂合物、代谢产物、药学上可接受的盐或前药，
Figure BDA0002775106710000022
并且所述冠状病毒科包括选自2019-nCov病毒、HCov 229E病毒、SARS病毒、MERS病毒的至少一种。
在本公开内容的另一方面，提供了式I化合物或其立体异构体、互变异构体、N-氧化物、溶剂合物、代谢产物、药学上可接受的盐或前药在制备用于治疗或预防冠状病毒科感染的药物中的用途，
Figure BDA0002775106710000031
并且所述冠状病毒科包括选自2019-nCov病毒、HCov 229E病毒、SARS病毒、MERS病毒的至少一种。
前述内容仅总结了本文公开的某些方面，并且本质上无意于限制。通过下面的详细描述并通过本发明的实践，本发明的这些方面和其它方面以及另外的实施方案、特征和优点将变得明显。
附图说明
根据参考所附方案和附图的以下描述，本公开内容的实施方案的这些和其它方面以及优点将变得明显并且将更容易理解，其中：
图1显示了在细胞水平上WS-635对SARS-CoV-2冠状病毒的抑制作用；
图2显示了WS-635抗SARS-CoV-2活性结果；和
图3显示了WS-635抗人冠状病毒(HCoV)229E活性结果。
具体实施方式
定义
除非另有说明，否则本文中使用的以下术语和短语将具有以下含义：
“酯”是指化合物的任何酯，其中任何-COOH官能团的分子是具有取代基的-C(O)OR官能团，或其中任何分子-OH官能团是-OC(O)R官能团，其中R可形成稳定酯部分，酯部分是任何含碳基团，包括但不限于烷基、烯基、炔基、环烷基、环烷基烷基、芳基、芳基烷基、杂环基、杂环烷基及其取代的衍生物。
“药学上可接受的”是指适用于药物制剂，通常被认为是安全的，国家或州政府管理机构官方批准使用或在药典或其它公认的药物典籍中记载用于动物，特别是用于人。
“药学上可接受的载体”是指药学上可接受的稀释剂、佐剂、赋形剂或载体或其它组分，并且与本发明的化合物组合施用。
“药学上可接受的盐”是指可以增强其期望的药理活性盐。其与无机或有机酸的药学上可接受的盐包括酸加成盐、金属盐和胺盐。酸加成盐可以与无机酸和有机酸形成。
“前药”是指在施用时，作为自发的化学反应、酶催化的化学反应、光解和/或化学过程的代谢结果，生物系统可以产生其活性成分药物的任何化合物。因此，前药是治疗活性化合物共价修饰的类似物或潜在形式。非限制性实例包括前药酯、季铵分子、二醇分子等。
“治疗有效量”是指将化合物以足以有效的量施用于动物以治疗疾病。
治疗有效量的化合物“治疗”是指并包括以下任何一种应用：
(1)预防可能是易感于疾病，但仍未在发生该疾病的动物中经历或显示出该疾病的病理学或症状，
(2)抑制疾病是在动物中正在经历或表现出疾病的病理或症状(即，阻止病理和/或症状的进一步发展)，或
(3)改善疾病的病理或症状是在动物中正在经历或表现出的疾病(即逆转病理和/或症状)。
化合物
本公开内容涉及式I的化合物或其立体异构体、互变异构体、N-氧化物、溶剂合物、代谢产物、药学上可接受的盐或前药，
Figure BDA0002775106710000041
当在有此需要的受试者中治疗或预防冠状病毒科感染时，施用式I化合物或其立体异构体、互变异构体、N-氧化物、溶剂合物、代谢产物、药学上可接受的盐或前药。并且在一些实例中，冠状病毒科可包括选自2019-nCov病毒、HCov 229E病毒、SARS病毒、MERS病毒的至少一种。
在本公开内容的一些实例中，式I化合物可以药学上可接受的盐的形式使用，并且药学上可接受的盐是选自包含以下的组的至少一种：磷酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硫酸盐、硝酸盐、乙磺酸盐、甲苯磺酸盐和苯磺酸盐、乙酸盐、三氟乙酸盐、酒石酸盐、马来酸盐、琥珀酸盐、柠檬酸盐、苯甲酸盐、水杨酸盐和抗坏血酸盐、己二酸盐、藻酸盐、精氨酸盐、天冬氨酸盐、硫酸氢盐、亚硫酸氢盐、溴化物、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、辛酸盐、氯化物、氯苯甲酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡萄糖酸盐、磷酸二氢盐、二硝基苯甲酸盐、十二烷基硫酸盐、富马酸盐、半乳糖酸盐、半乳糖醛酸盐、葡庚糖酸盐、葡糖酸盐、谷氨酸盐、甘油磷酸盐、半琥珀酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、马尿酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙磺酸盐、碘化物、羟乙基磺酸盐、异丁酸盐、乳酸盐、乳糖酸盐、苹果酸盐、丙二酸盐、扁桃酸盐、偏磷酸盐、甲磺酸盐、甲基苯甲酸盐、磷酸一氢盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、草酸盐、油酸盐、双羟萘酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、苯乙酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、膦酸盐和邻苯二甲酸盐。
药物制剂和用途
本公开内容的化合物可以与常规载体和赋形剂一起配制，所述载体和赋形剂满足所选的通用实践。片剂含有赋形剂、助流剂、填充剂、粘合剂等。当旨在通过口服施用来施用时，水性制剂将制成无菌形式，通常是等渗溶液。
尽管活性成分可以单独施用，但是可以优选配制成药物制剂。本发明的制剂无论是用于人还是兽用制剂，均具有至少一种活性成分以及一种或多种可接受的载体和任选的其它治疗成分。
适用于口服制剂的本发明可以以多个离散单位存在，每个单位包含预定量的活性成分，例如胶囊剂、扁囊剂或片剂；粉末或颗粒；在水性或非水性液体溶液或混悬液中；或水包油乳剂或油包水乳剂。活性成分也可以是大丸剂、干药糖剂或糊剂形式。
活性成分的有效量至少取决于所治疗疾病的性质、毒性，化合物用于预防(低剂量)或用于活性病毒感染、药物制剂和施用方法，然后使用常规剂量递增研究由临床医生做出决定。
在本公开内容的一些优选的实施方案中，本公开涉及式I的化合物。发明人惊奇地发现，式I的化合物在多种实验测试中显示出对于治疗或预防冠状病毒科感染的显著高的功效和活性。
然后，可以将式I化合物或其药学上可接受的盐、酯或前药的盐或前药以溶胶、芳香水、气雾剂、部分吸入剂、粉剂、颗粒剂、片剂、软膏剂、糊剂、乳剂、混悬剂、气体分散体、固体分散体、微粒剂、丸剂的形式施用于受试者。并且在一些实例中，按式I化合物计，以低于1000mg，例如100mg至1000mg、100～500mg的日剂量施用式I化合物或其药学上可接受的盐、酯或前药。
另外，本领域技术人员可以理解，也可以使用联合疗法。式I化合物或其药学上可接受的盐、酯或前药可以与一种或多种活性剂组合。在非限制性实施方案中，用于组合的合适活性剂包括选自包含以下的组的一种或多种：皮质类固醇、抗炎信号转导调节剂、β2-肾上腺素受体激动剂支气管扩张剂、抗胆碱能药、粘液溶解剂、高渗盐水、降低细胞因子风暴的药剂、用于治疗covid-19病毒感染的其它药物，或其混合物。然后在一些实例中，提供了在受试者中治疗或预防covid-19病毒感染的方法，包括向有此需要的受试者施用治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐、酯、水合物或前药，
Figure BDA0002775106710000061
并且在一些具体实例中，提供的方法可以还包括施用治疗有效量的至少一种其它治疗剂或其组合物，所述其它治疗剂或其组合物选自包含以下的组：皮质类固醇、抗炎信号转导调节剂、β2-肾上腺素受体激动剂支气管扩张剂、抗胆碱能药、粘液溶解剂、高渗盐水、降低细胞因子风暴的药剂、用于治疗covid-19病毒感染的其它药物，或其混合物。
在一些具体实例中，式I化合物或其药学上可接受的盐、酯、水合物或前药以溶胶、芳香水、气雾剂、部分吸入剂、粉剂、颗粒剂、片剂、软膏剂、糊剂、乳剂、混悬剂、气体分散体、固体分散体、微粒剂、丸剂的形式施用于受试者。
并且在一些具体实例中，以按式I化合物计低于1000mg的日剂量施用式I化合物或其药学上可接受的盐、酯、水合物或前药。
并且在一些具体实例中，以按式I化合物计100mg至1000mg的日剂量施用式I化合物或其药学上可接受的盐、酯、水合物或前药。
并且在一些具体实例中，以按式I化合物计100mg至500mg的日剂量施用式I化合物或其药学上可接受的盐、酯、水合物或前药。
在一些其它实例中，提供了在有此需要的受试者中治疗或预防covid-19病毒感染的药物组合物，包含式I化合物或其药学上可接受的盐、酯、水合物或前药，
Figure BDA0002775106710000071
并且在一些具体实例中，所述组合物还包含至少一种其它治疗剂或其组合物，所述其它治疗剂或其组合物选自包含以下的组：皮质类固醇、抗炎信号转导调节剂、β2-肾上腺素受体激动剂支气管扩张剂、抗胆碱能药、粘液溶解剂、高渗盐水、降低细胞因子风暴的药剂、用于治疗covid-19病毒感染的其它药物，或其混合物。
并且在一些具体实例中，药学上可接受的盐是选自包含以下的组的至少一种：磷酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硫酸盐、硝酸盐、乙磺酸盐、甲苯磺酸盐和苯磺酸盐、乙酸盐、三氟乙酸盐、酒石酸盐、马来酸盐、琥珀酸盐、柠檬酸盐、苯甲酸盐、水杨酸盐和抗坏血酸盐、己二酸盐、藻酸盐、精氨酸盐、天冬氨酸盐、硫酸氢盐、亚硫酸氢盐、溴化物、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、辛酸盐、氯化物、氯苯甲酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡萄糖酸盐、磷酸二氢盐、二硝基苯甲酸盐、十二烷基硫酸盐、富马酸盐、半乳糖酸盐、半乳糖醛酸盐、葡庚糖酸盐、葡糖酸盐、谷氨酸盐、甘油磷酸盐、半琥珀酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、马尿酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙磺酸盐、碘化物、羟乙基磺酸盐、异丁酸盐、乳酸盐、乳糖酸盐、苹果酸盐、丙二酸盐、扁桃酸盐、偏磷酸盐、甲磺酸盐、甲基苯甲酸盐、磷酸一氢盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、草酸盐、油酸盐、双羟萘酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、苯乙酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、膦酸盐和邻苯二甲酸盐。
并且在一些具体实例中，式I化合物或其药学上可接受的盐、酯、水合物或前药为溶胶、芳香水、气雾剂、部分吸入剂、粉剂、颗粒剂、片剂、软膏剂、糊剂、乳剂、混悬剂、气体分散体、固体分散体、微粒剂、丸剂的形式。
并且在一些具体实例中，组合物包含剂量低于1000mg、低于800mg、低于600mg、低于500mg、或低于200mg的式I化合物或其药学上可接受的盐、酯、水合物或前药。
然后在本公开内容中提供了用于在受试者中治疗或预防covid-19病毒感染的式I化合物或其药学上可接受的盐、酯、水合物或前药，
Figure BDA0002775106710000081
并且在一些具体实例中，药学上可接受的盐是选自包含以下的组的至少一种：磷酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硫酸盐、硝酸盐、乙磺酸盐、甲苯磺酸盐和苯磺酸盐、乙酸盐、三氟乙酸盐、酒石酸盐、马来酸盐、琥珀酸盐、柠檬酸盐、苯甲酸盐、水杨酸盐和抗坏血酸盐、己二酸盐、藻酸盐、精氨酸盐、天冬氨酸盐、硫酸氢盐、亚硫酸氢盐、溴化物、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、辛酸盐、氯化物、氯苯甲酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡萄糖酸盐、磷酸二氢盐、二硝基苯甲酸盐、十二烷基硫酸盐、富马酸盐、半乳糖酸盐、半乳糖醛酸盐、葡庚糖酸盐、葡糖酸盐、谷氨酸盐、甘油磷酸盐、半琥珀酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、马尿酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙磺酸盐、碘化物、羟乙基磺酸盐、异丁酸盐、乳酸盐、乳糖酸盐、苹果酸盐、丙二酸盐、扁桃酸盐、偏磷酸盐、甲磺酸盐、甲基苯甲酸盐、磷酸一氢盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、草酸盐、油酸盐、双羟萘酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、苯乙酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、膦酸盐和邻苯二甲酸盐。
并且在一些具体实例中，式I化合物或其药学上可接受的盐、酯、水合物或前药为溶胶、芳香水、气雾剂、部分吸入剂、粉剂、颗粒剂、片剂、软膏剂、糊剂、乳剂、混悬剂、气体分散体、固体分散体、微粒剂、丸剂的形式。
并且在一些具体实例中，以按式I化合物计低于1000mg的日剂量施用式I化合物或其药学上可接受的盐、酯、水合物或前药。
并且在一些具体实例中，以按式I化合物计100mg至1000mg的日剂量施用式I化合物或其药学上可接受的盐、酯、水合物或前药。
并且在一些具体实例中，以按式I化合物计100mg至500mg的日剂量施用式I化合物或其药学上可接受的盐、酯、水合物或前药。
实施例
实施例1.在细胞水平上评价WS-635对SARS-CoV-2冠状病毒的抑制作用。
WS-635由Waterstone Pharmaceuticals Inc.作为粉末提供。
病毒细胞由军事医学科学院微生物与流行病学研究所病毒学实验室(VirologyLaboratory of the Institute of Microbiology and Epidemiology,Academy ofMilitary Medical Sciences)保存。
SARS-CoV-2冠状病毒分离株(保藏代码：2019-nCoV BetaCoV/Beijing/AMMS01/2020)由军事医学科学院微生物与流行病学研究所保存。
通过病毒核酸定量测定WS-635的EC50：
人Vero细胞购自ATCC(US)，SARS-Cov-2病毒由北京军事医学研究所分离，保藏代码为：2019-nCoV BetaCoV/Beijing/AMMS01/2020。
1).通过MTS(Promega)方法确定药物的CC50。详细信息如下：将Vero细胞以10000/孔的浓度接种到96孔细胞培养板中，并在37℃和5％CO2下培养过夜。当细胞生长到完全单层时，将包含不同浓度药物(初始浓度为400μM)的2％FBS DMEM维持溶液添加至100μL/孔，并在每种浓度下测量4个复孔。继续培养并且每天在显微镜下观察细胞状态。直至给药第4天添加20μL MTS溶液，在37℃下孵育1小时，然后测量OD490值。
2).通过核酸定量方法确定药物的EC50。如下：提前一天将Vero细胞以10000/孔的浓度接种到96孔板中。用2％细胞维持培养基稀释2019-nCoV病毒，并将其添加到96孔板中，使每个孔的病毒含量为100TCID50。用2％FBS的DMEM维持溶液将溶解在DMSO中的WS-635制备为400、200、100、50、25和12.5μM。丢弃细胞培养上清液，并添加不同浓度的T705(100μL/孔)。每种药物有4个复孔，然后将100TCID50病毒溶液添加到每个液滴(drop)中。设置阳性药物对照(10μM瑞德西韦(RDV))、病毒对照和正常细胞对照组，并在37℃、5％CO2培养箱中培养。感染后第二天，从每个孔中取50μL细胞上清液以提取核酸。通过定量RT-PCR检测病毒载量，并通过使用graphpad prism 7拟合剂量反应曲线来计算EC50。
3).选择指数SI＝CC50/EC50。
使用通过核酸定量方法在细胞水平上测试WS-635对SARS-CoV-2新型冠状病毒的抑制作用，并计算WS-635的EC50。
图1显示了在细胞水平上WS-635对2019-nCoV新冠状病毒具有抑制作用，其EC50为14.28μM(图)。CC50>100μM，SI>7。
实施例2.WS-635对于SARS-CoV-2复制的离体测定
实验由中国病毒学研究所(Chinese Institute of Virology)在P3实验室进行：
用病毒SARS-CoV-2(2019-nCOV BetaCoV/Beijing/AMMS01/2020)感染人Vero细胞(ATCC)至100TCID50的病毒浓度。通过在不同化合物浓度下孵育来测量病毒RNA载量。
提前一天将Vero细胞以10000/孔的浓度接种到96孔板中。用2％细胞维持培养基稀释2019-nCoV病毒，并将其添加到96孔板中，使每个孔的病毒含量为100TCID50。用2％FBS的DMEM维持溶液将溶解在DMSO中的WS-635制备为400、200、100、50、25和12.5μM。丢弃细胞培养上清液，并添加不同浓度的T705(100μL/孔)。每种药物有4个复孔，然后将100TCID50病毒溶液添加到每个液滴中。设置阳性药物对照(10μM瑞德西韦(RDV))、病毒对照和正常细胞对照组，并在37℃、5％CO2培养箱中培养。感染后第二天，从每个孔中取50μL细胞上清液以提取核酸。通过定量RT-PCR检测病毒载量，并通过使用graphpad prism7拟合剂量反应曲线来计算EC50。
抑制和细胞毒性曲线如图2和表1所示。图显示WS-635以剂量依赖性方式抑制SARS-CoV-2(2019-nCOV BetaCoV/Beijing/AMMS01/2020)。
表1：
CPD ID EC<sub>50</sub>(μM)
WS-635 5.5
实施例3.在细胞病变效应(CPE)测定中评估测试化合物WS-635对人冠状病毒(HCoV)229E的抗病毒活性。
3.1.测试和参照化合物
测试化合物WS-635由赞助商以干粉提供，并在100％DMSO溶液中制备成60mM储备溶液。参照化合物瑞德西韦(remdesivir)由WuXi AppTec提供。以3倍稀释的8个浓度一式两份地测试化合物的50％有效浓度(EC50)和50％细胞毒性浓度(CC50)。表2中列出了测试的最高浓度。细胞培养物中DMSO的终浓度为0.5％。
表2.化合物的信息
Figure BDA0002775106710000101
3.2.细胞系和病毒株
HCoV 229E(ATCC VR-740)和MRC-5细胞(ATCC CCL-171)获自ATCC。将MRC-5细胞维持在补充有10％FBS(Hyclone)、1％L-谷氨酰胺(Gibco)、1％NEAA(Gibco)和1％青霉素-链霉素(Hyclone)的最低必需培养基(Sigma)中。使用补充有5％FBS、1％L-谷氨酰胺、1％NEAA和1％青霉素-链霉素的最低必需培养基作为测定培养基。
3.3.试剂和仪器
本测定中使用的主要试剂是发光细胞活力测定试剂盒CellTiter Glo(Promega)。本测定中使用的主要仪器是Microplate Reader Synergy2(BioTek)。
3.4.方法
抗病毒测定总结于表3中。
表3.抗病毒测定方法
病毒 细胞 处理时间(天)/终点 参照化合物 检测试剂
HCoV 229E MRC-5 3/CPE 瑞德西韦 CellTiter Glo
3.4.1.HCoV 229E CPE测定
在96孔板中，将MRC-5细胞以每孔20,000个细胞接种，并在37℃和5％CO2下培养过夜。第二天，添加含有连续稀释的化合物和病毒(每孔200TCID50)的培养基。将所得培养物在35℃和5％CO2下再保持3天，直到病毒对照(在没有化合物处理的情况下用病毒感染细胞)中的病毒感染显示出显著的CPE。根据制造商的手册，使用CellTiter Glo测量细胞活力。通过Microplate Reader Synergy2(Molecular Device)测量发光信号。基于在通过病毒对照归一化的每种浓度下对CPE的抑制，计算每种化合物的抗病毒活性。
3.4.2.细胞毒性测定
在相同条件下但没有病毒感染的情况下，同时评估化合物的细胞毒性。根据制造商的手册，使用CellTiter Glo测量细胞活力。然后基于通过培养基对照(仅培养基)归一化的测试浓度下的细胞毒性计算CC50值。
3.4.3.数据分析
化合物的抗病毒活性和细胞毒性分别表示为抑制％和细胞活力％，并用以下公式计算：
抑制(％)＝(原始数据CPD–平均VC)/(平均CC–平均VC)x 100
细胞活力(％)＝(原始数据CPD–平均MC)/(平均CC–平均MC)x 100
其中原始数据CPD表示化合物处理的孔的值；平均VC、平均CC和平均MC分别表示病毒对照、细胞对照(未进行病毒感染或化合物处理的细胞)和培养基对照的平均值。
使用GraphPad Prism软件(版本5)并使用方程式log(抑制剂)vs.斜率可变的响应计算EC50和CC50值。然后计算SI(CC50/EC50)。
3.5.结果和讨论
用参照化合物对抗病毒实验进行质量控制。瑞德西韦显示出预期的抗病毒活性和对细胞活力的影响，表明该实验的可靠性。表3总结了测试化合物的抗病毒和细胞毒性结果。
WS-635对HCoV 229E表现出抑制活性，EC50值为5.16μM。其对MRC-5细胞具有明显的细胞毒性，CC50和SI值分别为46.79μM和9.07。
抑制和细胞毒性曲线如图3和表4所示。图显示WS-635对HCoV 229E感染的MRC-5细胞具有明显的细胞毒性，并通过阻止病毒的传播发挥作用。
表4.WS-635的EC50和CC50值
Figure BDA0002775106710000121
在整个说明书中，对“实施方案”、“一些实施方案”、“一个实施方案”、“另一个实例”、“实例”、“具体实例”或“一些实例”的提及是指在本公开内容的至少一个实施方案或实例中包括结合实施方案或实例描述的特定特征、结构、材料或特性。因此，整个说明书中各处诸如“在一些实施方案中”、“在一个实施方案中”、“在实施方案中”、“在另一个实例中”、“在实例中”、“在具体实例中”或“在一些实例中”的词语的出现未必是指本公开内容的相同实施方案或实例。此外，在一个或多个实施方案或实例中特定特征、结构、材料或特性可以以任何合适的方式组合。
尽管已经示出和描述了示例性实施方案，但是本领域技术人员将理解，以上实施方案不能被解释为限制本公开内容，并且可以在不背离本公开内容的精神、原理和范围的情况下对实施方案进行改变、替换和修改。

Claims (19)

1.一种在受试者中治疗或预防冠状病毒科感染的方法，包括施用治疗有效量的式I化合物或其立体异构体、互变异构体、N-氧化物、溶剂合物、代谢产物、药学上可接受的盐或前药，
Figure FDA0002775106700000011
并且所述冠状病毒科包括选自2019-nCov病毒、HCov 229E病毒、SARS病毒、MERS病毒的至少一种。
2.根据权利要求1所述的方法，还包括施用治疗有效量的至少一种其它治疗剂或其组合物，所述其它治疗剂或其组合物选自包含以下的组：皮质类固醇、抗炎信号转导调节剂、β2-肾上腺素受体激动剂支气管扩张剂、抗胆碱能药、粘液溶解剂、高渗盐水、降低细胞因子风暴的药剂、用于治疗covid-19病毒感染的其它药物，或其混合物。
3.根据权利要求1所述的方法，其中将所述式I化合物或其立体异构体、互变异构体、N-氧化物、溶剂合物、代谢产物、药学上可接受的盐或前药以溶胶、芳香水、气雾剂、部分吸入剂、粉剂、颗粒剂、片剂、软膏剂、糊剂、乳剂、混悬剂、气体分散体、固体分散体、微粒剂、丸剂的形式施用于所述受试者。
4.根据权利要求1所述的方法，其中所述药学上可接受的盐是选自包含以下的组的至少一种：磷酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硫酸盐、硝酸盐、乙磺酸盐、甲苯磺酸盐和苯磺酸盐、乙酸盐、三氟乙酸盐、酒石酸盐、马来酸盐、琥珀酸盐、柠檬酸盐、苯甲酸盐、水杨酸盐和抗坏血酸盐、己二酸盐、藻酸盐、精氨酸盐、天冬氨酸盐、硫酸氢盐、亚硫酸氢盐、溴化物、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、辛酸盐、氯化物、氯苯甲酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡萄糖酸盐、磷酸二氢盐、二硝基苯甲酸盐、十二烷基硫酸盐、富马酸盐、半乳糖酸盐、半乳糖醛酸盐、葡庚糖酸盐、葡糖酸盐、谷氨酸盐、甘油磷酸盐、半琥珀酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、马尿酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙磺酸盐、碘化物、羟乙基磺酸盐、异丁酸盐、乳酸盐、乳糖酸盐、苹果酸盐、丙二酸盐、扁桃酸盐、偏磷酸盐、甲磺酸盐、甲基苯甲酸盐、磷酸一氢盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、草酸盐、油酸盐、双羟萘酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、苯乙酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、膦酸盐和邻苯二甲酸盐。
5.根据权利要求1所述的方法，其中向所述受试者施用所述式I化合物或其立体异构体、互变异构体、N-氧化物、溶剂合物、代谢产物、药学上可接受的盐或前药和一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
6.根据权利要求1所述的方法，其中以按所述式I化合物计低于1000mg的日剂量施用式I化合物或其药学上可接受的盐、酯或前药。
7.根据权利要求1所述的方法，其中以按所述式I化合物计100mg至1000mg的日剂量施用式I化合物或其药学上可接受的盐、酯或前药。
8.根据权利要求1所述的方法，其中以按所述式I化合物计100mg至500mg的日剂量施用式I化合物或其药学上可接受的盐、酯或前药。
9.一种用于治疗或预防冠状病毒科感染的药物组合物，包含式I化合物或其立体异构体、互变异构体、N-氧化物、溶剂合物、代谢产物、药学上可接受的盐或前药，
Figure FDA0002775106700000021
并且所述冠状病毒科包括选自2019-nCov病毒、HCov 229E病毒、SARS病毒、MERS病毒的至少一种。
10.根据权利要求9所述的药物组合物，还包含至少一种其它治疗剂或其组合物，所述其它治疗剂或其组合物选自包含以下的组：皮质类固醇、抗炎信号转导调节剂、β2-肾上腺素受体激动剂支气管扩张剂、抗胆碱能药、粘液溶解剂、高渗盐水、降低细胞因子风暴的药剂、用于治疗covid-19病毒感染的其它药物，或其混合物。
11.根据权利要求9所述的药物组合物，其中所述药物组合物为溶胶、芳香水、气雾剂、部分吸入剂、粉剂、颗粒剂、片剂、软膏剂、糊剂、乳剂、混悬剂、气体分散体、固体分散体、微粒剂、丸剂的形式。
12.根据权利要求9所述的药物组合物，还包含一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
13.根据权利要求9所述的药物组合物，包含低于1000mg、800mg、600mg或500mg的剂量的所述式I化合物或其立体异构体、互变异构体、N-氧化物、溶剂合物、代谢产物、药学上可接受的盐或前药。
14.式I化合物或其立体异构体、互变异构体、N-氧化物、溶剂合物、代谢产物、药学上可接受的盐或前药在制备用于治疗或预防冠状病毒科感染的药物中的用途，
Figure FDA0002775106700000031
并且所述冠状病毒科包括选自2019-nCov病毒、HCov 229E病毒、SARS病毒、MERS病毒的至少一种。
15.根据权利要求14所述的用途，其中所述药学上可接受的盐是选自包含以下的组的至少一种：磷酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硫酸盐、硝酸盐、乙磺酸盐、甲苯磺酸盐和苯磺酸盐、乙酸盐、三氟乙酸盐、酒石酸盐、马来酸盐、琥珀酸盐、柠檬酸盐、苯甲酸盐、水杨酸盐和抗坏血酸盐、己二酸盐、藻酸盐、精氨酸盐、天冬氨酸盐、硫酸氢盐、亚硫酸氢盐、溴化物、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、辛酸盐、氯化物、氯苯甲酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡萄糖酸盐、磷酸二氢盐、二硝基苯甲酸盐、十二烷基硫酸盐、富马酸盐、半乳糖酸盐、半乳糖醛酸盐、葡庚糖酸盐、葡糖酸盐、谷氨酸盐、甘油磷酸盐、半琥珀酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、马尿酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙磺酸盐、碘化物、羟乙基磺酸盐、异丁酸盐、乳酸盐、乳糖酸盐、苹果酸盐、丙二酸盐、扁桃酸盐、偏磷酸盐、甲磺酸盐、甲基苯甲酸盐、磷酸一氢盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、草酸盐、油酸盐、双羟萘酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、苯乙酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、膦酸盐和邻苯二甲酸盐。
16.根据权利要求14所述的用途，其中所述药物为溶胶、芳香水、气雾剂、部分吸入剂、粉剂、颗粒剂、片剂、软膏剂、糊剂、乳剂、混悬剂、气体分散体、固体分散体、微粒剂、丸剂的形式。
17.根据权利要求14所述的用途，其中所述药物包含低于1000mg、800mg、600mg或500mg的剂量的所述式I化合物或其立体异构体、互变异构体、N-氧化物、溶剂合物、代谢产物、药学上可接受的盐或前药。
18.根据权利要求14所述的用途，其中所述药物为溶胶、芳香水、气雾剂、部分吸入剂、粉剂、颗粒剂、片剂、软膏剂、糊剂、乳剂、混悬剂、气体分散体、固体分散体、微粒剂、丸剂的形式。
19.根据权利要求14所述的用途，其中所述药物还包含一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
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