CN112143739A - 一种水稻OsABCC9基因及其在转运镉中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种水稻OsABCC9基因及其应用，属于植物基因工程技术领域，所述水稻OsABCC9基因的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。本发明提供的水稻OsABCC9基因具有转运镉的作用，水稻OsABCC9基因编码的蛋白在植物的解镉毒过程中发挥重要的作用。本发明中的OsABCC9基因在水稻根中的表达受Cd的高度诱导；亚细胞定位分析显示OsABCC9定位于液泡膜上；植株实验分析表明OsABCC9基因具有转运Cd的作用。本发明的OsABCC9基因可做为一个镉转运蛋白，在水稻的解镉毒过程中发挥重要的作用。

Description

一种水稻OsABCC9基因及其在转运镉中的应用

技术领域

本发明属于植物基因工程技术领域，尤其涉及一种水稻OsABCC9基因及其在转运镉中的应用。

背景技术

镉(Cadmium，Cd)是一种对动植物有剧毒的金属元素之一。土壤中过量的镉可被植物根系吸收，从而抑制植物生长，降低作物产量。而且，被根吸收的镉可以从根转移到地上部分，进而积累到果实、谷物中，并通过饮食摄入进入人体内，长时间的摄入有毒的镉可引起肾功能不全、骨折、癌症等多种疾病。因此，阐明植物体内Cd的转运过程和积累机制，有助于生产和开发低Cd作物，从而减少或降低人类对Cd的摄取量。

Cd作为一种非必需元素，主要通过运输系统进入植物的根细胞，进入根细胞后的Cd主要有三种转运途径：排出体外、隔离到液泡中和转移到木质部中。例如，拟南芥中的AtPDR8(AtABCG36)已被报道参与了Cd或Cd复合物的外排，其过表达后增加了转基因植株中Cd的外排，降低了Cd的含量，从而增加了植株对Cd的耐受性。另外，Cd或Cd-复合物也可以通过液泡上的转运体被隔离到液泡中，以达到解Cd毒的作用。例如，水稻中的OsHMA3蛋白参与了Cd向液泡中的转运，从而降低了Cd对水稻的毒害，而OsHMA3突变的植株未能将Cd隔离到液泡中。此外，一些Cd也可以转移到木质部，进而运输到地上部分以及种子或果实中。在水稻中，OsHMA2已被报道参与了Cd和Zn向木质部的转运。OsHMA2主要表达于根的维管束中，其突变后降低了Cd和Zn从根到茎的转移。总的来说，Cd转运体对植物体内Cd的解毒和积累都发挥着重要作用。

ATP结合盒式(ATP-binding cassette，ABC)转运蛋白是在原核生物和真核生物中发现的一个蛋白超家族。根据转运蛋白的结构域和系统发育关系，将植物ABC转运蛋白分为8个亚科(A-G,I)。ABC蛋白转运底物种类繁多，包括脂类、金属和植物激素等。目前已有多种ABC转运蛋白被报道能够转运Cd或Cd-复合物。第一个被称为Cd转运体的ABC转运体是裂变酵母中的HMT1，它可以将PC-Cd复合物转运到液泡中已达到Cd解毒的作用。随后，在不同物种中发现了参与Cd转运的ABC转运蛋白。在拟南芥中，除了AtABCG36之外，三种C型ABC转运蛋白AtABCC1、AtABCC2和AtABCC3也通过将Cd或Cd复合物隔离在液泡中进而增强Cd的耐受性。

在水稻中，有133个基因被注释为ABC转运体基因，其中2个基因被报道参与了Cd的耐受性。OsABCG43在水稻根系中受Cd诱导表达，在酵母中表达可以增加酵母的Cd耐受性，但其在水稻中的确切功能目前尚不清楚。OsABCG36在水稻的根中的表达，也受Cd的诱导，其定位于细胞膜上，OsABCG36突变后增加植株根中Cd的积累，因此OsABCG36被认为是通过从水稻的根细胞排出Cd或Cd复合物来增加对的Cd的耐受性。目前，现有报道中还未发现新的水稻ABC转运蛋白家族基因对镉耐受的报道。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种水稻OsABCC9基因及其在转运镉中的应用。

为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：

本发明提供了一种水稻OsABCC9基因，所述水稻OsABCC9基因的核苷酸序列如SEQID No.1所示。

本发明还提供了上述技术方案所述的水稻OsABCC9基因在转运镉中的应用。

本发明提供了一种水稻OsABCC9基因及其在转运镉中的应用。本发明提供的水稻OsABCC9基因具有转运镉的作用，所述水稻OsABCC9基因编码的蛋白在植物的解镉毒过程中发挥重要的作用。

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

(1)本发明的水稻OsABCC9基因主要在根中表达，并且受Cd的高度诱导。

(2)利用水稻原生质体细胞分析OsABCC9亚细胞定位情况，表明其定位于液泡膜上。

(3)使用CRISPR-Cas9技术进行突变体植株的构建，筛选了两个不同突变位点的纯合突变体植株进行植株实验。突变体植株使用Cd处理后发现，突变体植株根和茎的干重、Cd含量显著性少于野生型，对Cd表现出敏感现象。结果表明，在水稻中OsABCC9参与了Cd的耐受性调控。并且，OsABCC9突变后，增加籽粒中的Cd含量，说明OsABCC9基因影响水稻种子中的Cd积累。因此，水稻OsABCC9是一个新的参与镉耐受性和镉积累的基因。

附图说明

图1为水稻和拟南芥中ABCC转运蛋白的进化树分析图；

图2为OsABCC9基因结构图和纯合突变体植株类型；

图3为OsABCC9在根和茎中的表达水平；

图4为不同处理时间、不同Cd浓度处理对OsABCC9表达水平的影响；

图5为OsABCC9在水稻原生质体中亚细胞定位情况；

图6为OsABCC9突变体植株镉耐受性分析及Cd含量测定；

图7为OsABCC9突变体植株种子中镉含量分析。

具体实施方式

本发明提供了一种水稻OsABCC9基因，所述水稻OsABCC9基因的核苷酸序列如SEQID No.1所示，具体如下：

atgccgatgccggccacctcgctcccgtggtggctgtccaccaccgcgtgctccccgcctccgccgtcttcctcctccttctccctctccgaccgcctcgccttcctcttcctctccccatgcccgcagcgcgtggtcctcggcggcgccgtcgacctcgccttcctcctcgcggtggtgttcgtcgccgtccgcgctcgcttgtcgcggtcccggcgtgagggtatcgcgaacggcaacggggaccacgcggaggaggagcccctgctcgcgaagccgtctgtggtggctgcggtgcccccgccgcccccgcgcggggggttgcggcacgcgctcgcgctcgcggcgtccgtgtgtttcgcggccgcgtcgctcgtgctgctcgtgctcgcggtcgtgctgctcccgaggaccgcatggctcgccgcggagtgcgcgttcctcgtggcgcagttcgtggcgcacctcgccgctgtgggggtcgtcgtggcggagaaggcggccgcggcgcgttctcacccggcgcacctccgtctcttctgggctgggactgcggctctcgcggcgctcttctccggctccgcggctgcgcgctacgcggctcgcgagcccatcctccccgacgatgccgtcgcgttcgctgggctggtgatgtcgctccctcttctctacttctccgtcaccggctccaccggcctcggtggtgcggcgattcccgacggggaagaccgaagctgtgttccgggtcacgccgcggcggcggcgtcgtactcgacggcgtcgtggttgtcgctcgcgacgttcagctggatcaacccgctcatctccaagggctccagggcggctctcgccgcggacgatgtcccgcccgtggcgccagatgataccgccgaggcgacttacgcgctgttcgtgtcaaactgggccgcgccgccggcgccggggactaaggccgggcatcccgtggtcaccgcacttctccggtcgttctggccgcagttcttgctcaccgccatgctcggcctggcgcacctctcggtcatgtatatcggcccttccctcgtcgacaggttcgtgaatttcgtccgccgcggcggggagttgacggaagggcttcagctggtcgtcgtcctcctcgccggcaaggcggcggaggcgctggcctcgcaccactacgagttccaggggcagaagctcgggatgcgcatccacgccgcgctgctcgccgcggtgtaccgcaagtcgctgcggctgtccacgggcgcgcggcgcgcgcacggcgccggcgcgatcgtgaactacatggaggtggacgccgaggaggtggccaacgtcacgcacgagctccacaacctgtggctgatgccgctggagatcgccgtggctctcaccctgctgtacacccacctcggccccgccgtgctcaccgcggtcgccgcgatcgccgtggtgaccgtggtcgtggcgctcgccaaccgccgcaacctggagtaccagttcaagttcctcggcaagcgcgacgagcgcatgaaggccatcaccgagctgctcaactacatgcgcgtgatcaagctgcaggggtgggaggagacgttcggcggcaagatccacgagctcagggaggctgagctcgggtggcttgccaagtccatgtacttcatgtgcgccaacaccgtcgtgctctggagcggcccgctcgccatgaccgtgctcgtgttcggcacctgtgtgctgaccggcgtcacgctcgacgccggcaaggtgttcacggccaccgccttcttccacatgctggatggaccaatgcagagcttccccgaggcgattgcctccgtgacgcaggcgaccgtgtcactggggaggcttgacaggtatctgctcgacgtggagcttgatgataccacggtggagcgtgttgatgacgctgggattaaccctgatggtgtggtcgtggaagtgcgcgatggcgtgtttgcatgggacgtgaggggcaagaaggagaatgaagagggcgacgacaacgaggatgatgaagaaggtgaggaggaggaggaggagaaagatgtcgaggagacgcctgttctggagacagtgctgaaggggattaacattgaggtaaggaggggtgagcttgcagcggtggtcgggacggttggctccggcaaatcgtcgctgctgtcatgtatcatgggggagatggacaaggtctccgggaaggttaggatatgcgggagcactgcatatgttgcacagactgcttggattcaaaatggcacaattcaagagaacatcttatttgggcagccaatggatgctgaaagatataaagaagttctgcggtctcgagggatcaatctcagtggtggacaaaaacaacgtattcagcttgccagggcagtttattgcagcctggaaaaggatttggaaatgatggaatttggtgaccagacagagattggagagcaaaattgtgatatatatctccttgacgatgtcttcagtgcagttgatgcacatactggctcaagcatttttaaggaatgtctgagaggcatgctcaaaggaaagaccatcttacttgtaactcaccaagtggatttcttgcataatgtggataacatatttgtcatgagagatggcatgattgtgcagtcagggaaatatgatgagttactagatgctggctcagatttcttagctcttgttgctgctcatgatagttcaatggaactggtggatcaaagtcgacaagttgtcaaaactgaatattctcagcctaaggcggtagccagaattccttctcttcgctctagatccattggaaagggtgagaaggtacttgttgcacctgatatagaagcagctacttctaaaattatacgagaagaggaaagagaaagtggtcaagtaagttggcgtgtgtacaagttatatatgacagaggcttggggttggtggggggttgtcggcatgcttgcttttgcaattgtatggcaagttactgaaatggctagtgactattggctgtcatatgaaacatcaggcagcattccatttaatccatctctatttattggagtgtatgttgctatagctgctgtttcaattatccttcaagtaatcaagagtcttcttgagacaatattgggacttcagactgctcagatctttttcaagaagatgtttgacagtattttgcatgccccgatgtcattttttgataccacaccttcagggaggattctcagtcgggcatcatcggaccaaacaaccattgatattgtgctgtccttttttgttggtctgacaatttcaatgtacatttcagtattaagtaccataattgttacttgtcaggttgcctggccatcggttatagctgtaattccacttgtactattgaacatttggtacaggaatcgctatcttgcaacttctcgggagctaactagacttgaaggagtaacaaaggcaccagtaattgatcacttttcagagactgttctaggtgctacaaccatcagatgcttcaagaaggacaaagaatttttccaagaaaatttggacagaatcaattcaagtttgcgcatgtacttccacaattatgcagcaaatgaatggcttgggttccgtctggagttgattgggacactcgtattggcaataactgctttccttatgattagtctgcctagcaattttatcaagaaagaatttgttggcatgtctctttcatatggcctctccctcaattctctagtgtattttgcaatatccattagctgtatgttggaaaatgatatggttgctgtggagagggttaatcagttcagtacccttccttctgaggcagtgtggaagatagaagaccatcttccttctccaaattggcccactcatggtgatattgacatcgatgatttaaaggttaggtaccgaccgaatacacctctaattttgaaaggcataactgtaagcattagtggtggtgaaaagataggagttgttggaagaacaggcagtggaaaatcaactttgatccaagcattgttcagacttgtagagcctgtgcaggggacaatgatcattgatggaatagacatatgcacattgggtctgcatgatctgaggtcccgctttggcattattccccaagaaccagttctctttgaaggaacaattcgaagcaacattgatccaattgggcagtattcagatgctgagatatggcgggctctggagggctgccaactgaaagatgtagttgcttcaaaacctcaaaaacttgatgctctagtggctgatagtggggagaactggagtgtaggccaaaggcagcttctttgtcttggccgcgtcatattgaagcggactcgaatattatttatggatgaggcaactgcttcagttgattctcaaactgatgccacgatacagaagatcacacgacaagaattttcttcatgtacaataattagcattgcacacagaataccaacagtcatggattgtgatagagttctggtgctggatgcaggtctggtaaaagaatttgattcaccctcaagattgattgagcagccatccctgtttggtgcaatggttgaggaatacgccaatcgctcatccaacctgtaa

在本发明中，亚细胞定位分析显示OsABCC9定位于液泡膜上，所述OsABCC9基因全长为4638bp，具有11个外显子和10个内含子，其基因结构图如图2中的A所示。

本发明还提供了上述技术方案所述的水稻OsABCC9基因在转运镉中的应用。

下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。

实施例1

1.植物材料和生长条件

本实施例使用的材料有野生型日本晴水稻和两个OsABCC9突变体植株。

将水稻种子浸泡于自来水中，放于28℃培养箱中黑暗发芽2d后，将种子摆于滤网上，放于含有0.5mM CaCl₂去离子水的4L塑料容器中，28℃继续培养2d。待根长长至2-3cm后用于后续相关实验。

2.OsABCC9基因全序列的获得以及进化树的构建

为了获到OsABCC9的CDS序列，按照产品的说明书使用Trizol试剂盒(Lifetechnologies)从水稻根中提取总RNA。取1μg总RNA使用Hiscript II Q RT SuperMix Kit(Vazyme)合成试剂盒合成cDNA的第一条。获得的cDNA作为模板，用于下列不同实验中获得OsABCC9的全序列。

水稻和拟南芥中的ABCC家族蛋白的系统进化树主要通过TAIR(https://www.arabidopsis.org/)和NCBI(www.ncbi.nlm.nih.gov)下载该家族的全长氨基酸序列。然后，使用MEGA6软件通过邻近法进行系统进化树的构建(图1)。

3.OsABCC9突变体植株构建

OsABCC9基因(SEQ ID No.1)全长为4638bp，具有11个外显子和10个内含子，其基因结构图如图2中的A所示。

使用CRISPR-Cas9基因组编辑系统来构建OsABCC9基因的突变体植株。首先，在OsABCC9的外显子区选择两个目标靶点，序列分别为GGCGCCAGATGATACCGCCG(SEQ ID No.2)和GCCTTCTTCCACATGCTGGA(SEQ ID No.3)，构建了具有两个OsABCC9特异性靶点的pCRISPR-OsABCC9质粒。然后，利用土壤农杆菌介导的遗传转化方法，来侵染野生型日本晴水稻构建突变体植株。最后，设计相应引物，利用PCR对目标靶点位置的序列进行扩增，并经过测序验证后，选择了两个独立的纯合突变体植株(osabcc9-1和osabcc9-2)进行下列实验，结果如图2中的B所示。

3.RNA的提取和基因表达水平分析

为了分析OsABCC9表达模式，取15d大的野生型水稻植株使用10μM Cd处理6h，对根和茎分别进行取样，取样后立刻放入液氮中，并以未经Cd处理的样品为对照组。使用Trizol试剂试剂盒(Life technologies)提取样品的总RNA。然后，使用Hiscript II Q RTSuperMix Kit(Vazyme)，进行cDNA第一条链的合成。并使用ChanQ^TM SYBR Color qPCRMaster Mix(Vazyme)试剂盒和StepOnePlus Real-Time PCR系统(Analytikjena)进行qRT-PCR实验分析。OsABCC9基因表达所用的引物序列为(SEQ ID No.4)5’-GGAAAGAGAAAGTGGTCAAGTAAG-3’和(SEQ ID No.5)5’-TTAAATGGAATGCTGCCTGATG-3’；内参选择的是组蛋白H3，其引物序列为(SEQ ID No.6)5’-GGTCAACTTGTTGATTCCCCTCT-3’和(SEQID No.7)5’-AACCGCAAAATCCAAAGAACG-3’，结果如图3所示。

由图3可知，本发明的OsABCC9基因主要在水稻的根中表达，并且受Cd的诱导表达。

为了分析OsABCC9表达水平对Cd的详细响应情况，首先，取5d大野生型水稻幼苗分别使用10μM Cd分别处理0，1，3，6，12，24h后取主根样品并提取RNA；其次，使用0，5，10，15，20μM Cd处理6h后取主根样品提取RNA；并使用上述方法进行qRT-PCR分析，每组实验4个重复，结果如图4所示。

由图4中的A可知，前6h内，随着时间的增加，表达水平依次增加，6h时达到最高，随后逐渐递减。由图4中的B可知，OsABCC9基因的表达受Cd的诱导，且随着Cd浓度的增加，表达水平依次升高。

4.OsABCC9的亚细胞定位分析

为了分析OsABCC9的亚细胞定位情况，构建OsABCC9-GFP融合表达载体。使用OsABCC9特异的引物(SEQ ID No.8 5’-AAGCTTCATGCCGATGCCGGCCACCTCGCTC-3’和SEQ IDNo.95’-GGATCCCCAGGTTGGATGAGCGATTGGC-3’)使用PCR扩增出OsABCC9的全长序列(SEQ IDNo.1)(去终止子)。然后，将扩增的片段克隆到pYL322-GFP载体上GFP编码区的前面，产生GFP-OsABCC9重组质粒。

实施例2

1.利用PEG介导转化的方法，将实施例1得到的质粒GFP-OsABCC9或GFP空载体分别与液泡膜标记质粒AtTPK1共同转化于水稻原生质体细胞中，在室温下孵育后，利用激光共聚焦扫描显微镜(TCS SP8；Leica)进行拍照，结果如图5所示。

由图5中的A-D所示，GFP空载体(绿色荧光)定位于细胞质和细胞核等位置，而液泡膜标记AtTPK1(红色荧光)只定位于液泡膜上。然而，由图5中的E-H所示，GFP-OsABCC9与AtTPK1共定位结果发现，绿色荧光和红色荧光可以融合，说明OsABCC9定位于液泡膜上。

2.OsABCC9突变体植株的表型分析及Cd含量分析

为了研究OsABCC9突变体植株对Cd的耐受性，取15d天大的野生型和2个OsABCC9突变体植株幼苗分别转移至含有0和10μM Cd的1/2Kimura B营养液中培养12d，每3天更换一次营养液。处理结束后，进行拍照，并对根和茎部使用5mM CaCl₂和去离子水分别洗涤3次后进行取样。然后，将样品放在70℃的烘箱中干燥5天后，称量干重。加入适量的浓硝酸，并使用石墨消解仪进行消解后，使用ICP-MS(Plasma Quant MS；Analytik JenaAG)测定镉的浓度，结果如图6所示。

由图6中的A可以看出，未经Cd处理的突变体植株与野生型长势一致，而经过Cd处理后，突变体植株的根长短于野生型(图6中的B)。对根和茎分干重进行称量发现，经Cd处理后，突变体植株的根和茎的干重显著轻于野生型(图6中的C,D)。对样品中的Cd含量进行测定发现，经Cd处理之后，突变体植株根和茎中的镉含量显著性高于野生型(图6中的E,F)。说明OsABCC9突变之后，导致水稻根和茎中的Cd的增加，进而对水稻植株产生了毒害作用。

3.OsABCC9突变体植株种子中Cd含量分析

为测定籽粒中Cd的浓度，将40日大的野生型和2个OsABCC9突变体植株转移到2mg/kg Cd的土壤中，培养至收取种子。取干燥后的去壳种子，加入适量的硝酸后，使用石墨消解仪消解后，使用ICP-MS测定Cd元素含量，结果汇总见图7。

由图7所示，突变体植株种子中的Cd含量显著高于野生型，说明OsABCC9突变之后，增加了Cd在种子中的积累。

由以上实施例可以得出，OsABCC9是一个定位于液泡膜上的转运蛋白，在水稻中参与了对镉的转运，增加了水稻对镉的耐受性。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

序列表

<110> 广西大学

<120> 一种水稻OsABCC9基因及其在转运镉中的应用

<160> 9

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 4638

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

atgccgatgc cggccacctc gctcccgtgg tggctgtcca ccaccgcgtg ctccccgcct 60

ccgccgtctt cctcctcctt ctccctctcc gaccgcctcg ccttcctctt cctctcccca 120

tgcccgcagc gcgtggtcct cggcggcgcc gtcgacctcg ccttcctcct cgcggtggtg 180

ttcgtcgccg tccgcgctcg cttgtcgcgg tcccggcgtg agggtatcgc gaacggcaac 240

ggggaccacg cggaggagga gcccctgctc gcgaagccgt ctgtggtggc tgcggtgccc 300

ccgccgcccc cgcgcggggg gttgcggcac gcgctcgcgc tcgcggcgtc cgtgtgtttc 360

gcggccgcgt cgctcgtgct gctcgtgctc gcggtcgtgc tgctcccgag gaccgcatgg 420

ctcgccgcgg agtgcgcgtt cctcgtggcg cagttcgtgg cgcacctcgc cgctgtgggg 480

gtcgtcgtgg cggagaaggc ggccgcggcg cgttctcacc cggcgcacct ccgtctcttc 540

tgggctggga ctgcggctct cgcggcgctc ttctccggct ccgcggctgc gcgctacgcg 600

gctcgcgagc ccatcctccc cgacgatgcc gtcgcgttcg ctgggctggt gatgtcgctc 660

cctcttctct acttctccgt caccggctcc accggcctcg gtggtgcggc gattcccgac 720

ggggaagacc gaagctgtgt tccgggtcac gccgcggcgg cggcgtcgta ctcgacggcg 780

tcgtggttgt cgctcgcgac gttcagctgg atcaacccgc tcatctccaa gggctccagg 840

gcggctctcg ccgcggacga tgtcccgccc gtggcgccag atgataccgc cgaggcgact 900

tacgcgctgt tcgtgtcaaa ctgggccgcg ccgccggcgc cggggactaa ggccgggcat 960

cccgtggtca ccgcacttct ccggtcgttc tggccgcagt tcttgctcac cgccatgctc 1020

ggcctggcgc acctctcggt catgtatatc ggcccttccc tcgtcgacag gttcgtgaat 1080

ttcgtccgcc gcggcgggga gttgacggaa gggcttcagc tggtcgtcgt cctcctcgcc 1140

ggcaaggcgg cggaggcgct ggcctcgcac cactacgagt tccaggggca gaagctcggg 1200

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ggcgcgcggc gcgcgcacgg cgccggcgcg atcgtgaact acatggaggt ggacgccgag 1320

gaggtggcca acgtcacgca cgagctccac aacctgtggc tgatgccgct ggagatcgcc 1380

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atcgccgtgg tgaccgtggt cgtggcgctc gccaaccgcc gcaacctgga gtaccagttc 1500

aagttcctcg gcaagcgcga cgagcgcatg aaggccatca ccgagctgct caactacatg 1560

cgcgtgatca agctgcaggg gtgggaggag acgttcggcg gcaagatcca cgagctcagg 1620

gaggctgagc tcgggtggct tgccaagtcc atgtacttca tgtgcgccaa caccgtcgtg 1680

ctctggagcg gcccgctcgc catgaccgtg ctcgtgttcg gcacctgtgt gctgaccggc 1740

gtcacgctcg acgccggcaa ggtgttcacg gccaccgcct tcttccacat gctggatgga 1800

ccaatgcaga gcttccccga ggcgattgcc tccgtgacgc aggcgaccgt gtcactgggg 1860

aggcttgaca ggtatctgct cgacgtggag cttgatgata ccacggtgga gcgtgttgat 1920

gacgctggga ttaaccctga tggtgtggtc gtggaagtgc gcgatggcgt gtttgcatgg 1980

gacgtgaggg gcaagaagga gaatgaagag ggcgacgaca acgaggatga tgaagaaggt 2040

gaggaggagg aggaggagaa agatgtcgag gagacgcctg ttctggagac agtgctgaag 2100

gggattaaca ttgaggtaag gaggggtgag cttgcagcgg tggtcgggac ggttggctcc 2160

ggcaaatcgt cgctgctgtc atgtatcatg ggggagatgg acaaggtctc cgggaaggtt 2220

aggatatgcg ggagcactgc atatgttgca cagactgctt ggattcaaaa tggcacaatt 2280

caagagaaca tcttatttgg gcagccaatg gatgctgaaa gatataaaga agttctgcgg 2340

tctcgaggga tcaatctcag tggtggacaa aaacaacgta ttcagcttgc cagggcagtt 2400

tattgcagcc tggaaaagga tttggaaatg atggaatttg gtgaccagac agagattgga 2460

gagcaaaatt gtgatatata tctccttgac gatgtcttca gtgcagttga tgcacatact 2520

ggctcaagca tttttaagga atgtctgaga ggcatgctca aaggaaagac catcttactt 2580

gtaactcacc aagtggattt cttgcataat gtggataaca tatttgtcat gagagatggc 2640

atgattgtgc agtcagggaa atatgatgag ttactagatg ctggctcaga tttcttagct 2700

cttgttgctg ctcatgatag ttcaatggaa ctggtggatc aaagtcgaca agttgtcaaa 2760

actgaatatt ctcagcctaa ggcggtagcc agaattcctt ctcttcgctc tagatccatt 2820

ggaaagggtg agaaggtact tgttgcacct gatatagaag cagctacttc taaaattata 2880

cgagaagagg aaagagaaag tggtcaagta agttggcgtg tgtacaagtt atatatgaca 2940

gaggcttggg gttggtgggg ggttgtcggc atgcttgctt ttgcaattgt atggcaagtt 3000

actgaaatgg ctagtgacta ttggctgtca tatgaaacat caggcagcat tccatttaat 3060

ccatctctat ttattggagt gtatgttgct atagctgctg tttcaattat ccttcaagta 3120

atcaagagtc ttcttgagac aatattggga cttcagactg ctcagatctt tttcaagaag 3180

atgtttgaca gtattttgca tgccccgatg tcattttttg ataccacacc ttcagggagg 3240

attctcagtc gggcatcatc ggaccaaaca accattgata ttgtgctgtc cttttttgtt 3300

ggtctgacaa tttcaatgta catttcagta ttaagtacca taattgttac ttgtcaggtt 3360

gcctggccat cggttatagc tgtaattcca cttgtactat tgaacatttg gtacaggaat 3420

cgctatcttg caacttctcg ggagctaact agacttgaag gagtaacaaa ggcaccagta 3480

attgatcact tttcagagac tgttctaggt gctacaacca tcagatgctt caagaaggac 3540

aaagaatttt tccaagaaaa tttggacaga atcaattcaa gtttgcgcat gtacttccac 3600

aattatgcag caaatgaatg gcttgggttc cgtctggagt tgattgggac actcgtattg 3660

gcaataactg ctttccttat gattagtctg cctagcaatt ttatcaagaa agaatttgtt 3720

ggcatgtctc tttcatatgg cctctccctc aattctctag tgtattttgc aatatccatt 3780

agctgtatgt tggaaaatga tatggttgct gtggagaggg ttaatcagtt cagtaccctt 3840

ccttctgagg cagtgtggaa gatagaagac catcttcctt ctccaaattg gcccactcat 3900

ggtgatattg acatcgatga tttaaaggtt aggtaccgac cgaatacacc tctaattttg 3960

aaaggcataa ctgtaagcat tagtggtggt gaaaagatag gagttgttgg aagaacaggc 4020

agtggaaaat caactttgat ccaagcattg ttcagacttg tagagcctgt gcaggggaca 4080

atgatcattg atggaataga catatgcaca ttgggtctgc atgatctgag gtcccgcttt 4140

ggcattattc cccaagaacc agttctcttt gaaggaacaa ttcgaagcaa cattgatcca 4200

attgggcagt attcagatgc tgagatatgg cgggctctgg agggctgcca actgaaagat 4260

gtagttgctt caaaacctca aaaacttgat gctctagtgg ctgatagtgg ggagaactgg 4320

agtgtaggcc aaaggcagct tctttgtctt ggccgcgtca tattgaagcg gactcgaata 4380

ttatttatgg atgaggcaac tgcttcagtt gattctcaaa ctgatgccac gatacagaag 4440

atcacacgac aagaattttc ttcatgtaca ataattagca ttgcacacag aataccaaca 4500

gtcatggatt gtgatagagt tctggtgctg gatgcaggtc tggtaaaaga atttgattca 4560

ccctcaagat tgattgagca gccatccctg tttggtgcaa tggttgagga atacgccaat 4620

cgctcatcca acctgtaa 4638

<210> 2

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

ggcgccagat gataccgccg 20

<210> 3

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

gccttcttcc acatgctgga 20

<210> 4

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 4

ggaaagagaa agtggtcaag taag 24

<210> 5

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 5

ttaaatggaa tgctgcctga tg 22

<210> 6

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 6

ggtcaacttg ttgattcccc tct 23

<210> 7

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 7

aaccgcaaaa tccaaagaac g 21

<210> 8

<211> 31

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 8

aagcttcatg ccgatgccgg ccacctcgct c 31

<210> 9

<211> 28

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 9

ggatccccag gttggatgag cgattggc 28

Claims (2)

1.一种水稻OsABCC9基因，其特征在于，所述水稻OsABCC9基因的核苷酸序列如SEQ IDNo.1所示。

2.权利要求1所述的水稻OsABCC9基因在转运镉中的应用。

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