CN112136601A - 一种鸡腿菇菌丝的培养基及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明属于菌丝培养技术领域，尤其涉及一种鸡腿菇菌丝的培养基及其应用；本发明提供的一种鸡腿菇菌丝的培养基，以重量份计，包括以下原料：马铃薯200份、蔗糖20份、蛋白胨2份、KH₂PO₄0.5份，MgSO₄0.5份，H₂O 1000份；其特征在于，还包含有Cu²⁺，所述Cu²⁺的浓度小于600mg/L；此培养基由于富含Cu²⁺，因此可以促进鸡腿菇菌丝的生长，且在Cu²⁺的浓度为100mg/L时，生长最快；由于本培养基富含Cu²⁺使得长成的鸡腿菇也富含铜元素，可以为人体提供铜微量元素。本发明提供的培养基对鸡腿菇进行适宜环境的培养，步骤简单，可以快速培养需要的鸡腿菇，长成的鸡腿菇富含人体所需的微量元素铜元素。

Description

一种鸡腿菇菌丝的培养基及其应用

技术领域

本发明属于菌丝培养技术领域，尤其涉及一种鸡腿菇菌丝的培养基及其应用。

背景技术

鸡腿菇，学名是毛头鬼伞，隶属于鬼伞科鬼伞属，其营养丰富、口感极佳，味道鲜美，营养价值高，因而很受消费者的青睐，它是近几年来人工开发的具有商业潜力的稀有真菌，因此其开发潜力很大并且拥有很好的应用前景；鸡腿菇的培育需要由菌丝繁育，因此鸡腿菇菌丝的生长速度越快，鸡腿菇的培育时间变短，其商业价值就越高，而鸡腿菇菌丝的培养基一定程度上会影响其生长速度，为了使得鸡腿菇菌丝生长更快，需要对现有的培养基的成分进行改进。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供了一种鸡腿菇菌丝的培养基，以重量份计，包括以下原料：马铃薯200份、蔗糖20份、蛋白胨2份、KH₂PO₄ 0.5份，MgSO₄ 0.5份，H₂O 1000份；还包含有Cu²⁺，所述Cu²⁺的浓度小于600mg/L。

作为上述方案的进一步说明，还包括琼脂11份。

作为上述方案的进一步说明，所述Cu²⁺的浓度为100mg/L。

本发明还提供了一种鸡腿菇菌丝的培养方法，包含以下步骤：

(1)菌种活化：在超净工作台上将保藏的鸡腿菇菌株用无菌竹签挑取接种于新制的PDA固体斜面培养基上，28℃培养7天，备用；

(2)液体培养基接种培养：将活化的斜面菌种用无菌竹签挑取菌丝接入液体培养基中，所述液体培养基中富含有Cu²⁺，其浓度小于800mg/L，置于28℃摇床以120r/min培养10天。

作为上述方案的进一步说明，所述步骤(2)可以替换为固体培养基接种培养：将含铜离子的固体培养基倒入培养皿中，用无菌竹签挑取菌丝放于培养基中央，将接种后的固体平板放置在28℃恒温培养箱中倒置避光培养。

作为上述方案的进一步说明，所述液体培养基的成分以重量份计，包括以下原料：马铃薯200份、蔗糖20份、蛋白胨2份、KH₂PO₄0.5份，MgSO₄ 0.5份，H₂O 1000份。

作为上述方案的进一步说明，所述液体培养基的成分以重量份计，包括以下原料：马铃薯200份、蔗糖20份、蛋白胨2份、KH₂PO₄0.5份，MgSO₄ 0.5份，H₂O 1000份、琼脂11份。

作为上述方案的进一步说明，所述Cu²⁺的浓度为100mg/L。

本发明的有益效果：本发明提供的培养基，由于富含Cu²⁺，因此可以促进鸡腿菇菌丝的生长，且在Cu²⁺的浓度为100mg/L时，生长最快；由于本培养基富含Cu²⁺使得长成的鸡腿菇也富含铜元素，可以为人体提供铜微量元素；另外本发明提供的一种鸡腿菇菌丝的培养方法，其利用本发明提供的培养基对鸡腿菇进行适宜环境的培养，步骤简单，可以快速培养需要的鸡腿菇，长成的鸡腿菇富含人体所需的微量元素铜元素。

附图说明

图1：不同浓度铜对鸡腿菇菌落直径的影响；

图2：鸡腿菇在添加不同浓度Cu²⁺的培养基平板上生长第10天的情况(A.空白对照；B.100mg/L；C.400mg/L；D.600mg/L；E.800mg/L)；

图3：不同浓度铜对鸡腿菇日平均增长量的影响；

图4：不同浓度铜对鸡腿菇菌丝体POD活性的影响。

具体实施方式

下面将结合附图和实施方式对本发明作进一步说明。

实施例：

本实施例提供了一种鸡腿菇菌丝的培养基，其以重量份计，包括以下原料：马铃薯200份、蔗糖20份、蛋白胨2份、KH₂PO₄ 0.5份，MgSO₄ 0.5份，H₂O 1000份；其中还包含有Cu²⁺，其浓度小于600mg/L。

为了使本发明的有益效果更加明显，本实施例采取了以下实验通过不同成分的培养基对鸡腿菇菌丝进行培养和对比。

第一步：菌种活化，在超净工作台上将保藏的鸡腿菇菌株用无菌竹签挑取接种于新制的固体培养基上，28℃培养7天，备用；其中液体培养基按照以下成分制作，取新鲜土豆去皮200g，蔗糖20g，蛋白胨2g，KH₂PO₄0.5g，MgSO₄0.5g，H₂O1000mL，其pH自然；

第二步：液体培养基接种培养：将活化的斜面菌种用无菌竹签挑取大小均一的菌丝接入液体培养基中(在200mL三角瓶装入含有0、100、400、600、800mg/L不同浓度的铜离子培养基各50mL)，每个梯度重复3个，置于28℃摇床以120r/min培养10天。

同时，第二步也可以利用固体培养基接种培养：在上述液体培养基中加入11g琼脂，将含有不同浓度的铜离子(分别为0、100、400、600、800mg/L)培养基倒入培养皿中，用无菌竹签挑取大小均一的菌丝放于培养基中央，将接种后的固体平板放置在28℃恒温培养箱中倒置避光培养，每个梯度重复3个。

以上过程中，需定期观察鸡腿菇菌丝长势情况并测量菌落直径，其测定方法如下：以固体培养基为例，用无菌竹签从活化的固体养基上挑取菌丝分别置于含有0、100、400、600、800mg/L不同浓度Cu²⁺的液体培养基中，在28℃下培养箱中培养10天，从第4天开始测量，分别在第4天，第8天，第10天测量菌落直径并观察菌丝的长势情况，每个处理重复3次，其结果如图1所示。

由图1可知，培养到第4天，可以明显的看出空白对照组(0mg/L的Cu²⁺)的菌丝长势较其他组的较好，第8天时，Cu²⁺浓度为100mg/L组的菌丝生长最快，并且菌落直径最长，说明此浓度对菌丝体的生长有显著的促进作用，随着Cu²⁺浓度升高，菌丝生长较慢，与对照相比差异显著，并且菌落直径较短，说明过高的Cu²⁺浓度对菌丝体的生长有明显的抑制作用；第10天时，Cu²⁺浓度为100mg/L时，菌丝体依然生长最快，并且菌丝长势跟其他组相比较好，其余组菌丝体生长缓慢，与对照相比没有明显的促进作用，可见过高浓度Cu²⁺会抑制菌丝体的生长；可以得出不同浓度Cu²⁺对鸡腿菇菌丝体生长的促进作用都有所差异，但是在Cu²⁺浓度为100mg/L时，不但可以促进菌丝体的生长，而且可以使菌丝洁白致密、长势旺、生长浓密、粗壮、铺满整个培养基(如图2)；当Cu²⁺浓度为800mg/L时，与其他组对比，菌丝生长缓慢，菌落较小，并且菌落直径较短，说明此浓度对菌丝的生长有显著的抑制作用(如图2)。

从本试验结果看，培养基中添加不同浓度的Cu²⁺培养出的菌落直径有所差异，在培养基中添加100mg/L的Cu²⁺能明显促进菌丝体的生长，并且菌丝体长势情况最佳，但超过600mg/L时，菌丝生长受到抑制作用；结果表明：Cu²⁺浓度对鸡腿菇菌丝体的生长有显著的影响，并且鸡腿菇菌丝体生长的最佳Cu²⁺浓度为100mg/L，此浓度下菌丝长势情况较好，可以从图3中看出菌丝基本铺满了整个固体培养基。

由表1可以看出，Cu²⁺浓度极显著影响鸡腿菇菌丝体的生长(P<0.01)；同时培养时间对鸡腿菇菌丝体生长的影响也存在极显著影响(P<0.01)；但Cu²⁺浓度与培养时间两个因素的交互作用不显著(P>0.05)。

表1双因素分析浓度与培养时间对鸡腿菇菌落直径的影响

注：**表示P＜0.01；NS表示P＞0.05。

不同浓度Cu²⁺对菌丝生长影响显著，由图3可以看出，在固体培养基中添加100mg/LCu²⁺时，鸡腿菇菌丝体日平均增长量最大，说明此浓度下的菌丝体生长速度最快；当Cu²⁺浓度超过600mg/L时，鸡腿菇菌丝日平均增长量逐渐减少，菌丝体生长速度缓慢。随着Cu²⁺浓度的升高，鸡腿菇菌丝生长受抑制的程度也增大，当Cu²⁺浓度为800mg/L时，Cu²⁺对鸡腿菇菌丝生长的抑制作用达到显著水平。原因有可能是高浓度的Cu²⁺会抑制菌丝体的生长。结果表明：鸡腿菇菌丝体生长的最佳浓度是100mg/L。

由于鸡腿菇菌丝的生长与多种因素相关，因此通过对菌丝体生物量的测定以及菌丝体过氧化物酶活性测定，来综合评价。

菌丝体生物量的测定：制备含有0、100、400、600、800mg/L不同浓度Cu元素的液体培养基，从活化了的斜面固体培养基培养的菌种中用无菌竹签挑取大小均一的菌丝放入含有不同浓度Cu²⁺的液体培养基中，28℃120r·min^-1摇床振荡培养10天。将培养液中的菌丝体过滤，用去离子水或蒸馏水多次冲洗，将得到的菌丝体置于温度为80℃烘箱内烘干至恒重，称其干重，精确到0.1mg。

以上可得，不同浓度铜对液体培养鸡腿菇菌丝的影响也显著，从表2可以看出，不同的Cu²⁺浓度会使菌丝体的生物量有所不同；当Cu²⁺浓度为100mg/L时，鸡腿菇菌丝体的生物量达到最大值，平均值为0.333g/L，与对照组相比差异显著；当Cu²⁺浓度在100-800mg/L时，鸡腿菇菌丝体生物量随着Cu²⁺浓度的升高而降；当Cu²⁺浓度为800mg/L时，鸡腿菇菌丝体生物量最低，原因可能是此浓度对鸡腿菇菌丝体的生长有抑制作用。

结果表明：鸡腿菇菌丝体生长对Cu²⁺需求的最适浓度为100mg/L，并且与对照相比差异显著。

表2不同浓度Cu²⁺对鸡腿菇菌丝体生物量的影响

注:不同小写字母表示差异显著(P<0.05)。

菌丝体过氧化物酶活性测定：液体培养基摇床振荡培养5天后，分别取样，室温、4000r·min^-1离心15min，取上清液，4℃低温保存备用；取反应混合液4mL(浓度0.05mol·L^-1磷酸盐缓冲液50mL，加入愈创木酚0.019mL、H₂O₂ 0.028mL)与1mL粗酶液混合，28℃水浴保温30min后于470nm处测OD值。

从图4可以看出，不同浓度Cu²⁺处理的鸡腿菇菌丝体的过氧化物酶活性均有差异，当Cu²⁺浓度为100mg/L时，鸡腿菇菌丝体的过氧化物酶活性达到最大值，说明此浓度的Cu²⁺对菌丝体的过氧化物酶活性有显著的促进作用，并且与对照相比差异显著；当Cu²⁺浓度在600～800mg/L时，菌丝体的过氧化物酶活性普遍较低，并且当Cu²⁺浓度为800mg/L时，菌丝体的过氧化物酶活性最低，说明过高的Cu²⁺浓度对菌丝体的过氧化物酶活性有明显的抑制作用，并且此浓度不利于鸡腿菇菌丝体的生长；不同浓度铜对鸡腿菇菌丝体过氧化物酶活性的影响与其对菌丝体生长的影响的结果是一致的。

通过以上实施例和对比实验可以看出，本发明提供的培养基，由于富含Cu²⁺，因此可以促进鸡腿菇菌丝的生长，且在Cu²⁺的浓度为100mg/L时，生长最快；由于本培养基富含Cu²⁺使得长成的鸡腿菇也富含铜元素，可以为人体提供铜微量元素；另外本发明提供的鸡腿菇菌丝的培养方法，其利用本发明提供的培养基对鸡腿菇进行适宜环境的培养，步骤简单，可以快速培养需要的鸡腿菇，长成的鸡腿菇富含人体所需的微量元素铜元素。

以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书及附图内容所作的等效结构或等效流程变换，或直接或间接运用在其它相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。

Claims (8)

1.一种鸡腿菇菌丝的培养基，以重量份计，包括以下原料：马铃薯200份、蔗糖20份、蛋白胨2份、KH₂PO₄ 0.5份，MgSO₄ 0.5份，H₂O 1000份；其特征在于，还包含有Cu²⁺，所述Cu²⁺的浓度小于600mg/L。

2.根据权利要求1所述的一种鸡腿菇菌丝的培养基，其特征在于，还包括琼脂11份。

3.根据权利要求1或2所述的一种鸡腿菇菌丝的培养基，其特征在于，所述Cu²⁺的浓度为100mg/L。

4.一种鸡腿菇菌丝的培养方法，其特征在于，包含以下步骤：

(1)菌种活化：在超净工作台上将保藏的鸡腿菇菌株用无菌竹签挑取接种于新制的PDA固体斜面培养基上，28℃培养7天，备用；

(2)液体培养基接种培养：将活化的斜面菌种用无菌竹签挑取菌丝接入液体培养基中，所述液体培养基中富含有Cu²⁺，其浓度小于800mg/L，置于28℃摇床以120r/min培养10天。

5.如权利要求4所述的一种鸡腿菇菌丝的培养方法，其特征在于，所述步骤(2)可以替换为固体培养基接种培养：将含铜离子的固体培养基倒入培养皿中，用无菌竹签挑取菌丝放于培养基中央，将接种后的固体平板放置在28℃恒温培养箱中倒置避光培养。

6.如权利要求4所述的一种鸡腿菇菌丝的培养方法，其特征在于，所述液体培养基的成分以重量份计，包括以下原料：马铃薯200份、蔗糖20份、蛋白胨2份、KH₂PO₄ 0.5份，MgSO₄0.5份，H₂O 1000份。

7.如权利要求5所述的一种鸡腿菇菌丝的培养方法，其特征在于，所述液体培养基的成分以重量份计，包括以下原料：马铃薯200份、蔗糖20份、蛋白胨2份、KH₂PO₄ 0.5份，MgSO₄0.5份，H₂O 1000份、琼脂11份。

8.如权利要求6或7所述的一种鸡腿菇菌丝的培养方法，其特征在于，所述Cu²⁺的浓度为100mg/L。

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