CN112118743A - α硫辛酸作为水生动物饲料添加剂的用途 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及α‑硫辛酸作为用于包括鱼类和基围虾在内的水生动物,特别是用于冷水鱼类如鲑鱼、鳊鱼、鲈鱼和用于温水鱼类如鲤鱼、罗非鱼、鲶鱼的饲料添加剂的用途。更具体地,本发明涉及α硫辛酸用于以下的用途:改善鱼的饲料转化率和/或日体重增加;通过调节肠道微生物菌群和/或通过保护所述动物免受病原病毒引起的感染来降低死亡率。
Description
背景技术
水产养殖中的一种重要因素是周转率(turnover rate)。周转率取决于鱼生长到可收获大小有多快。
例如,将大西洋鲑鱼从二龄鲑(smolt,当大西洋鲑鱼可以首次从淡水转移到海水的生理阶段)饲养到可收获的大小需要12至18个月。快速周转有若干个积极结果。首先,它有助于现金流。其次,它改善了风险管理。
周转率可能例如受到饲料转化率(FCR)的影响,然而其也可能受到死亡率的影响。
在本领域中通常已知的是,死亡率因失衡的微生物菌群和/或因由病原微生物或病毒引起的感染而增加。鱼病是常见的,并且在长生长期中发作的可能性更高。还存在鱼将由于意外而逃脱的风险,例如当移动网时,或由于恶劣天气导致养鱼围栏破损。
关于其他农场饲养动物,众所周知的是使用抗生素和疫苗来预防疾病的发展。在水产养殖中,由于疾病传播非常迅速且病鱼具有降低的食欲的事实,因此不经常施加含抗生素的加药饲料。另外,鱼未食用的剩余加药饲料可能对水生环境具有负面影响。如果疫苗可得,则广泛使用疫苗,但并非针对所有疾病都开发出了疫苗。此外,已经观察到药物和胁迫的使用往往导致对鱼表现的负面影响。
因此,在水产养殖行业中仍然需要预防疾病的发展,从而通过包括肠道水平的抗微生物和/或抗病毒活性在内的任何预防手段来降低死亡率;并且需要甚至更好地恢复以改善表现。
发明内容
本申请的发明人惊奇地发现,α硫辛酸具有用于鱼饲料中,例如用于改善饲料转化率(FCR)和/或增加体重和/或调节肠道菌群的巨大潜力。此外,发明人惊奇地发现α硫辛酸还具有针对胰腺疾病病毒的抗病毒活性,从而导致了降低的死亡率。
因此,在一个方面中,本发明涉及一种组合物,所述组合物包含α-硫辛酸、其盐或衍生物作为活性成分,其中所述组合物选自由以下项组成的组:饲料添加剂、饲料预混物或水产养殖饲料,其中所述水产养殖饲料中的活性成分的浓度在150mg/kg饲料至1000mg/kg饲料的范围内。
在另一方面中,本发明涉及一种制备饲料丸粒的方法,所述方法包括以下步骤:
i)混合饲料成分;ii)形成包含所述饲料成分的鱼饲料丸粒;(iii)获得饲料丸粒,(iv)用包含α-硫辛酸、其盐或衍生物的油或在包含α硫辛酸、其盐或衍生物的油中包被所述丸粒;以及(v)获得包含浓度介于150mg/kg饲料与1000mg/kg饲料之间的α-硫辛酸或其衍生物或盐的饲料丸粒。
在第三方面中,本发明涉及α-硫辛酸、其盐或衍生物用于以下的用途:
-改善水生动物的饲料转化率和/或日体重增加(标准生长率);或者
-降低水生动物的死亡率;或者
-治疗和预防水生动物的由病原微生物或病毒引起的疾病。
在第四方面中,本发明涉及用于以下的方法:
-改善水生动物的饲料转化率和/或标准生长率;或者
-降低水生动物的死亡率;或者
-治疗和/或预防水生动物的由病原微生物或病毒引起的疾病;
所述方法包括向水生动物饲喂包含α-硫辛酸、其盐或衍生物的饲料。
在第五方面中,本发明涉及一种组合物,所述组合物包含α-硫辛酸、其盐或衍生物,所述组合物用于:
-改善水生动物的饲料转化率和/或标准生长率;或者
-降低水生动物的死亡率;或者
-治疗和/或预防水生动物的由病原微生物或病毒引起的疾病。
在另一方面中,本发明涉及一种饲料添加剂组合物,所述饲料添加剂组合物包含粒径低于1mm的粉末形式的α-硫辛酸、其盐或衍生物,任选地包埋在油载体中。
在另一方面中,本发明涉及一种预混组合物或水产饲料添加剂,所述预混组合物或水产饲料添加剂包含α-硫辛酸、其盐或衍生物和至少一种附加组分,所述至少一种附加组分选自由以下项组成的组:脂溶性维生素、水溶性维生素、类胡萝卜素、多不饱和脂肪酸、微量矿物质、益生菌、益生元和巨量矿物质。
附图说明
图1.在SAV挑战之后大西洋鲑鱼鱼苗的累积死亡率,比较了饲喂对照饮食或包含500mgα-硫辛酸/kg饲料的饲料的鱼。
图2.在SAV挑战之后大西洋鲑鱼鱼苗的累积死亡率,评估了饮食α-硫辛酸的剂量响应。
图3.在SAV挑战之后大西洋鲑鱼鱼苗的累积死亡率,评估了饮食α-硫辛酸的剂量响应。-测试1
图4.在SAV挑战之后大西洋鲑鱼鱼苗的累积死亡率,评估了饮食α-硫辛酸的剂量响应。-测试2
图5.在SAV挑战之后大西洋鲑鱼鱼苗的累积死亡率,评估了饮食α-硫辛酸的剂量响应。-测试3
图6.在IPN挑战之后大西洋鲑鱼的累积死亡率,比较了饲喂对照饮食或包含500mgα-硫辛酸/kg饲料、750mgα-硫辛酸/kg饲料和1000mgα-硫辛酸/kg饲料的鱼。
图7.在IPN挑战之后大西洋鲑鱼的表现,比较了饲喂对照饮食或包含500mgα-硫辛酸/kg饲料、750mgα-硫辛酸/kg饲料和1000mgα-硫辛酸/kg饲料的饲料的经挑战鱼的生长减少。
图8.饲喂分级水平的饮食α-硫辛酸4周的虹鳟鱼的吞噬细胞的氧化性爆发。
图9.饲喂分级水平的饮食α-硫辛酸4周的虹鳟鱼的淋巴细胞的凋亡。
图10.饲喂分级水平的饮食α-硫辛酸41天的虹鳟鱼的累积饲料转化率(FCR)。
图11.在VNN(野田村病毒)挑战之后海鲈鱼鱼苗的累积死亡率,比较了饲喂对照饮食或包含250mgα-硫辛酸/kg饲料、500mgα-硫辛酸/kg饲料和750mgα-硫辛酸/kg饲料的饲料的鱼。
定义
水生动物:术语“水生动物”是指甲壳类动物,包括但不限于基围虾(shrimps)和对虾(prawns);以及鱼类,包括但不限于青甘鱼(amberjack)、巨滑舌鱼(arapaima)、鲃鱼(barb)、鲈鱼(bass)、扁鲹(bluefish)、鲮脂鲤科(bocachico)、鳊鱼(bream)、大头鱼(bullhead)、大盖巨脂鲤(cachama)、鲤鱼(carp)、鲶鱼(catfish)、卡特拉魮(catla)、虱目鱼(chanos)、红点鲑(char)、丽鱼科鱼(cichlid)、军曹鱼(cobia)、鳕鱼(cod)、莓鲈(crappie)、金头鲷(dorada)、石首鱼(drum)、鳗鱼(eel)、虾虎鱼(goby)、金鱼(goldfish)、丝足鱼(gourami)、石斑鱼(grouper)、花身副丽鱼(guapote)、大比目鱼(halibut)、爪哇鱼(java)、野鲮属(labeo)、濑鱼(lai)、泥鳅(loach)、鲭鱼(mackerel)、遮目鱼(milkfish)、银鲈(mojarra)、泥鱼(mudfish)、鲻鱼(mullet)、paco、绿腹丽鱼(pearlspot)、银汉鱼(pejerrey)、河鲈鱼(perch)、梭子鱼(pike)、鲳参鱼(pompano)、斜齿鳊(roach)、鲑鱼(salmom)、长丝异鳃鲶(sampa)、大眼鰤鲈(sauger)、海鲈鱼(sea bass)、海鲷(seabream)、闪光鱼(shiner)、鲈塘鳢(sleeper)、黑鱼(snakehead)、鲷鱼(snapper)、锯盖鱼(snook)、鳎(sole)、蓝子鱼(spinefoot)、鲟鱼(sturgeon)、翻车鱼(sunfish)、香鱼(sweetfish)、丁鲷(tench)、皇冠鱼(terror)、罗非鱼(tilapia)、鳟鱼(trout)、金枪鱼(tuna)、大菱鲆(turbot)、白鳟鱼(vendace)、玻璃梭鲈(walleye)和白鲑鱼(whitefish)。
饲料添加剂:根据本发明的术语饲料添加剂是指旨在被鱼摄取的包含α-硫辛酸作为活性成分的配制品。
饲料预混物:在实践中,使用浓缩物或预混物将如上文所例示的饲料添加剂的组合物掺入动物饲料(例如鱼饲料)中。预混物表示一种或多种微量成分与稀释剂和/或载体的优选均匀的混合物。预混物用于促进微量成分在较大混合物中的均匀分散。可以将根据本发明的预混物作为固体(例如作为水溶性粉末)或液体添加到饲料成分中。
饲料或水产养殖饲料:术语“饲料”或“水产养殖饲料”或“水产饲料”是指适合或旨在被水生动物和十足甲壳类动物摄入的任何化合物、制剂或混合物。用于水生动物的动物饲料通常包含高蛋白和能量的浓缩物,例如鱼粉、糖蜜、寡糖浓缩物以及维生素、矿物质、酶、直接饲喂微生物、氨基酸和/或其他饲料成分(例如在预混物中)。水产养殖饲料是指用于补充或替代天然饲料的制造或人工的饮食(即配合饲料),其最常见地以薄片或丸粒形式生产。饲料丸粒的优选实施方式的特征在于,丸粒大小(直径)在大致0.5mm至16mm丸粒大小(直径)的范围内,并且蛋白质含量为20%w/w至65%w/w。
通常,十足甲壳类动物饲料可以是薄片或丸粒的形式,例如挤出丸粒的形式。在本发明的情境中,术语“十足甲壳类动物饲料”可以是例如基围虾或对虾的饲料。
饲料效率:术语“饲料效率”是指当在某一时间段期间动物以自由采食方式饲喂或饲喂指定量的食物时每单位饲料的体重增加量。“提高的饲料效率”是指与在不存在所述饲料添加剂组合物的情况下饲喂的动物相比,在饲料中使用根据本发明的饲料添加剂组合物导致每单位饲料摄入量的体重增加增加。
饲料转化率(FCR):FCR是动物将饲料质量转化为期望输出的增长的效率的量度。被饲养肉用的动物—例如猪、家禽和鱼—的输出是该动物增加的质量。特别地,FCR被计算为饲料摄入量除以体重增加,所述饲料摄入量和体重增加均为指定时间段内的。FCR改善意味着FCR值降低。FCR改善2%意味着FCR降低2%。
比生长速率(SGR):根据本发明的术语比生长速率(SGR)是指体重的每日增加(以%计)。
具体实施方式
本发明涉及α硫辛酸作为包括鱼类和十足甲壳类动物在内的水生动物的饲料添加剂的用途。
更具体地,本发明涉及α硫辛酸、其盐或衍生物用于以下的用途:改善鱼的饲料转化率和/或日体重增加;通过调节肠道微生物菌群和/或通过保护动物免受病原病毒引起的感染来降低死亡率。
另外,本发明涉及一种新颖的水产饲料组合物,所述新颖的水产饲料组合物包含α硫辛酸、其盐或衍生物作为活性成分,其中所述组合物选自由以下项组成的组:饲料添加剂、饲料预混物或水产养殖饲料。
存在硫辛酸与抗病毒活性、诱导增殖中的癌细胞的细胞凋亡、以及还有抑制细胞凋亡(包括减少高等脊椎动物的心肌细胞的细胞凋亡)相关的现有技术,然而没有公开关于在水产养殖中通过硫辛酸用于改善饲料转化率(FCR)或治疗和/或预防水生动物的由病原微生物或病毒引起的疾病的应用。
在第一特定实施方式中,本发明涉及使用α硫辛酸用于改善水生动物的标准生长率(SGR)和饲料转化率(FCR)和/或水生动物的体重增加的方法和/或用于通过调节肠道微生物菌群来降低水生动物死亡率的方法。
可以基于包括第一处理和第二处理(对照)的生长试验来确定FCR,在第一处理中将至少两种根据本发明的化合物的混合物以每kg饲料合适的浓度添加到动物饲料中,在第二处理中不向动物饲料中添加所述化合物。
如通常已知的,改善的FCR低于对照FCR。在具体实施方式中,与对照相比,FCR改善(即,降低)了至少1.0%,优选地至少1.5%、1.6%、1.7%、1.8%、1.9%、2.0%、2.1%、2.2%、2.3%、2.4%或至少2.5%。
如本文所用的术语“肠”表示胃肠道或消化道(也称为消化管),是指多细胞动物体内摄取食物、消化食物以提取能量和营养并排出剩余废物的器官系统。
如本文所用,术语肠“微生物菌群”是指驻留在肠中并通过帮助适当消化来维持健康的天然微生物培养物。
如本文中与肠道微生物菌群结合使用的术语“调节”通常是指在健康且功能正常的动物中改变、操纵、变更或调节肠道微生物菌群的功能或状态,即非治疗用途。
如本文所用的术语“死亡率”是指在池塘中的生长期结束时活着的动物与最初包括到所述池塘中的动物的数量之比。死亡率可以基于鱼挑战试验来确定,所述鱼挑战试验包括两组受特定鱼病原体挑战的鱼,目的是激发未治疗组中的动物的40%至80%死亡率。然而,在用适当每Kg饲料浓度的至少两种化合物(其中一种是α-硫辛酸、其盐或衍生物)的混合物饲喂的挑战组中,与未处理的组相比,死亡率降低了至少5%,优选地至少10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%或至少50%。
具体地,本申请的发明人惊奇地发现,一种化合物是α-硫辛酸、其盐或衍生物有效地抵抗了由病原微生物或病毒引起的感染。
在本发明的一个实施方式中,水生动物疾病选自由以下项组成的组:胰腺疾病(PD)、白点病、心肌病综合征(CMS)和骨骼肌炎症(HSMI)。
在一个实施方式中,病毒可以是甲病毒(alpha virus)。甲病毒可以是能够导致胰腺疾病的鲑鱼甲病毒亚型2(SAV-2)病毒和/或鲑鱼甲病毒亚型3(SAV-3)病毒。
在另一个实施方式中,病毒可以是心肌炎病毒(PMCV),其为整体病毒科(Totiviridae family)的整体病毒属(totivirus)。在又一个实施方式中,病毒可以是鱼呼肠孤病毒(piscine reovirus,PRV),其是呼肠孤病毒科(Reoviridae family)的逆转录病毒。
在一个实施方式中,病毒可以是野田村病毒科(Nodaviridae)的野田村病毒(nodavirus)。更具体地,该野田村病毒可以选自由以下项组成的组:鱼类野田村病毒(piscine nodavirus)、白点综合症病毒、罗氏沼虾野田村病毒(Macrobrachiumrosenbergii nodavirus,MrNV)和凡纳滨对虾野田村病毒(Penaeus vannamei nodavirus,PvNV)。
因此,在第二具体实施方式中,本发明涉及使用α硫辛酸用于预防或治疗由微生物或病毒感染引起的疾病的方法。
在第三具体实施方式中,本发明涉及一种组合物,所述组合物包含α-硫辛酸、其盐或衍生物作为活性成分,所述组合物用于:
-改善水生动物的饲料转化率和/或标准生长率;
-降低水生动物的死亡率;
-治疗和/或预防水生动物的由病原微生物或病毒引起的疾病。
根据本发明的饲料添加剂组合物可以如实施例3中所述制备。此类组合物的活性成分可以是α硫辛酸、其盐或衍生物。将α硫辛酸、其盐或衍生物筛分以实现小于1mm的粒度并包埋在油载体中。
所述油载体可以是鱼油、微生物油脂和/或一种或多种植物油。植物油可以选自由以下项组成的组:菜籽油和豆油。根据本发明的微生物油的示例是来自裂殖壶菌属(Schizochytrium)的油。优选地,油是二十碳五烯酸(“EPA”)和/或二十二碳六烯酸(“DHA”)源。“二十碳五烯酸”[“EPA”]是顺式-5,8,11,14,17-二十碳五烯酸的通用名称。该脂肪酸是20:5ω-3脂肪酸。“二十二碳六烯酸”[“DHA”]是顺式-4,7,10,13,16,19-二十二碳六烯酸的通用名称。该脂肪酸是22:6ω-3脂肪酸。
α-硫辛酸可例如作为高纯度的结晶粉末从苏州富士莱医药股份有限公司(SUZHOUFUSHILAI PHARMACEUTICALCO.,LTD.)商购获得。
如实施例1和实施例2中所述,可以执行将含有α硫辛酸、其盐或衍生物的饲料添加剂组合物掺入鱼饲料中。饲料中α硫辛酸的最终浓度根据标准方法通过HPLC测定。
可供选择地,可以通过制备α硫辛酸、其盐或衍生物与其他合适的添加剂的预混物来进行将含有α硫辛酸、其盐或衍生物的饲料添加剂组合物掺入鱼饲料中。此类预混物可包含2-10重量%的α硫辛酸、其盐或衍生物;0-40重量%的其他常规添加剂,例如调味剂;以及50-98重量%的任何常规吸收支持物。
该支持物可含有例如40-50重量%的木纤维、8-10重量%的硬脂精、4-5重量%的姜黄粉、4-5重量%的迷迭香粉、22-28重量%的石灰石、1-3重量%的树胶(例如阿拉伯树胶)、5-50重量%的糖和/或淀粉,以及5-15重量%的水。
该预混物还可含有维生素(例如维生素E)、矿物质盐和其他饲料添加剂成分(例如含有核苷酸、葡聚糖和其他肠道微生物菌群调节剂(例如益生菌和/或益生元)的酵母提取物),然后最终以某一量添加到饲料中,使得饲料包含10-5000ppm,优选地100-1000ppm、150-1000ppm、500-1000ppm、500-750ppm或100-500ppm的α硫辛酸、其盐或衍生物。
此外,可以添加到预混物中的任选的饲料添加剂成分是着色剂,例如类胡萝卜素,例如β-胡萝卜素、虾青素和叶黄素;芳香族化合物;稳定剂;抗微生物肽;不饱和脂肪酸;和/或至少一种酶,该酶选自植酸酶(EC 3.1.3.8或3.1.3.26);木聚糖酶(EC 3.2.1.8);半乳聚糖酶(EC 3.2.1.89);α-半乳糖苷酶(EC 3.2.1.22);蛋白酶(EC 3.4.);磷脂酶A1(EC3.1.1.32);磷脂酶A2(EC 3.1.1.4);溶血磷脂酶(EC 3.1.1.5);磷脂酶C(EC 3.1.4.3);磷脂酶D(EC 3.1.4.4);淀粉酶,例如α-淀粉酶(EC 3.2.1.1);和/或β-葡聚糖酶(EC 3.2.1.4或EC 3.2.1.6)。
多不饱和脂肪酸的示例是C18、C20和C22多不饱和脂肪酸,诸如花生四烯酸、二十二碳六烯酸,二十碳五烯酸和γ-亚油酸。鱼油、微生物油脂和/或一种或多种植物油是这些脂肪酸的来源。植物油可以选自由以下项组成的组:菜籽油和豆油。根据本发明的微生物油脂的示例是来自裂殖壶菌属(Schizochytrium)的油。
根据本发明的优选的预混组合物包含作为活性成分的α-硫辛酸、其盐或衍生物,以及维生素E制剂,其中脂溶性维生素E制剂是至少一种选自由以下项组成的组的化合物:α-生育酚、β-生育酚、γ-生育酚、δ-生育酚、α-生育三烯酚、β-生育三烯酚、γ-生育三烯酚、δ-生育三烯酚以及它们的酯,优选地它们的乙酸酯。此类预混物具有的优点是维生素E的存在使活性成分稳定化。
根据本发明的另一种优选的预混组合物包含作为活性成分的α-硫辛酸、其盐或衍生物,以及包衣油,该活性成分溶解或悬浮在该包衣油中。
所述包衣油可为鱼油、微生物油脂和/或一种或多种植物油。植物油可以选自由以下项组成的组:菜籽油和豆油。根据本发明的微生物油的示例是来自裂殖壶菌属的油。优选地,该油是二十碳五烯酸(“EPA”)和/或二十二碳六烯酸(“DHA”)源。
在另一个实施方式中,本发明涉及用于水生动物的饲料或鱼饲料组合物。
如本文所用的术语“饲料”或“鱼饲料”或“水生饲料”包括根据本发明的鱼饲料组合物和如上所述的组分。典型地,鱼饲料包含鱼粉作为组分。适当地,鱼饲料为薄片或丸粒的形式,例如挤出丸粒的形式。
在一个实施方式中,饲料包含每kg饲料150mg的α-硫辛酸、其盐或衍生物,例如每kg饲料200-450mg的α-硫辛酸、其盐或衍生物,例如每kg饲料250-400mg的α硫辛酸、其盐或衍生物,例如每kg饲料300-350mg的α硫辛酸或其盐或衍生物。
在一个实施方式中,饲料包含每kg饲料200mg,优选地每kg饲料250mg、300mg、350mg、400mg、450mg、500mg、550mg、600mg、650mg、700mg、750mg、800mg、850mg、900mg、950mg、1000mg的α-硫辛酸、其盐或衍生物。
在一个实施方式中,饲料包含每kg饲料至多1000mg,优选地每kg饲料至多950mg、900mg、850mg、7800mg、750mg、700mg、650mg、600mg、550mg、500mg、450mg、400mg、350mg、300mg、250mg的α硫辛酸、其盐或衍生物。
在一个实施方式中,饲料包含在每kg饲料150-1000mg的范围中,优选地在每kg饲料200-950mg、250-900mg、300-850mg、350-800mg、400-750mg、450-700mg、500-650mg的范围内的α-硫辛酸、其盐或衍生物。
在一个特定实施方式中,水生动物饲料每kg饲料其,例如在每kg饲料200-1000mg的α-硫辛酸、其盐或衍生物的范围中,例如在每kg饲料250-950mg的α-硫辛酸、其盐或衍生物的范围中,例如在每kg饲料300-900mg的α硫辛酸、其盐或衍生物的范围中,例如在每kg饲料400-850mg的α硫辛酸,其盐或其衍生物的范围中,例如在每kg饲料450-800mg的α硫辛酸、其盐或衍生物的范围中,例如在每kg饲料500-750mg的α硫辛酸、其盐或衍生物的范围中,例如在每kg饲料550-700mg的α硫辛酸、其盐或衍生物的范围中,例如在每kg饲料600-650mg的α硫辛酸、其盐或衍生物的范围中,例如优选地在每kg饲料250-1000mg的α硫辛酸、其盐或衍生物的范围中。
如本文所述的鱼饲料包含20-60重量%的蛋白质和1-45重量%的水分和脂质的近似组成。
在一个实施方式中,水生动物饲料是鱼饲料或十足甲壳类动物饲料。
在一些特定示例中,水产饲料包括以下来源中的一种或多种:
-蛋白质、碳水化合物和脂质(例如鱼粉、鱼油、血粉、羽毛粉、家禽粉、鸡肉粉和/或从其他屠宰场废物产生的其他类型的粉),
-动物脂肪(例如家禽油),
-植物粉(例如豆粉、羽扇豆粉、豌豆粉、菜豆粉、油菜粉和/或向日葵粉),
-植物油(例如菜籽油、豆油和/或亚麻荠籽油(camelina oil)),
-麸质(例如小麦麸质或玉米麸质),以及
-添加的氨基酸(例如赖氨酸)
-灰分
-水分,例如水。
因此,在一个实施方式中,本发明的水生动物饲料可包含选自由以下项组成的组的成分:碳水化合物源、蛋白质源、脂质源、灰分、水,以及它们的任何组合。
通常,蛋白质源可占组合物和/或鱼饲料的20-60%(w/w),例如26-54%(w/w)、例如27-53%(w/w)、例如28-52%(w/w)、例如27-51%(w/w)、例如28-50%(w/w)、例如29-49%(w/w)、例如30-48%(w/w)、例如31-47%(w/w)、例如32-46%(w/w)、例如33-45%(w/w)、例如34-44%(w/w)、例如35-43%(w/w)、例如36-42%(w/w)、例如37-41%(w/w)、例如38-40%(w/w)、例如39-40%(w/w)、例如20-40%(w/w)、例如25-60%(w/w),优选地在30-55%w/w的范围中。
碳水化合物源可占组合物和/或鱼饲料的10-25%(w/w),例如11-24%(w/w)、例如12-23%(w/w)、例如13-24%(w/w)、例如14-23%(w/w)、例如15-24%(w/w)、例如16-23%(w/w)、例如17-22%(w/w)、例如18-21%(w/w)、例如19-20%(w/w),优选地在10-15%(w/w)的范围中。
脂质源可占组合物和/或鱼饲料的15-40%(w/w),例如16-39%(w/w)、例如17-38%(w/w)、例如18-37%(w/w)、例如19-36%(w/w)、例如20-35%(w/w)、例如21-36%(w/w)、例如22-35%(w/w)、例如23-36%(w/w)、例如24-35%(w/w)、例如25-34%(w/w)、例如26-33%(w/w)、例如27-32%(w/w)、例如28-33%(w/w)、例如29-32%(w/w)、例如30-31%(w/w),优选地在25-40%(w/w)的范围中。
在另一个实施方式中,本发明涉及一种提供挤出饲料丸粒的方法,所述方法包括根据权利要求18所述的步骤。
根据本发明的饲料丸粒(例如水生饲料丸粒)可以是挤出丸粒。挤出饲料丸粒可以通过本发明的方法生产。
在优选的示例中,最终的饲料丸粒包含1%至40%,例如12%至45%的根据本发明的包衣油。
可以设想挤出饲料丸粒的DORIS值在75-100%的范围中。DORIS值是在DORIS测试仪(现实测试中的耐用性)(Akvasmart,AKVA group ASA,Bryne,Norway)上测量的。DORIS测试仪被设计用于模拟气动进料系统期间的丸粒降解。结果介于0%与100%之间,并且对应于整个丸粒在DORIS暴露之后相对于初始样品质量的的质量分数(m/m)。
还可以设想本发明的挤出饲料丸粒的丸粒硬度在20-100N的范围中。丸粒硬度是在来自Stable Micro Systems Ltd,Godalming的丸粒强度质构仪上测定的。更具体地,可以使用来自Stable Micro Systems的安装有圆柱形探头(P/40)的TA-XT+质构仪(TA)测定丸粒硬度。
该饲料可以饲喂所有类型的鱼,包括冷水鱼和基围虾。一些示例是大菱鲆、大比目鱼、黄尾三文鱼、鳟鱼、鲷鱼、鲈鱼和金枪鱼。该饲料特别适合用于饲喂鲑鱼类,包括大西洋鲑鱼(安大略鲑(Salmo salar))、其他鲑鱼物种和鳟鱼、以及非鲑鱼(例如鳕鱼、海鲈鱼、海鲷和鳗鱼)。它适合用于饲喂处于淡水(FW)阶段和海水(SW)阶段中以及处于孵化后直至屠宰之前的时段中的所有时期(例如鱼苗、小鱼(fingerlings)、幼鱼(parr)、二龄鲑和成鱼)中的鲑鱼、鳟鱼、鳊鱼和/或鲈鱼。
本发明的组合物(即饲料、饲料添加剂、预混物和油)可以特别适合用于水生动物和多种水生动物物种。
在本发明的一个特别优选的实施方式中,水生动物是鱼或十足类甲壳动物。
鱼可以是任何种类的鱼,例如但不限于选自由以下项组成的组的鱼:鲑鱼、鳟鱼、海鲷、海鲈鱼、鳕鱼、鳗鱼、大菱鲆、大比目鱼、黄尾鱼、金枪鱼、鲤鱼、罗非鱼和鲶鱼。在特别优选的实施方式中,鱼选自由以下项组成的组:鲑鱼、鳟鱼、海鲷和海鲈鱼。
鲑鱼可为鲑科(family Salmonidae)的,以及鲑亚科(subfamily of Salmoninae)的。在一个实施方式中,鲑鱼选自由以下项组成的组:斑鳟属(Salmo)、大麻哈鱼属(Oncorhynchus)和Salvenis属。在另一个实施方式中,斑鳟属选自由以下项组成的组:大西洋鲑鱼(安大略鲑)和褐鲑鱼(海鳟(Salmo trutta))。在又一个实施方式中,大麻哈鱼属选自由以下项组成的组:奇努克鲑鱼(帝王鲑(Oncorhynchus tshawytsch))、虹鳟鱼(虹鳟(Oncorhynchus mykiss))、红大麻哈鱼(红大马哈鱼(Oncorhynchus nerka))和银大麻哈鱼(银大马哈鱼(Oncorhynchus kisutch))。在另一个实施方式中,Salvenis属选自由以下项组成的组:北极红点鲑(Salvelinus alpinus)、溪红点鲑(美洲红点鲑(Salvelinusfontinalis))和湖红点鲑(Salvelinus namaycush)。
海鲷可为金头鲷(Sparus aurata),而海鲈鱼可为欧洲鲈(Dicentrarchuslabrax)
在本发明的一个优选实施方式中,十足甲壳类动物可以是基围虾或对虾。
基围虾可以选自由以下项组成的组:太平洋白虾(凡纳滨对虾(Penaeusvannamei)或南美白对虾(Litopenaeus vannamei))、白脚虾(凡纳滨对虾或南美白对虾)、黑虎虾(斑节对虾(Penaeus monodon))、日本囊对虾(日本对虾(Penaeus japonicas)或日本沼虾(Marsupenaeus japonicas))、西部蓝虾(蓝对虾(Penaeus stylirostris)或细角滨对虾(Litopenaeus stylirostris))、蓝虾(蓝对虾或细角滨对虾)、中国白虾(中国对虾(Penaeus chinensis)或中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis))、东方虾(中国对虾或中国明对虾)、印度白虾(印度对虾(Penaeus indicus)或印度明对虾(Fenneropenaeusindicus))、香蕉虾(墨吉对虾(Penaeus merguiensis)或墨吉明对虾(Fenneropenaeusmerguiensis))、秋酱虾(新对虾属种(Metapenaeus spp.))、黄脚虾(加州对虾(Penaeuscaliforniensis)或加州美对虾(Farfantepenaeus californiensis))、褐虾(加州对虾或加州美对虾)、圣保罗虾(圣保罗对虾(Penaeus paulensis)或圣保罗美对虾(Farfantepenaeus paulensis))、Carpas虾(圣保罗对虾或圣保罗美对虾)、红点虾(红斑对虾(Penaeus brasiliensis)或巴西美对虾(Farfantepenaeus brasiliensis))、斑点粉虾(红斑对虾或巴西美对虾)和南部白虾(斯氏对虾(Penaeus schmitti))。
对虾可以选自由以下项组成的组:宽沟对虾(凡纳滨对虾或南美白对虾)、巨型虎虾(斑节对虾)、巨型淡水虾(罗氏沼虾)、巨型河虾(罗氏沼虾)、马来西亚虾(罗氏沼虾)、日本对虾(Kuruma prawn)(日本对虾或日本囊对虾)、肉虾(Fleshy prawn)(中国对虾或中国明对虾)、印度虾(印度对虾或印度明对虾)、香蕉虾(墨吉对虾或墨吉明对虾)、东方河虾(日本沼虾(Macrobrachium nipponense))和季风河虾(马氏沼虾(Macrobrachiummalcolmsonii))。
本发明的组合物可以在孵化之后至屠宰之前的时段中施用(即饲喂)给水生动物。这也意味着取决于水生动物的生命时期,可以向在淡水(FW)或海水(SW)中的水生动物施用(即饲喂)该组合物。
关于鱼,可以在所有生命时期期间将本发明的组合物施用(即饲喂)给鱼,因此该鱼可以选自由以下项组成的组:仔鱼、鱼苗、小鱼、幼鱼、二龄鲑和成鱼。
本文描述和要求保护的发明的范围不受本文所公开的特定实施方式的限制,因为这些实施方式旨在作为本发明的几个方面的说明。任何等同的实施方式都旨在处于本发明的范围内。实际上,除了本文中示出和描述的那些修改之外,根据前面的描述,本发明的各种修改对于本领域技术人员将变得显而易见。此类修改也旨在落入所附权利要求的范围内。
本发明的实施方式可以总结如下:
1.一种组合物,所述组合物包含α-硫辛酸、其盐或衍生物作为活性成分,其中所述组合物旨在用于被水生动物摄取,并且其中添加至所述动物的最终饲料中的活性成分的浓度范围为每kg饲料150mg-1000mg。
2.根据权利要求1所述的组合物,其中所述组合物是包含为粒径低于1mm的粉末形式的所述活性成分的饲料添加剂活性成分。
3.根据权利要求2所述的组合物,其中所述活性成分包埋在油载体中。
4.根据权利要求1所述的组合物,其中所述组合物为饲料预混物,其中除了所述活性成分外,所述预混物还包含至少一种选自由以下项组成的组的附加组分:脂溶性维生素、水溶性维生素、微量矿物质、类胡萝卜素、多不饱和脂肪酸、益生菌、益生元和巨量矿物质。
5.根据权利要求4所述的组合物,其中所述脂溶性维生素为维生素E。
6.根据权利要求4或5所述的组合物,其中所述脂溶性维生素是至少一种选自由以下项组成的组的化合物:α-生育酚、β-生育酚、γ-生育酚、δ-生育酚、α-生育三烯酚、β-生育三烯酚、γ-生育三烯酚、δ-生育三烯酚,以及它们的酯,优选地它们的乙酸酯。
7.根据权利要求3至6所述的组合物,所述组合物包含包衣油,其中所述包衣油选自由以下项组成的组:鱼油、微生物油脂和/或一种或多种植物油。
8.根据权利要求7所述的组合物,其中所述包衣油包含在0.28-229.15g/kg饲料范围中的亚油酸(18:1n-9)、在0.22-233.24g/kg饲料范围中的油酸、在0.28-225.06g/kg饲料范围中的α-亚麻酸、在0.03-24.55g/kg饲料范围中的花生四烯酸(ARA,20:4n-6)、在0.03-73.66g/kg饲料范围中的二十碳五烯酸(EPA,20:5n-3)和在0.03-73.66g/kg饲料范围中的二十二碳六烯酸(DHA,22:6n-3)。
9.根据权利要求8所述的组合物,其中所述植物油选自由以下项组成的组:菜籽油、豆油和亚麻荠籽油。
10.根据权利要求7至9中任一项所述的组合物,其中所述包衣油是二十碳五烯酸(“EPA”)和/或二十二碳六烯酸(“DHA”)源。
11.根据权利要求1所述的组合物,其中所述组合物是水产养殖饲料,并且优选地是鱼饲料丸粒,并且其中所述饲料包含至少一种附加组分,其中
a.所述附加组分是25-55%(w/w)的蛋白质源,或者
b.所述附加组分是10-25%(w/w)的碳水化合物源,或者
c.所述附加组分是15-40%(w/w)的脂质源。
12.根据权利要求11所述的组合物,其中所述饲料组合物还包含一种或多种选自由以下项组成的组的成分:鱼粉、磷虾粉、大豆浓缩物、玉米麸质、小麦麸质、豌豆蛋白、小麦面粉、鱼油、维生素、矿物质预混物、矿物质预混物加合成磷,以及它们的组合。
13.根据权利要求11或12所述的组合物,其中所述饲料丸粒为挤出饲料丸粒或压制饲料丸粒。
14.根据权利要求11至13中任一项所述的组合物,其中所述饲料丸粒是包衣的饲料丸粒。
15.根据权利要求11至14中任一项所述的组合物,其中所述活性成分存在于所述包衣的饲料丸粒的包衣中。
16.根据权利要求11至15中任一项所述的组合物,其中所述包衣包含油和α-硫辛酸。
17.根据权利要求16所述的组合物,其中在所述包衣中存在的α-硫辛酸、其盐或衍生物的量构成所述丸粒的总α-硫辛酸、其盐或衍生物的100重量%。
18.一种提供挤出饲料丸粒的方法,所述方法包括以下步骤:
a)将至少碳水化合物源、蛋白质源、脂质源、灰分、水和任选的一种或多种选自由以下项组成的组的成分研磨和/或混合成粉末混合物:鱼粉、磷虾粉、大豆浓缩物、玉米麸质、小麦麸质、豌豆蛋白、小麦面粉、鱼油、维生素、矿物质预混物、矿物质预混物加合成磷,以及它们的组合,
b)将(a)中的所述混合物均质化,直至形成糊状物;
c)通过包括模具和多个混合和捏合区的挤出装置挤出在步骤(b)中获得的所述糊状物,所述挤出装置由多个交替向前和向后的捏合螺杆元件构成;
d)当挤出的材料离开模头时,将所述挤出的材料切割成合适长度的多孔丸粒;
e)干燥所述多孔丸粒;
f)将根据权利要求7至10中任一项所述的具有包衣油的组合物添加到在步骤(e)中获得的所述丸粒中,并在真空下将所述油吸附到所述多孔丸粒中,以及
g)冷却所述丸粒,以及
h)获得包衣的鱼饲料丸粒。
19.α-硫辛酸、其盐或衍生物用于改善水生动物的饲料转化率和/或标准生长率的用途。
20.α-硫辛酸、其盐或衍生物用于降低水生动物的死亡率的用途。
21.α-硫辛酸、其盐或衍生物用于治疗和/或预防水生动物的由病原微生物或病毒引起的疾病的用途。
22.一种用于改善水生动物的饲料转化率和/或标准生长率的方法,所述方法包括向所述水生动物饲喂包含α-硫辛酸、其盐或衍生物的饲料。
23.一种用于降低水生动物的死亡率的方法,所述方法包括向所述水生动物饲喂包含α-硫辛酸、其盐或衍生物的饲料。
24.一种用于治疗和/或预防水生动物的由病原微生物或病毒引起的疾病的方法,所述方法包括向所述水生动物饲喂包含α-硫辛酸、其盐或衍生物的饲料。
25.一种组合物,所述组合物包含α-硫辛酸、其盐或衍生物,所述组合物用于改善水生动物的饲料转化率和/或标准生长率。
26.一种组合物,所述组合物包含α-硫辛酸、其盐或衍生物,所述组合物用于降低水生动物的死亡率。
27.一种组合物,所述组合物包含α-硫辛酸、其盐或衍生物,所述组合物用于治疗和/或预防水生动物的由病原微生物或病毒引起的疾病。
28.根据权利要求24或27所述的组合物或饲料,其中所述疾病是胰腺疾病。
29.根据权利要求28所述的组合物,其中所述病毒是甲病毒(SAV)、野田村病毒(VNN)、白点综合症病毒(WSSV)。
30.根据权利要求29所述的组合物,其中所述甲病毒是鲑鱼甲病毒亚型3(SAV-3)病毒。
31.根据权利要求25至30中任一项所述的组合物,其中所述组合物包含每kg饲料至少150-1000mg的量的α-硫辛酸、其盐或其衍生物。
32.根据权利要求25至30中任一项所述的组合物,其中所述组合物包含每kg饲料至少150mg、200mg、250mg、300mg、350mg、400mg、450mg、500mg、550mg、600mg、650mg、700mg、750mg、800mg、850mg、900mg、950mg、1000mg的量的α-硫辛酸、其盐或衍生物。
33.根据权利要求25至30中任一项所述的组合物,其中所述组合物包含每kg饲料150-1000mg、200-1000mg、250-1000mg、300-1000mg、350-1000mg、400-1000mg、450-1000mg、500-1000mg、550-1000mg、600-1000mg、650-1000mg、700-1000mg、750-1000mg、800-1000mg、850-1000mg、900-1000mg或950-1000mg的量的α-硫辛酸、其盐或衍生物。
34.根据权利要求25至33中任一项所述的组合物,其中将所述组合物施用至由以下项组成的组的水生动物:鲑鱼、鳟鱼、鳊鱼、鲈鱼和十足甲壳类动物。
35.根据权利要求25至33中任一项所述的组合物,其中将所述组合物施用至处于淡水(FW)阶段中的鲑鱼、鳟鱼、鳊鱼和/或鲈鱼。
36.根据权利要求25至33中任一项所述的组合物,其中将所述组合物施用至处于海水(SW)阶段中的鲑鱼、鳟鱼、鳊鱼和/或鲈鱼。
37.根据权利要求25至36中任一项所述的组合物,其中将所述组合物施用至处于孵化之后直至屠宰之前的时段中的鲑鱼、鳟鱼、鳊鱼和/或鲈鱼。
38.根据权利要求34至37中任一项所述的组合物,其中所述鲑鱼为鲑科的。
39.根据权利要求34至38中任一项所述的组合物,其中所述鲑鱼选自由以下项组成的组:斑鳟属、大麻哈鱼属和Salvenis属。
40.根据权利要求34至38中任一项所述的组合物,其中所述斑鳟属的水生动物选自由以下项组成的组:大西洋鲑鱼(安大略鲑)和褐鳟鱼(海鳟)。
41.根据权利要求39或40中任一项所述的组合物,其中所述大麻哈鱼属的水生动物选自奇努克鲑鱼(帝王鲑(Oncorhynchus tshawytsch))、虹鳟鱼(虹鳟(Oncorhynchusmykiss))、红大麻哈鱼(红大马哈鱼(Oncorhynchus nerka))和银大麻哈鱼(银大马哈鱼(Oncorhynchus kisutch))。
42.根据权利要求39或40中任一项所述的组合物,其中所述Salvenis属的水生动物选自由以下项组成的组:北极红点鲑(Salvelinus alpinus)、溪红点鲑(美洲红点鲑(Salvelinus fontinalis))和湖红点鲑(Salvelinus namaycush)。
43.根据权利要求34至42中任一项所述的组合物,其中所述水生动物选自由以下项组成的组:大西洋鲑鱼(安大略鲑)、褐鳟鱼(海鳟)和虹鳟鱼。
44.根据权利要求34至42中任一项所述的组合物,其中所述水生动物是选自由以下项组成的组的鱼:鱼苗、小鱼、幼鱼、二龄鲑和成鱼。
实施例
实施例1:压制鱼饲料的制备
将主要原材料研磨并混合。然后将微量成分添加到混合器中,并通过在预调节器中将水和蒸汽添加到该物料中来调节均质混合物。这开始了淀粉级分(结合组分)的蒸煮过程。将该物料进料到制粒机中。物料被迫通过磨机的模头,并且带状物在模头的外部被破碎成丸粒。水分含量低,因此不需要干燥饲料。
然后将包含根据本发明的鱼饲料组合物的附加油喷雾到丸粒的表面上,但是由于丸粒相当致密,所以总脂质含量很少超过24%。添加的油可以是鱼油、微生物/藻类油或植物油,例如菜籽油或豆油,或油的混合物。在油包衣后,将丸粒在冷却器中冷却并装袋。最终的压制鱼饲料含有10ppm至5000ppm的如本发明所述的组合物。
实施例2:挤出鱼饲料的制备方法
将主要原材料研磨并混合。将包含根据本发明的鱼饲料组合物在内的微量成分添加到混合器中。通过在预调节器中将水和蒸汽添加到物料中来调节均质混合物。也可以在此时期处将附加油添加到物料中。这开始了淀粉级分(结合组分)的蒸煮过程。将物料进料到挤出机中。挤出机可以是单螺杆或双螺杆型的。由于物料在挤出机中的旋转运动,所以物料被进一步混合。可以将附加的油、水和蒸汽添加到挤出机中的物料中。在挤出机的末端,物料的温度高于100℃,并且压力高于环境压力。物料被迫通过挤出机拉模板中的开口。由于温度和压力的减轻,水分中的一些水分将立即蒸发(闪蒸),并且挤出的物料变得多孔。用旋转刀将带状物切成丸粒。含水量相当高(18-28%),因此将丸粒立即在干燥器中干燥至约10%的含水量。
在干燥器之后,可以通过将油喷雾到饲料的表面上,或者通过将饲料浸入油中来将更多的包含根据本发明的饲料添加剂组合物的油添加到饲料中。有利的是在空气压力低于环境压力的密闭容器中将油添加至饲料中(真空包衣),使得多孔饲料丸粒吸收更多的油。可以通过这种方式生产含有超过40%的脂质的饲料。在包衣机后,将饲料冷却并装袋。油可以在如上所述的过程中的若干个位置处添加,并且可以是鱼油、微生物/藻类油或植物油,例如菜籽油或豆油,或油混合物。
鱼需要蛋白质、脂肪、矿物质和维生素才能生长和处于良好健康中。肉食性鱼的饮食尤为重要。最初在肉食性鱼的养殖中,整鱼或磨碎的鱼被用来满足养殖鱼类的营养需求。混有各种类型的干原材料(例如鱼粉和淀粉)的磨碎的鱼被称为软饲料或半湿饲料。随着养殖变得产业化,软或半湿饲料被压制干饲料替代。压制干饲料本身逐渐被挤出的干饲料替代。
如今,挤出饲料已在多种鱼物种(例如各种类型的鲑鱼、鳕鱼、海鲈鱼和海鲷)的养殖中几乎普及。
用于鱼的干饲料中的主要蛋白质源是不同质量的鱼粉。其他动物蛋白源也用于干鱼饲料。因此,已知使用血粉、骨粉、羽毛粉和其他类型的由屠宰场废物产生的粉(例如鸡肉粉)。这些通常比鱼粉和鱼油更便宜。然而,在某些地理区域中,已经禁止在用于食物生产性动物和鱼类的饲料中使用此类原材料。
还已知使用植物蛋白,例如小麦麸质、玉蜀黍(玉米)麸质、大豆蛋白、羽扇豆粉、豌豆粉、菜豆粉、油菜粉、向日葵粉和米粉。
实施例3:用于在油中制备α-硫辛酸组合物的方法
将粉末形式的α硫辛酸(AL)筛过1mm的筛网,以去除较大的粒子。将少量油预热至45℃,并与粉末混合以形成均质的液体糊状物。添加的油可以是鱼油、微生物/藻类油或植物油,例如菜籽油或豆油,或油的混合物。加入更多的油直至达到所需的浓度。油作为载体起作用。该AL组合物可以在搅拌的同时进行喷雾以防止AL沉降。该组合物用于包被在实施例1和2中所述的饲料。
实施例4-研究1:SAV挑战后大西洋鲑鱼鱼苗的死亡率
第一项研究评估了500mg/kg的饮食α-硫辛酸(LA)对比对照基础饲料饲喂的鱼。在每种饮食4个平行测定水槽中,预饲喂实验饮食约5周,从而从约0.2g生长至约0.5g。水温为12℃±1℃。每种饮食(水槽)最少30条鱼。通过与受鲑鱼甲病毒(SAV)感染的鱼类共栖来进行疾病挑战。
这旨在将感染传播给测试组,从而导致临床胰腺疾病(PD)。挑战持续9.5周(约2g),每天记录死亡率。
观察到饲喂硫辛酸的鱼的存活率显著较高,表示相对于饲喂对照饮食的鱼,相对存活率百分比(RPS)改善了63%(图1)。
图1.在SAV挑战后大西洋鲑鱼鱼苗的累积死亡率,比较了饲喂对照饮食或500mg/kg LA的鱼。
实施例5-研究2:SAV挑战2后大西洋鲑鱼鱼苗的死亡率
第二项研究评估了饲喂125mg/kg、250mg/kg和500mg/kg的3种剂量的饮食α-硫辛酸的鱼对比饲喂对照基础饮食的鱼对病毒疾病(PD)的抵抗力。如关于第一项研究所述进行实验。
如在第一项研究中一样,与饲喂对照饮食的鱼相比,饲喂500mg/kg LA的鱼具有显著更高的存活率(34%RPS,表1)。在250mg/kg处,存在改善生存率的趋势,但这不是统计学上显著的。在125mg/kg处没有观察到影响(图2)。
表1 SAV挑战后大西洋鲑鱼鱼苗的相对存活率百分比(RPS)对不同饮食的依赖性
图2.SAV挑战之后大西洋鲑鱼鱼苗的累积死亡率,评估了饮食LA的剂量响应。
实施例6-研究3:SAV挑战3后大西洋鲑鱼鱼苗的死亡率
在这项研究中,三个单独的病毒攻毒试验评估了饲喂250mg/kg、500mg/kg和1000mg/kg的3种剂量的饮食α-硫辛酸的鱼对比饲喂对照基础饮食的鱼对病毒疾病(PD)的抵抗力。如关于第一项研究所述进行实验。
在所有试验中,使用中等剂量(500mg/kg)和高剂量(1000mg/kg)的α硫辛酸添加剂时均显示出显著降低的最终死亡率(图3至图5)。
图3在SAV挑战之后大西洋鲑鱼鱼苗的累积死亡率,评估了饮食α-硫辛酸的剂量响应。-测试1
图4在SAV挑战之后大西洋鲑鱼鱼苗的累积死亡率,评估了饮食α-硫辛酸的剂量响应。-测试2
图5在SAV挑战之后大西洋鲑鱼鱼苗的累积死亡率,评估了饮食α-硫辛酸的剂量响应。-测试3
实施例7-研究4:IPN挑战后大西洋鲑鱼的死亡率
第四项研究评估了饲喂500mg/kg、750mg/kg和1000mg/kg的3种剂量的饮食α-硫辛酸的鱼对比饲喂对照基础饮食的鱼对病毒疾病(IPN)的抵抗力。如关于第一项研究所述进行实验。
与饲喂对照饮食的鱼相比,饲喂750mg/kg LA的鱼具有显著更高的存活率(28%RPS)。与饲喂对照饮食的鱼相比,饲喂500mg/kg LA的鱼也具有显著更高的存活率(7%RPS)。然而,与饲喂对照饮食的鱼相比,饲喂1000mg/kg LA的鱼没有显著更高的存活率(-1%RPS)(图3)。
表2IPN挑战后大西洋鲑鱼的平均存活率、平均死亡率和相对存活率(RPS)对不同饮食的依赖性
图6.在IPN挑战之后大西洋鲑鱼的累积死亡率,比较了饲喂对照饮食或包含500mgα-硫辛酸/kg饲料、750mgα-硫辛酸/kg饲料和1000mgα-硫辛酸/kg饲料的饲料的鱼。
实施例8-研究5:IPN挑战后大西洋鲑鱼的表现
这项研究评估了饲喂500mg/kg、750mg/kg和1000mg/kg的3种剂量的饮食α-硫辛酸的鱼对比饲喂对照基础饮食的鱼在大西洋鲑鱼疾病(IPN)挑战之后的表现,并且接着通过对鱼进行称重并比较经挑战的饲喂LA和饲喂对照的鱼与未经挑战的饲喂对照的鱼来进行第五项研究。
与未经挑战的鱼相比,经挑战的鱼的表现下降。然而,与经挑战的饲喂对照饮食的鱼相比,经挑战的饲喂750mg/kg LA的鱼具有显著更好的表现。与经挑战的饲喂对照饮食的鱼相比,经挑战的饲喂500mg/kg LA的鱼也表现更好。然而,与经挑战的饲喂对照饮食的鱼相比,经挑战的饲喂1000mg/kg LA的鱼没有表现得显著更好(图7)。
图7.在IPN挑战之后大西洋鲑鱼的表现,比较了与未经挑战的鱼相比,饲喂对照饮食或包含500mgα-硫辛酸/kg饲料、750mgα-硫辛酸/kg饲料和1000mgα-硫辛酸/kg饲料的饲料的经挑战鱼的生长减少。
实施例9-研究6:RB鳟鱼的免疫应答
与饲喂基础对照饮食的鱼相比,将虹鳟鱼以分级水平的LA(125mg/kg、250mg/kg和500mg/kg)饲喂4周。对在饲喂时段结束时获得的组织/细胞进行一系列功能免疫测定,以研究在疾病挑战研究中观察到的可能作用模式。
测定吞噬细胞的氧化爆发能力,以评定抗氧化或促氧化活性,如针对LA的使用所广泛报道的(Kutter等人,2014)。对于治疗组中的任何一组,细胞外或细胞内氧化爆发都没有显著差异,表明该机制不是由于氧化生化途径(图4)。
图8.饲喂分级水平的饮食LA 4周的虹鳟鱼的吞噬细胞的氧化性爆发。
通过评定淋巴细胞预防在与细胞凋亡化学刺激剂Campto(Campto)一起孵育后发生细胞凋亡的能力来研究细胞凋亡途径(程序性细胞死亡)。存在饮食LA对凋亡细胞减少的明显剂量响应,其中来自饲喂500mg/kg LA的鱼的淋巴细胞显著减少。这种水平的细胞凋亡减少是非常显著的。在LA治疗组中未使用Campto的情况下,也存在基础细胞凋亡活性较低的趋势(不显著)(图5)。
图9.饲喂分级水平的饮食LA 4周的虹鳟鱼的淋巴细胞的凋亡。
实施例10-研究7:RB鳟鱼的FCR
这项研究评估了饲喂250mg/kg、500mg/kg和1000mg/kg的3种剂量的饮食α-硫辛酸的鱼对比饲喂对照基础饮食的鱼的饲料转化率。与饲喂基础对照饮食的鱼相比,将初始体重约50g的虹鳟鱼用分级水平的LA饲喂约6周,其中每种饮食有4个平行测定水槽,每个水槽50条鱼。参照对照基础饮食的饲喂说明,每天自动地向鱼饲喂过量的实验饮食,并每两周进行称重。每天去除过量的饲料。
在这项研究中,与饲喂对照饮食的鱼相比,饲喂LA的鱼显示出了改善的饲料转化率(图6)。
表3虹鳟鱼的(累积)饲料转化率(FCR)对不同饮食的依赖性
图10.饲喂分级水平的饮食α-硫辛酸41天的虹鳟鱼的(累积)饲料转化率(FCR)。
实施例11-研究8:VNN(野田村病毒)挑战后海鲈鱼的死亡率
第七项研究评估了在海鲈鱼鱼苗中,饲喂250mg/kg、500mg/kg和750mg/kg的饮食α-硫辛酸(LA)的鱼对比饲喂对照基础饮食的鱼。预饲喂实验饮食5-6周,鱼从约0.7g生长至约1.4g。水温为25℃。每种饮食(水槽)有133条鱼。通过与受野田村病毒(VNN)感染的鱼类共栖来进行疾病挑战。这旨在将感染传播给测试组。每天记录死亡率。
观察到饲喂500mg/kg硫辛酸的鱼的存活率显著较高,表示相对于饲喂对照饮食的鱼,相对存活率百分比(RPS)改善了66%。观察到饲喂250mg/kg和750mg/kg硫辛酸的鱼的存活率也显著较高,表示相对于饲喂对照饮食的鱼,相对存活率百分比(RPS)改善了60%和45%(图8)。
图11.在VNN(野田村病毒)挑战之后海鲈鱼鱼苗的累积死亡率,比较了饲喂对照饮食或包含250mgα-硫辛酸/kg饲料、500mgα-硫辛酸/kg饲料和750mgα-硫辛酸/kg饲料的饲料的鱼。
对照 | 250ppm | 500ppm | 750ppm | |
平均存活率[%] | 60.8 | 84.2 | 86.7 | 78.3 |
平均死亡率[%] | 39.2 | 15.8 | 13.3 | 21.7 |
RPS[%] | 0.0 | 59.6 | 66.0 | 44.7 |
表4 VNN挑战后海鲈鱼鱼苗的平均存活率、平均死亡率和相对存活率(RPS)对不同饮食的依赖性
实施例12-研究9:在WSSV挑战之后基围虾的死亡率
第四项研究评估了饲喂650mg/kg的饮食α-硫辛酸的基围虾对比饲喂对照基础饮食的基围虾对白点综合症病毒疾病(WSSV)的抵抗力。实验是在用于基围虾的标准条件下进行的。预饲喂实验饮食约4周。每天记录死亡率。
与饲喂对照饮食的基围虾相比,饲喂650mg/kg LA的基围虾具有更高的存活率(8.7%RPS,表5)。
表5 WSSV挑战后基围虾的平均存活率、平均死亡率和相对存活率(RPS)对不同饮食的依赖性。
Claims (34)
1.一种组合物,所述组合物包含α-硫辛酸、其盐或衍生物作为活性成分,其中所述组合物旨在用于被水生动物摄取,并且其中添加至所述动物的最终饲料中的活性成分的浓度范围为每kg饲料150mg-1000mg。
2.根据权利要求1所述的组合物,其中所述组合物是包含以粒径低于1mm的粉末形式的所述活性成分的饲料添加剂活性成分为。
3.根据权利要求2所述的组合物,其中所述活性成分包埋在油载体中。
4.根据权利要求1所述的组合物,其中所述组合物为饲料预混物,其中除了所述活性成分外,所述预混物还包含至少一种选自由以下项组成的组的附加组分:脂溶性维生素、水溶性维生素、微量矿物质、类胡萝卜素、多不饱和脂肪酸、益生菌、益生元和巨量矿物质。
5.根据权利要求4所述的组合物,其中所述脂溶性维生素为维生素E。
6.根据权利要求4或5所述的组合物,其中所述脂溶性维生素是至少一种选自由以下项组成的组的化合物:α-生育酚、β-生育酚、γ-生育酚、δ-生育酚、α-生育三烯酚、β-生育三烯酚、γ-生育三烯酚、δ-生育三烯酚,以及它们的酯,优选地它们的乙酸酯。
7.根据权利要求3至6所述的组合物,所述组合物包含包衣油,其中所述包衣油选自由以下项组成的组:鱼油、微生物油脂和/或一种或多种植物油。
8.根据权利要求7所述的组合物,其中所述包衣油包含在0.28-229.15g/kg饲料范围中的亚油酸(18:1n-9)、在0.22-233.24g/kg饲料范围中的油酸、在0.28-225.06g/kg饲料范围中的α-亚麻酸、在0.03-24.55g/kg饲料范围中的花生四烯酸(ARA,20:4n-6)、在0.03-73.66g/kg饲料范围中的二十碳五烯酸(EPA,20:5n-3)和在0.03-73.66g/kg饲料范围中的二十二碳六烯酸(DHA,22:6n-3)。
9.根据权利要求8所述的组合物,其中所述植物油选自由以下项组成的组:菜籽油、豆油和亚麻荠籽油。
10.根据权利要求7至9中任一项所述的组合物,其中所述包衣油是二十碳五烯酸(“EPA”)和/或二十二碳六烯酸(“DHA”)源。
11.根据权利要求1所述的组合物,其中所述组合物是水产养殖饲料,并且优选地是鱼饲料丸粒,并且其中所述饲料包含至少一种附加组分,其中
a.所述附加组分是25-55%(w/w)的蛋白质源,或者
b.所述附加组分是10-25%(w/w)的碳水化合物源,或者
c.所述附加组分是15-40%(w/w)的脂质源。
12.根据权利要求11所述的组合物,其中所述饲料组合物还包含一种或多种选自由以下项组成的组的成分:鱼粉、磷虾粉、大豆浓缩物、玉米麸质、小麦麸质、豌豆蛋白、小麦面粉、鱼油、维生素、矿物质预混物、矿物质预混物加合成磷,以及它们的组合。
13.根据权利要求11或12所述的组合物,其中所述饲料丸粒为挤出饲料丸粒或压制饲料丸粒。
14.根据权利要求11至13中任一项所述的组合物,其中所述饲料丸粒是包衣的饲料丸粒。
15.根据权利要求11至14中任一项所述的组合物,其中所述活性成分存在于所述包衣的饲料丸粒的包衣中。
16.根据权利要求11至15中任一项所述的组合物,其中所述包衣包含油和α-硫辛酸。
17.根据权利要求16所述的组合物,其中在所述包衣中存在的α-硫辛酸、其盐或衍生物的量构成所述丸粒的总α-硫辛酸、其盐或衍生物的100重量%。
18.一种提供挤出饲料丸粒的方法,所述方法包括以下步骤:
i)将至少碳水化合物源、蛋白质源、脂质源、灰分、水和任选的一种或多种选自由以下项组成的组的成分研磨和/或混合成粉末混合物:鱼粉、磷虾粉、大豆浓缩物、玉米麸质、小麦麸质、豌豆蛋白、小麦面粉、鱼油、维生素、矿物质预混物、矿物质预混物加合成磷,以及它们的组合,
j)将(a)中的所述混合物均质化,直至形成糊状物;
k)通过包括模具和多个混合和捏合区的挤出装置挤出在步骤(b)中获得的所述糊状物,所述挤出装置由多个交替向前和向后的捏合螺杆元件构成;
l)当挤出的材料离开模头时,将所述挤出的材料切割成合适长度的多孔丸粒;
m)干燥所述多孔丸粒;
n)将根据权利要求7至10中任一项所述的具有包衣油的组合物添加到在步骤(e)中获得的所述丸粒中,并在真空下将所述油吸附到所述多孔丸粒中,以及
o)冷却所述丸粒,以及
p)获得包衣的鱼饲料丸粒。
19.α-硫辛酸、其盐或衍生物用于改善水生动物的饲料转化率和/或标准生长率的用途。
20.α-硫辛酸、其盐或衍生物用于降低水生动物的死亡率的用途。
21.α-硫辛酸、其盐或衍生物用于治疗和/或预防水生动物的由病原微生物或病毒引起的疾病的用途。
22.一种用于改善水生动物的饲料转化率和/或标准生长率的方法,所述方法包括向所述水生动物饲喂包含α-硫辛酸、其盐或衍生物的饲料。
23.一种用于降低水生动物的死亡率的方法,所述方法包括向所述水生动物饲喂包含α-硫辛酸、其盐或衍生物的饲料。
24.一种用于治疗和/或预防水生动物的由病原微生物或病毒引起的疾病的方法,所述方法包括向所述水生动物饲喂包含α-硫辛酸、其盐或衍生物的饲料。
25.一种组合物,所述组合物包含α-硫辛酸、其盐或衍生物,所述组合物用于改善水生动物的饲料转化率和/或标准生长率。
26.一种组合物,所述组合物包含α-硫辛酸、其盐或衍生物,所述组合物用于降低水生动物的死亡率。
27.一种组合物,所述组合物包含α-硫辛酸、其盐或衍生物,所述组合物用于治疗和/或预防水生动物的由病原微生物或病毒引起的疾病。
28.根据权利要求24或27所述的组合物或饲料,其中所述疾病是胰腺疾病。
29.根据权利要求28所述的组合物,其中所述病毒是甲病毒(SAV)、野田村病毒(VNN)、白点综合症病毒(WSSV)。
30.根据权利要求29所述的组合物,其中所述甲病毒是鲑鱼甲病毒亚型3(SAV-3)病毒。
31.根据权利要求25至30中任一项所述的组合物,其中所述组合物包含每kg饲料至少150-1000mg的量的α-硫辛酸、其盐或其衍生物。
32.根据权利要求25至30中任一项所述的组合物,其中所述组合物包含每kg饲料至少150mg、200mg、250mg、300mg、350mg、400mg、450mg、500mg、550mg、600mg、650mg、700mg、750mg、800mg、850mg、900mg、950mg、1000mg的量的α-硫辛酸、其盐或衍生物。
33.根据权利要求25至30中任一项所述的组合物,其中所述组合物包含每kg饲料150-1000mg、200-1000mg、250-1000mg、300-1000mg、350-1000mg、400-1000mg、450-1000mg、500-1000mg、550-1000mg、600-1000mg、650-1000mg、700-1000mg、750-1000mg、800-1000mg、850-1000mg、900-1000mg或950-1000mg的量的α-硫辛酸、其盐或衍生物。
34.根据权利要求25至33中任一项所述的组合物,其中将所述组合物施用至由以下项组成的组的水生动物:鲑鱼、鳟鱼、鳊鱼、鲈鱼和十足甲壳类动物。
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Legal Events
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PB01 | Publication | ||
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