CN111511200B - 用于水产养殖的组合物及方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种喂养感兴趣的水生动物品种的水产养殖的方法。所述方法包含对所述水产养殖提供一水产饲料，所述水产饲料包含一次优的剂量的蛋白质及一有效量的丁酸或其盐类，所述有效量协助降低饲料转换率(FCR)。本发明也公开一种用于水产养殖的饲料组合物。
Description
技术领域及背景技术
本发明，在其一些实施例中，是有关于一种用于水产养殖的组合物及方法。
2014年时，水产养殖生产超过7300万吨的鱼类，估计价值为1600亿美元(FAO.2016)。为了支持鱼类的生产，配制复合的水产饲料，以符合蛋白质、脂质、碳水化合物、维生素及矿物质的已知营养需求，并包含除了诸如引诱剂、抗氧化剂、免疫刺激剂、酵素、色素、有机酸、益生元、益生菌、进食兴奋剂、抗生素及激素的营养剂以外的功能性物质(Lall及Dumas.，2015)。鱼饲料中需要高水平的日粮蛋白质，而蛋白质成分的供给是水产养殖产量成长的主要限制条件。因此，降低鱼饲料中的蛋白质含量且不损害其生长性能是非常重要的。
丁酸是一种四个碳的短链脂肪酸(SCFA)，是由脊椎动物的结肠内的碳水化合物及膳食纤维通过细菌发酵而自然产生的(Cummings，1981)。已发现在内腔中所产生的丁酸盐(及其他的SCFA)被结肠细胞快速地代谢掉(Roediger WE，1996)，且已证明即使存在竞争性受质，丁酸盐仍是主要的肠道燃料(Clausen及Mortensen，1994)。除了提供上皮细胞能量之外，丁酸盐还显着地提升肠道细胞增殖、影响分化及肠上皮细胞的成熟、降低正常的肠上皮细胞的凋亡，并改善结肠屏障功能(Cook及Sellin，1998、Mariadason等人，1999、McIntyre等人，1993、Sengupta等人，2006)。已证明摄取丁酸盐能改变大鼠及仔猪内肠道的微结构(Sakata，1987、Bartholome等人，2004)、通过提升肠道隐窝的深度及绒毛的高度能改善仔猪的肠粘膜功能(Lu等人，2008、Kotunia等人，2004)。这在仔牛及猪中得到了证明：当在仔牛及猪的日粮中添加丁酸盐时，展现改善了仔牛及猪的生长及饲料转换率(FCR)(Guilloteau等人，2009、Partanen及Mroz，1999)。已证明添加丁酸盐至人肠上皮Caco2-BBE细胞培养基中显着地提升PepT1的表达(Dalmasso等人，2008)。PepT1是一种低亲和性、高容量的转运蛋白，可介导摄取绝大多数潜在的400个双肽及8,000个三肽，其为蛋白质的部分消化的结果(Daniel等人，2004)。
牛磺酸是一种不会并入蛋白质的半-必需的β-氨基酸。牛磺酸主要参与细胞渗透调节及肌肉的功能。由于有限度或不足的合成能力，鱼类(如同新生哺乳动物)仰赖并从牛磺酸的膳食补给中获得益处。然而，已报导长时间暴露于高水平的细胞外牛磺酸会通过降低氯化钠高亲和力、低容量的牛磺酸转运蛋白TauT(SLC6A6)的转录及活性，以负调节牛磺酸的吸收(Lambert等人，2015)。
相关的前案:
CN104664174
US20120029077
US20070264313
WO2006126889
CN104222534
US专利公告第4,808,417号
发明内容
根据本发明的一些实施例的一方面，提供一种喂养感兴趣的一水生动物品种的一水产养殖的方法，所述方法包含：对所述水产养殖提供一水产饲料，所述水产饲料包含一次优(sub-optimal)的剂量的蛋白质及一有效量的丁酸或其盐类，所述有效量协助降低饲料转换率(FCR)。
根据本发明的一些实施例的一方面，提供一种对于感兴趣的一水生动物品种的一水产养殖提升相对体重增加(RWG)、特定生长率(SGR)及降低饲料转换率(FCR)的方法，所述方法包含：对所述水产养殖提供一水产饲料，所述水产饲料包含一次优的剂量的蛋白质及一有效量的丁酸或其盐类，所述有效量协助提升RWG、SGR及降低FCR。
根据本发明的一些实施例的一方面，提供一种改善感兴趣的一水生动物品种的一水产养殖的喂食及蛋白质利用的方法，所述方法包含：对所述水产养殖提供一水产饲料，所述水产饲料包含一次优的剂量的蛋白质及一有效量的丁酸或其盐类，所述有效量协助降低饲料转换率(FCR)。
根据本发明的一些实施例的一方面，提供一种确定用于饲养感兴趣的一品种的一水产养殖的饲料，所述饲料包含：以重量计低于所述品种在一预定的发育阶段的一最佳蛋白质浓度至少15％的蛋白质浓度，及一有效量的丁酸或其盐类，所述有效量协助降低饲料转换率(FCR)。
根据本发明的一些实施例，所述感兴趣的水生动物品种包含鱼类。
根据本发明的一些实施例，所述感兴趣的水生动物品种包含在一预定的发育阶段的多个感兴趣的鱼类的个体。
根据本发明的一些实施例，所述饲料进一步包含牛磺酸或其盐类。
根据本发明的一些实施例，所述饲料进一步包含：一有效量的牛磺酸或其盐类，以便与所述丁酸协同作用以协助降低FCR。
根据本发明的一些实施例，所述牛磺酸或其盐类的所述有效量以重量计包含0.1至5％。
根据本发明的一些实施例，所述牛磺酸或其盐类的所述有效量以重量计包含1至1.5％。
根据本发明的一些实施例，所述饲料进一步包含多个营养成分，所述多个营养成分选自于由脂肪、碳水化合物、维生素及矿物质所组成的群组。
根据本发明的一些实施例，所述方法或饲料包含一成分，所述一成分选自于由鱼粉、鱼油、家禽肉、家禽肉副产品、羽毛粉、肉粉、血粉、骨粉、油菜籽、玉米蛋白、亚麻籽、家禽油、小麦及大豆及其等衍生物、羽扇豆粉、豌豆蛋白、向日葵粉、蚕豆粉、芥花籽油、藻类、微藻、海藻、水生附生植物及农业或畜牧业的副产品所组成的群组。
根据本发明的一些实施例，所述饲料进一步包含一附加添加剂，所述附加添加剂选自于由引诱剂、抗氧化剂、免疫刺激剂、酵素、色素、有机酸、益生元、益生菌、进食兴奋剂、抗生素、激素及粘合剂所组成的群组。
根据本发明的一些实施例，所述丁酸的盐类是选自于由丁酸钠、丁酸乙酯、丁酸甲酯、丁酸戊酯及其组合所组成的群组。
根据本发明的一些实施例，所述饲料包含：以重量计低于所述品种在一预定的发育阶段的一最佳蛋白质浓度至少15％的一蛋白质浓度。
根据本发明的一些实施例，所述饲料包含以重量计不超过45％的蛋白质。
根据本发明的一些实施例，所述饲料包含以重量计不超过40％的蛋白质。
根据本发明的一些实施例，所述饲料包含以重量计不超过35％的蛋白质。
根据本发明的一些实施例，所述饲料包含以重量计不超过30％的蛋白质。
根据本发明的一些实施例，所述饲料包含以重量计不超过25％的蛋白质。
根据本发明的一些实施例，所述丁酸或其盐类的所述有效量以重量计包含0.01至5％。
根据本发明的一些实施例，所述有效量包含以重量计0.1至1.6％的丁酸或其盐类。
根据本发明的一些实施例，所述蛋白质包含一植物蛋白。
根据本发明的一些实施例，所述蛋白质包含一非植物蛋白。
根据本发明的一些实施例，所述蛋白质包含一鱼蛋白、一家禽蛋白或其组合。
根据本发明的一些实施例，所述饲料是配制成颗粒。
根据本发明的一些实施例，所述饲料是团聚、造粒、压制或挤出的型态。
根据本发明的一些实施例，所述鱼类是海鱼。
根据本发明的一些实施例，所述鱼类是肉食性鱼。
根据本发明的一些实施例，所述鱼类是选自于由表2所列的鱼所组成的群组。
根据本发明的一些实施例，所述鱼类是至少处于一稚鱼发育的阶段。
根据本发明的一些实施例，在所述水产养殖中大部分的所述鱼类为至少3克。
根据本发明的一些实施例，所述饲料最少包含5％的总脂质及/或5至50％的碳水化合物。
根据本发明的一些实施例，所述提供是每24小时进行不超过一次。
根据本发明的一些实施例，所述提供是每个星期进行一次。
根据本发明的一些实施例，所述提供是每两个星期进行一次。
根据本发明的一些实施例，所述提供是每三个星期进行一次。
根据本发明的一些实施例，所述提供是每一个至三个进行星期一次。
根据本发明的一些实施例，所述提供是每两个至三个进行星期一次。
除非另有定义，否则本文中使用的所有技术及/或科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员一般所理解的相同含义。尽管与本文描述的彼等类似或等同的方法及材料可用于本发明的实施例的实施或测试中，但是示例性的方法及/或材料描述如下。在有冲突的情况下，以专利说明书，包括定义为准。此外，材料、方法及实施例仅是示例性，并且不意图是必然限制性的。
在附图中：
附图说明
图1是显示丁酸盐(B)或牛磺酸(T)或两者(TB)对于以含有0或0.1％丁酸钠及0或1.5％牛磺酸的实验膳食所喂食的幼体白石斑鱼(Epinephelus aeneus)的近端肠道内TauTmRNA相对表达的影响的图表。具有不同字母的柱的平均值存在显著的差异(P<0.05)。
图2A-2B是显示丁酸盐或牛磺酸或两者对于以含有0或0.1％丁酸钠及0或1.5％牛磺酸的实验膳食所喂食的幼体石斑鱼的肝或肌肉内牛磺酸含量(mg g-1DW)的影响的图表。具有不同字母的柱的平均值存在显著的差异(P<0.05)。(图2A)丁酸盐或牛磺酸或两者对肝牛磺酸含量(mg g-1DW)的影响。(图2B)丁酸盐或牛磺酸或两者对肌肉牛磺酸含量的影响(mgg-1DW)。
图3是显示丁酸盐或牛磺酸或二者对近端肠道形态的影响的图表，其是通过以含有0或0.1％丁酸钠及0或1.5％牛磺酸的实验膳食喂食的幼体石斑鱼的肠道横截面所测得的内周长与外周长之比例(mm)表示。具有不同字母的柱的平均值存在显著差异(P<0.05)。
图4是显示丁酸对于白天金头鲷内PepT1 mRNA表达的影响的图表。自上午07:30至下午15:30的数个时间点，喂食对照膳食及含有0.8％丁酸钠的膳食的海鲷内PepT1 mRNA相对的表达。红色箭头表明进食时间。对于各个时间点，柱上方的星号表明两种处理之间的显著差异(P<0.01；t-检验)。
图5A-5C是显示丁酸盐对于金头鲷内PepT1 mRNA表达的持续影响的图表。(图5A)在饲喂8天含有0、0.8及1.6％丁酸钠的实验饲料的鱼(n＝8)内PepT1 mRNA的相对表达。具有不同字母的柱的平均值存在显著差异(P<0.001)。(图5B，5C)于第9天、第12天及第15天所喂食对照组的鲷鱼(n＝8)内所测得的PepT1 mRNA相对表达以及于第9天、第12天及第15天在仅喂食对照膳食之前(图5B)喂食8％的丁酸钠及(图5C)喂食1.6％的丁酸钠的鲷鱼(n＝8)内所测得的PepT1 mRNA相对表达。对于每一天，柱上方的星号表明两种处理之间的显著差异(P<0.01；t-检验)。(图5A)F2、21＝13.51、P<0.001；方差分析。
图6是显示丁酸盐对于增殖细胞核抗原(PCNA)mRNA表达的影响的图表。在喂食对照膳食及含有0.8％丁酸盐的膳食的海鲷(n＝6)之后的1.5小时所测得PCNA mRNA的相对表达。柱上方的星号表明两种处理之间的显著差异(P<0.05；t检验)。
图7是显示在含有或不含丁酸盐的饲料的情况下，于不同的蛋白质水平下的PepT1mRNA表达的图表。喂食含有50％及35％粗蛋白、1％牛磺酸及添加或不添加丁酸的实验饲料(分别地分配为50％ CP、35％ CP、50％ CP+B及35％ CP+B)的海鲷(n＝15)的PepT1的相对表达。不同的字母表示明显不同的数值(至少P<0.01)。F3，40＝7.07、P<0.01；嵌套设计方差分析；
图8是显示在具有1％牛磺酸及含有或不含丁酸盐的情况下，于不同的蛋白质水平下的PCNA mRNA表达的图表。喂食实验膳食的鱼(n＝15)的PCNA相对表达。具有不同字母的数值存在显著差异(P<0.05)。
图9是显示喂食实验膳食的幼体海鲷的肠道内周长与外周长(n＝10)之比例的图表。具有不同字母的数值存在显著差异(P<0.001)。F3，36＝14.74、P<0.0001；单向方差分析。
图10是显示在含有或不含丁酸盐的情况下，于不同的蛋白质水平下的肠道指数(肠道指数＝100×体重(g)/[肠道长度(mm)]3)的图表。喂食实验膳食的幼体海鲷的肠道指数(n＝25)。具有不同字母的条表明显著差异(P<0.05)。F3，80＝5.108、P<0.01；嵌套设计方差分析。
具体实施方式
在本发明的一些实施例是涉及用于水产养殖的组合物及方法。
在详细解释本发明的至少一实施例之前，应理解的是本发明的应用并不必然局限于以下所叙述的阐述中或由实施例举例说明的细节。本发明能够具有其他的实施例，或者能够以各种方式被实施或执行。
本发明的一方面涉及一种喂养感兴趣的一水生动物品种的一水产养殖的方法，所述方法包含：对所述水产养殖提供一水产饲料，所述水产饲料包含一次优的剂量的蛋白质及一有效量的丁酸或其盐类，所述有效量协助降低饲料转换率(FCR)。
本发明的一方面涉及一种喂养感兴趣的一水生动物品种的一水产养殖的方法，所述方法包含：对所述水产养殖提供一水产饲料，所述水产饲料包含一有效量的丁酸或其盐类，所述有效量协助降低饲料转换率(FCR)。
本发明的一方面涉及一种对于感兴趣的一水生动物品种的一水产养殖提升相对体重增加(RWG)、特定生长率(SGR)及降低饲料转换率(FCR)的方法，所述方法包含：对所述水产养殖提供一水产饲料的所述水产养殖，所述水产饲料包含一次优的剂量的蛋白质及一有效量的丁酸或其盐类，所述有效量协助提升RWG、SGR及降低FCR。
本发明的一方面涉及一种对于感兴趣的一水生动物品种的一水产养殖提升相对体重增加(RWG)、特定生长率(SGR)及降低饲料转换率(FCR)的方法，所述方法包含：对所述水产养殖提供一水产饲料的所述水产养殖，所述水产饲料包含一有效量的丁酸或其盐类，所述有效量协助提升RWG、SGR及降低FCR。
本发明的一方面涉及一种改善感兴趣的一水生动物品种的一水产养殖的喂食及蛋白质利用的方法，所述方法包含：对所述水产养殖提供一水产饲料，所述水产饲料包含一次优的剂量的蛋白质及一有效量的丁酸或其盐类，所述有效量协助降低饲料转换率(FCR)。
本发明的一方面涉及一种改善感兴趣的一水生动物品种的一水产养殖的喂食及蛋白质利用的方法，所述方法包含：对所述水产养殖提供一水产饲料，所述水产饲料包含一有效量的丁酸或其盐类，所述有效量协助降低饲料转换率(FCR)。
本发明的一方面涉及一种用于饲养感兴趣的一品种的一水产养殖的饲料，其特征在于：所述饲料包含：以重量计低于所述品种在一预定的发育阶段的一最佳蛋白质浓度至少15％的蛋白质浓度，及一有效量的丁酸或其盐类，所述有效量协助降低饲料转换率(FCR)。
本文提供的结果支持丁酸盐的多个作用：
(i)通过影响肠道形态以提升蛋白质的吸收，所述肠道形态诸如肠道指数、肠道表面积、二肽及三肽转运蛋白。
(iii)可能通过增加牛磺酸转运蛋白的转录，以提升牛磺酸吸收至组织中，例如肌肉、肝脏。
RWG：相对体重增加＝(增加的体重/起始体重)x 100。
SGR：比生长率＝100x ln(最终体重/起始体重)/试验天数。
FCR：饲料转换率＝提供的饲料(g)/增加的体重(g)。
PER：蛋白质效率比＝增加的体重(g)/蛋白质摄入量(g)。
PPV：蛋白质生产价值＝增加的鱼蛋白质(g)X 100/蛋白质摄入量(g)。
肠道指数＝100x体重(g)/[肠道长度(mm)]3。
如本文中所使用，“增加”或“减少”是指相较于未添加丁酸或丁酸盐或牛磺酸或牛磺酸盐或彼等的组合的相同饲料，在生长条件、饲料组成、喂养方案的方面给予相同族群(相同的品种及发育阶段)的养殖动物，亦称为“对照组”。
如本文中所使用，“饲料利用率”是指鱼为了生长或维持而能被鱼利用的饲料的比例，其是通过FCR所测得。
如本文中所使用，“喂养”是指对于一水产养殖提供一人为配方的组合物，所述组合物是配制成用于喂养感兴趣的鱼类品种。
如本文中所使用，“一水产养殖(an aquaculture)”或“水产养殖(aquaculture)”是指在受控制的条件下水生族群的养殖(例如：淡水、盐水水生动物，例如：盐水，半盐水)。在一水产养殖中生长的水生动物可能包含鱼类及甲壳类。应当理解，虽然对于涉及鱼类的一些叙述更为详细，但是本发明可能不限于鱼类，且亦包含甲壳类。甲壳类，例如：龙虾、螃蟹、白虾、明虾及小龙虾。本文以提供养殖鱼类的实例(表2)。
根据一具体实施例，所述水生动物是一海水鱼或甲壳类。
根据一具体实施例，所述水生动物是一河海洄游鱼类或甲壳类。
根据一具体实施例，所述水生动物是一淡水鱼或甲壳类。
根据一具体实施例，所述水生动物是肉食性(例如肉食性鱼)。
根据一具体实施例，所述水生动物是草食性(例如草食性鱼)。
根据一具体实施例，所述水生动物是杂食性(例如杂食性鱼)。
根据一具体实施例，所述鱼类是一养殖鱼类。
鱼类和甲壳类的养殖是最常见的水产养殖的形式。其涉及例如在商业上通常用于食物的鱼缸、池塘或海洋围栏、网箱内养殖鱼类。以下提供水产养殖的其他考量的用途及产品。
根据一具体实施例，所述鱼类是鲑鱼属的鱼，例如：樱桃鲑鱼(Oncorhynchusmasou)、奇努克鲑鱼(Oncorhynchus tshawytscha)、大马哈鲑鱼(Oncorhynchus keta)、银鲑鱼(Oncorhynchus kisutch)、细鳞鲑鱼(Oncorhynchus gorbuscha)、红鲑鱼(Oncorhynchus nerka)及大西洋鲑鱼(Salmo salar)。对于水产养殖感兴趣的其他鱼类包括但不限于各种鳟鱼，以及白鲑鱼，例如罗非鱼(包含Oreochromis、Sarotherodon及Tilapia的各种品种)、石斑鱼(石斑鱼亚科)、海鲈鱼、鲷鱼、鲶鱼(鲶形目)、大眼鲔鱼(Thunnus obesus)、鲤鱼(Cyprimidae科)及鳕鱼(鳕属)。下文提供可根据本教示使用的其他鱼类(表2)。
考量低价值主食鱼类品种[例如：诸如鲤鱼、罗非鱼及鲶鱼的淡水鱼]及对于奢侈或利基市场的价值较高的经济作物品种二者[例如：主要是海生的及河海洄游的品种，例如白虾、鲑鱼、鳟鱼)、黄尾鱼、鲈鱼、鲷鱼及石斑鱼])。
根据一具体实施例，所述鱼类是一白石斑鱼。
根据一具体实施例，所述鱼类是一金头鲷。
根据一具体实施例，水产养殖实质上包含一单一鱼类品种的单一养殖。由于本教示涉及量产，因此本教示涉及多个个体。应理解的是，当涉及单一鱼类品种(单一养殖)时，本发明并不排除在水产养殖中其他品种的存在(捕捞渔业)。
因此，根据一具体实施例，养殖中的养殖品种的特征在于同步生长。
根据一具体实施例，感兴趣的鱼类品种包含多个感兴趣的特定品种的个体，彼等全部皆处于大约(例如：+/-10％、20％、30％或40％)相同的发育阶段。
根据一具体实施例，所述鱼类是处于介于仔鱼及成鱼或种鱼阶段之间的一发育阶段。
根据一具体实施例，所述鱼类是处于至少一稚鱼发育阶段。
根据一具体实施例，所述鱼类是处于至少一稚鱼发育阶段，取决于品种，例如：饲养期、稚鱼期、幼鱼期、鱼苗期、后仔鱼期。
根据一具体实施例，所述鱼类是达到生长/养成/中鱼/银白化幼鱼/成鱼发育阶段或种鱼阶段。不同品种之间的鱼类的名称及阶段会有所不同，甲壳类亦是如此。
根据一具体实施例，所述水产养殖中大部分的所述鱼类是至少0.5克。
根据一具体实施例，所述水产养殖中大部分的所述鱼类是至少1克。
根据一具体实施例，所述水产养殖中大部分的所述鱼类是至少1.5克。
根据一具体实施例，所述水产养殖中大部分的所述鱼类是至少2克。
根据一具体实施例，所述水产养殖中大部分的所述鱼类是至少2.5克。
根据一具体实施例，所述水产养殖中大部分的所述鱼类是至少3克。
根据其他的具体实施例，所述水产养殖包含具有相容的生长条件要求的多个品种(例如：2个、3个、4个混合养殖)。例如，已知以下的组合是共同养殖的：罗非鱼及鲤鱼、罗非鱼及鲻鱼。
如本文中所使用，术语“饲料”或“水产饲料”涉及在水产养殖业中添加或替代天然饲料的人造或人工饲料(即，配制的饲料)。此等制备的食物最常被配制成片状、颗粒或片锭剂形式。
根据一具体实施例，所述饲料是被团聚、造粒或挤出。
此等配方饲料是由数种成分以不同的比例所组成，所述数种成分彼此相互补充，以形成用于水产养殖品种的营养完整的饲料或功能性饲料，所述功能性饲料诸如一医疗饲料、种鱼饲料或最终饲料。
饲料通常是由微观及宏观组分所组成。一般而言，含量被使用超过1％的所有组分皆被视为宏观组分。含量被使用低于1％的饲料成分是微观组分。宏观组分及微观组分二者皆细分为具有营养功能及技术功能的组分。具有技术功能的组分改善水产养殖饲料组合物的物理品质或其外观。
具有营养功能的宏观组分为水生动物提供生长及性能所需的蛋白质及能量。理想的饲料(例如：鱼类)应对动物提供：1)脂肪，所述脂肪作为脂肪酸的来源，以产生能量(尤其是对于心脏及骨骼肌)；及2)氨基酸，所述氨基酸是作为蛋白质的建构组块。脂肪亦有助于维生素的吸收；例如，维生素A、D、E及K是脂溶性的，或者仅能与脂肪一起被消化、吸收及运送。碳水化合物通常亦包含在饲料组合物内，尽管相较于蛋白质或脂肪，碳水化合物对于鱼类并非为一优越的能量来源。碳水化合物以重量计通常是以5至50％的范围提供于组合物内。矿物质及维生素以及其他的微量元素亦通常包含于组合物内以作为微观组分。
因此，根据一具体实施例，所述饲料包含赖氨酸、甲硫氨酸、脂质、生物素、胆碱、烟酸、抗坏血酸、肌醇、泛酸、叶酸，吡哆醇、核黄素、硫胺素、维生素A、维生素B12、维生素D、维生素E、维生素K、钙、磷、钾、钠、镁、锰、铝、碘、钴、锌、铁、硒或其等的组合。
通常通过在饲料组合物中掺入鱼粉(所述鱼粉含有少量的鱼油)及鱼油以提供脂肪。可被使用于饲料的提取油包含鱼油(例如：自油性鲱鱼、鳀鱼、鲱鱼、毛鳞鱼及鳕鱼肝中提取)，以及植物油(例如，自大豆、油菜籽、向日葵籽及亚麻籽中提取)。由于鱼油含有长链omega-3多元不饱和脂肪酸(PUFA)、EPA及DHA，因此鱼油通常是优选的油。相反的，植物油并未提供EPA及/或DHA的来源。此等PUFA对于大部分的水产养殖产品的生长及健康都是必要的。以水产养殖饲料组合物的重量百分比计，典型的饲料将包含大约5至30％或15至30％的油(例如：鱼、蔬菜等)。
根据一具体的实施例，所述饲料包含至少5％的总脂质及/或5至50％的碳水化合物。
如本文中所使用，“蛋白质”是指蛋白质、肽及/或氨基酸(例如：赖氨酸、甲硫氨酸、生物碱)。
根据一具体的实施例，所述蛋白质是源自于一植物的一植物蛋白。
根据一具体的实施例，所述蛋白质是一非植物蛋白，例如：动物。
根据一具体的实施例，所述蛋白质包含一鱼蛋白、一家禽蛋白或其等的组合。
根据一具体的实施例，所述蛋白质是一合成的蛋白质，
根据一具体的实施例，所述蛋白质是一经纯化的蛋白质。
根据一具体的实施例，所述蛋白质基本上是单一类型的。
根据一具体的实施例，所述蛋白质是多个蛋白质(不同类型的蛋白质，例如：至少2、3、4、5等等)。
例如，经常使用来自羽扇豆种子、玉米、大豆、小麦及豌豆的蛋白质的组合。其他的植物蛋白的来源包含谷物及植物蛋白质。
发现于大豆内的蛋白质是另一实施例。大豆蛋白的商业来源通常以其组成及蛋白质含量的变化的各种不同形式所获得。一般而言，取决于豆粉收获后加工的程度，大豆蛋白产品包含30至70％的蛋白质。根据一些实施例，适合使用的大豆蛋白的可商购获得的来源包括，但不限于，由Archer Daniels Midland公司(ADM)所出售的(产品代码：065311)及由Prairie AquaTech(Brookings，S.Dak.)所出售的PisciZyme或ME-PROTM。(参见，例如：美国公开第2013/0142905号，其通过引用全部并入本文中)。
根据一具体实施例，所述蛋白质是一蛋白质制品，例如一膳食。
如本文中所使用，术语“饲料粉”是指衍生自谷物、植物、动物或鱼类的富含蛋白质的饲料组分。饲料粉可以捣碎的及/或干燥的形式提供。
根据一具体实施例，膳食可选自鱼粉、鸡肉粉、大豆粉，经水解的羽毛粉、血粉、肉类及骨粉。根据一具体实施例，所述饲料粉是鱼粉或鸡肉粉。
如本文中所使用，“鱼粉”是指通过将捕获的鱼及其他的水生动物品种(经捕获的或经生产的)进行煮沸、分离出水及油(例如：通过使用一挤压机)，以及之后进行干燥而制得的。通常将鱼粉是干燥至水分含量小于或等于大约10％，以及之后在室温下分配鱼粉。许多的鱼类品种可被使用作为鱼粉的原料，例如竹荚鱼、拟沙丁鱼、各种其他的沙丁鱼、鲭鱼、鲱鱼、毛鳞鱼香鱼、鳗鱼、各种类型的鳕鱼，及南极磷虾。
鱼粉是被广泛的使用作为大部分商业养殖鱼类的膳食蛋白的主要来源，部分原因为鱼粉提供必需氨基酸的一均衡数量。
根据一具体实施例，所述饲料包含鱼粉以作为一组分。
根据一具体实施例，所述饲料包含鸡肉粉以作为一组分。
根据一具体实施例，所述饲料包含大豆粉以作为一组分。
根据其他的实施例，所述蛋白质是衍生自鱼浆、碎鱼肉、磷虾、明胶、胶原蛋白、面筋、蛋白。
根据一具体实施例，“最佳剂量的蛋白质”是定义为在一特定量的可消化能下，一特定品种的最佳生长性能所需的最小量的可消化蛋白质。
如本文中所使用，“次优的蛋白质剂量”是指低于最优的蛋白质剂量。
表1.对于所选的鱼类品种的最低量及建议的膳食蛋白水平(粗蛋白)
1国家科学研究委员会(2011)鱼类及虾类的营养需求
2联合国粮食及农业组织
表1A.淡水鱼的营养需求(以干性物质为基础)a,b
此等需求已通过高度经纯化的成分确定，所述成分内的营养是高度易消化的，其中所显示的数值代表接近100％的生物利用度。
R:在膳食所需但未确定所需量，NR:在实际的条件下是不需要的(例如，膳食内含有来自海洋及陆地动物的成分、蛋白质以及鱼油及硬度至少为中等的水)。Nt:未测试。
在市售的膳食内典型的可消化能及可消化的粗蛋白浓度(可消化的N x 6.25)。
转移至海水中后迅速生长的幼年大西洋鲑鱼显示需要高达1.4％的膳食组氨酸，以预防眼部病理及外侧的白内障。
括号内的数值代表报导对于仔鱼/稚鱼阶段的需求。
未含水性钙的膳食要求。
脂溶性维生素的换算因数如下：10,000IU＝3,000μg维生素A(视黄醇)，1IU＝0.025μg维生素D(胆固醇)。
未含磷脂的膳食。请参见第9章：维生素，对于胆碱、肌醇及磷脂的完整性讨论。
作为L-抗坏血酸-2-单磷酸盐或L-抗坏血酸-2-多磷酸盐。
表2.水产养殖中所使用的动物品种的列表
资料来源：联合国粮农组织文件库，水产养殖中使用的动物物种清单
蛋白质的最佳剂量通常根据各品种的经验来决定。蛋白质的最佳剂量受到各种因素的影响，所述因素包括经处理的品种的发育阶段、养殖的温度及膳食内蛋白质的来源。蛋白质吸收及生长参数可使用本领域的技术人员众所周知的方法来确定。一些方法详细地描述于以下的实例部分中。
对于感兴趣品种的营养需求的参考资料是由管制机构(例如：联合国粮农组织、NRC)定期地发布。当前的需求是提供于本文的上表1、1A中。
根据一具体实施例，所述饲料相较于在一预定的发育阶段对于所述品种最佳的蛋白质浓度，包含以重量计低于至少15％的蛋白质浓度。
根据一具体实施例，所述饲料相较于在一预定的发育阶段对于所述品种最佳的蛋白质浓度，包含以重量计低于至少20％的蛋白质浓度。
根据一具体实施例，所述饲料相较于在一预定的发育阶段对于所述品种最佳的蛋白质浓度，包含以重量计低于至少25％的蛋白质浓度。
根据一具体实施例，所述饲料相较于在一预定的发育阶段对于所述品种最佳的蛋白质浓度，包含以重量计低于至少30％的蛋白质浓度。
根据一具体实施例，所述饲料相较于在一预定的发育阶段对于所述品种最佳的蛋白质浓度，包含以重量计低于至少35％的蛋白质浓度。
根据一具体实施例，所述饲料相较于在一预定的发育阶段对于所述品种最佳的蛋白质浓度，包含以重量计低于至少40％的蛋白质浓度。
根据一具体实施例，所述饲料相较于在一预定的发育阶段对于所述品种最佳的蛋白质浓度，包含以重量计低于至少45％的蛋白质浓度。
根据一具体实施例，所述饲料相较于在一预定的发育阶段对于所述品种最佳的蛋白质浓度，包含以重量计低于至少50％的蛋白质浓度。
根据一具体实施例，所述饲料相较于在一预定的发育阶段对于所述品种最佳的蛋白质浓度，包含以重量计低于至少55％的蛋白质浓度。
根据一具体实施例，所述饲料相较于在一预定的发育阶段对于所述品种最佳的蛋白质浓度，包含以重量计低于至少60％的蛋白质浓度。
根据一具体实施例，所述饲料相较于在一预定的发育阶段对于所述品种最佳的蛋白质浓度，包含以重量计低于至少65％的蛋白质浓度。
根据一具体实施例，所述饲料相较于在一预定的发育阶段对于所述品种最佳的蛋白质浓度，包含以重量计低于至少70％的蛋白质浓度。
根据一具体实施例，所述饲料相较于在一预定的发育阶段对于所述品种最佳的蛋白质浓度，包含以重量计低于至少75％的蛋白质浓度。
根据一具体实施例，所述饲料相较于在一预定的发育阶段对于所述品种最佳的蛋白质浓度，包含以重量计低于至少80％的蛋白质浓度。
根据一具体实施例，所述饲料相较于在一预定的发育阶段对于所述品种最佳的蛋白质浓度，包含以重量计低于至少85％的蛋白质浓度。
根据一具体实施例，所述饲料相较于在一预定的发育阶段对于所述品种最佳的蛋白质浓度，包含以重量计低于至少90％的蛋白质浓度。
根据一具体实施例，所述饲料相较于根据所述参考资料的最佳的蛋白质浓度，包含以重量计低于至少15％的蛋白质浓度(例如：上表1及1A)。
根据一具体实施例，所述饲料相较于根据所述参考资料的最佳的蛋白质浓度，包含以重量计低于至少20％的蛋白质浓度(例如：上表1及1A)。
根据一具体实施例，所述饲料相较于根据所述参考资料的最佳的蛋白质浓度，包含以重量计低于至少25％的蛋白质浓度(例如：上表1及1A)。
根据一具体实施例，所述饲料相较于根据所述参考资料的最佳的蛋白质浓度，包含以重量计低于至少30％的蛋白质浓度(例如：上表1及1A)。
根据一具体实施例，所述饲料相较于根据所述参考资料的最佳的蛋白质浓度，包含以重量计低于至少35％的蛋白质浓度(例如：上表1及1A)。
根据一具体实施例，所述饲料相较于根据所述参考资料的最佳的蛋白质浓度，包含以重量计低于至少40％的蛋白质浓度(例如：上表1及1A)。
根据一具体实施例，所述饲料相较于根据所述参考资料的最佳的蛋白质浓度，包含以重量计低于至少45％的蛋白质浓度(例如：上表1及1A)。
根据一具体实施例，所述饲料相较于根据所述参考资料的最佳的蛋白质浓度，包含以重量计低于至少50％的蛋白质浓度(例如：上表1及1A)。
根据一具体实施例，所述饲料相较于根据所述参考资料的最佳的蛋白质浓度，包含以重量计低于至少55％的蛋白质浓度(例如：上表1及1A)。
根据一具体实施例，所述饲料相较于根据所述参考资料的最佳的蛋白质浓度，包含以重量计低于至少60％的蛋白质浓度(例如：上表1及1A)。
根据一具体实施例，所述饲料相较于根据所述参考资料的最佳的蛋白质浓度，包含以重量计低于至少65％的蛋白质浓度(例如：上表1及1A)。
根据一具体实施例，所述饲料相较于根据所述参考资料的最佳的蛋白质浓度，包含以重量计低于至少70％的蛋白质浓度(例如：上表1及1A)。
根据一具体实施例，所述饲料相较于根据所述参考资料的最佳的蛋白质浓度，包含以重量计低于至少75％的蛋白质浓度(例如：上表1及1A)。
根据一具体实施例，所述饲料相较于根据所述参考资料的最佳的蛋白质浓度，包含以重量计低于至少80％的蛋白质浓度(例如：上表1及1A)。
根据一具体实施例，所述饲料相较于根据所述参考资料的最佳的蛋白质浓度，包含以重量计低于至少85％的蛋白质浓度(例如：上表1及1A)。
根据一具体实施例，所述饲料相较于根据所述参考资料的最佳的蛋白质浓度，包含以重量计低于至少90％的蛋白质浓度(例如：上表1及1A)。
根据一具体实施例，所述饲料包含以重量计不超过45％的蛋白质(例如：以重量计10％至45％、10％至40％、10％至35％、10％至30％、10％至25％、10％至20％、10％至15％)。
根据一具体实施例，所述饲料包含以重量计不超过40％的蛋白质。
根据一具体实施例，所述饲料包含以重量计不超过35％的蛋白质。
根据一具体实施例，所述饲料包含以重量计不超过30％的蛋白质。
根据一具体实施例，所述饲料包含以重量计不超过25％的蛋白质。
根据一具体实施例，所述饲料包含以重量计不超过20％的蛋白质。
根据一具体实施例，所述饲料包含以重量计不超过10％的蛋白质。
如本文中所使用，“丁酸(butyric acid)”亦称为丁酸(butanoic acid)，缩写为BTA，是一具有结构式为CH3CH2CH2-COOH的羧酸。丁酸的盐类及酯称为丁酸盐(butyrate)或丁酸酯(butanoate)。丁酸是天然存在于牛奶内，尤其是存在于山羊、绵羊及水牛乳、奶油、巴马干酪，以及作为厌氧发酵的一产物(包括在结肠内且作为体味)。根据一具体实施例，所述丁酸或其盐类是合成的或一发酵的产物。
丁酸的盐类的实例包括，但不限于，丁酸钠、丁酸乙酯、丁酸甲酯、丁酸戊酯及其组合。
根据一具体实施例，丁酸或其盐类的所述有效量以重量计包含0.01至5％。
根据一具体实施例，丁酸或其盐类的所述有效量以重量计包含0.01至2％。
根据一具体实施例，丁酸或其盐类的所述有效量以重量计包含0.01至1.5％。
根据一具体实施例，丁酸或其盐类的所述有效量以重量计包含0.01至1％。
根据一具体实施例，丁酸或其盐类的所述有效量以重量计包含0.01至0.5％。
根据一具体实施例，丁酸或其盐类的所述有效量以重量计包含0.01至0.1％。
根据一具体实施例，丁酸或其盐类的所述有效量以重量计包含0.1至1.6％。
如本文中所使用，“牛磺酸”是指有机化合物2-氨基乙烷磺酸。
牛磺酸盐的实例包括，但不限于，牛磺酸钠及牛磺酸镁、牛磺酸钾及牛磺酸铁。
根据一具体实施例，牛磺酸或其盐类的所述有效量以重量计包含0.1至5％。
根据一具体实施例，牛磺酸或其盐类的所述有效量以重量计包含0.1至4％。
根据一具体实施例，牛磺酸或其盐类的所述有效量以重量计包含0.1至3％。
根据一具体实施例，牛磺酸或其盐类的所述有效量以重量计包含0.1至2％。
根据一具体实施例，牛磺酸或其盐类的所述有效量以重量计包含0.1至1.5％。
根据一具体实施例，牛磺酸或其盐类的所述有效量以重量计包含1.5％。
根据一具体实施例，牛磺酸或其盐类的所述有效量以重量计包含0.5至1.5％。
根据一具体实施例，牛磺酸或其盐类的所述有效量以重量计包含0.6至1.5％。
根据一具体实施例，牛磺酸或其盐类的所述有效量以重量计包含0.7至1.5％。
根据一具体实施例，牛磺酸或其盐类的所述有效量以重量计包含0.8至1.5％。
根据一具体实施例，牛磺酸或其盐类的所述有效量以重量计包含0.9至1.5％。
本文中所叙述的组合物(饲料)可包含一有效量的丁酸或其盐类、牛磺酸或其盐类或其组合，所述有效量例如用以降低FCR并提升RWG、SGR、食物及蛋白质的利用效率)。根据一具体实施例，所述组合支持协同增效作用(例如：在降低FCR及提升RWG、SGR、食品及蛋白质利用效率上)。
根据一具体实施例，所述饲料包含牛磺酸或其盐类，所述牛磺酸或其盐类的一有效量与所述丁酸协同作用以协助降低FCR。
根据一具体实施例，所提升的RWG是至少5％、10％、15％或甚至20％。
根据一具体实施例，所提升的SGR是至少0.05％、0.1％、0.15％或0.2％。
根据一具体实施例，所提升的SGR是至少0.025％、0.05％、0.1％、0.15％或0.2％。
根据一具体实施例，所降低的FCR是至少0.05、0.1、0.15或0.2。
在一实施例中，所述饲料可进一步包含在动物饲料内常用的其他组分。例如，引诱剂、抗氧化剂、免疫刺激剂、酵素、色素、有机酸、益生元、益生菌、进食兴奋剂、抗生素、激素及粘合剂及其组合。
在一实施例中，所述饲料可包含鱼粉、鱼油、家禽肉、家禽肉副产品、羽毛粉、肉粉、血粉、骨粉、油菜籽、玉米蛋白、亚麻籽、家禽油、小麦及大豆及其等衍生物、羽扇豆粉、豌豆蛋白、向日葵粉、蚕豆粉、芥花籽油、藻类、微藻、海藻，水生附生植物及农业或畜牧业的副产品。
在以下的实例部分的表3-5中提供示例性的组合物。
所述生产的方法可以是本领域已知的，其取决于所使用的成分及配方。根据一具体实施例，所述方法包括：(i)将丁酸、牛磺酸、其盐或其等的组合与其他合适的饲料成分混合(如上述，亦如经包封的添加剂)(ii)将混合物均质化及(iii)将所述经均质化的混合物加工成如上所述的一合适的形式。
根据另一更优选的实施例，经包封或未包封的所述牛磺酸可被添加至一颗粒中，此步骤是在挤出阶段之后通过涂覆或通过真空涂覆于所述经挤出的颗粒上。
在一实施例中，于步骤(iii)，将所述经均质化的混合物造粒为适合喂食鱼类或甲壳类的形式。例如：虾，例如：下沉的颗粒。
在另一实施例中，于步骤(iii)，将所述经均质化的混合物挤出成薄片，且适合于喂食鱼类。
据此，提供一种水产养殖饲料，所述水产养殖饲料确定为用于喂养一感兴趣的品种，所述饲料相较于在一预定的发育阶段对于所述品种最佳的蛋白质浓度，包含以重量计低于至少15％的蛋白质浓度(或以上所列出的任何其他数值，整体而言，各个数值皆意图涵盖一个单独的实施例)，以及一有效量的丁酸或其盐类，所述有效量协助降低饲料转化率(FCR)。
根据一具体实施例，所述饲料可用于作为在整个所述鱼类的生命周期(自稚鱼至成鱼)的唯一食物来源，或者在不同时间点与一种或多种的水产养殖饲料结合使用，此等饲料被配制以满足在不同的生长阶段所需的不断变化的营养需求(Handbook of SalmonFarming；Stead and Laird(eds)(2002)Praxis Publishing Ltd.,Chichester,UK)。本发明的水产养殖饲料组合物可通过本领域的技术人员已知的任何水产养殖的方法来饲喂动物以支持动物的生长(Food for Thought:the Use of Marine Resources in Fish Feed,Editor:Tveferaas,head of conservation,WWF-Norway,Report#02/03(2/2003))。
如本文中所使用，“提供”是指可以通过分配的喂食的动作。
根据一具体实施例，提供是每24小时进行不超过一次。
根据一具体实施例，提供是每24小时进行至少一次(例如：2、3、4、5)。
根据一具体实施例，提供是每个星期进行一次。
根据一具体实施例，提供是每两个星期进行一次。
根据一具体实施例，提供是每三个星期进行一次。
根据一具体实施例，提供是每一个至三个星期进行一次。
根据一具体实施例，提供是每两个至三个星期进行一次。
根据一具体实施例，提供是每四个至五个星期进行一次。
根据一具体实施例，提供是每五个至六个星期进行一次。
根据一具体实施例，提供是每六个至七个星期进行一次。
根据一具体实施例，提供是每七个至八个星期进行一次。
根据一具体实施例，提供是每八个至十个星期进行一次。
根据一具体实施例，提供是每八个至十二个星期进行一次。
一旦所述水产养殖动物达到一适当的尺寸，即可收割农作物(鱼、甲壳类)，并进行加工以满足消费者的需求，且能够被运送至市场，通常在离开水后的几个小时内到达。术语“水产养殖肉制品”是指供人类食用的食品，所述供人类食用的食品包含来自如上所定义的一水产养殖产品的至少一部分的肉类。一水产养殖肉类产品可为，例如，一整条鱼或自一条鱼上所切下的一鱼片，其中的每一种皆可作为食物食用，且通常包含根据本发明的某些实施例所生长的所述水生动物的DNA。然而，所述产品亦可由所述水产养殖动物的一经纯化的代谢产物所组成，例如虾青素或油脂或脂肪酸，例如omega-3、或所述鱼类的部分，例如性腺。
如本文中所使用，术语“大约”是指±10％。
术语“包含(comprises)”，“包含(comprising)”，“包括(include)”，“包括(including)”，“具有”及其共轭词意指“包括但不限于”。
术语“由...所组成”意指“包括且限于”。
术语“实质上由...所组成”意指所述组合物、方法或结构可包括额外的成分、步骤及/或部分，但前提为所述额外的成分、步骤及/或部分不会实质性地改变所请求保护的组合物、方法或结构的基本的及新颖的特征。
如本文中所使用，除非本文额外的明确指示，否则单数形式“一(a)”、“一(an)”及“所述”包括复数的指定事项。例如，术语“一化合物”或“至少一化合物”可包括多个化合物，涵盖其混合物。
在整个本申请中，本发明的各种实施例可以一范围形式呈现。应当理解，范围形式内的描述仅是为了方便及简洁，且不应被解释为对本发明的范围作为不可改变的限制。据此，所述一范围的描述应被视为已经具体地公开了所有可能的子范围以及所述范围内的各个数值。例如，对于自1至6的一范围的描述应被视为已经具体地公开子范围，例如：自1至3、自1至4、自1至5、自2至4、自2至6、自3至6等等，以及所述范围内的各个数值，例如：1、2、3、4、5及6。此与范围的广度无关。
每当在本文中指示一数值范围时，其意指包括在所述指示的范围内的任何引用的数字(小数或整数)。短语“在”一第一指示数字及一第二指示数字“之间的范围(ranging)/范围(ranges)”以及“自”一第一指示数字“至”一第二指示数字的“范围(ranging)/范围(ranges)”在本文中可互换使用，且意指包括所述第一及第二指示数字以及其等之间所有的小数及整数。
如本文中所使用，术语“方法”是指用于完成一给定工作的方式、手段、技术及过程，包括，但不限于，已知的彼等方式、手段、技术及过程，或者轻易地通过化学、药理学、生物学、生物化学及医学领域的从业人员的已知的方式、手段、技术及过程进行研发。
应理解的是，为了清楚起见，在单独的实施例的内文内所描述的本发明的某些特征亦可在一单独的实施例中组合提供。相反地，为了简洁起见，在一单独的实施例的内文中所描述的本发明的各种特征，亦可单独地或以任何合适的子组合或在本发明的任何其他所述的实施例中合适地提供。在不同的实施例的内文中所描述的某些特征不应被认为是彼等实施例的必要特征，除非所述实施例缺乏彼等要素及无法运行。
如本文上述的本发明的各种实施例及在以下的权利要求书中所请求保护的内容在以下的实例中得到实验上的支持。
实例
目前制作以下的实例以作为参考文献，所述实例连同上述内容以一非限制性的方式说明本发明。
一般而言，本文中所使用的命名法及本发明所利用的实验室方法包括分子的、生物化学的、微生物学的及重组的DNA技术。此等技术在文献中已被详尽地解释。参见，例如，“Molecular Cloning:A laboratory Manual”，Sambrook等人，(1989)、“CurrentProtocols in Molecular Biology”，第I至III卷，Ausubel，R.M.编辑(1994)、Ausubel等人，“Current Protocols in Molecular Biology”，John Wiley及Sons,Baltimore(1989)、Perbal，“A Practical Guide to Molecular Cloning”，John Wiley及Sons，纽约(1988年)、Watson等人，“Recombinant DNA”，Scientific American Books，纽约、Birren等人(编辑)“Genome Analysis:A Laboratory Manual Series”，卷：1-4，Cold Spring HarborLaboratory Press，纽约(1998)、记载于美国专利第4,666,828号、第4,683,202号、第4,801,531号、第5,192,659号及第5,272,057号的方法、“Cell Biology:A LaboratoryHandbook”，第I至III卷，Cellis，J.E.编辑(1994)、“Current Protocols in Immunology”，第I至III卷，Coligan，J.E.编辑(1994)、Stites等人编辑，“Basic and ClinicalImmunology”(第8版)，Appleton及Lange，诺沃克康乃狄克州(1994年)、Mishell及Shiigi编辑，“Selected Methods in Cellular Immunology”，W.H.Freeman及Co.，纽约(1980)、可利用的免疫分析法已被广泛的描述于专利及科学文献中，例如：美国专利第3,791,932号、第3,839,153号、第3,850,752号、第3,850,578号、第3,853,987号、第3,867,517号、第3,879,262号、第3,901,654号、第3,935,074号、第3,984,533号、第3,996,345号、第4,034,074号、第4,098,876号、第4,879,219号、第5,011,771号及第5,281,521号、《OligonucleotideSynthesis》，Gait,M.J.编辑(1984)、“Nucleic Acid Hybridization”，Hames，B.D.及Higgins S.J.编辑(1985)、“Transcription and Translation”，Hames，B.D.，及Higgins，S.J.编辑(1984)、“Animal Cell Culture”，Freshney，R.I.编辑(1986)、“ImmobilizedCells and Enzymes”，IRL出版社(1986)、“A Practical Guide to Molecular Cloning”，Perbal，B.，(1984)及“Methods in Enzymology”，第1至317卷，学术出版社、“PCRProtocols:A Guide To Methods And Applications”，学术出版社，圣地亚哥，加利福尼亚(1990)、Marshak等人，“Strategies for Protein Purification and Characterization-A Laboratory Course Manual”，CSHL出版社(1996)。所有此等文献皆通过引用而并入本文中，如同完整地阐述于在本文中。一般其他的参考文献被提供于整个本文件中。其中的方法在本领域中是众所周知的，且为了读者的便利在本文中提供参考文献内的方法。其中所包含的所有信息皆通过引用而并入本文中。
实验的方法
丁酸盐及牛磺酸对白石斑鱼生长的影响
将起始体重为41.78±0.74g(平均值±SEM)白石斑鱼(Epinephelus aeneus)以每槽30条鱼的密度置放于80L圆柱形塑料槽内，四种膳食处理中的各种膳食的处理皆进行4槽重复(总共16个槽)。在22.1至23.2℃的温度范围、自然光周期为约12h光照：12h黑暗，其中光照强度为200至400lux(Hioki Lux Hi Tester 3421，日本)下，将鱼置于经过滤、经紫外线处理的环境海水(40‰)的开放循环内。经溶解的氧的水平是高于5.33mg L-1(OxyguardHandy Polaris，法鲁姆，丹麦)。
每天以四种不同的实验膳食喂食鱼至其具有明显的饱腹感，所述四种不同的实验膳食包括一对照膳食及添加1.5％牛磺酸(+T)、含量水平为0.1％丁酸钠(Sigma Aldrich，美国)(+B)及包含牛磺酸与丁酸盐二者(+TB；表3)的膳食。所述试验进行12周，其中每两周将鱼进行称重并计数鱼量，以评估其等的生长及存活率。在试验结束时，计算生长参数，并牺牲各组内的8条鱼，以进行基因表达、牛磺酸含量、体组成及组织学的分析。在此方法中，利用过量的MS2-22(Sigma Aldrich，美国)对鱼实施安乐死，之后迅速将鱼斩首，然后解剖以移除其等的胃肠道及内脏。立即将肝脏及肌肉的样本取出并保存于-20℃，以及将近端肠道(约1cm)的样本立即冷冻并保存于-80℃，直至进行分子的分析，或者固定于10％的中性福马林缓冲液(NBF)内并保存于室温，直至进行组织学的处理。将剩余的鱼尸体储存于-20℃并分析其体组成。
表3.试验中用于表征膳食丁酸盐及牛磺酸对于白石斑鱼生长的影响的实验膳食的组成(g kg-1干重)。
鱼组织内牛磺酸的分析
将肝及肌肉组织样本进行冷冻干燥(冷冻干燥机FD-1C-80，博伊康，中国)。首先将大约2至5mg的各样本进行水解(1ml的0.1MHCL，并在冰上均质1.5分钟)，之后离心(在4℃下以13,000rpm的转速离心20分钟)。将来自已测得量的各样本的上清液转移至10ml的玻璃试管内。根据(Orth，2001)所述的方法，使用反相HPLC(Varian HPLC 325–410nm，WalnutCreek，加利福尼亚，美国)进行进一步的制备及分析，并以150×4.6mm AcclaimTM120C18 5μm色谱柱(Thermo Scientific，美国)进行梯度洗脱。为了优化分离并更佳地检测样本内的牛磺酸，对梯度洗脱的方法进行调整。
近端肠道的组织学分析
根据标准组织学规约以处理肠道样本，其中将样本进行脱水，并在K-Clear(Kaltek，意大利)中清除，之后将样本包埋于Paraplast(Sigma Aldrich，美国)内，并以5μm的厚度进行切片(RM2245切片机，Leica，德国)。将载有石斑鱼的肠道横截面的载玻片(三重复)以苏木精-伊红(HE)进行染色，并在一立体变焦显微镜(Axio Zoom.V16，蔡司，德国)下进行拍照，及使用ImageJ软件(imagej.nih.gov/ij/)测量所述的肠道横截面的内周长及外周长(mm)。对于各截面，将带有隐窝及绒毛的所述肠道的内周长，相对于外周长(mm)进行常规化。对于各载玻片/样本，之后对于各载玻片/样本，对各切片所计算出的比率(内周长/外周长)进行平均，并分析处理之间的差异。
丁酸盐及牛磺酸对金头鲷(Sparus aurata)的影响
实验的装置是由200L的圆柱形槽所组成，在大约12h/12h(暗/亮)的自然光周期下，所述圆柱形槽是在一水流通过、经过滤的(10μm)环境海水(40‰)系统内，其中水的温度范围是介于24.8至25.4℃之间。每天两次向鱼供给实验膳食(9:00、14:00)。
表征PepT1的表达模式并筛选膳食丁酸盐对于靶基因的影响
将平均重量为14.49±0.2g(平均±SEM)的鱼以每槽30条鱼的密度置放于15个槽内，各膳食处理进行5槽重复(指定为A至E)。在为期10天的试验中，向鱼供给含有1％牛磺酸及0％和0.8％的丁酸钠(Sigma Aldrich，美国)的实验膳食(表4)。10天后，按以下的方式，每隔一个小时自各处理中取样6条鱼的近端肠道的总RNA：07：30(A)、08：30(B)、09：30(C)、10：30(D)、11：30(E)、13：30(A)、14：30(B)及15:30(C)。
表4.试验中用于表征PepT1表达模式及筛选膳食丁酸盐对靶基因的影响的实验膳食的组合物(g kg-1干重)。
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为了确定(1)在停止添加膳食丁酸盐后，对于PepT1转录水平的影响是否会持续，以及(2)研究膳食丁酸盐对于Cdx1b表达的影响。为此，进行另一个研究。在此试验中，具有平均重量为27.14±0.47g(平均±SEM)的鱼以每槽30条鱼的密度放养，各处理有两个重复的槽。在停止添加丁酸钠膳食之前，先以含有1％牛磺酸及0％、0.8％与1.6％丁酸钠的实验饮食(表4)喂食鱼，之后所有的膳食组别开始接受含有0％丁酸钠的膳食。在试验的第9、12及15天，自各槽中取样4条鱼的近端肠道的总RNA样本(各种膳食处理取样8条鱼)。
牛磺酸及丁酸盐对于喂食低蛋白水平膳食的鱼类的影响
使用起始体重为5.57±0.02g(平均值±SEM)的稚鱼金头鲷以测试蛋白质水平及丁酸盐的添加对于20个槽系统内鱼类的生长性能的综合影响。将鱼以每槽密度为30条鱼进行放养，其允许在5槽重复处理(指定为A至E)中测试4种处理。膳食的处理是由包括1％牛磺酸及含有或不含1.6％的丁酸钠(表5；分别为50％CP、35％CP、50％CP+B，35％CP+B)的两种不同的膳食蛋白水平，即50％或35％的粗蛋白(CP)所组成。膳食是等能量的，且包括相同比率的鱼粉/豆粉，以减少变动的消化率及膳食氨基酸谱(表5)。
在为期13周的试验中，大约每两周对鱼进行称重。数据用于计算生长率及调整饲料的日粮。在试验结束时，自各槽内取样6条鱼，以计算肠道指数并提取其等的近端肠道的总RNA。另外两条鱼取样进行组织学及体组成分析。所有取样方法皆如所述进行。
表5.试验中用于确定膳食蛋白水平及添加牛磺酸与丁酸盐对于稚鱼海鲷的影响的实验膳食的组合物(g kg-1干重)及近邻分析。
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取样方法
利用过量的MS2-22(Sigma Aldrich，美国)对鱼实施安乐死，之后迅速将鱼斩首，然后解剖以移除其等的胃肠道及内脏。对于总RNA，切开近端肠道的第一段(大约1厘米)，立即冷冻并于-80℃下保存直至提取RNA。对于组织学，取样近端肠道的片段(大约0.6厘米)，将所述片段置入装有10％中性福马林(NBF)的15ml Falcon试管中，并保存于在室温直至后续处理。对于免疫组织化学(IHC-P)染色，取样近端肠道的片段(大约0.6厘米)，将所述片段置于含有4％多聚甲醛(PFA)的1.7ml的微量离心管内，并于4℃下保存过夜以进行固定。固定后，利用0.8％ PBST(含有0.8％ Triton x-100的PBS，Sigma Aldrich，美国)将肠道样本冲洗(rinse)两次，然后再清洗(wash)3次(每次10分钟)。在此之后，通过以含有50％甲醇的PBST清洗1次5分钟，之后再用以100％甲醇清洗3次，以将样本逐渐脱水，并于-20℃下保存在100％甲醇中，直至进行染色步骤。在移除胃肠道之后，将剩余的经取样的鱼尸体置入尼龙袋中，并保存于-20℃，直至进行近邻分析。为了计算肠道指数(GI)，在移除彼等的胃肠道之前，将鱼进行称重。将肠子与胃及幽门垂分开，之后通过镊子将肠子对准一直尺，以测量其等的长度(mm)。对于每条鱼，使用以下的公式计算肠道指数：肠道指数＝100x体重(g)/(肠道长度(mm))3。
基因表达的分析
总RNA的提取及cDNA的合成
根据厂商的说明书，来自近端肠道的样本通过使用BioTri试剂(Biolab，以色列)提取总RNA。为了确定总RNA的品质及浓度，各样本以18μl经DEPC处理过的水稀释后，取2μl(1:10)负载至一384孔微孔盘(Greiner Bio-One，奥地利)。各样本通过盘读取器及Gen5软件(Synergy HT，BioTek，美国)获得260/280比率、260/230比率及RNA浓度。对于各RNA的提取方法，通过在经GelRed(Biotium，美国)染色的1.2％琼脂糖凝胶上进行电泳，以评估经提取的RNA的完整性。将来自6个随机选择的体积为5μl的RNA样本负载至含有RNA凝胶负载染剂(Thermo Scientific，美国)的凝胶上，并分离RNA片段以检测代表28S及18S rRNA的完整条带。在合成cDNA之前，将2μg的来自各RNA样本以DNase I(Ambion，美国)处理，以去除微量的基因组DNA。将1μg的来自经DNase处理的样本反转录为cDNA(qScriptTMcDNA合成，QuantaBioSciences，美国)。
金头鲷内的靶基因的扩增及定序
对于CCK及Cdx1b转录本的即时qPCR分析的设计(其等的序列在海鲷中是未知的)，开始于进行nucleotide blast搜索(blast(nc)ncbi.nlm.nih.gov)/Blast.cgi)，以在其他的鱼类/脊椎动物的物种中找寻具有一相似水平的直系同源物。将经选定的编码(mRNA)序列进行多序列比对(MSA)(Clustal Omega，www.ebi.ac.uk/Tools/msa/clustalo)，以检测所述序列内的保守区域。将所述序列内的保守区作为一模板，以设计跨物种特异性PCR引物(表6)，所述引物用于扩增来自海鲷直系同源物编码序列的片段。通过在经GelRed染色的1.8％琼脂糖凝胶(Biotium，美国)上进行电泳，以评估PCR产物的尺寸，之后将所述PCR产物进行定序(Hy Laboratories Ltd.)。通过执行包括经定序的数据及其他的直系同源物的额外的MSA’s(Clusta Omega)以及通过计算双序列同一性(SIAS，imed.med.ucm.es/Tools/sias.html)，以进一步验证所述经定序的数据的同一性。
对于各项扩增，使用金头鲷的18S rRNA的特异性引物(登录号AY993930.1；表6)作为阳性对照。
PCR
对于通过PCR进行扩增，使用GoGreen Master Mix PCR试剂盒(美国Promega)及特异性引物(表6)将150ng模板cDNA转移至PCR 0.2ml管中。PCR扩增(TPersonalThermocycler，Biometra，德国)起始于在95℃下进行2分钟，之后进行30个循环，分别在95℃进行30秒、在黏合温度进行45秒(根据所述引物的Tm值)及在72分钟进行1分钟。根据厂商的建议，在72℃下新增5分钟的最终延伸阶段。
Real-time PCR
设计特异性real-time PCR引物(表6)以扩增海鲷PepT1(登录号GU733710.1)、PCNA(登录号CX734891.1)、CCK、Cdx1b及β-肌动蛋白(登录号AY362763)转录本。不同处理的靶基因转录本的定量是通过在定量PCR系统(Applied Biosystems，7500快速实时PCR系统)的PCR反应混合物(10μl)所获得，所述PCR反应混合物包含SYBR Green染剂(Quanta，Perfecta；SYBR Green FastMix，Low ROX；95074-012)、模板cDNA及500nM靶特异性引物。使用ΔΔCT方法(Livak和Schmittgen，2001)检测靶转录本的相对量，其中将各靶基因的CT值与作为参考基因的海鲷β-肌动蛋白的CT值进行比较。
表6.用于RCR及real-time PCR的引物的序列
近端肠道横截面的组织学分析(C.S.)
施行用于组织学分析的标准规约(Grate等人，2003)。简要地，将肠道样本进行脱水如下：(1)转移至30％乙醇中2小时，之后(2)于50％乙醇中2小时，之后(3)在70％乙醇中置放隔夜。第二天，将样本(4)转移至95％乙醇中3小时(两次)，之后转移至(5)100％乙醇中1小时(两次)，然后保存样本。在将样本包埋于Paraplast(Sigma Aldrich，美国)内部之前，先在K-Clear(意大利，Kaltek)中进行清理，并以5μm的厚度(RM2245切片机，Leica，德国)进行切片。将切片置于载玻片上(各载玻片上置放三个切片，且各样本制备一个载玻片)，并使用苏木精-伊红(HE)对肠组织内的细胞核及细胞结构进行染色。在一立体变焦显微镜(AxioZoom.V16，德国蔡司，德国)下拍摄肠道横截面切片，并使用ImageJ软件(imagej.nih.gov/ij/)测量切片的内周长及外周长(mm)。对于各切片，将带有隐窝及绒毛的所述肠道的内周长，相对于外周长(mm)进行常规化。之后对于各载玻片/样本，对各切片所计算出的比率(内周长/外周长)进行平均，并分析处理之间的差异。
近邻分析(生物化学分析)
使用凯氏定氮法(Kjeldahl method)测定粗蛋白，并将N乘以6.25。在使用氯仿-甲醇提取后检测总脂质(Folch等人，1957年)。使用高速匀浆器(T-25，IKA，德国)将样本进行均质5分钟，然后在溶剂分离及真空干燥后，通过重量分析法以测定总脂质。通过在550℃的马弗炉内，将样本焚烧24小时后称重以定量灰分。使用苯甲酸作为标准，通过在炸弹式量热计(Parr，美国)内燃烧以计算总能量(GE)。
统计分析
膳食处理之间的差异是通过参数数据分析，之后对于均一性再通过Levene检验法进行评估。通过学生t检验分析0.8％的膳食丁酸盐及对照膳食或1.6％的膳食丁酸盐对基因表达的影响，而采用3种或4种膳食处理的试验数据则是使用单向方差分析(STATISTICAv10；StatSoft，Ltd.，突沙市，奥克拉荷马州，美国)进行分析，之后再使用Tukey HSD进行事后(post-hoc)比较。对基因表达的结果，组织学横截面分析以及肠道指数进行对数转换，然后使用ANOVA进行分析。首先对生存率和所有比例或百分比值进行反正弦变换。
实例1
牛磺酸及丁酸盐对于生长性能展现具有协同作用
相较于对照组鱼类所增加的体重(152.67±5.62％)，在白石斑鱼膳食(+TB)中添加牛磺酸及丁酸盐导致相对体重增加(RWG)显著较高(203.59±10.18％)(P<0.05)，且相较于喂食对照饮食的鱼(104.59±1.70克)，在白石斑鱼膳食(+TB)中添加牛磺酸及丁酸盐，导致鱼的最终体重(125.12±1.61克)(P<0.05)(表7)显著较高。喂食(+TB)膳食的鱼相较于喂食对照膳食(1.02±0.02％)的鱼亦展现显著较高的(P<0.05)比生长率(SGR)(1.22±0.04％)，且平均体重增加显著高于其他所有的处理组别(P<0.01)(表7)。在鱼饲料中添加牛磺酸及丁酸盐(+TB)后，对照膳食的饲料转换率(FCR)自(2.82±0.12)显著地降低至(2.32±0.07)(P<0.05)(表7)。
表7.喂食实验膳食的幼体白石斑鱼的生长、存活率(％)、RWG(％)、SGR及FCR。结果呈现为4次重复的平均值±SEM，不同的字母表示明显不同的数值。
RWG:相对体重增加(增加的体重/起始体重)x 100.
SGR:比生长率＝100x ln(最终体重/起始体重)/试验天数.
FCR:饲料转换率＝提供的饲料(g)/增加的体重(g).
实例2
丁酸盐部分地恢复经牛磺酸诱导的TauT表达的负调控
检测并比较喂食含有1.5％ DW牛磺酸(+T)、0.1％ DW丁酸盐(+B)、1.5％ DW牛磺酸及0.1％ DW丁酸盐(+TB)的膳食、或未添加膳食的对照膳食后，近端肠道内TauT的表达水平，所述未添加膳食的对照膳食是仅包含来自鱼类及家禽肉组分的背景牛磺酸的基础膳食(对照组)。当在膳食(对照组)与(+T)之间相比较以及在膳食(+B)与(+TB)之间相比较，添加牛磺酸的膳食对于白石斑鱼的近端肠道内的TauT的表达具有负调节作用，且显著地降低TauT的表达水平(P<0.05)(+TB)(图1)。相较于对照组及(+T)膳食，在存在1.5％ DW牛磺酸的膳食中，丁酸盐(+TB)的添加可部分地恢复TauT的表达水平(图1)。
实例3
丁酸盐提升肌肉内牛磺酸的水平
分析经喂食不同膳食的鱼类的肝脏及肌肉组织中牛磺酸的积累。发现经喂食添加有牛磺酸的膳食(+T及+TB)的鱼类的肝脏(图2A)及肌肉(图2B)内的牛磺酸的水平(mg g- 1DW)显著较高(P<0.001)。此外，在喂食含有牛磺酸的饮食(+T)而导致肌肉的牛磺酸水平提升的同时，在所述饮食中添加丁酸盐(+TB)则会显着将彼等牛磺酸水平更加提升24％(图2B)(P<0.05)。
实例4
丁酸盐影响肠道形态
当显著地延伸48％以上的近端肠道的周长时，添加丁酸盐至膳食(+B及+TB膳食)展现对近端肠道的空腔形态提供正向的影响(P<0.01)，其是从取自近端肠道的组织学横截面进行测量(图3)。
实施例5
PepT1的表达模式及丁酸钠对PepT1的影响
海鲷的PepT1表达模式在早晨喂食之前较高，在整个试验的同时一致性给予，且之后降低。在另一方面，在第二次日常喂养之前，Pept1的表达并未明显提升。
为了研究膳食丁酸盐是否能够上调海鲷内的PepT1的表达，以在与先前试验相同的饮食添加或不添加(对照组)0.8％的丁酸钠喂食鱼类。在两种处理中皆发现相似的表达模式，其中Pept1的表达在早晨喂食时增加，之后降低。然而，相较于在早晨喂食之前的对照组鱼类中PepT1的表达，喂食添加丁酸钠的膳食的PepT1表达显著较高(P<0.01)(图4)。有趣的是，此种情况是在前一天下午喂食包括添加丁酸盐的饲料后超过17个小时所记录而得的。
为了检测在停止膳食中添加此种短链脂肪酸后，丁酸盐对于PepT1mRNA转录水平的持续影响，以干重计含有提高的丁酸盐水平的膳食喂食鱼类8天，所述提高的丁酸盐水平为0(对照)、0.8及1.6％，之后仅继续喂饲对照膳食6天。添加0.8％及1.6％的丁酸盐(P<0.001)提升PepT1的转录，所述转录在1.6％丁酸盐处理是2倍以上(图5A)。在停止饲喂丁酸盐6天后，饲喂0.8％(图5B)及1.6％(图5C)的丁酸盐的鱼类中PepT1的转录水平仍维持高于对照组。
实例6
丁酸盐对肠上皮细胞增殖的影响
为了确定喂食含0％(对照)和0.8％丁酸钠的饲料持续9天的鱼的PCNA水平(作为增殖细胞的标志物)，在喂食1.5小时后从近端肠样本中提取总RNA。膳食丁酸盐对PCNA的转录具有显著(P<0.05)的作用。丁酸盐处理中PCNA的表达是对照的2倍以上(图6)。
实例7
丁酸盐对于喂食低蛋白膳食的鱼类的影响
以上结果证实在海鲷膳食中添加丁酸钠可提升PepT1的转录水平，且能通过在PCNA转录水平上的刺激作用促进肠道细胞的增殖。为了进一步采取此步骤，尝试阐明在肠道经丁酸盐诱导的转录作用是否亦能协助蛋白质摄取以及改善生长。此种潜在增加的蛋白质吸收亦将降低达到最佳生长所必需的膳食蛋白质的水平，从而降低饲料成本及在养成期间的氮排放。
蛋白质水平及/或丁酸盐的添加对于鱼的存活并未有明显的影响，但是对于膳食之间的平均体重增加则有显著地影响(P<0.05)(表8)。饲喂35％粗蛋白(CP)膳食的海鲷的平均体重增加(27.32g鱼类-1)显著低于喂食50％CP的鱼类(29.48g鱼类-1)(P<0.05)，在此等膳食处理中添加1.6％丁酸盐显著改善生长(分别为28.83及31.15；表8)(P<0.05)。就体重增加百分比(RWG)而言，饲喂35％ CP的鱼类的体重增加百分比(493.3％)相较于喂食50％ CP的鱼类的体重增加百分比(524.6％)，显著地展现较低的数值(P<0.01)。另一方面，在50％ CP的膳食中添加丁酸盐所得到的RWG(556.99％)显著优于其他所有的处理(P<0.01)。在35％ CP的膳食中添加丁酸盐亦显著提升鱼类的RWG(520.46％)(P<0.01)，其与喂食不添加丁酸盐的50％ CP的膳食的鱼类则无显著差异(P>0.05)(表8)。此模式在比生长速率(SGR)及饲料转化率(FCR)方面亦得到类似及显著的结果(分别为P<0.001及P<0.01；表8)。有趣的是，在35％ CP的膳食中添加丁酸盐会导至鱼类在所有的试验处理中具有最高的蛋白质利用率(PER；2.31；表8)。在表8中，于检测蛋白质生产价值(PPV)时，饲喂35％ CP+B处理组的鱼类亦显著占优势(P<0.001)(127.44％)。此外，最近的分析结果并未表明丁酸盐的添加对于鱼类整体近邻组成物有任何显著的影响(表9)。
表8.在包含牛磺酸及含有或不含丁酸盐的不同的蛋白质水平下的生长参数。以实验膳食喂养稚鱼金头鲷的生长、存活率(％)、RWG(％)、SGR及FCR、PER、PPV(％)。结果显示为5次重复的平均值±SEM，不同的字母表示明显不同的数值。
1RWG:相对体重增加＝(增加的体重/起始体重)x 100.
2SGR:比生长率＝100x ln(最终体重/起始体重)/试验天数.
3FCR:饲料转换率＝提供的饲料(g)/增加的体重(g).
4PER:蛋白质利用率＝增加的体重(g)/摄入的蛋白质(g).
5PPV:蛋白质生产价值＝鱼类增加的蛋白质(g)X 100/摄入的蛋白质(g).
表9.在包括含有或不含丁酸盐的牛磺酸不同的蛋白质水平下，整条鱼的蛋白质、脂质及能量的含量。饲喂实验膳食的稚鱼金头鲷的干重(％)、蛋白质水平(干重％)、脂质(干重％)及能量(cal g-1)的整体近邻分析。结果以10条鱼的平均值±SEM表示，不同的字母表示明显不同的值。
实例8
通过不同水平的膳食蛋白及丁酸盐的添加对于PepT1 mRNA转录的调节
在喂食35％ CP膳食的鱼类内的PepT1转录水平显著低于在饲喂50％ CP膳食的鱼类(P<0.001)(图7)。然而，接受含有1.6％丁酸钠的50％ CP膳食(50％ CP+B)及的鱼类展现最高的PepT1表达水平(P<0.01)。然而，相较于高CP膳食，在低CP膳食内添加丁酸盐导致Pept1表达并无显著差异(P>0.05)。
实例9
膳食丁酸盐的添加及膳食蛋白的水平对于肠道细胞增殖的影响
从饲喂不同膳食的鱼类的近端肠道样本中提取总RNA，以确定PCNA(作为增殖细胞的标志物)的转录水平。接受丁酸盐添加的鱼类(35％ CP+B和50％ CP+B)中的PCNA转录水平显著较高(P<0.05)，无论其等地膳食内是否含有蛋白质(图8)
实例10
膳食丁酸盐的添加及膳食蛋白质的水平对于肠道形态的影响
为了检测膳食丁酸盐对于肠上皮形态的生理影响，分析饲喂不同膳食的鱼类的近端肠样本的组织学横截面。使用ImageJ测量肠道的内周长(mm)，并相对于外周长(mm)进行常规化。已证实通过显著将近端肠上皮的内周长扩大至外周长的比率约30％(P<0.001)，丁酸酯的添加对于近端肠上皮展现正影响。此种作用与膳食蛋白的水平无关(图9)。
此外，计算来自不同的膳食处理组别的鱼类的肠道指数，所述肠道指数代表体重(g)与肠道长度(mm)相关联。在含有35％及50％的二者膳食蛋白质水平的鱼类膳食内添加丁酸盐会导致与体重相关的肠道长度延长，相较于不含膳食丁酸盐的相同膳食，其在含有35％ CP+B及50％ CP+B的膳食中展现显著较低的肠道指数(P<0.01)(图10)。
尽管已经结合本发明的特定实施例以描述本发明，然而显然对于本领域技术人员而言，许多的替代、修改及变化将是显而易见的。据此，旨在涵盖落入所附权利要求书的精神及广泛范围内的所有如此的替代、修改及变化。
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(其他参考文献已列于本申请内文各处)
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Claims (30)
1.一种喂养感兴趣的一水生动物品种的一水产养殖的方法，其特征在于：所述方法包含：对所述水产养殖提供一水产饲料，所述水产饲料包含以重量计低于所述品种在一预定的发育阶段的最佳蛋白质量至少30％的蛋白质及一有效量的丁酸或其盐类及牛磺酸或其盐类，所述有效量协助降低饲料转换率，其中所述有效量包含以重量计0.1至1.6％的丁酸或其盐类，以及所述牛磺酸或其盐类的所述有效量以重量计包含1至1.5％。
2.一种对于感兴趣的一水生动物品种的一水产养殖提升相对体重增加、特定生长率及降低饲料转换率的方法，其特征在于：所述方法包含：对所述水产养殖提供一水产饲料，所述水产饲料包含以重量计低于所述品种在一预定的发育阶段的最佳蛋白质量至少30％的蛋白质及一有效量的丁酸或其盐类及牛磺酸或其盐类，所述有效量协助提升相对体重增加、特定生长率及降低饲料转换率，其中所述有效量包含以重量计0.1至1.6％的丁酸或其盐类，以及所述牛磺酸或其盐类的所述有效量以重量计包含1至1.5％。
3.一种改善感兴趣的一水生动物品种的一水产养殖的喂食及蛋白质利用的方法，其特征在于：所述方法包含：对所述水产养殖提供一水产饲料，所述水产饲料包含以重量计低于所述品种在一预定的发育阶段的最佳蛋白质量至少30％的蛋白质及一有效量的丁酸或其盐类及牛磺酸或其盐类，所述有效量协助降低饲料转换率，其中所述有效量包含以重量计0.1至1.6％的丁酸或其盐类，以及所述牛磺酸或其盐类的所述有效量以重量计包含1至1.5％。
4.一种确定用于饲养感兴趣的一水生动物品种的一水产养殖的饲料，其特征在于：所述饲料包含：以重量计低于所述品种在一预定的发育阶段的一最佳蛋白质浓度至少30％的一蛋白质浓度，及一有效量的丁酸或其盐类及牛磺酸或其盐类，所述有效量协助降低饲料转换率，其中所述有效量包含以重量计0.1至1.6％的丁酸或其盐类，以及所述牛磺酸或其盐类的所述有效量以重量计包含1至1.5％。
5.如权利要求1至4中任一项所述的方法或饲料，其特征在于：所述感兴趣的水生动物品种包含鱼类。
6.如权利要求1至4中任一项所述的方法或饲料，其特征在于：所述感兴趣的水生动物品种包含在一预定的发育阶段中的多个感兴趣的鱼类的个体。
7.如权利要求1至4中任一项所述的方法或饲料，其特征在于：所述饲料进一步包含多个营养成分，所述多个营养成分选自于由脂肪、碳水化合物、维生素及矿物质所组成的群组。
8.如权利要求7所述的方法或饲料，其特征在于：所述饲料包含一成分，所述一成分选自于由鱼粉、鱼油、家禽肉、肉粉、血粉、骨粉、油菜籽、玉米蛋白、亚麻籽、家禽油、小麦、大豆、羽扇豆粉、豌豆蛋白、向日葵粉、蚕豆粉、芥花籽油及水生附生植物所组成的群组。
9.如权利要求1至4中任一项所述的方法或饲料，其特征在于：所述饲料进一步包含一附加添加剂，所述附加添加剂选自于由引诱剂、抗氧化剂、免疫刺激剂、酵素、色素、有机酸、益生元、益生菌、进食兴奋剂、抗生素、激素及粘合剂所组成的群组。
10.如权利要求1至4中任一项所述的方法或饲料，其特征在于：所述丁酸的盐类是选自于由丁酸钠、丁酸乙酯、丁酸甲酯、丁酸戊酯及其组合所组成的群组。
11.如权利要求1至4中任一项所述的方法或饲料，其特征在于：所述蛋白质包含一植物蛋白。
12.如权利要求1至4中任一项所述的方法或饲料，其特征在于：所述蛋白质包含一非植物蛋白。
13.如权利要求1至4中任一项所述的方法或饲料，其特征在于：所述蛋白质包含一鱼蛋白、一家禽蛋白或其组合。
14.如权利要求1至4中任一项所述的方法或饲料，其特征在于：所述饲料是配制成颗粒。
15.如权利要求14所述的方法或饲料，其特征在于：所述饲料是团聚、造粒、压制或挤出的型态。
16.如权利要求1至4中任一项所述的方法或饲料，其特征在于：所述感兴趣的水生动物品种是海鱼。
17.如权利要求1至4中任一项所述的方法或饲料，其特征在于：所述感兴趣的水生动物品种是肉食性鱼。
18.如权利要求1至4中任一项所述的方法或饲料，其特征在于：所述感兴趣的水生动物品种是选自由下列的鱼类所组成的群组：西伯利亚鲟、细鳞肥脂鲤、大口牛胭脂鱼、锯盖鱼、爪哇拟鲃、小体鲟、黑真鮰、披肩象齿脂鲤、红目鲈、拟鲤、闪光鲟、河内鲶鱼、网纹鲮脂鲤、尼罗尖吻鲈、丁鱥、高首鲟、黑鳍金鲿、莫氏石脂鲤、墨瑞鳕、大鳞泥鳅、鳇鱼、欧鲶、大盖巨脂鲤、金鲈、攀鲈、巨骨舌鱼、鲶属、短盖巨脂鲤、金头鲷、乌鲤、尼罗异耳骨舌鱼、苏氏鲶、条纹鲈、美国红鱼、瘤棘鲆、鳗鱼、鳗胡鲶、舌齿鲈、绿宝丽鲷、湖鲑、白鳗、蟾胡鲶、赤点石斑鱼、斑尾副尼丽鱼、大西洋鳕、美洲鳗、胡子鲶、宝石斑鱼、马那瓜丽体鱼、牙银汉鱼、牙银汉鱼、虱目鱼、尖齿胡鲶、鲈滑石斑鱼、尾斑体丽鲷、鳝鱼、欧鳊、大头胡鲇、斑鳃棘鲈、苏拉塔小腹丽鲷、糙鳞毛足鲈、赤梢鱼、双背鳍异鳃鲶、银锯眶鯻、黄边口孵非鲫、小盾鳢、卡特拉、双背鳍异鳃鲶、大口黑鲈、奥利口孵丽鲷、牙鲆、鲫鱼、萨波雷氏鲶、河鲈、大臂口孵丽鲷、点篮子鱼、鲫鱼、滨岸护胸鲶、暗斑梭鲈、南洋鲫、金带蓝子鱼、鲠鱼、白斑狗鱼、扁鲹、尼罗丽鲷、蓝鳍金枪鱼、印度鲮、香鱼、红甘鲹、金斑口孵丽鲷、鲔、草鱼、香鱼、青甘鲹、尾鳞口孵非鲫、接吻鱼、鲤鱼、突唇白鲑、黄腊鲳、霍氏帚齿丽鲷、翠鳢、白鲢、淡红鲑、北美鲳鲹、几内亚非鲫、欧洲鳎、大头鲢、大麻哈鱼、谷氏鲳鲹、伦氏非鲫、梭状鲻、蓝野鲮、银大麻哈鱼、真鲹、吉利外鲫、侧叶脂塘鳢、露斯塔野鲮、樱花钩吻鲑、银纹笛鲷、金鮻鲻、尖塘鳢、何氏细须魮、虹鳟、敏尾笛鲷、大鳞鲻、斑点臭都鱼、团头鲂、虹鳟、黑棘鲷、金点鮻、丝足鲈、青鱼、大鳞大麻哈鱼、异带重牙鲷、薄唇鮻、线鳢、金体美鳊、大西洋鲑、日本真鲷、跳鮻鲻、哈氏纹唇鱼、鳟、嘉腊鱼、尖头鮻鲻、长春鳊、红点鲑、鲷、鲻鱼、银无须魮、溪鲑、黄锡鲷及库里鲻。
19.如权利要求1至4中任一项所述的方法或饲料，其特征在于：所述感兴趣的水生动物品种是至少处于一稚鱼发育的阶段。
20.如权利要求5所述的方法或饲料，其特征在于：在所述水产养殖中大部分的所述鱼类为至少3克。
21.如权利要求1至4中任一项所述的方法或饲料，其特征在于：所述饲料最少包含5％的总脂质及/或5至50％的碳水化合物。
22.如权利要求1至3中任一项所述的方法或饲料，其特征在于：所述提供是每24小时进行不超过一次。
23.如权利要求1至3中任一项所述的方法或饲料，其特征在于：所述提供是每个星期进行一次。
24.如权利要求1至3中任一项所述的方法或饲料，其特征在于：所述提供是每两个星期进行一次。
25.如权利要求1至3中任一项所述的方法或饲料，其特征在于：所述提供是每三个星期进行一次。
26.如权利要求1至3中任一项所述的方法或饲料，其特征在于：所述提供是每一个至三个星期进行一次。
27.如权利要求1至3中任一项所述的方法或饲料，其特征在于：所述提供是每两个至三个星期进行一次。
28.如权利要求1至4中任一项所述的方法或饲料，其特征在于：所述感兴趣的水生动物品种是盐水水生动物。
29.如权利要求1至4中任一项所述的方法或饲料，其特征在于：所述感兴趣的水生动物品种是半盐水水生动物。
30.如权利要求1至4中任一项所述的方法或饲料，其特征在于：所述感兴趣的水生动物品种是淡水水生动物。
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