CN112111513A - 基于外泌体平台的新冠病毒疫苗制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及基因工程和生物医学领域，具体为基于外泌体平台的新冠病毒疫苗制备方法，包括以下步骤：步骤一：构建Spike‑lamp2b重组质粒；步骤二：提取细胞上清中的分泌的外泌体；与现有技术相比，本发明的有益效果是：实现了外泌体平台的疫苗药物的治疗潜力，高效、组织特异性的递送疫苗药物用于新冠病毒的预防。

Description

基于外泌体平台的新冠病毒疫苗制备方法
技术领域
本发明涉及基因工程和生物医学领域，具体为基于外泌体平台的新冠病毒疫苗制备方法。
背景技术
新型冠状病毒(COVID-19)全球蔓延，在疫情爆发当下，最急切的是找到检验试剂和有效治疗药物，但长期来说，疫苗才是战胜新兴传染病的终级武器。尤其新冠肺炎(COVID-19)可能流感化长期存在，疫苗在未来防疫工作上愈为重要。目前有140多种SARS-CoV-2疫苗正在加速研发中，有效和安全的疫苗将是对抗COVID-19的重大突破。
2019新型冠状病毒(SARS-CoV-2)属于尼多病毒目冠状病毒科，是一类呈球形或不规则形、表面有突起形似皇冠的病毒，并有囊膜病毒基因为连续线性单链RNA病毒。其中棘突糖蛋白(Spike，S蛋白)是冠状病毒最重要的表面跨膜糖蛋白，有着大量位点的糖基化修饰，S蛋白展示于病毒表面从而形成特殊的花冠状结构。S蛋白含有两个亚基S1和S2。S1亚基含有与宿主细胞受体血管紧张素转化酶2结合的受体结合结构域，S2亚基介导病毒和宿主细胞的膜融合功能,从而将病毒体内的遗传物质注入细胞，达到侵染细胞的目的。在感染SARS-CoV期间，S蛋白在诱导中和抗体和T细胞反应以及保护性免疫中起关键作用，是宿主中和抗体的重要作用位点以及疫苗设计的关键靶点。
病毒样颗粒(VLP)是一种多蛋白结构，可模仿真实天然病毒的组织和构象，但缺乏病毒基因组，从而可能产生更安全，更便宜的候选疫苗。虽然VLP疫苗在过去一直是候选疫苗，最新进展已证明此疫苗平台的有效性。目前，一些基于VLP的预防性疫苗已在世界范围内商业化：葛兰素史克的Engerix(乙型肝炎病毒)和Cervarix(人乳头瘤病毒)，以及默克公司的Recombivax HB(乙型肝炎病毒)和Gardasil(人乳头瘤病毒)。其他基于VLP的候选疫苗正在临床试验中或正在接受临床前评估，例如流感病毒，细小病毒，诺沃克和各种嵌合VLP。尽管许多其他药物在临床前测试中取得了成功，但它们仍然仅限于小型基础研究。VLP技术在针对流行和紧急疾病的新一代疫苗中的重要作用。
已知SARS-CoV-2直径在75-160nm，而外泌体在大小为40-160nm。从理论上讲外泌体可以模拟SARS-CoV-2病毒颗粒的尺寸，外泌体可以作为类似病毒样颗粒，展示SARS-CoV-2的S蛋白到外泌体膜表面。
发明内容
本发明的目的在于提供基于外泌体平台的新冠病毒疫苗制备方法，以达到背景技术中提到的效果。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：基于外泌体平台的新冠病毒疫苗制备方法，包括以下步骤：
步骤一：构建Spike-lamp2b重组质粒；
步骤二：提取细胞上清中的分泌的外泌体；
优选的，所述步骤一具体包括以下操作过程：
S1：设计lamp2b的引物，以小鼠cDNA为模板，PCR扩增得到lamp2b片段，PCR纯化；
S2：将步骤S1中PCR纯化回收后的lamp2b基因克隆到表达载体pcDNA4.5载体上，构建成pcDNA-lamp2b质粒；
S3：再将的SEQ ID NO.2所述的核酸DNA序列插入到步骤S2所构建的质粒pcDNA-lamp2b上，得到基因工程改造的lamp2b重组质粒，并命名为Spike-lamp2b；质粒表达的蛋白序列为SEQ ID NO.3；
S4：将步骤S3的基因改造的Spike-lamp2b重组质粒转染小鼠树枝状细胞，转染48小时后，加入G418抗生素连续筛选三周左右获得稳定表达Spike-lamp2b细胞系；
S5：在无外泌体培养基和条件下培养Spike-lamp2b细胞，收集培养基，离心去除死细胞及细胞碎片，通过高速离心法(差速离心)分离到大小相近的外泌体的囊泡颗粒。
优选的，所述步骤二包括以下操作过程：
A：10000g，4度离心30分钟；
B：0.22微米膜过滤后，100000g，4度，离心70分钟，上清液弃去，加入30毫升PBS，混匀，120000g，4度，70分钟；
C：弃上清，用500ulPBS重悬获得外泌体疫苗。
优选的，利用携带新冠病毒Spike蛋白(1-1195)融合表达于外泌体膜蛋白(lamp2b)上作为基因工程化外泌体。
优选的，所述步骤S4中，在树突状细胞(DC细胞)中转染此表达质粒Spike-lamp2b,筛选稳定的表达细胞株。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：实现了外泌体平台的疫苗药物的治疗潜力，高效、组织特异性的递送疫苗药物用于新冠病毒的预防。
附图说明
图1为本发明的Spike-lamp2b质粒图谱。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
请参阅图1，本发明提供一种技术方案：基于外泌体平台的新冠病毒疫苗制备方法，包括以下步骤：
步骤一：构建Spike-lamp2b重组质粒；
步骤二：提取细胞上清中的分泌的外泌体；
优选的，所述步骤一具体包括以下操作过程：
S1：设计lamp2b的引物，以小鼠cDNA为模板，PCR扩增得到lamp2b片段，PCR纯化；
S2：将步骤S1中PCR纯化回收后的lamp2b基因克隆到表达载体pcDNA4.5载体上，构建成pcDNA-lamp2b质粒；利用携带新冠病毒Spike蛋白(1-1195)融合表达于外泌体膜蛋白(lamp2b)上作为基因工程化外泌体；
S3：再将的SEQ ID NO.2所述的核酸DNA序列插入到步骤S2所构建的质粒pcDNA-lamp2b上，得到基因工程改造的lamp2b重组质粒，并命名为Spike-lamp2b；质粒表达的蛋白序列为SEQ ID NO.3；
S4：将步骤S3的基因改造的Spike-lamp2b重组质粒转染小鼠树枝状细胞，转染48小时后，加入G418抗生素连续筛选三周左右获得稳定表达Spike-lamp2b细胞系；在树突状细胞(DC细胞)中转染此表达质粒Spike-lamp2b,筛选稳定的表达细胞株。
S5：在无外泌体培养基和条件下培养Spike-lamp2b细胞，收集培养基，离心去除死细胞及细胞碎片，通过高速离心法(差速离心)分离到大小相近的外泌体的囊泡颗粒。
步骤二包括以下操作过程：
A：10000g，4度离心30分钟；
B：0.22微米膜过滤后，100000g，4度，离心70分钟，上清液弃去，加入30毫升PBS，混匀，120000g，4度，70分钟；
C：弃上清，用500ulPBS重悬获得外泌体疫苗。
本发明提供一种基于外泌体的疫苗基因工程改造的外泌体表达载体，所述外泌体表达质粒包括新冠病毒的Spike蛋白及外泌体的lamp2b膜蛋白。
本申请通过基因工程手段融和表达外泌体的表面膜蛋白lamp2b与Spike蛋白，从而达到外泌体表面展示新冠病毒的抗体-Spike蛋白的。
根据本发明，所述Spike蛋白氨基酸序列是利用膜外区域的序列如SEQ ID NO.1所示，
SEQ ID NO.1
Spike氨基酸序列(1-1195)
MFVFLVLLPLVSSQCVNLTTRTQLPPAYTNSFTRGVYYPDKVFRSSVLHSTQDLFLPFFSNVTWFHAIHVSGTNGTKRFDNPVLPFNDGVYFASTEKSNIIRGWIFGTTLDSKTQSLLIVNNATNVVIKVCEFQFCNDPFLGVYYHKNNKSWMESEFRVYSSANNCTFEYVSQPFLMDLEGKQGNFKNLREFVFKNIDGYFKIYSKHTPINLVRDLPQGFSALEPLVDLPIGINITRFQTLLALHRSYLTPGDSSSGWTAGAAAYYVGYLQPRTFLLKYNENGTITDAVDCALDPLSETKCTLKSFTVEKGIYQTSNFRVQPTESIVRFPNITNLCPFGEVFNATRFASVYAWNRKRISNCVADYSVLYNSASFSTFKCYGVSPTKLNDLCFTNVYADSFVIRGDEVRQIAPGQTGKIADYNYKLPDDFTGCVIAWNSNNLDSKVGGNYNYLYRLFRKSNLKPFERDISTEIYQAGSTPCNGVEGFNCYFPLQSYGFQPTNGVGYQPYRVVVLSFELLHAPATVCGPKKSTNLVKNKCVNFNFNGLTGTGVLTESNKKFLPFQQFGRDIADTTDAVRDPQTLEILDITPCSFGGVSVITPGTNTSNQVAVLYQDVNCTEVPVAIHADQLTPTWRVYSTGSNVFQTRAGCLIGAEHVNNSYECDIPIGAGICASYQTQTNSPRRARSVASQSIIAYTMSLGAENSVAYSNNSIAIPTNFTISVTTEILPVSMTKTSVDCTMYICGDSTECSNLLLQYGSFCTQLNRALTGIAVEQDKNTQEVFAQVKQIYKTPPIKDFGGFNFSQILPDPSKPSKRSFIEDLLFNKVTLADAGFIKQYGDCLGDIAARDLICAQKFNGLTVLPPLLTDEMIAQYTSALLAGTITSGWTFGAGAALQIPFAMQMAYRFNGIGVTQNVLYENQKLIANQFNSAIGKIQDSLSSTASALGKLQDVVNQNAQALNTLVKQLSSNFGAISSVLNDILSRLDKVEAEVQIDRLITGRLQSLQTYVTQQLIRAAEIRASANLAATKMSECVLGQSKRVDFCGKGYHLMSFPQSAPHGVVFLHVTYVPAQEKNFTTAPAICHDGKAHFPREGVFVSNGTHWFVTQRNFYEPQIITTDNTFVSGNCDVVIGIVNNTVYDPLQPELDSFKEELDKYFKNHTSPDVDLGDISGINASVVNIQKEIDRLNEVAKNLNE。
根据本发明，所述Spike蛋白核酸序列如SEQ ID NO.2所示：
GGCGGCAGCGGCGGCATGTTTGTTTTTCTTGTTTTATTGCCACTAGTCTCTAGTCAGTGTGTTAATCTTACAACCAGAACTCAATTACCCCCTGCATACACTAATTCTTTCACACGTGGTGTTTATTACCCTGACAAAGTTTTCAGATCCTCAGTTTTACATTCAACTCAGGACTTGTTCTTACCTTTCTTTTCCAATGTTACTTGGTTCCATGCTATACATGTCTCTGGGACCAATGGTACTAAGAGGTTTGATAACCCTGTCCTACCATTTAATGATGGTGTTTATTTTGCTTCCACTGAGAAGTCTAACATAATAAGAGGCTGGATTTTTGGTACTACTTTAGATTCGAAGACCCAGTCCCTACTTATTGTTAATAACGCTACTAATGTTGTTATTAAAGTCTGTGAATTTCAATTTTGTAATGATCCATTTTTGGGTGTTTATTACCACAAAAACAACAAAAGTTGGATGGAAAGTGAGTTCAGAGTTTATTCTAGTGCGAATAATTGCACTTTTGAATATGTCTCTCAGCCTTTTCTTATGGACCTTGAAGGAAAACAGGGTAATTTCAAAAATCTTAGGGAATTTGTGTTTAAGAATATTGATGGTTATTTTAAAATATATTCTAAGCACACGCCTATTAATTTAGTGCGTGATCTCCCTCAGGGTTTTTCGGCTTTAGAACCATTGGTAGATTTGCCAATAGGTATTAACATCACTAGGTTTCAAACTTTACTTGCTTTACATAGAAGTTATTTGACTCCTGGTGATTCTTCTTCAGGTTGGACAGCTGGTGCTGCAGCTTATTATGTGGGTTATCTTCAACCTAGGACTTTTCTATTAAAATATAATGAAAATGGAACCATTACAGATGCTGTAGACTGTGCACTTGACCCTCTCTCAGAAACAAAGTGTACGTTGAAATCCTTCACTGTAGAAAAAGGAATCTATCAAACTTCTAACTTTAGAGTCCAACCAACAGAATCTATTGTTAGATTTCCTAATATTACAAACTTGTGCCCTTTTGGTGAAGTTTTTAACGCCACCAGATTTGCATCTGTTTATGCTTGGAACAGGAAGAGAATCAGCAACTGTGTTGCTGATTATTCTGTCCTATATAATTCCGCATCATTTTCCACTTTTAAGTGTTATGGAGTGTCTCCTACTAAATTAAATGATCTCTGCTTTACTAATGTCTATGCAGATTCATTTGTAATTAGAGGTGATGAAGTCAGACAAATCGCTCCAGGGCAAACTGGAAAGATTGCTGATTATAATTATAAATTACCAGATGATTTTACAGGCTGCGTTATAGCTTGGAATTCTAACAATCTTGATTCTAAGGTTGGTGGTAATTATAATTACCTGTATAGATTGTTTAGGAAGTCTAATCTCAAACCTTTTGAGAGAGATATTTCAACTGAAATCTATCAGGCCGGTAGCACACCTTGTAATGGTGTTGAAGGTTTTAATTGTTACTTTCCTTTACAATCATATGGTTTCCAACCCACTAATGGTGTTGGTTACCAACCATACAGAGTAGTAGTACTTTCTTTTGAACTTCTACATGCACCAGCAACTGTTTGTGGACCTAAAAAGTCTACTAATTTGGTTAAAAACAAATGTGTCAATTTCAACTTCAATGGTTTAACAGGCACAGGTGTTCTTACTGAGTCTAACAAAAAGTTTCTGCCTTTCCAACAATTTGGCAGAGACATTGCTGACACTACTGATGCTGTCCGTGATCCACAGACACTTGAGATTCTTGACATTACACCATGTTCTTTTGGTGGTGTCAGTGTTATAACACCAGGAACAAATACTTCTAACCAGGTTGCTGTTCTTTATCAGGATGTTAACTGCACAGAAGTCCCTGTTGCTATTCATGCAGATCAACTTACTCCTACTTGGCGTGTTTATTCTACAGGTTCTAATGTTTTTCAAACACGTGCAGGCTGTTTAATAGGGGCTGAACATGTCAACAACTCATATGAGTGTGACATACCCATTGGTGCAGGTATATGCGCTAGTTATCAGACTCAGACTAATTCTCCTCGGCGGGCACGTAGTGTAGCTAGTCAATCCATCATTGCCTACACTATGTCACTTGGTGCAGAAAATTCAGTTGCTTACTCTAATAACTCTATTGCCATACCCACAAATTTTACTATTAGTGTTACCACAGAAATTCTACCAGTGTCTATGACCAAGACATCAGTAGATTGTACAATGTACATTTGTGGTGATTCAACTGAATGCAGCAATCTTTTGTTGCAATATGGCAGTTTTTGTACACAATTAAACCGTGCTTTAACTGGAATAGCTGTTGAACAAGACAAAAACACCCAAGAAGTTTTTGCACAAGTCAAACAAATTTACAAAACACCACCAATTAAAGATTTTGGTGGTTTTAATTTTTCACAAATATTACCAGATCCATCAAAACCAAGCAAGAGGTCATTTATTGAAGATCTACTTTTCAACAAAGTGACACTTGCAGATGCTGGCTTCATCAAACAATATGGTGATTGCCTTGGTGATATTGCTGCTAGAGACCTCATTTGTGCACAAAAGTTTAACGGCCTTACTGTTTTGCCACCTTTGCTCACAGATGAAATGATTGCTCAATACACTTCTGCACTGTTAGCGGGTACAATCACTTCTGGTTGGACCTTTGGTGCAGGTGCTGCATTACAAATACCATTTGCTATGCAAATGGCTTATAGGTTTAATGGTATTGGAGTTACACAGAATGTTCTCTATGAGAACCAAAAATTGATTGCCAACCAATTTAATAGTGCTATTGGCAAAATTCAAGACTCACTTTCTTCCACAGCAAGTGCACTTGGAAAACTTCAAGATGTGGTCAACCAAAATGCACAAGCTTTAAACACGCTTGTTAAACAACTTAGCTCCAATTTTGGTGCAATTTCAAGTGTTTTAAATGATATCCTTTCACGTCTTGACAAAGTTGAGGCTGAAGTGCAAATTGATAGGTTGATCACAGGCAGACTTCAAAGTTTGCAGACATATGTGACTCAACAATTAATTAGAGCTGCAGAAATCAGAGCTTCTGCTAATCTTGCTGCTACTAAAATGTCAGAGTGTGTACTTGGACAATCAAAAAGAGTTGATTTTTGTGGAAAGGGCTATCATCTTATGTCCTTCCCTCAGTCAGCACCTCATGGTGTAGTCTTCTTGCATGTGACTTATGTCCCTGCACAAGAAAAGAACTTCACAACTGCTCCTGCCATTTGTCATGATGGAAAAGCACACTTTCCTCGTGAAGGTGTCTTTGTTTCAAATGGCACACACTGGTTTGTAACACAAAGGAATTTTTATGAACCACAAATCATTACTACAGACAACACATTTGTGTCTGGTAACTGTGATGTTGTAATAGGAATTGTCAACAACACAGTTTATGATCCTTTGCAACCTGAATTAGACTCATTCAAGGAGGAGTTAGATAAATATTTTAAGAATCATACATCACCAGATGTTGATTTAGGTGACATCTCTGGCATTAATGCTTCAGTTGTAAACATTCAAAAAGAAATTGACCGCCTCAATGAGGTTGCCAAGAATTTAAATGAAGGCGGCAGCGGCGGC。
SEQ ID NO.3
Spike-lamp2b融合蛋白质的表达序列：
MFVFLVLLPLVSSQCVNLTTRTQLPPAYTNSFTRGVYYPDKVFRSSVLHSTQDLFLPFFSNVTWFHAIHVSGTNGTKRFDNPVLPFNDGVYFASTEKSNIIRGWIFGTTLDSKTQSLLIVNNATNVVIKVCEFQFCNDPFLGVYYHKNNKSWMESEFRVYSSANNCTFEYVSQPFLMDLEGKQGNFKNLREFVFKNIDGYFKIYSKHTPINLVRDLPQGFSALEPLVDLPIGINITRFQTLLALHRSYLTPGDSSSGWTAGAAAYYVGYLQPRTFLLKYNENGTITDAVDCALDPLSETKCTLKSFTVEKGIYQTSNFRVQPTESIVRFPNITNLCPFGEVFNATRFASVYAWNRKRISNCVADYSVLYNSASFSTFKCYGVSPTKLNDLCFTNVYADSFVIRGDEVRQIAPGQTGKIADYNYKLPDDFTGCVIAWNSNNLDSKVGGNYNYLYRLFRKSNLKPFERDISTEIYQAGSTPCNGVEGFNCYFPLQSYGFQPTNGVGYQPYRVVVLSFELLHAPATVCGPKKSTNLVKNKCVNFNFNGLTGTGVLTESNKKFLPFQQFGRDIADTTDAVRDPQTLEILDITPCSFGGVSVITPGTNTSNQVAVLYQDVNCTEVPVAIHADQLTPTWRVYSTGSNVFQTRAGCLIGAEHVNNSYECDIPIGAGICASYQTQTNSPRRARSVASQSIIAYTMSLGAENSVAYSNNSIAIPTNFTISVTTEILPVSMTKTSVDCTMYICGDSTECSNLLLQYGSFCTQLNRALTGIAVEQDKNTQEVFAQVKQIYKTPPIKDFGGFNFSQILPDPSKPSKRSFIEDLLFNKVTLADAGFIKQYGDCLGDIAARDLICAQKFNGLTVLPPLLTDEMIAQYTSALLAGTITSGWTFGAGAALQIPFAMQMAYRFNGIGVTQNVLYENQKLIANQFNSAIGKIQDSLSSTASALGKLQDVVNQNAQALNTLVKQLSSNFGAISSVLNDILSRLDKVEAEVQIDRLITGRLQSLQTYVTQQLIRAAEIRASANLAATKMSECVLGQSKRVDFCGKGYHLMSFPQSAPHGVVFLHVTYVPAQEKNFTTAPAICHDGKAHFPREGVFVSNGTHWFVTQRNFYEPQI ITTDNTFVSGNCDVVIGIVNNTVYDPLQPELDSFKEELDKYFKNHTSPDVDLGDISGINASVVNIQKEIDRLNEVAKNLNEGGSGGSGGAEWEMNFTITYETTNQTNKTITIAVPDKATHDGSSCGDDRNSAKIMIQFGFAVSWAVNFTKEASHYSIHDIVLSYNTSDSTVFPGAVAKGVHTVKNPENFKVPLDVIFKCNSVLTYNLTPVVQKYWGIHLQAFVQNGTVSKNEQVCEEDQTPTTVAPIIHTTAPSTTTTLTPTSTPTPTPTPTPTVGNYSIRNGNTTCLLATMGLQLNITEEKVPFIFNINPATTNFTGSCQPQSAQLRLNNSQIKYLDFIFAVKNEKRFYLKEVNVYMYLANGSAFNISNKNLSFWDAPLGSSYMCNKEQVLSVSRAFQINTFNLKVQPFNVTKGQYSTAQECSLDDDTILIPIIVGAGLSGLIIVIVIAYLIGRRKTYAGYQTL。
本发明专利实现了外泌体平台的疫苗药物的治疗潜力，高效、组织特异性的递送疫苗药物用于新冠病毒的预防。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。

Claims (5)

1.基于外泌体平台的新冠病毒疫苗制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤一：构建Spike-lamp2b重组质粒；
步骤二：提取细胞上清中的分泌的外泌体；
2.根据权利要求1所述的基于外泌体平台的新冠病毒疫苗制备方法，其特征在于：所述步骤一具体包括以下操作过程：
S1：设计lamp2b的引物，以小鼠cDNA为模板，PCR扩增得到lamp2b片段，PCR纯化；
S2：将步骤S1中PCR纯化回收后的lamp2b基因克隆到表达载体pcDNA4.5载体上，构建成pcDNA-lamp2b质粒；
S3：再将的SEQ ID NO.2所述的核酸DNA序列插入到步骤S2所构建的质粒pcDNA-lamp2b上，得到基因工程改造的lamp2b重组质粒，并命名为Spike-lamp2b；质粒表达的蛋白序列为SEQ ID NO.3；
S4：将步骤S3的基因改造的Spike-lamp2b重组质粒转染小鼠树枝状细胞，转染48小时后，加入G418抗生素连续筛选三周左右获得稳定表达Spike-lamp2b细胞系；
S5：在无外泌体培养基和条件下培养Spike-lamp2b细胞，收集培养基，离心去除死细胞及细胞碎片，通过高速离心法(差速离心)分离到大小相近的外泌体的囊泡颗粒。
3.根据权利要求1所述的基于外泌体平台的新冠病毒疫苗制备方法，其特征在于：所述步骤二包括以下操作过程：
A：10000g，4度离心30分钟；
B：0.22微米膜过滤后，100000g，4度，离心70分钟，上清液弃去，加入30毫升PBS，混匀，120000g，4度，70分钟；
C：弃上清，用500ulPBS重悬获得外泌体疫苗。
4.根据权利要求2所述的基于外泌体平台的新冠病毒疫苗制备方法，其特征在于：利用携带新冠病毒Spike蛋白(1-1195)融合表达于外泌体膜蛋白(lamp2b)上作为基因工程化外泌体。
5.根据权利要求1所述的基于外泌体平台的新冠病毒疫苗制备方法，其特征在于：所述步骤S4中，在树突状细胞(DC细胞)中转染此表达质粒Spike-lamp2b,筛选稳定的表达细胞株。
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