CN112094266B - 一种吡咯并吡啶酮类化合物、其制备方法、其组合物和用途 - Google Patents

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Abstract

一种吡咯并吡啶酮类化合物或其药学上可接受的盐，以及它们的制备方法和用途。所述吡咯并吡啶酮类化合物具有I所示的结构。该化合物具有BRD4和HDAC双靶抑制活性的特点和/或具有靶向泛素化降解BRD4蛋白功能的特点，可应用于与该靶点相关的抗肿瘤等相关疾病。
Figure DDA0002543200300000011

Description

一种吡咯并吡啶酮类化合物、其制备方法、其组合物和用途
技术领域
本发明涉及一种吡咯并吡啶酮类化合物或其药学上可接受的盐，其制备方法、及其组合物用于治疗与该靶点相关的肿瘤疾病等的药物用途。
背景技术
组蛋白赖氨酸残基的乙酰化被认为是转录活性基因的标志(参见非专利文献1)。一方面，赖氨酸乙酰化可以中和其正电荷，导致组蛋白对带负电荷的DNA的亲和力降低或使核小体的结构变得松散，最终形成一个开放的、可进入的染色质结构，能够招募转录因子。另一方面，乙酰化赖氨酸为蛋白识别模块提供了结合位点。组蛋白赖氨酸残基的乙酰化和去乙酰化主要由组蛋白乙酰化酶(histone acetylase，HATs)和组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylases,HDACs)控制。而组蛋白上的乙酰化能够特异的被溴结构域蛋白(bromodomains，BRDs)识别，招募染色质调节相关蛋白、转录因子、染色质重塑因子等，从而在调控基因转录和染色质重塑中发挥重要作用(参见非专利文献2)。
溴结构域蛋白(bromodomains，BRDs)按照结构和序列相似性可以被分为8个家族。其中，溴结构域和超末端结构蛋白(bromodomain and extra-terminal Domain,BET)家族属于BRD家族中的第二类，包括BRD2、BRD3、BRD4以及BRDT。BET蛋白能够识别乙酰化的组蛋白，招募转录因子和转录延长因子等，调控细胞的转录和细胞周期，在多种疾病尤其是肿瘤、炎症中扮演着重要的角色(参见非专利文献3)。BRD4作为该家族中主要的成员，与转录调控和肿瘤的发生等密切相关(参见非专利文献4)。许多调节癌细胞增殖、抗凋亡和侵袭性的癌基因都受BRD4调控，其中c-Myc作为第一个被报道的在血液瘤和实体瘤中受BRD4调控的致癌基因，为BET蛋白抑制剂的开发提供了理论依据(参见非专利文献5、6)。还有一些其他的致癌基因例如FOSL1(FRA-1)、BCL-2、RUNX2、c-KIT等受BRD4调控(参见非专利文献7-10)。此外，BRD4已被证明可以调控与修复受损DNA相关的分子机制，并与癌症中异常的端粒调控有关，这突出了这种蛋白在癌症发生过程中的功能多样性作用(参见非专利文献11、12)。
目前，已经发展出了有多种结构类型的BET抑制剂，例如I-BET 762,JQ1,I-BET151,OTX-015,TEN-010,ZEN003694,GS-5829,CPI-0610,ABBV-075,ABBV-744等，被广泛应用于血液瘤、实体瘤和心血管疾病等的研究。该类抑制剂的早期临床研究虽然能够有取得短暂的治疗效果，但是也存在一些毒副作用，例如严重的血小板减少、疲劳、恶心、呕吐和腹泻等胃肠道副作用等(参见非专利文献13)。
HDACs的作用使组蛋白去乙酰化，令组蛋白和DNA的结合更为紧密，从而抑制基因的表达。目前研究表明，HDAC能够影响细胞周期、细胞凋亡、DNA损伤相应、癌细胞转移、血管生成、自噬和其他细胞进程，在肿瘤进程中扮演至关重要的角色(参见非专利文献14)。HDAC的抑制会引起组蛋白总体乙酰化水平的改变，尤其是缺乏乙酰化或者低密度乙酰化区域(参见非专利文献15-17)。而整个基因组中乙酰化的重新分布能够影响BET蛋白的募集，使其从调控区域转移到新的乙酰化位点，使BET蛋白的促进转录功能作用降低。因此，HDAC和BET蛋白通过基因组乙酰化谱可能存在着一些直接或者间接的相互作用(参见非专利文献18)。例如癌细胞生长中心超级增强子依赖于BRD4蛋白，因此BET抑制剂能够优先抑制癌细胞依赖的癌基因转录(参见非专利文献4)；而HDAC抑制剂能使组蛋白和其他转录调节因子的乙酰化水平升高，这能够诱导RNA聚合酶Ⅱ的延长暂停，从而优先抑制高表达的致癌扩增子(参见非专利文献16)。此外BRD4蛋白具有组蛋白分子伴侣的功能，能够协助RNA聚合酶Ⅱ通过乙酰化的核小体，而HDAC通过去除组蛋白或者其他蛋白上的乙酰化，改变BRD4在组蛋白在核小体和染色质相关蛋白复合物的结合(参见非专利文献19)。
许多临床前研究表明，HDAC和BRD4抑制剂能够在多种肿瘤细胞中表现出协同作用，而且这种药物联用能够在较低的剂量下达到较高的细胞毒性，从而可能避免叠加毒性的问题。例如在c-Myc诱导的淋巴瘤小鼠中，BET抑制剂能够部分敏化由HDAC沉默基因诱导的c-Myc过表达淋巴瘤细胞，而BET抑制剂RVX2135和HDAC抑制泛剂SAHA联用对淋巴瘤移植小鼠的无进展生存期具有协同作用(参见非专利文献20)。在成神经细胞瘤和极性骨髓性白血病细胞系中，帕比司他和JQ1联合治疗相比单独用药能够更有效的诱导细胞凋亡和生长抑制，而治疗对正常细胞没有显著影响，且能够阻止肿瘤生长，提高移植瘤小鼠的存活率(参见非专利文献21、22)。同样，JQ1与SAHA联用在胰腺导管癌(PDAC)的体内外模型中都能够产生有效且持续的抗肿瘤效果(参见非专利文献23)；在尿路上皮癌细胞系中，JQ1和罗米地辛联用显示出协同作用(参见非专利文献24)；帕比司他和I-BET151联合使用可强烈诱导黑色素瘤细胞系和对BRAFi耐药的黑色素瘤患者的细胞凋亡和细胞周期阻滞(参见非专利文献25)；panobinostat和OTX-015能够抑制胶质母细胞瘤细胞的增殖，增强caspase介导的凋亡，尤其是抑制磷酸化和糖酵解，导致细胞出现能量危机和严重的应激反应(参见非专利文献26)。
这些研究证明了HDAC和BRD4抑制剂联合治疗的有效性，而将HDAC和BRD4抑制剂活性基团结合到同一个分子中，可开发出一类新型更为有效的双靶小分子药物，同时能够表观遗传机制研究提供新型的工具分子，目前尚没有吡咯并吡啶酮类HDAC和BRD4双靶抑制剂小分子的报道。
近年来还发展出一种利用蛋白水解靶向嵌合分(Proteolysis TargetingChimeras,PROTACs)技术设计合成的双功能小分子，能够将BRD4蛋白和细胞内的E3拉近，从而导致目标蛋白的降解。和传统的抑制剂相比，该类双功能小分子能够更加有效的抑制肿瘤细胞的生长，促进其凋亡(参见非专利文献27)。发展能够靶向泛素化降解BRD4蛋白的双功能小分子在研究BRD4蛋白的功能以及新型抗肿瘤药物的研发中具有重要意义(参见非专利文献28)，目前上没有基于吡咯并吡啶酮类结构母核的BRD4泛素化降解小分子的报道。
现有技术文献
非专利文献1：Hewings DS,Rooney TPC,Jennings LE,et al.Progress in theDevelopment and Application of Small Molecule Inhibitors of Bromodomain–Acetyl-lysine Interactions.Journal of Medicinal Chemistry 2012；55:9393-413.
非专利文献2：Arrowsmith CH,Bountra C,Fish PV,Lee K,SchapiraM.Epigenetic protein families:a new frontier for drug discovery.Nat Rev DrugDiscov 2012；11:384-400.
非专利文献3：Liu Z,Wang P,Chen H,et al.Drug Discovery TargetingBromodomain-Containing Protein 4.J Med Chem 2017；60:4533-58.
非专利文献4：Donati B,Lorenzini E,Ciarrocchi A.BRD4 and Cancer:goingbeyond transcriptional regulation.Mol Cancer 2018；17:164.
非专利文献5：Delmore JE,Issa GC,Lemieux ME,et al.BET bromodomaininhibition as a therapeutic strategy to target c-Myc.Cell 2011；146:904-17.
非专利文献6：McCleland ML,Mesh K,Lorenzana E,et al.CCAT1 is anenhancer-templated RNA that predicts BET sensitivity in colorectal cancer.JClin Invest 2016；126:639-52.
非专利文献7：Wyce A,Ganji G,Smitheman KN,et al.BET inhibition silencesexpression of MYCN and BCL2 and induces cytotoxicity in neuroblastoma tumormodels.PLoS One 2013；8:e72967.
非专利文献8：Zhao Y,Liu Q,Acharya P,et al.High-Resolution Mapping ofRNA Polymerases Identifies Mechanisms of Sensitivity and Resistance to BETInhibitors in t(8；21)AML.Cell Reports 2016；16:2003-16.
非专利文献9：Sancisi V,Manzotti G,Gugnoni M,et al.RUNX2 expression inthyroid and breast cancer requires the cooperation of three non-redundantenhancers under the control of BRD4 and c-JUN.Nucleic Acids Res 2017；45:11249-67.
非专利文献10：Lockwood WW,Zejnullahu K,Bradner JE,Varmus H.Sensitivityof human lung adenocarcinoma cell lines to targeted inhibition of BETepigenetic signaling proteins.Proceedings of the National Academy of Sciences2012；109:19408-13.
非专利文献11：Wang S,Pike AM,Lee SS,Strong MA,Connelly CJ,GreiderCW.BRD4inhibitors block telomere elongation.Nucleic Acids Research 2017；45:8403-10.
非专利文献12：Li X,Baek G,Ramanand SG,et al.BRD4 Promotes DNA Repairand Mediates the Formation of TMPRSS2-ERG Gene Rearrangements in ProstateCancer.Cell Reports 2018；22:796-808.
非专利文献13：Doroshow DB,Eder JP,LoRusso PM.BET inhibitors:a novelepigenetic approach.Ann Oncol 2017；28:1776-87.
非专利文献14：Roche J,Bertrand P.Inside HDACs with more selective HDACinhibitors.European Journal of Medicinal Chemistry 2016；121:451-83.
非专利文献15：Chou C-W,Wu M-S,Huang W-C,Chen C-C.HDAC InhibitionDecreases the Expression of EGFR in Colorectal Cancer Cells.PLOS ONE 2011；6:e18087.
非专利文献16：Kim YJ,Greer CB,Cecchini KR,Harris LN,Tuck DP,KimTH.HDAC inhibitors induce transcriptional repression of high copy numbergenes in breast cancer through elongation blockade.Oncogene 2013；32:2828.
非专利文献17：Wang Z,Zang C,Cui K,et al.Genome-wide Mapping of HATsand HDACs Reveals Distinct Functions in Active and Inactive Genes.Cell 2009；138:1019-31.
非专利文献18：Manzotti G,Ciarrocchi A,Sancisi V.Inhibition of BETProteins and Histone Deacetylase(HDACs):Crossing Roads in CancerTherapy.Cancers(Basel)2019；11.
非专利文献19：Kanno T,Kanno Y,LeRoy G,et al.BRD4 assists elongation ofboth coding and enhancer RNAs by interacting with acetylated histones.NatureStructural&Amp；Molecular Biology 2014；21:1047.
非专利文献20：Bhadury J,Nilsson LM,Muralidharan SV,et al.BET and HDACinhibitors induce similar genes and biological effects and synergize to killin Myc-induced murine lymphoma.Proc Natl Acad Sci U S A 2014；111:E2721-30.
非专利文献21：Shahbazi J,Liu PY,Atmadibrata B,et al.The BromodomainInhibitor JQ1 and the Histone Deacetylase Inhibitor PanobinostatSynergistically Reduce N-Myc Expression and Induce Anticancer Effects.ClinCancer Res 2016；22:2534-44.
非专利文献22：Fiskus W,Sharma S,Qi J,et al.Highly active combinationof BRD4antagonist and histone deacetylase inhibitor against human acutemyelogenous leukemia cells.Mol Cancer Ther 2014；13:1142-54.
非专利文献23：Mazur PK,Herner A,Mello SS,et al.Combined inhibition ofBET family proteins and histone deacetylases as a potential epigenetics-basedtherapy for pancreatic ductal adenocarcinoma.Nat Med 2015；21:1163-71.
非专利文献24：Holscher AS,Schulz WA,Pinkerneil M,Niegisch G,HoffmannMJ.Combined inhibition of BET proteins and class I HDACs synergisticallyinduces apoptosis in urothelial carcinoma cell lines.Clin Epigenetics 2018；10:1.
非专利文献25：Anja Heinemann1,3,Carleen Cullinane4,Ricardo De Paoli-Iseppi2,5,James S.,Wilmott2,Dilini Gunatilake1,2,3,Jason Madore2,5,DarioStrbenac6,Jean Y.Yang6,,Kavitha Gowrishankar1,Jessamy C.Tiffen1,2,3,RabK.Prinjha7,Nicholas Smithers7,,Grant A.McArthur4 PH,2,3,Stuart J.Gallagher1,2,3.Combining BET and HDAC inhibitors synergistically induces apoptosis ofmelanoma and suppresses AKT and YAP signaling.Oncotarget 2015；6.
非专利文献26：Zhang Y,Ishida CT,Ishida W,et al.Combined HDAC andBromodomain Protein Inhibition Reprograms Tumor Cell Metabolism and ElicitsSynthetic Lethality in Glioblastoma.Clin Cancer Res 2018；24:3941-54.
非专利文献27：Zhou B,Hu J,Xu F,et al.Discovery of a Small-MoleculeDegrader of Bromodomain and Extra-Terminal(BET)Proteins with PicomolarCellular Potencies and Capable of Achieving Tumor Regression.J Med Chem 2018；61:462-81.
非专利文献28：Toure M,Crews CM.Small-Molecule PROTACS:New Approachesto Protein Degradation.Angew Chem Int Ed Engl 2016；55:1966-73.
发明内容
本发明基于吡咯并吡啶酮类为母核，设计合成出新化合物，其具有HDAC和BRD4双靶抑制活性，或者具有能够抑制BRD4和泛素化降解BRD4蛋白的双功能，具有明确的细胞生物学功能，可应用于抗肿瘤等疾病。
鉴于此，提供一种式I化合物或其药学上可接受的盐：
Figure BDA0002543200280000061
其中，
R1选自
Figure BDA0002543200280000062
Figure BDA0002543200280000063
其中，Ra表示一个或多个取代基，各自独立地选自氢、卤素、羟基、氰基、烷基、任选被烷基取代的氨基、卤代烷基、烷氧基，
X选自亚烷基、杂亚烷基、亚烯基、亚杂芳基、(亚烷基)0或1-亚芳基-(亚烷基)0或1、亚烷基-CONH-亚烷基、亚环烷基、亚环烯基、亚杂环基、亚杂环烯基；所述亚芳基、亚杂芳基、(亚烷基)0或1-亚芳基-(亚烷基)0或1、亚环烷基、亚环烯基、亚杂环基或亚杂环烯基任选被环烯基、杂环基、杂环烯基、羟基、硝基、氰基、任选被烷基取代的氨基、烷氧基、烷基，烯基、芳基、杂芳基、环烷基、杂链烃基取代，
A选自芳基、杂芳基，
R2表示一个或多个取代基，各自独立地选自氢、＝O、卤素、羟基、氰基、烷基、卤代烷基、烷氧基、环烷基氧基、芳氧基、羟烷基、-(Rb)NS(O)2Rc、-S(O)2Rd、ReO(C＝O)-、RfRgN-C1-10烷基、杂环基烷基、环烷基烷氧基，其中，Rb、Rc、Rd、Re、Rf和Rg各自独立地为氢、烷基或卤代烷基；其中所述烷氧基、环烷基氧基、芳氧基、杂环基烷基和环烷基烷氧基任选各自独立地被1、2、3、4或5个选自＝O、卤素、羟基、氰基、烷基、卤代烷基、环烷基的基团取代；
或者，R2表示两个或两个以上取代基，其中两个相邻的取代基连接，并与所连接的A上的碳原子一起形成环烷、杂环、芳环、杂芳环；所述环烷、杂环、芳环、杂芳环任选被卤素、＝O、羟基、氰基、烷基、卤代烷基、烷氧基、胺基、磺酰基、烷基磺酰基、烷基磺酰氨基取代。
可选地，所述“卤素”选自氟、氯、溴或碘。
可选地，所述“烷基”、“被烷基取代的氨基”、“卤代烷基”、“烷氧基”、“羟烷基”、“杂环基烷基”、“环烷基烷氧基”中的烷基各自独立地为C1-C20直链或支链烷基，可选地为C1-C15直链或支链烷基，可选地为C1-C10直链或支链烷基，可选地为C1-C7直链或支链烷基，可选地为C1-C6直链或支链烷基，可选地为C1-C5直链或支链烷基，可选地C1-C4直链或支链烷基，可选地，选自甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基，1-甲基丁基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、异戊基、1-乙基丙基、新戊基、正己基、1-甲基戊基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、异己基、1,1-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、3,3-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、正庚基、2-甲基己基、3-甲基己基、2,2-二甲基戊基、3,3-二甲基戊基、2,3-二甲基戊基、2,4-二甲基戊基、3-乙基戊基或2,2,3-三甲基丁基；可选地，选自甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基或异丁基。
可选地，所述“亚烷基”、“(亚烷基)0或1-亚芳基-(亚烷基)0或1”和“亚烷基-CONH-亚烷基”中的亚烷基各自独立地为C1-C20直链或支链亚烷基，可选地为C1-C15直链或支链亚烷基，可选地为C1-C10直链或支链亚烷基，可选地为C1-C8直链或支链亚烷基，可选地为C1-C6直链或支链亚烷基，可选地为C1-C4直链或支链亚烷基，可选地为C1-C3直链或支链亚烷基，可选地为C3-C6直链或支链亚烷基。
可选地，所述“杂亚烷基”为含有1个或多个选自O、S或N的杂原子的C1-C20直链或支链亚烷基，可选地为含有1-6个选自O、S或N的杂原子的C1-C20直链或支链亚烷基，可选地为含有1-4个选自O、S或N的杂原子的C1-C20直链或支链亚烷基，可选地为含有1-6个选自O或S的C1-C20直链或支链亚烷基，可选地为含有1-4个选自O或S的C1-C20直链或支链亚烷基，可选地为含有1-6个O原子的C1-C20直链或支链亚烷基，可选地为含有1-4个O原子的C1-C20直链或支链亚烷基；可选地碳原子数为1-15个，可选地为1-10个，可选地为1-8个，可选地为1-6个；杂亚烷基为例如–(CH2CH2O)n–、–(OCH2CH2)m–、–(CH2CH2O)lCH2CH2–、–(OCH2)k–、–(CH2O)i–、–(CH2O)jCH2–、C1-C20亚烷氧基，其中n、m、l、k、i、j各自独立地为1-6的整数，可选地为1-4的整数，可选地为1-3的整数，可选地为1或2；可选地杂亚烷基为例如–(CH2CH2O)4CH2CH2–、–(CH2CH2O)3CH2CH2–、–(CH2CH2O)2CH2CH2–或C1-C10亚烷氧基，或者C1-C8亚烷氧基，或者C1-C6亚烷氧基，或者C1-C4亚烷氧基。
可选地，所述“亚烯基”为C2-C20直链或支链亚烯基，可选地为C2-C15直链或支链亚烯基，可选地为C2-C10直链或支链亚烯基，可选地为C2-C8直链或支链亚烯基，可选地为C2-C6直链或支链亚烯基，可选地为C2-C4直链或支链亚烯基，可选地所述亚烯基为-CH＝CH-、-CH＝CHCH2-、-CH2CH＝CH-或-CH2CH＝CHCH2-。
可选地，所述“烯基”为C2-C20直链或支链烯基，可选地为C2-C15直链或支链烯基，可选地为C2-C10直链或支链烯基，可选地为C2-C8直链或支链烯基，可选地为C2-C6直链或支链烯基，可选地为C2-C4直链或支链烯基，可选地所述烯基为CH2＝CH-、CH2＝CHCH2-、CH3CH＝CH-或CH3CH＝CHCH2-。
可选地，所述“亚芳基”、“(亚烷基)0或1-亚芳基-(亚烷基)0或1”中的亚芳基为6-10元亚芳基；可选为亚苯基或亚萘基。
可选地，所述“芳基”为6-10元芳基；可选为苯基或萘基。
可选地，所述“芳环”为6-10元芳环；可选为苯环或萘环。
可选地，所述“亚杂芳基”为含有1-3个选自N、O和S中的杂原子的5-10元亚杂芳基；可选地，为含有1-2个选自N、O和S中的杂原子的5-10元亚杂芳基；可选地，所述亚杂芳基选自亚吡啶基、亚吡咯基、亚嘧啶基、亚吡嗪基、亚哒嗪基、亚噻吩基、亚呋喃基。
可选地，所述“杂芳环”、“杂芳基”中的环为含有1-3个选自N、O和S中的杂原子的5-10元杂芳环；可选地，为含有1-2个选自N、O和S中的杂原子的5-10元杂芳环；可选地，所述环选自吡啶环、吡咯环、嘧啶环、吡嗪环、哒嗪环、噻吩环、呋喃环。
可选地，所述“(亚烷基)0或1-亚芳基-(亚烷基)0或1”优选为亚苯乙基、亚苄基、亚乙苯基、亚甲苯基。
可选地，所述“亚环烷基”为C3-C10单环、双环、三环、或四环亚环烷基；可选地，所述亚环烷基选自亚环丙基、亚环丁基、亚环戊基、亚环己基、亚环庚基及亚环辛基。
可选地，所述“环烷”、“环烷基”的环烷为C3-C10单环、双环、三环、或四环环烷；可选地，所述环烷选自环丙烷、环丁烷、环戊烷、环己烷、环庚烷及环辛烷。
可选地，所述“亚环烯基”为含一或多个双键的部分不饱和单环、双环、三环、或四环C3-C12亚环烯基；可选地为亚环丙烯基、亚环丁烯基、亚环戊烯基、亚环己烯基、亚环庚烯基或亚环辛烯基。
可选地，所述“环烯基”为含一或多个双键的部分不饱和单环、双环、三环、或四环C3-C12环烯基；可选地为环丙烯基、环丁烯基、环戊烯基、环己烯基、环庚烯基或环辛烯基。
可选地，所述“杂环”、“杂环基”、“亚杂环基”中的杂环为环上含有1个、2个或3个选自N、O、S的杂原子的3-10元非芳香杂环，可选地，所述杂环为环上含有1个或2个选自N、O的杂原子的3-6元非芳香环。
可选地，所述“亚杂环烯基”为环上含有1个、2个或3个选自N、O、S的杂原子且含有1个或多个双键的3-10元非芳香亚杂环烯基，可选地，为环上含有1个或2个选自N、O的杂原子的3-6元非芳香亚杂环烯基。
可选地，所述“杂环烯基”为环上含有1个、2个或3个选自N、O、S的杂原子且含有1个或多个双键的3-10元非芳香杂环烯基，可选地，为环上含有1个或2个选自N、O的杂原子的3-6元非芳香杂环烯基。
可选地，所述“杂链烃基”为链上含1-6个选自N、O、S的杂原子的直链或支链饱和或不饱和C1-C20杂链烃结构；可选地，为链上含1个、2个、3个或4个选自N、O的杂原子的直链或支链饱和或不饱和C1-C20杂链烃结构，可选地，为链上含1个、2个、3个或4个O的直链或支链饱和或不饱和C1-C20杂链烃结构，可选地，为链上含1个、2个、3个或4个O的直链或支链饱和或不饱和C1-C10杂链烃结构。
可选地，所述的式I化合物或其药学上可接受的盐中，Ra表示一个或多个取代基，各自独立地选自氢或卤素，
X选自C1-C10亚烷基、C1-C10亚烷基-CONH-C1-C10亚烷基、–(CH2CH2O)n–、–(OCH2CH2)m–、–(CH2CH2O)l CH2CH2–、–(OCH2)k–、–(CH2O)i–、–(CH2O)jCH2–、C1-C10亚烷氧基、(C1-C10亚烷基)0或1-亚芳基-(C1-C10亚烷基)0或1，其中n、m、l、k、i、j各自独立地为1-6的整数；
A选自苯基，
R2表示1、2、3、4或5个取代基，各自独立地选自氢、＝O、卤素、羟基、氰基、C1-6烷基、卤代C1-6烷基、C1-6烷氧基、C3-6环烷基氧基、C6-10芳氧基、羟基C1-6烷基、-(Rb)NS(O)2Rc、-S(O)2Rd、ReO(C＝O)-、RfRgN-C1-10烷基、C5-10杂环基C1-6烷基、C3-6环烷基C1-6烷氧基，其中，Rb、Rc、Rd、Re、Rf和Rg各自独立地为氢、C1-6烷基或卤代C1-6烷基；其中所述C1-6烷氧基、C3-6环烷基氧基、C6-10芳氧基、C5-10杂环基C1-6烷基和C3-6环烷基C1-6烷氧基任选各自独立地被1、2、3、4或5个选自卤素、羟基、氰基、C1-6烷基、卤代C1-6烷基、C3-6环烷基的基团取代；
或者，R2表示两个或两个以上取代基，其中两个相邻的取代基连接，并与所连接的A环上的碳原子一起形成杂环，所述杂环优选为[1,4]恶嗪环；所述杂环任选被＝O、烷基、磺酰基、烷基磺酰基取代。
可选地，上述式I化合物或其药学上可接受的盐中，所述式I化合物选自下列化合物：
Figure BDA0002543200280000101
Figure BDA0002543200280000111
Figure BDA0002543200280000121
Figure BDA0002543200280000131
Figure BDA0002543200280000141
Figure BDA0002543200280000151
Figure BDA0002543200280000161
Figure BDA0002543200280000171
Figure BDA0002543200280000181
Figure BDA0002543200280000191
Figure BDA0002543200280000201
Figure BDA0002543200280000211
Figure BDA0002543200280000221
Figure BDA0002543200280000231
可选地，上述式I化合物或其药学上可接受的盐中，所述药学上可接受的盐包括所述式I化合物的阴离子盐和阳离子盐；
优选地，所述药学上可接受的盐包括所述式I化合物的碱金属的盐、碱土金属的盐、铵盐；优选地，所述碱金属包括钠、钾、锂、铯，所述碱土金属包括镁、钙、锶；
优选地，所述药学上可接受的盐包括所述式I化合物与有机碱形成的盐；优选地，所述有机碱包括三烷基胺、吡啶、喹啉、哌啶、咪唑、甲基吡啶、二甲氨基吡啶、二甲基苯胺、N-烷基吗啉、1,5-二氮杂双环[4.3.0]壬烯-5(DBN)、1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳烯-7(DBU)、1,4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷(DABCO)；优选地，所述三烷基胺包括三甲胺、三乙胺、N-乙基二异丙胺；优选地，所述N-烷基吗啉包括N-甲基吗啉；
优选地，所述药学上可接受的盐包括所述式I化合物与酸形成的盐；优选地，所述酸包括无机酸、有机酸；优选地，所述无机酸包括盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、硝酸、磷酸、碳酸；优选地，所述有机酸包括甲酸、乙酸、丙酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、马来酸、乳酸、苹果酸、柠檬酸、枸橼酸、酒石酸、碳酸、苦味酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、谷氨酸、双羟萘酸。
另一方面，还提供制备上述式I化合物或其药学上可接受的盐的方法，
Figure BDA0002543200280000241
其特征在于，包括：
将式II化合物与NH2X-R1发生缩合反应，得到式I化合物，
Figure BDA0002543200280000242
其中，式I中，A、R2、X、R1如上所定义；
式II中，P为氢或保护基团，Q为氢或C1-C10烷基；A和R2如上所定义。
关于保护基团：当多官能团有机化合物进行反应时，为使反应只发生在所希望的官能团处，而避免其他官能团遭受影响，在反应前将其他官能团先加以保护，当反应完成后再恢复。保护基团是这种能够对所述其他官能团提供保护的一类基团的总称。此处保护基团可以为例如苄基、对甲苯磺酰基、(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)。
式NH2X-R1中，X、R1如上所定义。
或者，其特征在于，包括：
将式III化合物与式NH2R01发生缩合反应，得到式I化合物，
Figure BDA0002543200280000243
其中，
式I中，R1为
Figure BDA0002543200280000251
A、R2、X、Ra如上所定义。
式III中，A、R2、X如上所定义，M为氢或C1-C10烷基；
式NH2R01中，R01为羟基、
Figure BDA0002543200280000252
Ra如上所定义；
或者，其特征在于，包括：将式IV化合物与NH2R02发生缩合反应，得到式I化合物，
Figure BDA0002543200280000253
其中，式I中，A、R2、R1如上所定义；X为亚烷基-CONH-亚烷基，
式IV中，A、R2如上所定义；M为氢或C1-C10烷基；X1为亚烷基；
式NH2R02中，R02为亚烷基-R1，R1如上所定义。
优选地，所述式III化合物或式IV化合物的制备方法包括：
将式II化合物与式H2NXCOOM化合物或式H2NX1COOM化合物发生缩合反应，得到式III化合物或式IV化合物；
式H2NXCOOM中，X定义同式III中的定义；
式H2NX1COOM中，X1定义同式IV中的定义；
优选地，式II化合物的制备方法包括：将式V化合物与芳基硼酸发生Suzuki偶联反应得到式II化合物，
或者，
将式V化合物通过Suzuki偶联反应得到式VI的芳基硼酸酯化合物，然后将式VI的芳基硼酸酯化合物与溴代物发生Suzuki偶联反应得到式II化合物，
Figure BDA0002543200280000261
式V中，PG表示保护基团(例如苄基、对甲苯磺酰基、(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)，Y表示卤素，Q为氢或C1-C10烷基；
式VI中，PG和Q的定义与式V中相同；
所述芳基硼酸为式VII化合物：
Figure BDA0002543200280000262
其中，A和R2的定义与式II中的相同；
所述溴代物为式VIII化合物：
Figure BDA0002543200280000263
其中，A和R2的定义与式II中的相同。
优选地，所述式V化合物的制备方法包括：
将式XIV化合物与N,N-二甲基甲酰胺二甲基缩醛反应得到式XIII化合物，所得式XIII化合物在酸性条件下还原得到式XII化合物，式XII化合物在强碱条件下和卤化物反应得到式XI化合物，所得式XI化合物在强碱条件下与氯甲酸烷基酯反应得到式X化合物，对所得式X化合物用酸处理得到式IX化合物，在碱性条件和溶剂中用甲基化试剂将式IX化合物甲基化得到式V化合物；
Figure BDA0002543200280000271
式IX至式XIV中，Y、PG和Q的定义与式V中相同。
优选地，在上述制备方法中，所述缩合反应在碱性条件下和缩合剂的存在下，在溶剂中进行；优选地，所述缩合剂包括：N,N'-羰基二咪唑、二环己基碳二亚胺、O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲、N-羟基-7-偶氮苯并三氮唑、2-(1H-苯并三偶氮L-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲四氟硼酸酯或1-羟基苯并三唑；优选地，所述碱性条件所用的碱包括三乙胺、二异丙基乙胺、DMAP中的一种或者两种以上；所述溶剂包括：四氢呋喃、二氯甲烷或N,N-二甲基甲酰胺。
优选的，所述Suzuki偶联反应在钯催化剂的存在下在碱性条件下于溶剂中进行，任选地在配体的存在下进行；优选地，所述Suzuki偶联反应在60℃至150℃的温度下进行，优选地，该反应通过微波辐射促发；优选地，所述碱性条件所用的碱包括CsF、Cs2CO3、K2CO3、三乙胺、二异丙基乙胺、DMAP中的一种或者两种以上；优选地，所述钯催化剂包括：Pd2(dba)3、Pd(OAc)2或Pd(PPh3)4；优选地，所述配体包括：1,3,5,7-四甲基-6-苯基-2,4,8-三氧杂-6-磷酰金刚烷、2-二环己基磷-2’,4’,6’-三异丙基联苯、1,1’-双(二苯基磷烷基)二茂铁；优选地，所述溶剂包括：甲醇、二甲氧基乙烷、N,N-二甲基甲酰胺、二甲亚砜、二氧杂环己烷、四氢呋喃和水，或其混合物；
优选地，式XIV化合物与N,N-二甲基甲酰胺二甲基缩醛的反应60℃至100℃的温度下)进行；优选地在溶剂中进行，所述溶剂包括：N,N-二甲基甲酰胺；
优选地，所述式XIII化合物在酸性条件下的还原反应中，所述酸包括：氯化铵或乙酸；还原反应所用的还原剂包括还原铁粉；
优选地，所述式XII化合物在强碱条件下和卤化物的反应中，所述强碱包括氢化钠；
优选地，所得式XI化合物在强碱条件下与氯甲酸烷基酯的反应中，所述强碱包括二异丙基氨基锂；
优选地，所述式X化合物用酸处理步骤中，在溶剂中于40℃至100℃的温度下进行，优选的，所述酸包括盐酸、氢溴酸；所述溶剂包括二氧六环、水；
优选地，在式IX化合物甲基化反应，在溶剂中于40℃至100℃的温度下进行，优选地，甲基化试剂为碘甲烷；优选的，所述碱性条件所用的碱包括氢化钠、碳酸铯或碳酸钾；所述溶剂包括N，N-二甲基甲酰胺或二甲亚砜。
另一方面，还提供一种药物组合物，包括上述式I化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的辅料。
另一方面，还提供上述式I化合物或其药学上可接受的盐或上述药物组合物在制备用于预防或治疗肿瘤的药物中的用途。
另一方面，还提供一种预防或治疗肿瘤的方法，包括给予需要的患者预防或治疗有效量的上述式I化合物或其药学上可接受的盐，或上述药物组合物。
优选地，所述肿瘤包括非小细胞肺癌、乳腺癌、甲状腺癌(甲状腺髓样癌、乳头状甲状腺癌)、胃癌、膀胱癌、子宫内膜癌、前列腺癌、宫颈癌、结肠癌、食管癌、角质母细胞瘤、骨髓瘤、横纹肌肉瘤、急性白血病、肝癌、腺癌或胰腺癌。
根据一方面的具体实施方式，通过引入R1中的HDAC关键药效团，获得了具有抑制BRD4和HDAC作用的双功能抑制剂，或者，根据本发明另一方面的具体实施方式，通过引入R1中的泛素化募集药效团，获得了具有BRD4抑制活性以及泛素化降解BRD4蛋白的双功能化合物。
根据本发明另一方面的具体实施方式，测试化合物在急性单核细胞白血病细胞MV-4-11、骨髓增生异常综合征细胞株SKM-1及人胰腺癌细胞株MIA Paca2均显示出了很强的抑制细胞增殖活性。
根据本发明另一方面的具体实施方式，测试化合物在急性单核细胞白血病细胞MV-4-11显示出了明显的抑制细胞增殖活性。
附图说明
图1为实验二中实施例7和10化合物在SKM-1细胞中HDAC和BRD4信号通路影响的Western-Blotting图，其中Ac-tub是指乙酰化的tublin蛋白，Ac-H3是指乙酰化的H3蛋白。
图2为实验二中实施例7和10化合物在MV-4-11HDAC和BRD4信号通路影响的Western-Blotting图，其中Ac-tub是指乙酰化的tublin蛋白，Ac-H3是指乙酰化的H3蛋白。
图3是实验四中实施例105化合物在MV-4-11细胞株上对BRD4蛋白降解功能的Western-Blotting图。
具体实施方式
以下对本发明的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于示例性地对本发明进行说明，并不用于限制本发明。
实施例
实施例1
Figure BDA0002543200280000291
实施例1a 4-溴-7-甲氧基-1-氢-吡咯并[2,3-c]吡啶(化合物1a)
Figure BDA0002543200280000292
将5-溴-2-甲氧基-4-甲基-3-硝基吡啶(25g,101.19mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(50mL)，并加入N,N-二甲基甲酰胺二甲基缩醛(34mL,253mmol)，用油浴加热80℃下反应12小时；反应结束后冷却至室温，减压蒸干溶剂，得到红色固体。将所得固体溶于乙酸(400mL)，搅拌状态下加入还原铁粉(40g,708.36mmol)，用油浴加热回流反应4小时；反应结束冷却后用硅藻土滤除不溶固体，用热乙醇洗涤滤渣至不再有产物，减压蒸干溶剂。将所得固体溶于乙酸乙酯(300mL)，依次用水(100mL)、饱和碳酸钠水溶液(100mL)、饱和氯化钠水溶液(100mL)洗有机相，合并有机相后用无水硫酸钠干燥，减压蒸干溶剂后用石油醚和乙酸乙酯20:1溶液重结晶，得到产物4-溴-7-甲氧基-1-氢-吡咯并[2,3-c]吡啶20g，(产率：87％)。
实施例1b 4-溴-7-甲氧基-1-甲苯磺酰基吡咯并[2,3-c]吡啶(化合物1b)
Figure BDA0002543200280000301
在室温条件下将化合物1a(10g,44.04mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(100mL)。在冰浴条件下向该溶液中介入氢化钠(2.11g，1.27g的60％矿物油分散液，52.85mmol)，搅拌10分钟后分批加入对甲苯磺酰氯(10.08g,52.85mmol)，冰浴条件下氮气保护搅拌2小时至反应完全。在冰浴条件下用饱和氯化铵水溶液淬灭反应后，抽滤得米白色不溶固体并用水洗涤。收集固体并在50℃真空烘箱中干燥得到产物4-溴-7-甲氧基-1-甲苯磺酰基-1-氢吡咯并[2,3-c]吡啶16g(产率：95％)。
实施例1c 4-溴-7-甲氧基-1-甲苯磺酰基-1-氢-吡咯并[2,3-c]吡啶-2-甲酸甲酯(化合物1c)
Figure BDA0002543200280000302
向干燥的三口圆底烧瓶中加入化合物1b(10g,26.23mmol)，室温条件下溶于干燥的四氢呋喃(80mL)后，在-78℃条件下滴加2M的二异丙基氨基锂的四氢呋喃溶液(20mL,40mmmol)。逐渐升温至-50℃反应30分钟后，滴加氯甲酸甲酯(3.05mL,39.34mmol)，继续反应45分钟后，用饱和氯化铵溶液淬灭反应，乙酸乙酯萃取后用饱和食盐水洗有机相，无水硫酸钠干燥后，减压蒸干溶剂后柱层析，得到产物4-溴-7-甲氧基-1-甲苯磺酰基-1-氢-吡咯并[2,3-c]吡啶-2-甲酸甲酯8g(产率:70％)。
实施例1d 4-溴-7-氧代-1-甲苯磺酰基-6,7-二氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-2-羧酸甲酯(化合物1d)
Figure BDA0002543200280000303
将化合物1c(3g,6.83mmol)溶于4M的氯化氢(24mL,136.60mmol)的二氧六环溶液中，在60℃条件氩气保护反应2小时至反应完全，减压蒸干溶剂得到产物4-溴-7-氧代-1-甲苯磺酰基-6,7-二氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-2-羧酸甲酯2.9g(产率：100％)。
实施例1e 4-溴-6-甲基-7-氧代-1-甲苯磺酰基-6,7-二氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-2-羧酸甲酯(化合物1e)
Figure BDA0002543200280000311
在室温条件下将化合物1d(2.9g,6.83mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(30mL)。在冰浴条件下向该溶液中加入氢化钠(0.327g，0.106g的60％矿物油分散液，8.18mmol)，搅拌10分钟后加入碘甲烷(0.509mL,8.18mmol)。冰浴条件下氮气保护搅拌2小时至反应完全。在冰浴条件下用饱和氯化铵水溶液淬灭反应后，用乙酸乙酯萃取。然后用水和饱和氯化钠溶液洗涤，合并有机相经无水硫酸钠干燥，过滤浓缩后将所得固体用石油醚：乙酸乙酯10:1重结晶，得到产物4-溴-6-甲基-7-氧代-1-甲苯磺酰基-6,7-二氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-2-羧酸甲酯2.5g(产率：83％)。
实施例1f 6-甲基-7-氧代-4-(2-苯氧基苯基)-1-甲苯磺酰基-6,7-二氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-2-羧酸甲酯(化合物1f)
Figure BDA0002543200280000312
在氩气保护条件下将化合物1e(2g,4.55mmol)、(2-苯氧基苯基)硼酸(1.46g,6.83mmol)、氟化铯(1.38g,9.10mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(0.417g,0.46mmol)、1,3,5,7-四甲基-6-苯基-2,4,8-三氧杂-6-磷酰金刚烷(0.20g,0.91mmol)溶于乙二醇二甲醚(2mL)和甲醇(0.4mL)混合溶液中，60℃油浴条件下搅拌2小时至反应完全。用硅藻土滤除不溶物后乙酸乙酯萃取。然后用氯化钠溶液洗涤，合并有机相经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过快速层析法(硅胶2-50％乙酸乙酯/石油醚梯度)分离出产物6-甲基-7-氧代-4-(2-苯氧基苯基)-1-甲苯磺酰基-6,7-二氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-2-羧酸甲酯2g(产率：83％)。
实施例1g 6-甲基-7-氧代-4-(2-苯氧基苯基)-6,7-二氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-2-羧酸(化合物1g)
Figure BDA0002543200280000321
将化合物1f(0.2g,0.378mmol)溶于二氧六环(2mL)后加入4M的氢氧化钠溶液(0.4mL,1.6mmol)，在氩气保护条件下90℃搅拌2小时至反应完全。用1N盐酸溶液调节体系pH至1-3，将析出的白色固体抽滤、干燥，得到产物6-甲基-7-氧代-4-(2-苯氧基苯基)-6,7-二氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-2-羧酸0.11g(产率：81％)。
实施例1h 4-(6-甲基-7-氧代-4-(2-苯氧基苯基)-6,7-二氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-2-甲酰胺基)丁酸甲酯(化合物1h)
Figure BDA0002543200280000322
将化合物1g(0.11g,0.305mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1.5mL)后加入N,N-二异丙基乙胺(0.079mL,0.610mmol)、N-羟基-7-偶氮苯并三氮唑(0.062g,0.458mmol)和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(0.088g,0.458mmol)，室温反应20分钟后加入4-氨基丁酸甲酯(0.054g,0.458mmol)。在室温下搅拌4小时至反应完全。加入水淬灭反应，乙酸乙酯萃取后用水和饱和氯化钠溶液洗涤，合并有机相并经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过快速层析法(硅胶0-5％二氯甲烷/石甲醇梯度)分离出产物4-(6-甲基-7-氧代-4-(2-苯氧基苯基)-6,7-二氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-2-甲酰胺基)丁酸甲酯0.1g(产率：71％)
将化合物1h(0.1g,0.217mmol)溶于二氯甲烷(0.2mL)和甲醇(1mL)，冰浴条件下加入50％羟胺水溶液(0.286mL,4.35mmol)后加入氢氧化钠固体(0.174g,4.35mmol)，继续搅拌2小时至反应完全。用3N盐酸溶液调节体系pH至1-3，将析出的固体抽滤后用水洗，干燥，得到实施例1化合物，0.07g(产率：70％)。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.21(s,1H),10.38(s,1H),8.71(s,1H),8.38(t,J＝5.4Hz,1H),7.52(dd,J＝7.6,1.7Hz,1H),7.45–7.39(m,1H),7.33–7.25(m,4H),7.07–7.00(m,2H),6.89–6.83(m,3H),3.51(s,3H),3.23(dd,J＝12.7,6.8Hz,2H),2.02(t,J＝7.5Hz,2H),1.78-1.68(m,2H).LR-MS(ESI)m/z 461(M+1)
实施例2
Figure BDA0002543200280000331
实施例2a 4-(6-甲基-7-氧代-4-(2-苯氧基苯基)-6,7-二氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-2-甲酰胺基)丁酸(化合物2a)
Figure BDA0002543200280000332
将化合物1h(0.1g,0.218mmol)溶于二氧六环(2mL)后加入2M的氢氧化钠溶液0.436mL,0.872mmol)，在氩气保护条件下90℃搅拌2小时至反应完全。用1N盐酸溶液调节体系pH至1-3，将析出的白色固体抽滤干燥得到产物化合物2a。
将化合物2a(0.08g,0.180mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)后加入N,N-二异丙基乙胺(0.089mL,0.540mmol)、N-羟基-7-偶氮苯并三氮唑(0.034g,0.252mmol)和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(0.048g,mmol)，室温反应20分钟后加入邻苯二胺(0.029g,0.269mmol)。在室温下搅拌4小时至反应完全。加入水淬灭反应，乙酸乙酯萃取后用水和饱和氯化钠溶液洗涤，合并有机相并经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过快速层析法(硅胶0-7％二氯甲烷/甲醇梯度)分离出实施例2化合物.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.24(s,1H),9.13(s,1H),8.37(s,1H),7.52(s,1H),7.41(dd,J＝15.0,3.0Hz,1H),7.36–7.26(m,4H),6.68(ddd,J＝14.9,13.4,3.1Hz,2H),6.58(ddd,J＝15.0,9.7,6.9Hz,1H),6.53–6.43(m,3H),6.40(dd,J＝15.1,3.0Hz,1H),6.25(td,J＝14.8,3.0Hz,1H),5.83(s,1H),4.63(s,2H)3.48(s,3H),3.28(t,J＝9.8Hz,2H),3.20(dd,J＝15.8,5.4Hz,2H),1.49–1.35(m,2H)LR-MS(ESI)m/z 536(M+1).
实施例3
Figure BDA0002543200280000341
除了用5-氨基戊酸甲酯代替4-氨基丁酸甲酯以外，合成方法如实施例1。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.20(s,1H),10.35(s,1H),8.76–8.59(m,1H),8.35(t,J＝5.4Hz,1H),7.52(dd,J＝7.5,1.7Hz,1H),7.41(td,J＝7.8,1.7Hz,1H),7.32–7.24(m,4H),7.05–6.99(m,2H),6.88–6.83(m,3H),3.50(s,3H),3.22(dd,J＝12.3,6.2Hz,2H),1.97(t,J＝7.0Hz,2H),1.58–1.44(m,4H).LR-MS(ESI)m/z 475(M+1).
实施例4
Figure BDA0002543200280000342
除了用5-氨基戊酸甲酯代替4-氨基丁酸甲酯以外，合成方法如实施例2。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.24(s,1H),9.12(s,1H),8.40(t,J＝5.4Hz,1H),7.52(dd,J＝7.5,1.2Hz,1H),7.41(td,J＝7.9,1.4Hz,1H),7.34–7.24(m,4H),7.15(d,J＝7.4Hz,1H),7.06–6.98(m,2H),6.92–6.83(m,4H),6.71(d,J＝7.2Hz,1H),6.53(t,J＝7.6Hz,1H),4.83(s,2H),3.50(s,3H),3.28(dd,J＝11.0,5.1Hz,2H),2.35(t,J＝7.3Hz,2H),1.71–1.60(m,2H),1.60–1.50(m,2H).LR-MS(ESI)m/z 550(M+1)
实施例5
Figure BDA0002543200280000343
除了用6-氨基己酸甲酯代替4-氨基丁酸甲酯以外，合成方法如实施例1。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.22(s,1H),10.34(s,1H),8.67(s,1lH),8.34(s,1H),7.52(d,J＝7.6Hz,1H),7.42(t,J＝7.9Hz,1H),7.25–7.33(m,6.8Hz,4H),7.06–7.00(m,2H),6.90–6.84(d,J＝5.6Hz,3H),3.51(s,3H),3.23(dd,J＝12.8,6.7Hz,2H),1.95(t,J＝6.7Hz,2H),1.58–1.43(m,4H),1.33–1.26(m,2H).LR-MS(ESI)m/z 489(M+1).
实施例6
Figure BDA0002543200280000351
除了用6-氨基己酸甲酯代替4-氨基丁酸甲酯以外，合成方法如实施例2。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.24(s,1H),9.13(s,1H),8.38(t,J＝5.4Hz,1H),7.52(dd,J＝7.6,1.5Hz,1H),7.42(td,J＝8.0,1.7Hz,1H),7.33–7.24(m,3H),7.14(dd,J＝7.9,1.1Hz,1H),7.06–7.00(m,2H),6.93–6.83(m,4H),6.72(dd,J＝8.0,1.1Hz,1H),6.53(t,J＝7.6Hz,1H),4.97(s,2H),3.51(s,3H),3.30–3.22(m,2H),2.32(t,J＝7.5Hz,2H),1.68–1.60(m,2H),1.59–1.51(m,3H),1.42–1.32(m,2H).LR-MS(ESI)m/z 564(M+1).
实施例7
Figure BDA0002543200280000352
除了用7-氨基庚酸甲酯代替4-氨基丁酸甲酯以外，合成方法如实施例1。
1H NMR(600MHz,DMSO)δ12.20(s,1H),10.33(s,1H),8.66(s,1H),8.33(t,J＝5.4Hz,1H),7.52(dd,J＝7.6,1.6Hz,1H),7.42(td,J＝8.1,1.7Hz,1H),7.32–7.25(m,4H),7.05–7.01(m,2H),6.88–6.84(m,3H),3.51(s,3H),3.23(dd,J＝12.7,6.7Hz,2H),1.94(t,J＝7.4Hz,2H),1.53–1.46(m,4H),1.32–1.25(m,4H).LR-MS(ESI)m/z 503(M+1).
实施例8
除了用7-氨基庚酸甲酯代替4-氨基丁酸甲酯以外，合成方法如实施例2。
Figure BDA0002543200280000361
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.22(s,1H),9.10(s,1H),8.35(t,J＝5.6Hz,1H),7.52(dd,J＝7.5,1.6Hz,1H),7.44–7.39(m,1H),7.33–7.24(m,4H),7.14(d,J＝6.9Hz,1H),7.05–7.00(m,2H),6.84–6.91(m,4H),6.70(d,J＝6.8Hz,1H),6.53(td,J＝7.9,1.4Hz,1H),4.82(s,2H),3.50(s,3H),3.24(dd,J＝11.5,5.9Hz,2H),2.31(t,J＝7.4Hz,2H),1.65–1.56(m,2H),1.55–1.47(m,2H),1.42–1.30(m,4H).LR-MS(ESI)m/z 578(M+1).
实施例9
Figure BDA0002543200280000362
除了用4-(氨基甲基)苯甲酸甲酯代替4-氨基丁酸甲酯以外，合成方法如实施例1。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.29(s,1H),11.19(s,1H),8.95(t,J＝5.6Hz,1H),7.72(d,J＝8.1Hz,2H),7.52(d,J＝6.5Hz,1H),7.45–7.35(dd,J＝17.4,7.5Hz,3H),7.33–7.25(m,4H),7.08–6.98(m,2H),6.95(s,1H),6.87(d,J＝7.5Hz,2H),4.49(d,J＝5.7Hz,2H),3.50(s,3H).LR-MS(ESI)m/z 509(M+1).
实施例10
Figure BDA0002543200280000363
除了用4-(氨基甲基)苯甲酸甲酯代替4-氨基丁酸甲酯以外，合成方法如实施例2。
1H NMR(600MHz,DMSO)δ12.30(s,1H),9.64(s,1H),9.00(t,J＝5.5Hz,1H),7.95(t,J＝9.9Hz,2H),7.53(d,J＝7.5Hz,1H),7.49–7.37(m,3H),7.31(s,1H),7.24–7.30(m,3H),7.17(d,J＝7.5Hz,1H),7.03(d,J＝7.7Hz,2H),7.00-6.94(m,2H),6.87(d,J＝8.0Hz,2H),6.78(d,J＝7.9Hz,1H),6.60(t,J＝7.4Hz,1H),4.89(s,2H),4.53(d,J＝5.6Hz,2H),3.51(s,3H)LR-MS(ESI)m/z 584(M+1).
实施例11
Figure BDA0002543200280000371
除了用苯硼酸代替(2-苯氧基苯基)硼酸以外，合成方法如实施例9。
1H NMR(600MHz,DMSO)δ12.40(s,1H),11.17(s,1H),10.14(s,1H),8.99(t,J＝5.8Hz,1H),7.71(d,J＝8.2Hz,2H),7.59(d,J＝7.2Hz,2H),7.47(t,J＝7.7Hz,2H),7.42(s,1H),7.38(d,J＝8.2Hz,2H),7.35(t,J＝7.4Hz,1H),7.13(d,J＝2.2Hz,1H),4.49(d,J＝5.7Hz,2H),3.57(s,3H).LR-MS(ESI)m/z 417(M+1)
实施例12
Figure BDA0002543200280000372
除了用苯硼酸代替(2-苯氧基苯基)硼酸以外，合成方法如实施例10。
1H NMR(500MHz,DMSO)δ12.43(s,1H),9.63(s,1H),9.05(t,J＝5.8Hz,1H),7.97(d,J＝8.0Hz,1H),7.62(d,J＝7.3Hz,2H),7.50(t,J＝7.7Hz,2H),7.47(d,J＝8.2Hz,2H),7.45(s,1H),7.38(t,J＝7.4Hz,1H),7.20-7.4(m,2H),6.97(t,J＝7.0Hz,1H),6.79(d,J＝8.0Hz,1H),6.60(t,J＝7.2Hz,1H),4.88(s,2H),4.57(d,J＝5.7Hz,2H),3.61(s,3H).LR-MS(ESI)m/z 492(M+1)
实施例13
Figure BDA0002543200280000381
除了用(2-异丙氧基苯基)硼酸代替(2-苯氧基苯基)硼酸以外，合成方法如实施例9。
1H NMR(600MHz,DMSO)δ12.21(s,1H),11.18(s,1H),8.99(s,1H),8.93(t,J＝5.4Hz,1H),7.71(d,J＝7.9Hz,2H),7.37(d,J＝7.9Hz,2H),7.33(d,J＝7.1Hz,2H),7.24(s,1H),7.11(d,J＝8.5Hz,1H),7.00(t,J＝7.3Hz,1H),6.82(s,1H),4.55(dt,J＝11.9,5.8Hz,1H),4.48(d,J＝5.4Hz,2H),3.56(s,3H),1.16(s,3H),1.15(s,3H).LR-MS(ESI)m/z 475(M+1)
实施例14
Figure BDA0002543200280000382
除了用(2-异丙氧基苯基)硼酸代替(2-苯氧基苯基)硼酸以外，合成方法如实施例10。
1H NMR(600MHz,DMSO)δ12.21(s,1H),9.61(s,1H),8.95(t,J＝5.9Hz,1H),7.93(d,J＝8.0Hz,1H),7.42(d,J＝8.2Hz,2H),7.34-7.30(m,2H),7.23(s,1H),7.14(d,J＝7.6Hz,1H),7.10(d,J＝8.4Hz,1H),6.99(td,J＝7.4,0.9Hz,1H),6.97–6.93(m,1H),6.82(d,J＝1.6Hz,1H),6.76(dd,J＝8.0,1.2Hz,1H),6.57(dd,J＝11.0,4.1Hz,1H),4.54(dt,J＝12.2,6.1Hz,1H),4.86(s,2H),4.51(d,J＝5.8Hz,2H),3.55(s,3H),1.15(s,3H),1.14(s,3H).LR-MS(ESI)m/z 550(M+1).
实施例15
Figure BDA0002543200280000391
除了用2-氟苯硼酸替代(2-苯氧基苯基)硼酸以外，合成方法如实施例9。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.48(s,1H),11.24(s,1H),10.24(s,1H),9.04(s,1H),7.76(d,J＝7.9Hz,2H),7.58(t,J＝7.2Hz,1H),7.53-7.32(m,6H),6.91(s,1H),4.53(d,J＝5.0Hz,2H),3.62(s,3H).LR-MS(ESI)m/z 435(M+1).
实施例16
Figure BDA0002543200280000392
除了用2-氟苯硼酸替代(2-苯氧基苯基)硼酸以外，合成方法如实施例10。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.47(s,1H),9.65(s,1H),9.04(s,1H),7.96(d,J＝8.1Hz,2H),7.55(t,J＝6.8Hz,1H),7.50–7.41(m,4H),7.40–7.30(m,2H),7.16(d,J＝7.3Hz,1H),6.97(t,J＝7.6Hz,1H),6.89(s,1H),6.78(d,J＝8.0Hz,1H),6.60(t,J＝7.5Hz,1H),4.90(s,2H),4.54(d,J＝5.7Hz,2H),3.59(s,3H).LR-MS(ESI)m/z 510(M+1).
实施例17
Figure BDA0002543200280000393
除了用2-氯苯硼酸替代(2-苯氧基苯基)硼酸以外，合成方法如实施例9。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.48(s,1H),11.24(s,1H),10.24(s,1H),9.04(t,J＝5.6Hz,1H),8.22(s,1H),8.02–7.80(m,2H),7.57–7.49(m,1H),7.38–7.31(m,2H),7.30–7.20(m,2H),7.13–6.99(m,1H),6.94(s,1H),4.52(d,J＝5.6Hz,2H),3.67(s,3H)LR-MS(ESI)m/z 451(M+1).
实施例18
Figure BDA0002543200280000401
除了用2-氯苯硼酸替代(2-苯氧基苯基)硼酸以外，合成方法如实施例10。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.48(s,1H),9.64(s,1H),9.04(t,J＝5.6Hz,1H),7.97–7.85(m,2H),7.64(dd,J＝14.9,2.8Hz,1H),7.54–7.48(m,2H),7.43–7.34(m,2H),7.34–7.29(m,2H),7.28–7.17(m,2H),7.09–7.00(m,1H),6.98(dd,J＝15.1,(m,1H),6.94(s,1H),4.90(s,2H),4.54(d,J＝5.6Hz,2H),3.60(s,3H).LR-MS(ESI)m/z 526(M+1).
实施例19
Figure BDA0002543200280000402
除了用2-氰基苯硼酸替代(2-苯氧基苯基)硼酸以外，合成方法如实施例9。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.48(s,1H),11.23(s,1H),10.22(s,1H),9.04(t,J＝5.6Hz,1H),8.21(s,1H),7.99–7.87(m,2H),7.71–7.60(m,1H),7.60–7.45(m,3H),7.40–7.28(m,2H),6.90(s,1H),4.55(d,J＝5.6Hz,2H),3.60(s,3H)LR-MS(ESI)m/z 442(M+1).
实施例20
Figure BDA0002543200280000403
除了用2-氰基苯硼酸替代(2-苯氧基苯基)硼酸以外，合成方法如实施例10。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.48(s,1H),9.64(s,1H),9.05(t,J＝5.6Hz,1H),8.21(s,1H),8.01–7.86(m,2H),7.71–7.60(m,2H),7.59–7.52(m,2H),7.51–7.46(m,1H),7.45–7.36(m,1H),7.36–7.30(m,2H),7.00(dd,J＝14.9,3.1Hz,1H),6.93(s,1H),6.85(td,J＝14.9,3.1Hz,1H),4.91(s,2H),4.55(d,J＝5.6Hz,2H),3.60(s,3H).LR-MS(ESI)m/z 517(M+1).
实施例21
Figure BDA0002543200280000411
除了用2-三氟甲基苯硼酸替代(2-苯氧基苯基)硼酸以外，合成方法如实施例9。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.21(s,1H),11.17(s,1H),9.00(s,1H),8.94(t,J＝5.4Hz,1H),8.19(s,1H),8.06–7.84(m,2H),7.46–7.39(m,1H),7.39–7.30(m,3H),7.27(dd,J＝14.9,3.6Hz,1H),7.10(td,J＝14.7,3.5Hz,1H),6.91(s,1H),4.54(d,J＝5.6Hz,2H),3.57(s,3H).LR-MS(ESI)m/z 485(M+1).
实施例22
Figure BDA0002543200280000412
除了用2-三氟甲基苯硼酸替代(2-苯氧基苯基)硼酸以外，合成方法如实施例10。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.48(s,1H),9.65(s,1H),9.06(t,J＝5.6Hz,1H),8.20(s,1H),8.08–7.84(m,2H),7.66(dd,J＝15.0,2.9Hz,1H),7.46–7.39(m,2H),7.39–7.31(m,3H),7.27(dd,J＝14.9,3.6Hz,1H),7.10(td,J＝14.7,3.5Hz,1H),7.00(dd,J＝15.1,3.0Hz,1H),6.93(s,1H),6.85(td,J＝14.9,3.1Hz,1H),4.91(s,2H),4.55(d,J＝5.6Hz,2H),3.61(s,3H).LR-MS(ESI)m/z 560(M+1).
实施例23
Figure BDA0002543200280000413
除了用2-甲基苯硼酸替代(2-苯氧基苯基)硼酸以外，合成方法如实施例9。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.21(s,1H),11.17(s,1H),9.00(s,1H),8.95(t,J＝5.4Hz,1H),8.19(s,1H),8.06–7.82(m,2H),7.38–7.31(m,2H),7.31–7.21(m,2H),7.05–6.90(m,3H),4.65(s,1H),4.49(d,J＝5.6Hz,2H),3.56(s,3H),2.45(s,3H).LR-MS(ESI)m/z431(M+1).
实施例24
Figure BDA0002543200280000421
除了用2-甲基苯硼酸替代(2-苯氧基苯基)硼酸以外，合成方法如实施例10。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.47(s,1H),9.65(s,1H),9.07(t,J＝5.6Hz,1H),8.13(s,1H),7.95–7.80(m,2H),7.64(dd,J＝14.9,2.9Hz,1H),7.44–7.34(m,1H),7.34–7.29(m,2H),7.28–7.19(m,2H),7.05–6.89(m,4H),6.83(td,J＝14.9,3.0Hz,1H),4.93(s,2H),4.50(d,J＝5.6Hz,2H),3.61(s,3H),2.44(s,3H).LR-MS(ESI)m/z 506(M+1).
实施例25
Figure BDA0002543200280000422
除了用2-异丙基苯硼酸替代(2-苯氧基苯基)硼酸以外，合成方法如实施例9。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.21(s,1H),11.17(s,1H),8.99(s,1H),8.95(t,J＝5.4Hz,1H),8.19(s,1H),8.07–7.84(m,2H),7.39–7.31(m,3H),7.31–7.27(m,1H),7.27–7.23(m,1H),7.23–7.11(m,1H),6.95(s,1H),4.50(d,J＝5.6Hz,2H),3.57(s,3H),3.06–2.69(m,1H),1.17(d,J＝12.8Hz,6H).LR-MS(ESI)m/z 459(M+1).
实施例26
Figure BDA0002543200280000423
除了用2-异丙基苯硼酸替代(2-苯氧基苯基)硼酸以外，合成方法如实施例10。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.48(s,1H),9.65(s,1H),9.06(t,J＝5.6Hz,1H),8.15(s,1H),7.98–7.84(m,2H),7.65(dd,J＝14.9,3.1Hz,1H),7.46–7.36(m,1H),7.36–7.30(m,3H),7.30–7.21(m,2H),7.21–7.11(m,1H),6.99(dd,J＝15.1,3.0Hz,1H),6.94(s,1H),6.84(td,J＝14.9,3.1Hz,1H),4.93(s,2H),4.50(d,J＝5.6Hz,2H),3.61(s,3H),3.14–2.66(m,1H),1.17(d,J＝12.7Hz,6H).LR-MS(ESI)m/z 534(M+1).
实施例27
Figure BDA0002543200280000431
除了用2-甲氧基苯硼酸替代(2-苯氧基苯基)硼酸以外，合成方法如实施例9。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.21(s,1H),11.17(s,1H),9.00(s,1H),8.96(t,J＝5.4Hz,1H),8.20(s,1H),7.97–7.86(m,2H),7.38–7.30(m,3H),7.29–7.18(m,1H),7.10–6.99(m,2H),6.99(s,1H),4.49(d,J＝5.6Hz,2H),3.57(s,3H),3.67(s,3H).LR-MS(ESI)m/z447(M+1).
实施例28
Figure BDA0002543200280000432
除了用2-甲氧基苯硼酸替代(2-苯氧基苯基)硼酸以外，合成方法如实施例10。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.48(s,1H),9.65(s,1H),9.07(t,J＝5.6Hz,1H),8.23(s,1H),8.04–7.84(m,2H),7.66(dd,J＝14.9,3.1Hz,1H),7.47–7.36(m,1H),7.36–7.30(m,3H),7.29–7.17(m,1H),7.10–6.96(m,4H),6.85(td,J＝14.9,3.1Hz,1H),4.93(s,2H),4.51(d,J＝5.6Hz,2H),3.90(s,3H),3.61(s,3H).LR-MS(ESI)m/z 522(M+1).
实施例29
Figure BDA0002543200280000441
除了用(2-环丙氧基苯基)硼酸替代(2-苯氧基苯基)硼酸以外，合成方法如实施例9。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.22(s,1H),11.18(s,1H),9.00(s,1H),8.95(t,J＝5.4Hz,1H),8.19(s,1H),7.92(d,J＝7.4Hz,2H),7.34(d,J＝7.4Hz,3H),7.23(td,J＝7.5,1.5Hz,1H),7.04(ddd,J＝15.7,7.6,1.5Hz,2H),6.90(s,1H),4.49(d,J＝5.6Hz,2H),3.57(s,3H),3.12(p,J＝8.3Hz,1H),0.66–0.34(m,2H),0.25–0.02(m,2H).LR-MS(ESI)m/z 473(M+1).
实施例30
Figure BDA0002543200280000442
除了用(2-环丙氧基苯基)硼酸替代(2-苯氧基苯基)硼酸以外，合成方法如实施例10。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.49(s,1H),9.65(s,1H),9.07(t,J＝5.6Hz,1H),8.36(s,1H),7.99–7.87(m,2H),7.66(dd,J＝14.9,3.1Hz,1H),7.46–7.39(m,2H),7.38–7.30(m,3H),7.28–7.18(m,1H),7.10–6.96(m,3H),6.85(td,J＝14.9,3.1Hz,1H),4.92(s,2H),4.51(d,J＝5.6Hz,2H),3.60(s,3H),3.33(p,J＝16.4Hz,1H),0.57–0.31(m,2H),0.25–0.03(m,2H).LR-MS(ESI)m/z 548(M+1).
实施例31
Figure BDA0002543200280000443
除了用2-(4-氟-2,6-二甲基苯氧基)苯基)硼酸代替(2-苯氧基苯基)硼酸以外，合成方法如实施例9。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.29(s,1H),11.19(s,1H),9.00(s,1H),8.95(t,J＝5.6Hz,1H),8.28(s,1H),7.98–7.82(m,2H),7.46(td,J＝14.8,3.1Hz,1H),7.38–7.23(m,4H),7.14–7.05(m,1H),7.04(s,1H),6.86(s,1H),6.82(s,1H),4.50(d,J＝5.6Hz,2H),3.57(s,3H),2.15(s,6H).LR-MS(ESI)m/z 555(M+1).
实施例32
Figure BDA0002543200280000451
除了用2-(4-氟-2,6-二甲基苯氧基)苯基)硼酸代替(2-苯氧基苯基)硼酸以外，合成方法如实施例10。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.49(s,1H),9.65(s,1H),9.07(t,J＝5.6Hz,1H),8.27(s,1H),7.97–7.88(m,2H),7.66(dd,J＝15.0,2.9Hz,1H),7.52–7.35(m,3H),7.34–7.28(m,2H),7.27(dd,J＝12.7,2.3Hz,1H),7.09(td,J＝14.9,3.3Hz,1H),7.04–6.96(m,2H),6.92–6.78(m,3H),4.94(s,2H),4.51(d,J＝5.6Hz,2H),3.63(s,3H),2.15(s,6H).LR-MS(ESI)m/z630(M+1).
实施例33
Figure BDA0002543200280000452
除了用(2-(2,4-二氟苯氧基)苯基)硼酸代替(2-苯氧基苯基)硼酸以外，合成方法如实施例9。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.29(s,1H),11.19(s,1H),9.00(s,1H),8.95(t,J＝5.6Hz,1H)8.06(s,1H),7.98–7.85(m,2H),7.46(td,J＝14.8,3.2Hz,1H),7.38–7.32(m,2H),7.32–7.23(m,2H),7.15(s,1H),7.09(td,J＝14.9,3.3Hz,1H),7.02–6.85(m,2H),6.74(td,J＝16.0,2.5Hz,1H),,4.50(d,J＝5.6Hz,2H),3.58(s,3H).LR-MS(ESI)m/z 545(M+1).
实施例34
Figure BDA0002543200280000453
除了用(2-(2,4-二氟苯氧基)苯基)硼酸代替(2-苯氧基苯基)硼酸以外，合成方法如实施例10。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.49(s,1H),9.65(s,1H),9.07(t,J＝5.6Hz,1H),8.36(s,1H),7.97–7.84(m,2H),7.64(dd,J＝14.9,3.1Hz,1H),7.49–7.42(m,1H),7.42–7.33(m,2H),7.33–7.27(m,2H),7.25(dd,J＝12.6,2.3Hz,1H),7.17(s,1H),7.07(td,J＝14.8,3.2Hz,1H),6.98(dd,J＝15.1,3.0Hz,1H),6.96–6.86(m,2H),6.87–6.80(m,1H),6.79–6.70(m,1H),5.00(s,2H),4.51(d,J＝5.6Hz,2H),3.63(s,3H).LR-MS(ESI)m/z 620(M+1).
实施例35
Figure BDA0002543200280000461
除了用(3-(乙基磺酰胺基)苯基)硼酸代替(2-苯氧基苯基)硼酸以外，合成方法如实施例9。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.52(s,1H),9.95(s,1H),9.66(s,1H),9.05(s,1H),7.97(d,J＝8.0Hz,2H),7.51–7.37(m,5H),7.32(d,J＝7.3Hz,1H),7.23(d,J＝7.2Hz,1H),7.20–7.11(m,2H),6.97(t,J＝7.7Hz,1H),6.78(d,J＝8.0Hz,1H),6.60(t,J＝7.5Hz,1H),4.91(s,2H),4.56(d,J＝5.4Hz,2H),3.60(s,3H),3.17–3.11(m,2H),1.22(t,J＝7.3Hz,3H).LR-MS(ESI)m/z 524(M+1).
实施例36
Figure BDA0002543200280000462
除了用(3-(乙基磺酰胺基)苯基)硼酸代替(2-苯氧基苯基)硼酸以外，合成方法如实施例10。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.49(s,1H),11.21(s,1H),9.94(s,1H),9.02(s,1H),7.73(d,J＝7.7Hz,2H),7.50–7.36(m,5H),7.31(d,J＝6.7Hz,1H),7.23(d,J＝7.5Hz,1H),7.14(s,1H),4.52(s,2H),3.60(s,3H),3.19–3.07(m,2H),1.22(t,J＝7.0Hz,3H).LR-MS(ESI)m/z 599(M+1).
实施例37
Figure BDA0002543200280000471
除了用3-甲磺酰基苯硼酸代替(2-苯氧基苯基)硼酸以外，合成方法如实施例9。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.57(s,1H),11.22(s,1H),10.26(s,1H),9.08(t,J＝5.7Hz,1H),8.09(s,1H),7.98(d,J＝7.7Hz,1H),7.91(d,J＝8.1Hz,1H),7.77(t,J＝7.8Hz,1H),7.72(d,J＝8.1Hz,2H),7.63(s,1H),7.40(d,J＝8.1Hz,2H),7.14(d,J＝1.7Hz,1H),4.52(d,J＝5.5Hz,2H),3.61(s,3H),3.30(s,3H).LR-MS(ESI)m/z 495(M+1).
实施例38
Figure BDA0002543200280000472
除了用3-甲磺酰基苯硼酸代替(2-苯氧基苯基)硼酸以外，合成方法如实施例10。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.59(s,1H),9.65(s,1H),9.07(s,1H),8.09(s,1H),8.01–7.88(m,4H),7.78(t,J＝7.8Hz,1H),7.63(s,1H),7.46(d,J＝8.2Hz,2H),7.15(d,J＝6.9Hz,2H),6.97(s,1H),6.77(d,J＝6.8Hz,1H),6.59(s,1H),4.90(s,2H),4.56(d,J＝5.2Hz,2H),3.62(s,3H),3.30(s,3H).LR-MS(ESI)m/z 570(M+1).
实施例39
Figure BDA0002543200280000473
实施例39a甲基-6-甲基-7-氧代-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1-甲苯磺酰基-6,7-二氢-1H-吡咯并[2]，3-c]吡啶-2-羧酸乙酯(化合物39a)
Figure BDA0002543200280000481
将化合物1e(0.500g,1.14mmol)，连硼酸频哪醇酯(0.347g,1.37mmol)和醋酸钾(0.223g,2.28mmol)溶于二氧六环溶液(2mL)中，Ar气保护条件下加入Pd2(dba)3(0.132g,0.114mmol)和X-Phos(0.137g,0.228mmol)，在90℃油浴条件下反应3小时后停止加热，冷却至室温后滤除不溶物后用EA萃取后合并有机相，用饱和食盐水洗涤有机相后，用无水硫酸钠干燥。减压蒸干溶剂后，柱层析得到目标产物化合物39a(0.450g，92％)。
实施例39b 2-(3-溴苯基)丙-2-醇
Figure BDA0002543200280000482
将3-溴苯甲酸甲酯(2g,9.30mmol)溶于无水四氢呋喃(30mL)，在冰浴条件下滴加甲基溴化镁(1M in THF,11.6mL，11.6mmol)，然后将反应室温条件下反应两个小时后用饱和氯化铵溶液灭反应。用乙酸乙酯萃取后合并有机相，用饱和食盐水洗涤有机相后，用无水硫酸钠干燥。减压蒸干溶剂后柱层析得到目标产物化合物39b(0.2g，10％)。
实施例39c 4-(3-(2-羟基丙烷-2-基)苯基)-6-甲基-7-氧代-1-甲苯磺酰基-6,7-二氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-2-甲基羧酸
Figure BDA0002543200280000483
在氩气保护条件下将化合物39a(0.3g,0.617mmol)、化合物39b(0.110g,0.514mmol)、氟化铯(0.156g,1.03mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(0.047g,0.0514mmol)、1,3,5,7-四甲基-6-苯基-2,4,8-三氧杂-6-磷酰金刚烷(0.029g,0.103mmol)溶于乙二醇二甲醚(2mL)和水(0.16mL)混合溶液中，60℃油浴条件下搅拌2小时至反应完全。用硅藻土滤除不溶物后乙酸乙酯萃取。然后用氯化钠溶液洗涤，合并有机相经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过快速层析法(硅胶2-50％乙酸乙酯/石油醚梯度)分离出产物4-(3-(2-羟基丙烷-2-基)苯基)-6-甲基-7-氧代-1-甲苯磺酰基-6,7-二氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-2-甲基羧酸0.2g，(产率：79％)。
实施例39d 4-(3-(2-羟基丙烷-2-基)苯基)-6-甲基-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-2-羧酸
Figure BDA0002543200280000491
将化合物39c(0.2g,0.404mmol)溶于二氧六环(2mL)后加入4M的氢氧化钠溶液(0.4mL,1.6mmol)，在氩气保护条件下90℃搅拌2小时至反应完全。用1N盐酸溶液调节体系pH至1-3，将析出的白色固体抽滤、干燥，得到产物4-(3-(2-羟基丙烷-2-基)苯基)-6-甲基-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-2-羧酸0.11g(产率：83％)。
实施例39e 4-((4-(3-(2-羟基丙烷-2-基)苯基)-6-甲基-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-2-甲基甲酰氨基)甲基)苯甲酸甲酯
Figure BDA0002543200280000492
将化合物39d(0.10g,0.306mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1.5mL)后加入N,N-二异丙基乙胺(0.080mL,0.612mmol)、N-羟基-7-偶氮苯并三氮唑(0.062g,0.458mmol)和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(0.088g,0.458mmol)，室温反应20分钟后加入4-(氨基甲基)苯甲酸甲酯(0.076g,0.459mmol)。在室温下搅拌4小时至反应完全。加入水淬灭反应，乙酸乙酯萃取后用水和饱和氯化钠溶液洗涤，合并有机相并经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过快速层析法(硅胶0-5％二氯甲烷/石甲醇梯度)分离出产物4-((4-(3-(2-羟基丙烷-2-基)苯基)-6-甲基-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-2-甲基甲酰氨基)甲基)苯甲酸甲酯0.1g(产率：69％)
将化合物39e(0.1g,0.213mmol)溶于二氯甲烷(0.2mL)和甲醇(1mL)，冰浴条件下加入50％羟胺水溶液(0.286mL,4.35mmol)后加入氢氧化钠固体(0.174g,4.35mmol)，继续搅拌2小时至反应完全。用3N盐酸溶液调节体系pH至3，将析出的固体抽滤后用水洗，干燥，得到实施例39化合物，0.07g(产率：70％)。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.46(s,1H),11.23(s,1H),10.29(s,1H),9.09(s,1H),7.77-7.65(m,4H),7.45-7.37(m,5H),7.14(s,1H),4.52(d,J＝5.3Hz,2H),1.49(s,6H).LC-MS(ESI)m/z＝475(M+1)
实施例40
Figure BDA0002543200280000501
实施例41a 4-((4-(3-(2-羟基丙烷-2-基)苯基)-6-甲基-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-2-甲酰氨基)甲基)苯甲酸
Figure BDA0002543200280000502
将化合物39e(0.1g,0.211mmol)溶于二氧六环(2mL)后加入2M的氢氧化钠溶液0.436mL,0.872mmol)，在氩气保护条件下90℃搅拌2小时至反应完全。用1N盐酸溶液调节体系pH至3，将析出的白色固体抽滤干燥得到产物4-((4-(3-(2-羟基丙烷-2-基)苯基)-6-甲基-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-2-甲酰氨基)甲基)苯甲酸0.08g(产率：82％)。
将化合物40a(0.08g,0.174mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)后加入N,N-二异丙基乙胺(0.089mL,0.540mmol)、N-羟基-7-偶氮苯并三氮唑(0.034g,0.252mmol)和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(0.048g,mmol)，室温反应20分钟后加入邻苯二胺(0.023g,0.208mmol)。在室温下搅拌4小时至反应完全。加入水淬灭反应，乙酸乙酯萃取后用水和饱和氯化钠溶液洗涤，合并有机相并经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过快速层析法(硅胶0-7％二氯甲烷/甲醇梯度)分离出产物实施例40化合物0.06g(产率：63％)。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.48(s,1H),9.67(s,1H),9.06(s,1H),7.97(d,J＝7.7Hz,2H),7.69(s,1H),7.45(dd,J＝18.1,7.5Hz,6H),7.18(d,J＝7.5Hz,1H),7.13(s,1H),6.98(t,J＝7.6Hz,1H),6.79(d,J＝8.0Hz,1H),6.61(t,J＝7.5Hz,1H),4.93(s,2H),4.57(d,J＝5.4Hz,2H),4.13(s,1H),3.62(s,3H),1.50(s,6H).LR-MS(ESI)m/z 550(M+1).
实施例41
Figure BDA0002543200280000511
除了用3-(1-羟基乙基)苯硼酸替代(2-苯氧基苯基)硼酸以外，合成方法如实施例9。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.29(s,1H),11.19(s,1H),9.00(s,1H),8.95(t,J＝5.6Hz,1H),8.23(s,1H),8.04–7.75(m,2H),7.39–7.31(m,2H),7.31–7.25(m,2H),7.25–7.15(m,2H),6.99(s,1H),5.17(s,1H),4.71(q,J＝11.3Hz,1H),4.51(d,J＝5.6Hz,2H),3.57(s,3H),1.57(d,J＝11.3Hz,3H).LR-MS(ESI)m/z 461(M+1).
实施例42
Figure BDA0002543200280000512
除了用3-(1-羟基乙基)苯硼酸替代(2-苯氧基苯基)硼酸以外，合成方法如实施例10。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.49(s,1H),9.65(s,1H),9.07(t,J＝5.6Hz,1H),8.23(s,1H),7.99–7.83(m,2H),7.66(dd,J＝15.0,2.9Hz,1H),7.45–7.36(m,1H),7.36–7.27(m,4H),7.26–7.16(m,2H),7.04(s,1H),7.00(dd,J＝15.1,3.0Hz,1H),6.85(td,J＝14.9,3.1Hz,1H),5.15(d,J＝20.0Hz,3H),4.71(q,J＝11.3Hz,1H),4.61(d,J＝5.6Hz,2H),3.57(s,3H),1.57(d,J＝11.4Hz,3H).LR-MS(ESI)m/z 536(M+1).
实施例43
Figure BDA0002543200280000521
除了用3-甲氧基羰基苯硼酸替代(2-苯氧基苯基)硼酸以外，合成方法如实施例9。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.29(s,1H),11.19(s,1H),9.00(s,1H),8.95(t,J＝5.6Hz,1H),8.27(s,1H),7.96–7.84(m,3H),7.55(dt,J＝15.2,3.2Hz,1H),7.40(t,J＝13.5Hz,1H),7.36–7.30(m,3H),7.01(s,1H),4.50(d,J＝5.6Hz,2H),3.90(s,3H),3.57(s,3H).LR-MS(ESI)m/z 475(M+1).
实施例44
Figure BDA0002543200280000522
除了用3-甲氧基羰基苯硼酸替代(2-苯氧基苯基)硼酸以外，合成方法如实施例10。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.49(s,1H),9.67(s,1H),9.07(t,J＝5.6Hz,1H),8.28(s,1H),7.97–7.83(m,3H),7.66(dd,J＝15.0,2.9Hz,1H),7.55(dt,J＝15.2,3.2Hz,1H),7.46–7.36(m,2H),7.36–7.30(m,3H),7.04(s,1H),7.00(dd,J＝15.1,3.0Hz,1H),6.85(td,J＝14.9,3.1Hz,1H),5.00(s,2H),4.51(d,J＝5.6Hz,2H),3.90(s,3H),3.57(s,3H).LR-MS(ESI)m/z 550(M+1).
实施例45
Figure BDA0002543200280000531
除了用3-羟基苯硼酸替代(2-苯氧基苯基)硼酸以外，合成方法如实施例9。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.39(s,1H),11.19(s,1H),8.99(s,1H),8.95(t,J＝5.6Hz,1H),8.40(s,1H),8.26(s,1H),8.06–7.84(m,2H),7.38–7.25(m,3H),7.04(s,1H),6.90(dt,J＝14.9,2.9Hz,1H),6.77–6.66(m,2H),4.51(d,J＝5.6Hz,2H),3.58(s,3H).LR-MS(ESI)m/z 433(M+1).
实施例46
Figure BDA0002543200280000532
除了用3-羟基苯硼酸替代(2-苯氧基苯基)硼酸以外，合成方法如实施例10。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.50(s,1H),9.65(s,1H),9.40(s,1H),9.07(t,J＝5.6Hz,1H),8.25(s,1H),7.98–7.83(m,2H),7.66(dd,J＝15.0,2.9Hz,1H),7.47–7.36(m,1H),7.36–7.24(m,3H),7.04(s,1H),7.00(dd,J＝15.1,3.0Hz,1H),6.94–6.79(m,2H),6.71(m,2H),5.00(s,2H),4.50(d,J＝5.6Hz,2H),3.57(s,3H).LC-MS(ESI)m/z＝508(M+1)
实施例47
Figure BDA0002543200280000533
除了用3-甲氧基苯硼酸替代(2-苯氧基苯基)硼酸以外，合成方法如实施例9。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.45(s,1H),11.20(s,1H),10.02(d,J＝73.6Hz,1H),9.04(t,J＝5.8Hz,2H),7.72(d,J＝8.1Hz,2H),7.47(s,1H),7.39(d,J＝6.7Hz,3H),7.16(t,J＝12.7Hz,3H),6.94(d,J＝6.4Hz,1H),4.51(d,J＝5.5Hz,2H),3.82(s,3H),3.58(s,3H).LR-MS(ESI)m/z 447(M+1).
实施例48
Figure BDA0002543200280000541
除了用3-甲氧基苯硼酸替代(2-苯氧基苯基)硼酸以外，合成方法如实施例10。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.46(s,1H),9.65(s,1H),9.07(d,J＝6.0Hz,1H),7.95(d,J＝8.3Hz,2H),7.50–7.43(m,3H),7.40(t,J＝8.0Hz,1H),7.20–7.10(m,4H),7.00–6.91(m,2H),6.77(d,J＝6.8Hz,1H),6.59(t,J＝7.5Hz,1H),4.91(s,2H),4.55(d,J＝5.9Hz,2H),3.83(s,3H),3.59(s,3H).LR-MS(ESI)m/z 522(M+1).
实施例49
Figure BDA0002543200280000542
除了用3-甲基苯硼酸替代(2-苯氧基苯基)硼酸以外，合成方法如实施例9。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.44(s,1H),11.21(s,1H),10.05(d,J＝73.6Hz,1H),9.03(s,1H),7.73(d,J＝8.2Hz,2H),7.45–7.34(m,6H),7.19(d,J＝6.9Hz,1H),7.14(d,J＝2.0Hz,1H),4.52(d,J＝5.3Hz,2H),3.59(s,3H),2.39(s,3H).LR-MS(ESI)m/z431(M+1).
实施例50
Figure BDA0002543200280000543
除了用3-甲基苯硼酸替代(2-苯氧基苯基)硼酸以外，合成方法如实施例10。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.45(s,1H),9.64(s,1H),9.06(t,J＝5.8Hz,1H),7.96(d,J＝7.8Hz,2H),7.46(d,J＝8.0Hz,2H),7.43–7.32(m,4H),7.18(d,J＝7.1Hz,2H),7.14(s,1H),6.97(t,J＝7.6Hz,1H),6.77(d,J＝7.8Hz,1H),6.59(t,J＝7.3Hz,1H),4.89(s,2H),4.56(d,J＝5.7Hz,2H),3.59(s,3H),2.39(s,3H).LR-MS(ESI)m/z 506(M+1).
实施例51
Figure BDA0002543200280000551
除了用3-三氟甲基苯硼酸替代(2-苯氧基苯基)硼酸以外，合成方法如实施例9。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.56(s,1H),11.22(s,1H),10.24(s,1H),9.07(t,J＝5.8Hz,1H),7.95(s,1H),7.89(s,1H),7.76–7.70(m,4H),7.62(s,1H),7.40(d,J＝8.2Hz,2H),7.13(d,J＝2.0Hz,1H),4.52(d,J＝5.5Hz,2H),3.61(s,3H).LR-MS(ESI)m/z 485(M+1).
实施例52
Figure BDA0002543200280000552
除了用3-三氟甲基苯硼酸替代(2-苯氧基苯基)硼酸以外，合成方法如实施例10。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.56(s,1H),9.64(s,1H),9.07(s,1H),7.95(d,J＝8.0Hz,3H),7.89(s,1H),7.73(s,2H),7.62(s,1H),7.46(d,J＝8.0Hz,2H),7.15(d,J＝9.9Hz,2H),6.96(t,J＝7.6Hz,1H),6.77(d,J＝8.0Hz,1H),6.59(t,J＝7.8Hz,1H),4.89(s,2H),4.56(d,J＝5.5Hz,2H),3.60(s,3H).LR-MS(ESI)m/z 560(M+1).
实施例53
Figure BDA0002543200280000553
除了用3-氟苯硼酸替代(2-苯氧基苯基)硼酸以外，合成方法如实施例9。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.45(s,1H),11.21(s,1H),10.05(d,J＝73.6Hz,1H),9.03(s,1H),8.23(s,1H),8.02–7.78(m,2H),7.39–7.30(m,2H),7.30–7.19(m,1H),7.11(dt,J＝14.9,3.1Hz,1H),7.05–7.00(m,1H),7.00–6.91(m,2H),4.51(d,J＝5.6Hz,2H),3.66(s,3H).LR-MS(ESI)m/z 435(M+1).
实施例54
Figure BDA0002543200280000561
除了用3-氟苯硼酸替代(2-苯氧基苯基)硼酸以外，合成方法如实施例10。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.52(s,1H),9.65(s,1H),9.08(t,J＝6.0Hz,1H),7.96(d,J＝8.0Hz,2H),7.57–7.50(m,2H),7.45(dd,J＝17.9,9.7Hz,4H),7.24–7.12(m,3H),6.97(t,J＝7.6Hz,1H),6.78(d,J＝7.8Hz,1H),6.59(t,J＝7.4Hz,1H),4.90(s,2H),4.56(d,J＝5.5Hz,2H),3.59(s,3H).LR-MS(ESI)m/z 510(M+1).
实施例55
Figure BDA0002543200280000562
除了用3-氯苯硼酸替代(2-苯氧基苯基)硼酸以外，合成方法如实施例9。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.56(s,1H),11.21(s,1H),10.24(s,1H),9.07(t,J＝5.8Hz,1H),8.26(s,1H),7.98–7.88(m,2H),7.40–7.30(m,4H),7.30–7.26(m,1H),7.22(ddd,J＝12.7,5.3,3.3Hz,1H),7.02(s,1H),4.51(d,J＝5.6Hz,2H),3.57(s,3H).LR-MS(ESI)m/z451(M+1).
实施例56
Figure BDA0002543200280000563
除了用3-氯苯硼酸替代(2-苯氧基苯基)硼酸以外，合成方法如实施例10。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.53(s,1H),9.65(s,1H),9.08(t,J＝6.0Hz,1H),7.96(d,J＝8.1Hz,2H),7.64(s,1H),7.60(d,J＝7.8Hz,1H),7.56(s,1H),7.52(t,J＝7.9Hz,1H),7.45(t,J＝9.1Hz,3H),7.16(d,J＝6.8Hz,2H),6.97(t,J＝7.5Hz,1H),6.78(d,J＝8.0Hz,1H),6.60(t,J＝7.7Hz,1H),4.94(s,2H),4.56(d,J＝5.7Hz,2H),3.59(s,3H).LR-MS(ESI)m/z 526(M+1).
实施例57
Figure BDA0002543200280000571
除了用3-氰基苯硼酸替代(2-苯氧基苯基)硼酸以外，合成方法如实施例9。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.21(s,1H),11.17(s,1H),9.00(s,1H),8.95(t,J＝5.4Hz,1H),8.23(s,1H),7.97–7.87(m,2H),7.85–7.82(m,1H),7.82–7.75(m,1H),7.66–7.58(m,2H),7.40–7.27(m,2H),6.98(s,1H),4.51(d,J＝5.6Hz,2H),3.57(s,3H)LR-MS(ESI)m/z 442(M+1).
实施例58
Figure BDA0002543200280000572
除了用3-氰基苯硼酸替代(2-苯氧基苯基)硼酸以外，合成方法如实施例10。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.51(s,1H),9.68(s,1H),9.03(t,J＝5.6Hz,1H),8.01(s,1H),7.96–7.85(m,2H),7.84–7.72(m,2H),7.68–7.53(m,3H),7.44–7.34(m,1H),7.34–7.26(m,2H),7.02–6.93(m,2H),6.83(td,J＝14.9,3.1Hz,1H),5.00(s,2H),4.50(d,J＝5.6Hz,2H),3.60(s,3H).LR-MS(ESI)m/z 517(M+1).
实施例59
Figure BDA0002543200280000581
除了用4-甲基苯硼酸替代(2-苯氧基苯基)硼酸以外，合成方法如实施例9。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.21(s,1H),11.17(s,1H),9.00(s,1H),8.95(t,J＝5.4Hz,1H),8.22(s,1H),7.96–7.88(m,2H),7.38–7.32(m,2H),7.32–7.25(m,2H),7.16–7.07(m,2H),7.01(s,1H),4.50(d,J＝5.7Hz,2H),3.57(s,3H),2.41(s,3H).LR-MS(ESI)m/z431(M+1).
实施例60
Figure BDA0002543200280000582
除了用4-甲基苯硼酸替代(2-苯氧基苯基)硼酸以外，合成方法如实施例10。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.49(s,1H),9.66(s,1H),9.06(t,J＝5.7Hz,1H),8.23(s,1H),7.97–7.87(m,2H),7.66(dd,J＝15.0,3.0Hz,1H),7.46–7.36(m,1H),7.36–7.31(m,2H),7.31–7.25(m,2H),7.16–7.07(m,2H),7.03(s,1H),7.00(dd,J＝15.0,3.0Hz,1H),6.85(td,J＝14.9,3.1Hz,1H),4.93(s,2H),4.51(d,J＝5.6Hz,2H),3.61(s,3H),2.41(s,3H).LR-MS(ESI)m/z 506(M+1).
实施例61
Figure BDA0002543200280000583
除了用4-三氟甲基苯硼酸替代(2-苯氧基苯基)硼酸以外，合成方法如实施例9。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.20(s,1H),11.17(s,1H),9.01(s,1H),8.95(t,J＝5.4Hz,1H),8.21(s,1H),7.97–7.87(m,2H),7.46–7.38(m,2H),7.38–7.30(m,2H),7.30–7.23(m,2H),6.97(s,1H),4.51(d,J＝5.6Hz,2H),3.60(s,3H).LR-MS(ESI)m/z 485(M+1).
实施例62
Figure BDA0002543200280000591
除了用4-三氟甲基苯硼酸替代(2-苯氧基苯基)硼酸以外，合成方法如实施例10。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.45(s,1H),9.65(s,1H),9.06(t,J＝5.7Hz,1H),8.22(s,1H),8.05–7.82(m,2H),7.66(dd,J＝14.9,3.1Hz,1H),7.45–7.34(m,4H),7.33–7.31(m,1H),7.30–7.22(m,2H),7.04–6.95(m,2H),6.85(td,J＝14.9,3.1Hz,1H),4.90(s,2H),4.50(d,J＝5.6Hz,2H),3.57(s,3H).LR-MS(ESI)m/z 560(M+1).
实施例63
Figure BDA0002543200280000592
除了用4-甲氧基苯硼酸替代(2-苯氧基苯基)硼酸以外，合成方法如实施例9。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.21(s,1H),11.17(s,1H),9.00(s,1H),8.95(t,J＝5.4Hz,1H),8.22(s,1H),8.01–7.83(m,2H),7.42–7.26(m,4H),7.01(s,1H),6.95–6.81(m,2H),4.55(d,J＝5.7Hz,2H),3.81(s,3H),3.60(s,3H).LR-MS(ESI)m/z 447(M+1).
实施例64
Figure BDA0002543200280000593
除了用4-甲氧基苯硼酸替代(2-苯氧基苯基)硼酸以外，合成方法如实施例10。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.43(s,1H),9.63(s,1H),9.06(t,J＝5.7Hz,1H),8.21(s,1H),7.98–7.87(m,2H),7.66(dd,J＝15.0,2.9Hz,1H),7.46–7.29(m,5H),7.04–6.96(m,2H),6.93–6.80(m,3H),4.88(s,2H),4.55(d,J＝5.6Hz,2H),3.81(s,3H),3.57(s,3H).LR-MS(ESI)m/z 526(M+1).
实施例65
Figure BDA0002543200280000601
除了用4-氟苯硼酸替代(2-苯氧基苯基)硼酸以外，合成方法如实施例9。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.21(s,1H),11.17(s,1H),9.00(s,1H),8.95(t,J＝5.4Hz,1H),8.21(s,1H),7.98–7.86(m,2H),7.38–7.28(m,4H),7.24(ddd,J＝15.4,8.9,2.7Hz,2H),7.00(s,1H),4.53(d,J＝5.7Hz,2H),3.55(s,3H).LR-MS(ESI)m/z 435(M+1)
实施例66
Figure BDA0002543200280000602
除了用4-氟苯硼酸替代(2-苯氧基苯基)硼酸以外，合成方法如实施例10。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.45(s,1H),9.61(s,1H),9.06(t,J＝5.7Hz,1H),8.22(s,1H),8.05–7.84(m,2H),7.66(dd,J＝15.0,3.0Hz,1H),7.45–7.36(m,1H),7.36–7.28(m,4H),7.28–7.18(m,2H),7.03(s,1H),7.00(dd,J＝15.2,3.1Hz,1H),6.91–6.79(m,1H),4.85(s,2H),4.51(d,J＝5.7Hz,2H),3.57(s,3H).LR-MS(ESI)m/z 510(M+1).
实施例67
Figure BDA0002543200280000611
除了用4-氯苯硼酸替代(2-苯氧基苯基)硼酸以外，合成方法如实施例9。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.21(s,1H),11.17(s,1H),8.99(s,1H),8.95(t,J＝5.4Hz,1H),8.22(s,1H),7.98–7.85(m,2H),7.49–7.39(m,2H),7.38–7.31(m,2H),7.31–7.23(m,2H),7.01(s,1H),4.45(d,J＝5.7Hz,2H),3.43(s,3H).LR-MS(ESI)m/z 451(M+1).
实施例68
Figure BDA0002543200280000612
除了用4-氯苯硼酸替代(2-苯氧基苯基)硼酸以外，合成方法如实施例10。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.45(s,1H),9.60(s,1H),9.06(t,J＝5.7Hz,1H),8.21(s,1H),7.97–7.86(m,2H),7.66(dd,J＝15.0,2.9Hz,1H),7.48–7.36(m,3H),7.36–7.31(m,2H),7.31–7.24(m,2H),7.04–6.96(m,2H),6.85(td,J＝14.9,3.1Hz,1H),4.85(s,2H),4.55(d,J＝5.7Hz,2H),3.57(s,3H).LR-MS(ESI)m/z 527(M+1).
实施例69
Figure BDA0002543200280000613
除了用4-氰基苯硼酸替代(2-苯氧基苯基)硼酸以外，合成方法如实施例9。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.31(s,1H),11.37(s,1H),9.10(s,1H),8.95(t,J＝5.4Hz,1H),8.22(s,1H),7.97–7.90(m,2H),7.90–7.83(m,2H),7.57–7.47(m,2H),7.40–7.28(m,2H),6.98(s,1H),4.40(d,J＝5.7Hz,2H),3.47(s,3H).LR-MS(ESI)m/z 442(M+1).
实施例70
Figure BDA0002543200280000621
除了用4-氰基苯硼酸替代(2-苯氧基苯基)硼酸以外，合成方法如实施例10。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.45(s,1H),9.60(s,1H),9.06(t,J＝5.7Hz,1H),8.22(s,1H),7.97–7.89(m,2H),7.90–7.83(m,2H),7.66(dd,J＝15.0,2.9Hz,1H),7.58–7.47(m,2H),7.46–7.36(m,1H),7.37–7.28(m,2H),7.04–6.96(m,2H),6.85(td,J＝14.9,3.1Hz,1H),4.81(s,2H),4.55(d,J＝5.7Hz,2H),3.57(s,3H).LR-MS(ESI)m/z 517(M+1).
实施例71
除了用(4-(二甲胺基)甲基)苯基)硼酸替代(2-苯氧基苯基)硼酸以外，合成方法如实施例9。
Figure BDA0002543200280000622
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.21(s,1H),11.17(s,1H),9.00(s,1H),8.95(t,J＝5.4Hz,1H),8.20(s,1H),7.97–7.85(m,2H),7.42–7.28(m,4H),7.16–7.04(m,2H),6.94(s,1H),4.51(d,J＝5.7Hz,2H),3.87(s,2H),3.55(s,3H),2.16(s,6H)LR-MS(ESI)m/z 474(M+1).
实施例72
Figure BDA0002543200280000623
除了用(4-(二甲胺基)甲基)苯基)硼酸替代(2-苯氧基苯基)硼酸以外，合成方法如实施例10。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.45(s,1H),9.60(s,1H),9.06(t,J＝5.7Hz,1H),8.23(s,1H),8.08–7.80(m,2H),7.66(dd,J＝14.9,3.1Hz,1H),7.46–7.36(m,2H),7.36–7.30(m,3H),7.15–7.07(m,2H),7.03(s,1H),7.00(dd,J＝15.2,3.1Hz,1H),6.85(td,J＝14.9,3.1Hz,1H),4.83(s,2H),4.51(d,J＝5.7Hz,2H),3.87(s,2H),3.55(s,3H),2.16(s,6H).LR-MS(ESI)m/z 549(M+1).
实施例73
Figure BDA0002543200280000631
除了用(4-(吗啉代甲基)苯基)硼酸替代(2-苯氧基苯基)硼酸以外，合成方法如实施例9。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.31(s,1H),11.15(s,1H),8.99(s,1H),8.95(t,J＝5.4Hz,1H),8.22(s,1H),8.00–7.80(m,2H),7.49–7.25(m,4H),7.14–7.06(m,2H),6.96(s,1H),4.51(d,J＝5.7Hz,2H),3.76(s,2H),3.55(s,3H),3.57(t,J＝9.3Hz,4H),2.42(t,J＝9.4Hz,4H).LR-MS(ESI)m/z 516(M+1).
实施例74
Figure BDA0002543200280000632
除了用(4-(吗啉代甲基)苯基)硼酸替代(2-苯氧基苯基)硼酸以外，合成方法如实施例10。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.45(s,1H),9.61(s,1H),9.06(t,J＝5.7Hz,1H),8.21(s,1H),8.01–7.84(m,2H),7.66(dd,J＝14.9,3.1Hz,1H),7.42(dd,J＝15.0,3.0Hz,1H),7.39–7.30(m,4H),7.16–7.07(m,2H),7.04–6.96(m,2H),6.85(td,J＝14.9,3.1Hz,1H),4.83(s,2H),4.55(d,J＝5.7Hz,2H),3.87(s,2H),3.56(s,3H),3.57(t,J＝9.4Hz,4H),2.42(t,J＝9.4Hz,4H).LR-MS(ESI)m/z 591(M+1).
实施例75
Figure BDA0002543200280000641
除用N-(3-溴-4-(2,4-二氟苯氧基)苯基)乙磺酰胺替代化合物39b以外，实施例75化合物的合成方法参照实施例39。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.40(s,1H),11.21(s,1H),9.86(s,1H),8.95(t,J＝5.6Hz,1H),7.73(d,J＝8.2Hz,2H),7.44–7.35(m,4H),7.34(d,J＝2.6Hz,1H),7.24(dd,J＝8.8,2.6Hz,1H),7.08(td,J＝9.0,5.6Hz,1H),7.01(t,J＝8.5Hz,1H),6.95(d,J＝8.8Hz,1H),6.92(d,J＝2.1Hz,1H),4.50(d,J＝5.4Hz,2H),3.54(s,3H),3.11(q,J＝7.3Hz,2H),1.23(t,J＝7.3Hz,3H).LR-MS(ESI)m/z 652(M+1).
实施例76
Figure BDA0002543200280000642
除用N-(3-溴-4-(2,4-二氟苯氧基)苯基)乙磺酰胺替代化合物39b以外，实施例76化合物的合成方法参照实施例40。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.41(s,1H),9.86(s,1H),9.67(s,1H),8.99(s,1H),7.96(d,J＝8.3Hz,2H),7.45(d,J＝8.0Hz,2H),7.40–7.33(m,3H),7.26–7.22(m,1H),7.17(d,J＝8.2Hz,1H),7.13–7.05(m,1H),7.03–6.97(m,2H),6.96(s,1H),6.93(s,1H),6.79(d,J＝7.9Hz,1H),6.61(t,J＝7.6Hz,1H),4.96(s,2H),4.54(d,J＝5.5Hz,2H),3.55(s,3H),3.12(q,J＝7.5Hz,2H),1.23(t,J＝7.3Hz,4H)LR-MS(ESI)m/z 727(M+1).
实施例77
Figure BDA0002543200280000651
除用2-溴-1-(2,4-二氟苯氧基)-4-(甲基磺酰基)苯替代化合物39b，实施例77的合成方法参照实施例39。
1H NMR(400MHz,DMSO))δ12.31(s,1H),11.15(s,1H),8.99(s,1H),8.95(t,J＝5.4Hz,1H),8.30(s,1H),8.01–7.78(m,2H),7.72(d,J＝3.1Hz,1H),7.62(dd,J＝14.9,2.8Hz,1H),7.38–7.26(m,4H),7.03–6.85(m,2H),6.56(td,J＝15.9,2.7Hz,1H),4.51(d,J＝5.7Hz,2H),3.57(s,3H),3.31(s,3H).LR-MS(ESI)m/z 623(M+1).
实施例78
Figure BDA0002543200280000652
除用2-溴-1-(2,4-二氟苯氧基)-4-(甲基磺酰基)苯替代化合物39b，实施例78的合成方法参照实施例40。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.42(s,1H),9.60(s,1H),9.06(t,J＝5.7Hz,1H),8.25(s,1H),7.96–7.84(m,2H),7.70(d,J＝3.0Hz,1H),7.67–7.55(m,2H),7.44–7.35(m,1H),7.35–7.25(m,3H),6.98(dd,J＝15.0,3.1Hz,1H),6.96–6.88(m,2H),6.88–6.78(m,2H),6.70(td,J＝15.8,2.5Hz,1H),4.88(s,2H),4.50(d,J＝5.7Hz,2H),3.56(s,3H),3.30(s,3H).LR-MS(ESI)m/z 442(M+1).LR-MS(ESI)m/z 698(M+1).
实施例79
Figure BDA0002543200280000653
实施例79a 1-(3-溴-4-(2,4-二氟苯氧基)苯基)乙烷-1-酮
Figure BDA0002543200280000661
将3-溴-4-氟苯甲酮(2g,9.22mmol)、2,4-二氟苯酚(1.44g,11.06mmol)和碳酸铯(4.5g,13.8 2mmol)溶于二甲亚砜(20mL)，在90℃油浴加热条件下反应3小时，冷却至室温后用乙酸乙酯萃取反应，合并有机相后用水和饱和氯化钠溶液洗有机相，然后用无水硫酸钠干燥。减(压蒸发除去溶剂后柱层析得到化合物1-(3-溴-4-(2,4-二氟苯氧基)苯基)乙烷-1-酮2.5g(产率：83％)。
实施例79b 2-(3-溴-4-(2,4-二氟苯氧基)苯基)丙-2-醇
Figure BDA0002543200280000662
将化合物79a(2g,6.11mmol)溶于无水四氢呋喃(30mL)，在冰浴条件下滴加甲基溴化镁(1M in THF,7.33mL，7.33mmol)，然后将反应室温条件下反应两个小时后用饱和氯化铵溶液灭反应。用乙酸乙酯萃取后合并有机相，用饱和食盐水洗涤有机相后，用无水硫酸钠干燥。减压蒸干溶剂后柱层析得到目标产物化合物2-(3-溴-4-(2,4-二氟苯氧基)苯基)丙-2-醇(0.8g，38％)。
实施例79c 4-(2-(2,4-二氟苯氧基)-5-(2-羟基丙烷-2-基)苯基)-6-甲基-7-氧代-1-甲苯磺酰基-6,7-二氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-2-羧酸乙酯
Figure BDA0002543200280000663
在氩气保护条件下将化合物39a(0.3g,0.617mmol)、化合物79b(0.176g,0.514mmol)、氟化铯(0.156g,1.03mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(0.047g,0.0514mmol)、1,3,5,7-四甲基-6-苯基-2,4,8-三氧杂-6-磷酰金刚烷(0.029g,0.103mmol)溶于乙二醇二甲醚(2mL)和水(0.16mL)混合溶液中，60℃油浴条件下搅拌2小时至反应完全。用硅藻土滤除不溶物后乙酸乙酯萃取。然后用氯化钠溶液洗涤，合并有机相经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过快速层析法(硅胶2-50％乙酸乙酯/石油醚梯度)分离出产物44-(2-(2,4-二氟苯氧基)-5-(2-羟基丙烷-2-基)苯基)-6-甲基-7-氧代-1-甲苯磺酰基-6,7-二氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-2-羧酸乙酯0.2g，(产率：62％)。
实施例79d 4-(2-(2,4-二氟苯氧基)-5-(2-羟基丙烷-2-基)苯基)-6-甲基-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡咯并[2,3-C]吡啶-2-羧酸
Figure BDA0002543200280000671
将化合物79c(0.2g,0.321mmol)溶于二氧六环(2mL)后加入4M的氢氧化钠溶液(0.4mL,1.6mmol)，在氩气保护条件下90℃搅拌2小时至反应完全。用1N盐酸溶液调节体系pH至1-3，将析出的白色固体抽滤、干燥，得到产物4-(2-(2,4-二氟苯氧基)-5-(2-羟基丙烷-2-基)苯基)-6-甲基-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡咯并[2,3-C]吡啶-2-羧酸0.11g(产率：75％)。
实施例79e 4-((4-(2-(2,4-二氟苯氧基)-5-(2-羟基丙烷-2-基)苯基)-6-甲基-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-2-甲酰氨基)甲基)苯甲酸甲酯
Figure BDA0002543200280000672
将化合物79d(0.10g,0.220mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1.5mL)后加入N,N-二异丙基乙胺(0.080mL,0.612mmol)、N-羟基-7-偶氮苯并三氮唑(0.062g,0.458mmol)和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(0.088g,0.458mmol)，室温反应20分钟后加入4-(氨基甲基)苯甲酸甲酯(0.054g,0.330mmol)。在室温下搅拌4小时至反应完全。加入水淬灭反应，乙酸乙酯萃取后用水和饱和氯化钠溶液洗涤，合并有机相并经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过快速层析法(硅胶0-5％二氯甲烷/石甲醇梯度)分离出产物4-((4-(2-(2,4-二氟苯氧基)-5-(2-羟基丙烷-2-基)苯基)-6-甲基-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-2-甲酰氨基)甲基)苯甲酸甲酯0.1g(产率：76％)
将化合物79e(0.1g,0.166mmol)溶于二氯甲烷(0.2mL)和甲醇(1mL)，冰浴条件下加入50％羟胺水溶液(0.286mL,4.35mmol)后加入氢氧化钠固体(0.174g,4.35mmol)，继续搅拌2小时至反应完全。用3N盐酸溶液调节体系pH至3，将析出的固体抽滤后用水洗，干燥，得到实施例39化合物，0.07g(产率：70％)。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.46(s,1H),11.23(s,1H),10.29(s,1H),9.09(s,1H),8.34(s,1H),8.11–7.78(m,2H),7.39–7.32(m,2H),7.32–7.21(m,2H),7.02–6.85(m,3H),6.78–6.65(m,2H),5.52(s,1H),4.51(d,J＝5.7Hz,2H),3.66(s,3H),1.49(s,6H).LR-MS(ESI)m/z 603(M+1).
实施例80
Figure BDA0002543200280000681
实施例80a 4-((4-(2-(2,4-二氟苯氧基)-5-(2-羟基丙烷-2-基)苯基)-6-甲基-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡咯并[2,1，3-c]吡啶-2-甲酰胺基)甲基)苯甲酸
Figure BDA0002543200280000682
将化合物79e(0.1g,0.166mmol)溶于二氧六环(2mL)后加入2M的氢氧化钠溶液0.436mL,0.872mmol)，在氩气保护条件下90℃搅拌2小时至反应完全。用1N盐酸溶液调节体系pH至3，将析出的白色固体抽滤干燥得到产物4-((4-(2-(2,4-二氟苯氧基)-5-(2-羟基丙烷-2-基)苯基)-6-甲基-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡咯并[2,1，3-c]吡啶-2-甲酰胺基)甲基)苯甲酸0.08g(产率：81％)。
将化合物80a(0.08g,0.136mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)后加入N,N-二异丙基乙胺(0.089mL,0.540mmol)、N-羟基-7-偶氮苯并三氮唑(0.034g,0.252mmol)和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(0.048g,mmol)，室温反应20分钟后加入邻苯二胺(0.017g,0.163mmol)。在室温下搅拌4小时至反应完全。加入水淬灭反应，乙酸乙酯萃取后用水和饱和氯化钠溶液洗涤，合并有机相并经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过快速层析法(硅胶0-7％二氯甲烷/甲醇梯度)分离出产物实施例80化合物0.05g(产率：54％)。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.36(s,1H),9.65(s,1H),8.98(t,J＝5.0Hz,1H),7.96(d,J＝8.2Hz,2H),7.56(s,1H),7.45(d,J＝7.9Hz,3H),7.39(t,J＝8.6Hz,1H),7.33(s,1H),7.16(d,J＝8.0Hz,1H),7.14–7.08(m,1H),7.03(t,J＝9.8Hz,1H),6.97(t,J＝7.8Hz,1H),6.92(s,1H),6.83(d,J＝8.6Hz,1H),6.78(d,J＝7.7Hz,1H),6.60(t,J＝7.6Hz,1H),5.10(s,1H),4.90(s,2H),4.54(d,J＝5.5Hz,2H),3.56(s,3H),1.47(s,6H).LR-MS(ESI)m/z678(M+1).
实施例81
Figure BDA0002543200280000691
实施例81a 4-(2-(4-氟-2,6-二甲基苯氧基)-5-(2-羟基丙烷-2-基)苯基)-6-甲基-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡咯并[2,1，3-c]吡啶-2-羧酸
Figure BDA0002543200280000692
除用4-氟-2,6-二甲基苯酚替代2,4-二氟苯酚外，实施例81a的合成方法如实施例79d。
除用实施例81a化合物替代实施例79d化合物以外，实施例81的合成方法如实施例79。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.31(s,1H),11.15(s,1H),8.99(s,1H),8.95(t,J＝5.4Hz,1H),8.32(s,1H),7.99–7.84(m,2H),7.38–7.32(m,2H),7.29(dd,J＝14.9,2.8Hz,1H),7.26–7.22(m,2H),6.98(d,J＝14.9Hz,1H),6.85(d,J＝15.8Hz,2H),5.52(s,1H),4.51(d,J＝5.7Hz,2H),3.57(s,3H),2.15(s,6H),1.35(s,6H).LR-MS(ESI)m/z 613(M+1).
实施例82
Figure BDA0002543200280000701
除用4-氟-2,6-二甲基苯酚替代2,4-二氟苯酚，实施例的合成方法如实施例80。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.45(s,1H),9.61(s,1H),9.06(t,J＝5.7Hz,1H),8.33(s,1H),8.04–7.84(m,2H),7.66(dd,J＝15.0,2.9Hz,1H),7.45–7.36(m,1H),7.36–7.32(m,2H),7.29(dd,J＝14.9,2.8Hz,1H),7.26(s,1H),7.24(d,J＝2.9Hz,1H),7.09–6.93(m,2H),6.92–6.79(m,3H),5.52(s,1H),4.88(s,2H),4.51(d,J＝5.7Hz,2H),3.60(s,3H),2.15(s,6H),1.35(s,6H).LR-MS(ESI)m/z 688(M+1).
实施例83
Figure BDA0002543200280000702
除用异丙醇替代2,4-二氟苯酚，实施例的合成方法如实施例79。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.31(s,1H),11.15(s,1H),8.99(s,1H),8.95(t,J＝5.4Hz,1H),8.33(d,J＝18.9Hz,2H),8.06–7.73(m,2H),7.47–7.30(m,2H),7.28(d,J＝2.9Hz,1H),7.08(s,1H),6.94(d,J＝14.9Hz,1H),5.52(s,1H),4.91–4.47(m,1H),4.45(d,J＝5.6Hz,2H),3.66(s,3H),1.35(s,6H),1.31(d,J＝11.2Hz,6H).LR-MS(ESI)m/z 533(M+1).
实施例84
Figure BDA0002543200280000711
除用异丙醇替代2,4-二氟苯酚，实施例的合成方法如实施例80。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.43(s,1H),9.58(s,1H),9.03(t,J＝5.6Hz,1H),8.24(s,1H),8.04–7.82(m,2H),7.63(dd,J＝14.9,3.1Hz,1H),7.43–7.34(m,1H),7.34–7.28(m,3H),7.25(d,J＝3.1Hz,1H),7.04(s,1H),6.97(dd,J＝15.0,3.0Hz,1H),6.91(d,J＝14.8Hz,1H),6.82(td,J＝14.9,3.0Hz,1H),5.50(s,1H),5.10(s,2H),4.67(hept,J＝11.2Hz,1H),4.50(d,J＝5.6Hz,2H),3.56(s,3H),1.35(s,6H),1.31(d,J＝11.1Hz,6H).LR-MS(ESI)m/z608(M+1).
实施例85
Figure BDA0002543200280000712
除用环丙醇替代2,4-二氟苯酚，实施例的合成方法如实施例79。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.31(s,1H),11.15(s,1H),8.99(s,1H),8.95(t,J＝5.4Hz,1H),8.33(s,1H),8.00–7.85(m,2H),7.38–7.30(m,3H),7.28(d,J＝2.9Hz,1H),7.04(s,1H),6.94(d,J＝14.9Hz,1H),5.52(s,1H),4.51(d,J＝5.6Hz,2H),3.60(s,3H),1.35(s,6H),1.28–0.92(m,1H),0.42–0.06(m,4H).LR-MS(ESI)m/z 531(M+1).
实施例86
Figure BDA0002543200280000713
除用环丙醇替代2,4-二氟苯酚，实施例的合成方法如实施例80。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.44(s,1H),9.60(s,1H),9.05(t,J＝5.6Hz,1H),8.35(s,1H),7.96–7.86(m,2H),7.65(dd,J＝14.9,3.1Hz,1H),7.46(s,1H),7.44–7.36(m,1H),7.36–7.25(m,4H),6.99(dd,J＝14.9,3.1Hz,1H),6.93(d,J＝14.8Hz,1H),6.84(td,J＝15.0,3.0Hz,1H),5.52(s,1H),4.88(s,2H),4.51(d,J＝5.6Hz,2H),3.67(s,3H),3.33(p,J＝16.6Hz,1H),1.35(s,6H),0.75–0.02(m,4H).LR-MS(ESI)m/z 606(M+1).
实施例87
Figure BDA0002543200280000721
除用羟甲基环丙烷替代2,4-二氟苯酚，实施例的合成方法如实施例79。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.31(s,1H),11.15(s,1H),8.99(s,1H),8.95(t,J＝5.4Hz,1H),8.33(s,1H),8.00–7.85(m,2H),7.38–7.30(m,3H),7.28(d,J＝2.9Hz,1H),7.04(s,1H),6.94(d,J＝14.9Hz,1H),5.52(s,1H),4.51(d,J＝5.6Hz,2H),3.85(d,J＝14.7Hz,2H),3.66(s,3H),1.35(s,6H),1.28–0.92(m,1H),0.42–0.06(m,4H).LR-MS(ESI)m/z545(M+1).
实施例88
Figure BDA0002543200280000722
除用羟甲基环丙烷替代2,4-二氟苯酚，实施例的合成方法如实施例80。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.45(s,1H),9.61(s,1H),9.06(t,J＝5.6Hz,1H),8.15(s,1H),7.97–7.88(m,2H),7.66(dd,J＝15.0,2.9Hz,1H),7.47–7.37(m,1H),7.36–7.30(m,3H),7.28(d,J＝2.9Hz,1H),7.00(dd,J＝15.1,3.0Hz,1H),6.94(t,J＝7.5Hz,2H),6.85(td,J＝14.9,3.1Hz,1H),5.52(s,1H),4.90(s,2H),4.51(d,J＝5.6Hz,2H),3.58(d,J＝16.0Hz,2H),3.67(s,3H),1.35(s,6H),1.28–0.94(m,1H),0.54–0.20(m,4H).LR-MS(ESI)m/z 620(M+1).
实施例89
Figure BDA0002543200280000731
除用环己醇替代2,4-二氟苯酚，实施例的合成如参照实施例79。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.31(s,1H),11.15(s,1H),8.99(s,1H),8.95(t,J＝5.4Hz,1H),8.26(s,1H),8.06–7.83(m,2H),7.37–7.25(m,4H),6.99(s,1H),6.94(d,J＝14.9Hz,1H),5.52(s,1H),4.51(d,J＝5.6Hz,2H),3.85–3.69(m,1H),3.57(s,3H),2.03–1.85(m,2H),1.82–1.67(m,1H),1.68–1.53(m,2H),1.35(s,6H),1.30–1.07(m,5H).LR-MS(ESI)m/z 573(M+1).
实施例90
Figure BDA0002543200280000732
除用环己醇替代2,4-二氟苯酚，实施例的合成方法如实施例80。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.45(s,1H),9.61(s,1H),9.06(t,J＝5.6Hz,1H),8.19(s,1H),7.97–7.87(m,2H),7.66(dd,J＝14.9,3.1Hz,1H),7.45–7.36(m,1H),7.36–7.30(m,3H),7.28(d,J＝2.9Hz,1H),7.00(dd,J＝14.9,3.1Hz,1H),6.94(d,J＝14.8Hz,1H),6.89–6.76(m,2H),5.52(s,1H),5.12(s,2H),4.51(d,J＝5.6Hz,2H),3.57(s,3H),3.65–3.54(m,1H),2.00–1.83(m,2H),1.81–1.54(m,3H),1.35(s,6H),1.32–1.10(m,5H).LR-MS(ESI)m/z678(M+1).
实施例91
Figure BDA0002543200280000733
除用3-溴-4-甲氧基苯甲酸甲酯替代化合物79a以外，实施例91的合成方法如实施例79。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.38(s,1H),11.19(s,1H),9.09–8.92(m,2H),7.73(d,J＝8.2Hz,2H),7.68(s,1H),7.48–7.38(m,6H),7.10(s,1H),5.08(s,1H),4.52(d,J＝5.8Hz,2H),3.81(s,3H),3.53(s,3H),1.49(s,6H).LR-MS(ESI)m/z 505(M+1).
实施例92
Figure BDA0002543200280000741
实施例92a:
Figure BDA0002543200280000742
除用3-溴-4-甲氧基苯甲酸甲酯替代化合物79a，实施例92a的合成方法如实施例79e。
实施例92b:
Figure BDA0002543200280000743
除用92a替代79e，实施例92b的合成方法如实施例80a。
除用92b替代80a，实施例92的合成方法如实施例80。
1H NMR(600MHz,DMSO)δ12.24(d,J＝1.8Hz,1H),9.66(s,1H),8.95(t,J＝5.9Hz,1H),7.95(d,J＝8.0Hz,2H),7.44(dd,J＝8.5,2.0Hz,3H),7.38(d,J＝2.4Hz,1H),7.19(s,1H),7.17(d,J＝7.3Hz,1H),7.05(d,J＝8.7Hz,1H),6.98(t,J＝7.0Hz,1H),6.80(d,J＝7.8Hz,1H),6.71(d,J＝2.3Hz,1H),6.63(t,J＝7.3Hz,1H),5.09(s,1H),4.95(s,2H),4.52(d,J＝5.8Hz,2H),3.71(s,3H),3.57(s,3H),1.44(s,6H).LR-MS(ESI)m/z 490(M+1).
实施例93
Figure BDA0002543200280000751
除用6-氨基己酸甲酯替代4-(氨基甲基)苯甲酸甲酯，实施例93的合成方法如实施例85。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.15(s,1H),10.34(s,1H),8.67(s,1H),8.29(t,J＝5.4Hz,1H),7.45(d,J＝8.6Hz,1H),7.38(s,1H),7.33(d,J＝8.5Hz,1H),7.16(s,1H),6.59(d,J＝1.9Hz,1H),4.97(s,1H),3.83–3.72(m,1H),3.56(s,3H),3.22(q,J＝6.1Hz,2H),1.95(t,J＝7.4Hz,2H),1.56–1.46(m,4H),1.45(s,6H),1.34–1.25(m,2H),0.76–0.68(m,2H),0.60–0.53(m,2H).LR-MS(ESI)m/z 511(M+1).
实施例94
Figure BDA0002543200280000752
除用7-氨基庚酸乙酯替代4-(氨基甲基)苯甲酸甲酯，实施例94的合成方法如实施例85。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.15(s,1H),10.34(s,1H),8.67(s,1H),8.28(s,1H),7.45(d,J＝10.3Hz,1H),7.38(s,1H),7.33(d,J＝8.5Hz,1H),7.16(s,1H),6.60(s,1H),4.97(s,1H),3.85–3.74(m,1H),3.56(s,3H),3.22(q,J＝6.4,6.0Hz,1H),1.94(t,J＝7.4Hz,2H),1.53–1.47(m,4H),1.45(s,6H),1.34–1.25(m,4H),0.75–0.66(m,2H),0.61–0.53(m,2H).LR-MS(ESI)m/z 525(M+1).
实施例95
Figure BDA0002543200280000753
除用6-氨基己酸甲酯替代4-(氨基甲基)苯甲酸甲酯，实施例95的合成方法如实施例83。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.14(s,1H),10.34(s,1H),8.67(s,1H),8.31(t,J＝5.3Hz,1H),7.43–7.36(m,2H),7.20(d,J＝1.2Hz,1H),7.02(d,J＝9.1Hz,1H),6.72(s,1H),4.96(s,1H),4.50(p,J＝6.0Hz,1H),3.57(s,3H),3.22(q,J＝6.1Hz,2H),1.94(t,J＝7.3Hz,2H),1.50(q,J＝7.6Hz,4H),1.44(s,6H),1.35–1.22(m,2H),1.13(d,J＝6.1Hz,6H).LR-MS(ESI)m/z 513(M+1).
实施例96
Figure BDA0002543200280000761
除用7-氨基庚酸乙酯替代4-(氨基甲基)苯甲酸甲酯，实施例96的合成方法如实施例83。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.13(s,1H),10.34(s,1H),8.67(s,1H),8.30(t,J＝5.4Hz,1H),7.42–7.36(m,2H),7.20(s,1H),7.02(d,J＝9.4Hz,1H),6.72(s,1H),4.95(s,1H),4.50(p,J＝6.0Hz,1H),3.57(s,3H),3.22(q,J＝6.5Hz,2H),1.94(t,J＝7.3Hz,2H),1.50(q,J＝7.3Hz,4H),1.44(s,6H),1.37–1.25(m,4H),1.13(d,J＝6.0Hz,6H).LR-MS(ESI)m/z 527(M+1).
实施例97
Figure BDA0002543200280000762
除用6-氨基己酸甲酯替代4-(氨基甲基)苯甲酸甲酯，实施例97的合成方法如实施例79。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.23(s,1H),10.35(s,1H),8.68(s,1H),8.32(t,J＝5.4Hz,1H),7.55(d,J＝2.4Hz,1H),7.45(dd,J＝8.6,2.4Hz,1H),7.39(td,J＝11.5,8.8,2.9Hz,1H),7.31(s,1H),7.14–7.06(m,1H),7.02(td,J＝8.5,2.5Hz,1H),6.82(d,J＝7.4Hz,2H),5.10(s,1H),3.56(s,3H),3.22(q,J＝6.1Hz,2H),1.94(t,J＝7.3Hz,2H),1.50(q,J＝7.6Hz,4H),1.44(s,6H),1.35–1.22(m,2H).LR-MS(ESI)m/z 583(M+1).
实施例98
Figure BDA0002543200280000763
除用7-氨基庚酸乙酯替代4-(氨基甲基)苯甲酸甲酯，实施例98的合成方法如实施例79。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.23(s,1H),10.35(s,1H),8.68(s,1H),8.32(t,J＝5.4Hz,1H),7.55(d,J＝2.4Hz,1H),7.45(dd,J＝8.6,2.4Hz,1H),7.39(td,J＝11.5,8.8,2.9Hz,1H),7.31(s,1H),7.14–7.06(m,1H),7.02(td,J＝8.5,2.5Hz,1H),6.82(d,J＝7.4Hz,2H),5.10(s,1H),3.56(s,3H),3.22(q,J＝6.5Hz,2H),1.94(t,J＝7.3Hz,2H),1.55–1.39(m,10H),1.34–1.24(m,4H).LR-MS(ESI)m/z 597(M+1).
实施例99
Figure BDA0002543200280000771
除用6-氨基己酸甲酯替代4-(氨基甲基)苯甲酸甲酯，实施例99的合成方法如实施例81。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.27(s,1H),10.35(s,1H),8.68(s,1H),8.34(t,J＝5.4Hz,1H),7.52(d,J＝2.4Hz,1H),7.35(s,1H),7.32(dd,J＝8.6,2.4Hz,1H),7.00(d,J＝9.1Hz,2H),6.85(s,1H),6.31(d,J＝8.6Hz,1H),5.02(s,1H),3.60(s,3H),3.22(q,J＝6.5Hz,2H),2.02(s,6H),1.95(t,J＝7.4Hz,2H),1.58–1.47(m,4H),1.44(s,6H),1.29(d,J＝7.3Hz,2H).LR-MS(ESI)m/z 593(M+1).
实施例100
Figure BDA0002543200280000772
除用7-氨基庚酸乙酯替代4-(氨基甲基)苯甲酸甲酯，实施例100的合成方法如实施例81。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.25(s,1H),10.34(s,1H),8.67(s,1H),8.33(t,J＝5.5Hz,1H),7.52(d,J＝2.4Hz,1H),7.35(s,1H),7.33(dd,J＝8.7,2.6Hz,1H),7.00(d,J＝9.1Hz,2H),6.85(s,1H),6.31(d,J＝8.5Hz,1H),5.01(s,1H),3.60(s,3H),3.23(q,J＝6.5Hz,2H),2.02(s,6H),1.94(t,J＝7.3Hz,2H),1.53–1.47(m,4H),1.44(s,6H),1.33–1.24(m,4H).LR-MS(ESI)m/z 607(M+1).
实施例101
Figure BDA0002543200280000781
除用8-溴-2,2,4-三甲基-6-(甲基磺酰基)-2-H-苯并[b][1,4]恶嗪-3(4-H)-酮替代化合物39b，实施例101的合成方法如实施例39。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.31(s,1H),11.15(s,1H),8.99(s,1H),8.95(t,J＝5.4Hz,1H),8.27(s,1H),7.98–7.86(m,2H),7.74(d,J＝3.1Hz,1H),7.50(d,J＝3.1Hz,1H),7.40–7.25(m,2H),7.07(s,1H),4.51(d,J＝5.6Hz,2H),3.57(s,3H),3.36(s,3H),3.31(s,3H),1.55(s,6H).LR-MS(ESI)m/z 608(M+1).
实施例102
Figure BDA0002543200280000782
除用8-溴-2,2,4-三甲基-6-(甲基磺酰基)-2-H-苯并[b][1,4]恶嗪-3(4-H)-酮替代化合物39b，实施例102的合成方法如实施例40。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.44(s,1H),9.60(s,1H),9.05(t,J＝5.6Hz,1H),8.38(s,1H),7.98–7.87(m,2H),7.73(d,J＝3.1Hz,1H),7.65(dd,J＝15.0,2.9Hz,1H),7.49(d,J＝2.8Hz,1H),7.45–7.36(m,1H),7.36–7.29(m,2H),6.99(dd,J＝15.0,3.0Hz,1H),6.84(td,J＝14.9,3.1Hz,1H),6.65(s,1H),4.88(s,2H),4.51(d,J＝5.6Hz,2H),3.66(s,3H),3.36(s,3H),3.31(s,3H),1.55(s,6H).LR-MS(ESI)m/z 683(M+1).
实施例103
Figure BDA0002543200280000791
除用4-氟-1,2-苯二胺替代邻苯二胺外，实施例103的合成方法参照实施例80。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.31(s,1H),11.15(s,1H),8.99(s,1H),8.95(t,J＝5.4Hz,1H),8.28(s,1H),7.95–7.82(m,2H),7.44(dd,J＝14.9,9.9Hz,1H),7.35–7.28(m,2H),7.25(dd,J＝14.9,3.1Hz,1H),7.20(d,J＝2.9Hz,1H),7.00–6.93(m,2H),6.93–6.82(m,2H),6.79–6.67(m,2H),6.62(ddd,J＝16.0,15.0,3.1Hz,1H),5.49(s,1H),4.91(s,1H),4.59(d,J＝5.6Hz,2H),3.55(s,3H),1.34(s,6H).LR-MS(ESI)m/z 696(M+1).
实施例104
Figure BDA0002543200280000792
除用4-氟-1,2-苯二胺替代邻苯二胺外，实施例104的合成方法参照实施例76。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.43(s,1H),9.60(s,1H),9.05(t,J＝5.6Hz,1H),8.34(s,1H),7.97–7.84(m,2H),7.47(dd,J＝15.0,10.0Hz,1H),7.36(s,1H),7.35–7.29(m,2H),7.03–6.97(m,1H),6.97–6.93(m,1H),6.92–6.84(m,1H),6.83–6.74(m,3H),6.70–6.59(m,2H),6.57(s,1H),4.93(s,2H),4.51(d,J＝5.6Hz,2H),3.57(s,3H),3.45(q,J＝13.8Hz,2H),1.27(t,J＝13.7Hz,3H).LR-MS(ESI)m/z 745(M+1).
实施例105
Figure BDA0002543200280000801
将实施例10化合物(25mg,0.043mmol)溶于二氯甲烷(2mL)和甲醇(1mL)后加入4M的HCl的二氧六环溶液(0.021mL,0.086mmol)，室温反应3小时候减压蒸发除去溶剂，将所得用甲基叔丁基醚重结晶得到实施例105化合物。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.35(s,1H),10.59(s,1H),9.10(t,J＝5.7Hz,1H),8.10(d,J＝8.1Hz,2H),7.60(d,J＝7.8Hz,1H),7.56–7.46(m,4H),7.46–7.34(m,3H),7.30(m,4H),7.08–7.01(m,2H),6.98(s,1H),6.88(d,J＝8.2Hz,2H),4.56(d,J＝5.7Hz,2H),3.92(s,3H),3.51(s,3H).LR-MS(ESI)m/z 621(M+1).
实施例106
Figure BDA0002543200280000802
实施例106a
Figure BDA0002543200280000803
除用2-异丙氧基吡啶-3-硼酸替代(2-苯氧基苯基)硼酸外，实施例106a的合成方法同实施例1g；
除用实施例106a化合物替代实施例1g化合物外，实施例106的合成方法同实施例10。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.21(s,1H),9.61(s,1H),8.95(t,J＝5.9Hz,1H),δ7.92(d,J＝15.1Hz,2H),7.70–7.57(m,3H),7.41–7.28(m,4H),7.09(dd,J＝15.1,3.0Hz,1H),6.94–6.79(m,2H),6.59(t,J＝15.0Hz,1H).4.86(s,2H),4.55(dt,J＝11.9,5.8Hz,1H),4.48(d,J＝5.4Hz,2H),3.56(s,3H),1.16(s,3H),1.15(s,3H).LR-MS(ESI)m/z 551(M+1).
实施例107
Figure BDA0002543200280000811
实施例107a
Figure BDA0002543200280000812
将3-氟酞酐(10g,60.20mmol)和3-氨基-2,6-哌啶二酮(0.26g,72.24mmol)溶于乙酸(70mL)，在90℃油浴加热条件下反应过夜后，有大量不溶固体析出，抽滤后用水和饱和碳酸钠溶液洗涤固体，干燥后得到产物107a(12g,72％)。
实施例107b
Figure BDA0002543200280000813
将化合物107a(0.2g,0.724mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(3mL)后，加入N-叔丁氧羰基-1,4-丁二胺(0.151g,0.869mmol)和碳酸铯(0.220g,1.45mmol)。在室温下搅拌4小时至反应完全。加入水淬灭反应，乙酸乙酯萃取后用水和饱和氯化钠溶液洗涤，合并有机相并经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过快速层析法(硅胶0-7％二氯甲烷/石甲醇梯度)分离出产物后将所得产物溶于三氟乙酸，室温搅拌15分钟后加压蒸发除去溶剂，得到化合物107b(0.2g,84％)。
将化合物1g(0.1g,0.277mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)后，加入N,N-二异丙基乙胺(0.098mL,0.555mmol)、N-羟基-7-偶氮苯并三氮唑(0.053g,0.388mmol)和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(0.074g,0.388mmol)，室温反应20分钟后加入107b(0.128g,0.388mmol)。在室温下搅拌4小时至反应完全。加入水淬灭反应，乙酸乙酯萃取后用水和饱和氯化钠溶液洗涤，合并有机相并经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过快速层析法(硅胶0-7％二氯甲烷/石甲醇梯度)分离出产物化合物107。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ11.54(s,1H),9.44(s,1H),7.52(d,J＝6.3Hz,1H),7.47–7.41(m,1H),7.38–7.30(m,2H),7.23(dd,J＝11.0,4.9Hz,3H),7.12–7.04(m,3H),6.99(t,J＝7.4Hz,1H),6.96(s,1H),6.86(dd,J＝8.0,5.3Hz,3H),6.26(t,J＝5.4Hz,1H),4.97(dd,J＝11.8,5.0Hz,1H),3.62(s,3H),3.45(s,2H),3.30(s,2H),2.88–2.70(m,3H),2.09(d,J＝7.4Hz,1H),1.70(s,4H).LR-MS(ESI)m/z 687(M+1).
实施例108
Figure BDA0002543200280000821
除用化合物N-叔丁氧羰基-1,5-戊二胺替代N-叔丁氧羰基-1,4-丁二胺外，实施例108的合成方法参照实施例107。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.85(s,1H),11.06(s,1H),8.98(t,J＝5.6Hz,1H),8.32(s,1H),7.59(t,J＝14.9Hz,1H),7.51–7.37(m,3H),7.30(dd,J＝12.6,2.3Hz,1H),7.28–7.22(m,2H),7.22–7.14(m,1H),7.14–7.04(m,3H),7.02–6.94(m,2H),6.79(t,J＝5.8Hz,1H),4.52(t,J＝14.7Hz,1H),3.67(s,3H),3.30(t,J＝10.1Hz,2H),3.06(t,J＝15.0Hz,2H),2.89–2.66(m,1H),2.58–2.35(m,2H),2.34–2.15(m,1H),1.76–1.56(m,2H),1.55–1.41(m,2H),1.39–1.17(m,2H).LR-MS(ESI)m/z 701(M+1).
实施例109
Figure BDA0002543200280000822
除用化合物N-叔丁氧羰基-1,6-己二胺替代N-叔丁氧羰基-1,4-丁二胺外，实施例109的合成方法参照实施例107。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.85(s,1H),11.06(s,1H),8.98(t,J＝5.7Hz,1H),8.08(s,1H),7.59(t,J＝14.9Hz,1H),7.51–7.37(m,3H),7.30(dd,J＝12.6,2.3Hz,1H),7.28–7.15(m,4H),7.15–7.04(m,3H),6.98(dd,J＝14.9,3.1Hz,1H),6.79(t,J＝5.6Hz,1H),4.52(t,J＝14.8Hz,1H),3.67(s,3H),3.30(t,J＝13.8Hz,2H),3.06(t,J＝14.9Hz,2H),2.89–2.66(m,1H),2.56–2.34(m,2H),2.33–2.11(m,1H),1.72–1.16(m,8H).LR-MS(ESI)m/z715(M+1).
实施例110
Figure BDA0002543200280000831
实施例110a
Figure BDA0002543200280000832
将化合物1g(0.2g,0.555mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(2mL)后加入N,N-二异丙基乙胺(0.197mL,1.11mmol)、N-羟基-7-偶氮苯并三氮唑(0.106g,0.776mmol)和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(0.148g,0.776mmol)，室温反应20分钟后加入5-氨基戊酸甲酯(0.44g,0.832mmol)。在室温下搅拌4小时至反应完全。加入水淬灭反应，乙酸乙酯萃取后用水和饱和氯化钠溶液洗涤，合并有机相并经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过快速层析法(硅胶0-7％二氯甲烷/甲醇梯度)分离出产物后将所得产物溶于二氧六环溶液(2mL)，加入2M的氢氧化钠溶液(0.2mL)，90℃反应4小时后用2M的盐酸酸化析出固体，抽滤后水洗干燥得到化合物110a。
将化合物110a(0.1g,0.218mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)后加入N,N-二异丙基乙胺(0.076mL,0.435mmol)、N-羟基-7-偶氮苯并三氮唑(0.041g,0.305mmol)和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(0.058g,0.305mmol)，室温反应20分钟后加入97b(0.090g,0.261mmol)。在室温下搅拌4小时至反应完全。加入水淬灭反应，乙酸乙酯萃取后用水和饱和氯化钠溶液洗涤，合并有机相并经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过快速层析法(硅胶0-7％二氯甲烷/石甲醇梯度)分离出产物110。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ11.51(d,J＝19.4Hz,1H),9.54(d,J＝19.6Hz,1H),7.50(d,J＝7.6Hz,1H),7.45–7.39(m,1H),7.33(t,J＝7.7Hz,1H),7.22(q,J＝8.7Hz,3H),7.08–6.94(m,5H),6.85(d,J＝8.5Hz,2H),6.81(d,J＝8.6Hz,1H),6.34(d,J＝21.5Hz,1H),6.22(t,J＝5.4Hz,1H),4.98(dd,J＝12.0,5.5Hz,1H),3.60(s,3H),3.50(s,1H),3.38(d,J＝5.9Hz,2H),3.23(d,J＝8.2Hz,4H),2.91–2.71(m,3H),2.21(t,J＝6.9Hz,2H),1.75–1.49(m,9H).LR-MS(ESI)m/z 786(M+1).
实施例111
Figure BDA0002543200280000841
除用5-氨基己酸甲酯替代5-氨基戊酸甲酯外，合成方法同实施例110。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ11.43(s,1H),9.62(s,1H),7.51(d,J＝7.5Hz,1H),7.48–7.42(m,1H),7.36–7.31(m,1H),7.27–7.18(m,3H),7.06(d,J＝6.2Hz,3H),7.00(t,J＝7.4Hz,1H),6.95(s,1H),6.85(dd,J＝8.2,4.1Hz,3H),6.27(s,1H),6.10(s,1H),5.00(dd,J＝11.8,5.4Hz,1H),3.59(s,3H),3.42–3.15(m,6H),2.92–2.74(m,3H),2.15(dd,J＝14.5,7.6Hz,3H),1.70–1.44(m,9H),1.41–1.21(m,2H).LR-MS(ESI)m/z 800(M+1).
实施例112
Figure BDA0002543200280000842
除用5-氨基庚酸甲酯替代5-氨基戊酸甲酯外，合成方法同实施例110。
1H NMR(600MHz,CDCl3)δ11.23(s,1H),9.93(s,1H),8.02(s,1H),7.52–7.46(m,2H),7.34(td,J＝8.1,1.6Hz,1H),7.22(dd,J＝8.3,7.6Hz,4H),7.06(dd,J＝14.0,6.7Hz,3H),6.99(t,J＝7.4Hz,1H),6.92(d,J＝8.6Hz,2H),6.88(s,1H),6.83(d,J＝7.8Hz,2H),6.28(t,J＝5.8Hz,1H),5.96(t,J＝5.8Hz,1H),4.97(dd,J＝12.3,5.4Hz,1H),3.61(s,3H),3.42–3.35(m,1H),3.34–3.30(m,1H),3.27(dt,J＝19.6,6.4Hz,3H),3.22–3.15(m,1H),2.82–2.71(m,2H),2.14(dt,J＝7.6,6.0Hz,4H),1.68–1.54(m,6H),1.29–1.18(m,4H).LR-MS(ESI)m/z 814(M+1).
实施例113
Figure BDA0002543200280000851
除用4-氨甲基苯甲酸甲酯替代5-氨基戊酸甲酯，以及N-叔丁氧羰基-1,3-丙二胺替代N-叔丁氧羰基-1,4-丁二胺外，合成方法同实施例110。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.85(s,1H),11.06(s,1H),9.26(t,J＝5.6Hz,1H),8.44(s,1H),8.32(s,1H),7.98–7.87(m,2H),7.59(t,J＝14.9Hz,1H),7.51–7.41(m,2H),7.41–7.30(m,3H),7.30–7.26(m,2H),7.26–7.22(m,1H),7.22–7.13(m,1H),7.13–7.04(m,4H),6.98(dd,J＝14.9,3.1Hz,1H),6.79(s,1H),5.01–4.81(m,1H),4.11(d,J＝5.6Hz,2H),3.67(s,3H),3.42(t,J＝10.9Hz,2H),3.35(t,J＝15.4Hz,2H),2.61–2.19(m,4H),1.99–1.78(m,2H).LR-MS(ESI)m/z 806(M+1).
实施例114
Figure BDA0002543200280000852
除用4-氨甲基苯甲酸甲酯替代5-氨基戊酸甲酯，以及N-叔丁氧羰基-1,5-戊二胺替代N-叔丁氧羰基-1,4-丁二胺外，合成方法同实施例110。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.85(s,1H),11.06(s,1H),9.26(t,J＝5.6Hz,1H),8.64(s,1H),8.31(s,1H),7.98–7.85(m,2H),7.59(t,J＝15.1Hz,1H),7.51–7.45(m,1H),7.44–7.34(m,3H),7.33–7.26(m,3H),7.26–7.22(m,1H),7.22–7.13(m,1H),7.13–7.03(m,3H),7.02–6.94(m,2H),6.79(s,1H),5.13–4.73(m,1H),4.11(d,J＝5.6Hz,2H),3.67(s,3H),3.43–3.10(m,4H),2.64–2.20(m,4H),1.73–1.45(m,4H),1.39–1.19(m,2H).LR-MS(ESI)m/z834(M+1).
实施例115
Figure BDA0002543200280000861
除用4-氨甲基苯甲酸甲酯替代5-氨基戊酸甲酯外，合成方法同实施例110。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ11.92(s,1H),9.33(s,1H),8.23(s,1H),7.60(s,2H),7.47(d,J＝6.8Hz,1H),7.43–7.35(m,1H),7.31(d,J＝7.2Hz,1H),7.21(t,J＝7.9Hz,4H),7.08(s,1H),7.00(t,J＝7.2Hz,4H),6.89(s,1H),6.84(d,J＝8.0Hz,2H),6.79(d,J＝8.6Hz,1H),6.20(t,J＝5.3Hz,1H),4.91(dd,J＝11.5,5.4Hz,1H),4.58(s,2H),3.43(s,3H),3.23(s,2H),2.84–2.62(m,3H),2.05(s,1H),1.77(s,2H),1.66(s,4H).LR-MS(ESI)m/z820(M+1).
实施例116
Figure BDA0002543200280000862
除用4-氨甲基苯甲酸甲酯替代5-氨基戊酸甲酯，以及N-叔丁氧羰基-1,6-己二胺替代N-叔丁氧羰基-1,4-丁二胺外，合成方法同实施例110。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.85(s,1H),11.06(s,1H),9.26(t,J＝5.6Hz,1H),8.64(s,1H),7.96(s,1H),7.95–7.89(m,2H),7.59(t,J＝14.9Hz,1H),7.51–7.44(m,1H),7.44–7.37(m,2H),7.37–7.32(m,2H),7.31–7.26(m,2H),7.24(dd,J＝7.7,3.1Hz,1H),7.22–7.13(m,1H),7.13–7.04(m,4H),6.98(dd,J＝14.9,3.1Hz,1H),6.79(s,1H),5.07–4.80(m,1H),4.11(d,J＝5.6Hz,2H),3.67(s,3H),3.30(t,J＝14.5Hz,4H),2.63–2.21(m,4H),1.68–1.47(m,4H),1.46–1.19(m,4H).LR-MS(ESI)m/z 848(M+1).
实施例117
Figure BDA0002543200280000863
实施例117a
Figure BDA0002543200280000871
将化合物1g(0.2g,0.555mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(2mL)后，加入N,N-二异丙基乙胺(0.197mL,1.11mmol)、N-羟基-7-偶氮苯并三氮唑(0.106g,0.776mmol)和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(0.148g,0.776mmol)，室温反应20分钟后加入9-氨基-4,7-二氧杂壬酸叔丁酯(0.144g,0.832mmol)。在室温下搅拌4小时至反应完全。加入水淬灭反应，乙酸乙酯萃取后用水和饱和氯化钠溶液洗涤，合并有机相并经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过快速层析法(硅胶0-7％二氯甲烷/甲醇梯度)分离出产物。将所得产物溶于4M的HCl的二氧六环溶液(5mL)中，60℃反应4小时后减压浓缩除去溶剂得到化合物117a。
将化合物117a(0.1g,0.192mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)，然后滴加草酰氯(0.029g,0.231mmol)的二氯甲烷溶液(1mL)，室温反应4个小时后加入泊马度胺(0.105g,0.385mmol)，继续反应过夜后淬灭反应，乙酸乙酯萃取后用水和饱和氯化钠溶液洗涤，合并有机相并经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过快速层析法(硅胶0-7％二氯甲烷/甲醇梯度)分离出产物117。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.06(s,1H),10.01(s,1H),8.98(t,J＝7.4Hz,1H),8.31(s,1H),8.05(dd,J＝14.9,3.1Hz,1H),7.79(t,J＝14.9Hz,1H),7.48(dd,J＝14.8,3.0Hz,1H),7.45–7.37(m,3H),7.28(m,2H),7.23–7.13(m,1H),7.13–7.04(m,4H),4.60(t,J＝14.9Hz,1H),3.77–3.63(m,7H),3.52(s,4H),3.03(td,J＝21.9,7.4Hz,2H),2.87–2.65(m,1H),2.59–2.41(m,4H),2.38–2.15(m,1H).LR-MS(ESI)m/z 775(M+1).
实施例118
Figure BDA0002543200280000872
除用12-氨基-4,7,10-三氧杂十二烷酸叔丁酯替代9-氨基-4,7-二氧杂壬酸叔丁酯外，合成方法同实施例117。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.85(s,1H),11.06(s,1H),10.01(s,1H),8.98(t,J＝7.3Hz,1H),8.29(s,1H),8.05(dd,J＝14.9,3.1Hz,1H),7.79(t,J＝14.9Hz,1H),7.48(dd,J＝14.8,3.1Hz,1H),7.45–7.37(m,3H),7.30(dd,J＝12.7,2.3Hz,1H),7.27(dd,J＝12.6,2.3Hz,1H),7.23–7.13(m,1H),7.13–7.04(m,3H),6.42(s,1H),4.57(t,J＝15.0Hz,1H),3.78–3.62(m,7H),3.55–3.39(m,8H),3.03(td,J＝21.6,7.3Hz,2H),2.77–2.12(m,6H).LR-MS(ESI)m/z 819(M+1).
实施例119
除15-氨基-4,7,10,13-四氧杂十五烷酸叔丁酯替代9-氨基-4,7-二氧杂壬酸叔丁酯外，合成方法同实施例117。
Figure BDA0002543200280000881
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.85(s,1H),11.06(s,1H),10.01(s,1H),8.98(t,J＝7.3Hz,1H),8.31(s,1H),8.05(dd,J＝14.9,3.1Hz,1H),7.79(t,J＝14.9Hz,1H),7.51–7.39(m,3H),7.39–7.28(m,2H),7.26(dd,J＝12.6,2.3Hz,1H),7.23–7.13(m,1H),7.13–7.02(m,4H),5.08–4.78(m,1H),3.77–3.62(m,7H),3.54–3.21(m,12H),3.12–2.96(m,2H),2.67–2.22(m,6H).LR-MS(ESI)m/z 863(M+1).
实施例120
Figure BDA0002543200280000882
除用来那度胺替代泊马度胺外，合成方法同实施例118。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.85(s,1H),11.06(s,1H),9.41(s,1H),8.98(t,J＝7.3Hz,1H),7.86(s,1H),7.68(dd,J＝13.8,4.2Hz,1H),7.62–7.49(m,2H),7.48–7.36(m,3H),7.30(dd,J＝12.6,2.3Hz,1H),7.27(dd,J＝12.7,2.3Hz,1H),7.23–7.16(m,2H),7.15–7.03(m,3H),5.15–4.77(m,1H),4.39(s,2H),3.77–3.59(m,7H),3.52(s,8H),3.04(t,J＝8.6Hz,2H),2.66–2.17(m,6H).LR-MS(ESI)m/z 805(M+1).
实施例121
Figure BDA0002543200280000891
除用实施例81a化合物替代实施例1g化合物外，合成方法同实施例115。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.83(s,1H),11.05(s,1H),9.25(t,J＝5.6Hz,1H),8.63(s,1H),8.29(s,1H),8.06–7.84(m,2H),7.58(t,J＝14.9Hz,1H),7.37–7.31(m,2H),7.31–7.21(m,3H),7.03–6.92(m,2H),6.88(s,1H),6.84(d,J＝16.0Hz,2H),6.78(t,J＝7.5Hz,1H),5.58–5.52(m,1H),5.51(s,1H),4.10(d,J＝5.6Hz,2H),3.67(s,3H),3.30(t,J＝9.9Hz,4H),2.71–2.43(m,1H),2.38–2.17(m,3H),2.15(s,6H),1.68–1.39(m,4H),1.35(s,6H).LR-MS(ESI)m/z 925(M+1).
实施例122
Figure BDA0002543200280000892
除用来那度胺替代泊马度胺外，合成方法同实施例121。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.85(s,1H),11.06(s,1H),9.26(t,J＝5.6Hz,1H),8.64(s,1H),8.28(s,1H),8.15–7.69(m,2H),7.38–7.30(m,3H),7.29–7.22(m,3H),6.98(t,J＝7.5Hz,2H),6.94(s,1H),6.90(s,1H),6.90–6.85(m,1H),6.79(s,1H),5.52(s,1H),5.15–4.75(m,1H),4.39(s,2H),4.11(d,J＝5.6Hz,2H),3.67(s,3H),3.42–3.21(m,4H),2.59–2.29(m,3H),2.15(s,6H),2.13–1.95(m,1H),1.71–1.38(m,4H),1.35(s,6H).LR-MS(ESI)m/z 911(M+1).
实施例123
Figure BDA0002543200280000901
除用实施例106a化合物替代实施例1g化合物外，合成方法同实施例115。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.85(s,1H),11.07(s,1H),10.01(s,1H),8.78(s,1H),7.96–7.87(m,2H),7.67(dd,J＝14.8,3.0Hz,1H),7.63–7.53(m,2H),7.40(s,1H),7.37–7.31(m,2H),7.25(dd,J＝15.1,3.0Hz,1H),7.09(dd,J＝15.0,2.9Hz,1H),6.98(dd,J＝15.0,3.1Hz,1H),6.29(t,J＝15.0Hz,1H),4.70(dt,J＝22.5,11.1Hz,1H),4.45(dd,J＝21.2,7.9Hz,1H),4.11(s,2H),3.67(s,3H),3.60(s,1H),3.36–3.24(m,4H),2.38–1.90(m,4H),1.66–1.40(m,4H),1.34(s,3H),1.33(s,3H).LR-MS(ESI)m/z 787(M+1).
实施例124
Figure BDA0002543200280000902
除用实施例81a化合物替代实施例1g化合物外，合成方法同实施例119。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.85(s,1H),11.06(s,1H),10.01(s,1H),8.98(t,J＝7.5Hz,1H),8.31(s,1H),8.05(dd,J＝14.9,3.1Hz,1H),7.79(t,J＝14.9Hz,1H),7.40(dd,J＝15.1,3.0Hz,1H),7.29(dd,J＝14.9,2.8Hz,1H),7.24(d,J＝2.9Hz,1H),7.11(s,1H),6.98(d,J＝14.9Hz,1H),6.84(d,J＝16.0Hz,2H),5.52(s,1H),5.09–4.62(m,1H),3.78–3.62(m,7H),3.54–3.20(m,12H),3.11–2.96(m,2H),2.71–2.23(m,6H),2.15(s,6H),1.35(s,6H)LR-MS(ESI)m/z 967(M+1).
实施例125
Figure BDA0002543200280000903
除用来那度胺替代泊马度胺外，合成方法同实施例124。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.85(s,1H),11.06(s,1H),10.01(s,1H),8.98(t,J＝7.5Hz,1H),8.20(s,1H),7.77(dd,J＝14.9,3.1Hz,1H),7.62(t,J＝14.9Hz,1H),7.31(t,J＝3.0Hz,1H),7.28(t,J＝3.0Hz,1H),7.24(d,J＝2.9Hz,1H),6.98(d,J＝15.6Hz,2H),6.79(d,J＝15.8Hz,2H),5.52(s,1H),5.37–5.20(m,1H),4.39(s,2H),3.78–3.63(m,7H),3.56–3.18(m,12H),3.04(t,J＝7.1Hz,2H),2.62–2.28(m,5H),2.15(s,6H),2.12–1.89(m,1H),1.35(s,6H).LR-MS(ESI)m/z 954(M+1).
实施例126
Figure BDA0002543200280000911
除了用异丙醇替代4-氟-2,6-二甲基苯酚，合成方法同121.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.21(s,1H),11.10(s,1H),8.92(t,J＝6.0Hz,1H),8.46(t,J＝5.7Hz,1H),7.80(d,J＝8.2Hz,2H),7.56(dd,J＝8.6,7.1Hz,1H),7.44–7.34(m,4H),7.21(s,1H),7.11(d,J＝8.6Hz,1H),7.06–6.98(m,2H),6.80(s,1H),6.59(t,J＝6.0Hz,1H),5.05(dd,J＝12.8,5.4Hz,1H),4.95(s,1H),4.54–4.44(m,3H),3.57(s,3H),3.33–3.25(m,3H),2.94–2.82(m,1H),2.71–2.54(m,2H),2.08–1.97(m,1H),1.65-1.56(m,4H),1.44(s,6H),1.13(d,J＝6.0Hz,6H).
实施例127
Figure BDA0002543200280000912
除了用环丙醇替代4-氟-2,6-二甲基苯酚，合成方法同121.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.24(s,1H),11.11(s,1H),8.91(t,J＝5.9Hz,1H),8.46(t,J＝5.7Hz,1H),7.80(d,J＝7.9Hz,2H),7.56(t,J＝7.8Hz,1H),7.45(d,J＝8.1Hz,1H),7.41–7.36(m,3H),7.33(d,J＝8.5Hz,1H),7.17(s,1H),7.11(d,J＝8.6Hz,1H),7.01(d,J＝7.0Hz,1H),6.68(s,1H),6.59(t,J＝6.1Hz,1H),5.05(dd,J＝12.8,5.4Hz,1H),4.97(s,1H),4.49(d,J＝5.7Hz,2H),3.83–3.72(m,1H),3.56(s,3H),3.32–3.25(m,3H),2.95–2.80(m,1H),2.70–2.53(m,2H),2.08–1.97(m,1H),1.70–1.55(m,4H),1.44(s,6H),0.78–0.70(m,2H),0.61–0.56(m,2H).
实施例128
Figure BDA0002543200280000921
除了用苯酚替代4-氟-2,6-二甲基苯酚，合成方法同121.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.30(s,1H),11.11(s,1H),8.95(t,J＝6.1Hz,1H),8.47(t,J＝5.2Hz,0H),7.81(d,J＝7.9Hz,2H),7.62–7.53(m,2H),7.48(dd,J＝8.6,2.4Hz,1H),7.38(d,J＝8.1Hz,2H),7.32–7.22(m,3H),7.12(d,J＝8.6Hz,1H),7.01(d,J＝7.3Hz,2H),6.97(d,J＝8.7Hz,1H),6.93(d,J＝2.1Hz,1H),6.84(d,J＝8.3Hz,2H),6.60(t,J＝5.7Hz,1H),5.11(s,1H),5.05(dd,J＝12.8,5.3Hz,1H),4.50(d,J＝5.7Hz,2H),3.52(s,3H),3.32–3.24(m,3H),2.95–2.81(m,1H),2.70–2.55(m,2H),2.07–2.00(m,1H),1.66–1.55(m,4H),1.48(s,6H).
实施例129
Figure BDA0002543200280000922
除了用2，4-二氟苯酚替代4-氟-2,6-二甲基苯酚，合成方法同121.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.32(s,1H),11.10(s,1H),8.93(t,J＝5.8Hz,1H),8.46(t,J＝5.7Hz,1H),7.81(d,J＝8.3Hz,2H),7.60–7.53(m,2H),7.45(dd,J＝8.6,2.4Hz,1H),7.42–7.34(m,3H),7.32(s,1H),7.14–7.07(m,2H),7.05–6.97(m,2H),6.90(s,1H),6.82(d,J＝8.5Hz,1H),6.59(t,J＝6.0Hz,1H),5.09(s,1H),5.05(dd,J＝12.8,5.4Hz,1H),4.50(d,J＝5.8Hz,2H),3.56(s,3H),3.33–3.26(m,3H),2.95–2.81(m,1H),2.64–2.53(m,2H),2.06–1.97(m,1H),1.61(s,4H),1.47(s,6H).
实施例130
Figure BDA0002543200280000923
除了用化合物92b替代化合物110a以外，合成方法同115。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.25(s,1H),11.11(s,1H),8.90(t,J＝5.9Hz,1H),8.46(t,J＝5.7Hz,1H),7.80(d,J＝7.9Hz,2H),7.56(t,J＝7.8Hz,1H),7.45(d,J＝8.1Hz,1H),7.41–7.36(m,3H),7.33(d,J＝8.5Hz,1H),7.17(s,1H),7.11(d,J＝8.6Hz,1H),7.01(d,J＝7.0Hz,1H),6.68(s,1H),6.54(t,J＝6.1Hz,1H),5.05(dd,J＝12.8,5.4Hz,1H),4.97(s,1H),4.49(d,J＝5.7Hz,2H),3.70(s,3H),3.56(s,3H),3.32–3.26(m,3H),2.95–2.80(m,1H),2.71–2.53(m,2H),2.07–1.97(m,1H),1.70–1.55(m,4H),1.44(s,6H)
生物活性检测
试验一：分子水平酶的抑制实验
BRD4(1)/(2)分子水平抑制实验方法：
将化合物用DMSO配制成10mM母液，再稀释10倍得到1mM储液备用。然后用BindingDomain diluent buffer(#62DLBDDF，Cisbio)稀释10倍后(终体系中DMSO浓度为0.1％)，依据实验要求的起始浓度，1：5梯度稀释，共5个浓度。
用Binding Domain diluent buffer(#62DLBDDF，Cisbio)稀释BRD4(1)/(2)至5倍终浓度备用。用Binding Domain diluent buffer(#62DLBDDF，Cisbio)稀释[Lys(5,8,12,16)Ac]H4(1-21)-biotin(#64989，Cisbio)至5倍终浓度备用。
在384-well ProxiPlate(#6008280，PE)中加入4μL配制好的BRD4(1)/BRD(2)，然后转移2μL化合物到反应板中，最后在反应板中加4μL配制好的[Lys(5,8,12,16)Ac]H4(1-21)-biotin(#64989，Cisbio)。同时设置两组对照孔，分别为有BRD4对照(4μLBRD4(1)或者BRD4(2)+4μL配制好的Lys(5,8,12,16)Ac]H4(1-21)-biotin+2μL Binding Domaindiluent buffer)，以及无BRD4对照(4μL配制好的Lys(5,8,12,16)Ac]H4(1-21)-biotin+6μL Binding Domain diluent buffer)。贴上贴膜，37℃孵育30min。
用Detection buffer配制SA-XL665(#610SAXLA，Cisbio)和MAb Anti-6HIS-Eucryptate Gold(#61HI2KLB，Cisbio)或者MAb Anti FLAG M2-Eu cryptate(#61FG2KLA，Cisbio)的检测混合物，每孔加入10μL检测混合物，室温孵育3h，使用多功能酶标仪Envision读取mp值，参数设置如下：
Top mirror LANCE/DELFIA Dual/Bias(446)
Exc.Filter UV2(TRF)320
Ems.Filter APC 665
2nd Ems.Filter Europium 615
实验所得的ratio值＝665nm荧光值/615nm荧光值。
Figure BDA0002543200280000931
IC50值采用Prism软件以三参数法回归求得。
HDAC 1/6分子水平抑制实验方法
化合物粉末用DMSO配制成10mM母液，再稀释10倍得到1mM储液备用。然后用1倍Enzymatic buffer(50mM Tris-HCl pH 8.0,137mM NaCl,2.7mM KCl,1mM MgCl2,0.01％Tween20)稀释10倍后(终体系中DMSO浓度为0.1％)，依据实验要求的起始浓度，1：5梯度稀释，共5个浓度。
用1倍Enzymatic buffer稀释HDAC1(#31504，Active Motif)/HDAC6(#31943，Active Motif)至5倍终浓度备用。用1倍Enzymatic buffer稀释Histone H3(1-21)lysine9 acetylated biotinylated peptide(#AS-64361，AnaSpec)至2.5倍终浓度备用。
在384-well ProxiPlate(#6008280，PE)中加入2μL配制好的5倍HDAC1/HDAC6，然后加入4μL化合物到反应板中，最后在反应板中加4μL 2.5倍Histone H3(1-21)lysine 9acetylated biotinylated peptide(#AS-64361，AnaSpec)。同时设置两组对照孔，分别为有HDAC对照(2μLHDAC1或者HDAC6+4μL配制好的Histone H3(1-21)lysine 9 acetylatedbiotinylated peptide+4μL Enzymatic buffer)，以及无HDAC对照(4μL配制好的HistoneH3(1-21)lysine 9 acetylated biotinylated peptide+6μL Enzymatic buffer)。贴上贴膜，37℃孵育1h。
用Detection buffer(10μM SAHA in KinEASEdetection buffer)配制SA-XL665(#610SAXLA，Cisbio)和anti-H3K9me0-Eu(K)(#61KB0KAD，Cisbio)的检测混合物，每孔加入10μL检测混合物，室温孵育0.5h，使用多功能酶标仪Envision读取mp值，参数设置如下：
Top mirror LANCE/DELFIA Dual/Bias(446)
Exc.Filter UV2(TRF)320
Ems.Filter APC 665
2nd Ems.Filter Europium 615
实验所得的ratio值＝665nm荧光值/615nm荧光值。
Figure BDA0002543200280000941
IC50值采用Prism软件以三参数法回归求得。
本发明实施例中制备的化合物以及阳性对照药SAHA(HDAC泛抑制剂)、阳性对照药MS275(HDAC1选择性抑制剂)、阳性对照药OTX015(BRD4(1/2)泛抑制剂)、阳性对照药ABBV-744(BRD4(2)选择性抑制剂)对BRD4(1)/(2)以及HDAC1/6酶活数据见下表1至表2。
表1对BRD4(1)/(2)酶活IC50(nM)
Figure BDA0002543200280000951
Figure BDA0002543200280000961
表2对HDAC(1)/(6)酶活IC50(nM)
Figure BDA0002543200280000962
Figure BDA0002543200280000971
Figure BDA0002543200280000981
实验结论：在生物活性评价中，由表1可知，本发明实施例的HDAC和BRD4双靶吡咯并吡啶酮类化合物(实施例1-106化合物)都具有较好的BRD4活性。部分化合物表现出对BRD4的两个作用区域BD1和BD2的选择性，不同亚型选择性的HDAC抑制剂SAHA,MS275和ACY1215均不具有BRD4抑制活性。
由表2可知，本发明的实施例1-106化合物在具有BRD4活性的同时也具有一定的HDAC抑制活性，而相应的作为阳性对照的BRD4抑制剂ABBV-744和OTX-015不具有HDAC抑制活性。
试验例二：蛋白质免疫印迹(Western Blot)检测化合物对MV-4-11细胞中HDAC和BRD4信号通路的影响
实验方法
将对数生长期MV-4-11细胞接种于12孔培养板中。待细胞贴壁过夜后，分别加入化合物(10，100，1000nM)处理细胞24h。用预冷PBS(含1mM钒酸钠)冲洗3遍后，加入1xSDS凝胶上样缓冲液(配方为：50mM Tris-Cl(pH6.8)，100mM DTT，2％SDS，10％(v/v)甘油，0.1％(w/v)溴酚蓝)裂解细胞。细胞裂解物于沸水浴中加热15min放入-20℃保存。
蛋白样品置于密度SDS-聚丙烯酰胺凝胶中，在Tris-甘氨酸-SDS电泳缓冲液[25mmol/L Tris，250mmol/L甘氨酸(pH8.3)，0.1％SDS]中以80V电泳约20min进行压缩，随后改用120V电泳约2h进行分离。电泳结束后用半干印迹法将蛋白从凝胶转移至硝酸纤维素滤膜，转移缓冲液配方为192mmol/L甘氨酸、25mmol/L Tris、20％甲醇，按所需蛋白分子量大小转移约1h。用丽春红(Ponceau S)染色确定转移情况和蛋白条带位置，依据蛋白Marker分子量裁剪相应目的条带，然后用封闭液(含3％BSA的TBST)室温封闭90min，与相应的抗体于4℃孵育过夜。次日，用TBST洗涤液[20mmol/L Tris-HCl(pH 7.2-7.4，室温)，150mmol/LNaCl，0.1％(v/v)Tween20]室温洗涤3次，每次10min。加入用封闭液稀释的辣根过氧化物酶标记的二抗(1：2000)，室温孵育1h。然后用TBST漂洗三次，每次10min。根据曝光强度选择合适的发光试剂显色，发光试剂分别有ECL Plus western blotting detection system和Advance ECL western blotting detection system，以及Super Signal West PicoChemiluminescent Substrate。
实验结论：实施例84和80，实施例96和81以及实施例9和100化合物在MV-4-11细胞株上对HDAC和BRD4信号通路的影响见图1。
由图可知，实施例84和80化合物能够剂量依赖的上调组蛋白H3的乙酰化水平，但是对微管蛋白的乙酰化水平影响不大，其作用效果和HDAC1选择性抑制剂MS275相当，说明该类化合物是HDAC1选择性抑制剂；同时化合物能够剂量依赖的下调c-Myc的表达，作用效果和BRD4抑制剂ABBV-744类似。
实施例96化合物能够同时剂量依赖的上调组蛋白H3和微管蛋白的乙酰化水平，与泛HDAC抑制剂SAHA作用效果类似，说明该化合物具有泛HDAC抑制活性。同时该化合物能够剂量依赖的下调c-Myc的表达，作用效果和BRD4抑制剂ABBV-744类似。
实施例100化合物能够剂量依赖的上调微管蛋白的乙酰化水平，但是对组蛋白H3乙酰化水平影响不大，其作用效果和选择性HDAC6抑制剂ACY1215类似，说明该化合物具有一定的HDAC6选择性抑制活性。同时该化合物能够剂量依赖的下调c-Myc的表达，作用效果和BRD4抑制剂ABBV-744类似。
综上所述，通过在MV-4-11细胞株上免疫印迹实验，证明实施例84和80化合物是选择性HDAC1和BRD4双靶抑制剂，实施例96化合物是泛HDAC和BRD4双靶抑制剂，实施例100化合物是选择性HDAC6和BRD4双靶抑制剂。
试验例三：细胞水平抑制试验
实验方法
细胞的生长抑制检测采用CCK-8方法。
处于对数生长期的细胞按合适密度接种至96孔培养板(#3599，Corning)，每孔90μL培养过夜。
10mM的待测化合物用DMSO以1：3梯度稀释后，吸取2μl加入到198μl的无菌PBS中稀释100倍待用。将稀释好的化合物吸取10μl加入到细胞板作用72h，每个浓度设三复孔，并设相应浓度的溶媒对照及无细胞调零孔。作用结束后，每孔加入10μL CCK-8，培养箱中孵育4h后，SpectraMax 190酶标仪测定450nm波长下的光密度(OD值)。
化合物抑制率和IC50值采用酶标仪随机附带软件以四参数法回归求得。
实施例化合物以及阳性对照药SAHA、阳性对照药MS275、阳性对照药OTX015、阳性对照药ABBV-744对不同肿瘤细胞株抑制活性见表3：
表3：对不同细胞株细胞抑制IC50(μM)
Figure BDA0002543200280001001
N.T.是指未测定。
实验结论：由表3可知，泛HDAC和BRD4双靶抑制剂实施例7和实施例96化合物在人急性单核细胞白血病细胞株MV-4-11及人骨髓增生异常综合征细胞株SKM-1显示出了强抑制活性，优于阳性对照HDAC抑制剂SAHA和ABBV-744。
HDAC1和BRD4双靶抑制剂实施例10，实施例80和实施例84化合物较好地抑制人急性单核细胞白血病细胞株MV-4-11及人骨髓增生异常综合征细胞株SKM-1细胞增殖，同时在人胰腺癌MIA Paca2细胞株上表现出较好的抑制活性，强于阳性化合物ABBV-744和MS275。
靶向泛素化降解BRD4蛋白的实施例115，实施例127和实施例128化合物在MV-4-11细胞株上表现出较强的抑制细胞增殖活性，强于BET抑制剂ABBV-744，和阳性对照d-BET6相当。
试验例四：免疫印迹杂交(Western Blot)检测化合物BRD4蛋白降解作用
实验方法
将对数生长期MV-4-11细胞接种于12孔培养板中，分别加入不同浓度化合物(10nM，100nM，1000nM)处理细胞3h。将每孔细胞吹匀后收集到1.5ml离心管中，做好标记，450g离心5分钟，弃上清。加入1ml预冷PBS(含1mM钒酸钠)清洗三遍，每次均离心弃上清。，最后加入1xSDS凝胶上样缓冲液(配方为：50mM Tris-Cl(pH6.8)，100mM DTT，2％SDS，10％(v/v)甘油，0.1％(w/v)溴酚蓝)裂解细胞。细胞裂解物于沸水浴中加热10min。取上述细胞裂解液进行SDS-PAGE电泳，电泳结束后，用半干电转移系统将蛋白转移至硝酸纤维素膜上。转移结束后，用丽春红(Ponceau S)染色确定转移情况和蛋白条带在硝酸纤维素膜上的位置，标记后用含3％BSA的封闭液[5％BSA，20mM Tris-HCl pH7.2-7.4，150mM NaCl，0.1％Tween-20]于摇床室温封闭60min。然后，将膜置于抗体稀释液(3％BSA)稀释的一抗中4℃过夜。用洗液[100mM Tris-HCl pH7.2-7.4，0.9％NaCl，0.2％Tween-20]室温洗涤三次，每次10min。加入辣根过氧化物酶标记的二抗，室温置于摇床上平缓摇动1h。再用洗液洗涤三次后，根据曝光强度选择合适的发光试剂显色。
时间依赖降解的实验方案：将对数生长期MV-4-11细胞接种于6孔培养板中，分别于收样时间点前1h,3h,6h,12h,24h加入化合物处理细胞。收样时，将每孔细胞吹匀后收集到2ml离心管中，做好标记，450g离心5分钟，弃上清。加入1ml预冷PBS(含1mM钒酸钠)清洗三遍，每次均离心弃上清。最后加入1xSDS凝胶上样缓冲液(配方为：50mM Tris-Cl(pH6.8)，100mM DTT，2％SDS，10％(v/v)甘油，0.1％(w/v)溴酚蓝)裂解细胞。细胞裂解物于沸水浴中加热15min放入-20℃保存。取上述细胞裂解液进行SDS-PAGE电泳，电泳结束后，用半干电转移系统将蛋白转移至硝酸纤维素膜上。转移结束后，用丽春红(Ponceau S)染色确定转移情况和蛋白条带在硝酸纤维素膜上的位置，标记后用含3％BSA的封闭液[5％BSA，20mM Tris-HCl pH7.2-7.4，150mM NaCl，0.1％Tween-20]于摇床室温封闭60min。然后，将膜置于抗体稀释液(3％BSA)稀释的一抗中4℃过夜。用洗液[100mM Tris-HCl pH7.2-7.4，0.9％NaCl，0.2％Tween-20]室温洗涤三次，每次10min。加入辣根过氧化物酶标记的二抗，室温置于摇床上平缓摇动1h。再用洗液洗涤三次后，根据曝光强度选择合适的发光试剂显色。
实验结论：不同浓度的(10nM，100nM，1000nM)代表化合物3h时对BRD4蛋白降解结果见图2。由图可知，实施例111，112，115，127和128化合物在3h时能够起到降解BRD4蛋白的作用，其中实施例115化合物在3h时对BRD4-Short的降解作用不明显。
化合物在100nM浓度条件下在不同时间点对BRD4的降解作用结果见图3。由图可知，实施例115化合物对BRD4蛋白的降解作用随着时间的延长而逐渐增加，24h基本完全降解；和阳性对照dBET6类似，实施例128化合物在6h完全降解了BRD4后出现对BRD4-Short的反弹。随着时间的增加，实施例115和实施例128化合物对其下游蛋白c-Myc出现持续的下调作用。
以上结合附图详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，这种简单变型均属于本发明的保护范围。

Claims (19)

1.一种式I化合物或其药学上可接受的盐：
Figure FDA0003980430320000011
其中，
R1选自
Figure FDA0003980430320000012
Figure FDA0003980430320000013
其中，Ra表示一个或多个取代基，各自独立地选自氢、卤素，
X选自C1-C6直链或支链亚烷基、C1-C6直链或支链亚烷基-CONH-C1-C4直链或支链亚烷基、–(CH2CH2O)lCH2CH2–、C1-C4直链或支链亚烷基-亚苯基，其中l为1-4的整数；
A选自苯基、吡啶基；
R2表示1或2个取代基，各自独立地选自氢、卤素、羟基、氰基、C1-6直链或支链烷基、卤代C1-6直链或支链烷基、C1-6直链或支链烷氧基、C3-6单环烷基氧基、苯氧基、羟基C1-6直链或支链烷基、-(Rb)NS(O)2Rc、-S(O)2Rd、ReO(C＝O)-、RfRgN-甲基、
Figure FDA0003980430320000014
C3-6单环烷基甲氧基，其中，Rb、Rc、Rd、Re、Rf和Rg各自独立地为氢、C1-3直链或支链烷基或卤代烷基；其中所述苯氧基任选各自独立地被1、2、或3个选自卤素、甲基的基团取代；
或者，R2表示两个或两个以上取代基，其中两个相邻的取代基连接，并与所连接的A上的碳原子一起形成
Figure FDA0003980430320000015
所示的杂环；
其中，所述“卤素”选自氟、氯、溴或碘。
2.根据权利要求1所述的式I化合物或其药学上可接受的盐，其中，各个所述直链或支链的烷基各自独立地为选自甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基，1-甲基丁基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、异戊基、1-乙基丙基、新戊基、正己基、1-甲基戊基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、异己基、1,1-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、3,3-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2,3-二甲基丁基、2-乙基丁基。
3.根据权利要求1所述的式I化合物或其药学上可接受的盐，其中，各个所述直链或支链的烷基各自独立地为选自甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基或异丁基。
4.根据权利要求1所述的式I化合物或其药学上可接受的盐，其中，各个所述直链或支链的亚烷基各自独立地为C1-C3直链或支链亚烷基。
5.根据权利要求1所述的式I化合物或其药学上可接受的盐，其中，各个所述C3-C6单环烷基为选自环丙烷、环丁烷、环戊烷、或环己烷。
6.根据权利要求1所述的式I化合物或其药学上可接受的盐，其中，所述式I化合物选自以下化合物：
Figure FDA0003980430320000021
Figure FDA0003980430320000031
Figure FDA0003980430320000041
Figure FDA0003980430320000051
Figure FDA0003980430320000061
Figure FDA0003980430320000071
Figure FDA0003980430320000081
Figure FDA0003980430320000091
Figure FDA0003980430320000101
Figure FDA0003980430320000111
Figure FDA0003980430320000121
Figure FDA0003980430320000131
Figure FDA0003980430320000141
Figure FDA0003980430320000151
Figure FDA0003980430320000161
7.根据权利要求1-6任一项所述的式I化合物或其药学上可接受的盐，其中，所述药学上可接受的盐包括所述式I化合物的阴离子盐和阳离子盐。
8.根据权利要求1-6任一项所述的式I化合物或其药学上可接受的盐，其中，所述药学上可接受的盐包括所述式I化合物的碱金属的盐、碱土金属的盐、铵盐；所述碱金属包括钠、钾、锂、铯，所述碱土金属包括镁、钙、锶。
9.根据权利要求1-6任一项所述的式I化合物或其药学上可接受的盐，其中，所述药学上可接受的盐包括所述式I化合物与有机碱形成的盐；所述有机碱包括三烷基胺、吡啶、喹啉、哌啶、咪唑、甲基吡啶、二甲氨基吡啶、二甲基苯胺、N-烷基吗啉、1,5-二氮杂双环[4.3.0]壬烯-5(DBN)、1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳烯-7(DBU)、1,4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷(DABCO)；所述三烷基胺包括三甲胺、三乙胺、N-乙基二异丙胺；所述N-烷基吗啉包括N-甲基吗啉。
10.根据权利要求1-6任一项所述的式I化合物或其药学上可接受的盐，其中，所述药学上可接受的盐包括所述式I化合物与酸形成的盐；所述酸包括无机酸、有机酸；所述无机酸包括盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、硝酸、磷酸、碳酸；所述有机酸包括甲酸、乙酸、丙酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、马来酸、乳酸、苹果酸、枸橼酸、酒石酸、碳酸、苦味酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、谷氨酸、双羟萘酸。
11.制备权利要求1-6任一项所述的式I化合物或其药学上可接受的盐的方法，
Figure FDA0003980430320000171
其特征在于，包括：
将式II化合物与NH2X-R1发生缩合反应，得到式I化合物，
Figure FDA0003980430320000172
其中，式I中，A、R2、X、R1如权利要求1-6任一项中所定义；
式II中，P为氢或保护基团，所述P为保护基团时，为苄基、对甲苯磺酰基、或(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)；Q为氢或C1-C10直链或支链烷基；A和R2如权利要求1-6任一项中所定义；
式NH2X-R1中，X、R1如权利要求1-6任一项中所定义；
或者，其特征在于，包括：
将式III化合物与式NH2R01发生缩合反应，得到式I化合物，
Figure FDA0003980430320000173
其中，
式I中，R1为
Figure FDA0003980430320000181
A、R2、X、Ra如权利要求1-6任一项中所定义；
式III中，A、R2、X如权利要求1-6任一项中所定义，M为氢或C1-C10直链或支链烷基；
式NH2R01中，R01为羟基、
Figure FDA0003980430320000182
Ra如权利要求1-6任一项中所定义；
或者，其特征在于，包括：将式IV化合物与NH2R02发生缩合反应，得到式I化合物，
Figure FDA0003980430320000183
其中，式I中，A、R2、R1如权利要求1-6任一项中所定义；X为C1-C6直链或支链亚烷基-CONH-C1-C4直链或支链亚烷基，
式IV中，A、R2如权利要求1-6任一项中所定义；M为氢或C1-C10直链或支链烷基；X1为C1-C6直链或支链亚烷基；
式NH2R02中，R02为C1-C6直链或支链亚烷基-R1，R1如权利要求1-6任一项中所定义。
12.根据权利要求11所述的方法，其特征在于，所述式III化合物或式IV化合物的制备方法包括：
将式II化合物与式H2NXCOOM化合物或式H2NX1COOM化合物发生缩合反应，得到式III化合物或式IV化合物；
式H2NXCOOM中，X定义同式III中的定义；
式H2NX1COOM中，X1定义同式IV中的定义。
13.根据权利要求11或12所述的方法，其特征在于，式II化合物的制备方法包括：将式V化合物与芳基硼酸发生Suzuki偶联反应得到式II化合物，
或者，
将式V化合物通过Suzuki偶联反应得到式VI的芳基硼酸酯化合物，然后将式VI的芳基硼酸酯化合物与溴代物发生Suzuki偶联反应得到式II化合物，
所述Suzuki偶联反应在钯催化剂的存在下在碱性条件下于溶剂中进行，在配体的存在下进行；所述Suzuki偶联反应在60℃至150℃的温度下进行，该反应通过微波辐射促发；所述碱性条件所用的碱包括CsF、Cs2CO3、K2CO3、三乙胺、二异丙基乙胺、DMAP中的一种或者两种以上；所述钯催化剂包括：Pd2(dba)3、Pd(OAc)2或Pd(PPh3)4；所述配体包括：1,3,5,7-四甲基-6-苯基-2,4,8-三氧杂-6-磷酰金刚烷、2-二环己基磷-2’,4’,6’-三异丙基联苯、1,1’-双(二苯基磷烷基)二茂铁；所述溶剂包括：甲醇、二甲氧基乙烷、N,N-二甲基甲酰胺、二甲亚砜、二氧杂环己烷、四氢呋喃和水，或其混合物；
Figure FDA0003980430320000191
式V中，PG表示保护基团，为苄基、对甲苯磺酰基、(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)，Y表示卤素，Q为氢或C1-C10直链或支链烷基；
式VI中，PG和Q的定义与式V中相同；
所述芳基硼酸为式VII化合物：
Figure FDA0003980430320000192
其中，A和R2的定义与式II中的相同；
所述溴代物为式VIII化合物：
Figure FDA0003980430320000193
其中，A和R2的定义与式II中的相同。
14.根据权利要求13所述的方法，所述式V化合物的制备方法包括：
将式XIV化合物与N,N-二甲基甲酰胺二甲基缩醛反应得到式XIII化合物，所得式XIII化合物在酸性条件下还原得到式XII化合物，式XII化合物在强碱条件下和卤化物反应得到式XI化合物，所得式XI化合物在强碱条件下与氯甲酸烷基酯反应得到式X化合物，对所得式X化合物用酸处理得到式IX化合物，在碱性条件和溶剂中用甲基化试剂将式IX化合物甲基化得到式V化合物；
式XIV化合物与N,N-二甲基甲酰胺二甲基缩醛的反应60℃至100℃的温度下进行；在溶剂中进行，所述溶剂包括：N,N-二甲基甲酰胺；
所述式XIII化合物在酸性条件下的还原反应中，所述酸包括：氯化铵或乙酸；还原反应所用的还原剂包括还原铁粉；
所述式XII化合物在强碱条件下和卤化物的反应中，所述强碱包括氢化钠；
所得式XI化合物在强碱条件下与氯甲酸烷基酯的反应中，所述强碱包括二异丙基氨基锂；
所述式X化合物用酸处理步骤中，在溶剂中于40℃至100℃的温度下进行，所述酸包括盐酸、氢溴酸；所述溶剂包括二氧六环、水；
在式IX化合物甲基化反应，在溶剂中于40℃至100℃的温度下进行，甲基化试剂为碘甲烷；所述碱性条件所用的碱包括氢化钠、碳酸铯或碳酸钾；所述溶剂包括N，N-二甲基甲酰胺或二甲亚砜
Figure FDA0003980430320000201
式IX至式XIV中，Y、PG和Q的定义与式V中相同。
15.根据权利要求11或12所述的方法，其中，所述缩合反应在碱性条件下和缩合剂的存在下，在溶剂中进行；所述缩合剂包括：N,N'-羰基二咪唑、二环己基碳二亚胺、O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲、N-羟基-7-偶氮苯并三氮唑、2-(1H-苯并三偶氮L-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲四氟硼酸酯或1-羟基苯并三唑；所述碱性条件所用的碱包括三乙胺、二异丙基乙胺、DMAP中的一种或者两种以上；所述溶剂包括：四氢呋喃、二氯甲烷或N,N-二甲基甲酰胺。
16.一种药物组合物，包括权利要求1-6任一项所述的式I化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的辅料。
17.权利要求1-6任一项所述的式I化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗HDAC或BRD介导的肿瘤的药物中的用途。
18.根据权利要求17所述的用途，其特征在于，所述肿瘤包括非小细胞肺癌、乳腺癌、甲状腺癌、胃癌、膀胱癌、子宫内膜癌、前列腺癌、宫颈癌、结肠癌、食管癌、角质母细胞瘤、骨髓瘤、横纹肌肉瘤、急性白血病、肝癌、腺癌或胰腺癌。
19.根据权利要求18所述的用途，其特征在于，所述甲状腺癌为甲状腺髓样癌、或乳头状甲状腺癌。
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