CN112094265A - 7-oh-帽柱木碱的提取方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种7‑OH‑帽柱木碱的提取方法,7‑OH‑帽柱木碱的提取方法包括以下步骤:(1)将干燥的kratom叶粉碎,并向其中加入提取剂,在常温条件下超声提取,经离心和减压浓缩后,得到第一浓缩液;(2)向第一浓缩液加入萃取剂萃取,经减压浓缩后,得到第二浓缩液;(3)第二浓缩液经硅胶柱层析分离,用洗脱剂进行梯度洗脱,得到7‑OH‑帽柱木碱。本发明中7‑OH‑帽柱木碱的提取方法操作简单、快速,所得7‑OH‑帽柱木碱的提取率为0.24%,纯度大于90%,具有更高的提取率和纯度。
Description
技术领域
本发明涉及医药技术领域,特别涉及7-OH-帽柱木碱的提取方法。
背景技术
Kratom是一种生长在泰国、马来西亚等东南亚国家的帽蕊木属药用植物,我国云南海拔1000米以上也有这种帽蕊木植物。早在1800年后期其叶片就被用来治疗肌肉疼痛、腹泻、咳嗽,还被用来减少昂贵的阿片类药物的摄入量,并用来治疗鸦片成瘾产生的戒断反应。此外,马来西亚人及泰国人也会食用这种植物,以增强他们在烈日下辛苦工作的忍耐力。Kratom的主要活性成分是吲哚生物碱,其中帽柱木碱(mitragynine)占总生物碱的66%以上,7-OH-帽柱木碱是最近几十年分离出来的一种新生物碱,研究发现它比帽柱木碱具有更强的亲脂性,易穿透血脑屏障,反应快速而高效,具有更强的抗伤害活性。
现有文献大多数采用soxhlet提取方法,利用甲醇作为溶剂从kratom叶中提取粗提物,但这些方法效率低,耗时长,需要几天才能得到粗提液;而且得到的粗提物含有较多的杂质,呈胶粘状,需要经过萃取、酸化、中和等一系列步骤才能得到较纯的7-OH-帽柱木碱,步骤繁琐、且纯度和收率较低。
发明内容
本发明的目的在于克服上述技术不足,提出一种7-OH-帽柱木碱的提取方法,该7-OH-帽柱木碱的提取方法简单高效,得到的7-OH-帽柱木碱具有较高的纯度和收率,可制备中药组合物并应用到包含该中药组合物的保健带上,起到辅助治疗鸦片成瘾产生的戒断反应和缓解肌肉疼痛、抗疲劳效果。
为达到上述技术目的,本发明提供了一种7-OH-帽柱木碱的提取方法,包括以下步骤:
将干燥的kratom叶粉碎,并向其中加入提取剂,在常温条件下超声提取,经离心和减压浓缩后,得到第一浓缩液;
向上述第一浓缩液加入萃取剂萃取,经减压浓缩后,得到第二浓缩液;
上述第二浓缩液经硅胶柱层析分离,用洗脱剂进行梯度洗脱,得到7-OH-帽柱木碱。
与现有技术相比,本发明的有益效果为:
本发明中7-OH-帽柱木碱的提取方法操作简单、快速,所得7-OH-帽柱木碱的提取率为0.24%,纯度大于90%,具有更高的提取率和纯度。
附图说明:
图1是本发明提供的7-OH-帽柱木碱的提取方法的工艺流程图;
图2是本发明提供的包含中药组合物的保健带的结构示意图;
图3是不同组小鼠力竭游泳试验效果图;
图4是建模后即刻不同组的肌肉疼痛试验效果图;
图5是建模后24h不同组的肌肉疼痛试验效果图。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白,以下结合附图及具体实施例,对本发明进行进一步详细说明。应当理解,此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明,并不用于限定本发明。
请参阅图1,对于本发明的第一解决方案,本发明提供了一种7-OH-帽柱木碱的提取方法,包括以下步骤:
S1:将干燥的kratom叶粉碎,并向其中加入提取剂,在常温条件下超声提取,经离心和减压浓缩后,得到第一浓缩液;
S2:向上述第一浓缩液加入萃取剂萃取,经减压浓缩后,得到第二浓缩液;
S3:上述第二浓缩液经硅胶柱层析分离,用洗脱剂进行梯度洗脱,得到7-OH-帽柱木碱。
其中,上述提取剂为甲醇、乙醇、氯仿、二氯甲烷或二氯乙烷中的一种或多种,优选为氯仿,与选用其他溶剂相比,选用氯仿能达到更高的提取率;上述kratom叶与提取剂的重量比为1:(10~15),在此比例范围内提取效果好,且便于操作;上述超声提取的功率为200~400w,在此条件下,提取时间显著降低;超声提取的pH范围为6~7,在此pH值范围内提取效果最佳,其原因在于,在此范围内,7-OH-帽柱木碱比较容易降解,优选为6~6.5,更为优选为6.1~6.2;超声提取的时间为0.5~1.5h,在此范围内,可达到最佳提取效果;上述萃取剂为石油醚或乙酸乙酯中的一种;上述第一浓缩液与萃取剂的体积比为1:(0.8~2),在此比例范围内,萃取效果好,且便于操作;上述萃取的温度为40~60℃;上述洗脱剂为己烷和乙酸乙酯中一种或多种的混合液,且己烷与乙酸乙酯的体积比为(0~4):1。
上述7-OH-帽柱木碱的提取方法中利用超声波辅助法大大缩短了提取时间,比传统方法提高了2/3以上;通过调节pH值,使7-OH-帽柱木碱尽可能的溶出,最终提取率可达0.25%;经过硅胶柱层析纯化后,帽柱木碱的纯度大于90%。
对于本发明的第二解决方案,本发明提供了一种包含7-OH-帽柱木碱的中药组合物,上述包含7-OH-帽柱木碱的中药组合物由以下重量份的原料制成:7-OH-帽柱木碱5~30份、三叶五加10~40份、瓜拉纳提取物5~35份、薄荷5~40份,将这些中药原料组合使得功效产生协同作用,能够提神醒脑、抗疲劳和缓解肌肉疼痛。
本发明第二解决方案中的7-OH-帽柱木碱是通过本发明第一解决方案中7-OH-帽柱木碱的提取方法得到的。
本发明中,上述中药组合物中各类中药原料的药理作用如下:
7-OH-帽柱木碱:与阿片受体有较强亲和力,具有抗抑郁、抗肿瘤、抗心血管疾病、抗菌活性和镇痛效果;还能抑制胃肠道转运,起到止泻作用。
三叶五加:清火解热,消肿止痛,除风利湿,用于治疗周身肌肉麻木、身体酸软乏力,能强身健体。
瓜拉纳提取物:瓜拉纳含有丰富的黄嘌呤类衍生物(如生物碱和咖啡因)、氨基酸、单宁酸等物质,具有提神醒脑、补充能量、缓解疲劳、恢复体力、控制食欲、缓解腹痛的作用,在巴西被誉为“国饮”。
薄荷:清凉提神、疏风散热、解毒败火、清咽利喉,可用于治疗感冒发热、喉痛、头痛,目赤痛、肌肉疼痛等。
请参阅图2,对于本发明的第三解决方案,本发明提供了一种包含中药组合物的保健带,具有上述包含7-OH-帽柱木碱的中药组合物的全部有益效果;上述包含中药组合物的保健带包括:弹性带1、凝胶冰贴2、药包夹层3和药包4,凝胶冰贴2的一面与弹性带1粘接,另一面和药包夹层3粘接,药包夹层3中含有药包4,药包4内装有上述包含7-OH-帽柱木碱的中药组合物。
本发明第三解决方案中的中药组合物是本发明第二解决方案提供的包含7-OH-帽柱木碱的中药组合物。
本发明中,上述弹性带1两端设置有粘扣,通过两端的粘扣配合,便于使用者佩戴。
实施例1
本实施例提供了一种7-OH-帽柱木碱的提取方法、包含7-OH-帽柱木碱的中药组合物以及包含中药组合物的保健带;其中,
7-OH-帽柱木碱的提取方法包括以下步骤:
(a)将干燥的kratom叶粉碎,按照1:10的料液比加入氯仿后,用质量分数为10%乙酸溶液调节pH值至6.11,在常温条件下超声提取45min,离心取上清液,此过程重复3次,将3次上清液减压浓缩,得到第一浓缩液;其中,超声的功率为200W;
(b)向第一浓缩液中加入等体积的石油醚,并在50℃下萃取,静置后取下层液体,此过程重复3次,合并3次下层液体,减压浓缩备用。
(c)将第二浓缩液经硅胶柱层析分离,依次用体积比为0:1、1:2和4:1的己烷/乙酸乙酯洗脱,得若干洗脱部位,经薄层色谱进行检测,显色,合并显色的洗脱部位,将合并后的洗脱部位经减压浓缩冻干,得到7-OH-帽柱木碱,其中,装柱硅胶230~400目。
采用本方法得到的7-OH-帽柱木碱的纯度为91%,得率为0.24%,核磁结果如下:
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ=7.42(1H,s),7.26(1H,t,J=7.8Hz),7.18(1H,d,J=7.8Hz),6.71(1H,d,J=8.1Hz),3.85(3H,s,Ar-OCH3),3.81(3H,s,OCH3),3.68(3H,s,CO2CH3),3.14(1H,d,J=9.4Hz),3.05(1H,d,J=11.6Hz),3.01(1H,d,J=13.1Hz),2.79(2H,m),2.56(2H,m,t,J=9.5Hz),1.89(1H,d,J=13.6Hz),1.65(3H,m),1.23(1H,m),0.83(3H,t,J=7.4Hz)。
13C-NMR(125MHz,CDCl3)δ=184.35(C-2),169.23(CO),161.62(C-17)155.86(C-9),154.85(C-13),130.58(C-11),126.49(C-8),114.09(C-12),111.17(C-16),108.81(C-10),80.85(C-7),61.67(OMe),61.48(C-3),58.16(C-21),55.35(Ar-OMe),52.05(O2Me),50.12(C-5),40.41(C-20),39.28(C-15),35.58(C-6),25.95(C-14),18.85(C-19),12.79(C-18)。
该包含7-OH-帽柱木碱的中药组合物由以下重量份的原料制成:7-OH-帽柱木碱10份、三叶五加25份、瓜拉纳提取物35份、薄荷30份。
该包含中药组合物的保健带包括:弹性带1、凝胶冰贴2、药包夹层3和药包4,凝胶冰贴2的一面与弹性带1粘接,另一面和药包夹层3粘接,药包夹层3中含有药包4,药包4内装有上述包含7-OH-帽柱木碱的中药组合物。弹性带1两端设置有粘扣。
实施例2
本实施例提供了一种7-OH-帽柱木碱的提取方法、包含7-OH-帽柱木碱的中药组合物以及包含中药组合物的保健带;其中,
7-OH-帽柱木碱的提取方法包括以下步骤:
(a)将干燥的kratom叶粉碎,按照1:12的料液比加入氯仿后,用质量分数为10%乙酸溶液调节pH值至6.11,在常温条件下超声提取1.5h,离心取上清液,此过程重复3次,将3次上清液减压浓缩,得到第一浓缩液;其中,超声的功率为200W;
(b)向第一浓缩液中加入等体积的石油醚,并在40℃下萃取,静置后取下层液体,此过程重复3次,合并3次下层液体,减压浓缩备用。
(c)将第二浓缩液经硅胶柱层析分离,依次用体积比为0:1、1:2和4:1的己烷/乙酸乙酯洗脱,得若干洗脱部位,经薄层色谱进行检测,显色,合并显色的洗脱部位,将合并后的洗脱部位经减压浓缩冻干,得到7-OH-帽柱木碱,其中,装柱硅胶230~400目。
采用本方法得到的7-OH-帽柱木碱的纯度为92.7%,得率为0.25%。
该包含7-OH-帽柱木碱的中药组合物由以下重量份的原料制成:7-OH-帽柱木碱20份、三叶五加15份、瓜拉纳提取物25份、薄荷40份。
该包含中药组合物的保健带包括:弹性带1、凝胶冰贴2、药包夹层3和药包4,凝胶冰贴2的一面与弹性带1粘接,另一面和药包夹层3粘接,药包夹层3中含有药包4,药包4内装有上述包含7-OH-帽柱木碱的中药组合物。弹性带1两端设置有粘扣。
实施例3
本实施例提供了一种7-OH-帽柱木碱的提取方法、包含7-OH-帽柱木碱的中药组合物以及包含中药组合物的保健带;其中,
7-OH-帽柱木碱的提取方法包括以下步骤:
(a)将干燥的kratom叶粉碎,按照1:15的料液比加入氯仿后,用质量分数为10%乙酸溶液调节pH值至6.28,在常温条件下超声提取30min,离心取上清液,此过程重复3次,将3次上清液减压浓缩,得到第一浓缩液;其中,超声的功率为400W;
(b)向第一浓缩液中加入等体积的石油醚,并在45℃下萃取,静置后取下层液体,此过程重复3次,合并3次下层液体,减压浓缩备用。
(c)将第二浓缩液经硅胶柱层析分离,依次用体积比为0:1、1:2和4:1的己烷/乙酸乙酯洗脱,得若干洗脱部位,经薄层色谱进行检测,显色,合并显色的洗脱部位,将合并后的洗脱部位经减压浓缩冻干,得到7-OH-帽柱木碱,其中,装柱硅胶230~400目。
采用本方法得到的7-OH-帽柱木碱的纯度为90.2%,得率为0.23%。
该包含7-OH-帽柱木碱的中药组合物由以下重量份的原料制成:7-OH-帽柱木碱30份、三叶五加10份、瓜拉纳提取物5份、薄荷15份。
该包含中药组合物的保健带包括:弹性带1、凝胶冰贴2、药包夹层3和药包4,凝胶冰贴2的一面与弹性带1粘接,另一面和药包夹层3粘接,药包夹层3中含有药包4,药包4内装有上述包含7-OH-帽柱木碱的中药组合物。弹性带1两端设置有粘扣。
实施例4
本实施例提供了一种7-OH-帽柱木碱的提取方法、包含7-OH-帽柱木碱的中药组合物以及包含中药组合物的保健带;其中,
7-OH-帽柱木碱的提取方法包括以下步骤:
(a)将干燥的kratom叶粉碎,按照1:10的料液比加入氯仿后,用质量分数为10%乙酸溶液调节pH值至6.56,在常温条件下超声提取1h,离心取上清液,此过程重复3次,将3次上清液减压浓缩,得到第一浓缩液;其中,超声的功率为300W;
(b)向第一浓缩液中加入等体积的石油醚,并在50℃下萃取,静置后取下层液体,此过程重复3次,合并3次下层液体,减压浓缩备用。
(c)将第二浓缩液经硅胶柱层析分离,依次用体积比为0:1、1:2和4:1的己烷/乙酸乙酯洗脱,得若干洗脱部位,经薄层色谱进行检测,显色,合并显色的洗脱部位,将合并后的洗脱部位经减压浓缩冻干,得到7-OH-帽柱木碱,其中,装柱硅胶230~400目。
采用本方法得到的7-OH-帽柱木碱的纯度为90.1%,得率为0.22%。
该包含7-OH-帽柱木碱的中药组合物由以下重量份的原料制成:7-OH-帽柱木碱30份、三叶五加10份、瓜拉纳提取物5份、薄荷15份。
该包含中药组合物的保健带包括:弹性带1、凝胶冰贴2、药包夹层3和药包4,凝胶冰贴2的一面与弹性带1粘接,另一面和药包夹层3粘接,药包夹层3中含有药包4,药包4内装有上述包含7-OH-帽柱木碱的中药组合物。弹性带1两端设置有粘扣。
试验例1
本试验例通过采用小鼠力竭游泳试验证明包含7-OH-帽柱木碱的中药组合物的协同功效。选取6-8周龄的清洁健康雄性昆明小鼠60只,体重28-32g,在21-22℃温度下饲养,适应环境7d后,随机分组。设五个给药组和一个阴性对照组(Y组)。给药组分别为中药组合物组(F组)、7-OH-帽柱木碱组(M组)、三叶五加组(S组)、瓜拉纳提取物组(G组)和薄荷组(B组)。每组10只。每日于同一时间灌胃,灌胃体积为0.2ml,持续灌胃30d。
中药组合物组灌胃成分为:7-OH-帽柱木碱10mg/kg、三叶五加25mg/kg、瓜拉纳提取物35mg/kg、薄荷30mg/kg;7-OH-帽柱木碱组灌胃成分为:7-OH-帽柱木碱10mg/kg;三叶五加组灌胃成分为:三叶五加25mg/kg;瓜拉纳提取物组灌胃成分为:瓜拉纳提取物35mg/kg;薄荷组灌胃成分为:薄荷30mg/kg;阴性对照组灌胃成分为:生理盐水。
力竭游泳时间测定:最后一次灌胃30min后,在小鼠尾根部负以小鼠体重5%的钢丝,放入水深为30cm的游泳箱中游泳,水温(25±1)℃。当小鼠头部沉入水中经10s仍不能返回水面视为力竭,记录从游泳开始至力竭的时间作为小鼠力竭游泳时间。
本研究采用SPSS17软件对测试数据进行统计学处理和分析,采用一般线性模型的两因素多水平重复测量方差分析方法。计量资料以平均数±标准差(mean±SD)表示,p<0.05表示差异有统计学意义。试验结果如下:
由图3可见,与阴性对照组(Y组)相比,中药组合物组(F组)小鼠负重游泳时间极显著性增加(p<0.01,**),7-OH-帽柱木碱组(M组)小鼠负重游泳时间显著性增加(p<0.05,*);同时,中药组合物组(F组)小鼠负重游泳时间显著高于7-OH-帽柱木碱组(M组)小鼠(p<0.05,#)。由此可见,该包含7-OH-帽柱木碱的中药组合物可明显改善小鼠的运动性能、延长运动时间,具有抗疲劳效果。
试验例2
本试验例用于检测包含中药组合物的保健带的缓解肌肉疼痛的试验效果,使用实施例1提供的包含中药组合物的保健带。
受试对象为健康非体育专业男大学生,受试者自愿参加试验并签署知情同意书,年龄18岁至25岁,一般体格检查正常,无心血管疾病史,无运动系统损伤史。试验前一周受试者肌肉无运动性疲劳,试验前一周和测试周期内受试者不参加其它体育活动,恢复期不接受试验规定之外的其他干预措施。
本试验采用随机、单盲、对照试验设计。根据干预方法不同将受试者分为4组,每组8人,包括:运动后佩戴组(运动建模后佩戴保健带组,A组)、运动前后佩戴组(运动建模前和建模后均佩戴保健带组,B组)、空白对照组(建模后恢复期无任何处理组,C组)、安慰剂组(运动前后均佩戴药包组,且药包内为麸皮,P组)。
延迟性肌肉酸痛模型构建:受试者在完成准备活动之后,采取行进间全蹲蛙跳的运动负荷方式,每组15次,共完成10组,每组蛙跳之间休息2min,运动总持续时间30~40min。所有受试者运动建模前1天测定值为基线值,随后分别在建模后即刻,建模后24h进行指标测定,选取受试者右下肢为指标测试部位。
采用主观疼痛感觉作为评价延迟性肌肉酸痛的疼痛状况指标,使用视觉模拟评分法。
采用中华医学会疼痛医学会监制的视觉模拟评分卡,卡的正面有一条横线和可以移动的标尺,其中一端为0分(代表无痛),另一端为10分(代表受试者能够想象的最剧烈的疼痛),使用时受试者移动标尺定于主观认为的自己疼痛强度的位置,通过该尺反面的读数,可确定视觉模拟评分数值,该数值为疼痛强度评分,数值越大,表示疼痛强度越大。
本研究采用SPSS17软件对测试数据进行统计学处理和分析,采用一般线性模型的两因素多水平重复测量方差分析方法。计量资料以平均数±标准差(mean±SD)表示,p<0.05表示差异有统计学意义。试验结果如下:
由图4单独效应分析得出,在建模后即刻,B组(运动前后佩戴组)评分下降,且与P组(安慰剂组)相比极显著降低(p<0.01,**),说明在延迟性肌肉酸痛模型中,运动前后佩戴能极显著降低延迟性肌肉酸痛。
由图5可以看出,建模后24h后,B组(运动前后佩戴组)评分下降,且与P组(安慰剂组)相比极显著降低(p<0.01,**),说明在延迟性肌肉酸痛模型中,运动前后佩戴能极显著降低模型构建24h后的延迟性肌肉酸痛,表明本发明提供的包含中药组合物的保健带具有缓解肌肉疼痛的作用。
与现有技术相比,本发明的有益效果为:
本发明中7-OH-帽柱木碱的提取方法操作简单、快速,所得7-OH-帽柱木碱的提取率为0.24%,纯度大于90%;
本发明提供了一种包含7-OH-帽柱木碱的中药组合物,该包含7-OH-帽柱木碱的中药组合物具有提神醒脑、抗疲劳和缓解肌肉疼痛的作用;
本发明提供了一种包含中药组合物的保健带,该保健带具有中药组合物的全部有益效果,且可佩带在头、手臂、腿、肩颈等疼痛部位,适用范围广泛。
以上所述仅为本发明的较佳实施例,并不用以限制本发明,凡在本发明的精神和原则之内,所作的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (6)
1.一种7-OH-帽柱木碱的提取方法,其特征在于,包括以下步骤:
将干燥的kratom叶粉碎,并向其中加入提取剂,在常温条件下超声提取,经离心和减压浓缩后,得到第一浓缩液;
向所述第一浓缩液加入萃取剂萃取,经减压浓缩后,得到第二浓缩液;
所述第二浓缩液经硅胶柱层析分离,用洗脱剂进行梯度洗脱,得到7-OH-帽柱木碱。
2.根据权利要求1所述7-OH-帽柱木碱的提取方法,其特征在于,所述提取剂为甲醇、乙醇、氯仿、二氯甲烷或二氯乙烷中的一种或多种;所述kratom叶与提取剂的重量比为1:(10~15)。
3.根据权利要求1所述7-OH-帽柱木碱的提取方法,其特征在于,所述超声提取的功率为200~400w,所述超声提取的时间为0.5~1.5h。
4.根据权利要求1所述7-OH-帽柱木碱的提取方法,其特征在于,所述超声提取的pH范围为6~7。
5.根据权利要求1所述7-OH-帽柱木碱的提取方法,其特征在于,所述萃取剂为石油醚或乙酸乙酯中的一种;所述第一浓缩液与萃取剂的体积比为1:(0.8~2)。
6.根据权利要求1所述7-OH-帽柱木碱的提取方法,其特征在于,所述洗脱剂为己烷和乙酸乙酯中一种或多种的混合液。
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CN204411508U (zh) * | 2015-04-07 | 2015-06-24 | 朱冬子 | 一种多功能保健带 |
CN106967067A (zh) * | 2017-05-25 | 2017-07-21 | 福州大学 | 一种制备7‑羟基帽柱木碱的方法 |
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2019
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Patent Citations (3)
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