CN112089829A - 枯草杆菌纤溶酶在治疗功能性便秘药物中的应用 - Google Patents
枯草杆菌纤溶酶在治疗功能性便秘药物中的应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN112089829A CN112089829A CN202010762580.3A CN202010762580A CN112089829A CN 112089829 A CN112089829 A CN 112089829A CN 202010762580 A CN202010762580 A CN 202010762580A CN 112089829 A CN112089829 A CN 112089829A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- bacillus subtilis
- plasmin
- functional constipation
- constipation
- strain
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 206010010774 Constipation Diseases 0.000 title claims abstract description 47
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 title claims abstract description 41
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 title claims abstract description 41
- 239000003814 drug Substances 0.000 title claims abstract description 15
- 101710196208 Fibrinolytic enzyme Proteins 0.000 title claims abstract description 10
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 23
- 229940012957 plasmin Drugs 0.000 claims abstract description 20
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 18
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims description 17
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims description 17
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 11
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 8
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 8
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 claims description 4
- 238000001694 spray drying Methods 0.000 claims description 4
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 3
- 239000012880 LB liquid culture medium Substances 0.000 claims description 3
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 claims description 3
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 claims description 3
- 108090000787 Subtilisin Proteins 0.000 claims description 3
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 claims description 3
- 239000002518 antifoaming agent Substances 0.000 claims description 3
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 3
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 3
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 3
- 238000001471 micro-filtration Methods 0.000 claims description 3
- 229910000403 monosodium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 235000019799 monosodium phosphate Nutrition 0.000 claims description 3
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims description 3
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 claims description 3
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 claims description 3
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 3
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims description 3
- 239000002775 capsule Substances 0.000 claims description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 2
- 239000003826 tablet Substances 0.000 claims description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 abstract description 29
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 28
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 abstract description 10
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 abstract description 10
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 abstract description 10
- 230000008855 peristalsis Effects 0.000 abstract description 5
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 4
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 abstract description 4
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 abstract description 3
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 abstract description 3
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 abstract description 3
- 108010088842 Fibrinolysin Proteins 0.000 description 23
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 22
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 16
- 230000013872 defecation Effects 0.000 description 12
- 229940001501 fibrinolysin Drugs 0.000 description 11
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 9
- 239000008141 laxative Substances 0.000 description 7
- 230000001543 purgative effect Effects 0.000 description 7
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 6
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 6
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 6
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 6
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 5
- 239000004382 Amylase Substances 0.000 description 4
- 102000013142 Amylases Human genes 0.000 description 4
- 108010065511 Amylases Proteins 0.000 description 4
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 description 4
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 description 4
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 description 4
- 235000019418 amylase Nutrition 0.000 description 4
- 239000003651 drinking water Substances 0.000 description 4
- 235000020188 drinking water Nutrition 0.000 description 4
- 235000005686 eating Nutrition 0.000 description 4
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 description 4
- 230000006996 mental state Effects 0.000 description 4
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 4
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- 108010059892 Cellulase Proteins 0.000 description 3
- 229940106157 cellulase Drugs 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 3
- 230000002550 fecal effect Effects 0.000 description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 3
- 238000000465 moulding Methods 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 2
- -1 compound diphenoxylate Chemical class 0.000 description 2
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 2
- 229960004192 diphenoxylate Drugs 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 239000002085 irritant Substances 0.000 description 2
- 231100000021 irritant Toxicity 0.000 description 2
- 235000019626 lipase activity Nutrition 0.000 description 2
- KJFMBFZCATUALV-UHFFFAOYSA-N phenolphthalein Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1C1(C=2C=CC(O)=CC=2)C2=CC=CC=C2C(=O)O1 KJFMBFZCATUALV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000019419 proteases Nutrition 0.000 description 2
- 210000001187 pylorus Anatomy 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 2
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 2
- ZEMPKEQAKRGZGQ-AAKVHIHISA-N 2,3-bis[[(z)-12-hydroxyoctadec-9-enoyl]oxy]propyl (z)-12-hydroxyoctadec-9-enoate Chemical compound CCCCCCC(O)C\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC(OC(=O)CCCCCCC\C=C/CC(O)CCCCCC)COC(=O)CCCCCCC\C=C/CC(O)CCCCCC ZEMPKEQAKRGZGQ-AAKVHIHISA-N 0.000 description 1
- 206010067484 Adverse reaction Diseases 0.000 description 1
- 241001116389 Aloe Species 0.000 description 1
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 208000014540 Functional gastrointestinal disease Diseases 0.000 description 1
- 208000018522 Gastrointestinal disease Diseases 0.000 description 1
- 229940121710 HMGCoA reductase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000029578 Muscle disease Diseases 0.000 description 1
- 208000021642 Muscular disease Diseases 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 208000007271 Substance Withdrawal Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 230000006838 adverse reaction Effects 0.000 description 1
- 235000011399 aloe vera Nutrition 0.000 description 1
- PYKYMHQGRFAEBM-UHFFFAOYSA-N anthraquinone Natural products CCC(=O)c1c(O)c2C(=O)C3C(C=CC=C3O)C(=O)c2cc1CC(=O)OC PYKYMHQGRFAEBM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000004056 anthraquinones Chemical class 0.000 description 1
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 201000007637 bowel dysfunction Diseases 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004913 chyme Anatomy 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 230000002354 daily effect Effects 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 150000005690 diesters Chemical class 0.000 description 1
- 235000013325 dietary fiber Nutrition 0.000 description 1
- 208000010643 digestive system disease Diseases 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 230000035622 drinking Effects 0.000 description 1
- 239000000428 dust Substances 0.000 description 1
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 1
- 235000006694 eating habits Nutrition 0.000 description 1
- 239000003792 electrolyte Substances 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 208000018685 gastrointestinal system disease Diseases 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 208000030159 metabolic disease Diseases 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 235000021590 normal diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 239000002325 prokinetic agent Substances 0.000 description 1
- 210000000664 rectum Anatomy 0.000 description 1
- 230000002040 relaxant effect Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 210000001599 sigmoid colon Anatomy 0.000 description 1
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 1
- 210000002460 smooth muscle Anatomy 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 210000005070 sphincter Anatomy 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
- A61K38/46—Hydrolases (3)
- A61K38/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- A61K38/482—Serine endopeptidases (3.4.21)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/10—Laxatives
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
- C12N9/52—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from bacteria or Archaea
- C12N9/54—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from bacteria or Archaea bacteria being Bacillus
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
- C12Y304/21—Serine endopeptidases (3.4.21)
- C12Y304/21062—Subtilisin (3.4.21.62)
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Immunology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明公开了一种枯草杆菌纤溶酶在治疗功能性便秘药物中的应用。枯草杆菌纤溶酶由枯草杆菌Bacillus subtilis QK02菌种发酵制得，该菌种己保存于国家典型培养物保藏中心，菌种编号为CCTCCNO：M203078。本发明的枯草杆菌纤溶酶对功能性便秘具有很好的治疗效果，能有效提高大便含水量，有助于肠道蠕动，并可通过调节肠道酶活性对便秘起改善作用，其可以在治疗功能性便秘药物中广泛应用。本发明的枯草杆菌纤溶酶相比于现有的治疗功能性便秘的临床药物，使用后毒副作用小，更安全。
Description
技术领域
本发明涉及功能性便秘治疗技术领域，尤其是，本发明涉及枯草杆菌纤溶酶在治疗功能性便秘药物中的应用。
背景技术
便秘是一种常见的慢性胃肠疾病，粪便干硬、排便困难或者每周排便次数少于三次即视为便秘。食物在消化道经消化吸收，剩余的食糜残渣从小肠输送到结肠，结肠内再将大部分的水分和电解质吸收形成粪团，最后输送至乙状结肠以及直肠，通过一系列的排便活动，将粪便排出体外。从形成粪团到产生便意和排便动作的各个环节，均可以因神经系统活动异常，肠平滑肌病变以及肛门括约肌功能异常或病变而发生便秘。
便秘可以分为器质性便秘和功能性便秘(FC)，功能性便秘主要由于肠功能紊乱引起，是无明显器质性病变或继发于代谢病、系统性疾病或药物因素而功能性排便困难为特征的便秘。FC又可以分为慢传输性便秘(STC)和出口梗阻性便秘以及混合型便秘，其中慢传输性便秘相对来说是最普遍的一种症状。造成慢传输型便秘的原因有很多，包括膳食纤维和液体摄入量不足，不良饮食习惯以及缺乏锻炼等因素。流行病学研究显示，我国便秘发病率有5％～6％，在老年人群甚至可达到15％～20％，并且有逐年增加的趋势。
目前治疗便秘药物种类有容积性泻剂、盐类泻剂、渗透性泻剂、刺激性泻剂、促动力剂、润滑剂等。常见盐类泻剂、刺激性泻剂如硫酸镁、镁乳、含蒽醌类的植物性泻药(大黄、弗朗鼠李皮、番泻叶、芦荟)、酚酞、蓖麻油、双酯酚汀等，这些药物作用比较明显，但长期服用可引起严重不良反应，加重便秘，停药后可逆。
肠道微生态结构是便秘发生机制的重要因素之一。肠道及肠道菌群通过产生各种酶，去调节肠道蠕动，肠道酶活性在便秘治疗过程中具有重要的作用。因此，研究在疾病控制和预防方面治疗效果好、毒副作用小的具有通便作用的生物活性物质，通过改善肠道微生态结构，治疗功能性便秘的药物具有重要意义。
发明内容
为了克服上述现有技术的不足，本发明的目的在于提供枯草杆菌纤溶酶在治疗功能性便秘药物中的应用。
优选地，所述枯草杆菌纤溶酶由枯草杆菌Bacillus subtilis QK02菌种发酵制得，该菌种己保存于国家典型培养物保藏中心，位于湖北武汉，菌种编号为 CCTCCNO：M203078，保藏日期为2003年11月17日。
优选地，所述枯草杆菌纤溶酶采用以下方法制备：将枯草杆菌菌种用新鲜的斜面活化18h～24h，从斜面上取一环菌体接入装有LB液体培养基的三角瓶中，并于37℃、200r/min摇床振荡培养18h；将培养好的菌种按1wt％接种到发酵罐中发酵24h，控制发酵罐内温度37℃、湿度85％、溶氧4.0mg/L～6.0mg/L；发酵液经过离心、微滤、超滤浓缩后，喷雾干燥即得所述枯草杆菌纤溶酶；发酵罐中含有以下营养成分：蛋白胨2％、葡萄糖2％、磷酸氢二钠1％、磷酸二氢钠0.1％、硫酸镁0.05％、无水氯化钙0.02％、消泡剂0.1％、余量为水。
优选地，所述枯草杆菌纤溶酶可与医药学上可接受的辅料配合制成粉剂、胶囊剂或者片剂。
与现有技术相比，本发明的技术效果体现在：
本发明的枯草杆菌纤溶酶对功能性便秘具有很好的治疗效果，能有效提高大便含水量，有助于肠道蠕动，并可通过调节肠道酶活性对便秘起改善作用，其可以在治疗功能性便秘药物中广泛应用。本发明的枯草杆菌纤溶酶相比于现有的治疗功能性便秘的临床药物，使用后毒副作用小，更安全。
具体实施方式
以下通过特定的具体实例说明本发明的实施方式，本领域技术人员可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点与功效。本发明还可以通过另外不同的具体实施方式加以实施或应用，本说明书中的各项细节也可以基于不同观点与应用，在没有背离本发明的精神下进行各种修饰或改变。
须知，下列实施例中未具体注明的工艺设备或装置均采用本领域内的常规设备或装置。
此外应理解，本发明中提到的一个或多个方法步骤并不排斥在所述组合步骤前后还可以存在其他方法步骤或在这些明确提到的步骤之间还可以插入其他方法步骤，除非另有说明；而且，除非另有说明，各方法步骤的编号仅为鉴别各方法步骤的便利工具，而非为限制各方法步骤的排列次序或限定本发明可实施的范围，其相对关系的改变或调整，在无实质变更技术内容的情况下，当亦视为本发明可实施的范畴。
实施例1
本发明实施例1提供一种制备枯草杆菌纤溶酶粉的制备方法，具体如下：
(1)将置于-80℃低温冰箱里保存的枯草杆菌菌种取出后用新鲜的斜面活化 18h～24h，从斜面上取一环菌体接入装有LB液体培养基的三角瓶中，并于37℃、 200r/min摇床振荡培养18h。
(2)配制发酵罐培养基300L，培养基中含有以下质量百分比营养成分：蛋白胨2％、葡萄糖2％、磷酸氢二钠1％、磷酸二氢钠0.1％、硫酸镁0.05％、无水氯化钙0.02％、消泡剂0.1％、余量为水。
(3)将配制好的发酵罐培养基在115℃下灭菌处理30min，冷却至室温后，将步骤(1)中培养好的菌种按1wt％接种到发酵罐中发酵24h，控制发酵罐内温度37℃、湿度85％、溶氧4.0mg/L～6.0mg/L；发酵液经过离心、微滤、超滤浓缩后，喷雾干燥即得枯草杆菌纤溶酶。喷雾干燥的进风温度140℃、出风温度为63℃-68℃。
实施例2
本发明实施例2提供一种枯草杆菌纤溶酶在对大鼠功能性便秘的治疗上的应用。
模型的建立：连续2周，每天以复方地芬诺酯混悬液对大鼠进行灌胃，剂量为2ml/100g。正常进食饮水。2周内密切观测大鼠体重、精神状态及排便情况。与正常大鼠相比，质量降低、精神状态差、大便粒数少、粪质干硬即为模型建立成功。
动物分组及给药方法：根据质量随机分成3组，空白对照组、以前述得到的便秘大鼠为模型组和给药组，每组20只，雌雄各半，饲养环境符合SPF级实验条件要求。空白对照组、模型组正常进食饮水，不做处理。给药组正常进食饮水外每日经口给予枯草杆菌纤溶酶粉，剂量为100IU/100g。上述方案连续喂养2 周后。测量大便含水量(大便含水量＝[(湿重－干重)/湿重]×100％)、大鼠肠道碳末推进率(炭末推进率(％)＝[幽门至活性炭悬液末端的长度(cm)/肠道总长度(cm)]×100％)、大鼠肠道酶活性。枯草杆菌纤溶酶粉对大鼠大便含水量的影响结果如表1所示。枯草杆菌纤溶酶粉对大鼠肠道碳末推进率的影响结果如表2所示。枯草杆菌纤溶酶粉对大鼠肠道酶活性的影响结果如表3所示。
表1不同处理组大鼠大便含水量比较(n＝20)
| 组别 | 造模前 | 造模后 | 给药1周 | 给药2周 |
| 对照组 | 64.77±8.65 | 66.43±7.69 | 65.96±8.32 | 64.23±8.59 |
| 模型组 | 63.98±9.28 | 36.69±5.62<sup>&&</sup> | 35.68±5.05 | 34.58±4.76 |
| 给药组 | 64.83±8.45 | 37.32±4.68<sup>&&</sup> | 45.94±6.52<sup>*</sup> | 56.58±7.21<sup>**</sup> |
注：与对照组相比，&&p＜0.01；与模型组相比，*p＜0.05，**p＜0.01。
从表1看到，给药1周后，给药组能增加大鼠大便含水量，且随着给药时间的增加，2周后给药组大鼠大便含水量进一步增加且与模型组相比有明显提高，但尚未完恢复到正常含水量。表明枯草杆菌纤溶酶粉能有效提高大鼠大便含水量。
表2不同处理组大鼠肠道碳末推进率比较(n＝5)
| 组别 | 碳末推进长度(cm) | 肠道总长度(cm) | 肠道推进率(％) |
| 对照组 | 67.58±6.43 | 103.26±4.35 | 65.45±6.76 |
| 模型组 | 38.75±4.33<sup>&&</sup> | 102.54±4.62 | 37.79±7.25<sup>&&</sup> |
| 给药组 | 56.74±4.86<sup>**</sup> | 101.66±5.22 | 55.81±6.84<sup>**</sup> |
注：与对照组相比，&&p＜0.01；与模型组相比，**p＜0.01。
从表2看到，2周后，给药组大鼠肠道碳末推进长度及肠道推进率均明显优于模型组，有显著差异(p＜0.01)。可知，枯草杆菌纤溶酶粉有利于肠道蠕动，改善便秘。
表3不同处理组大鼠肠道酶活性比较(n＝15)
| 组别 | 蛋白酶(U/mg) | 淀粉酶(U/mg) | 纤维素酶(U/mg) | 脂肪酶(U/mg) |
| 对照组 | 69.21±11.39 | 8.53±1.61 | 4.71±0.48 | 87.74±13.25 |
| 模型组 | 54.56±13.87 | 5.42±1.36 | 2.83±0.56 | 71.59±10.75 |
| 给药组 | 83.63±9.55<sup>**</sup> | 7.61±1.78 | 3.56±0.68 | 105.61±12.47<sup>**</sup> |
注：与模型组相比，**p＜0.01。
从表3看到，模型组较正常组大鼠肠道蛋白酶、淀粉酶、纤维素酶、脂肪酶活力降低但并无显著降低。经过2周的给药，与模型组相比，给药组大鼠蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶活性有提升，且蛋白酶和脂肪酶活性提高显著(**p＜0.01)。相反，对便秘大鼠，枯草杆菌纤溶酶粉对纤维素酶活性有提高，但不显著的影响不明显。说明枯草杆菌纤溶酶粉可通过调节肠道酶活性对便秘起改善作用。
实施例3
本发明实施例3提供一种枯草杆菌纤溶酶在对家兔功能性便秘的治疗上的应用。
模型的建立：连续4周，每天以复方地芬诺酯混悬液对健康家兔进行灌胃，剂量为10ml/1kg。自由进食饮水。4周内密切观测家兔体重、精神状态及排便情况。造模第15天，选取5只模型家兔及5只正常家兔，禁食不禁水，24h后以活性炭灌胃，灌喂量为10ml/kg，随后恢复正常饮食饮水。记录每只家兔的黑便时间、24h大便粒数及大便质量，模型组与正常家兔相比数据差异显著，模型组体重减轻、精神状态差，即为模型建立成功。
动物分组及给药方法：根据质量随机分成3组，空白对照组、以前述得到的便秘家兔为模型组和给药组，每组25只，雌雄各半，饲养环境符合SPF级实验条件要求。空白对照组、模型组正常进食饮水，不做处理。给药组正常进食饮水外每日经口给予枯草杆菌纤溶酶粉，剂量为100IU/100g。上述方案连续喂养4 周后。测量3组家兔大便含水量(大便含水量＝[(湿重-干重)/湿重]× 100％)、肠道碳末推进率(炭末推进率(％)＝[幽门至活性炭悬液末端的长度(cm) /肠道总长度(cm)]×100％)、肠道酶活性。
结果发现：2周后，给药组家兔大便含水量较模型组有提高，且随着给药时间的增加，4周后，给药组家兔大便含水量较模型组有显著提高(p＜0.01)，且能恢复到正常组大便含水量。说明枯草杆菌纤溶酶粉能有效提高功能性便秘家兔大便含水量。肠道碳末推进率方面，给药组家兔肠道碳末推进长度及肠道碳末推进率均明显优于模型组，有显著差异(p＜0.01)。说明枯草杆菌纤溶酶粉有助于肠道蠕动。给药4周后便秘家兔蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶活性均有提升，且蛋白酶和脂肪酶活性提高显著(**p＜0.01)。说明枯草杆菌纤溶酶粉可通过调节肠道酶活性对便秘起改善作用。
实施例4
本发明实施例4提供一种枯草杆菌纤溶酶对功能性便秘患者治理上的应用。
病例选择：挑选60例功能性便秘患者，病人随机分成两组，对照组和试验组各30例，确保性别、年龄等因素差异无统计学意义。患者需符合以下条件之一：大便一周小于3次者；排便耗时较长且极度不顺畅者；排便次数减少且粪质干结者。
药物选择：对照组服用达立通颗粒，温开水冲服，一次1袋，一日3次。试验组患者服用实施例1制备的枯草杆菌纤溶酶粉，温水冲服，一日2次，每次 5000IU。连续服用14天。
结果：服用枯草杆菌纤溶酶粉的试验组中，治愈18例，有效8例，无效4 例，治愈率60.0％，总有效率86.7％。服用达立通颗粒的对照组中，治愈21例，有效7例，无效2例，治愈率70.0％，总有效率93.3％。以上结果显示，枯草杆菌纤溶酶粉能很好的治疗和改善便秘。
本发明不局限于上述具体的实施方式，本发明可以有各种更改和变化。凡是依据本发明的技术实质对以上实施方式所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (4)
1.枯草杆菌纤溶酶在治疗功能性便秘药物中的应用。
2.如权利要求1所述的枯草杆菌纤溶酶在治疗功能性便秘药物中的应用，其特征在于，所述枯草杆菌纤溶酶由枯草杆菌Bacillus subtilis QK02菌种发酵制得，该菌种己保存于国家典型培养物保藏中心，菌种编号为CCTCCNO：M203078。
3.如权利要求2所述的枯草杆菌纤溶酶在治疗功能性便秘药物中的应用，其特征在于，所述枯草杆菌纤溶酶采用以下方法制备：将枯草杆菌菌种用新鲜的斜面活化18h～24h，从斜面上取一环菌体接入装有LB液体培养基的三角瓶中，并于37℃、200r/min摇床振荡培养18h；将培养好的菌种按1wt％接种到发酵罐中发酵24h，控制发酵罐内温度37℃、湿度85％、溶氧4.0mg/L～6.0mg/L；发酵液经过离心、微滤、超滤浓缩后，喷雾干燥即得所述枯草杆菌纤溶酶；发酵罐中含有以下营养成分：蛋白胨2％、葡萄糖2％、磷酸氢二钠1％、磷酸二氢钠0.1％、硫酸镁0.05％、无水氯化钙0.02％、消泡剂0.1％、余量为水。
4.如权利要求1所述的枯草杆菌纤溶酶在治疗功能性便秘药物中的应用，其特征在于，所述枯草杆菌纤溶酶可与医药学上可接受的辅料配合制成粉剂、胶囊剂或者片剂。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202010762580.3A CN112089829B (zh) | 2020-08-01 | 2020-08-01 | 枯草杆菌纤溶酶在治疗功能性便秘药物中的应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202010762580.3A CN112089829B (zh) | 2020-08-01 | 2020-08-01 | 枯草杆菌纤溶酶在治疗功能性便秘药物中的应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN112089829A true CN112089829A (zh) | 2020-12-18 |
| CN112089829B CN112089829B (zh) | 2024-03-12 |
Family
ID=73750656
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202010762580.3A Active CN112089829B (zh) | 2020-08-01 | 2020-08-01 | 枯草杆菌纤溶酶在治疗功能性便秘药物中的应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN112089829B (zh) |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105535950A (zh) * | 2016-02-02 | 2016-05-04 | 武汉真福医药股份有限公司 | 制备纤溶酶组合物的方法及其应用 |
-
2020
- 2020-08-01 CN CN202010762580.3A patent/CN112089829B/zh active Active
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105535950A (zh) * | 2016-02-02 | 2016-05-04 | 武汉真福医药股份有限公司 | 制备纤溶酶组合物的方法及其应用 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 张卫生: "枯草杆菌二联活菌颗粒治疗小儿功能性便秘的临床疗效评价", 中国处方药, vol. 14, no. 7, pages 61 - 62 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN112089829B (zh) | 2024-03-12 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN1119154C (zh) | 双歧三联活菌制剂及制备方法 | |
| US20100247489A1 (en) | Use of a composition made of mineral nutrients and optionally acetogenic and/or butyrogenic bacteria in order to avoid or reduce the formation of gas in the large intestine of a mammal and the resulting abdominal problems | |
| CN110205270B (zh) | 一种缓解养殖动物便秘的副干酪乳杆菌l9的应用 | |
| US20080199444A1 (en) | Composition and method for reducing feces toxins and treating digestive disorders | |
| CN114774313B (zh) | 鼠李糖乳杆菌LRa05在制备缓解便秘制品或调解肠道菌群制品方面的用途 | |
| CN114681493B (zh) | 动物双歧杆菌乳亚种的应用 | |
| CN109985069B (zh) | 益生菌组合物及其用途 | |
| CN114831286B (zh) | 一种具有缓解便秘功能的组合物及其制备方法 | |
| CN113969253B (zh) | 一株具有便秘治疗效果的乳双歧杆菌jybr-390及其应用和产品 | |
| CN114145459A (zh) | 一种含乳酸菌的组合物、制备方法及其用途 | |
| CN114343180A (zh) | 一种具有通腑排毒作用的系列组合物及其应用 | |
| CN115119940A (zh) | 嗜酸乳杆菌LA85和乳双歧杆菌BLa80在抑制幽门螺旋杆菌上的应用 | |
| CN101849969A (zh) | 产酪酸有益菌在制备防治重症疾病肠道屏障损伤及损伤后并发症制剂中的应用 | |
| CN115737672A (zh) | 一种益生菌和益生元的组合物及其应用 | |
| CN115747121B (zh) | 一种乳双歧杆菌hsla-009、菌剂及其制备方法和应用 | |
| CN107752015A (zh) | 一种全消化道改善的复合营养食品 | |
| CN111603489A (zh) | 一种改善便秘的菌剂及其制备方法 | |
| CN112089829A (zh) | 枯草杆菌纤溶酶在治疗功能性便秘药物中的应用 | |
| CN114081184B (zh) | 一种具有预防抑郁和焦虑行为形成的益生菌剂及其应用 | |
| CN113425697B (zh) | 一种复方益气润肠胶囊的制备及初步药学评价方法 | |
| CN113186118A (zh) | 一种用于提高母猪生产性能的复合益生菌制剂及其制备方法 | |
| CN113181131A (zh) | 一种用于免疫治疗的新药配方及其片剂结构 | |
| CN114145460A (zh) | 乳酸菌以及含乳酸菌的组合物、用途 | |
| CN114224941B (zh) | 一种治疗慢性肾功能衰竭的中药组合物及其应用 | |
| CN109549957A (zh) | 能双向调节便秘的复合益生菌 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |