CN112079804A - 一种山莴苣苦素及其作为抗炎成分的应用 - Google Patents
一种山莴苣苦素及其作为抗炎成分的应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN112079804A CN112079804A CN202011063090.0A CN202011063090A CN112079804A CN 112079804 A CN112079804 A CN 112079804A CN 202011063090 A CN202011063090 A CN 202011063090A CN 112079804 A CN112079804 A CN 112079804A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- silica gel
- lactucin
- dry powder
- eluent
- methanol
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 title claims abstract description 29
- 235000003167 Lactuca indica Nutrition 0.000 title description 2
- 240000005993 Lactuca saligna Species 0.000 title description 2
- 235000003126 Lactuca saligna Nutrition 0.000 title description 2
- VJQAFLAZRVKAKM-UHFFFAOYSA-N lactucine Natural products OC1CC(C)=C2C(=O)C=C(CO)C2C2OC(=O)C(=C)C21 VJQAFLAZRVKAKM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 73
- VJQAFLAZRVKAKM-QQUHWDOBSA-N lactucin Chemical compound O[C@@H]1CC(C)=C2C(=O)C=C(CO)[C@@H]2[C@H]2OC(=O)C(=C)[C@@H]21 VJQAFLAZRVKAKM-QQUHWDOBSA-N 0.000 claims abstract description 71
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 53
- 235000007542 Cichorium intybus Nutrition 0.000 claims abstract description 35
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims abstract description 33
- 241000723343 Cichorium Species 0.000 claims abstract description 27
- 244000298479 Cichorium intybus Species 0.000 claims abstract description 24
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims abstract description 16
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 10
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 claims abstract description 4
- 239000002260 anti-inflammatory agent Substances 0.000 claims abstract description 3
- 229940124599 anti-inflammatory drug Drugs 0.000 claims abstract description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 93
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 70
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 claims description 62
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 claims description 62
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 46
- 239000003480 eluent Substances 0.000 claims description 34
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 30
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 25
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 21
- 238000002791 soaking Methods 0.000 claims description 20
- 239000000945 filler Substances 0.000 claims description 17
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 17
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 claims description 16
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 11
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 10
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 10
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 10
- 239000002021 butanolic extract Substances 0.000 claims description 8
- 238000004821 distillation Methods 0.000 claims description 8
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 8
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 8
- XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N methyl 1-acetylthieno[3,2-c]pyrazole-5-carboxylate Chemical compound CC(=O)N1N=CC2=C1C=C(C(=O)OC)S2 XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 claims description 6
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 claims description 6
- 238000011068 loading method Methods 0.000 claims description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 5
- 239000000178 monomer Substances 0.000 claims description 5
- 238000007605 air drying Methods 0.000 claims description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 claims description 3
- 238000005292 vacuum distillation Methods 0.000 claims description 3
- WGLUMOCWFMKWIL-UHFFFAOYSA-N dichloromethane;methanol Chemical compound OC.ClCCl WGLUMOCWFMKWIL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- ROAYSRAUMPWBQX-UHFFFAOYSA-N ethanol;sulfuric acid Chemical compound CCO.OS(O)(=O)=O ROAYSRAUMPWBQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 2
- 239000011148 porous material Substances 0.000 claims description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 claims 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 12
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 4
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 25
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 25
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 20
- MWUXSHHQAYIFBG-UHFFFAOYSA-N Nitric oxide Chemical compound O=[N] MWUXSHHQAYIFBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 18
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 17
- 102100038280 Prostaglandin G/H synthase 2 Human genes 0.000 description 13
- 108050003267 Prostaglandin G/H synthase 2 Proteins 0.000 description 11
- 240000008415 Lactuca sativa Species 0.000 description 10
- 235000003228 Lactuca sativa Nutrition 0.000 description 10
- 238000011160 research Methods 0.000 description 10
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 8
- 102100029438 Nitric oxide synthase, inducible Human genes 0.000 description 8
- 101710089543 Nitric oxide synthase, inducible Proteins 0.000 description 8
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 8
- 239000000463 material Substances 0.000 description 8
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 7
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 6
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 6
- 208000005156 Dehydration Diseases 0.000 description 5
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 5
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 5
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 5
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000003777 Interleukin-1 beta Human genes 0.000 description 4
- 108090000193 Interleukin-1 beta Proteins 0.000 description 4
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 4
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 4
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 4
- XEYBRNLFEZDVAW-ARSRFYASSA-N dinoprostone Chemical compound CCCCC[C@H](O)\C=C\[C@H]1[C@H](O)CC(=O)[C@@H]1C\C=C/CCCC(O)=O XEYBRNLFEZDVAW-ARSRFYASSA-N 0.000 description 4
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 4
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 4
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 description 3
- 239000006286 aqueous extract Substances 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 3
- 230000036541 health Effects 0.000 description 3
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 3
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 3
- 150000002611 lead compounds Chemical class 0.000 description 3
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 3
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 3
- 238000010183 spectrum analysis Methods 0.000 description 3
- 206010000087 Abdominal pain upper Diseases 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010037462 Cyclooxygenase 2 Proteins 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 2
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 2
- UMVSOHBRAQTGQI-XGARDCMYSA-N Lactupicrin Chemical compound O([C@@H]1[C@H]2C(=C)C(=O)O[C@@H]2[C@@H]2C(C(C=C2CO)=O)=C(C1)C)C(=O)CC1=CC=C(O)C=C1 UMVSOHBRAQTGQI-XGARDCMYSA-N 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 229930182660 Picrasin Natural products 0.000 description 2
- 208000004880 Polyuria Diseases 0.000 description 2
- 208000022531 anorexia Diseases 0.000 description 2
- 210000000941 bile Anatomy 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 2
- 206010061428 decreased appetite Diseases 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 229960002986 dinoprostone Drugs 0.000 description 2
- 238000002072 distortionless enhancement with polarization transfer spectrum Methods 0.000 description 2
- 230000035619 diuresis Effects 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 210000004969 inflammatory cell Anatomy 0.000 description 2
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 2
- -1 lactucin compound Chemical class 0.000 description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 2
- XEYBRNLFEZDVAW-UHFFFAOYSA-N prostaglandin E2 Natural products CCCCCC(O)C=CC1C(O)CC(=O)C1CC=CCCCC(O)=O XEYBRNLFEZDVAW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 2
- 102000003390 tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 2
- LOGFVTREOLYCPF-KXNHARMFSA-N (2s,3r)-2-[[(2r)-1-[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-hydroxybutanoic acid Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H]1CCCN1C(=O)[C@@H](N)CCCCN LOGFVTREOLYCPF-KXNHARMFSA-N 0.000 description 1
- YFESOSRPNPYODN-RSMWSHJLSA-N (2s,3s,4s,5r,6r)-6-[[(4s,6ar,6bs,8r,8ar,9r,10r,14br)-9-acetyloxy-8-hydroxy-4,8a-bis(hydroxymethyl)-4,6a,6b,11,11,14b-hexamethyl-10-[(z)-2-methylbut-2-enoyl]oxy-1,2,3,4a,5,6,7,8,9,10,12,12a,14,14a-tetradecahydropicen-3-yl]oxy]-4-hydroxy-3,5-bis[[(2s,3r,4s, Chemical compound O([C@@H]1[C@H](O[C@H]([C@@H]([C@H]1O)O[C@H]1[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)OC1CC[C@]2(C)C3CC=C4[C@@]([C@@]3(CCC2[C@]1(CO)C)C)(C)C[C@@H](O)[C@@]1(CO)[C@@H](OC(C)=O)[C@@H](C(CC14)(C)C)OC(=O)C(\C)=C/C)C(O)=O)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O.O([C@@H]1[C@H](O[C@H]([C@@H]([C@H]1O)O[C@H]1[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)OC1CC[C@]2(C)C3CC=C4[C@@]([C@@]3(CCC2[C@]1(CO)C)C)(C)C[C@@H](O)[C@@]1(CO)[C@@H](OC(C)=O)[C@@H](C(CC14)(C)C)OC(=O)C(/C)=C/C)C(O)=O)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O YFESOSRPNPYODN-RSMWSHJLSA-N 0.000 description 1
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- XQXPVVBIMDBYFF-UHFFFAOYSA-M 4-hydroxyphenylacetate Chemical compound OC1=CC=C(CC([O-])=O)C=C1 XQXPVVBIMDBYFF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- GOZMBJCYMQQACI-UHFFFAOYSA-N 6,7-dimethyl-3-[[methyl-[2-[methyl-[[1-[3-(trifluoromethyl)phenyl]indol-3-yl]methyl]amino]ethyl]amino]methyl]chromen-4-one;dihydrochloride Chemical compound Cl.Cl.C=1OC2=CC(C)=C(C)C=C2C(=O)C=1CN(C)CCN(C)CC(C1=CC=CC=C11)=CN1C1=CC=CC(C(F)(F)F)=C1 GOZMBJCYMQQACI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010067484 Adverse reaction Diseases 0.000 description 1
- AXNVHPCVMSNXNP-GKTCLTPXSA-N Aescin Natural products O=C(O[C@H]1[C@@H](OC(=O)C)[C@]2(CO)[C@@H](O)C[C@@]3(C)[C@@]4(C)[C@@H]([C@]5(C)[C@H]([C@](CO)(C)[C@@H](O[C@@H]6[C@@H](O[C@H]7[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O7)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]7[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O7)[C@@H](C(=O)O)O6)CC5)CC4)CC=C3[C@@H]2CC1(C)C)/C(=C/C)/C AXNVHPCVMSNXNP-GKTCLTPXSA-N 0.000 description 1
- PLXMOAALOJOTIY-FPTXNFDTSA-N Aesculin Natural products OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1Oc2cc3C=CC(=O)Oc3cc2O PLXMOAALOJOTIY-FPTXNFDTSA-N 0.000 description 1
- 241000208838 Asteraceae Species 0.000 description 1
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 description 1
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 238000012404 In vitro experiment Methods 0.000 description 1
- 102000000589 Interleukin-1 Human genes 0.000 description 1
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 1
- 206010023126 Jaundice Diseases 0.000 description 1
- 241001348736 Lactuca formosana Species 0.000 description 1
- 206010030302 Oliguria Diseases 0.000 description 1
- 208000037273 Pathologic Processes Diseases 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000006838 adverse reaction Effects 0.000 description 1
- 230000036528 appetite Effects 0.000 description 1
- 235000019789 appetite Nutrition 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 1
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 230000003467 diminishing effect Effects 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 230000002900 effect on cell Effects 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- XHCADAYNFIFUHF-TVKJYDDYSA-N esculin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC(C(=C1)O)=CC2=C1OC(=O)C=C2 XHCADAYNFIFUHF-TVKJYDDYSA-N 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 239000002360 explosive Substances 0.000 description 1
- 239000012642 immune effector Substances 0.000 description 1
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 238000010874 in vitro model Methods 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 201000004792 malaria Diseases 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000002808 molecular sieve Substances 0.000 description 1
- 201000008383 nephritis Diseases 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 1
- 238000012261 overproduction Methods 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000012856 packing Methods 0.000 description 1
- 230000009054 pathological process Effects 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 238000000751 protein extraction Methods 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 229930004725 sesquiterpene Natural products 0.000 description 1
- 150000004354 sesquiterpene derivatives Chemical class 0.000 description 1
- URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N sodium aluminosilicate Chemical compound [Na+].[Al+3].[O-][Si]([O-])=O.[O-][Si]([O-])=O URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000000451 tissue damage Effects 0.000 description 1
- 231100000827 tissue damage Toxicity 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000027 toxicology Toxicity 0.000 description 1
- 229940126680 traditional chinese medicines Drugs 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D307/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom
- C07D307/77—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems
- C07D307/93—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems condensed with a ring other than six-membered
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
本发明涉及生物医药技术领域，尤其涉及一种山莴苣苦素及其作为抗炎成分的应用。其技术方案为：一种山莴苣苦素的制备方法，包括如下步骤：对毛菊苣根进行脱水处理，再依次进行醇冷提、浓缩、萃取纯化、过柱纯化。一种山莴苣苦素作为抗炎成分的应用，包括如下步骤：对毛菊苣根进行脱水处理，再依次进行醇冷提、浓缩、萃取纯化、柱纯化，得到山莴苣苦素，将山莴苣苦素用于抗炎药物。本发明提供了一种山莴苣苦素的制备方法及其作为抗炎成分的应用，解决了现有技术中无法从毛菊苣中提取出山莴苣苦素的方法且没有在抗炎方面的应用的问题。
Description
技术领域
本发明涉及生物医药技术领域，尤其涉及一种山莴苣苦素及其作为抗炎成分的应用。
背景技术
毛菊苣是新疆特色药材，原产于地中海、中亚和北非，在欧洲栽培甚多。中药菊苣具有清肝利胆，健胃消食，利尿消肿，抗菌消炎之功效，常用于湿热黄疸，胃痛食少和水肿尿少。
维药毛菊苣在抗炎方面的研究已经取得了较大的进展，研究结果提示毛菊苣具有较好的抗炎活性，可以广泛用于各种炎症疾病。但相对于其他中药，对毛菊苣抗炎效果的研究有一定的滞后。以往的研究中有关毛菊苣提取物、活性成分的抗炎作用缺乏系统性，对抗炎机制研究较少。特别是在相对应的炎症疾病适应症上的研究匮乏(具抗炎作用维药的研究进展，刘燕，中国中药杂志，2014)，且原药材毛菊苣的抗炎作用并不明显，需要从毛菊苣中分离纯化出具有抗炎效果的成分才能更好的发挥毛菊苣的抗炎功效。以往对毛菊苣抗炎成分的研究多集中于毛菊苣水提物上。毛菊苣水提物是一种具有多种水溶性成分的混合物，没有分离得到毛菊苣中具有抑制炎症作用的单一化合物，对混合物的药理和毒理研究较为困难，从而限制了毛菊苣水提物在临床上的运用，毛菊苣中还含有大量的非水溶性成分，非水溶性成分对原药毛菊苣实现抗炎作用也具有一定贡献，但现有技术的方案缺少对非水溶性成分的抗炎效果研究。进一步探究毛菊苣抗炎单体成分，对于开发维药，指导临床，都具有重要意义。
发明内容
本发明克服了现有技术的不足，提供一种山莴苣苦素的制备方法及其作为抗炎成分的应用，解决了现有技术中无法从毛菊苣中提取出山莴苣苦素的方法且没有在抗炎方面的应用的问题。
为解决上述的技术问题，本发明采用以下技术方案：
一种山莴苣苦素的制备方法，包括如下步骤：
S1：预处理：对毛菊苣根进行脱水处理；
S2：醇冷提：用乙醇对脱水处理后的毛菊苣根进行浸泡处理，收集浸泡处理后的滤液；
S3：浓缩：将步骤S2中的滤液浓缩得稠浸膏；
S4：萃取纯化：将稠浸膏分散到水中，得混悬液；使用正丁醇对混悬液进行萃取，取水层；将所述正丁醇层浓缩得正丁醇浸膏；
S5：过柱纯化：将步骤S4中的正丁醇部位浸膏用正相硅胶划段，用15:1～1:1的二氯甲烷-甲醇依次洗脱，用TLC板展开，经硫酸乙醇加热至120℃显色，并划分成依次为DT1-71-1、DT1-71-2/3、DT1-71-4/5、DT1-71-6/7、DT1-71-8的五段；将DT1-71-1过反相的得到化合物DT1-71-20和DT1-71-15—19和DT1-71-21—24；将DT1-71-20上硅胶柱Ⅰ，通过梯度洗脱得洗脱液Ⅰ，将洗脱液Ⅰ蒸干得干粉Ⅰ；将所述干粉Ⅰ溶于甲醇后上硅胶柱Ⅱ，通过梯度洗脱得洗脱液Ⅱ，将洗脱液Ⅱ蒸干的干粉Ⅱ；将干粉Ⅱ溶于甲醇后上ODS填料，甲醇洗脱得洗脱液Ⅲ，将洗脱液Ⅲ蒸干得干粉Ⅲ；将干粉Ⅲ溶于甲醇后上SephadexLH-20填料，甲醇洗脱得洗脱液Ⅳ，将洗脱液Ⅳ蒸干得干粉Ⅳ；将干粉Ⅳ溶于甲醇后上硅胶柱Ⅲ，通过梯度洗脱得洗脱液Ⅴ，将洗脱液Ⅴ蒸干得干粉Ⅴ；将所述干粉Ⅴ溶于甲醇后上ODS填料，甲醇洗脱后得洗脱液Ⅵ，将洗脱液Ⅵ蒸干得干粉Ⅵ，所述干粉Ⅵ即为单体山莴苣苦素。
从毛菊苣中提取分离得到山莴苣苦素，并且上述提取制备方法简单，成本低，可以获得高纯度的山莴苣苦素。用乙醇冷浸的方法可以使山莴苣苦素充分溶出，并且相对于传统提取方法，减少了提取过程中乙醇对环境的污染，提高了安全性。传统乙醇蒸馏提取法会产生大量乙醇蒸汽，污染环境，且对操作者的健康有一定影响。且乙醇易燃易爆，属于易制毒试剂监管范围，加热乙醇进行毛菊苣提取物制备有可能会导致安全事故的发生。另外，乙醇冷浸的方法对设备要求较低，只需要提供浸泡药材的设备，有助于扩大生产，提高山莴苣苦素产量。其中，脱水处理是指脱去毛菊苣根内部的水分。
由本发明的方法提取纯化制备的干粉Ⅵ为白色粉末。对干粉Ⅵ进行光谱分析，对
H NMR(pyridine-d5,400MHz)的光谱分析结果进行了统一分析，结果显示使用本法提取获得的化合物(干粉Ⅵ)为山莴苣苦素。山莴苣苦素的系统名为：
[(3aR,4S,9aS,9bR)-9-(hydroxymethyl)-6-methyl-3-methylidene-2,7-dioxo-4,5,9a,9b-tetrahydro-3aH-azuleno[4,5-b]furan-4-yl]2-(4-hydroxyphenyl)acetate。
作为本发明的优选方案，在所述步骤S1中，对毛菊苣根进行脱水处理是采用晾干的方式，脱水处理后的毛菊苣根的含水量为1～10％。在提取之前进行脱水处理，可以减少植物内部水分对后续提取效率的影响。
作为本发明的优选方案，在所述步骤S2中，用脱水处理后的毛菊苣根的质量的3～5倍的95％乙醇对脱水处理后的毛菊苣根进行浸泡处理5次，收集5次浸泡处理后的滤液。采用上述95％乙醇用量可以充分溶出植物中的山莴苣苦素。5次浸泡可以保证植物中的绝大部分山莴苣苦素被浸出，提高原药材的利用率。
作为本发明的优选方案，在所述步骤S3中，用减压蒸馏装置在压力0～0.1MPa和温度40～50℃的条件下，将步骤S2中的滤液浓缩得稠浸膏；所述稠浸膏的浓度为0.1～0.4g/ml。在压力0～0.1MPa和温度40～50℃的条件下，将滤液浓缩成稠浸膏，既可以保证目的化合物的分子完整性，又可以除去原有的溶剂(乙醇)，便于后面的萃取步骤进行。
作为本发明的优选方案，在步骤S4中，将1体积份的稠浸膏分散到3体积份的水中，得混悬液；使用1体积份的正丁醇对1体积份的混悬液进行萃取；使用1体积份的乙酸乙酯对1体积份的水层进行萃取。将1体积份的稠浸膏分散到3体积份的水中，可以使浸膏充分混悬在水中。使用1:1的萃取溶剂比例，可以保证目的化合物被充分分配到有机相中。
作为本发明的优选方案，在步骤S4中，在压强0.1～0.2MPa和温度40～80℃的条件下将所述正丁醇层蒸馏浓缩得正丁醇浸膏，所述正丁醇浸膏的浓度为0.2～0.6g/ml。在压力0～0.1MPa和温度40～50℃的条件下，将滤液浓缩成稠浸膏，既可以保证目的化合物的分子完整性，又可以除去原有的溶剂(正丁醇)，便于后面的柱纯化步骤进行。
作为本发明的优选方案，在步骤S5中，硅胶柱Ⅰ、硅胶柱Ⅱ和硅胶柱Ⅲ的孔径范围均为200～300目；硅胶柱Ⅰ的硅胶类型为硅胶H、硅胶G和硅胶HF中的任意一种；硅胶柱Ⅱ的硅胶类型为硅胶H、硅胶G和硅胶HF中的任意一种；硅胶柱Ⅲ的硅胶类型为硅胶H、硅胶G和硅胶HF中的任意一种。硅胶具有优良的机械强度和表面易改性等特性，是目前应用最广泛的色谱柱填料。硅胶H、硅胶G和硅胶HF均为现有技术中常见的色谱柱填料。
作为本发明的优选方案，在步骤S5中，梯度洗脱时，用氯仿和甲醇组成的混合物进行梯度洗脱。顺次进行步骤S5中梯度洗脱操作可以纯化分离出纯度高且杂质少的目的化合物山莴苣苦素。
作为本发明的优选方案，在步骤S5中，所述Sephadex LH-20填料的颗粒直径的范围18～111μm。SephadexLH-20既有分子筛作用，可再生利用。颗粒直径为18～111μm的Sephadex LH-20填料可实现对目的化合物的纯化分离。
一种山莴苣苦素作为抗炎成分的应用，包括如下步骤：对毛菊苣根进行脱水处理，再依次进行醇冷提、浓缩、萃取纯化、柱纯化，得到山莴苣苦素，将山莴苣苦素用于抗炎药物。使用山莴苣苦素和LPS处理细胞，经一定时间后细胞迅速收取细胞蛋白。使用WesternBlot方法检测iNOS、COX-2蛋白表达，结果表明山莴苣苦素可以显著的下调由LPS刺激RAW264.7产生的COX-2蛋白表达，抑制炎症的产生，起到抗炎的作用。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
1、本发明从毛菊苣中提取分离得到山莴苣苦素，并且上述提取制备方法简单，成本低，可以获得高纯度的山莴苣苦素。用乙醇冷浸的方法可以使山莴苣苦素充分溶出，并且相对于传统提取方法，减少了提取过程中乙醇对环境的污染，提高了安全性。另外，乙醇冷浸的方法对设备要求较低，只需要提供浸泡药材的设备，有助于扩大生产，提高山莴苣苦素产量。其中，脱水处理是指脱去毛菊苣根内部的水分。
2、使用山莴苣苦素和LPS处理细胞，经一定时间后细胞迅速收取细胞蛋白。使用Western Blot方法检测iNOS、COX-2蛋白表达，结果表明山莴苣苦素可以显著的下调由LPS刺激RAW264.7产生的COX-2蛋白表达，抑制炎症的产生，起到抗炎的作用。
附图说明
图1是山莴苣苦素的化学结构图；
图2是山莴苣苦素的核磁共振氢谱图；
图3是山莴苣苦素的核磁共振碳谱图；
图4是山莴苣苦素的核磁共振DEPT谱图；
图5是MTT实验结果图；
图6是Western Blot法检测COX-2、iNOS蛋白表达结果图；
图7是图5的COX-2、iNOS蛋白条带的相对强度图(检测条带灰度值)；
图8是Griess Reagent法检测结果图。
具体实施方式
下面结合附图，对本发明作详细的说明。
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
毛菊苣提取物山莴苣苦素为C23H22O7，C23H22O7的结构式如图1所示。
C23H22O7的系统名为：
[(3aR,4S,9aS,9bR)-9-(hydroxymethyl)-6-methyl-3-methylidene-2,7-dioxo-4,5,9a,9b-tetrahydro-3aH-azuleno[4,5-b]furan-4-yl]2-(4-hydroxyphenyl)acetate。C23H22O7对脂多糖(LPS)激活的RAW264.7细胞产生的NO具有抑制作用，可显著降低iNOS、COX-2蛋白(Cyclooxygenase-2，环氧化酶2)的表达；并且对RAW264.7细胞表现出较低的细胞毒性。对LPS激活的RAW264.7细胞产生的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、前列腺素E2(PGE2)均具有抑制作用，该化合物还可改善由LPS引起的小鼠脾脏指数和胸腺指数，降低由LPS引起小鼠血清中IL-1β的浓度。
炎症是人类疾病中最常见而复杂的病理过程.可以发生于机体的任何部位和任何组织.是机体清除刺激因素、对局部组织损伤进行修复的过程。大部分患者存在不同程度的炎性反应，会进一步加重疾病的发展，甚至诱发严重的肿瘤疾病，故治疗与控制患者的炎性反应，对改善疾病的治疗效果及预后具有十分重要的意义。巨噬细胞在调节由促炎因子(如LPS)诱导的炎症反应和活性氧/氮物的水平中，起着至关重要的作用。山莴苣苦素化合物具有较好抗炎作用且为天然产物，该化合物能作为抗炎先导化合物等治疗或预防炎症的药物，具有较好的应用前景。
C23H22O7为山莴苣苦素，山莴苣苦素是一种天然化合物，广泛分布于自然界中。毛菊苣为菊科苣属一年生草本植物，具有显著的药用价值，是一种兼具食用和药用两种功用的特殊植物，现已被卫生部列为“药食同源类”食品，同时被国家营养联盟专家誉为绿色“健康之王”。菊苣性味微苦、咸，凉。其中的苦味物质的成分有马栗树皮素、马栗树皮甙、野莴苣甙、山莴苣素和山莴苣苦素等，有清肝利胆的功效，《中国民族药志》记载：清热解毒，利水消肿，健胃，用于肝火食少，肾炎水肿，胃脘湿热胀痛，食欲不振。山莴苣苦素是毛菊苣中的倍半萜类成分之一，具有保肝作用、抗肿瘤、抗拒食、抗菌抗疟、抗病毒等作用，是医药领域中常用物质，菊苣现有技术中，缺少对山莴苣苦素单体制备和应用的研究，导致山莴苣苦素的优良性质没有被充分利用。发明人研究发现，山莴苣苦素还具有抗炎功效，可以被用于制备抗炎先导化合物等治疗或预防炎症的药物。发明人发现了山莴苣苦素的新性质，该新性质可以拓宽山莴苣苦素的应用范围。将山莴苣苦素的抗炎性质充分利用，从而生产出具有抗炎效果的天然药物，减少不良反应，同时为抗炎药物产品提供更多的原材料。
实施例一
山莴苣苦素的制备方法，包括如下步骤：
S1：预处理：将毛菊苣根晾干，并使毛菊苣根的含水率在5％。
S2：醇冷提：采用冷提法，取晾干的毛菊苣根5kg，用4倍量的95％乙醇浸泡5次，每次3天，收集每次浸泡的滤液，并将5次收集的滤液合并。
S3：浓缩：取合并后的滤液，用减压蒸馏装置，在压力0.1MPa和温度45℃的条件下，蒸馏除去乙醇，得0.3g/ml的稠浸膏。
S4：萃取纯化：将1体积份的稠浸膏分散到3体积份的水中，得混悬液；使用1体积份的正丁醇对1体积份的混悬液进行萃取，取水层；在压强0.2MPa和温度60℃的条件下，对正丁醇层进行蒸馏浓缩，得0.5g/ml的正丁醇浸膏。
S5：过柱纯化：将步骤S4中正丁醇浸膏上300目的硅胶柱Ⅰ，硅胶柱Ⅰ的硅胶类型为硅胶H，用体积比30:1～3:1的氯仿：甲醇进行梯度洗脱得洗脱液Ⅰ，洗脱液Ⅰ用减压蒸馏装置，在压强0.1MPa和温度45℃的条件下蒸干得干粉Ⅰ。将所述干粉Ⅰ溶于甲醇后上300目的硅胶柱Ⅱ，硅胶柱Ⅱ的硅胶类型为硅胶H，用体积比10:1～1:1的氯仿：甲醇进行梯度洗脱得洗脱液Ⅱ，洗脱液Ⅱ用减压蒸馏装置，在压强0.1MPa和温度45℃的条件下蒸干得干粉Ⅱ。将干粉Ⅱ溶于甲醇后上ODS填料，60％甲醇洗脱得洗脱液Ⅲ，洗脱液Ⅲ用减压蒸馏装置，在压强0.1MPa和温度45℃的条件下蒸干得干粉Ⅲ。将干粉Ⅲ溶于甲醇后上Sephadex LH-20填料，Sephadex LH-20填料的颗粒直径为90μm，甲醇洗脱得洗脱液Ⅳ，洗脱液Ⅳ用减压蒸馏装置，在压强0.1MPa和温度45℃的条件下蒸干得干粉Ⅳ。将干粉Ⅳ溶于甲醇后上300目的硅胶柱Ⅲ，硅胶柱Ⅲ的硅胶类型为硅胶H，用体积比300:1～50:1的氯仿：甲醇进行梯度洗脱得洗脱液Ⅴ，洗脱液Ⅴ用减压蒸馏装置，在压强0.1MPa和温度45℃的条件下蒸干得干粉Ⅴ。将上述所得干粉Ⅴ上用甲醇溶解上ODS填料，50％甲醇洗脱得洗脱液Ⅵ，洗脱液Ⅵ用减压蒸馏装置，在压强0.1MPa和温度45℃的条件下蒸干得干粉Ⅵ。
图2是山莴苣苦素的核磁共振氢谱图；图3是山莴苣苦素的核磁共振碳谱图；图4是山莴苣苦素的核磁共振DEPT谱图。对干粉Ⅵ进行鉴定(核磁共振氢谱)，结构以及性质鉴定结果如图2所示。对
1H NMR(pyridine-d5,400MHz)的光谱分析结果进行了统一分析，结果显示在表1。
表1山莴苣苦素光谱分析结果
干粉Ⅵ即单体山莴苣苦素，山莴苣苦素的系统名为：
[(3aR,4S,9aS,9bR)-9-(hydroxymethyl)-6-methyl-3-methylidene-2,7-dioxo-4,5,9a,9b-tetrahydro-3aH-azuleno[4,5-b]furan-4-yl]2-(4-hydroxyphenyl)acetate。
本发明从毛菊苣中提取分离得到山莴苣苦素，并且上述提取制备方法简单，成本低，可以获得高纯度的山莴苣苦素。用乙醇冷浸的方法可以使山莴苣苦素充分溶出，并且相对于传统提取方法，减少了提取过程中乙醇对环境的污染，提高了安全性。另外，乙醇冷浸的方法对设备要求较低，只需要提供浸泡药材的设备，有助于扩大生产，提高山莴苣苦素产量。其中，脱水处理是指脱去毛菊苣根内部的水分。
实施例二
本实施例与实施例一的不同点在于：在步骤S2醇冷提中使用采用冷提法，取晾干的毛菊苣根，用3倍量的95％乙醇浸泡5次，每次3天，收集每次浸泡的滤液，并将5次收集的滤液合并。硅胶柱Ⅰ、硅胶柱Ⅱ和硅胶柱Ⅲ的硅胶类型均为硅胶HF。
实施例三
本实施例与实施例一的不同点在于：在步骤S2醇冷提中使用采用冷提法，取晾干的毛菊苣根，用5倍量的95％乙醇浸泡5次，每次3天，收集每次浸泡的滤液，并将5次收集的滤液合并。硅胶柱Ⅰ、硅胶柱Ⅱ和硅胶柱Ⅲ的硅胶类型均为硅胶G。
实验例四
RAW264.7巨噬细胞是主要的免疫效应细胞，如何有效地抑制巨噬细胞的活化增殖和降低炎症因子的水平成为抗炎的关键。核转录因子-κB(NF-κB)和肿瘤坏死因子(TNF)介导的信号转导通路在炎症反应中起着至关重要的作用。减少不同类型细胞中TNF-α的表达，抑制其所在的信号通路，进一步减少下游炎症因子的分泌表达，从而减轻炎症反应。NF-κB信号传导通路是LPS所介导的信号传导通路中最重要的下游通路，也是巨噬细胞激活的中心环节。LPS诱导内皮细胞表达包括一氧化氮(NO)、前列腺素E2(PGE2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)，白细胞介素1β(IL-1β)等炎症因子。其中NO的过量生成与炎症反应关系密切，PGE2可诱导炎症细胞释放趋化因子，募集炎性细胞移动，并在巨噬细胞中与脂多糖协同诱导表达IL-6,IL-1。因此寻找可以负反馈调节这些细胞因子，并具有潜在抗炎活性的先导化合物尤为重要。
因此，在本实验例中，体外以脂多糖(LPS)刺激小鼠巨噬细胞RAW264.7建立体外炎症模型，通过MTT法评价细胞毒性,采用Griess Reagent法检测细胞培养上清一氧化氮(NO)含量并计算炎症抑制率,ELISA法检测细胞培养上清PGE2、TNF-α含量，蛋白质印迹法检测iNOS、COX-2蛋白(Cyclooxygenase-2，环氧化酶2)表达。体内以LPS诱导小鼠建立体内炎症模型，通过ELISA法检测小鼠血清中IL-1β和IL-6的含量。
在本实验例中使用的山莴苣苦素是按照实施例1中的提取方法提取制得。将山莴苣苦素粉末依照下述各实验的浓度要求溶于无菌去离子水，进行体外和体内实验。在实验例中，使用到的主要试剂和仪器为：MTT试剂盒(sigma，美国)，ELISA试剂盒(sigma，美国)，LPS(脂多糖，E.coli O55:B5，sigma，美国)，全蛋白抽提试剂盒(凯基生物，中国)，二氧化碳细胞培养箱(Heal Force，美国)，可调移液器(Finnpipette，美国)，SDS-PAGE电泳仪(Bio-RAD，美国)。
1、体外实验：
(1)MTT法评价细胞毒性
结果如图4所示，左侧为空白对照，右侧为使用各个浓度的山莴苣苦素处理小鼠巨噬细胞RAW264.7 24h。图5可以看出，与空白对照组相比25、50、100μM山莴苣苦素对细胞活力有一定影响，表现出较低的细胞毒性。
(2)蛋白质印迹法(Western Blot)检测iNOS、COX-2蛋白表达
如图6、图7所示，使用12.5、25、50、100Μ山莴苣苦素和LPS处理RAW264.7细胞24h，24h后迅速收取细胞蛋白，使用Western Blot方法检测iNOS、COX-2蛋白表达。结果表明山莴苣苦素可以显著的下调由LPS刺激RAW264.7产生的COX-2蛋白表达，抑制炎症的产生，起到抗炎的作用。
(3)Griess Reagent法检测NO含量
如图8所示，最左侧为空白对照，右侧依次为模型组(1ug/ml LPS)、溶剂组(dmso)、溶剂炎症模型组(1ug/ml LPS+dmso)、12.5μM、25μM、50μM、100μM莴苣苦素处理RAW264.7细胞24h。dmso溶剂组与空白组相比对炎症因子的影响没有较大差异，说明可以使用dmso来溶解莴苣苦素，使用1μg/ml的LPS刺激RAW264.7细胞建立体外炎症模型，与炎症模型组相比较，12.5μM、25μM、50μM、100μM莴苣苦素均能够抑制经LPS刺激的RAW264.7细胞产生NO的能力，其中100μM莴苣苦素抑制经LPS刺激的RAW264.7细胞产生NO的能力最强。
以上所述的仅是本发明的实施例，方案中公知的具体结构及特性等常识在此未作过多描述。应当指出，对于本领域的技术人员来说，在不脱离本发明结构的前提下，还可以作出若干变形和改进，这些也应该视为本发明的保护范围，这些都不会影响本发明实施的效果和专利的实用性。本申请要求的保护范围应当以其权利要求的内容为准，说明书中的具体实施方式等记载可以用于解释权利要求的内容。
Claims (10)
1.一种山莴苣苦素的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1：预处理：对毛菊苣根进行脱水处理；
S2：醇冷提：用乙醇对脱水处理后的毛菊苣根进行浸泡处理，收集浸泡处理后的滤液；
S3：浓缩：将步骤S2中的滤液浓缩得稠浸膏；
S4：萃取纯化：将稠浸膏分散到水中，得混悬液；使用正丁醇对混悬液进行萃取，取水层；将所述正丁醇层浓缩得正丁醇浸膏；
S5：过柱纯化：将步骤S4中的正丁醇部位浸膏用正相硅胶划段，用15:1～1:1的二氯甲烷-甲醇依次洗脱，用TLC板展开，经硫酸乙醇加热至120℃显色，并划分成依次为DT1-71-1、DT1-71-2/3、DT1-71-4/5、DT1-71-6/7、DT1-71-8的五段；将DT1-71-1过反相的得到化合物DT1-71-20和DT1-71-15—19和DT1-71-21—24；将DT1-71-20上硅胶柱Ⅰ，通过梯度洗脱得洗脱液Ⅰ，将洗脱液Ⅰ蒸干得干粉Ⅰ；将所述干粉Ⅰ溶于甲醇后上硅胶柱Ⅱ，通过梯度洗脱得洗脱液Ⅱ，将洗脱液Ⅱ蒸干的干粉Ⅱ；将干粉Ⅱ溶于甲醇后上ODS填料，甲醇洗脱得洗脱液Ⅲ，将洗脱液Ⅲ蒸干得干粉Ⅲ；将干粉Ⅲ溶于甲醇后上Sephadex LH-20填料，甲醇洗脱得洗脱液Ⅳ，将洗脱液Ⅳ蒸干得干粉Ⅳ；将干粉Ⅳ溶于甲醇后上硅胶柱Ⅲ，通过梯度洗脱得洗脱液Ⅴ，将洗脱液Ⅴ蒸干得干粉Ⅴ；将所述干粉Ⅴ溶于甲醇后上ODS填料，甲醇洗脱后得洗脱液Ⅵ，将洗脱液Ⅵ蒸干得干粉Ⅵ，所述干粉Ⅵ即为单体山莴苣苦素。
2.根据权利要求1所述的一种山莴苣苦素的制备方法，其特征在于，在所述步骤S1中，对毛菊苣根进行脱水处理是采用晾干的方式，脱水处理后的毛菊苣根的含水量为1～10％。
3.根据权利要求1所述的一种山莴苣苦素的制备方法，其特征在于，在所述步骤S2中，用脱水处理后的毛菊苣根的质量的3～5倍的95％乙醇对脱水处理后的毛菊苣根进行浸泡处理5次，收集5次浸泡处理后的滤液。
4.根据权利要求1所述的一种山莴苣苦素的制备方法，其特征在于，在所述步骤S3中，用减压蒸馏装置在压力0～0.1MPa和温度40～50℃的条件下，将步骤S2中的滤液浓缩得稠浸膏；所述稠浸膏的浓度为0.1～0.4g/ml。
5.根据权利要求1所述的一种山莴苣苦素的制备方法，其特征在于，在步骤S4中，将1体积份的稠浸膏分散到3体积份的水中，得混悬液；使用1体积份的正丁醇对1体积份的混悬液进行萃取；使用1体积份的乙酸乙酯对1体积份的水层进行萃取。
6.根据权利要求1所述的一种山莴苣苦素的制备方法，其特征在于，在步骤S4中，在压强0.1～0.2MPa和温度40～80℃的条件下将所述正丁醇层蒸馏浓缩得正丁醇浸膏，所述正丁醇浸膏的浓度为0.2～0.6g/ml。
7.根据权利要求1所述的一种山莴苣苦素的制备方法，其特征在于，在步骤S5中，硅胶柱Ⅰ、硅胶柱Ⅱ和硅胶柱Ⅲ的孔径范围均为200～300目；硅胶柱Ⅰ的硅胶类型为硅胶H、硅胶G和硅胶HF中的任意一种；硅胶柱Ⅱ的硅胶类型为硅胶H、硅胶G和硅胶HF中的任意一种；硅胶柱Ⅲ的硅胶类型为硅胶H、硅胶G和硅胶HF中的任意一种。
8.根据权利要求1述的一种山莴苣苦素的制备方法，其特征在于，在步骤S5中，梯度洗脱时，用氯仿和甲醇组成的混合物进行梯度洗脱。
9.根据权利要求1所述的一种山莴苣苦素的制备方法，其特征在于，在步骤S5中，所述Sephadex LH-20填料的颗粒直径的范围18～111μm。
10.一种山莴苣苦素作为抗炎成分的应用，其特征在于，包括如下步骤：对毛菊苣根进行脱水处理，再依次进行醇冷提、浓缩、萃取纯化、柱纯化，得到山莴苣苦素，将山莴苣苦素用于抗炎药物。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202011063090.0A CN112079804A (zh) | 2020-09-30 | 2020-09-30 | 一种山莴苣苦素及其作为抗炎成分的应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202011063090.0A CN112079804A (zh) | 2020-09-30 | 2020-09-30 | 一种山莴苣苦素及其作为抗炎成分的应用 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN112079804A true CN112079804A (zh) | 2020-12-15 |
Family
ID=73730488
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202011063090.0A Pending CN112079804A (zh) | 2020-09-30 | 2020-09-30 | 一种山莴苣苦素及其作为抗炎成分的应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN112079804A (zh) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112915078A (zh) * | 2021-03-15 | 2021-06-08 | 中国人民解放军空军军医大学 | 山莴苣苦素在制备治疗代谢综合征药物中的应用 |
| CN114569505A (zh) * | 2022-03-01 | 2022-06-03 | 国妆(广州)科技有限公司 | 一种消炎祛痘的祛痘膏 |
-
2020
- 2020-09-30 CN CN202011063090.0A patent/CN112079804A/zh active Pending
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| C.CAVIN ET AL.: "Inhibition of the expression and activity of cyclooxygenase-2 by chicory extract" * |
| 党婷: "毛菊苣化学成分及其生物活性研究" * |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112915078A (zh) * | 2021-03-15 | 2021-06-08 | 中国人民解放军空军军医大学 | 山莴苣苦素在制备治疗代谢综合征药物中的应用 |
| CN112915078B (zh) * | 2021-03-15 | 2022-10-18 | 中国人民解放军空军军医大学 | 山莴苣苦素在制备治疗代谢综合征药物中的应用 |
| CN114569505A (zh) * | 2022-03-01 | 2022-06-03 | 国妆(广州)科技有限公司 | 一种消炎祛痘的祛痘膏 |
| CN114569505B (zh) * | 2022-03-01 | 2023-10-17 | 国妆(广州)科技有限公司 | 一种消炎祛痘的祛痘膏 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN112079804A (zh) | 一种山莴苣苦素及其作为抗炎成分的应用 | |
| CN113150048B (zh) | 青钱柳的提取物及其抗类风湿性关节炎应用 | |
| CN110669034B (zh) | 异黄酮-查尔酮二聚体和查尔酮二聚体及制备方法和用途 | |
| CN113501801B (zh) | 一种乌药烷型倍半萜并香叶基苯聚合物及其制备方法与应用 | |
| CN109384798B (zh) | 一种具有1,3-二氧戊烷连接单元的乌药烷倍半萜二聚体及其制备方法和用途 | |
| CN113264974B (zh) | 一种乙型强心苷的制备及其抗血管生成应用 | |
| Wu et al. | Preparation of paeoniflorin from the stems and leaves of Paeonia lactiflora Pall.‘Zhongjiang’through green efficient microwave-assisted extraction and subcritical water extraction | |
| CN115850218B (zh) | 一种乌药烷型倍半萜二聚体及其制备方法与应用 | |
| CN109369586B (zh) | 一种乌药烷型倍半萜二聚体及其制备方法和用途 | |
| CN110526888B (zh) | 一种从粗糙凤尾蕨中提取香豆素的方法 | |
| CN115010618B (zh) | 一种可降尿酸的金色酰胺醇酯分离纯化方法及其应用 | |
| CN110354116B (zh) | 一种毛菊苣木质素类提取物的制备方法和应用 | |
| CN112939912A (zh) | 一种毛菊苣提取物莴苣苦素的制备方法及其应用 | |
| CN112194704B (zh) | 一种甾体皂苷类化合物及其制备方法和应用 | |
| CN109456163B (zh) | 一种具有对称结构的环烯酮类化合物及其制备方法和应用 | |
| CN107936001B (zh) | 芹菜素-8-C-β-D-木糖苷及其制备方法和应用 | |
| CN106377523B (zh) | 一种天然活性药物及其制备与应用 | |
| CN116730957B (zh) | 一种乌药烷型倍半萜二聚体及其制备方法与应用 | |
| CN111848638A (zh) | 酰基间苯三酚杂萜类化合物及其在制药中的用途 | |
| CN115558011B (zh) | 一种蒽酮类化合物及其制备方法和用途 | |
| CN107074798B (zh) | 红景天中提取草质素的方法 | |
| CN112661799B (zh) | 一种蕨菜中原蕨苷的分离纯化制备方法 | |
| CN114085257B (zh) | 一对苯骈呋喃己内酰胺和两个苯丙素糖苷及制备和用途 | |
| CN112898358B (zh) | 一个从牛蒡叶中提取的具有抗炎活性的新化合物nby-4及其制备方法与应用 | |
| CN109776565B (zh) | 一种苦味素类化合物及其制备方法与应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20201215 |