CN112063535A - 一种真姬菇菌株 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种真姬菇菌株福鸿1号，其已在2020年4月29日于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号为：CGMCC NO.19637。‘福鸿1号’菌种具有子实体簇生型，不易发生瘤盖菇，菇盖圆型、中部和边缘均为白色、大理石花纹较清晰，菌褶白色、波浪状、密度疏，菌柄白色、中实、无绒毛等优良真姬菇菌种的品质特点，且‘福鸿1号’在生产性试验中平均鲜菇产量达到250.0 g/瓶，改良了‘Hy0051’菌盖小且薄和‘Hy0056’菌柄细的缺点，具有良好的推广前景。

Description

一种真姬菇菌株

技术领域

本发明涉及一种真姬菇菌株福鸿1号，属于食用菌领域。

背景技术

真姬菇[Hypsizygus marmoreus (Peck) H.E.Bigelow] 隶属于担子菌亚门、层菌纲、伞菌目、白蘑科、玉蕈属，因它具有独特的蟹鲜味，故有人称它为蟹味菇、秀珍菇、海鲜菇。福建省是中国南方真姬菇的主栽地区，福建顺昌的日产量达到200吨，海鲜菇工厂化生产企业56家，占全国日产量65%以上。随着真姬菇栽培规模的扩大，市场上对真姬菇也产生了不同的评判标准，如栽培周期，菌盖厚度和花纹，菌柄粗细和中空与否和有无绒毛，菌褶颜色和疏密等评价标准。现有的传统栽培品种中，品种‘神农白雪’（Hy0051）栽培周期 120天，菌柄粗长，菌盖小，产量高，耐贮藏。另一主栽品种‘B-4’（Hy0056）菌柄短且较细，菌盖厚，栽培周期 110 天，耐贮藏。随着真姬菇产业的发展，市场上品种归属权矛盾和后备品种不足的问题日益凸显，选育品质优、产量高、商品性佳、市场前景好的优良品种显得尤为重要。

发明内容

本发明的目的是提供一种真姬菇菌株福鸿1号，解决现有生产中使用的真姬菇菌种容易发生瘤盖菇，菌柄绒毛，粗菌柄存在空心不够结实等的技术问题。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

所述真姬菇菌株‘福鸿1号’，属于真姬菇 (Hypsizygus marmoreus)，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为 2020 年4月29日，保藏编号为CGMCC NO.19637。

‘福鸿1号’菌种在 PDA 培养基上菌丝较浓密，气生菌丝呈缕络状从中心向边缘延伸，边缘界限不明显，菌丝分支明显。子实体簇生型，不易发生瘤盖菇。菇盖圆型、中部和边缘均为白色、大理石花纹较清晰，菌褶白色、波浪状、密度疏，菌柄白色、中实、无绒毛。

‘福鸿1号’由真姬菇‘Hy0051’和‘Hy0056’通过单双杂交育成，杂交菌株‘福鸿1号’编号为‘Hy4037’，筛选后进入栽培试验。‘Hy0051’是市场上购买的‘神农白雪’海鲜菇经组织分离获得菌种，‘Hy0056’是天津绿圣蓬源农业科技开发有限公司白玉菇‘B-4’组织分离获得菌种。栽培试验表明，‘Hy4037’具有产量高，菌盖厚，菌柄长而粗的遗传表现型特征。‘Hy4037’改良了其亲本‘Hy0051’菌盖小且薄，以及另一亲本‘Hy0056’菌柄短且细的缺点，融合了亲本‘Hy0051’菌柄长且粗和‘Hy0056’菌盖厚的优点，综合性状优良，产量高于‘Hy0056’，定名为‘福鸿1号’。

应用菌株的拮抗反应对‘福鸿1号’与其亲本菌株‘Hy0051’及‘Hy0056’的差异的判断，检测结果表明，3个供试真姬菇菌株彼此之间交界处菌丝均有较为明显的拮抗线，进一步推定待检菌株真姬菇‘福鸿1号’是不同于两个对照菌株的品种。

本发明的真姬菇菌种福鸿1号经基因组测序数据，采用 Kmer 差减组装技术，获得差异片段（SV），选取 4 个 SV 序列设计特异性引物 4 对（P2、P5、P8、P9），对‘Hy0051’、‘Hy0056’和‘福鸿1号’进行扩增，各特异性片段的 PCR 扩增结果表明：‘Hy0051’有 2 个特异片段P2 和P5，‘Hy0056’有 2 个特异片段P8 和 P9，而‘福鸿1号’继承了两亲本的特异片段，进一步证明它是两个亲本的杂交子且不同于两个亲本菌株的品种。

P2（778bp）：

TCTTTGACACATTCCCCGACGTATCATCACAGTAAAACCACAATGGCACCGCCAGGACACGCCGTCCATTAGCAATAGCACGAAGCGGATTCGGTGCCGTTTCCACCTGGCTGGATGTCGAGAGAATCTGGTTCGGTGAATTCCCCCGCCGTGAGAATCCCTGGCCCAATGTAAGTGTTATTGGAAGCCTGCGTAACAGGAACACTTTGAGATGCTTACCTCCAATTTCTGAAGGCTTTGGTAGGCCATGGAACAAATGTACTGTCTCGAGCTCATTGTACAGGCAGAAAAAACACGACAAAGGCAACTCCTCGCATTCATCATGTCGATTGTCGATCAGGAAGCAGTCGTTGATTGAATGTGGTACAAGGTGTTGGACCATTGCCCAAATTTGATCGTCTCGCATGAACCAGCGGGTGGGCAAGACAGCTAGGACGTCTCCTCCCAAAGGACTGGCGTTGACGAGAGCAGGCTCATTCATGAAAAAGTCCTTTCCCACCTGCCTAACCATTGGGCCAGCCAAGTCTGCCCGGACATCCTCCCGCCACTTCTCCCCTTGACACGCCTCCGCCAAACGTTCCCCAGAAACTTCGCTCAGTACTCGGATGAATGGTCGCGCGAGAGGATTTGAAAATTCCTACATATTGGGTAACAGTAACTCTTTAACAACATTTCAAGCTAAGATAAATGAAATCCCTCTTACGTTCGCAAGAATCTTTCCCAGATCCAGCACAGAGAAGATATTTCCTAACCAGCCTTTCTTGGTCGTCGGATTGAC；

P5（817bp）：

GAAATTGGTGTGGGACATCGCAGGAGGTGCTGATCCAGTTTCTCGGCTCAAAGTCGCACTCGAGACAATCCGCCTTGAATCGGATTTGAAGGCGCTTGATGAAGTCTATGAATGGTTGAATGTGGAACAACGTGAGTCGCCTAATATATTGGAGTATGTACGCCTTCAGAGACAAGATATCATTAGCTGGTTCAAGTACTTCTATCCGGCATGCGCCATTCTACCCTCAGGAACCGTCAGGCCAAGTCAGTATGCCATCTGGGAATGGGGAGTCTGTGAGTGAGAAAGACCAAGCAGCACGTGAAATGGTCGAATTCAGGAACAGCGCTACCACCATTGCCGTCTTCGGCAGAGGGAGCGAAACGCCTGGAGCTGCCTCGGAGCAACATGAATCTGTCCAGGCCTCTGAATCAACAGGCAAGATCCCTGAAACCACGCAACCACCGACAACATCCGTGACTCTAGACATTCCTATCGTGGCACCCCTGCCCGACATGGATGTGGATGGTGACTGGTCAGCGAACTCGCCTTTGACGGATCCTACGGCATCTGAACCTGAGCCCCAAGAACACGAGATTGCTGCTTCGGCATCTTCTAGCGCCGCAGCGAATGATCGGCAGGCGAGGAGGGACGAGATGGCAAAGAGGAGGGATGAAGCGAGGAGACAGCGGTCAGAGAAGGAGATGGCGGCAGCAGATGCAGCTGCAAGAAAGAAGAATGCGGAGGAGAGGGAGAGGCGGAGGCGTAAGAAGAAGAAACTTGGTCCGGGTGATCCGGGCAGATTGCAAGAGAAAACTGCGAAGACAAAGCAGTCACT；

P8（486bp）：

ATTACCACTGAACCCTCCCATATACAGTCGCCAAGTATTGCCTTCAACGCTAAACCCGTCAAGAACTGTGAACCCAACCTTGTCGACAGGTCTTAATGGAATTGTCCAGCAGAAACGATCACATATCCGCCGAACAGAATTGTTGAAATCTGGCCACATGATGCGACTGATCATTGTCCAACCCGCCTTCTCGTATTTCAGCATGTCGCTGTATCGCTCTGGCTGTTGCGCCGGTAAGGTACCCGCGTAATTGACGAGCAGTGACTTTGGCTGGGTCGCAAAAGTGGCAGATGGATAGAGCGAAACAGCGACATCATGACTGATGATGTTCATGACACAAGCTGTAGCAAAATTAGCAGATGTGTGCCCAAATTGAGATACACGACACACTTGAATGGAAGTTCAAAATGACATCTAAAGGTGACGAGGCTGCCGAAAATAGATGAACTATTGCATGACTTTCCGGGTGGCGAAAGTCAAATACGG；

P9（534bp）：

GTACACGCAGCATACCTCATATTTGTCAATGCTTGACGAAAGGCAGTATCCTGGACGGAGGTCTGTTTCTGACGCATGTTTTGTCTCAAAATGACCACTGTTGTAAATTGATGCCACAAAATCTTGCCCAAGATGTTTACCTGTTGATTGAAAGTTAAGGAAGCTGTTAAATTGGTACCGATTGACCCGCTGTATAGAGGCGGGCCTGTGGTGGGTGGCAGCTGAGCGAAATCACCTGCTAGGATAACGCTTAGGCCACCAAACGGTATGTTATGACAATTCCGAGCCTTGGCCAATTGCGTACTGATATCATGCAATGCGTTACAGGACAGCATCGATACTTCGTCTAAAAAGATATAGTCAAGGCCGGCAATTTTCTCACGGACATTAGCTAGGTTCGCTGCATCATTTCTGAAAGCCTGATAGTCTTCTGTGGAACTGTTGATTCCAAACAGATAATGATAAGTTGATCCGTGCAGAAGGGCGGCGGTCGAGCCTGTGGGAGCGACTATCGCGAAGCGGTATTGTTTCCCT。

由于本发明所提供的‘福鸿1号’菌种具有子实体簇生型，不易发生瘤盖菇，菇盖圆型、中部和边缘均为白色、大理石花纹较清晰，菌褶白色、波浪状、密度疏，菌柄白色、中实、无绒毛等优良真姬菇菌种的品质特点，且‘福鸿1号’在生产性试验中平均鲜菇产量达到250.0 g/瓶，改良了‘Hy0051’菌盖小且薄和‘Hy0056’菌柄细的缺点，具有良好的推广前景。

附图说明

图1‘福鸿1号’(Hy4037)与‘Hy0051’和‘Hy0056’拮抗试验；

图2 ‘福鸿1号’菌株SV鉴定电泳图；其中M表示2000bp Marker、泳道1表示Hy0051、泳道2表示Hy0051-41（Hy0051-41是Hy0051的随机的单孢菌株之一）、泳道3表示‘福鸿1号’、泳道4表示Hy0056-22（ Hy0056-22是Hy0056的随机的单孢菌株之一）、泳道5表示Hy0056、泳道6表示阴性对照。

图3‘福鸿1号’标准图片。

图4‘福鸿1号’与亲本‘Hy0056’的代表照片。

具体实施方式

实施例1

真姬菇‘Hy0051’是市场上购买的‘神农白雪’海鲜菇经子实体组织分离法获得菌种。（子实体组织分离法参考文献：王秀艳,子实体组织分离法制备食用菌母种,赤峰学院学报(自然科学版),2016,32(17):13-14。柯丽娜,赖志斌等,杏鲍菇组织分离菌株工厂化栽培试验,江苏农业科学,2015,43(8):239-241）

真姬菇‘Hy0056’是天津绿圣蓬源农业科技开发有限公司白玉菇‘B-4’经子实体组织分离法组织分离获得菌种。

选用主栽的真姬菇‘Hy0051’和‘Hy0056’做杂交亲本，两亲本各选 10 个生长速度较快、气生菌丝较发达的单孢菌株，按照两两配对，共配对 100 个组合，其中 38 个组合可产生锁状联合。经单菌丝尖端分离和培养，对比菌丝生长速度与长势，有 7 个组合菌丝生长速度较慢，舍弃。剩余的 31 个组合继续开展栽培试验。出菇复筛试验产量较好的菌株有12 个。产量高于对照菌株‘Hy0056’的杂交子数量有 9 个，其中产量较好又具有商品性状符合市场需求的有1 个，该菌株具有菌盖较厚、菌柄粗长、子实体较硬易储藏。该杂交菌株定名为‘福鸿 1 号’。

以拮抗反应法对‘福鸿 1 号’菌株与其亲本进行差异对比。

检测依据：依据中华人民共和国农业行业标准《NY/T 1845-2010 食用菌菌种区别性鉴定拮抗反应》进行待检样品的接种、培养和观察。

检测材料：真姬菇菌株3个，其中待检菌株为‘福鸿1号’，对照菌株2株分别为‘Hy0051’和‘Hy0056’。

检验方法：严格按照无菌操作，用Φ5 mm 打孔器分别打取活化后适龄菌种菌落边缘作接种块，两接种块间隔30 mm，分别置于距PDA平板中心点的15 mm 处，菌丝朝上。在25℃的温度下，通风、避光培养至接种块菌丝接触后，再在自然光下培养5 d~7 d。

结果与分析：在灯下或自然光下，观察培养物表面两菌株交界处菌丝反应，结果如图所示(图1)。

检测结论：检测结果表明，3个供试真姬菇菌株彼此之间交界处菌丝均呈现明显拮抗反应，推测待检菌株真姬菇‘福鸿1号’不同于两个对照菌株的品种。

实施例2 用SV检测技术对本菌株进行与其亲本的DNA差异对比。

检测材料：真姬菇菌株3个，其中待检菌株为‘福鸿1号’，对照菌株2株分别为‘Hy0051’和‘Hy0056’。

检验方法：根据基因组测序数据，采用Kmer差减组装技术，获得差异片段（SV），相应选取若干个SV序列设计特异性引物对待测样品进行扩增。（参考文献见 Alkan, C.,Coe, B. P. & Eichler, E. E. Genome structural variation discovery andgenotyping. Nature reviews. Genetics, 2011 (12), 363-376；朱风丽等, 韩国赤芝全基因组重测序分析，世界科学技术-中医药现代化，2019, 21(4)764-774.）。SV试验引物序列由擎科生物技术有限公司合成。

待检菌株菌丝体活化，培养，基因组DNA提取，电泳检测均参照中华人民共和国农业行业标准。

菌种真实性鉴定所用SV引物：

表1 SV引物

结果与分析：SV检测技术建立真姬菇菌株的DNA指纹图谱：根据基因组测序数据，采用Kmer 差减组装技术，获得差异片段（SV），选取 4 个 SV 序列设计特异性引物 4 对（表1），对‘Hy0051’、‘Hy0056’和 Hy4037 进行扩增，各差异片段 DNA 的测序结果见P2、P5、P8、P9，序列如SEQ ID NO.1-4所示。各特异性片段的 PCR 扩增结果分析如图2所示。‘Hy0051’有 2个特异片段（P2 和P5 ），‘Hy0056’有 2 个特异片段（P8 和 P9），而‘福鸿1号’继承了两亲本的特异片段，进一步证明它是杂交子。从图 2可以看出，P2 和 P5 是‘福鸿 1 号’和‘Hy0051’的特异序列； P8 和 P9 是‘福鸿 1 号’和‘Hy0056’的特有序列。综合上述检测结果，可以确定‘福鸿 1 号’是‘Hy0051’和‘Hy0056’的杂交子，它与亲本品种的 DNA 指纹有显著的差异，是不同的品种。

检测结论：SV分析结果表明，待检菌株真姬菇‘福鸿1号’是‘Hy0051’和‘Hy0056’的杂交子，它与亲本品种的 DNA 指纹有显著的差异，是不同的品种。

实施例3

‘福鸿1号’在多批次中试产量结果表明，‘福鸿1号’具备工厂化栽培的要求，产量高于亲本。

参试菌株：福鸿1号’、‘Hy0056’。

试验地点：天津滨海德盛农业科技有限公司。

试验安排：菌种统一制作，试验点按照当地生产管理方式进行栽培管理。

试验结果：试验发现，‘福鸿1号’菌丝在 PDA 中，菌丝较浓密，最适生长温度为 20℃，生长速度为 0.24 cm/d，较亲本‘Hy0056’和‘Hy0051’快 14 %和 7 %。‘福鸿1号’栽培结果如图3所示。

栽培发现：(1)接种到采收的时间，‘福鸿1号’与亲本相同；(2) ‘福鸿1号’平均产量为230.0 g/瓶，对照‘Hy0056’平均产量为198 g/瓶。(3)‘福鸿1号’平均菌盖直径19.5mm、厚度9.5 mm，平均菌柄长度101.0 mm、直径11.4 mm。

中试试验菌株产量结果统计

表2杂交子批次试验结果

试验菌株产量统计学分析：经产量统计学分析，栽培试验结果表明，‘福鸿1号’的平均鲜菇产量230 g/瓶，平均产量比亲本提高 16.2%。‘福鸿1号’的菌盖厚度大于亲本，菌柄直径和长度均显著大于亲本。

实施例4：‘福鸿1号’多批次生产性试验结果表明，适合工厂化生产。

参试菌株：‘福鸿1号’、‘Hy0056’。

试验地点：天津滨海德盛农业科技有限公司。

试验安排：菌种统一制作，实验重复次数3次，杂交子‘福鸿1号’总瓶数31296瓶，对照亲本‘Hy0056’总瓶数31296瓶，试验点按照当地生产管理方式进行栽培管理。

菌株发菌速度统计：菌种接种后，‘福鸿1号’与对照‘Hy0056’的萌发时间基本一致，菌丝浓密度也无差别，污染率都低于1 %。

表3 发菌情况记录表

多批次生产性试验结果表明：‘福鸿1号’相对于对照‘Hy0056’来说菌盖厚度大于亲本，菌柄直径和长度均显著大于亲本（‘福鸿1号’与亲本‘Hy0056’的代表照片见图4）。

表4 生产性试验杂交子出菇情况总表

工厂化试验菌株产量结果统计：‘福鸿1号’（Hy4037）平均产量为250.0 g/瓶，对照‘Hy0056’产量为217.8 g/瓶。

表5生产性试验杂交子产量情况表

试验菌株产量统计学分析：经产量统计学分析，生产性试验结果表明，‘福鸿1号’的平均产量比亲本提高 14.8%。

以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本发明的涵盖范围。

SEQUENCE LISTING

<110> 福建农林大学

天津农学院

天津绿圣蓬源农业科技开发有限公司

天津滨海德盛农业科技有限公司

天津鸿滨禾盛农业技术开发有限公司

<120> 一种真姬菇菌株福鸿1号

<130> 12

<160> 12

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1

<211> 778

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 1

tctttgacac attccccgac gtatcatcac agtaaaacca caatggcacc gccaggacac 60

gccgtccatt agcaatagca cgaagcggat tcggtgccgt ttccacctgg ctggatgtcg 120

agagaatctg gttcggtgaa ttcccccgcc gtgagaatcc ctggcccaat gtaagtgtta 180

ttggaagcct gcgtaacagg aacactttga gatgcttacc tccaatttct gaaggctttg 240

gtaggccatg gaacaaatgt actgtctcga gctcattgta caggcagaaa aaacacgaca 300

aaggcaactc ctcgcattca tcatgtcgat tgtcgatcag gaagcagtcg ttgattgaat 360

gtggtacaag gtgttggacc attgcccaaa tttgatcgtc tcgcatgaac cagcgggtgg 420

gcaagacagc taggacgtct cctcccaaag gactggcgtt gacgagagca ggctcattca 480

tgaaaaagtc ctttcccacc tgcctaacca ttgggccagc caagtctgcc cggacatcct 540

cccgccactt ctccccttga cacgcctccg ccaaacgttc cccagaaact tcgctcagta 600

ctcggatgaa tggtcgcgcg agaggatttg aaaattccta catattgggt aacagtaact 660

ctttaacaac atttcaagct aagataaatg aaatccctct tacgttcgca agaatctttc 720

ccagatccag cacagagaag atatttccta accagccttt cttggtcgtc ggattgac 778

<210> 2

<211> 817

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 2

gaaattggtg tgggacatcg caggaggtgc tgatccagtt tctcggctca aagtcgcact 60

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tgtggaacaa cgtgagtcgc ctaatatatt ggagtatgta cgccttcaga gacaagatat 180

cattagctgg ttcaagtact tctatccggc atgcgccatt ctaccctcag gaaccgtcag 240

gccaagtcag tatgccatct gggaatgggg agtctgtgag tgagaaagac caagcagcac 300

gtgaaatggt cgaattcagg aacagcgcta ccaccattgc cgtcttcggc agagggagcg 360

aaacgcctgg agctgcctcg gagcaacatg aatctgtcca ggcctctgaa tcaacaggca 420

agatccctga aaccacgcaa ccaccgacaa catccgtgac tctagacatt cctatcgtgg 480

cacccctgcc cgacatggat gtggatggtg actggtcagc gaactcgcct ttgacggatc 540

ctacggcatc tgaacctgag ccccaagaac acgagattgc tgcttcggca tcttctagcg 600

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gattgcaaga gaaaactgcg aagacaaagc agtcact 817

<210> 3

<211> 486

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 3

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acccgcgtaa ttgacgagca gtgactttgg ctgggtcgca aaagtggcag atggatagag 300

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atacgg 486

<210> 4

<211> 534

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 4

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gtctgtttct gacgcatgtt ttgtctcaaa atgaccactg ttgtaaattg atgccacaaa 120

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<210> 5

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<212> DNA

<213> 人工序列

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<210> 6

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<212> DNA

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<212> DNA

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<212> DNA

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<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 9

attaccactg aaccctccca 20

<210> 10

<211> 20

<212> DNA

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<400> 10

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<211> 20

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<213> 人工序列

<400> 11

gtacacgcag catacctcat 20

<210> 12

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 12

agggaaacaa taccgcttcg 20

Claims (1)

1.一种真姬菇菌株，其特征在于：所述真姬菇为真姬菇（Hypsizygus marmoreus）福鸿1号，在2020年4月29日于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号为：CGMCC NO.19637。

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