CN112011650A - 中华蜜蜂囊状幼虫病毒rt-rpa检测引物和探针及试剂盒 - Google Patents

中华蜜蜂囊状幼虫病毒rt-rpa检测引物和探针及试剂盒 Download PDF

Info

Publication number
CN112011650A
CN112011650A CN202011203754.9A CN202011203754A CN112011650A CN 112011650 A CN112011650 A CN 112011650A CN 202011203754 A CN202011203754 A CN 202011203754A CN 112011650 A CN112011650 A CN 112011650A
Authority
CN
China
Prior art keywords
rpa
probe
primer
chinese bee
bee sacbrood
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN202011203754.9A
Other languages
English (en)
Other versions
CN112011650B (zh
Inventor
侯春生
杨卅
袁春颖
邓炎春
赵红霞
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Institute of Apicultural Research of Chinese Academy of Agricultural Sciences
Original Assignee
Institute of Apicultural Research of Chinese Academy of Agricultural Sciences
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Institute of Apicultural Research of Chinese Academy of Agricultural Sciences filed Critical Institute of Apicultural Research of Chinese Academy of Agricultural Sciences
Priority to CN202011203754.9A priority Critical patent/CN112011650B/zh
Publication of CN112011650A publication Critical patent/CN112011650A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN112011650B publication Critical patent/CN112011650B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/70—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving virus or bacteriophage
    • C12Q1/701—Specific hybridization probes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/166—Oligonucleotides used as internal standards, controls or normalisation probes

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明提供一种中华蜜蜂囊状幼虫病毒RT‑RPA检测引物和探针及试剂盒。本发明还提供一种方便快捷、特异性高的中华蜜蜂囊状幼虫病毒RT‑RPA检测方法，所述RT‑RPA检测引物和探针的序列分别如SEQ ID NO:1‑3所示。本方法能满足现场应急对中华蜜蜂囊状幼虫病毒快速诊断的需求。

Description

中华蜜蜂囊状幼虫病毒RT-RPA检测引物和探针及试剂盒
技术领域
本发明涉及分子生物学检测技术领域，具体地说，涉及中华蜜蜂囊状幼虫病毒RT-RPA检测引物和探针及试剂盒。
背景技术
中华蜜蜂是我国特有的蜂种，在我国的农业作物开花授粉及野生植物的多样性具有重要的生态意义。但是自上个世纪70年代以来，中华蜜蜂一直受到中华蜜蜂囊状幼虫病毒病的威胁，给中华蜜蜂的健康发展带来严重的阻碍。中华蜜蜂囊状幼虫病，是由中华蜜蜂囊状幼虫病毒（Chinese Sacbrood Virus，CSBV）引起的一种高致病性、高传染性的病毒性疾病，俗称为“烂子病”，可以造成蜜蜂幼虫的大量死亡。CSBV属于小 RNA 病毒科，基因组由长约 8.8 kb 的单股正链 RNA 分子组成，整个基因组有一个大的开放阅读框（ORF）。CSBV编码四种结构蛋白（VP1~VP4）。中华蜜蜂囊状幼虫病毒的传播分为水平和垂直传播，其水平传播更为广泛，大体可以归纳为群内传播、群间传播、蜂场间传播和地区间传播四个途径。更为严重的是，在发现有典型症状时，蜂群已感染非常严重，一般采取毁巢或焚烧的手段阻止病毒的传播，给蜂农带来巨大经济损失，并严重影响到农作物的开花授粉。开发有效的病毒早期检测与诊断技术，做到早发现、早预防、早控制显得尤为重要。
对CSBV的早期、快速和有效检测是预防和控制疫情传播的重要手段之一，目前，已经建立了多种CSBV检测方法，主要包括病毒分离鉴定、间接免疫荧光方法、免疫电镜法和ELISA等传统方法，但这些传统方法费时费力、灵敏性较低，随着分子生物学的发展，一系列PCR方法也建立起来，如RT-PCR、实时荧光RT-PCR等。RT-PCR方法需要精确度高、操作复杂和价格昂贵的PCR仪，并且需要良好的实验室条件和熟练的技术人员，因此，RT-PCR系列检测方法不适合于在基层开展，更不适合养蜂场的现场检测，现有的用于CSBV检测的等温检测方法，主要包括RT-LAMP，上述等温方法一般需要45-60min才能完成检测，并且RT-LAMP方法需要设计6条引物，且有时难以设计精确的引物，而且需要较长时间才能完成检测。
重组酶聚合酶扩增(Recombinase Polymerase Amplification，RPA)是一种新型等温扩增技术，通过一对引物与模板同源区域特异性结合形成重组酶引物复合体，实现链置换作用，并在DNA聚合酶作用下实现延伸。该技术在一定温度条件下可实现对目标产物的扩增从而达到检测目的，无需经历热循环过程，大大简化了对大型仪器的需求，缩短了反应时间，操作简单方便，可满足现场应急对病原体快速诊断的需求，近年来成为分子诊断行业的研究热点。
发明内容
本发明的目的是提供中华蜜蜂囊状幼虫病毒RT-RPA检测引物和探针及试剂盒。
本发明的另一目的是提供中华蜜蜂囊状幼虫病毒的RT-RPA检测方法。
为了实现本发明目的，第一方面，本发明提供一套中华蜜蜂囊状幼虫病毒RT-RPA检测引物和探针，上、下游引物和探针序列分别如下（SEQ ID NO:1-3）：
上游引物：5’-ATCACCTAGTGGAGCGCCCATCACCGTAGT-3’
下游引物：5’-CATTATCAAATCATCACCGTAGCAGAACAA-3’
探针：5’-ATATTTTATATGTTTTTGTAGCTTGGGAGA[FAM-dT]GC[THF]AG[BHQ-dT]AGGAAGTAAAGAA[C3-spacer]-3’。
上述引物和探针是根据已经公开的中华蜜蜂囊状幼虫病毒基因组序列（GenBank:HM237361.1），通过分析其保守的RNA依赖的RNA聚合酶基因序列，设计了若干套RT-RPA检测引物和探针方案，并从中筛选出检测效果最佳（灵敏度和特异性较好）的引物及探针。
第二方面，本发明提供含有SEQ ID NO:1-3所示引物和探针的检测试剂或试剂盒。
第三方面，本发明提供中华蜜蜂囊状幼虫病毒RT-RPA检测试剂盒，所述试剂盒包括SEQ ID NO:1-3所示引物和探针，还含有反转录酶（如M-MLV反转录酶）、结合单链核酸的DNA重组酶、单链DNA结合蛋白、链置换DNA聚合酶、磷酸激酶、ATP、标准阳性模板（体外转录RNA标准分子，其序列参见GenBank:MN395732.1）、再水化缓冲液、醋酸镁溶液、RNA酶抑制剂、酶扩增八联管等中的至少一种。
第四方面，本发明提供一种利用RT-RPA技术检测中华蜜蜂囊状幼虫病毒的方法（含非诊断目的），包括以下步骤：
1）提取待测样本（蜜蜂幼虫）总RNA；
2）配制含有SEQ ID NO:1-3所示引物和探针的RT-RPA反应体系，向反应体系中加入上述提取的总RNA，进行RT-RPA扩增；
3）分析扩增产物。
所述RT-RPA反应体系包括（按总体积50ul计）：
再水化缓冲液 12.5ul
20umol/L上游引物 2ul
20umol/L下游引物 2ul
10umol/L探针 0.6ul
RNA模板 1ul
ddH2O 29.4ul
280mM醋酸镁溶液 2.5ul
RT-RPA扩增条件为：37-42℃，20-30min。优选39℃，20min。
前述的方法，步骤3）包括：根据是否出现扩增曲线，分析待测样本中是否含有中华蜜蜂囊状幼虫病毒；如果有相应的扩增曲线表示待测样本含有中华蜜蜂囊状幼虫病毒，结果为阳性；如果没有扩增曲线或扩增曲线低于检测阈值表示待测样本中未检测到中华蜜蜂囊状幼虫病毒，结果为阴性。
借由上述技术方案，本发明至少具有下列优点及有益效果：
（一）本发明首次采用RT-RPA技术建立快速检测中华蜜蜂囊状幼虫病毒的方法，并通过特异性、灵敏度及稳定性评价，可用于临床现场检测，为CSBV现场检测提供一种灵敏、可靠的新方法。
（二）本发明的引物和探针组合是根据靶标序列设计多对RPA引物、探针，并经大量实验筛选、反复优化获得的，特异性好，与其他病毒无交叉反应，能将CSBV与其他病毒如蜜蜂残翅病毒（DWV）、以色列急性麻痹病毒（IAPV）、慢性麻痹病毒（CBPV）有效鉴别开来。
（三）通过RPA反应能够将痕量的核酸模板扩增到可以检出的水平，本发明所建立的检测方法可检测出单拷贝的核酸。
（四）检测速度快，与常规PCR相比，不经过变温历程，约20min即可完成反应，尤其适于基层实验室和现场快速核酸检测。
附图说明
图1为本发明较佳实施例中CSBV实时荧光RT-RPA方法的特异性分析结果。其中，1和2分别表示不同地区来源的CSBV检测结果。
图2为本发明较佳实施例中CSBV实时荧光RT-RPA方法的灵敏性分析结果。
具体实施方式
本发明提供一种可以快速检测CSBV的逆转录重组酶聚合酶等温扩增（RT-RPA）检测方法，该方法不仅可以快速检测CSBV，而且不需要价格昂贵的PCR扩增仪等仪器，节约成本，对蜂群的日常监测、流行病学调查具有重要意义。
本发明提供的技术方案之一：
一种快速检测中华蜜蜂囊状幼虫病毒的引物组，所述引物组的核苷酸序列如下：
CSBV-F:5’-ATCACCTAGTGGAGCGCCCATCACCGTAGT-3’(SEQ ID NO:1)
CSBV-R:5’-CATTATCAAATCATCACCGTAGCAGAACAA-3’(SEQ ID NO:2)
一种快速检测中华蜜蜂囊状幼虫病毒的Probe探针，序列如下：
ATATTTTATATGTTTTTGTAGCTTGGGAGA[FAM-dT]GC[THF]AG[BHQ-dT]AGGAAGTAAAGAA[C3-spacer] (SEQ ID NO:3)。
本发明提供的技术方案之二：
一种中华蜜蜂囊状幼虫病毒RT-RPA检测试剂盒，该试剂盒包含SEQ ID NO:1所示的上游引物，SEQ ID NO:2所示的下游引物；SEQ ID NO:3所示的探针；扩增靶基因序列的重组酶聚合酶试剂。
进一步地，所述的试剂盒还含有阳性对照、醋酸镁溶液（MgOAc）、反应管。
优选地，所述反应管内储存有以干粉形式存在的：M-MLV反转录酶、DNA重组酶、DNA聚合酶、单链结合蛋白、磷酸激酶和ATP、RNA酶抑制剂。
所述阳性对照为体外转录RNA标准分子。其序列参见GenBank:MN395732.1。
本发明提供的技术方案之三：
一种快速检测中华蜜蜂囊状幼虫病毒RT-RPA方法，包括以下步骤：
1)从感染的蜜蜂幼虫中提取总RNA
2)RT-RPA：以提取的总RNA为模板，使用上述的试剂盒进行RT-RPA反应；
3)结果分析：将反应管置于荧光检测仪中，观察有无明显的扩增曲线。如果有明显的扩增曲线则判定样本阳性；如果没有明显扩增曲线则判定样本阴性。
前述的RT-RPA方法，步骤2)中RT-RPA的反应体系包括（按总体积50ul计）：
再水化缓冲液 12.5ul
20umol/L上游引物 2ul
20umol/L下游引物 2ul
10umol/L探针 0.6ul
RNA模板 1ul
ddH2O 29.4ul
280mM醋酸镁溶液 2.5ul
RT-RPA的反应程序为：39℃反应20min。
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。若未特别指明，实施例均按照常规实验条件，如Sambrook等分子克隆实验手册（Sambrook J & Russell DW,Molecular Cloning: a Laboratory Manual, 2001），或按照制造厂商说明书建议的条件。
以下实施例中使用TwistDx公司生产的TwistAmpTM RT exo kit试剂盒，包括再水化缓冲溶液、MgOAc、M-MLV反转录酶、DNA重组酶、DNA聚合酶、单链结合蛋白、磷酸激酶、ATP等试剂，其中，M-MLV反转录酶、DNA重组酶、DNA聚合酶、单链结合蛋白、磷酸激酶、ATP等试剂以干粉的形式贮存在酶扩增八联管内。
实施例1 特异性RPA引物和探针的设计
根据已经公开的中华蜜蜂囊状幼虫病毒基因组序列（GenBank: HM237361.1），通过分析其保守的RNA依赖的RNA聚合酶基因序列，进行引物设计，并对所设计的引物进行初步筛选，获得一对灵敏度和特异性较好的用于扩增CSBV特异性序列的引物对CSBV-F和CSBV-R，序列如下：
CSBV-F:5’-ATCACCTAGTGGAGCGCCCATCACCGTAGT-3’(SEQ ID NO:1)
CSBV-R:5’-CATTATCAAATCATCACCGTAGCAGAACAA-3’(SEQ ID NO:2)
扩增片段长度为166bp。
进一步设计出与靶基因序列互补的探针，探针序列如下：
ATATTTTATATGTTTTTGTAGCTTGGGAGA[FAM-dT]GC[THF]AG[BHQ-dT]AGGAAGTAAAGAA[C3-spacer] (SEQ ID NO:3)。
实施例2 用于检测CSBV的RT-RPA试剂盒的建立
中华蜜蜂囊状幼虫病毒RT-RPA检测试剂盒，该试剂盒包含SEQ ID NO:1所示的上游引物，SEQ ID NO:2所示的下游引物；SEQ ID NO:3所示的探针；阳性对照、MgOAc、反应管。
所述反应管内储存有以干粉形式存在的：M-MLV反转录酶、DNA重组酶、DNA聚合酶、单链结合蛋白、磷酸激酶和ATP、RNA酶抑制剂。
所述的阳性对照为体外转录RNA标准分子。其序列参见GenBank:MN395732.1。
实施例3 RT-RPA检测方法的建立
RT-RPA扩增所采用的反应体系如下（按总体积50ul计）：
再水化缓冲液 12.5ul
20umol/L上游引物 2ul
20umol/L下游引物 2ul
10umol/L探针 0.6ul
RNA模板 1ul
ddH2O 29.4ul
280mM醋酸镁溶液 2.5ul
RT-RPA的反应程序为：39℃反应20min。
将配置完成的反应管放置于荧光检测仪，根据仪器检测到的荧光信号，观察是否生成荧光信号曲线。
结果判断标准如下：
1)在20分钟内，有明显的扩增曲线生成，判断为阳性样本；
2)在20分钟内，没有明显的扩增曲线生成，判断为阴性样本。
实施例4 临床样品的检测
分别将四川、贵州感染中华蜜蜂囊状幼虫病毒的蜜蜂幼虫提取RNA作为模板，利用实施例3的方法进行RT-RPA检测。结果如图1所示，四川、贵州感染蜂样都生成荧光曲线，水对照没有扩增曲线，表明该检测方法特异性良好。
实施例5 灵敏性分析
将贵州感染中华蜜蜂囊状幼虫病毒的幼虫提取RNA作为模板，将总RNA分别稀释成1000ng、100ng、10ng、1ng，然后进行RT-RPA检测。结果如图2所示，感染蜂样都生成荧光曲线，且随着RNA浓度的降低，起峰越来越晚，水对照没有扩增曲线，说明该检测方法灵敏性良好。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之做一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
序列表
<110> 中国农业科学院蜜蜂研究所
<120> 中华蜜蜂囊状幼虫病毒RT-RPA检测引物和探针及试剂盒
<130> KHP201114230.4
<160> 3
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
atcacctagt ggagcgccca tcaccgtagt 30
<210> 2
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
cattatcaaa tcatcaccgt agcagaacaa 30
<210> 3
<211> 48
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
atattttata tgtttttgta gcttgggaga gcagtaggaa gtaaagaa 48

Claims (7)

1.中华蜜蜂囊状幼虫病毒RT-RPA检测引物和探针，其特征在于，上、下游引物和探针序列分别如下：
上游引物：5’-ATCACCTAGTGGAGCGCCCATCACCGTAGT-3’
下游引物：5’-CATTATCAAATCATCACCGTAGCAGAACAA-3’
探针：5’-ATATTTTATATGTTTTTGTAGCTTGGGAGA[FAM-dT]GC[THF]AG[BHQ-dT]AGGAAGTAAAGAA[C3-spacer]-3’。
2.含有权利要求1所述引物和探针的检测试剂或试剂盒。
3.中华蜜蜂囊状幼虫病毒RT-RPA检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述引物和探针，还含有反转录酶、结合单链核酸的DNA重组酶、单链DNA结合蛋白、链置换DNA聚合酶、磷酸激酶、ATP、标准阳性模板、再水化缓冲液、醋酸镁溶液、RNA酶抑制剂、酶扩增八联管。
4.非诊断目的RT-RPA检测中华蜜蜂囊状幼虫病毒的方法，其特征在于，包括以下步骤：
1）提取待测样本总RNA；
2）配制含有权利要求1所述引物和探针的RT-RPA反应体系，向反应体系中加入上述提取的总RNA，进行RT-RPA扩增；
3）分析扩增产物。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤2）所述RT-RPA反应体系包括：
再水化缓冲液 12.5ul
20umol/L上游引物 2ul
20umol/L下游引物 2ul
10umol/L探针 0.6ul
RNA模板 1ul
ddH2O 29.4ul
280mM醋酸镁溶液 2.5ul。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，RT-RPA扩增条件为：37-42℃，20-30min。
7.根据权利要求4-6任一项所述的方法，其特征在于，步骤3）包括：根据是否出现扩增曲线，分析待测样本中是否含有中华蜜蜂囊状幼虫病毒；如果有相应的扩增曲线表示待测样本含有中华蜜蜂囊状幼虫病毒，结果为阳性；如果没有扩增曲线或扩增曲线低于检测阈值表示待测样本中未检测到中华蜜蜂囊状幼虫病毒，结果为阴性。
CN202011203754.9A 2020-11-02 2020-11-02 中华蜜蜂囊状幼虫病毒rt-rpa检测引物和探针及试剂盒 Active CN112011650B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202011203754.9A CN112011650B (zh) 2020-11-02 2020-11-02 中华蜜蜂囊状幼虫病毒rt-rpa检测引物和探针及试剂盒

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202011203754.9A CN112011650B (zh) 2020-11-02 2020-11-02 中华蜜蜂囊状幼虫病毒rt-rpa检测引物和探针及试剂盒

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN112011650A true CN112011650A (zh) 2020-12-01
CN112011650B CN112011650B (zh) 2021-04-06

Family

ID=73527770

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202011203754.9A Active CN112011650B (zh) 2020-11-02 2020-11-02 中华蜜蜂囊状幼虫病毒rt-rpa检测引物和探针及试剂盒

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN112011650B (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112779341A (zh) * 2021-02-25 2021-05-11 中国农业科学院蜜蜂研究所 检测中华蜜蜂囊状幼虫病的引物组、探针及试剂盒
CN114182047A (zh) * 2021-12-02 2022-03-15 浙江省农业科学院 一种可视化快速检测中华鳖出血综合症病毒tshsv的rt-rpa试剂盒、引物及探针

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112779341A (zh) * 2021-02-25 2021-05-11 中国农业科学院蜜蜂研究所 检测中华蜜蜂囊状幼虫病的引物组、探针及试剂盒
CN114182047A (zh) * 2021-12-02 2022-03-15 浙江省农业科学院 一种可视化快速检测中华鳖出血综合症病毒tshsv的rt-rpa试剂盒、引物及探针

Also Published As

Publication number Publication date
CN112011650B (zh) 2021-04-06

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN108676920B (zh) 一种快速检测小鼠诺如病毒引物、试剂盒及其rt-rpa方法
CN110760620A (zh) 一种猪瘟病毒与非洲猪瘟病毒双重荧光pcr检测试剂、试剂盒和检测方法
CN111074000A (zh) 一种区分asfv野毒株与双基因缺失株的三重荧光定量pcr检测材料及试剂盒
RU2506317C2 (ru) Способ выявления кишечных вирусов в клинических образцах и воде методом мультиплексной пцр с детекцией в режиме реального времени и перечень последовательностей для его осуществления
CN108384899B (zh) 一种检测新型鹅星状病毒的荧光定量pcr试剂盒及应用
CN112011650B (zh) 中华蜜蜂囊状幼虫病毒rt-rpa检测引物和探针及试剂盒
CN113817868A (zh) 一种用于检测新型冠状病毒及其变异株的引物、探针组合物及试剂盒
CN110643745A (zh) 一种用于检测猫杯状病毒和猫细小病毒的组合物、试剂盒及其应用
CN112359125A (zh) 一种快速检测格特隐球菌的方法
CN111206121A (zh) 一种用于检测新型冠状病毒orflab和S基因的试剂盒
CN112739833A (zh) 利用巢式RPA技术检测SARS-CoV-2的引物对、探针、试剂盒及其应用
CN113652505A (zh) 检测新型冠状病毒及其voc-202012/01突变株的方法和试剂盒
CN105154584B (zh) 一种快速区分prrsv经典毒株和变异毒株的hrm非标记探针方法及其引物和探针
CN106755574B (zh) 一种高灵敏度的OsHV‑1实时荧光定量PCR检测试剂盒及方法
CN111676316B (zh) 一种快速区分非洲猪瘟病毒基因ii型与其它基因型的引物、探针及其检测方法
CN109735645B (zh) 一种检测球形孢子丝菌的实时荧光pcr引物、探针及试剂盒
CN114182046B (zh) 人类疱疹病毒的病原体核酸检测引物探针组合、试剂盒及其应用
CN110894550A (zh) 鳗鲡疱疹病毒（hva）的raa恒温荧光检测方法及试剂
KR20230097514A (ko) 흰반점 증후군 바이러스 검출용 조성물 및 이의 검출방법
CN112048573A (zh) 用于检测棉花曲叶病毒的rpa引物、试剂盒及其检测方法与应用
CN110894551A (zh) 草鱼出血病i型病毒（gcrv-i）的raa恒温荧光检测方法及试剂
RU2795016C1 (ru) Олигонуклеотиды для определения мутации S:delVYY143-145 SARS-CoV-2
RU2791958C1 (ru) Олигонуклеотиды для определения мутации S:N501Y SARS-CoV-2
CN109182599A (zh) 用于检测草鱼出血病毒的特异性引物对、探针、检测试剂盒
CN103834746B (zh) 一组快速检测牛、羊赤羽病病毒的等温扩增引物及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant