CN112011502A - 一种猪骨骼肌卫星细胞高效分离和纯化的方法 - Google Patents
一种猪骨骼肌卫星细胞高效分离和纯化的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN112011502A CN112011502A CN202010940072.XA CN202010940072A CN112011502A CN 112011502 A CN112011502 A CN 112011502A CN 202010940072 A CN202010940072 A CN 202010940072A CN 112011502 A CN112011502 A CN 112011502A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- skeletal muscle
- cell
- muscle satellite
- satellite cells
- culture
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 210000000419 skeletal muscle satellite cell Anatomy 0.000 title claims abstract description 43
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 14
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 35
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims abstract description 19
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 claims abstract description 15
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims abstract description 13
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims abstract description 12
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 claims abstract description 10
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 claims abstract description 10
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 claims abstract description 10
- 238000012136 culture method Methods 0.000 claims abstract description 10
- 230000029087 digestion Effects 0.000 claims abstract description 10
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims abstract description 9
- 108010019160 Pancreatin Proteins 0.000 claims abstract description 7
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 claims abstract description 7
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 claims abstract description 7
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims abstract description 7
- 229940055695 pancreatin Drugs 0.000 claims abstract description 7
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 claims abstract description 7
- 101001023030 Toxoplasma gondii Myosin-D Proteins 0.000 claims abstract description 6
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 claims abstract description 6
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 claims abstract description 6
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 6
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims abstract description 6
- FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 4',6-Diamino-2-phenylindol Chemical compound C1=CC(C(=N)N)=CC=C1C1=CC2=CC=C(C(N)=N)C=C2N1 FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 5
- 101000601661 Homo sapiens Paired box protein Pax-7 Proteins 0.000 claims abstract description 5
- 102100037503 Paired box protein Pax-7 Human genes 0.000 claims abstract description 5
- 238000007873 sieving Methods 0.000 claims abstract description 5
- 238000003125 immunofluorescent labeling Methods 0.000 claims abstract description 4
- 210000003855 cell nucleus Anatomy 0.000 claims abstract description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims abstract description 3
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 7
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 7
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 claims description 6
- YRQNKMKHABXEJZ-UVQQGXFZSA-N chembl176323 Chemical compound C1C[C@]2(C)[C@@]3(C)CC(N=C4C[C@]5(C)CCC6[C@]7(C)CC[C@@H]([C@]7(CC[C@]6(C)[C@@]5(C)CC4=N4)C)CCCCCCCC)=C4C[C@]3(C)CCC2[C@]2(C)CC[C@H](CCCCCCCC)[C@]21C YRQNKMKHABXEJZ-UVQQGXFZSA-N 0.000 claims description 5
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 3
- 239000006481 glucose medium Substances 0.000 claims 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 claims 1
- 210000002027 skeletal muscle Anatomy 0.000 abstract description 6
- 238000011160 research Methods 0.000 abstract description 5
- 238000011161 development Methods 0.000 abstract description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 abstract description 3
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 7
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 7
- 210000001057 smooth muscle myoblast Anatomy 0.000 description 6
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 6
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 101100351033 Mus musculus Pax7 gene Proteins 0.000 description 3
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 3
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 3
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 3
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- 241000193159 Hathewaya histolytica Species 0.000 description 2
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 2
- 238000007664 blowing Methods 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 235000009161 Espostoa lanata Nutrition 0.000 description 1
- 240000001624 Espostoa lanata Species 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101150013833 MYOD1 gene Proteins 0.000 description 1
- JLVVSXFLKOJNIY-UHFFFAOYSA-N Magnesium ion Chemical compound [Mg+2] JLVVSXFLKOJNIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 101100239689 Takifugu rubripes myod gene Proteins 0.000 description 1
- 101100239691 Xenopus laevis myod1-a gene Proteins 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 210000002615 epidermis Anatomy 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 210000003194 forelimb Anatomy 0.000 description 1
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 229910001425 magnesium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000001000 micrograph Methods 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 230000004070 myogenic differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000001114 myogenic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001087 myotubule Anatomy 0.000 description 1
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 1
- 210000000944 nerve tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 235000015277 pork Nutrition 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 239000010409 thin film Substances 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0652—Cells of skeletal and connective tissues; Mesenchyme
- C12N5/0658—Skeletal muscle cells, e.g. myocytes, myotubes, myoblasts
- C12N5/0659—Satellite cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2509/00—Methods for the dissociation of cells, e.g. specific use of enzymes
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明公开了一种猪骨骼肌卫星细胞体外培养方法，包括以下步骤：将猪骨骼肌肉组织块依次用II型胶原酶溶液和胰蛋白酶消化后过筛，固液分离得到沉淀物；将沉淀物制成细胞悬液采用差速贴壁纯化培养，直到细胞密度达到70%及以上，用胰酶消化，用完全培养基终止消化离心，弃去上清液加入培养基重悬后进行传代培养；骨骼肌卫星细胞的鉴定：对传代培养的骨骼肌卫星细胞进行PAX7和MyoD基因免疫荧光染色鉴定，显示都呈阳性表达，且与DAPI染色的的细胞核完全重叠表明分离的细胞为骨骼肌卫星细胞。本发明的猪骨骼肌卫星细胞体外培养方法操作简便、获得细胞数量多，而且细胞纯度高，为猪骨骼肌的生长发育研究提供材料。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域，关于一种猪骨骼肌卫星细胞的高效分离和纯化培养方法。
背景技术
猪肉是日常生活中最主要的消费肉类，猪的产肉率与骨骼肌生长发育紧密相关，骨骼肌卫星细胞成肌分化方面的研究需要纯度高的骨骼肌卫星细胞系。
根据已报道的分离培养方法如猪骨骼肌单根肌纤维移植方法《猪骨骼肌卫星细胞体外培养方法》获得的卫星细胞的纯度低；按照公开报道的骨骼肌卫星细胞分离方法《一种动物肌卫星细胞的分离培养技术》分离骨骼肌细胞分离方法，获得的骨骼肌卫星细胞数量非常少，已有的公开的其他动物的骨骼肌卫星细胞分离的方法在上述操作获得的细胞数量少、细胞纯度低，不能满足骨骼肌分子调控机制的研究需要，一种高效、可重复的猪骨骼肌卫星细胞分离方法亟待建立。
发明内容
发明目的：本发明所要解决的技术问题是建立了一种操作简便、获得的细胞数量多、细胞纯度较高的猪骨骼肌卫星细胞体外培养方法，为猪骨骼肌的生长发育研究提供材料。
技术方案：为了解决上述技术问题，本发明提供了一种猪骨骼肌卫星细胞体外培养方法，包括以下步骤：
1）将猪骨骼肌肉组织块依次用II型胶原酶溶液和胰蛋白酶消化后过筛，固液分离得到沉淀物；
2）将步骤1）的沉淀物制成细胞悬液采用差速贴壁纯化培养，直到细胞密度达到70%及以上，用胰酶消化，用完全培养基终止消化离心，弃去上清液加入培养基重悬后进行传代培养；
3）骨骼肌卫星细胞的鉴定：对步骤2）中传代培养的骨骼肌卫星细胞进行PAX7和MyoD基因免疫荧光染色鉴定，显示都呈阳性表达，且与DAPI染色的的细胞核完全重叠表明分离的细胞为骨骼肌卫星细胞。
其中，所述步骤1）中的II型胶原酶用量为0.25U/mg肌肉组织。
其中，所述步骤1）的固液分离先采用的是孔径为100目~300目的细胞筛网过筛，收集滤液，再取上清800-1000r/min离心8min得到沉淀物。
其中，所述步骤2）中的差速贴壁纯化培养具体步骤为：将细胞悬液培养0.5-1h后的细胞瓶中的上清转移至新的培养瓶，接着每0.5h将上清转移一次，共转移三次，第三次转移在细胞瓶中培养48h后更换培养液。
其中，所述步骤2）中胰蛋白酶的浓度为0.25% ，体积为所加入肌肉组织的1倍。
其中，所述步骤2）完全培养基为80%DMEM高糖培养基+20%FBS。
有益效果：相比于现有技术，本发明具备以下优点：本发明的猪骨骼肌卫星细胞体外培养方法操作简便、获得细胞数量多，而且细胞纯度高，为猪骨骼肌的生长发育研究提供材料。
附图说明
图1为使用《一种动物肌卫星细胞的分离培养技术》中方法进行原代培养的骨骼肌卫星细胞显微镜图；原代第三次转移后培养48h的肌卫星细胞；
图2为本发明实施例提供的原代培养的骨骼肌卫星细胞显微镜图，其中，A：原代第三次转移后培养48h的肌卫星细胞；B：原代第4天的卫星细胞；C：分离纯化后的原代卫星细胞；
图3骨骼肌卫星细胞免疫荧光检测早期特异表达的标记蛋白（PAX7）和成肌标记蛋白（MyoD）；A、B为PAX7阳性表达；C、D为 MyoD阳性表达。
具体实施方式
下面对本发明的技术方案进行进一步说明。
本发明培养过程中的试剂来源公司、货号及原产地：
（1）II型胶原酶（Collagenase from Clostridium histolyticum）（c6885,Sigma,USA）
（2）DMEM高糖培养基(DMEM/High glucose)（cat#SH30243.01,Hyclone,USA）
（3）PBS缓冲液（PBS）（PBS 1X）（cat#30256.01,Hyclone,USA）
（4）0.25%胰酶（TRYPSIN）（Ref#25200-072,Gibco，Canada）
（5）胎牛血清（FBS）（Ref#10270-106,Gibco，Brazil）
（6）Ⅳ型胶原酶（Collagenase from Clostridium histolyticum）（c5138,Sigma,USA）
实施例1
一种猪骨骼肌卫星细胞体外培养方法，包括以下步骤：
（1）实验试剂和仪器的准备
现配0.1%II型胶原酶溶液：20mg胶原酶溶解于20ml 无钙、镁离子的PBS中，0.22um滤器过滤后使用，-20℃保存，37℃溶解；
完全培养基：DMEM高糖+20%FBS；含2%双抗PBS的50ml离心管2管；0.25%胰酶适量；100目300目细胞筛网、眼科剪、镊子高压灭菌；培养皿。
（2）采集样品
1日龄健康大白猪放血致死；对表皮消毒后使用无菌的手术器械取出猪第三至第六肋骨间的背最长肌肌肉组织，时间控制在5Min内。取出的肌肉组织用酒精棉球擦拭，快速置于含2%双抗（青霉素和链霉素）的PBS中快速转移至超净工作台。
（3）肌肉组织消化
将背最长肌肌肉组织置于无菌10cm的培养皿上，用含2%双抗（青霉素和链霉素）的PBS清洗3次，剔除可见的血管、神经以及结缔组织，剪碎成1mm3大小的组织块，时间需在2min内。
将切好的组织块约5000mg移入另一管50ml无菌离心管中，加入10ml的0.1%II型胶原酶溶液（1250U），置于37℃水浴摇床中消化30min，每隔10min拿出进行一次上下颠倒，振幅为100r/min，为防止污染，可以在离心管外多套几层薄膜手套。
将消化后的液体移至15ml离心管中，1000rpm离心8min，弃上清，去除II型胶原酶，加入4ml的0.25%胰酶，吹打均匀后置于37℃培养箱消化20min，每隔10min混匀一次。
（4）细胞分离
加入含20%FBS的DMEM完全培养基终止消化。依次用孔径为100目、300目的细胞筛网过筛，收集滤液，取上清到新的离心管中，1000r/min离心8min；离心后去除上清液，离心管内的沉淀加适量完全培养液，吹打均匀，制成细胞悬液接种于细胞培养瓶中，置CO2培养箱（37℃，5% CO2）培养。
（5）差速贴壁纯化
将培养0.5-1h后的细胞瓶中的上清转移至新的培养瓶，接着每0.5h将上清转移一次，共转移三次，第三次转移在细胞瓶中培养48h后更换培养液。
（6）传代培养
在细胞密度达到70%左右时，即可用0.25%胰酶在37℃培养箱中消化20s，重悬后进行传代培养。用两倍体积的完全培养基终止消化后800rpm离心4分钟，弃去上清液加入培养。
（7）骨骼肌卫星细胞的鉴定
Myod和Pax7是骨骼肌卫星细胞的标志基因，对传代培养的骨骼肌卫星细胞进行PAX7和MyoD免疫荧光染色鉴定，显示都呈阳性表达（图3A）（图3C），且可以与DAPI染色的的细胞核完全重叠（图3B）（图3D），表明分离的细胞为骨骼肌卫星细胞。
（8）骨骼肌卫星细胞纯度检测
通过计算图2A中PAX7阳性表达的细胞数量与图2B中DAPI核染的总细胞数的比值，计算骨骼肌卫星细胞的纯度，结果显示，骨骼肌卫星细胞多次分离的平均纯度约95%。
对比例：
1、将猪前肢三头肌肌肉组织置于无菌10cm的培养皿上，用含2%双抗（青霉素和链霉素）的PBS清洗3次，剔除可见的血管、神经以及结缔组织，剪碎成1mm3大小的组织块。
2、将切好的组织块约5000mg移入另一管50ml无菌离心管中，加入10ml的Ⅳ型胶原酶（c5138，Sigma公司）（1250U），于37℃培养箱中消化30min，1500转离心去上清后用4ml的0.25%浓度胰蛋白酶消化1h，10%胎牛血清终止消化，用筛网过滤，1500转离心去上清后用10%胎牛血清培养基培养后进行分离培养对照试验（见图1），采用该对比试验方法未提到分离所得细胞纯度，我们未能从猪肌肉组织中成功分离出大量骨骼肌卫星细胞，并且混杂有细胞形态和生长速度不同的其他种类细胞。
实施例1中替换了用于肌肉组织消化的Ⅱ型胶原酶，在消化时间上，采集的肌肉组织上也做了相应的优化，分离到的骨骼肌卫星细胞数量明显增加（见图2）。
Claims (6)
1.一种猪骨骼肌卫星细胞体外培养方法，其特征在于，包括以下步骤：
1）将猪骨骼肌肉组织块依次用II型胶原酶溶液和胰蛋白酶消化后过筛，固液分离得到沉淀物；
2）将步骤1）的沉淀物制成细胞悬液采用差速贴壁纯化培养，直到细胞密度达到70%及以上，用胰酶消化，用完全培养基终止消化离心，弃去上清液加入培养基重悬后进行传代培养；
3）骨骼肌卫星细胞的鉴定：对步骤2）中传代培养的骨骼肌卫星细胞进行PAX7和MyoD基因免疫荧光染色鉴定，显示都呈阳性表达，且与DAPI染色的的细胞核完全重叠表明分离的细胞为骨骼肌卫星细胞。
2.根据权利要求1所述的猪骨骼肌卫星细胞体外培养方法，其特征在于，所述步骤1）中的II型胶原酶用量为0.25U/mg肌肉组织。
3.根据权利要求1所述的猪骨骼肌卫星细胞体外培养方法，其特征在于，所述步骤1）的固液分离先采用的是孔径为100目~300目的细胞筛网过筛，收集滤液，再取上清800~1000r/min离心8~10min得到沉淀物。
4.根据权利要求1所述的猪骨骼肌卫星细胞体外培养方法，其特征在于，所述步骤2）中的差速贴壁纯化培养具体步骤为：将细胞悬液培养0.5-1h后的细胞瓶中的上清转移至新的培养瓶，接着每0.5h将上清转移一次，共转移三次，第三次转移在细胞瓶中培养48h后更换培养液。
5.根据权利要求1所述的猪骨骼肌卫星细胞体外培养方法，其特征在于，所述步骤2）中胰酶浓度为0.25%。
6.根据权利要求1所述的猪骨骼肌卫星细胞体外培养方法，其特征在于，所述步骤2）完全培养基为80%的DMEM高糖培养基+20%FBS。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202010940072.XA CN112011502A (zh) | 2020-09-09 | 2020-09-09 | 一种猪骨骼肌卫星细胞高效分离和纯化的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202010940072.XA CN112011502A (zh) | 2020-09-09 | 2020-09-09 | 一种猪骨骼肌卫星细胞高效分离和纯化的方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN112011502A true CN112011502A (zh) | 2020-12-01 |
Family
ID=73523071
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202010940072.XA Pending CN112011502A (zh) | 2020-09-09 | 2020-09-09 | 一种猪骨骼肌卫星细胞高效分离和纯化的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN112011502A (zh) |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113337460A (zh) * | 2021-06-10 | 2021-09-03 | 呼和浩特职业学院 | 一种绵羊骨骼肌卫星细胞的高效分离和纯化方法 |
| CN113832098A (zh) * | 2021-09-23 | 2021-12-24 | 中国海洋大学 | 一种花鲈骨骼肌卫星细胞的体外培养方法以及鉴定方法 |
| CN114561346A (zh) * | 2022-02-21 | 2022-05-31 | 重庆市铂而斐细胞生物技术有限公司 | 一种肌肉干细胞的分离培养方法 |
| CN114854676A (zh) * | 2022-06-01 | 2022-08-05 | 华中农业大学 | 一种草鱼骨骼肌成肌细胞系的构建方法及其应用 |
| CN115181722A (zh) * | 2022-08-30 | 2022-10-14 | 江苏农牧科技职业学院 | 一种鹅骨骼肌卫星细胞的体外分离和培养方法 |
| CN116355840A (zh) * | 2022-12-27 | 2023-06-30 | 宁夏大学 | 家畜骨骼肌卫星细胞培养方法及专用于该方法的辅助装置 |
Citations (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101886060A (zh) * | 2010-07-20 | 2010-11-17 | 东北农业大学 | 牛肌卫星细胞的体外分离培养及诱导分化的方法 |
| CN102140438A (zh) * | 2011-01-07 | 2011-08-03 | 西北农林科技大学 | 猪骨骼肌卫星细胞体外培养方法 |
| CN102424813A (zh) * | 2011-12-25 | 2012-04-25 | 复旦大学附属中山医院 | 一种高纯度小鼠骨骼肌卫星细胞的简易提取方法 |
| CN104388465A (zh) * | 2014-09-24 | 2015-03-04 | 华南农业大学 | Mdfi在调控猪骨骼肌生长发育中的应用 |
| CN105647857A (zh) * | 2016-04-08 | 2016-06-08 | 安徽农业大学 | 山羊骨骼肌卫星细胞的分离纯化方法 |
| US20160177266A1 (en) * | 2013-05-29 | 2016-06-23 | Shanghai Institutes For Biological Sciences, Chine Se Academy Of Sciences | Muscle stem cell in vitro culture method and application |
| CN107287242A (zh) * | 2017-07-14 | 2017-10-24 | 天津农学院 | 一种促进牛骨骼肌卫星细胞成肌分化的方法 |
| WO2018128779A1 (en) * | 2017-01-06 | 2018-07-12 | The Regents Of The University Of California | Methods for generating skeletal muscle progenitor cells |
| CN113502269A (zh) * | 2021-05-27 | 2021-10-15 | 天津农学院 | 一种通过干扰uba2表达抑制牛骨骼肌卫星细胞增殖和成肌分化的方法 |
-
2020
- 2020-09-09 CN CN202010940072.XA patent/CN112011502A/zh active Pending
Patent Citations (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101886060A (zh) * | 2010-07-20 | 2010-11-17 | 东北农业大学 | 牛肌卫星细胞的体外分离培养及诱导分化的方法 |
| CN102140438A (zh) * | 2011-01-07 | 2011-08-03 | 西北农林科技大学 | 猪骨骼肌卫星细胞体外培养方法 |
| CN102424813A (zh) * | 2011-12-25 | 2012-04-25 | 复旦大学附属中山医院 | 一种高纯度小鼠骨骼肌卫星细胞的简易提取方法 |
| US20160177266A1 (en) * | 2013-05-29 | 2016-06-23 | Shanghai Institutes For Biological Sciences, Chine Se Academy Of Sciences | Muscle stem cell in vitro culture method and application |
| CN104388465A (zh) * | 2014-09-24 | 2015-03-04 | 华南农业大学 | Mdfi在调控猪骨骼肌生长发育中的应用 |
| CN105647857A (zh) * | 2016-04-08 | 2016-06-08 | 安徽农业大学 | 山羊骨骼肌卫星细胞的分离纯化方法 |
| WO2018128779A1 (en) * | 2017-01-06 | 2018-07-12 | The Regents Of The University Of California | Methods for generating skeletal muscle progenitor cells |
| CN107287242A (zh) * | 2017-07-14 | 2017-10-24 | 天津农学院 | 一种促进牛骨骼肌卫星细胞成肌分化的方法 |
| CN113502269A (zh) * | 2021-05-27 | 2021-10-15 | 天津农学院 | 一种通过干扰uba2表达抑制牛骨骼肌卫星细胞增殖和成肌分化的方法 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 秦本源等: "猪骨骼肌卫星细胞分离培养、鉴定及其生物学特性", 《中国农业科学》 * |
| 郑琪等: "安淮山羊骨骼肌卫星细胞的分离培养与鉴定", 《安徽农业大学学报》 * |
Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113337460A (zh) * | 2021-06-10 | 2021-09-03 | 呼和浩特职业学院 | 一种绵羊骨骼肌卫星细胞的高效分离和纯化方法 |
| CN113832098A (zh) * | 2021-09-23 | 2021-12-24 | 中国海洋大学 | 一种花鲈骨骼肌卫星细胞的体外培养方法以及鉴定方法 |
| CN114561346A (zh) * | 2022-02-21 | 2022-05-31 | 重庆市铂而斐细胞生物技术有限公司 | 一种肌肉干细胞的分离培养方法 |
| CN114854676A (zh) * | 2022-06-01 | 2022-08-05 | 华中农业大学 | 一种草鱼骨骼肌成肌细胞系的构建方法及其应用 |
| CN114854676B (zh) * | 2022-06-01 | 2023-10-31 | 华中农业大学 | 一种草鱼骨骼肌成肌细胞系的构建方法及其应用 |
| CN115181722A (zh) * | 2022-08-30 | 2022-10-14 | 江苏农牧科技职业学院 | 一种鹅骨骼肌卫星细胞的体外分离和培养方法 |
| CN115181722B (zh) * | 2022-08-30 | 2024-06-11 | 江苏农牧科技职业学院 | 一种鹅骨骼肌卫星细胞的体外分离和培养方法 |
| CN116355840A (zh) * | 2022-12-27 | 2023-06-30 | 宁夏大学 | 家畜骨骼肌卫星细胞培养方法及专用于该方法的辅助装置 |
| CN116355840B (zh) * | 2022-12-27 | 2024-05-14 | 宁夏大学 | 家畜骨骼肌卫星细胞培养方法及专用于该方法的辅助装置 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN112011502A (zh) | 一种猪骨骼肌卫星细胞高效分离和纯化的方法 | |
| CN107858327A (zh) | 一种鸡肌内前体脂肪细胞的分离、培养及诱导分化方法 | |
| CN110747159A (zh) | 一种小鼠或大鼠肾成纤维细胞分离及传代培养方法 | |
| CN106591224B (zh) | 高纯度鸡前体肌内脂肪细胞的分离纯化及构建其与肌卫星细胞共培养体系的方法 | |
| CN104818238B (zh) | 一种鸡肠上皮细胞分离培养方法 | |
| CN114874979A (zh) | 一种驴骨骼肌卫星细胞的分离提纯方法 | |
| CN115851587A (zh) | 一种人源胎盘来源间充质干细胞的优化培养基、试剂盒和培养方法 | |
| CN113462639B (zh) | 一种分离来源于人类诱导多能干细胞的成纤维细胞的方法及其应用 | |
| CN116574671B (zh) | 一种hek293细胞培养基及其应用 | |
| CN116836934B (zh) | 骨肉瘤类器官培养液、培养试剂组合及培养方法 | |
| CN110117570B (zh) | 一种类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞的原代培养方法 | |
| CN111235100B (zh) | 一种人脐带血间充质干细胞的培养方法 | |
| CN113293128A (zh) | 大泷六线鱼的精原细胞培养基及培养方法 | |
| CN111534476A (zh) | 一种贝类精巢生精细胞解离和分离的方法 | |
| CN111088215A (zh) | 一种体外分离培养蒙古马睾丸支持细胞的方法 | |
| CN114752590B (zh) | 一种高效且经济的猪肌肉干细胞的分离方法及其应用 | |
| CN114276986A (zh) | 一种分离纯化水牛原代成肌细胞的方法及其应用 | |
| CN106635990B (zh) | 一种原代培养背根神经节卫星胶质细胞的方法 | |
| CN104195100A (zh) | 一种乳腺上皮细胞的体外培养方法 | |
| CN112574948A (zh) | 一种人羊膜间充质干细胞的分离培养方法 | |
| CN112501115A (zh) | 一种兔肌肉干细胞的提取分离及纯化方法 | |
| CN111518745A (zh) | 一种人甲状旁腺单细胞悬液的制备方法及检测方法 | |
| CN112342182A (zh) | 一种高效分离小鼠肝脏胆管细胞的方法 | |
| CN108660107A (zh) | 一种骨骼肌类器官构建方法 | |
| CN115181722B (zh) | 一种鹅骨骼肌卫星细胞的体外分离和培养方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20201201 |
|
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |