CN112010972A - 与人lag-3蛋白结合的抗体及其编码基因和应用 - Google Patents

与人lag-3蛋白结合的抗体及其编码基因和应用 Download PDF

Info

Publication number
CN112010972A
CN112010972A CN201910469160.3A CN201910469160A CN112010972A CN 112010972 A CN112010972 A CN 112010972A CN 201910469160 A CN201910469160 A CN 201910469160A CN 112010972 A CN112010972 A CN 112010972A
Authority
CN
China
Prior art keywords
ser
gly
thr
antibody
amino acid
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201910469160.3A
Other languages
English (en)
Other versions
CN112010972B (zh
Inventor
张鹏
张蔓
崔文俊
郜鹏
高位相
郭树华
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Reyoung Suzhou Biology Science & Technology Co ltd
Original Assignee
Reyoung Suzhou Biology Science & Technology Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Reyoung Suzhou Biology Science & Technology Co ltd filed Critical Reyoung Suzhou Biology Science & Technology Co ltd
Priority to CN202210739338.3A priority Critical patent/CN115340606B/zh
Priority to CN201910469160.3A priority patent/CN112010972B/zh
Publication of CN112010972A publication Critical patent/CN112010972A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN112010972B publication Critical patent/CN112010972B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0684—Cells of the urinary tract or kidneys
    • C12N5/0686—Kidney cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2510/00—Genetically modified cells
    • C12N2510/02—Cells for production
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2800/00—Nucleic acids vectors
    • C12N2800/10—Plasmid DNA
    • C12N2800/106—Plasmid DNA for vertebrates
    • C12N2800/107—Plasmid DNA for vertebrates for mammalian

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明公开了一种与人LAG3蛋白结合的抗体及其编码基因和应用。本发明的与人LAG‑3蛋白结合的抗体是有别于现有LAG‑3抗体的新型抗体分子序列，具有与人LAG3蛋白特异性结合的抗原结合位点，显示了良好的生物学阻断活性。同时，本发明的抗体能够与BMS986016竞争抗原表位，不仅能够抑制BMS986016与抗原结合，还能促使已与抗原结合的BMS986016发生部分分离；这表明本发明的与人LAG‑3蛋白结合的抗体和BMS986016与抗原结合的位点不同，本发明的与人LAG‑3蛋白结合的抗体的结合能够改变抗原构型，推测其对LAG‑3对T细胞的抑制通路的封闭作用优于BMS986016。

Description

与人LAG-3蛋白结合的抗体及其编码基因和应用
技术领域
本发明属于生物制药技术领域，具体涉及一种与人LAG-3蛋白结合的抗体及其编码氨基酸序列和应用。
背景技术
正常情况下，人体免疫系统可以识别并清除肿瘤微环境中的肿瘤细胞，陈和提出的“肿瘤-免疫循环”阐述了肿瘤产生、人体免疫系统清除肿瘤细胞的七个环节：(1)肿瘤抗原释放；(2)肿瘤抗原呈递；(3)启动和激活效应性T细胞；(4)T细胞向肿瘤组织迁移；(5)肿瘤组织T细胞浸润；(6)T细胞识别肿瘤细胞；(7)清除肿瘤细胞。
然而，为了生存和生长，肿瘤细胞能够采用不同策略使人体的免疫系统受到抑制、发生异常而保护自身不能被杀伤和清除，从而在抗肿瘤免疫应答的各阶段得以幸存。上述七个环节中任何地方出现异常均可以导致抗肿瘤-免疫循环失效，出现免疫逃逸。
肿瘤免疫治疗即是通过恢复免疫系统的抗肿瘤免疫应答能力从而实现利用免疫系统来治疗癌症的一种治疗方法。包括单克隆抗体类免疫检查点抑制剂、治疗性抗体、癌症疫苗、细胞治疗和小分子抑制剂等。
LAG-3(Lymphocyte-activation gene 3)属于免疫球蛋白超家族，其结构域由胞外区、跨膜区和胞质区三个部分组成，LAG-3的基因定位于12号染色体(12P13)，与CD4分子在染色体上的定位和结构相似。抑制LAG-3能够让T细胞重新获得细胞毒性，从而增强对肿瘤的杀伤效果；同时抑制LAG-3还能够降低调节T细胞抑制免疫反应的功能。因此，LAG-3被认为是一个比其它免疫检查点蛋白更吸引人的靶点。
LAG-3是目前免疫检查点二代靶点中，临床数据较多、成药性相对确定的靶点，针对该靶点的抗体药物将来有可能成为重要的抗肿瘤药物。
发明内容
本申请的发明目的是提供一种与人LAG-3蛋白结合的抗体及其编码基因和应用。
为实现上述发明目的，本申请的技术方案如下：
一种与人LAG-3蛋白结合的抗体，包括轻链可变区和重链可变区中的至少一个氨基酸片段，所述的轻链可变区具有含有如①、②或③组所示氨基酸序列的轻链CDR区：
①：与SEQ ID No.1具有至少50％同源性的氨基酸序列、与SEQ ID No.2具有至少50％同源性的氨基酸序列以及与SEQ ID No.3具有至少50％同源性的氨基酸序列；
②：与SEQ ID No.7具有至少50％同源性的氨基酸序列、与SEQ ID No.8具有至少50％同源性的氨基酸序列以及与SEQ ID No.9具有至少50％同源性的氨基酸序列；
③：与SEQ ID No.13具有至少50％同源性的氨基酸序列、与SEQ ID No.14具有至少50％同源性的氨基酸序列以及与SEQ ID No.15具有至少50％同源性的氨基酸序列；
所述的重链可变区具有含有如④或⑤组所示氨基酸序列的重链CDR区：
④：与SEQ ID No.4具有至少50％同源性的氨基酸序列、与SEQ ID No.5具有至少50％同源性的氨基酸序列以及与SEQ ID No.6具有至少50％同源性的氨基酸序列；
⑤：与SEQ ID No.10具有至少50％同源性的氨基酸序列、与SEQ ID No.11具有至少50％同源性的氨基酸序列以及与SEQ ID No.12具有至少50％同源性的氨基酸序列。
本发明采用带有His标签的人LAG-3蛋白的胞外结构域蛋白免疫小鼠，发现免疫小鼠的血清效价可达1:256000，而后通过构建杂交瘤细胞株筛选出与人LAG-3具有高度亲和力的杂交瘤细胞亚克隆，表达获得了本发明的与人LAG-3蛋白结合的抗体。本发明的与人LAG-3蛋白结合的抗体具有与BMS986016相当的抗原亲和力，同时，本发明的与人LAG-3蛋白结合的抗体能够与BMS986016竞争抗原表位，不仅能够抑制BMS986016与抗原结合，还能促使已与抗原结合的BMS986016发生部分分离；这表明本发明的与人LAG-3蛋白结合的抗体和BMS986016与抗原结合的位点不同，本发明的与人LAG-3蛋白结合的抗体的结合能够改变抗原构型，推测其对LAG-3对T细胞的抑制通路的封闭作用优于BMS986016。
作为优选，所述的轻链可变区具有如SEQ ID No.13、14和15所示氨基酸序列的轻链CDR区，所述的重链可变区具有如SEQ ID No.4、5和6所示氨基酸序列的重链CDR区。
或者，所述的轻链可变区具有如SEQ ID No.7、8和9所示氨基酸序列的轻链CDR区，所述的重链可变区具有如SEQ ID No.10、11和12所示氨基酸序列的重链CDR区。
本发明的与人LAG-3蛋白结合的抗体可以是鼠源抗体、人鼠嵌合抗体或人源化抗体。人鼠嵌合抗体和人源化抗体都是在鼠源抗体的基础上进行改造获得的。
当所述的与人LAG-3蛋白结合的抗体为鼠源抗体或人鼠嵌合抗体时，所述的重链可变区具有如SEQ ID No.16或SEQ ID No.18所示的氨基酸序列，所述的轻链可变区具有如SEQ ID No.19或SEQ ID No.21所示的氨基酸序列。
当所述的与人LAG-3蛋白结合的抗体为人鼠嵌合抗体时，人鼠嵌合与人LAG-3蛋白结合的抗体的轻链可变区与上述相同，其轻链恒定区则为人IgG kappa CL区序列；其重链可变区与上述相同，其重链恒定区则为人IgG4 S228P的CH1，CH2和CH3区序列。当所述的与人LAG-3蛋白结合的抗体为全人源化抗体时，为全人源化抗体，该全人源化抗体的重链氨基酸序列如SEQ ID No.23所示，该全人源化抗体的轻链氨基酸序列如SEQ ID No.33所示。
或者，为全人源化抗体，该全人源化抗体的重链氨基酸序列如SEQ ID No.34所示，该全人源化抗体的轻链氨基酸序列如SEQ ID No.37所示。
本发明还提供了所述的与人LAG-3蛋白结合的抗体的编码基因，以及含有所述的与人LAG-3蛋白结合的抗体的编码基因的重组载体。
本发明还提供了表达所述的与人LAG-3蛋白结合的抗体的重组细胞。
本发明还提供了所述的与人LAG-3蛋白结合的抗体在制备恶性肿瘤治疗药物中的应用。该恶性肿瘤治疗药物可以是本发明的与人LAG-3蛋白结合的抗体，也可以是本发明的与人LAG-3蛋白结合的抗体与其他物质的偶联物或组合物；用于治疗的恶性肿瘤一般是由LAG-3造成T细胞失效而导致的。
与现有技术相比，本发明的有益效果体现在：
本发明采用带有His标签的人LAG-3蛋白的胞外结构域免疫小鼠，发现免疫小鼠的血清效价可达1:256000，而后通过构建杂交瘤细胞株筛选出与人LAG-3具有高度亲和力的杂交瘤细胞亚克隆，表达获得了本发明的与人LAG-3蛋白结合的抗体。本发明的与人LAG-3蛋白结合的抗体具有与BMS986016相当的抗原亲和力，具有良好的阻断LAG3与MHCII分子结合的生物学功能，同时，本发明的与人LAG-3蛋白结合的抗体能够与BMS986016竞争抗原表位，不仅能够抑制BMS986016与抗原结合，还能促使已与抗原结合的BMS986016发生部分分离；这表明本发明的与人LAG-3蛋白结合的抗体和BMS986016与抗原结合的位点不同，本发明的与人LAG-3蛋白结合的抗体的结合能够改变抗原构型，推测其对LAG-3对T细胞的抑制通路的封闭作用优于BMS986016。
附图说明
图1a为杂交瘤细胞株亚克隆的配体结合阻断实验结果1；
图1b为杂交瘤细胞株亚克隆的配体结合阻断实验结果2；
图2为抗人LAG-3人源化抗体的SDS-PAGE分析结果；
图3为抗人LAG-3人源化抗体的熔解曲线图；
图中，Temperature(℃)表示抗体Fab熔解温度(℃)，Derivative Reporter(-Rn’)表示经过分析处理后的数据形成的检测报告；
图4为20号抗人LAG-3人源化抗体的Ka/Kd图；
图5为22号抗人LAG-3人源化抗体的Ka/Kd图；
图6a、图6b、图6c为抗原抗体分步上样时抗人LAG-3人源化抗体与BMS986016抗体的抗原表位竞争性试验结果，其中图6a中上样的是BMS986016抗体，图6b中上样的是20号抗人LAG-3人源化抗体，图6c中上样的是22号抗人LAG-3人源化抗体；
其中，time(s)表示分析物流经芯片的时间(s)，Response(Ru)表示仪器对分析抗体结合的响应值；“Ag followed by BMS-mAb”表示先流入抗原再流入BMS986016抗体，“Agfollowed by 20mAb”表示先流入抗原再流入20号抗人LAG-3人源化抗体，“Ag followed by22mAb”表示先流入抗原再流入22号抗人LAG-3人源化抗体；
图7a、图7b、图7c为抗原抗体孵育后上样时抗人LAG-3人源化抗体与BMS986016抗体的抗原表位竞争性试验结果，其中图6a中上样的是BMS986016抗体与人LAG-3的混合孵育液，图6b中上样的是20号抗人LAG-3人源化抗体与人LAG-3的混合孵育液，图6c中上样的是22号抗人LAG-3人源化抗体与人LAG-3的混合孵育液；
其中，“Ag and BMS-mAb co-incubation”表示抗原与BMS986016抗体混合孵育后再流入，“Ag and 20mAb co-incubation”表示抗原与20号抗人LAG-3人源化抗体混合孵育后再流入，“Ag and 22mAb co-incubation”表示抗原与22号抗人LAG-3人源化抗体混合孵育后再流入。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施方式对本发明的技术方案做进一步详细说明。
实施例1
1、动物免疫
以带有His标签的人LAG-3蛋白的胞外结构域(Acro)(以下简称人LAG-3)作为抗原，将50ng抗原与弗氏不完全佐剂(Sigma-Titer Max)按1:1混合均匀，皮下免疫雌性Balb/c小鼠(共10只)，按上述的方法对小鼠免疫三次，每隔一周进行一次，第三次免疫后的第4天尾静脉取血，测小鼠的血清效价，以对各免疫小鼠的免疫应答进行检测，筛选出具有抗重组人IL-1β免疫球蛋白最高滴度的小鼠。
血清效价检测方法：用1μg/ml的人LAG-3包被ELISA板，每孔100μl于4℃过夜孵育；用200μl/孔PBS/Tween(0.1％)洗板，随后用200μl/孔PBS/Tween(0.1％)中的3％牛血清白蛋白进行封闭1小时；洗板后，每孔加入来自人LAG-3免疫小鼠血清稀释液，37℃孵育2小时，洗板；然后用稀释后的带HRP山羊抗小鼠IgG(H+L)(北京博奥龙免疫技术有限公司，BF03001)抗体37℃孵育1小时；洗涤后，每孔用100μl TMB显色液(Biopanda,TMB-S-002)显色；颜色变化后加入50μl 2M硫酸终止反应，之后于酶标仪OD450nm-620nm通过酶标仪进行分析，结果如表1。
表1各免疫小鼠的血清效价
Figure BDA0002080313060000071
根据表1的检测结果，经3次免疫的10只小鼠，OD值均在0.2以上认为是阳性，阴性对照(negative control，NC)OD均小于0.06，实验方法结果可信。因此选取编号为7的免疫小鼠进行杂交瘤细胞的融合试验。
2、杂交瘤细胞融合
融合前先对小鼠作抗原腹腔加强免疫，连续加强免疫3天后，处死小鼠并取出脾脏。
培养小鼠骨髓瘤SP2/0，调整并保证其生长密度不超过1×106个/mL，融合前悬浮并收集SP2/0细胞，提取小鼠脾脏并进行均质化产生单细胞悬液，保证脾细胞或淋巴结细胞与SP2/0细胞的混合后的数量比在3：1至1：1之间，通过电融合仪融合细胞。
将融合后的细胞置于含有杂交瘤细胞选择剂的胸腺核苷嘧啶、次黄嘌呤和氨基蝶呤的RPIM1640/10％FBS培养基中重悬，保证脾细胞密度约为0.5×106个/mL，将细胞液转入96孔细胞培养板，每孔200μL。将板置于37℃下、5％CO2的培养箱中孵育，融合7天以后收获上清液并更换培养基，收集的上清液通过ELISA结合方法、流式细胞仪测配体结合阻断试验筛选出2株阳性杂交瘤细胞株。
杂交瘤细胞亚克隆筛选
取筛选出的阳性杂交瘤细胞株，用枪吹打混匀后计数，移取80个细胞对应的细胞液至20mL HT培养基中，混匀后吸取细胞液至96孔培养板，每孔约200μL，保证每孔约0.8个细胞。培养7天，选取呈单个生长的杂交瘤克隆进行ELISA检测(检测方法参见步骤(1))，检测结果如表2所示。
表2杂交瘤细胞亚克隆的筛选结果
Figure BDA0002080313060000081
Figure BDA0002080313060000091
3、抗体体外生物学功能测定
按照说明培养并准备Raji-MHC-Ⅱ细胞，将步骤(3)中筛选出的59种杂交瘤亚克隆上清、对照抗体(BMS986016、hIgG4、mIgG4，浓度均为10μg/mL)与LAG-3混合(约100μL)加入96孔板，每一样品设置一个复孔，室温孵育1h；离心收集细胞Raji细胞，用DPBS洗涤细胞两次，加入适量含1％的BSA的DPBS缓冲液重悬，并将细胞密度调整为1×106个/mL，向每个样品孔中加入细胞悬液100μL，离心弃去上清；将孵育好的上清和LAG-3的混合物加到细胞孔中，4℃孵育30-45min，离心弃去上清；每孔加入250μL的含1％的BSA的DPBS缓冲液洗细胞3次后，每孔加入100μL经1％的BSA的DPBS缓冲液稀释后的FITC标记的山羊抗人IgG，4℃避光孵育1h，1％的BSA的DPBS缓冲液洗涤细胞三次，加入4℃预冷100μL PBS重悬细胞，避光，流式细胞仪分析
5、制备抗LAG-3人鼠嵌合抗体及亲和力检测
将表3中的抗LAG-3鼠源抗体的轻链可变区与人IgG kappa轻链恒定区序列SEQ IDNo.40进行拼接，获得全长的轻链序列；通过全基因合成，构建至含有氮端信号肽的pTT5载体上获得轻链表达载体。
将表3中的抗LAG-3鼠源抗体的重链可变区序列与人IgG4 S228P的重链恒定区SEQID No.39拼接成全长的重链序列，通过全基因合成，构建至含有氮端信号肽的pTT5载体上获得重链表达载体。
将轻链表达载体和重链表达载体通过共转染HEK293F细胞，并于37℃摇瓶中培养7天，收集培养上清，得到抗体上清17E3VL-17E3VH、29VL-17E3VH、78H3VL-78H3VH；采用SPR法测定抗LAG-3人鼠嵌合抗体与人LAG-3蛋白的结合能力，具体包括：
在25℃条件下进行，将人鼠嵌和抗体上清以一定流速流经Protein A芯片表面，待抗体结合到芯片表面之后，将100nM人LAG-3蛋白以一定流速流经固定了抗体的芯片表面；以实验缓冲液为空白对照，并且设定一个重复浓度；实验测定的结果用1:1Binding模型进行拟合。详细步骤如下：
(1)更换芯片，将仪器中的维护芯片更换为proteinA芯片。
(2)打开BIACORE仪器控制软件，设置分析样品程序，一个循环过程以及参数如下：
a)捕获(capture，即芯片捕获配体的过程)：配体以10μL/min速度流过芯片，时间为300s。
b)分析(analyte)：
结合(association，分析物与芯片表面物质结合的过程)：分析物30μL/min速度流过芯片，时间为300s；
解离(dissociation，分析物与芯片表面物质分离的过程)：缓冲液30μL/min速度流过芯片，时间为300s。
c)再生(regenation，芯片的再生过程)：芯片再生缓冲液以100μL/min速度流过芯片，时间60s。
(3)此次实验循环的配体与分析物及目的见表4。
表4嵌合抗体亲和力分析实验设计
Figure BDA0002080313060000101
Figure BDA0002080313060000111
五种抗体上清的SPR结果如表5所示。
表5抗LAG-3人鼠嵌合抗体亲和力分析
Figure BDA0002080313060000112
如表5可见，五种抗体上清中，29VL-VH抗体的Rmax值过小，表明并未表达。其余抗体的亲和力KD、结合常数ka、解离常数kd、Rmax值均正常，几个抗体的亲和力在10-10M，在动力学方面分子均属于快速结合、缓慢解离型。
6、抗LAG-3鼠源抗体人源化及SPR筛选
(1)人源化
分析鼠源抗体可变区序列，与人胚系(germline)基因比对，选取与鼠源抗体框架区序列同源性最高的人轻重链胚系基因的框架区序列作为基本骨架，或者选取框架区上的特定氨基酸作回复突变，然后再将鼠源抗体的CDR区序列与选定的人胚系基因的框架区序列进行嫁接，拼接后人源化抗体的轻重链可变区序列通过基因合成分别构建到包括人IgG4重链Fc和人IgG kappa CL的pTT5表达载体上。
构建好的人源化抗体(如表6)轻重链质粒一一配对(配对组合见表7)共转染进HEK293F细胞，37℃摇瓶中培养7天后收集上清，备用。
表6人源化序列对应表
Figure BDA0002080313060000113
Figure BDA0002080313060000121
表7人源化抗体的轻重链组合
Figure BDA0002080313060000122
Figure BDA0002080313060000131
(2)SPR筛选
通过SPR测定与LAG-3的亲和力筛选出亲和力高的人源化抗体，测定方法参见本实施例第2部分，测定结果如表7所示。
表8人源化抗体的SPR筛选结果
Figure BDA0002080313060000132
如上表检测结果所示，结合仪器检测到的响应值(Rmax)、表达量(Capture level)以及亲和力(KD)，亲本分子对应的人源化组合20与组合22的亲和力变现出了很高的结合特性，候选选择组合20与组合22继续进行表达、纯化研究。7、人源化抗体的表达纯化和分析
(1)人源化抗体的表达纯化
将上述实验筛选出的抗体20、22对应的重组质粒转染至HEK293细胞，摇瓶培养7天后，收集上清过滤除菌进行proteinA层析纯化。纯化之前，将AKTA Start纯化仪器管道和proteinA柱用0.1M NaOH去热原后，用含有20mM Na2HPO4(pH7.2)缓冲液平衡柱子，将过滤的上清液以1mL/min通入柱子，结束之后，先后用20mM Na2HPO4-1M NaCl(pH6.5)和20mMNa2HPO4平衡柱子，最后使用无菌0.1M柠檬酸钠(pH3.5)洗脱IgG，收集了洗脱液并用十分之一体积的无菌1M Tris-HCl(pH9.0)中和。在无菌条件下，将所述产品缓冲液交换为PBS(pH7.4)，使用1.43的消光系数Ec(0.1％)通过OD280nm对抗体进行定量。
纯化的抗体通过BioRad电泳系统用10％聚丙烯酰胺凝胶通过SDS-PAGE来分析。将所述凝胶用EstainL(GenScrip)染色并通过比较染色带与Protein Ladder(Thermo)来估计分子大小和纯度。
SDS-PAGE分析结果如图2所示。根据蛋白Marker估算完整抗体、重链及轻链的分子量约为170kDa及48kDa、25kDa，由于糖基化的作用，完整的抗体的分子量是大于理论值150kDa，抗体的轻链、重链分子量均符合理论值。
(2)稳定性
运用SyproOrange(Sigma)荧光染料可以监测蛋白的折叠状态，将抗体稀释至1mg/mL，用水稀释染料并与抗体混合，放入能荧光定量PCR仪(ABI 7500)中检测荧光信号随温度的变化，设置程序，每个样30μL，每个样重复3次，用水作空白对照，温度25℃～99℃，0.5℃/min扫描。结束后再ABI 7500软件中分析数据。
抗体的熔解曲线如图3所示，熔解曲线能明显地反应抗体的Fab对应的熔点温度(与实际熔点有一定的差距，用于抗体之间比较用，不用于定量测量)，即第一个尖峰对应的温度，抗体20和22分别在63℃和65℃，BMS986016在68℃。
(3)抗体亲和力测试
SPR方法能分析配体和分析物之间的动力学参数Kd、Ka，通过设置不同浓度的分析物，测得的亲和力更加准确。具体过程如下：
①更换芯片，将仪器中的维护芯片更换为proteinA芯片。
②编辑方法，设置分析样品程序，一个循环过程以及参数同本实施例第2部分中的相应内容。
③HBS-EP+稀释抗体至5μg/mL，HBS-EP+稀释抗原为2430nM、810nM、270nM、90nM、30nM、10nM、3nM、1nM、0.33nM，稀释后体积由仪器方法给出；将待测样品以及运行缓冲液和再生缓冲液加入相应位置(运行缓冲液：HBS-EP+，再生缓冲液：10mM Glycine-HCl pH1.7)，运行程序。
④运行结束后Biacore Evaluation Software分析数据。
SPR方法测得抗体20、22号与人LAG-3蛋白之间的结合/解离与时间关系如图4和图5，与图对应的亲和力数据如表8。
表9人源化抗体的亲和力分析
Figure BDA0002080313060000151
(4)SPR法分析人源化抗体与BMS986016抗体识别抗原表位竞争性
为分析我们得到抗体20、22识别的抗原表位是否与目前研究进展最快的LAG-3抗体BMS986016是否相同，利用抗体抗原表位特异结合的原理，采用SPR方法，固定其中一个抗体于芯片，与另一抗体竞争结合抗原，同时在芯片上固定LAG-3抗原作对照试验用。
具体如下：
1)配体固定
(1)打开BIACORE仪器控制软件，编辑芯片表面固定方法。
(2)方法运行前准备：用NaAc-HAc pH 5.5溶液稀释配体至10μg/mL；
解冻EDC、NHS。
(3)配体固定过程如下：
EDC、NHS以1：1混合活化芯片表面，420s，10μL/min；
配体上样，10μL/min，达到需要的固定水平后停止；
乙醇胺封闭芯片表面，420s，10μL/min。
(4)芯片处理结果如下表9：
表10芯片处理结果
Figure BDA0002080313060000161
2)竞争法分析表位
使用“配体固定”实验中的固定BMS986016配体的芯片通道，针对抗原表位是否相同设计两种上样方式进行分析：
①抗原抗体分步上样：于CM5芯片(GE)上固定BMS986016抗体，10nM抗原流经芯片表面与BMS986016抗体结合，之后分别流入不同浓度的人源化抗体样品，检测抗体和与芯片上BMS986016结合的抗原是否结合。具体包括：
分别将10nM的抗原与不同浓度(10nM、100nM、1000nM)的抗体先后流经芯片固定BMS986016的通道，抗原为分析物1(analyte1)，抗体为分析物2(analyte2)，参数如下：
a)分析物1(analyte1)：
结合(association)：分析物30μL/min速度流过芯片，时间为300s；
解离(dissociation)：缓冲液30μL/min速度流过芯片，时间为10s。
b)分析物2(analyte2)：
结合(association)：分析物30μL/min速度流过芯片，时间为300s；
解离(dissociation)：缓冲液30μL/min速度流过芯片，时间为600s。
c)再生(regenation)：芯片再生缓冲液以100μL/min速度流过芯片，时间60s。
根据程序设定用HBS-EP+将抗原LAG-3，抗体BMS986016、20、22分别稀释，将样品及缓冲液放入相应位置，运行程序。
d)运行完毕后对Biacore Control Software所得信号图进行比较分析。
②抗原抗体孵育后上样：将不同浓度的人源化抗体样品分别与一定浓度的抗原室温孵育1h后流经固定有BMS986016的芯片通道上，检测与实验室抗体结合的抗原能否与BMS986016结合。具体包括：
分别将10nM的Human-LAG-3-His与不同浓度(10nM、100nM、1000nM)的抗体混合孵育30min作为分析物流经芯片固定BMS986016的通道，参数条件如下：
a)分析(analyte)：
结合(association)：分析物30μL/min速度流过芯片，时间为300s；
解离(dissociation)：缓冲液30μL/min速度流过芯片，时间为600s。
b)再生(regenation)：芯片再生缓冲液以100μL/min速度流过芯片，时间60s。
用HBS-EP+稀释抗原LAG-3分别与抗体BMS986016、20、22的混合物，将样品及缓冲液放入相应位置，运行程序。
c)运行完毕后对Biacore Control Software所得信号图进行比较分析。
采用①和②两种方式互相印证，综合分析。抗原抗体分步上样的试验结果如图6a、6b和6c，抗原抗体孵育后上样的试验结果如图7a、7b和7c。
由图6a、6b和6c可见，在抗原上样后的300s内，10nM的LAG-3与芯片上BMS986016发生结合，且芯片上LAG-3的结合率达到饱和；而当300s后流入不同的抗体后，流入的20号抗体(如图6b)、22号抗体(如图6c)出现了与LAG-3结合的信号，这与流入BMS986016抗体(如图6a)出现了明显差异；并且，随着流入的20号抗体、22号抗体的浓度增加，20号抗体、22号抗体与LAG-3的结合信号也越来越强。
由图7a、7b和7c可见，10nM的LAG-3(如图7a)与芯片上BMS986016抗体的结合信号均比LAG-3与抗体的混合物要强，且随着与LAG-3混合孵育的20号抗体(如图7b)、22号抗体(如图7c)的浓度逐渐增大，混合孵育液与芯片上BMS986016抗体的结合信号越来越弱。
以上分析结果表明，20号抗体、22号抗体与BMS986016抗体所结合的抗原表位不同，并且，理论推断在抗原抗体混合孵育试验中，10nM LAG-3与芯片上的BMS986016结合信号应与混合有20号或22号抗体的10nM LAG-3混合液相当，但图7a、7b和图c的结果不同于推测，表明20号或22号抗体与LAG-3的结合影响其与BMS986016结合，推测20号或22号抗体的结合导致抗原的构型构象发生了变化。
序列表
<110> 瑞阳（苏州）生物科技有限公司
<120> 与人LAG-3蛋白结合的抗体及其编码基因和应用
<160> 40
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 15
<212> PRT
<213> Balb/c小鼠(Mouse parvovirus 1b)
<400> 1
Arg Thr Ser Glu Ser Ile Asp Asn Tyr Gly Val Ser Phe Met Asn
1 5 10 15
<210> 2
<211> 7
<212> PRT
<213> Balb/c小鼠(Mouse parvovirus 1b)
<400> 2
Ala Ala Ser Asn Gln Gly Ser
1 5
<210> 3
<211> 9
<212> PRT
<213> Balb/c小鼠(Mouse parvovirus 1b)
<400> 3
Gln Gln Ser Lys Glu Val Pro Phe Thr
1 5
<210> 4
<211> 10
<212> PRT
<213> Balb/c小鼠(Mouse parvovirus 1b)
<400> 4
Gly Phe Thr Phe Ile Thr Tyr Ala Met Ser
1 5 10
<210> 5
<211> 15
<212> PRT
<213> Balb/c小鼠(Mouse parvovirus 1b)
<400> 5
Ser Ile Asn Asn Gly Gly Thr His Tyr Pro Asp Thr Met Lys Gly
1 5 10 15
<210> 6
<211> 11
<212> PRT
<213> Balb/c小鼠(Mouse parvovirus 1b)
<400> 6
Ser Tyr Asn Gly Ile Pro His Tyr Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 7
<211> 11
<212> PRT
<213> Balb/c小鼠(Mouse parvovirus 1b)
<400> 7
Arg Ala Ser Gln Asp Ile Gly Asn Ser Leu Asn
1 5 10
<210> 8
<211> 7
<212> PRT
<213> Balb/c小鼠(Mouse parvovirus 1b)
<400> 8
Ala Thr Ser Ser Leu Asp Ser
1 5
<210> 9
<211> 9
<212> PRT
<213> Balb/c小鼠(Mouse parvovirus 1b)
<400> 9
Leu Gln His Ala Ser Ser Pro Pro Thr
1 5
<210> 10
<211> 10
<212> PRT
<213> Balb/c小鼠(Mouse parvovirus 1b)
<400> 10
Gly Tyr Thr Leu Thr Asp Tyr Tyr Met Asn
1 5 10
<210> 11
<211> 17
<212> PRT
<213> Balb/c小鼠(Mouse parvovirus 1b)
<400> 11
Ile Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Arg Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 12
<211> 11
<212> PRT
<213> Balb/c小鼠(Mouse parvovirus 1b)
<400> 12
Asp Asp Gly Tyr Tyr Val Asp Tyr Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 13
<211> 15
<212> PRT
<213> Balb/c小鼠(Mouse parvovirus 1b)
<400> 13
Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr Gly Val Ser Phe Val Asn
1 5 10 15
<210> 14
<211> 7
<212> PRT
<213> Balb/c小鼠(Mouse parvovirus 1b)
<400> 14
Ala Ala Ser Asn Gln Gly Ser
1 5
<210> 15
<211> 9
<212> PRT
<213> Balb/c小鼠(Mouse parvovirus 1b)
<400> 15
Gln Gln Ser Lys Glu Val Pro Phe Thr
1 5
<210> 16
<211> 118
<212> PRT
<213> Balb/c小鼠(Mouse parvovirus 1b)
<400> 16
Glu Val Met Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ile Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ser Ile Asn Asn Gly Gly Thr His Tyr Pro Asp Thr Met Lys Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Arg Asn Ile Leu Tyr Leu Gln
65 70 75 80
Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala Arg
85 90 95
Ser Tyr Asn Gly Ile Pro His Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 17
<211> 111
<212> PRT
<213> Balb/c小鼠(Mouse parvovirus 1b)
<400> 17
Asp Ile Leu Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Thr Ser Glu Ser Ile Asp Asn Tyr
20 25 30
Gly Val Ser Phe Met Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Arg Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Gln Gly Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ala Asp Phe Ser Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Met Glu Glu Asp Asp Ser Ala Leu Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Lys
85 90 95
Glu Val Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 18
<211> 120
<212> PRT
<213> Balb/c小鼠(Mouse parvovirus 1b)
<400> 18
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Val Leu Ala Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Leu Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Asn Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Ile Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Arg Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Asp Gly Tyr Tyr Val Asp Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 19
<211> 107
<212> PRT
<213> Balb/c小鼠(Mouse parvovirus 1b)
<400> 19
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Ser Leu Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Gly Asn Ser
20 25 30
Leu Asn Trp Leu Gln Gln Glu Pro Asp Gly Thr Ile Lys Arg Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Thr Ser Ser Leu Asp Ser Gly Val Pro Lys Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Arg Ser Gly Ser Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Val Asp Tyr Tyr Cys Leu Gln His Ala Ser Ser Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 20
<211> 118
<212> PRT
<213> Balb/c小鼠(Mouse parvovirus 1b)
<400> 20
Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ile Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ser Ile Asn Asn Gly Gly Thr His Tyr Pro Asp Ser Met Lys Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Arg Asn Ile Leu Tyr Leu Gln
65 70 75 80
Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala Arg
85 90 95
Ser Tyr Asn Gly Ile Pro His Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 21
<211> 111
<212> PRT
<213> Balb/c小鼠(Mouse parvovirus 1b)
<400> 21
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr
20 25 30
Gly Val Ser Phe Val Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Gln Gly Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Met Glu Glu Asp Asp Ser Ala Leu Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Lys
85 90 95
Glu Val Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 22
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工合成序列(Unknown)
<400> 22
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ile Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Asn Asn Gly Gly Thr His Tyr Pro Asp Thr Met Lys Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln
65 70 75 80
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys
85 90 95
Ser Tyr Asn Gly Ile Pro His Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 23
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工合成序列(Unknown)
<400> 23
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ile Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Asn Asn Gly Gly Thr His Tyr Pro Asp Thr Met Lys Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln
65 70 75 80
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
85 90 95
Ser Tyr Asn Gly Ile Pro His Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 24
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工合成序列(Unknown)
<400> 24
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Glu Ser Ile Asp Asn Tyr
20 25 30
Gly Val Ser Phe Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Gln Gly Ser Gly Val Pro Ser
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Lys
85 90 95
Glu Val Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 25
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工合成序列(Unknown)
<400> 25
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Glu Ser Ile Asp Asn Tyr
20 25 30
Gly Val Ser Phe Met Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Gln Gly Ser Gly Val Pro Ser
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Lys
85 90 95
Glu Val Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 27
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工合成序列(Unknown)
<400> 27
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Glu Ser Ile Asp Asn Tyr
20 25 30
Gly Val Ser Phe Met Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Gln Gly Ser Gly Val Pro Ser
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ser Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Lys
85 90 95
Glu Val Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 28
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工合成序列(Unknown)
<400> 28
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Glu Ser Ile Asp Asn Tyr
20 25 30
Gly Val Ser Phe Met Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Gln Gly Ser Gly Val Pro Ser
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ala Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Lys
85 90 95
Glu Val Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 29
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工合成序列(Unknown)
<400> 29
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Glu Ser Ile Asp Asn Tyr
20 25 30
Gly Val Ser Phe Met Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Gln Gly Ser Gly Val Pro Ser
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ala Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ser Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Lys
85 90 95
Glu Val Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 30
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工合成序列(Unknown)
<400> 30
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr
20 25 30
Gly Val Ser Phe Val Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Gln Gly Ser Gly Val Pro Ser
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Lys
85 90 95
Glu Val Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 31
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工合成序列(Unknown)
<400> 31
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr
20 25 30
Gly Val Ser Phe Val Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Gln Gly Ser Gly Val Pro Ser
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Lys
85 90 95
Glu Val Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 32
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工合成序列(Unknown)
<400> 32
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr
20 25 30
Gly Val Ser Phe Val Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Gln Gly Ser Gly Val Pro Ser
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ser Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Lys
85 90 95
Glu Val Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 33
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工合成序列(Unknown)
<400> 33
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr
20 25 30
Gly Val Ser Phe Val Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Gln Gly Ser Gly Val Pro Ser
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ala Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Lys
85 90 95
Glu Val Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 34
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工合成序列(Unknown)
<400> 34
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr
20 25 30
Gly Val Ser Phe Val Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Gln Gly Ser Gly Val Pro Ser
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ala Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ser Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Lys
85 90 95
Glu Val Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 35
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工合成序列(Unknown)
<400> 35
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Leu Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Arg Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Asp Gly Tyr Tyr Val Asp Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 36
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工合成序列(Unknown)
<400> 36
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Leu Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Arg Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Val Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Asp Gly Tyr Tyr Val Asp Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 37
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工合成序列(Unknown)
<400> 37
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Gly Asn Ser
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Thr Ser Ser Leu Asp Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Ala Ser Ser Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 38
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工合成序列(Unknown)
<400> 38
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Gly Asn Ser
20 25 30
Leu Asn Trp Leu Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Thr Ser Ser Leu Asp Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Ser Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Ala Ser Ser Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 39
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工合成序列(Unknown)
<400> 39
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Gly Asn Ser
20 25 30
Leu Asn Trp Leu Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Thr Ser Ser Leu Asp Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Arg Ser Gly Ser Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Ala Ser Ser Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 40
<211> 327
<212> PRT
<213> 人(Human)
<400> 40
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
115 120 125
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
130 135 140
Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp
145 150 155 160
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe
165 170 175
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
180 185 190
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu
195 200 205
Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
210 215 220
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys
225 230 235 240
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
245 250 255
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
260 265 270
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
275 280 285
Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser
290 295 300
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
305 310 315 320
Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
325
<210> 41
<211> 107
<212> PRT
<213> 人(Human)
<400> 41
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
1 5 10 15
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
35 40 45
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50 55 60
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
65 70 75 80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
85 90 95
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105

Claims (10)

1.一种与人LAG-3蛋白结合的抗体，包括轻链可变区和重链可变区中的至少一个氨基酸片段，其特征在于，所述的轻链可变区具有含有如①、②或③组所示氨基酸序列的轻链CDR区：
①：与SEQ ID No.1具有至少50％同源性的氨基酸序列、与SEQ ID No.2具有至少50％同源性的氨基酸序列以及与SEQ ID No.3具有至少50％同源性的氨基酸序列；
②：与SEQ ID No.7具有至少50％同源性的氨基酸序列、与SEQ ID No.8具有至少50％同源性的氨基酸序列以及与SEQ ID No.9具有至少50％同源性的氨基酸序列；
③：与SEQ ID No.13具有至少50％同源性的氨基酸序列、与SEQ ID No.14具有至少50％同源性的氨基酸序列以及与SEQ ID No.15具有至少50％同源性的氨基酸序列；
所述的重链可变区具有含有如④或⑤组所示氨基酸序列的重链CDR区：
④：与SEQ ID No.4具有至少50％同源性的氨基酸序列、与SEQ ID No.5具有至少50％同源性的氨基酸序列以及与SEQ ID No.6具有至少50％同源性的氨基酸序列；
⑤：与SEQ ID No.10具有至少50％同源性的氨基酸序列、与SEQ ID No.11具有至少50％同源性的氨基酸序列以及与SEQ ID No.12具有至少50％同源性的氨基酸序列。
2.如权利要求1所述的与人LAG-3蛋白结合的抗体，其特征在于，所述的轻链可变区具有如SEQ ID No.13、14和15所示氨基酸序列的轻链CDR区，所述的重链可变区具有如SEQ IDNo.4、5和6所示氨基酸序列的重链CDR区。
3.如权利要求1所述的与人LAG-3蛋白结合的抗体，其特征在于，所述的轻链可变区具有如SEQ ID No.7、8和9所示氨基酸序列的轻链CDR区，所述的重链可变区具有如SEQ IDNo.10、11和12所示氨基酸序列的重链CDR区。
4.如权利要求1-3中任意一项所述的与人LAG-3蛋白结合的抗体，其特征在于，为鼠源抗体、人鼠嵌合抗体或人源化抗体。
5.如权利要求4所述的与人LAG-3蛋白结合的抗体，其特征在于，为鼠源抗体或人鼠嵌合抗体，所述的重链可变区具有如SEQ ID No.16或SEQ ID No.18所示的氨基酸序列，所述的轻链可变区具有如SEQ ID No.19或SEQ ID No.21所示的氨基酸序列。
6.如权利要求4所述的与人LAG-3蛋白结合的抗体，其特征在于，为全人源化抗体，该全人源化抗体的重链氨基酸序列如SEQ ID No.23所示，该全人源化抗体的轻链氨基酸序列如SEQ ID No.33所示。
7.如权利要求4所述的与人LAG-3蛋白结合的抗体，其特征在于，为全人源化抗体，该全人源化抗体的重链氨基酸序列如SEQ ID No.34所示，该全人源化抗体的轻链氨基酸序列如SEQ ID No.37所示。
8.含有如权利要求7所述的与人LAG-3蛋白结合的抗体的编码基因的重组载体。
9.表达如权利要求1-6中任意一项所述的与人LAG-3蛋白结合的抗体的重组细胞。
10.如权利要求1-6中任意一项所述的与人LAG-3蛋白结合的抗体在制备恶性肿瘤治疗药物中的应用。
CN201910469160.3A 2019-05-31 2019-05-31 与人lag-3蛋白结合的抗体及其编码基因和应用 Active CN112010972B (zh)

Priority Applications (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202210739338.3A CN115340606B (zh) 2019-05-31 2019-05-31 与人lag-3蛋白结合的抗体及其编码基因和应用
CN201910469160.3A CN112010972B (zh) 2019-05-31 2019-05-31 与人lag-3蛋白结合的抗体及其编码基因和应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910469160.3A CN112010972B (zh) 2019-05-31 2019-05-31 与人lag-3蛋白结合的抗体及其编码基因和应用

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202210739338.3A Division CN115340606B (zh) 2019-05-31 2019-05-31 与人lag-3蛋白结合的抗体及其编码基因和应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN112010972A true CN112010972A (zh) 2020-12-01
CN112010972B CN112010972B (zh) 2023-01-10

Family

ID=73501079

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202210739338.3A Active CN115340606B (zh) 2019-05-31 2019-05-31 与人lag-3蛋白结合的抗体及其编码基因和应用
CN201910469160.3A Active CN112010972B (zh) 2019-05-31 2019-05-31 与人lag-3蛋白结合的抗体及其编码基因和应用

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202210739338.3A Active CN115340606B (zh) 2019-05-31 2019-05-31 与人lag-3蛋白结合的抗体及其编码基因和应用

Country Status (1)

Country Link
CN (2) CN115340606B (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2023051621A1 (zh) * 2021-09-29 2023-04-06 中山康方生物医药有限公司 抗lag3抗体、药物组合物及用途

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2016126858A2 (en) * 2015-02-03 2016-08-11 Anaptysbio, Inc. Antibodies directed against lymphocyte activation gene 3 (lag-3)
CA3024359A1 (en) * 2016-06-23 2017-12-28 Jiangsu Hengrui Medicine Co., Ltd. Lag-3 antibody, antigen-binding fragment thereof, and pharmaceutical application thereof
JP2018007668A (ja) * 2013-03-15 2018-01-18 グラクソスミスクライン、インテレクチュアル、プロパティー、ディベロップメント、リミテッドＧｌａｘｏｓｍｉｔｈｋｌｉｎｅ Ｉｎｔｅｌｌｅｃｔｕａｌ Ｐｒｏｐｅｒｔｙ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ Ｌｉｍｉｔｅｄ 抗ｌａｇ−３結合タンパク質
CN108367069A (zh) * 2015-12-14 2018-08-03 宏观基因有限公司 对于pd-1和ctla-4具有免疫反应性的双特异性分子及其使用方法

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DK0758383T3 (da) * 1994-05-06 2007-05-29 Roussy Inst Gustave Oplöselige polypeptidfraktioner af LAG-3-proteinet; fremgangsmåde til fremstilling; terapeutisk sammensætning; antiidiotypisk antistof
EP3116909B1 (en) * 2014-03-14 2019-11-13 Novartis Ag Antibody molecules to lag-3 and uses thereof
CN114853891A (zh) * 2015-07-22 2022-08-05 索伦托药业有限公司 与lag3结合的抗体治疗剂
CN105796542A (zh) * 2016-03-15 2016-07-27 四川九章生物科技有限公司 绿原酸在制备治疗以lag-3为靶点的疾病的药物中的用途

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2018007668A (ja) * 2013-03-15 2018-01-18 グラクソスミスクライン、インテレクチュアル、プロパティー、ディベロップメント、リミテッドＧｌａｘｏｓｍｉｔｈｋｌｉｎｅ Ｉｎｔｅｌｌｅｃｔｕａｌ Ｐｒｏｐｅｒｔｙ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ Ｌｉｍｉｔｅｄ 抗ｌａｇ−３結合タンパク質
WO2016126858A2 (en) * 2015-02-03 2016-08-11 Anaptysbio, Inc. Antibodies directed against lymphocyte activation gene 3 (lag-3)
CN108367069A (zh) * 2015-12-14 2018-08-03 宏观基因有限公司 对于pd-1和ctla-4具有免疫反应性的双特异性分子及其使用方法
CA3024359A1 (en) * 2016-06-23 2017-12-28 Jiangsu Hengrui Medicine Co., Ltd. Lag-3 antibody, antigen-binding fragment thereof, and pharmaceutical application thereof

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CHING-TAI HUANG等: "Role of LAG-3 in regulatory T cells", 《IMMUNITY》 *
FELIX S. LICHTENEGGER等: "Targeting LAG-3 and PD-1 to enhance T cell activation by antigen-presenting cells", 《FRONTIERS IN IMMUNOLOGY》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2023051621A1 (zh) * 2021-09-29 2023-04-06 中山康方生物医药有限公司 抗lag3抗体、药物组合物及用途

Also Published As

Publication number Publication date
CN115340606A (zh) 2022-11-15
CN112010972B (zh) 2023-01-10
CN115340606B (zh) 2023-12-19

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11396547B2 (en) Anti-EGFR and anti-CD3 bispecific antibody and uses thereof
CN109843927B (zh) 抗b7-h3抗体、其抗原结合片段及其医药用途
WO2017071625A1 (zh) 一种抗pd-1单克隆抗体、其药物组合物及其用途
CA3176385A1 (en) Antibody against nectin-4 and application thereof
CN110382536A (zh) 抗pd-1抗体及其用途
US20210032347A1 (en) Anti-b7-h4 antibody, antigen-binding fragment thereof and pharmaceutical use thereof
CN113015749A (zh) 靶向cd3的抗体、双特异性抗体及其用途
CN113508139B (zh) 结合人lag-3的抗体、其制备方法和用途
JP7384493B2 (ja) 抗ｃｌｌ１抗体およびその使用
CN115298216A (zh) 抗体或其抗原结合片段、其制备方法及医药用途
CN110461874A (zh) 抗gitr抗体、其抗原结合片段及其医药用途
CN112010972B (zh) 与人lag-3蛋白结合的抗体及其编码基因和应用
CN114539405B (zh) 抗tigit抗体或其抗原结合片段
US20220127364A1 (en) Novel anti-pd-l1 antibody and uses thereof
CN114957468A (zh) 一种抗Siglec15抗体及其用途
CN117384290B (zh) 人源robo1结合分子及其应用
CN113004407B (zh) Lag3抗体及其应用
CN114539406B (zh) 一种全人源抗PD-1的单克隆抗体No.8-3及其应用
CN114539407B (zh) 一种全人源抗PD-1的单克隆抗体No.1-10及其应用
CN112521499B (zh) 抗cxcl13抗体及其用途
EP4293047A1 (en) Anti-pd-l1 antibody and use thereof
US20240034792A1 (en) Pd-1 antigen-binding protein and use thereof
CN116082508A (zh) 一种抗siglec15人源化抗体及其应用
CN116478288A (zh) 红细胞弱结合型人源化cd47抗体及其应用
CN116761822A (zh) 抗pd-1抗体及其用途

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant