CN112005813A - 一种液体菌种生产工艺及纯度检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种液体菌种生产工艺及纯度检测方法，属于食用菌栽培技术领域，首先制作消毒工具，所述消毒工具包括套圈及手柄，所述套圈的内径大于发酵罐接种口的外径，在所述套圈上缠绕吸水材料，制成酒精套圈；生产步骤为：S1：用酒精浸润套圈上的吸水材料，备用；S2：打开发酵罐的放气阀使发酵罐内的压力降至零，把酒精套圈套在接种口，点燃酒精套圈，产生火焰圈后关闭放气阀；S3：打开接种口，在火焰圈的保护作用下，迅速将液体菌种倒入发酵罐内，将接种口密封；S4：对液体菌种进行培养。本发明示例的生产工艺及纯度检测方法，解决了现有技术中在菌种接种时菌种易污染、纯度检测时采用感官的方式检测存在的检测误差大的问题，确保菌种无污染。

Description

一种液体菌种生产工艺及纯度检测方法

技术领域

本发明属于食用菌栽培技术领域，具体而言是一种液体菌种生产工艺及纯度检测方法。

背景技术

液体菌种是用液体培养基，在生物发酵罐中，通过深层培养技术生产的液体形态的食用菌菌种；液体指的是培养基物理状态，液体深层培养就是发酵工程技术。液体制种实质是利用生物发酵工程生产液体菌种，取代传统、朴素的固体制种；利用生物发酵原理，给菌丝生长提供一个最佳的营养、酸碱度、温度、供氧量，使菌丝快速生长，迅速繁殖，在短时间达到一定菌球数量，完成一个发酵周期，即培养完毕；随着科学技术的发展，食用菌液体菌种的发酵培养技术日趋成熟，液体菌种在菌种的繁殖、液体菌种的接种方法、培养基的配方及专用设备方面都有着极大的优势，它发酵条件易控制、活性高、污染少、发菌快、成本低，可以大大节省人工、场地和能源能耗，液体菌种在生产发酵罐内发酵时，溶氧量、温度的稳定性和空气的环境都对菌种的培养有着很大的影响。

为确保生产出的食用菌安全无污染，在液体菌种接入发酵罐之前，需要确保接种口无污染，且在液体菌种培养的过程中，需要进行纯度检测。在液体菌种对接种口常用的消毒方法为用棉球蘸上酒精，对接种口进行擦拭，此方法存在消毒不彻底的问题；在液体菌种纯度检测时，目前常用的方法为采用感官的方式对菌种的质量进行评估，此方法易受环境因素与人为因素影响等缺点，评估结果误差较大。因此，需要构建一种能在菌种接入时避免菌种受到污染、且能简单、有效的对菌种纯度进行检测的菌种培养工艺，以解决上述技术问题。

发明内容

为了解决上述现有技术中的不足，本发明的目的在于提供一种液体菌种生产工艺及纯度检测方法，以解决现有技术中在菌种接种时菌种易污染、纯度检测时采用感官的方式检测存在的检测误差大的问题，确保菌种无污染。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案为：

一种液体菌种生产工艺，首先制作消毒工具，所述消毒工具包括套圈及手柄，所述套圈的内径大于发酵罐接种口的外径，在所述套圈上缠绕吸水材料，制成酒精套圈；

生产步骤为：

S1：用酒精浸润套圈上的吸水材料，备用；

S2：打开发酵罐的放气阀使发酵罐内的压力降至零，把套圈套在接种口上，点燃酒精套圈，产生火焰圈后关闭放气阀；

S3：打开接种口，在火焰圈的保护作用下，迅速将液体菌种倒入发酵罐内，将接种口密封；

S4：调节发酵罐内的压力及温度，对液体菌种进行培养。

优选的，所述套圈及手柄为铁丝制成，所述吸水材料为脱脂棉。

进一步的，步骤S1中所述酒精的浓度为95％。

进一步的，步骤S4液体菌种培养的方法为：步骤S4液体菌种培养的方法为：在接种口密封后，通过气泵充气，再通过放气阀调节罐体内部的压力，使罐体内部的压力维持在0.02Mpa-0.03Mpa；罐体内部的温度控制在20±1℃、通气比为1:0.8、培养时间为96h-144h。

一种液体菌种纯度检测方法，包括以下步骤：

S1：用酒精火焰灼烧取样阀后，打开取样阀，弃掉最初流出的少量液体菌种，用消毒后的试剂瓶接取发酵罐内的液体菌种；

S2：用酒精火焰灼烧试剂瓶瓶口，将试剂瓶密封，用酒精火焰灼烧取样阀将取样阀上的液体菌种烧干，将取样阀密封；

S3：在接种箱中放入倾斜试管或培养皿，倾斜试管的试管壁或培养皿中有培养基，将液体菌种接入到培养基上进行培养；

S4：将培养后的液体菌种制片，用显微镜进行观察。

进一步的，培养温度为28℃，培养时间为48h-72h。

与现有技术相比，本发明的有益效果为：

1、本发明示例的液体菌种生产工艺，采用带有手柄的酒精套圈的方式对接种口进行消毒，解决了现有技术中采用消毒棉对接种口进行消毒存在的消毒不彻底、只能对接种口表面进行消毒的问题，且接种过程不需要喷灯消毒，在消毒前，操作者手持手柄，将酒精套圈套在接种口外围，将火焰圈点燃，为接种创造无菌的环境，避免在接种时液体菌种在接种口处污染，使操作过程简单。

2、本发明示例的液体菌种生产工艺，在套圈上固定连接有手柄，手柄的设置能够方便对套圈的操作，使套圈的移动不需要借助其他工具，使操作过程更加顺畅。

3、本发明示例的液体菌种纯度检测方法，通过接入到试管斜面或培养皿的培养基中进行培养，培养后采用镜检的方式进行纯度检测，解决了根据气味、菌液澄清度及颜色变化存在的检测具有偏差的问题，使检测更精准，能及时发现杂菌，减少生产过程的损失。

附图说明

通过阅读参照以下附图所作的对非限制性实施例所作的详细描述，本申请的其它特征、目的和优点将会变得更明显：

图1为本发明消毒工具结构示意图。

1-手柄，2-套圈，3-脱脂棉。

具体实施方式

下面结合附图和实施例对本申请作进一步的详细说明。可以理解的是，此处所描述的具体实施例仅仅用于解释相关发明，而非对该发明的限定。另外还需要说明的是，为了便于描述，附图中仅示出了与发明相关的部分。

需要说明的是，在不冲突的情况下，本申请中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。下面将参考附图并结合实施例来详细说明本申请。

一：液体菌种的接种及纯度检测。

以海鲜菇液体菌种为例，制备液体菌种及对其进行纯度检测。

首先制作消毒工具，所述消毒工具包括套圈2及手柄1，所述套圈2的内径大于发酵罐接种口的外径，在所述套圈上缠绕脱脂棉3，制成酒精套圈。在接种过程中，将脱脂棉3浸润酒精后，套在接种口的外围，点燃酒精，对接种口进行消毒，并为接种创造一个无菌的环境，避免接种过程受杂菌污染。手柄1的设置方便操作者对火焰圈的操作，能在接种完毕后顺利的将套圈2从接种口取下，接种过程一气呵成，操作流程简单，能有效避免因酒精套圈取拿不变造成烫伤。

具体的，手柄的长度为20cm，脱脂棉的厚度为0.5cm，脱脂棉缠绕套圈1周，酒精套圈的内径大于液体菌种发酵罐接种口外径2cm。

实施例1：

海鲜菇液体菌种生产工艺为：

S1：用95％酒精浸润套圈上的脱脂棉，备用；

S2：打开发酵罐的放气阀使发酵罐内的压力降至零，把酒精套圈套在接种口上，点燃酒精套圈，产生火焰圈后关闭放气阀；

S3：打开接种口，在火焰圈的保护作用下，迅速将液体菌种倒入发酵罐内，将接种口密封；

S4：在接种口密封后，通过气泵充气，再通过放气阀调节罐体内部的压力，使罐体内部的压力维持在0.02Mpa；罐体内部的温度控制在20.3℃、通气比为1:0.8、培养时间为105h。

接种第四天对海鲜菇液体菌种进行纯度检测，其步骤为：

S1：用95％酒精火焰灼烧取样阀后，打开取样阀，弃掉最初流出的少量液体菌种，用消毒后的试剂瓶接取发酵罐内的液体菌种；

S2：用酒精火焰灼烧试剂瓶瓶口，将试剂瓶密封，用酒精火焰灼烧取样阀将取样阀上的液体菌种烧干，将取样阀密封；

S3：将取出的液体菌种带入接种箱中的培养皿中的培养基上进行培养，培养温度为28℃，培养时间为48h；

S4：将培养后的液体菌种制片，用显微镜进行观察。

实施例二：

海鲜菇液体菌种生产工艺为：

S1：用95％酒精浸润套圈上的脱脂棉，备用；

S2：打开发酵罐的放气阀使发酵罐内的压力降至零，把酒精套圈套在接种口上，点燃酒精套圈，产生火焰圈后关闭放气阀；

S3：打开接种口，在火焰圈的保护作用下，迅速将液体菌种倒入发酵罐内，将接种口密封；

S4：在接种口密封后，通过气泵充气，再通过放气阀调节罐体内部的压力，使罐体内部的压力维持在0.03Mpa；罐体内部的温度控制在20℃、通气比为1:0.8、培养时间为96h。

接种第四天对海鲜菇液体菌种进行纯度检测，其步骤为：

S1：用95％酒精火焰灼烧取样阀后，打开取样阀，弃掉最初流出的少量液体菌种，用消毒后的试剂瓶接取发酵罐内的液体菌种；

S2：用酒精火焰灼烧试剂瓶瓶口，将试剂瓶密封，用酒精火焰灼烧取样阀将取样阀上的液体菌种烧干，将取样阀密封；

S3：将取出的液体菌种带入接种箱中倾斜试管试管壁上的培养基上进行培养，培养温度为28℃，培养时间为57h；

S4：将培养后的液体菌种制片，用显微镜进行观察。

实施例三：

海鲜菇液体菌种生产工艺为：

S1：用95％酒精浸润套圈上的脱脂棉，备用；

S2：打开发酵罐的放气阀使发酵罐内的压力降至零，把酒精套圈套在接种口上，点燃酒精套圈，产生火焰圈后关闭放气阀；

S3：打开接种口，在火焰圈的保护作用下，迅速将液体菌种倒入发酵罐内，将接种口密封；

S4：在接种口密封后，通过气泵充气，再通过放气阀调节罐体内部的压力，使罐体内部的压力维持在0.02Mpa；罐体内部的温度控制在20.6℃、通气比为1:0.8、培养时间为124h。

接种第四天对海鲜菇液体菌种进行纯度检测，其步骤为：

S1：用95％酒精火焰灼烧取样阀后，打开取样阀，弃掉最初流出的少量液体菌种，用消毒后的试剂瓶接取发酵罐内的液体菌种；

S2：用酒精火焰灼烧试剂瓶瓶口，将试剂瓶密封，用酒精火焰灼烧取样阀将取样阀上的液体菌种烧干，将取样阀密封；

S3：将取出的液体菌种带入接种箱中倾斜试管试管壁上的培养基上进行培养，培养温度为28℃，培养时间为72h；

S4：将培养后的液体菌种制片，用显微镜进行观察。

实施例四：

海鲜菇液体菌种生产工艺为：

S1：用95％酒精浸润套圈上的脱脂棉，备用；

S2：打开发酵罐的放气阀使发酵罐内的压力降至零，把酒精套圈套在接种口上，点燃酒精套圈，产生火焰圈后关闭放气阀；

S3：打开接种口，在火焰圈的保护作用下，迅速将液体菌种倒入发酵罐内，将接种口密封；

S4：在接种口密封后，通过气泵充气，再通过放气阀调节罐体内部的压力，使罐体内部的压力维持在0.03Mpa；罐体内部的温度控制在21℃、通气比为1:0.8、培养时间为144h。

接种第四天对海鲜菇液体菌种进行纯度检测，其步骤为：

S1：用95％酒精火焰灼烧取样阀后，打开取样阀，弃掉最初流出的少量液体菌种，用消毒后的试剂瓶接取发酵罐内的液体菌种；

S2：用酒精火焰灼烧试剂瓶瓶口，将试剂瓶密封，用酒精火焰灼烧取样阀将取样阀上的液体菌种烧干，将取样阀密封；

S3：将取出的液体菌种带入接种箱中培养皿中的培养基上进行培养，培养温度为28℃，培养时间为60h；

S4：将培养后的液体菌种制片，用显微镜进行观察。

二、纯度检测结果分析。

表1为各实施例海鲜菇液体菌种的感官指标；

表2为各实施例海鲜菇液体菌种的理化指标。

表1合格海鲜菇液体菌种的感官指标

表2合格海鲜菇液体菌种的理化指标

根据试验分析可知，采用火焰圈消毒的方式能够在接种时为液体菌种创造一个无菌的接种环境，有效的避免在培养前菌种污染上其他杂菌，培养出的菌种无污染，产量高、质量好。

本领域技术人员应当理解，本申请中所涉及的发明范围，并不限于上述技术特征的特定组合而成的技术方案，同时也应涵盖在不脱离所述发明构思的情况下，由上述技术特征或其等同特征进行任意组合而形成的其它技术方案。例如上述特征与本申请中公开的(但不限于)具有类似功能的技术特征进行互相替换而形成的技术方案。

除说明书所述的技术特征外，其余技术特征为本领域技术人员的已知技术，为突出本发明的创新特点，其余技术特征在此不再赘述。

Claims (5)

1.一种液体菌种生产工艺，其特征在于，首先制作消毒工具，所述消毒工具包括套圈及手柄，所述套圈的内径大于发酵罐接种口的外径，在所述套圈上缠绕吸水材料，制成酒精套圈；

生产步骤为：

S1：用酒精浸润套圈上的吸水材料，备用；

S2：打开发酵罐的放气阀使发酵罐内的压力降至零，把酒精套圈套在接种口上，点燃酒精套圈，产生火焰圈后关闭放气阀；

S3：打开接种口，在火焰圈的保护作用下，迅速将液体菌种倒入发酵罐内，将接种口密封；

S4：调节发酵罐内的压力及温度，对液体菌种进行培养。

2.根据权利要求1所述的一种液体菌种生产工艺，其特征在于，步骤S1中所述酒精的浓度为95％。

3.根据权利要求1所述的一种液体菌种生产工艺，其特征在于，步骤S4液体菌种培养的方法为：在接种口密封后，通过气泵充气，再通过放气阀调节罐体内部的压力，使罐体内部的压力维持在0.02Mpa-0.03Mpa；罐体内部的温度控制在20±1℃、通气比为1:0.8、培养时间为96h-144h。

4.一种液体菌种纯度检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1：用酒精火焰灼烧取样阀后，打开取样阀，弃掉最初流出的少量液体菌种，用消毒后的试剂瓶接取发酵罐内的液体菌种；

S2：用酒精火焰灼烧试剂瓶瓶口，将试剂瓶密封，用酒精火焰灼烧取样阀将取样阀上的液体菌种烧干，将取样阀密封；

S3：在接种箱中放入倾斜试管或培养皿，倾斜试管的试管壁或培养皿中有培养基，将液体菌种接入到培养基上进行培养；

S4：将培养后的液体菌种制片，用显微镜进行观察。

5.根据权利要求4所述的一种液体菌种纯度检测方法，其特征在于，步骤S3中的培养温度为28℃，培养时间为48h-72h。

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