CN111995758B - 检测鸟苷酸的稀土配位聚合物探针及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种检测鸟苷酸的稀土配位聚合物探针的制备方法,将柠檬酸盐溶液和稀土金属盐溶液混合,室温下搅拌,充分反应后离心收集白色沉淀,烘干即可得到检测鸟苷酸的稀土配位聚合物探针。所制备的稀土配位聚合物探针可以很好地分散于水相缓冲溶液中,更适用于检测生物样品;稀土配位聚合物探针的制备是通过室温下自组装反应得到的,无需高温和较长的反应时间,制备过程较为简易;制备的稀土配位聚合物探针光学性质稳定,对鸟苷酸有识别性能力强,响应迅速,响应范围可以在0.15‑20μM,检测限为0.10μM。
Description
技术领域
本发明属于荧光材料技术领域,具体涉及一种检测鸟苷酸的稀土配位聚合物探针及其制备方法和应用。
背景技术
目前,为增强食品的风味及口感,鸟苷酸(guanosine-5′-monophosphate,即GMP)通常作为肉类、鸡精、饮料等食品的一种重要添加剂。此外,鸟苷酸作为一种营养成份还用于婴儿配方奶粉中。然而,任何过量的添加剂或营养素的摄入都会对人体造成严重的伤害。因此,许多国家对食品添加剂或者营养成份都制定了严格的限量。根据欧盟委员会工业迪萨利诺协会(IDEACE)的建议,对于低体重婴儿配方奶粉,鸟苷酸的最大允许量分为6.5毫克/100千卡(326.3mg/kg)(J.Nutr.,2002,132,1395S-1577S.);在澳新食品法典中也明确要求,鸟苷酸在婴儿配方奶粉中的添加量不得高于3.8毫克/100千克(797.69mg/kg)(Standard 2.9.1,Infant Formula products,Department of health and ageing,2000)。根据世界粮农组织及世界卫生组织的建议,鸟苷酸在肉类食品(午餐肉、火腿、咸肉)中的最大添加允许量为0.5g/kg(500mg/kg)。因此,建立食品中鸟苷酸的添加量检测方法具有重大意义。目前,对于鸟苷酸的检测,人们已经开发了色谱法(J.Chromatogr.A,2010,1217,5501-5510)、电化学法(Electrochimica Acta,2013.95,246-250;J.Anal.Chem.,2015,70,186-192)及荧光分析法(J.Lumin.,2016,169,173-181;Tetrahedron Lett.,2014,55,6131-6136.。色谱法通常需要繁琐的固相萃取程序;电分析化学方法很难避免其它物质的干扰、选择性较低;现已发展的荧光法通常需要一些复杂的有机合成,并且制成的探针水溶性差,很难用于食品中鸟苷酸的测定。
发明内容
本发明提供一种检测鸟苷酸的稀土配位聚合物探针及其制备方法和应用。
本发明的目的是以下述方式实现的:
检测鸟苷酸的稀土配位聚合物探针的制备方法,将柠檬酸盐溶液和稀土金属盐溶液混合,室温下搅拌,充分反应后离心收集白色沉淀,烘干即可得到检测鸟苷酸的稀土配位聚合物探针。
室温下搅拌反应时间为2-6h,离心分离的转速为6000rpm-8000rpm,收集的白色沉淀先用去离子水洗涤,再烘干,烘干温度为60-80℃。
所述柠檬酸盐和稀土金属盐的摩尔比为(0.5-5):5。
所述稀土金属盐溶液中的稀土金属离子为Tb3+、Eu3+中的至少一种。
所述柠檬酸盐为柠檬酸钠、柠檬酸钾中的至少一种。
如上述的检测鸟苷酸的稀土配位聚合物探针的制备方法制备的稀土配位聚合物探针。
利用上述的稀土配位聚合物探针检测鸟苷酸的方法,具体步骤如下:将稀土配位聚合物探针溶于水相缓冲溶液中,配成稀土配位聚合物探针溶液,将稀土配位聚合物探针溶液加入待测液中,反应一定时间后,检测探针的荧光光谱,将测得的荧光强度代入标准曲线中即可得到待测液中鸟苷酸的浓度。
所述标准曲线的建立方法如下:
A:水溶液中检测鸟苷酸的标准曲线的建立:配置鸟苷酸标准溶液,将不同体积的鸟苷酸标准溶液加入10μL稀土配位聚合物探针悬浮液中,使悬浮液中鸟苷酸的浓度呈梯度变化,通过调节HEPES缓冲液的量将总体积固定为100μL,室温下反应15分钟后,在252nm激发波长下测量它们相应的荧光强度;以荧光强度为纵坐标y、悬浮液中鸟苷酸的浓度为横坐标x,建立标准曲线,拟定线性方程;
B:奶粉中检测鸟苷酸的标准曲线的建立:配置鸟苷酸标准溶液,将奶粉溶于水,得到奶粉水溶液,用超滤离心管去除奶粉中的蛋白质,向奶粉水溶液中加入不同体积的鸟苷酸标准溶液,得到含有不同浓度的鸟苷酸的奶粉水溶液,向10μL稀土配位聚合物探针悬浮液中加入5μL具有不同浓度的鸟苷酸的奶粉水溶液和85μL的HEPES缓冲液,将总体积固定为100μL,超声20分钟后,在室温下检测溶液在252nm激发波长下的荧光强度;以荧光强度为纵坐标y、奶粉水溶液中鸟苷酸的浓度为横坐标x,建立标准曲线,拟定线性方程;
C:火腿中检测鸟苷酸的标准曲线的建立:配置鸟苷酸标准溶液,将4g破碎的火腿加入2mL去离子水中并超声处理1小时,离心除去杂质,得火腿水溶液;向火腿水溶液中加入不同体积的鸟苷酸标准溶液,得到含有不同浓度的鸟苷酸的火腿水溶液;向10μL稀土配位聚合物探针悬浮液中加入5μL具有不同浓度的鸟苷酸的火腿水溶液和85μL的HEPES缓冲液,将总体积固定为100μL,超声20分钟后,在室温下检测溶液在252nm激发波长下的荧光强度;以荧光强度为纵坐标y、火腿水溶液中鸟苷酸的浓度为横坐标x,建立标准曲线,拟定线性方程。
如上述的稀土配位聚合物探针在检测奶粉或火腿中鸟苷酸含量中的应用。
相对于现有技术,本发明的有益效果是,本发明制备的稀土配位聚合物探针使用的有机配体无毒、易溶于水。所制备的稀土配位聚合物探针可以很好地分散于水相缓冲溶液中,更适用于检测生物样品;稀土配位聚合物探针的制备是通过室温下自组装反应得到的,无需高温和较长的反应时间,制备过程较为简易;制备的稀土配位聚合物探针光学性质稳定,对鸟苷酸有识别性能力强,响应迅速,响应范围可以在0.15-20μM,检测限为0.10μM。因此利用本稀土配位聚合物探针可对传统方式难以检测的婴儿配方奶粉和火腿等中鸟苷酸定量检测。
附图说明
图1是加入鸟苷酸前(a)和加入鸟苷酸后(b)铽配位聚合物探针的扫描电镜图(SEM)。
图2是本发明的铽配位聚合物探针对水溶液中鸟苷酸检测的线性关系图。
图3是本发明的铽配位聚合物探针对奶粉中鸟苷酸检测的线性关系图。
图4是本发明的铽配位聚合物探针对火腿中鸟苷酸检测的线性关系图。
图5是加入鸟苷酸前(a)和加入鸟苷酸后(b)铽配位聚合物探针的X射线能谱分析图。
图6是加入鸟苷酸前(a)和加入鸟苷酸后(b)铽配位聚合物探针的X射线衍射图。
图7是柠檬酸盐(a)、铽配位聚合物探针(b)、加入鸟苷酸后的铽配位聚合物探针(c)、鸟苷酸(d)的红外光谱图。
图8是在252nm激发波长下,Cit/Tb在加入鸟苷酸前(a)、加入鸟苷酸后(b)的发射图谱,插图是紫外灯下相应的照片。
图9是Tb3+:Cit不同摩尔比时的Cit/Tb-GMP荧光光谱图。
图10是Cit/Tb和Cit/Tb-GMP的荧光寿命图。
图11是柠檬酸盐(a)、稀土配位聚合物探针(b)、鸟苷酸(c)、Tb-GMP(d)、在Cit/Tb中加入鸟苷酸的紫外吸收图。
图12是pH对加入鸟苷酸后的Cit/Tb的荧光强度的影响。
图13是Cit/Tb十天内的荧光强度变化。
图14是本发明的铽配位聚合物探针在加入不同浓度的鸟苷酸后荧光光谱图;从下至上加入鸟苷酸的浓度分别为:0.15、0.5、1.5、2.5、3.5、5.0、6、8、10、12、15、18、20μM,溶液体系为100mM的HEPES(pH 7.4)的水溶液,横坐标为波长,纵坐标为荧光强度(插图是配位聚合物探针的荧光强度与鸟苷酸之间的线性关系)。
图15是本发明的稀土配位聚合物探针对GMP的选择性;横坐标为干扰物质,纵坐标为荧光强度。
图16是Tb-GMP、Tb-AMP、Tb-CMP、Tb-UMP、Tb-IMP的荧光光谱。
图17是火腿样品和奶粉样品分别在荧光模式下(b,d)和时间分辨模式下(a,c)的荧光光谱图。
图18是铽配位聚合物探针测定鸟苷酸原理图。
具体实施方式
检测鸟苷酸的稀土配位聚合物探针的制备方法,将柠檬酸盐溶液和稀土金属盐溶液混合,柠檬酸盐和稀土金属盐的摩尔比为(0.5-5):5,室温下搅拌反应2-6h后,离心收集白色沉淀,离心分离的转速为6000rpm-8000rpm,收集的白色沉淀先用去离子水洗涤,再烘干,烘干温度为60-80℃,即可得到检测鸟苷酸的稀土配位聚合物探针。
稀土金属盐溶液中的稀土金属离子为Tb3+、Eu3+中的至少一种。
柠檬酸盐为柠檬酸钠、柠檬酸钾中的至少一种。
如上述的检测鸟苷酸的稀土配位聚合物探针的制备方法制备的稀土配位聚合物探针。
柠檬酸盐(Cit)是存在于柑橘类水果中的柠檬酸的衍生物;对于所有需氧生物而言,柠檬酸盐是柠檬酸循环新陈代谢中必需的中间体。此外,它是水溶性三羧酸,其可以提供其羧酸基团的O原子与Tb3+配位。
稀土配位聚合物探针为纳米粒子,鸟苷酸(GMP)本身可以与稀土离子配位并转移其激发能量给稀土离子从而敏化Tb3+的发射的过程,即“天线效应”。然而,由于配合物表面配位的水分子的O-H振动会使其荧光猝灭。因此,利用单独的Tb3+来检测鸟苷酸,荧光十分微弱,检测的灵敏度很低。而利用Cit/Tb作为荧光探针来检测鸟苷酸,由于柠檬酸根的羧基与鸟苷酸中的磷酸基团和N端均会与稀土离子配位,水分子与稀土离子之间配位作用的配位消失,大大敏化了配体与稀土离子之间的能量转移,因此当加入鸟苷酸后,使得整个配位聚合物处在一个疏水的环境中,从而可以增强体系的荧光强度,故而会降低检测限和拥有更高的灵敏度。
因此,本发明提供了一个稀土配位聚合物探针,由于柠檬酸根在紫外区几乎没有吸收,故而柠檬酸根很难敏化Tb3+发光,因此,稀土配位聚合物探针荧光很弱。鸟苷酸的碱基和磷酸基团很容易与稀土Tb3+配位,与稀土配位聚合物探针形成配位聚合物稀土配位聚合物探针-鸟苷酸,在该配位聚合物中,由于稀土配位聚合物探针为鸟苷酸提供了有效的疏水环境,因此,加入鸟苷酸后,荧光强度大大增加。故可用荧光分光光度法对鸟苷酸进行检测。
由于柠檬酸根和鸟苷酸之间的能量不匹配,稀土配位聚合物探针在水溶液中几乎不发光。然而,在加入鸟苷酸后,由于去除了配位水分子和从鸟苷酸到Tb3+的荧光共振能量转换,我们观察到15倍的荧光增强。加入鸟苷酸后的响应原理图如图18所示。
实施例1:
1.铽配位聚合物荧光探针的制备
铽配位聚合物探针的制备步骤如下:将1mL(100mM)的硝酸铽水溶液逐滴加入到0.5mL(100mM)的柠檬酸三钠溶液中,室温条件下,搅拌3.5h,产生白色沉淀。待反应结束后,进行离心分离(8000rmp×10min),收集白色沉淀,所得沉淀用去离子水洗涤,离心分离,去离子水洗涤重复三次,最后,将所得产品于70℃的烘箱中烘干即可得到检测鸟苷酸的铽配位聚合物探针(Cit/Tb),其扫描电子显微镜图如图1a所示,由图1a可以看出,所制备的聚合物探针是一种纳米颗粒。
将得到的铽配位聚合物探针(Cit/Tb)分散在1mL HEPES缓冲液(100mM,pH7.4)中,形成铽配位聚合物探针悬浮液,用于后续检测使用。
HEPES缓冲液的制备:先在纯水中溶解HEPES制成pH 7.0的HEPES缓冲液(浓度为100mM),然后采用浓度为5M的氢氧化钠溶液调整pH值。
稀土配位聚合物探针具有良好的水分散性能,可在水相中进行检测。
2.水溶液中检测鸟苷酸的标准曲线的建立
配置鸟苷酸标准溶液(10mM),将不同体积的鸟苷酸标准溶液加入10μL铽配位聚合物探针悬浮液中,使悬浮液中鸟苷酸的浓度呈梯度变化(悬浮液中鸟苷酸的浓度分别为0μM,0.15μM,0.5μM,1.5μM,2.5μM,3.5μM,5μM,6μM,8μM,10μM,12μM,15μM,18μM,20μM),通过调节HEPES缓冲液的量将总体积固定为100μL,室温下反应15分钟后,在252nm激发波长下测量它们相应的荧光强度;以荧光强度为纵坐标y、悬浮液中鸟苷酸的浓度为横坐标x,建立标准曲线,拟定线性方程,如图2所示。
3.奶粉中检测鸟苷酸的标准曲线的建立
配置鸟苷酸标准溶液(10mM),将奶粉溶于水,得到奶粉水溶液,用超滤离心管去除奶粉中的蛋白质,向奶粉水溶液中加入不同体积的鸟苷酸标准溶液,得到含有不同浓度的鸟苷酸的奶粉水溶液(奶粉水溶液中鸟苷酸的浓度分别为9.58mg/kg,28.74mg/kg,47.90mg/kg,95.81mg/kg,191.62mg/kg,287.43mg/kg,479.05mg/kg,766.48mg/kg,958.09mg/kg),向10μL铽配位聚合物探针悬浮液中加入5μL具有不同浓度的鸟苷酸的奶粉水溶液和85μL的HEPES缓冲液,将总体积固定为100μL,超声20分钟后,在室温下检测溶液在252nm激发波长下的荧光强度;以相对荧光强度为纵坐标y、奶粉水溶液中鸟苷酸的浓度为横坐标x,建立标准曲线,拟定线性方程,如图3所示。
4.火腿中检测鸟苷酸的标准曲线的建立
配置鸟苷酸标准溶液(10mM),将4g破碎的火腿加入2mL去离子水中并超声处理1小时,离心除去杂质,得火腿水溶液;向火腿水溶液中加入不同体积的鸟苷酸标准溶液,得到含有不同浓度的鸟苷酸的火腿水溶液(火腿水溶液鸟苷酸的浓度分别为12.47mg/kg,49.87mg/kg,174.56mg/kg,249.35mg/kg,374.03mg/kg,498.70mg/kg,623.375mg/kg,748.05mg/kg,872.73mg/kg,997.40mg/kg);向10μL铽配位聚合物探针悬浮液中加入5μL具有不同浓度的鸟苷酸的火腿水溶液和85μL的HEPES缓冲液,将总体积固定为100μL,超声20分钟后,在室温下检测溶液在252nm激发波长下的荧光强度;以相对荧光强度为纵坐标y、火腿水溶液中鸟苷酸的浓度为横坐标x,建立标准曲线,拟定线性方程,如图4所示。
相对荧光强度指的是鸟苷酸存在时的荧光强度减去Cit/Tb本身的荧光强度。
5.铽配位聚合物探针的特性及其对鸟苷酸的响应
通过X射线能谱分析了铽配位聚合物探针(Cit/Tb)和加入鸟苷酸之后的探针的化学组成,如图5所示。C、O、Tb这些峰证明Tb3+和柠檬酸都参与了Cit/Tb的构建,表明成功合成了Cit/Tb,如图5a所示。加入鸟苷酸后,X射线能谱中P的新峰进一步证实鸟苷酸参与了与Cit/Tb的配位,如图5b所示。
X射线衍射(XRD)分析证实铽配位聚合物探针(Cit/Tb)是无定形的,如图6a所示。加入鸟苷酸后,除了由于Cit和鸟苷酸与Tb3+的配位而增加的探针颗粒尺寸并没有观察到明显的形态变化与晶型变化,如图1b和6b所示,表明鸟苷酸不影响铽配位聚合物探针的形貌及晶相。
通过FT-IR分析验证Cit和GMP与Tb3+之间的结合行为,如图7所示,对于纯Cit,1589cm-1和1419cm-1处的峰值为COO-不对称和对称伸缩振动。当与Tb3+结合时,这些峰分别转移到1580cm-1和1408cm-1,这意味着Cit通过羧基与Tb3+配位。纯GMP在978cm-1(P-O),1627cm-1(N1-C2)和1673cm-1(C=O)处具有IR峰。在向铽配位聚合物探针中加入GMP后,这三个峰分别移动到1000cm-1,1639cm-1和1679cm-1,这些变化表明GMP与Tb3+通过GMP中的P-O,N1-C2,C=O发生了配位。
6.铽配位聚合物探针的荧光行为
图8显示了铽配位聚合物探针的时间分辨发光行为。铽配位聚合物探针在水溶液中显示出非常弱的发射,这归因于由配位水分子中的OH振动引起的荧光猝灭。但是,加入鸟苷酸后,形成Cit/Tb-GMP,观察到大约15倍的发射增强,并且Cit/Tb-GMP的荧光强度与Cit与Tb的摩尔比有关。在探针内,摩尔比为5:2.5(Tb:Cit)产生最强的荧光增强,如图9所示。我们将这种荧光增强归因于从GMP与Cit/Tb配位进而发生的鸟苷酸到Cit/Tb的能量转换,从而使铽配位聚合物探针内部形成疏水环境,将由OH振动引起的无辐射跃迁降到最低。加入鸟苷酸后,发光寿命如图10所示,从1.28ms增加到1.60ms,进一步证明通过鸟苷酸取代了配位水分子和减少激发态Tb3+的无辐射衰变。Cit/Tb的长寿命(毫秒级)使其适用于复杂的实际样品分析。
为了探索荧光增强机制,我们还进行了紫外吸收。如图11所示,在254nm波长有鸟苷酸的特征吸收。当鸟苷酸加入到铽配位聚合物探针中并形成Cit/Tb-GMP时,最大吸收峰位置254nm蓝移到252nm,且紫外吸光度也明显增加。这些结果表明,外范围内,GMP与Cit/Tb的配位导致鸟苷酸到Tb3+激发态5D4之间的更有效的能量转移。此外,Cit/Tb对GMP的发光响应是pH依赖性的,其在pH 7.4下达到最大值,如图12所示。在其他pH值的条件下,Cit/Tb-GMP荧光强度显著降低可能是由于酸性介质中GMP的质子化以及碱性介质中氢氧化铽的形成,破环了Cit/Tb-GMP的结构。因此,在实验期间,选择HEPES缓冲液(100mM,pH 7.4)测定鸟苷酸。在两周内,在室温下没有观察到Cit/Tb荧光明显的变化,表明我们合成的Cit/Tb对于真实样品的分析是高度稳定的,如图13所示。
7.水溶液中鸟苷酸的检测性能
为了评估Cit/Tb对GMP的传感性能,我们研究了在探针溶液中加入不同GMP浓度时,对应于Tb3+ 5D4→7F5 545nm处的发光变化趋势,如图14所示。从图14中可以看出,随着GMP浓度的增加,Cit/Tb的荧光强度也逐渐增强。在0.15-20μM的浓度范围内,Tb-Cit 545nm处的荧光强度对鸟苷酸浓度具有良好线性响应。基于3:1的信噪比,检测限为100nM,如图2所示。与其他报道的鸟苷酸传感器相比,其检测限(DL)分别为0.16μM,0.27μM,0.5μM,5μM,1.3μM,8.01μM,当前合成Cit/Tb探针对GMP的检测更具优势。
8.Cit/Tb对GMP检测的选择性
为了评估本申请合成的时间分辨Cit/Tb对鸟苷酸的选择性,还研究了其它核苷酸(CMP,UMP,AMP,IMP)的影响。如图15所示,在相同条件下,这些其他核苷酸没有引发Cit/Tb荧光的显著增强,可能是它们的低亲和力以及与Tb3+激发态能量不匹配。图16证明了这一结论。此外,考虑到Cit/Tb在婴儿配方食品和火腿中的实际应用,我们还检查了包括抗坏血酸(AA,通常存在于火腿中)在内的其他成分和通常存在婴儿配方奶粉中的金属离子(K+,Cl-,Zn2+,Mn2+,Fe2+,Cu2+)对Cit/Tb荧光强度的影响。从图15中我们可以看出,这些物质不会干扰GMP的检测。这些结果表明,在目前的条件下,Cit/Tb对GMP的检测具有高度选择性,我们制备的基于Cit/Tb可用于婴儿配方奶粉和火腿中鸟苷酸的检测。
9.基于时间分辨荧光检测婴儿配方食品和火腿中的GMP
由于探针荧光寿命长,在时间分辨模式下,婴儿配方奶粉和火腿的背景荧光可以完全消除,如图17所示。根据此结果,进一步应用Cit/Tb检测婴儿配方奶粉和火腿中的鸟苷酸。如图3和图4所示,Cit/Tb在545nm处的荧光强度与婴儿配方奶粉中9.58-958.09mg/kg和火腿中9.58-958.09mg/kg范围内的鸟苷酸浓度显示出良好的线性相关性。相应地,如表1-2所示,测定婴儿配方奶粉和火腿中鸟苷酸时,可以实现优异的回收率。根据相关限量标准,目前制备的Cit/Tb足以评估婴儿配方奶粉和火腿中的鸟苷酸是否过量添加。
表1为实施例1制备的Cit/Tb对奶粉中鸟苷酸的检测结果
样品 | 加入的GMP浓度(mg/kg) | 检测到的鸟苷酸(mg/kg)<sup>a</sup> | 回收率(%) |
1 | 0 | 10.34 | — |
2 | 47.90 | 56.70±2.92 | 96.78 |
3 | 479.05 | 460.39±13.32 | 93.95 |
4 | 958.09 | 981.91±4.79 | 101.41 |
表2为实施例1制备的Cit/Tb对火腿中鸟苷酸的检测结果
样品 | 加入的GMP浓度(mg/kg) | 检测到的(mg/kg)<sup>a</sup> | 回收率(%) |
1 | 61.08 | 56.90±7.52 | 93.16 |
2 | 101.80 | 101.02±16.97 | 99.23 |
3 | 407.20 | 423.34±24.21 | 103.96 |
4 | 773.68 | 817.12±36.02 | 105.61 |
实施例2:
铕配位聚合物探针的制备步骤如下:将1mL(100mM)的硝酸铕水溶液逐滴加入到0.1mL(100mM)的柠檬酸三钾溶液中,室温条件下,搅拌2h,产生白色沉淀。待反应结束后,进行离心分离(6000rmp×10min),收集白色沉淀,所得沉淀用去离子水洗涤,离心分离,去离子水洗涤重复三次,最后,将所得产品于60℃的烘箱中烘干即可得到检测鸟苷酸的铕配位聚合物探针。
实施例3:
铕配位聚合物探针的制备步骤如下:将1mL(100mM)的硝酸铕水溶液逐滴加入到1mL(100mM)的柠檬酸三钾溶液中,室温条件下,搅拌6h,产生白色沉淀。待反应结束后,进行离心分离(8000rmp×10min),收集白色沉淀,所得沉淀用去离子水洗涤,离心分离,去离子水洗涤重复三次,最后,将所得产品于80℃的烘箱中烘干即可得到检测鸟苷酸的铕配位聚合物探针。
以上所述的仅是本发明的优选实施方式,应当指出,对于本领域的技术人员来说,在不脱离本发明整体构思前提下,还可以作出若干改变和改进,这些也应该视为本发明的保护范围。
Claims (7)
1.检测鸟苷酸的稀土配位聚合物探针的制备方法,其特征在于:将柠檬酸盐溶液和稀土金属盐溶液混合,室温下搅拌,充分反应后离心收集白色沉淀,烘干即可得到检测鸟苷酸的稀土配位聚合物探针;所述稀土金属盐溶液中的稀土金属离子为Tb3+、Eu3+中的至少一种,所述柠檬酸盐和稀土金属盐的摩尔比为(0.5-5):5。
2.根据权利要求1所述的检测鸟苷酸的稀土配位聚合物探针的制备方法,其特征在于:室温下搅拌反应时间为2-6 h,离心分离的转速为6000 rpm-8000 rpm,收集的白色沉淀先用去离子水洗涤,再烘干,烘干温度为60-80℃。
3.根据权利要求1所述的检测鸟苷酸的稀土配位聚合物探针的制备方法,其特征在于:所述柠檬酸盐为柠檬酸钠、柠檬酸钾中的至少一种。
4.如权利要求1-3任一所述的检测鸟苷酸的稀土配位聚合物探针的制备方法制备的稀土配位聚合物探针。
5.利用权利要求4所述的稀土配位聚合物探针检测鸟苷酸的方法,其特征在于:具体步骤如下:将稀土配位聚合物探针溶于水相缓冲溶液中,配成稀土配位聚合物探针溶液,将稀土配位聚合物探针溶液加入待测液中,反应一定时间后,检测探针的荧光光谱,将测得的荧光强度代入标准曲线中即可得到待测液中鸟苷酸的浓度。
6.根据权利要求5所述的检测鸟苷酸的方法,其特征在于:所述标准曲线的建立方法如下:
A:水溶液中检测鸟苷酸的标准曲线的建立:配置鸟苷酸标准溶液,将不同体积的鸟苷酸标准溶液加入10 μL稀土配位聚合物探针悬浮液中,使悬浮液中鸟苷酸的浓度呈梯度变化,通过调节HEPES缓冲液的量将总体积固定为100 μL,室温下反应15分钟后,在252 nm激发波长下测量它们相应的荧光强度;以荧光强度为纵坐标y、悬浮液中鸟苷酸的浓度为横坐标x,建立标准曲线,拟定线性方程;
B:奶粉中检测鸟苷酸的标准曲线的建立:配置鸟苷酸标准溶液,将奶粉溶于水,得到奶粉水溶液,用超滤离心管去除奶粉中的蛋白质,向奶粉水溶液中加入不同体积的鸟苷酸标准溶液,得到含有不同浓度的鸟苷酸的奶粉水溶液,向10 μL稀土配位聚合物探针悬浮液中加入5 μL具有不同浓度的鸟苷酸的奶粉水溶液和85 μL的HEPES缓冲液,将总体积固定为100 μL,超声20分钟后,在室温下检测溶液在252 nm激发波长下的荧光强度;以荧光强度为纵坐标y、奶粉水溶液中鸟苷酸的浓度为横坐标x,建立标准曲线,拟定线性方程;
C:火腿中检测鸟苷酸的标准曲线的建立:配置鸟苷酸标准溶液,将4g破碎的火腿加入2mL去离子水中并超声处理1小时,离心除去杂质,得火腿水溶液;向火腿水溶液中加入不同体积的鸟苷酸标准溶液,得到含有不同浓度的鸟苷酸的火腿水溶液;向10 μL稀土配位聚合物探针悬浮液中加入5 μL具有不同浓度的鸟苷酸的火腿水溶液和85 μL的HEPES缓冲液,将总体积固定为100 μL,超声20分钟后,在室温下检测溶液在252 nm激发波长下的荧光强度;以荧光强度为纵坐标y、火腿水溶液中鸟苷酸的浓度为横坐标x,建立标准曲线,拟定线性方程。
7.如权利要求4所述的稀土配位聚合物探针在检测奶粉或火腿中鸟苷酸含量中的应用。
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