CN111991342B - 一种干细胞上清液冻干片及其冻干工艺 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种干细胞上清液冻干片及其冻干工艺，以细胞上清液为主要原料，与具有保湿功能的甘露糖醇、出芽短梗酶多糖、葡聚糖等混合后，通过特殊的冻干工艺所生产出的冻干片成独立片剂，包装成本低，包装美观，使用方便；本发明的冻干工艺用于冻干高浓度干细胞培养上清原液依然成型很好；使用后效果明显，肤感佳；冻干工艺程序需40小时，总时长较其他冻干工艺缩短了10小时左右。

Description

一种干细胞上清液冻干片及其冻干工艺
技术领域
本发明属于护肤品技术领域，具体涉及一种干细胞上清液冻干片及其冻干工艺。
背景技术
在现代化妆品研发及生产过程中，随着真空冷冻干燥技术的发展、表皮细胞生长因子或干细胞培养上清中多种细胞因子在皮肤保养中的作用被发现，在化妆品中出现了一种新产品——冻干粉。冻干粉相比于传统的护肤品具有活性物含量高、效果佳、不含防腐剂、更安全的优点。随着干细胞产业的发展，干细胞培养过程中分泌的多种细胞生长因子逐渐替代了人工合成的表皮细胞生长因子，利用干细胞培养上清制备冻干粉已经成为化妆品行业的发展趋势。目前生产冻干粉的技术来源于医药行业，将冻干粉制备在西林瓶中，但西林瓶中的冻干粉使用非常不便，作为护肤品的冻干粉需溶解后使用，溶解后溶液呈粘稠状，又由于西林瓶瓶口较小只能采用倾倒的方式将溶液倒出，因此，溶液粘稠挂壁严重很难将溶液完全从西林瓶中取出，这在使用中也造成了很大的浪费。若将冻干粉放置于广口容器中进行溶解，将便于涂抹，但在冻干过程中固化物成型非常困难，冻干后成崩解状，依然成粉末状粘附在容器周围，并且有严重的裂痕，成型差甚至不能成型，十分影响后期包装，也不美观。
鉴于此，申请此专利。
发明内容
为了解决现有技术存在的问题，本发明提供了一种干细胞上清液冻干片及其冻干工艺，在保证干细胞上清液中细胞因子活性的基础上，制备出的冻干片表面光滑，无崩解，内部蓬松，易溶解，溶解后的液体的生物活性或保湿效果较好。
本发明的目的是提供一种干细胞上清液冻干片。
本发明的再一目的是提供上述干细胞上清液冻干片的冻干工艺。
根据本发明的具体实施方式的干细胞上清液冻干片，所述干细胞上清液冻干片由以下原料制备，所述原料按重量百分比包括：
干细胞上清液50％-92％、甘露糖醇4％-6％、出芽短梗酶多糖3％-4％、葡聚糖0.3％-0.4％。
根据本发明的具体实施方式的干细胞上清液冻干片，其中，所述干细胞上清液冻干片由以下原料制备，所述原料按重量百分比包括：
干细胞上清液91.7％、甘露糖醇5％、出芽短梗酶多糖3％和葡聚糖0.3％。
根据本发明的具体实施方式的干细胞上清液冻干片，其中，所述原料还包括水；优选的，所述水的添加量为所述原料总重量的0.5％-41％。
根据本发明的具体实施方式的干细胞上清液冻干片，其中，所述干细胞上清液冻干片由以下原料制备，所述原料按重量百分比包括：干细胞上清液68.2％、甘露糖醇5.5％、出芽短梗酶多糖3％、葡聚糖0.3％和水23％。
根据本发明的具体实施方式的干细胞上清液冻干片的冻干工艺，所述冻干工艺包括以下步骤：
(1)间充质干细胞培养上清的收集：收集间充质干细胞培养上清液；
(2)原液配制：以步骤(1)收集的所述干细胞培养上清液作为溶剂溶解甘露糖醇、出芽短梗酶多糖和葡聚糖，然后进行剪切，得到具有保湿功能的原液；
(3)分装：将步骤(2)得到的所述原液分装至冻干容器中，每0.2-0.4ml为一份；
(4)速冻：将步骤(3)分装后原液连同冻干容器一起放入-100℃以下的低温环境中进行速冻成固体；
(5)冷冻干燥：将步骤(4)的固体连同冻干容器进行升温，从-100℃升至-90℃,然后保温2h；再依次从-90℃升至-80℃,保温2h；从-80℃升至-70℃,保温2h；从-70℃升至-60℃,保温2h；然后开始抽真空；再依次从-60℃降至-80℃,保温10h；从-80℃升至-60℃,保温10h；从-60℃升至-40℃,保温3h；从-40℃升至-20℃,保温3h；从-20℃升至-50℃,保温3h；从-5℃回温至25℃,保温3h，完成冷冻干燥过程，形成冻干片；
(6)收获冻干片：将步骤(5)收获的所述冻干片密封保存，包装，即得所述干细胞上清液冻干片。
本发明的冻干过程中采用快速冷冻，2次升温，2次降温，缓慢升降温，常温复温的程序，有利于冻干片收缩成型，防止回潮。
根据本发明的具体实施方式的干细胞上清液冻干片的冻干工艺，其中，步骤(1)中，收集P2-P5代之间人间充质干细胞培养上清液。
根据本发明的具体实施方式的干细胞上清液冻干片的冻干工艺，其中，步骤(1)中，所述剪切采用高速剪切机剪切至溶质均匀无颗粒。
根据本发明的具体实施方式的干细胞上清液冻干片的冻干工艺，其中，步骤(1)中，所述间充质干细胞为脐带来源的间充质干细胞或胎盘来源的间充质干细胞。
根据本发明的具体实施方式的干细胞上清液冻干片的冻干工艺，其中，步骤(2)中，以所述干细胞培养上清液作为溶剂溶解甘露糖醇、出芽短梗酶多糖和葡聚糖，加入水，混合均匀，然后进行剪切，得到具有保湿功能的原液。
根据本发明的具体实施方式的干细胞上清液冻干片的冻干工艺，其中，步骤(4)中，所述速冻的时间为2小时以上，所述冻干容器为金属制成的圆底容器，内表面光滑。
根据本发明的具体实施方式的干细胞上清液冻干片的冻干工艺，其中，步骤(5)中，所述抽真空后的真空度为5-15Pa。
根据本发明的具体实施方式的干细胞上清液冻干片的冻干工艺，其中，步骤(6)中，所述干细胞上清液冻干片为圆形片状，厚度为1-2mm。
本发明收获的冻干片成圆形药片状，独立颗粒，表面光滑无崩解，粉红色，内部蓬松。
本发明的原液配料里添加的成膜剂出芽短梗酶多糖水溶性好，使用时在皮肤表面形成薄膜，有效阻挡空气中的氧气、氮气，肤感佳。
本发明的冻干片主要用于面部保养，原液配制所采用的赋形剂和保护剂都是化妆品原料，以糖类保湿剂为主，包括保湿剂甘露糖醇、成膜剂出芽短梗酶多糖、保湿剂和皮肤调理剂葡聚糖。
本发明的冻干片后期使用时需用水或爽肤水或乳液或精华液溶解。
本发明采用了干细胞细胞因子和护肤品常用保湿成分，通过冻干工艺有效解决了细胞因子常温难以保存、有效细胞因子数量不足和质量不佳的缺点。冻干后成片剂状态，形态美观，容易包装，相对于冻干粉有效避免后期使用中的不便和造成的浪费。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
(1)本发明以保湿功能为主的干细胞上清液为主要原料，通过特殊的冻干工艺所生产出的冻干片成独立片剂，目前市面上冻干工艺生产出的产品均为粉末状，成型差。
(2)相较于目前市面的西林瓶冻干粉产品，本发明的冻干片剂后期包装成本低，包装美观，使用方便。
(3)本发明的冻干工艺可有效保持干细胞上清液中细胞因子活性，冻干后细胞因子活性保持率在92％以上。
(4)本发明的冻干工艺用于冻干高浓度干细胞培养上清原液依然成型很好，现有的冻存工艺随着干细胞上清含量的增加则易崩解、膨出现象会随之加重。
(5)本产品添加的原材料符合国产非特殊用途化妆品生产要求，添加成分为保湿剂甘露糖醇、成膜剂出芽短梗酶多糖、保湿剂和皮肤调理剂葡聚糖，保湿剂结合细胞因子的作用，使用后效果明显，肤感佳。
(6)本产品保湿效果明显，持续使用1周皮肤含水量增加26.96％，持续使用4周皮肤含水量增加36.17％，持续使用8周皮肤含水量增加40.65％
(7)本发明的冻干工艺程序需40小时，虽然过程经过多次升降温，但总时长较其他冻干工艺缩短了10小时左右。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例。
图1显示根据本发明的实施例2得到的干细胞上清液冻干片示意图，上图为剥离前，下图为剥离后；
图2显示根据本发明的实施例4得到的干细胞上清液冻干片示意图，上图为剥离前，下图为剥离后；
图3显示根据本发明的对比例1得到的干细胞上清液冻干片示意图，上图为剥离前，下图为剥离后；
图4显示根据本发明的对比例2得到的干细胞上清液冻干片示意图，上图为剥离前，下图为剥离后。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明的技术方案进行详细的描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所得到的所有其它实施方式，都属于本发明所保护的范围。
在一些较为具体的实施例中，所述干细胞上清液冻干片由以下原料制备，所述原料按重量百分比包括：
干细胞上清液50％-92％、甘露糖醇4％-6％、出芽短梗酶多糖3％-4％、葡聚糖0.3％-0.4％。
干细胞上清液冻干片的冻干工艺，包括以下步骤：
(1)间充质干细胞培养上清的收集：收集间充质干细胞培养上清液；
(2)原液配制：以步骤(1)收集的所述干细胞培养上清液作为溶剂溶解甘露糖醇、出芽短梗酶多糖和葡聚糖，然后进行剪切，得到具有保湿功能的原液；
(3)分装：将步骤(2)得到的所述原液分装至冻干容器中，每0.2-0.4ml为一份；
(4)速冻：将步骤(3)分装后原液连同冻干容器一起放入-100℃以下的低温环境中进行速冻成固体；
(5)冷冻干燥：将步骤(4)的固体连同冻干容器进行升温，从-100℃升至-90℃,然后保温2h；再依次从-90℃升至-80℃,保温2h；从-80℃升至-70℃,保温2h；从-70℃升至-60℃,保温2h；然后开始抽真空；再依次从-60℃降至-80℃,保温10h；从-80℃升至-60℃,保温10h；从-60℃升至-40℃,保温3h；从-40℃升至-20℃,保温3h；从-20℃升至-50℃,保温3h；从-5℃回温至25℃,保温3h，完成冷冻干燥过程，形成冻干片；
(6)收获冻干片：将步骤(5)收获的所述冻干片密封保存，包装，即得所述干细胞上清液冻干片。
实施例1
本实施例提供了一种干细胞上清液冻干片，每片含有0.4ml干细胞上清液的冻干片，由以下原料制备：
甘露糖醇500g、出芽短梗酶多糖300g、葡聚糖30g；
制备方法包括以下步骤：
收集P3代人间充质干细胞上清液，2-8℃条件下缓慢融化，完全溶化后取10ml样本进行无菌检测，检测合格准备配制冻干原液10L，首先称量甘露糖醇500g、出芽短梗酶多糖300g、葡聚糖30g，加入8L干细胞上清液中，适当混匀后用干细胞上清液补足10L；高速剪切机剪切，充分搅匀后开始分装，分装可采用自动灌装机，每400ul一剂，分装结束后放入-100℃度以下速冻，同时冻干机开始降温，3小时后原液已冻实，开始冻干程序：-100℃升至-90℃,2h；-90℃升至-80℃,2h；-80℃升至-70℃,2h；-70℃升至-60℃,2h；开始抽真空；-60℃降至-80℃,10h；-80℃升至-60℃,10h；-60℃升至-40℃,3h；-40℃升至-20℃,3h；-20℃升至-50℃,3h；-5℃回温至25℃,3h；冻干结束后收集冻干片，可先用铝袋集中包装储存，后期根据需求在采用铝板进行独立包装。
实施例2
如图1所示，本实施例提供了一种干细胞上清液冻干片，每片含有0.3ml干细胞上清液的冻干片，由以下原料制备：
甘露糖醇550g、出芽短梗酶多糖330g、葡聚糖30g和2.5L水，
制备方法包括以下步骤：去收集好的间充质干细胞上清液，2-8℃条件下缓慢融化，完全溶化后取10ml样本进行无菌检测，检测合格准备配制冻干原液10L，首先称量甘露糖醇550g、出芽短梗酶多糖330g、葡聚糖30g，2.5L水，加入5.5L干细胞上清液中，适当混匀后用干细胞上清液补足10L；高速剪切机剪切，充分搅匀后开始分装，分装可采用自动灌装机，每400ul一剂，分装结束后放入-100℃度以下速冻，同时冻干机开始降温，3小时后原液已冻实，开始冻干程序：-100℃升至-90℃,2h；-90℃升至-80℃,2h；-80℃升至-70℃,2h；-70℃升至-60℃,2h；开始抽真空；-60℃降至-80℃,10h；-80℃升至-60℃,10h；-60℃升至-40℃,3h；-40℃升至-20℃,3h；-20℃升至-50℃,3h；-5℃回温至25℃,3h；冻干结束后收集冻干片，采用铝板进行独立包装。
实施例3
本实施例提供了一种干细胞上清液冻干片，由以下原料制备，所述原料按重量百分比包括：
干细胞上清液91.7％、甘露糖醇5％、出芽短梗酶多糖3％和葡聚糖0.3％；干细胞为胎盘来源的间充质干细胞；
干细胞上清液冻干片的冻干工艺，包括以下步骤：
(1)间充质干细胞培养上清的收集：收集P2代人间充质干细胞培养上清液；
(2)原液配制：以步骤(1)收集的所述干细胞培养上清液作为溶剂溶解甘露糖醇、出芽短梗酶多糖和葡聚糖，然后采用高速剪切机进行剪切至溶质均匀无颗粒，得到具有保湿功能的原液；
(3)分装：将步骤(2)得到的所述原液分装至冻干容器中，每0.2ml为一份；
(4)速冻：将步骤(3)分装后原液连同冻干容器一起放入-100℃以下的低温环境中进行速冻成固体；
(5)冷冻干燥：将步骤(4)的固体连同冻干容器进行升温，从-100℃升至-90℃,然后保温2h；再依次从-90℃升至-80℃,保温2h；从-80℃升至-70℃,保温2h；从-70℃升至-60℃,保温2h；然后开始抽真空；再依次从-60℃降至-80℃,保温10h；从-80℃升至-60℃,保温10h；从-60℃升至-40℃,保温3h；从-40℃升至-20℃,保温3h；从-20℃升至-50℃,保温3h；从-5℃回温至25℃,保温3h，完成冷冻干燥过程，形成冻干片；
(6)收获冻干片：将步骤(5)收获的所述冻干片密封保存，包装，即得所述干细胞上清液冻干片。
实施例4
如图2所示，本实施例提供了一种干细胞上清液冻干片，由以下原料制备，所述原料按重量百分比包括：
干细胞上清液92％、甘露糖醇4％、出芽短梗酶多糖3％、葡聚糖0.3％，其余为水；干细胞为脐带来源的间充质干细胞；
干细胞上清液冻干片的冻干工艺，包括以下步骤：
(1)间充质干细胞培养上清的收集：收集P5代人间充质干细胞培养上清液；
(2)原液配制：以步骤(1)收集的所述干细胞培养上清液作为溶剂溶解甘露糖醇、出芽短梗酶多糖和葡聚糖，加入水，混合均匀，然后采用高速剪切机进行剪切至溶质均匀无颗粒，得到具有保湿功能的原液；
(3)分装：将步骤(2)得到的所述原液分装至冻干容器中，每0.4ml为一份；
(4)速冻：将步骤(3)分装后原液连同冻干容器一起放入-110℃的低温环境中进行速冻2小时以上成固体；冻干容器为金属制成的圆底容器，内表面光滑；
(5)冷冻干燥：将步骤(4)的固体连同冻干容器进行升温，从-100℃升至-90℃,然后保温2h；再依次从-90℃升至-80℃,保温2h；从-80℃升至-70℃,保温2h；从-70℃升至-60℃,保温2h；然后开始抽真空，真空度为5-15Pa；再依次从-60℃降至-80℃,保温10h；从-80℃升至-60℃,保温10h；从-60℃升至-40℃,保温3h；从-40℃升至-20℃,保温3h；从-20℃升至-50℃,保温3h；从-5℃回温至25℃,保温3h，完成冷冻干燥过程，形成冻干片；
(6)收获冻干片：将步骤(5)收获的所述冻干片密封保存，包装，即得圆形片状，厚度为1-2mm的干细胞上清液冻干片。
实施例5
本实施例与实施例4的唯一区别在于原料组成：本实施例提供了一种干细胞上清液冻干片，由以下原料制备，干细胞上清液50％、甘露糖醇6％、出芽短梗酶多糖3％、葡聚糖0.4％，其余为水。
实施例6
本实施例与实施例4的唯一区别在于原料组成：本实施例提供了一种干细胞上清液冻干片，由以下原料制备，干细胞上清液68.2％、甘露糖醇5.5％、出芽短梗酶多糖3％、葡聚糖0.3％和水23％。
对比例1
本对比例与实施例4的唯一区别在于：步骤(5)中，将步骤(4)的固体连同冻干容器保持35-40℃平衡20-50min，-60至-80℃预速冻8-14h，-30至-60℃、真空10-20Pa冷冻干燥20-48h，完成冷冻干燥过程，形成冻干片。与实施例4得到的冻干片相比较，本对比例得到的干细胞上清液冻干片成型不好，易崩解、有膨出现象如图3所示。
对比例2
本对比例与实施例2的唯一区别在于：速冻后，35-40℃平衡20-50min，-60至-80℃预速冻8-14h，-30至-60℃、真空10-20Pa冷冻干燥20-48h，完成冷冻干燥过程，形成冻干片。与实施例2得到的冻干片相比较，本对比例得到的干细胞上清液冻干片成型不好，易崩解、有膨出现象如图4所示。
说明，本发明的冻干工艺用于冻干高浓度干细胞培养上清原液依然成型很好；现有的冻存工艺随着干细胞上清含量的增加则易崩解、膨出现象会随之加重。
检测实施例4得到的干细胞上清液冻干片进行生物活性或保湿性能测定：
经检测收集的间充质干细胞上清液原液的生物活性为35000IU/ml,冻干后每片冻干片的生物活性为10000IU；
随机选择200名志愿者，采用本发明实施例4得到的干细胞上清液冻干片，用水溶解后用于面部，每天晚上一次，使用8周，面部使用冻干片前后肌肤水分含量对比数据如下表1：
表1肌肤水分含量对比结果
时间点 水分含量/％
测试前 45.26±0.96
使用1周 57.46±0.95
使用4周 61.63±0.83
使用8周 63.66±0.85
从表1中可以看出，使用本发明的干细胞上清液冻干片后的8周，肌肤的水分含量增加了40.65％，说明本发明的干细胞上清液冻干片的保湿效果较好。
从上述试验可以看出，本发明的干细胞上清液冻干片的生物活性或保湿效果均较好。
以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应以所述权利要求的保护范围为准。

Claims (2)

1.一种干细胞上清液冻干片，其特征在于，所述干细胞上清液冻干片由以下原料制备，所述原料按重量百分比由以下组成：
干细胞上清液50％-92％、甘露糖醇4％-6％、出芽短梗酶多糖3％-4％、葡聚糖0.3％-0.4％、水0.5％-41％；
所述的干细胞上清液冻干片的冻干工艺包括以下步骤：
(1)间充质干细胞培养上清的收集：收集间充质干细胞培养上清液；其中，收集P2-P5代之间人间充质干细胞培养上清液；所述间充质干细胞为脐带来源的间充质干细胞或胎盘来源的间充质干细胞；
(2)原液配制：以步骤(1)收集的所述干细胞培养上清液作为溶剂溶解甘露糖醇、出芽短梗酶多糖和葡聚糖，然后进行剪切，得到具有保湿功能的原液；其中，以所述干细胞培养上清液作为溶剂溶解甘露糖醇、出芽短梗酶多糖和葡聚糖，加入水，混合均匀，然后采用高速剪切机剪切至溶质均匀无颗粒，得到具有保湿功能的原液；
(3)分装：将步骤(2)得到的所述原液分装至冻干容器中，每0.2-0.4ml为一份；
(4)速冻：将步骤(3)分装后原液连同冻干容器一起放入-100℃以下的低温环境中进行速冻；其中，所述速冻的时间为2小时以上，所述冻干容器为金属制成的圆底容器，内表面光滑；
(5)冷冻干燥：将步骤(4)的固体连同冻干容器进行升温，从-100℃升至-90℃,然后保温2h；再依次从-90℃升至-80℃,保温2h；从-80℃升至-70℃,保温2h；从-70℃升至-60℃,保温2h；然后开始抽真空；再依次从-60℃降至-80℃,保温10h；从-80℃升至-60℃,保温10h；从-60℃升至-40℃,保温3h；从-40℃升至-20℃,保温3h；从-20℃升至-5℃,保温3h；从-5℃回温至25℃,保温3h，完成冷冻干燥过程，形成冻干片；
(6)收获冻干片：将步骤(5)收获的所述冻干片密封保存，包装，即得所述干细胞上清液冻干片；其中，所述干细胞上清液冻干片为圆形片状，厚度为1-2mm。
2.根据权利要求1所述的干细胞上清液冻干片，其特征在于，所述原料按重量百分比由以下组成：干细胞上清液68.2％、甘露糖醇5.5％、出芽短梗酶多糖3％、葡聚糖0.3％和水23％。
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