CN111989000A - 具有抗炎效果的黑米发芽液及其制备方法 - Google Patents
具有抗炎效果的黑米发芽液及其制备方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及通过对使黑米发芽时使用的水进行低温处理及常温处理来具有优秀的抗炎效果的黑米发芽液及其制备方法,其特征在于,通过如下步骤获取,即,在开放的容器中,在1℃至5℃的温度范围内对用于使黑米发芽的水进行1天至10天的低温处理,之后,在开放的容器中,在10℃至30℃的温度范围内进行30天至210天的常温处理。
Description
技术领域
本发明涉及具有抗炎效果的黑米发芽液的制备方法及由此获取的黑米发芽液,尤其,涉及通过对使黑米发芽时使用的水进行低温处理及常温处理来具有优秀的抗炎效果的黑米发芽液及其制备方法。
背景技术
近来,有报告指出,天然植物也具有能够预防或治疗疾病的物质,随着形成拥有健康人生的文化,从地球上的多种资源探索具有多种生理机能的物质方面的研究非常活跃,其中,尤其对包含于植物资源中的化合物有很高的关注。
近来,随着老龄化和饮食习惯的变化,急性炎症疾病和风湿性关节炎、带状疱疹、鼻炎等的慢性炎症疾病呈增加趋势(Hyun EA.Anti-inflammatory effect of Salviaofficinalis L.extract.Cheju National University.Korea 2003.)。在结核菌、原生动物、霉菌以及抵抗宿主的防御并长期留在组织的其他寄生虫等诱发急性炎症的物质去除失败的情况下,将发生慢性炎症。还称为手指甲、脚趾甲癣的灰指甲也属于炎症类爪甲疾病。
炎症被定义为分布有血管的生物组织中因有害物质引起的基于先天性(innate)免疫系统的复合免疫反应的一种,通常会伴有发烧和痛症。即,属于生物组织损伤时体内引起的防御性反应的统称,对外伤或烧伤、细菌侵入等引起身体反应来引起部分充血、浮肿、发热、痛症。炎症反应与受损组织的修复过程有关,包括去除造成组织损伤的微生物、毒素等的原因物质的过程和去除作为损伤后果的坏死细胞、组织等的过程。
炎症反应会因(1)补体系统(complement system)的活性化、(2)分泌炎性细胞因子、(3)纤维蛋白溶解、(4)白细胞的血管外流出及吞噬作用、(5)凝固反应、(6)其他炎症诱发物质等造成的免疫细胞及免疫体系的作用而被直接引起。引起这种免疫反应的原因包括会以任意形态造成组织损伤的因素,可引起炎症的外部因素的例包括:(1)物理因素,包括烧伤、冻伤、身体伤口/外伤、异物、电离辐射等;(2)生物学因素,包括病原体、过敏反应、压力等;以及(3)化学因素,包括毒素、乙醇等。
随着有报告指出慢性炎症与癌症或其他疾病之间的相关关系,正在努力通过利用膳食干预(dietary intervention)减少炎症反应来降低疾病的危险(Aggarwal BB etal.Inflammation and can cer:How hot is the link 72:1605-1621(2006))。
炎症反应是针对外部的物理、化学刺激或细菌感染的生物组织的防御反应之一,机制为对受损组织进行修复或再生(Zamora R,et al.Inducible nitric oxide synthaseand inflammatory diseases.Mol.Med.6:347-373(2000))。若在体内产生炎症反应,则巨噬细胞等的炎症细胞将分泌一氧化氮(NO)、前列腺素E2(PGE2)、肿瘤坏死因子(tumornecrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)等炎症介质物质(Guha M,MackmanN.LPS induction of gene expression in human monocytes.Cell Signal.13:85-94(2001))。正常情况下,生物体会通过炎症反应来中和或去除发病因素,通过使受损组织再生来恢复正常的结构和功能,如果不是这样,就会发展成慢性炎症等的疾病状态。炎症反应的产生会因传染源(infectious agents)、局部缺血(ischemia)、抗原-抗体反应、发热或其他身体伤口等的很多刺激而引起,会出现红斑(erythema)、浮肿(edema)、压痛(tenderness)、痛症等的临床症状。炎症反应会通过将各自不同的机制作为介导的鲜明的3个阶段来产生。包括:第一,以局部血管扩张(vasodilatation)和毛细血管透过性增加作为特征的急性瞬变期(acute transient phase);第二,以白细胞(leukocytes)和吞噬细胞(phagocytic cells)的扩散作为特征的延迟、亚急性期(delayed,subacute phase);第三,产生组织变性(tissue degeneration)和纤维化(fibrosis)的慢性增殖期(chronicproliferative phase)。此外,还有很多机制会在炎症反应期间出现。
几乎可在所有临床疾病中观察到炎症反应,与炎症反应相关的酶还会在致癌过程(carcinogenesis)中起到重要作用。因此,这些炎症疾病虽然有可通过投入抗生剂来进行根源性治疗的细菌性疾病,但大多数通过基于自我免疫反应的组织损伤来导致发病,属于没有特殊治疗方法的顽疾。
大多数非甾体抗炎药(non-steroidal anti-inflammatory drugs,NSAIDs)的抗炎效果以抑制环氧化酶(COX)活性作为媒介(Vane et al.,Annual Review ofPharmacology and Toxicology,38:97-120,1998)。
COX-1为以一定水平存在于胃或肾脏等组织的酶,参与维持正常的稳态,相反,COX-2会在炎症或其他免疫反应中因促细胞分裂因子(mitogen)或活素(cytokines)类而在细胞内临时、快速表达。在急性或风湿性关节炎等的慢性炎症疾病的治疗中使用的非甾体抗炎药不仅抑制COX-2酶,还抑制COX-1酶,因而会引起胃肠道损伤等副作用(Masferrer etal.,Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States ofAmerica,91:3228-3232,1994;Seibert et al.,Proceedings of the National Academyof Sciences of the United States of America,91:12013-12017,1994)。
尤其,因巨噬细胞中的活素、肿瘤坏死因子(TNF-α)、脂多糖类(lipopolysaccharide,LPS)等的刺激而导致作为炎症反应的转录因子的核因子-kB(nuclear factor-kB,NF-kB)活性化,最终使诱导型一氧化氮合成酶(inducible nitricoxide synthase,iNOS)、环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)表达来生成过量的一氧化氮(NO)和前列腺素E2(PGE2),从而引起炎症(Nishida T et al.Geranylgeranylacetoneinduces cyclooxygenase-2expression in cultured rat gastric epithelial cellsthrough NF-kappa B.Digestive Diseases and Sciences.52:1890-1896(2007))。
目前为止开发的合成抗炎剂大致分为类甾体(氢化可的松、泼尼松龙、β-美松)和非甾体(阿司匹林、吲哚美辛、布洛芬),这些大多具有胃肠道疾病、肾脏疾病以及心脏疾病等的副作用(Dagne JM,et al.cardiovascular side-effects:from light toshadow.Currpharm Des.12:917-975(2006)and Makins R,BallingerA.Gastrointestinal side effects of drugs.Expert Opin Drug Saf.2:421-429(2003)),因而实际需要开发比当前更安全、有效的天然抗炎症治疗剂。
发明内容
技术问题
本发明的目的在于提供通过对使黑米发芽时使用的水进行低温处理及常温处理来具有优秀的抗炎效果的黑米发芽液及其制备方法。
技术方案
本发明的特征在于,本发明的黑米发芽液通过如下的步骤获取,即,在开放的容器中,在1℃至5℃的温度范围内对用于使黑米发芽的水进行1天至10天的低温处理,之后,在开放的容器中,在10℃至30℃的温度范围内进行30天至210天的常温处理。
并且,本发明的黑米发芽液的制备方法的特征在于,包括:(1)黑米发芽步骤,通过将黑米浸泡在水中来进行发芽;(2)发芽液分离步骤,使发芽的黑米和黑米发芽过程中使用的发芽液分离;(3)低温处理步骤,在开放的容器中,在1℃至5℃的温度范围内对发芽液进行1天至10天的低温处理;以及(4)常温处理步骤,在开放的容器中,在10℃至30℃的温度范围内对经过低温处理的发芽液进行30天至210天的常温处理。
发明的效果
本发明具有如下的效果,即,可提供通过对使黑米发芽时使用的水进行低温处理及常温处理来具有优秀的抗炎效果的黑米发芽液及其制备方法。
附图说明
图1示出对进行低温处理及常温处理之前的黑米发芽液中存在的菌进行分析的实验报告的复印件。
图2及图3示出对进行低温处理及常温处理之后获取的黑米发芽液中存在的菌进行分析的实验报告的复印件。
图4至图8示出对本发明实施例的抗真菌活性实验结果进行拍摄的照片。
图9及图10示出对本发明实施例的抗病毒活性实验结果进行拍摄的照片。
具体实施方式
作为本发明的最佳实施方式,本发明提供一种具有抗炎效果的黑米发芽液,其特征在于,通过如下的步骤获取,即,在开放的容器中,在1℃至5℃的温度范围内对用于使黑米发芽的水进行1天至10天的低温处理,之后,在开放的容器中,在10℃至30℃的温度范围内进行30天至210天的常温处理。
并且,作为本发明的最佳实施方式,本发明提供一种具有抗炎效果的黑米发芽液的制备方法,其特征在于,包括:(1)黑米发芽步骤,通过将黑米浸泡在水中来进行发芽;(2)发芽液分离步骤,使发芽的黑米和黑米发芽过程中使用的发芽液分离;(3)低温处理步骤,在开放的容器中,在1℃至5℃的温度范围内对发芽液进行1天至10天的低温处理;以及(4)常温处理步骤,在开放的容器中,在10℃至30℃的温度范围内对经过低温处理的发芽液进行30天至210天的常温处理。
以下,参照具体实施例详细说明本发明。
本发明的特征在于,本发明的黑米发芽液通过如下的步骤获取,即,在开放的容器中,在1℃至5℃的温度范围内对用于使黑米发芽的水进行1天至10天的低温处理,之后,在开放的容器中,在10℃至30℃的温度范围内进行30天至210天的常温处理。
米作为属于禾本科的作物,与麦、玉米一同被誉为世界三大谷物,是全世界最主要的粮食资源。并且,由于水分及蛋白质的含量少且碳水化合物的含量高,因而不易腐败,是便于储存的重要热量源。
以黑色大米广为人知的黑米中的花色素苷有以上所提及的很强的抗氧化效果,并在预防癌症、提高免疫力方面有很强的效果。作为有色大米之一的黑米因其特有的颜色和香味而被加工成多种形态的食品,其消费量逐渐增加。黑米的香由乙二醇(ethanediol)、愈创木酚(guaiacol)等的乙醇成分和棕榈酸(hexadecanoic acid)、己醛(hexanal)、乙酸(acetic acid)等的酮、醛及有机酸引起,色素成分为矢车菊素-3-O-葡萄糖苷(cyanidin-3-glucoside,C3G)和氯化葡萄糖苷芍药素(peonidin-3-glucoside,P3G)等的以糖苷为主的成分。
尤其,黑米的色素成分含有具有多种结构和分子量的多酚化合物,这种多酚化合物被确认到具有抗氧化性、抗菌性、抗癌性等的生物活性。并且,黑米以糙米方式普及,与普通糙米相比,膳食纤维含量高,具有独特的香味,蛋白质、维生素B、无机质的含量也高。根据中国医疗宝典李时珍的本草纲目,具有开胃益中、滋阴补肾、健脾暖肝、明目活血之功效,对头晕、贫血、白发的预防及治疗、眼病、多尿症、便秘、心血管等疾病有明显的效果。
若每日经常食用黑米,可改善人体的综合调节功能、强化免疫功能,对防止衰老、预防疾病、女性的美容等有着显著效果。尤其,对孕妇容易引起的贫血等有特效,对儿童骨骼的形成有很大的帮助。并且,在儿童辅食方面,若将黑米作为辅食来喂儿童,则对儿童健康成长有很大的帮助。并且,由于黑米含有大量的硒(Se),因而有预防癌症的效果。在中国的文献(1992年11月)登载了通过使40名直肠癌患者长期食用黑米来最终使患者的状态好转的研究报告。尤其,自古以来,沿着中国的丝绸之路来往的人或新疆的居民将黑米、薏米、大枣等熬成粥来作为滋养健康食品,由此克服塔克拉玛干沙漠的酷暑。并且,黑米不仅颜色好看,还具有香香的气味,对糖尿病、便秘、胃肠疾病等有功效,由于维生素B、维生素C、维生素E的含量比普通大米高,因而可称为对人体有益的黑色谷物中的健康食品。
由于黑米会被捣精成糙米来使用,因而其中的胚芽含有比普通大米更多的各种营养素,黑色色度也比普通大米高出5倍。黑米中的作为天然色素的花色素苷等的含量非常高,含有丰富的包括维生素E在内的铁、锌、硒等无机盐类,活性氧的去除功能优秀。若摄入黑米,则去除活性氧的花色素苷和Oryzafuran等的抗氧化成分将惊人地提高,可期待提前预防皮肤老化的效果。具有这种生理效果、药理效果的黑米因其利用价值而得到关注。黑米的主产地为南亚和中国,韩国部分地区也有生产,是具有丰富医学效果的米。尤其,黑米具有的紫色的色素在高温和太阳光照射情况下具有高稳定性,因而在面包、粥、面条等的加工中被用作食品材料。
如下说明将这种黑米用作各种食品材料的情况。
在韩国专利授权第451126号中公开了一种利用黑米的面条及其制备方法,其特征在于,主要成分包括55重量百分比至70重量百分比的按140目至180目粉碎大米或黑米而成的米粉、20重量百分比至28重量百分比的小麦粉、5重量百分比至8重量百分比的食用盐以及5重量百分比至10重量百分比的水。
在韩国专利公开第2000-75359号中公开了一种利用黑米的大米饼干及其制备方法,即,以水分含量达到18%的方式向混合黑米和糙米的混合米添加水,并对所制备的面团进行膨化来制备。
在韩国专利公开第2002-92334号中公开了一种黑米米糕,即,对混合粉碎1.5L至1.8L的矿泉水、1.5kg至2.5kg的黑米、1.5kg至2.5kg的大麦米、6kg至7kg的白米、400g至500g的土豆淀粉、0.4g至0.5g的精盐而成的粉进行均匀的混合,之后在100℃至120℃的温度的水蒸气中进行蒸熟来制备。
在韩国专利公开第2001-105020号中公开了一种含有植物提取物的面条及其制备方法,即,以液态或粉末状态对植物食品和面粉进行混合、揉面、压延、成型来制备。
在韩国专利公开第2002-42384号中公开了一种添加黑米粉的面包及其制备方法,即,通过按规定比例混合黑米和面粉并混合适当量的水来进行揉面、发酵,从而制备面包。
在本发明中,黑米(black rice)还可称为黑色米或黑色大米,由于花色素苷的含量丰富,无机盐类的含量丰富,从而可有效中和体内活性氧。作为一例,上述黑米可使用在韩国珍岛栽培的黑珍珠(Oryza sativa cv.Heugjinjubyeo)。上述黑珍珠使外皮部分呈深紫色,包含作为花色素苷化合物的矢车菊素和锦葵色素以及作为其糖苷的矢车菊素葡萄糖苷、锦葵色素葡萄糖苷、飞燕草素葡萄糖苷、生物碱以及酚化合物,而且包含2-羟基-4-甲氧基吡啶成分。而且,黑米因其丰富的矿物质而具有碱性性质。碱性食品具有对因多种有害物质和食物氧化物而被氧化的身体进行中和来防止各种炎症疾病的效果。尤其,矿物质中的硒的含量最高,因而黑米中的硒不仅激活干细胞,还具有抑制干细胞受损的效果。
黑米的捣精度为通过进行9分钟至10分钟的捣精来达到的捣精度。捣精度意味着米被削去的程度,在捣精度方面,以糙米和白米作为基准,对外腔层和米糠层(参照米的结构和营养分布)加在一起的整体进行十等分,对其进行完全去除的情况称为10分度,将完全未被去除的糙米状态称为0分度。因此,5分度意味着外腔层和米糠层被去除50%左右的状态。并且,还以重量表示捣精程度,通常,外腔层和米糠层的重量约占糙米总重量的8~9%。由于这会根据品种而不同,因此无法完全同样适用于所有米,为了便于捣精,将对整体重量的8%进行捣精的程度称为10分度。换句话讲,1分度意味着对糙米总重量的约0.8%进行捣精的程度。市面上所讲的5分度米为对糙米总重量的约4%进行捣精的米,7分度米为对糙米的总重量的约5.6%进行捣精的米。如上所述,在以9分度至10分度进行捣精的情况下,发芽所需的米芽仍残留,因而可实现发芽。
可通过在水温达到16℃至23℃的水中浸泡24个小时至48个小时来进行黑米的发芽。这可理解为主要与韩国的冬季相对应的常温温度条件。
可通过在水温达到23℃至30℃的水中浸泡15个小时至24个小时来进行黑米的发芽。这可理解为主要与韩国的夏季相对应的常温温度条件。
上述发芽温度和发芽时间可理解为黑米的芽生长到0.5mm至1.5mm左右为止的适当条件。
在黑米的发芽过程中,对水进行搅拌,优选地,将下部的水引到上部,并使水从新从上部向下部下落。对水进行搅拌是为了防止因水停滞而产生腐败。这应理解为不停滞的流动的水会因自然产生的自力及与氧等相接触来被净化并防止产生腐败,可理解为具有与自然流动的水会比停滞、静止的水更具有自净能力相同和/或相似的道理,可理解为在净化处理中也得到应用的方式。
优选地,发芽时所使用的水位饮用水或可食用水,可使用自来水。
在低温处理及常温处理之前,如图1所示,发芽液本身存在达到92000000(CFU/g)的普通细菌,存在1100000(CFU/g)的大肠菌,但根据本发明进行低温处理及常温处理之后,如图2中的实验报告中所示,尤其包含3种普通细菌和3种真菌,如图3所示,普通细菌有莫利柠檬酸杆菌(Citrobacter murliniae)、中型假食酸菌(Pseudacidovorax intermedius)以及非光合细菌恩施类红细菌属(Paenirhodobacter enshiensis),真菌有中型假丝酵母(Candida intermedia)、热带假丝酵母(Candida tropicalis)以及季也蒙毕赤酵母属(Meyerzyma sp.)。
并且,本发明的黑米发芽液的制备方法的特征在于,包括:(1)黑米发芽步骤,通过将黑米浸泡在水中来进行发芽;(2)发芽液分离步骤,使发芽的黑米和用于使黑米发芽的发芽液分离;(3)低温处理步骤,在开放的容器中,在1℃至5℃的温度范围内对发芽液进行1天至10天的低温处理;以及(4)常温处理步骤,在开放的容器中,在10℃至30℃的温度范围内对经过低温处理的发芽液进行30天至210天的常温处理。
在上述(1)黑米发芽步骤中,通过将黑米浸泡在水中来进行发芽。对于黑米及与黑米的发芽相关的内容可理解为与如上所述的说明相同和/或相似。种子的发芽需要给植物的种子提供适当的温度、充足的氧以及适当的水分,根据种类分为需要光线充足的条件的种类和需要黑暗的条件的种类,但大部分的植物与有没有光线无关。若开始发芽,则多种酶将开始活动,使得呼吸作用变得活跃,通过分解所储存的养分来转换成容易利用的形态。而且,将被用在幼芽、幼根等的分裂组织的快速活动。在种子中,所储存的养分以淀粉、脂肪、蛋白质等的形态储存在胚乳(禾本科等)、外胚乳(莲花灯)、子叶(豆科等)。随着开始发芽,所储存的养分逐渐减少,但会在子叶或初生叶等形成叶绿素并逐渐进行光合作用,根也会吸收养分、水分,因而发芽将脱离依靠所储存的养分的被动营养阶段,从而转为依靠自力的独立营养生长。因此,还将生成发芽前没有的新成分。
在上述(2)发芽液分离步骤中,使得在上述(1)黑米发芽步骤中生成的发芽的黑米和用于使黑米发芽的发芽液分离。所获取的发芽的黑米可单独用于烹饪等,或可与其他米一起用于烹饪等。在用发芽的黑米烹饪的情况下,所获取的黑米饭具有很高的消化吸收率。本发明的特征在于,可按原来的目的使用使黑米发芽后的发芽的黑米且将利用作为副产物得到的发芽液。即,本发明的特征在于,在为了使黑米发芽而供给的水使黑米发芽之后,将发芽液作为副产物来回收并利用。所获取的发芽液呈黑色。这是因为包含黑米中极为丰富的花色素苷等,因而涌出了很多已知或尚未知晓的很多有效生物活性物质。
在上述(3)低温处理步骤中,在开放的容器中,在1℃至5℃的温度范围内对在上述(2)发芽液分离步骤中获取的发芽液进行1天至10天的低温处理。在这种低温处理前后,发芽液的酸碱度(pH)维持在4.5至5.5的范围内。
在上述(4)常温处理步骤中,在开放的容器中,在10℃至30℃的温度范围内对经过上述(3)低温处理步骤的发芽液进行30天至210天的常温处理。常温处理后的发芽液的酸碱度上升到7.5至8的范围内。
黑米的捣精度可以为通过进行9分钟至10分钟的捣精来达到的捣精度。与捣精度相关的内容可理解为与如上所述的说明相同和/或相似。
可通过在水温达到16℃至23℃的流淌的水中浸泡24个小时至48个小时来进行黑米的发芽。这可理解为主要与韩国的冬季相对应的常温温度条件。
可通过在水温达到23℃至30℃的水中浸泡15个小时至24个小时来进行黑米的发芽。这可理解为主要与韩国的夏季相对应的常温温度条件。
上述发芽温度和发芽时间可理解为黑米的芽生长到0.5mm至1.5mm左右为止的适当条件。
优选地,在黑米的发芽过程中,对水进行搅拌。对水进行搅拌将起到防止因水停滞而产生腐败的功能。
优选地,发芽时所使用的水为饮用水或可食用水,可使用自来水。
以下,将对本发明的优选实施例及比较例进行记述。
以下的实施例用于对本发明进行例证,不应理解为限制本发明的范围。
实施例1及实施例2
向500g的以约9分度的捣精度进行捣精的黑米(Oriza sativa L.,品种:清风黏黑米(Cheongpung Heugchalbyeo))倒入5L的普通自来水并缓慢进行搅拌且在20℃±3℃的温度下进行15个小时至48个小时左右的发芽,由此获取发芽的黑米和发芽液,使发芽的黑米和黑色的发芽液分离,向开放的容器倒入所分离的发芽液并测定酸碱度(在此情况下,pH﹦约5.5,将这称为“实施例1”),之后以2℃±0.1℃的温度进行维持并在冰箱内进行48个小时的低温处理。低温处理后,以将发芽液装在开放的容器的状态在常温(约20℃±3℃的温度)下进行50天的常温处理。常温处理后,测定了发芽液的酸碱度,发芽液的酸碱度显示pH﹦约7.8(将这称为“实施例2”)。
对所获取的本发明的黑米发芽液中存在的菌进行了测定,如图2及图3所示,包含了3种普通细菌和3钟真菌,如图3所示,确认了普通细菌有莫利柠檬酸杆菌(Citrobactermurliniae)、中型假食酸菌(Pseudacidovorax intermedius)以及非光合细菌恩施类红细菌属(Paenirhodobacter enshiensis),真菌有中型假丝酵母(Candida intermedia)、热带假丝酵母(Candida tropicalis)以及季也蒙毕赤酵母属(Meyerzyma sp.)。
为了便于保管及使用,对上述实施例1及实施例2的黑米发芽液进行滤纸过滤之后冷冻干燥,从而以粉末形态进行保管,使用前通过蒸馏水稀释并进行了使用。
比较例1
除了使用了以约9分度的捣精度进行捣精的糙米(Oriza sativa L.,品种:秋晴(Akibare))来代替以约9分度的捣精度进行捣精的黑米之外,以与上述实施例相同的方式实施来制备了糙米发芽液,但在低温处理、常温处理过程中频繁确认到因腐败而产生恶臭。
比较例2
除了在使用以约9分度的捣精度进行捣精的黑米(与实施例1相同)的情况下未进行低温处理之外,以与上述实施例相同的方式实施来制备了黑米发芽液,但因未进行低温处理,因此在常温处理过程中产生腐败并产生恶臭。
比较例3
虽然使用以约9分度的捣精度进行捣精的黑米(与实施例1相同)来以与实施例相同的方式实施发芽,但在发芽后未进行低温处理及常温处理,而是直接使用了发芽液。确认到,所获取的黑米发芽液的初始酸碱度为约4.5,存在92000000(CFU/g)的普通细菌,存在1100000(CFU/g)的大肠菌。
实验例1:抗真菌活性实验(1)
1.实验菌株
从韩国大邱韩医大学接收作为脚癣的根源性真菌之一的红色毛癣菌(Trichophyton rubrum)(KCTC 6375)来在用到抗真菌活性实验之前进行了3次以上继代培养并实现活性化,之后在实验中使用。
2.所使用的培养基
为了确认生长样态、继代培养及抗真菌活性,使用了沙氏葡萄糖琼脂(Sabourauddextrose agar,SDA)培养基。
3.抗真菌活性验证(Paper disc agar diffusion method)
抗真菌活性验证使用并应用了纸片琼脂扩散法(paper disc agar diffusionmethod)。通过穿孔器(Cork borer,5mm)采取试验菌株并放到培养基中间,以不掉落的方式将纸片(paper disc)放到培养基上,之后注入50μl的浓度分别达到5mg/ml、10mg/ml的实施例1及实施例2中的黑米发芽液(固体成分)试样并放入培养装置,在25℃的温度下培养7天以上之后,确认了是否生成生长抑制环。为了了解对于黑米发芽液粉末(固体成分)的影响,将灭菌水用作对照组。
在图4a、图4b、图4c、图4d及表1中示出了通过使用实施例1及实施例2中的浓度分别达到5mg/ml、10mg/ml的试样以及纸片琼脂扩散法(paper disc agar diffusion assay)进行抗真菌活性实验的结果。实验结果显示,从经过5天之后开始,因黑米发芽液的抗真菌活性,实施例1在5mg/ml、10mg/ml的浓度下分别以80mm、150mm抑制了脚癣菌(Trichophytonrubrum;KCTC 6375)的生长,实施例2在5mg/ml、10mg/ml的浓度下分别以70mm、130mm抑制了脚癣菌(Trichophyton rubrum;KCTC 6375)的生长(图4a),经过7天之后,实施例1在5mg/ml、10mg/ml的浓度下分别以70mm、140mm抑制了生长,而且实施例2在5mg/ml、10mg/ml的浓度下分别以50mm、110mm抑制了生长,从而呈现出了相似的抗真菌活性(图4b)。
表1
生长抑制:mm
在图4a、图4b、图4c、图4d中,P为菌株(Trichophyton rubrum KCTC 6375),C为作为对照组的蒸馏水,1为浓度达到5mg/ml的实施例1,2为浓度达到10mg/ml的实施例1,3为浓度达到5mg/ml的实施例2,4为浓度达到10mg/ml的实施例2。
实验例2:抗真菌活性实验(2)
对实验例1中的培养进行了10天以上的长期处理。实验结果,在经过10天以上的培养之后,确认到在实施例2中出现了白色的未知(un-known)霉菌的生长,因为该未知霉菌的抗真菌活性,如表2及图4c所示,确认到相当抑制脚癣菌(Trichophyton rubrum)的生长。
表2
+++:未抑制++:略微抑制+:中等程度抑制
在表3及图5示出了在实验例2中观察到的白色未知霉菌的确认及与实施例1及实施例2相关的5mg/ml、10mg/ml浓度下的实验结果。在实施例1中,仍未观察到白色未知霉菌,但在实施例2中,确认到白色未知霉菌的生长,对于5mg/ml、10mg/ml的浓度之差,也使得未知霉菌的浓度明显增加。
表3
+++:未抑制++:略微抑制+:中等程度抑制
在图5中,P为菌株(Trichophyton rubrum),C为作为对照组的蒸馏水,1为浓度达到5mg/ml的实施例1,2为浓度达到10mg/ml的实施例1,3为浓度达到5mg/ml的实施例2,4为浓度达到10mg/ml的实施例2。
并且,为了了解在实施例2中发现的白色未知霉菌与各种浓度之间的相关关系,在表4及图6中示出了与实施例2相关的1mg/ml、5mg/ml、10mg/ml浓度下的实验结果。
其结果,随着实施例2中的浓度增加,白色的未知霉菌的浓度及对于脚癣菌(Trichophyton rubrum)的抗真菌活性也呈相对增加的趋势。
表4
+++:未抑制++:略微抑制+:中等程度抑制
在图6中,P为菌株(Trichophyton rubrum),C为作为对照组的蒸馏水,1为浓度达到1mg/ml的实施例2,2为浓度达到5mg/ml的实施例2,3为浓度达到10mg/ml的实施例2。
实验结果,从经过5天之后开始,因实施例1及实施例2中的抗真菌活性,抑制了脚癣菌(Trichophyton rubrum)的生长,在经过7天之后,实施例1及实施例2中的活性相似。
实验例3:抗真菌活性实验(3)
根据钱德拉塞克兰(Chandrasekaran)及文卡塞萨卢(Venkatesalu)的方法(Journal of Ethnopharmacology,91,105-108(2004))测定了黑米发芽液对作为脚癣菌的红色毛癣菌(Trichophyton rubrum,KCTC6375)的抗菌效果。在沙氏葡萄糖肉汤(Sabourauddextrose broth)以及28℃的温度下对菌株进行3天的培养,之后以达到在450nm下达到0.6的吸光度的方式在培养基进行稀释。向1ml的含有提取物的培养基接种菌稀释液各50μl。在此情况下,以使培养基中的提取物的浓度达到10%、20%、40%的方式按2倍稀释系列进行制备。在28℃的温度下进行3天的培养之后,观察了菌是否生长,图7及图8示出了其结果。图8为对图7进行放大拍摄的照片。
如图7及图8所示,在比较例4(向500g的以约7分度的捣精度进行捣精的黑米倒入5L的普通自来水并缓慢进行搅拌且在20℃±3℃的温度下进行24个小时左右的浸渍来获取未发芽液)及培养基液中确认到了脚癣菌浮游物,在实施例1中未确认到脚癣菌浮游物,因此,40%的浓度被确认为最低抑制浓度(MIC:Minimum inhibitory concentration)。
实验例4:抗病毒活性实验
为了进行黑米发芽液的抗病毒活性实验,使用了实施例1中的发芽液。
针对比较例4和实施例1对于单纯疱疹病毒(HSV:Herpes simplex virus)的抗病毒性,利用非洲绿猴肾细胞(Vero)如下进行了实验。
在将非洲绿猴肾细胞(1×105细胞/孔)接种(Cell seeding)到24孔组织培养处理(TC)板之后经历18个小时至20个小时,之后使比较例4和实施例1中的浓度分别达到100μg/ml、200μg/ml并分别在37℃的温度下与单纯疱疹病毒1型(HSV-1,MOI:2)一同进行1个小时的繁殖,之后向非洲绿猴肾细胞(Vero)进行接种。与比较例4及实施例1中的液体一同接种单纯疱疹病毒1型(HSV-1)达到2个小时后,从非洲绿猴肾细胞(Vero)去除了接种液并用磷酸缓冲盐溶液(PBS)清洗3次之后用添加10%胎牛血清(FBS)的DMEM进行替换。阴性对照组仅处理的含有10%胎牛血清(FBS)的DMEM。在48个小时之后,用显微镜测定了病毒感染程度。并且,为了测定细胞存活率,进行了20μl的MTT试剂处理,在进行1个小时的培养之后,在450nm下测定了吸光度。
利用感染48小时后的图像进行的对于单纯疱疹病毒的抗病毒活性分析结果如下。如图9及图10所示,可以确认到,在感染单纯疱疹病毒之后,在经过黑米发芽液处理的细胞中,病毒感染率明显下降(图9),细胞存活率也达到了比较例4及病毒感染组的5倍以上(图10)。
在图9及图10中,细胞-1(C-1)意味着非洲绿猴肾细胞未感染组,细胞-2(C-2)意味着非洲绿猴肾细胞感染组(单纯疱疹病毒感染组),C-100意味着浓度达到100μg/ml的比较例4,C-200意味着浓度达到200μg/ml的比较例4,E-100意味着浓度达到100μg/ml的实施例1,E-200意味着浓度达到200μg/ml的实施例1。
在比较例1及比较例2中,因为腐败而未能获取可使用的发芽液,因而未能采用到实验,在比较例3中,以与上述内容相同的的方式进行使用,可通过所获取的黑米发芽液确认初期的细菌状态和酸碱度的变化状态。
以上,仅通过所记载的具体例详细说明了本发明,但可在本发明的技术思想范围内进行多种变形及修改,这对本发明所属技术领域的技术人员而言是明确无误的,这种变形及修改属于所附的发明要求保护范围,这是很明确的。
Claims (12)
1.一种具有抗炎效果的黑米发芽液,其特征在于,通过如下的步骤获取,即,在开放的容器中,在1℃至5℃的温度范围内对用于使黑米发芽的水进行1天至10天的低温处理,之后,在开放的容器中,在10℃至30℃的温度范围内进行30天至210天的常温处理。
2.根据权利要求1所述的具有抗炎效果的黑米发芽液,其特征在于,在低温处理之前、低温处理期间、低温处理之后维持在4.5至5.5的范围内的酸碱度在常温处理后使得酸碱度上升到7.5至8的范围内。
3.根据权利要求1所述的具有抗炎效果的黑米发芽液,其特征在于,黑米的捣精度为通过进行9分钟至10分钟的捣精来达到的捣精度。
4.根据权利要求1所述的具有抗炎效果的黑米发芽液,其特征在于,通过在水温达到23℃至30℃的水中浸泡15个小时至24个小时来进行黑米的发芽。
5.根据权利要求1所述的具有抗炎效果的黑米发芽液,其特征在于,通过在水温达到16℃至23℃的水中浸泡24个小时至48个小时来进行黑米的发芽。
6.根据权利要求1所述的具有抗炎效果的黑米发芽液,其特征在于,当黑米发芽时,用水进行搅拌。
7.一种具有抗炎效果的黑米发芽液的制备方法,其特征在于,包括:
(1)黑米发芽步骤,通过将黑米浸泡在水中来进行发芽;
(2)发芽液分离步骤,使发芽的黑米和黑米发芽过程中使用的发芽液分离;
(3)低温处理步骤,在开放的容器中,在1℃至5℃的温度范围内对发芽液进行1天至10天的低温处理;以及
(4)常温处理步骤,在开放的容器中,在10℃至30℃的温度范围内对经过低温处理的发芽液进行30天至210天的常温处理。
8.根据权利要求7所述的具有抗炎效果的黑米发芽液的制备方法,其特征在于,在低温处理之前、低温处理期间、低温处理之后维持在4.5至5.5的范围内的酸碱度在常温处理后使得酸碱度上升到7.5至8的范围内。
9.根据权利要求7所述的具有抗炎效果的黑米发芽液的制备方法,其特征在于,黑米的捣精度为通过进行9分钟至10分钟的捣精来达到的捣精度。
10.根据权利要求7所述的具有抗炎效果的黑米发芽液的制备方法,其特征在于,通过在水温达到23℃至30℃的水中浸泡15个小时至24个小时来进行黑米的发芽。
11.根据权利要求7所述的具有抗炎效果的黑米发芽液的制备方法,其特征在于,通过在水温达到16℃至23℃的水中浸泡24个小时至48个小时来进行黑米的发芽。
12.根据权利要求7所述的具有抗炎效果的黑米发芽液的制备方法,其特征在于,当黑米发芽时,用水进行搅拌。
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