CN111961660B - 一种多胺-多酚修饰的氧化石墨烯载体及其制备方法与应用 - Google Patents

一种多胺-多酚修饰的氧化石墨烯载体及其制备方法与应用 Download PDF

Info

Publication number
CN111961660B
CN111961660B CN202010888129.6A CN202010888129A CN111961660B CN 111961660 B CN111961660 B CN 111961660B CN 202010888129 A CN202010888129 A CN 202010888129A CN 111961660 B CN111961660 B CN 111961660B
Authority
CN
China
Prior art keywords
enzyme
solution
cross
graphene oxide
polymer
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202010888129.6A
Other languages
English (en)
Other versions
CN111961660A (zh
Inventor
庄伟�
刘彤乐
朱晨杰
应汉杰
饶远
李明
陈勇
吴菁岚
杨朋朋
柳东
牛欢青
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Nanjing Tech University
Original Assignee
Nanjing Tech University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Nanjing Tech University filed Critical Nanjing Tech University
Priority to CN202010888129.6A priority Critical patent/CN111961660B/zh
Publication of CN111961660A publication Critical patent/CN111961660A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN111961660B publication Critical patent/CN111961660B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
    • C12N11/02—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier
    • C12N11/10—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier the carrier being a carbohydrate
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C01—INORGANIC CHEMISTRY
    • C01B—NON-METALLIC ELEMENTS; COMPOUNDS THEREOF; METALLOIDS OR COMPOUNDS THEREOF NOT COVERED BY SUBCLASS C01C
    • C01B32/00—Carbon; Compounds thereof
    • C01B32/15—Nano-sized carbon materials
    • C01B32/182—Graphene
    • C01B32/198—Graphene oxide
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
    • C12N11/02—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
    • C12N11/02—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier
    • C12N11/08—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier the carrier being a synthetic polymer
    • C12N11/082—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier the carrier being a synthetic polymer obtained by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
    • C12N11/02—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier
    • C12N11/08—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier the carrier being a synthetic polymer
    • C12N11/082—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier the carrier being a synthetic polymer obtained by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds
    • C12N11/087—Acrylic polymers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
    • C12N11/02—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier
    • C12N11/08—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier the carrier being a synthetic polymer
    • C12N11/089—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier the carrier being a synthetic polymer obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
    • C12N11/02—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier
    • C12N11/08—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier the carrier being a synthetic polymer
    • C12N11/089—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier the carrier being a synthetic polymer obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds
    • C12N11/096—Polyesters; Polyamides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
    • C12N11/14—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an inorganic carrier
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
    • C12N11/18—Multi-enzyme systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
    • C12N9/0006—Oxidoreductases (1.) acting on CH-OH groups as donors (1.1)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
    • C12N9/0065—Oxidoreductases (1.) acting on hydrogen peroxide as acceptor (1.11)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
    • C12N9/18—Carboxylic ester hydrolases (3.1.1)
    • C12N9/20—Triglyceride splitting, e.g. by means of lipase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
    • C12N9/22—Ribonucleases RNAses, DNAses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
    • C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12N9/2405—Glucanases
    • C12N9/2434—Glucanases acting on beta-1,4-glucosidic bonds
    • C12N9/2437—Cellulases (3.2.1.4; 3.2.1.74; 3.2.1.91; 3.2.1.150)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/88—Lyases (4.)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y101/00—Oxidoreductases acting on the CH-OH group of donors (1.1)
    • C12Y101/03—Oxidoreductases acting on the CH-OH group of donors (1.1) with a oxygen as acceptor (1.1.3)
    • C12Y101/03004—Glucose oxidase (1.1.3.4)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y111/00—Oxidoreductases acting on a peroxide as acceptor (1.11)
    • C12Y111/01—Peroxidases (1.11.1)
    • C12Y111/01006—Catalase (1.11.1.6)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y301/00—Hydrolases acting on ester bonds (3.1)
    • C12Y301/01—Carboxylic ester hydrolases (3.1.1)
    • C12Y301/01003—Triacylglycerol lipase (3.1.1.3)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
    • C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12Y302/01004—Cellulase (3.2.1.4), i.e. endo-1,4-beta-glucanase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y406/00—Phosphorus-oxygen lyases (4.6)
    • C12Y406/01—Phosphorus-oxygen lyases (4.6.1)
    • C12Y406/01001—Aodenylate cyclase (4.6.1.1)

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Materials Engineering (AREA)
  • Nanotechnology (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)

Abstract

本发明公开了一种基于多胺‑多酚共沉积的交联酶聚体的制备方法及其应用，属于固定化酶应用技术领域。本发明是将氧化石墨烯分散在缓冲液中，然后向缓冲液中加入多酚类溶液和多氨基聚合物溶液，反应得到多胺‑多酚修饰氧化石墨烯。本方法得到的多胺‑多酚修饰氧化石墨烯载体用于固定化酶得到交联酶聚体，具有普适、高活性、操作简单等优点。

Description

一种多胺-多酚修饰的氧化石墨烯载体及其制备方法与应用
技术领域
本发明属于固定化酶应用技术领域，具体涉及一种多胺-多酚修饰的氧化石墨烯载体及其制备方法与应用。
背景技术
目前，生物催化技术的应用已经越来越广泛了，酶作为一种常见的生物催化剂与化学催化剂相比具有很多的优势：催化条件温和，一般在常温、常压以及酸碱度接近中性的条件下催化反应；与化学催化相比催化效率高、反应速度快；环境污染小，符合绿色化学的发展理念。然而，酶作为催化剂的缺点也很明显，稳定性较差，在高温、高压以及强酸强碱条件下容易失活，反应条件严苛，目前能真正应用到工业生产中酶催化剂还是有限的。
一般将酶应用于工业生产中，都需要对酶进行基因工程或化学修饰改造，达到提高它们在催化条件下的选择性、高活力和耐用性的目的，并且以固定化酶的形式对酶进行应用。固定化酶提高酶的稳定性，使酶易于与产物分离，提高酶的可重复使用性，从而降低生产成本。固定化酶的性能主要取决于固定化酶所使用的载体以及固定化方法。对于有载体固定化酶来说，载体材料的选择十分重要，因为所选择载体上的活性基团、微环境、载体的形状等因素，都可能影响固定化酶的活力、稳定性、可重复使用性以及可回收性等。一般选用的固定化酶载体材料都具有高比表面积、一定的孔径、易于进行表面改性、一定的硬度和机械强度等特点。本发明中使用的固定化酶载体氧化石墨烯(GO)是一种应用广泛的固定化酶载体，GO作为石墨烯的一种重要衍生物且与其具有相似的二维片层结构，具有良好的生物相容性，且表面带有环氧基、羰基、羧基等功能性基团，由于这些含氧基团的存在使GO在水中有较好的分散性和稳定性，所以GO是一种良好的固定化酶载体。
但是，利用GO作为固定化酶载体由于载体与酶之间的强疏水作用以及强静电作用，导致载量低、固定化率低、固定化酶稳定性以及可重复使用性差等问题，影响固定化酶的性能。为改善GO作为载体所存在的缺陷，所以需要对GO进行了表面改性。现有的聚乙二醇胺修饰GO表面的技术，需要对材料表面的羧基进行活化，活化过程复杂且反应条件苛刻，不利于应用到酶载体修饰过程中。本发明中的多巴胺和多氨基聚合物共沉积的表面修饰方法，其中常用的多氨基聚合物包括聚赖氨酸和聚乙烯亚胺等，存在操作简单，提高载体稳定性等优势。多巴胺与聚乙烯亚胺共沉积修饰方法是常用的材料改性手段，共沉积的机理主要是多巴胺氧化自聚过程中形成的多巴胺中间体与聚乙烯亚胺的氨基发生席夫碱反应或迈克尔加成反应形成共价键。将其应用于酶载体改性过程中，不仅可以提升载体的稳定性，同时可以减少载体与酶之间的相互作用。
目前常用的固定化酶方法可以大致分为吸附、共价结合、交联、包埋和微囊化五种，固定化酶技术采用其中某种方法或不同方法相结合将酶固定到载体上。交联酶聚体作为一种新型的酶固定化技术，它的传统制备方法主要是通过沉淀和交联两步完成，且属于无载体固定化酶。将交联酶聚体与载体固定化相结合，有利于交联酶聚体技术的发展以及工业应用的实现。本发明中通过多酚类化合物和多氨基聚合物共沉积修饰得到的GO载体用于固定化交联酶聚体，最终获得的交联酶具体在活性及稳定性方面都有显著的改善。
发明内容
发明目的：本发明要解决的技术问题是提供一种多胺-多酚修饰的氧化石墨烯载体，以解决现有技术中固定化酶稳定性以及可重复使用性差等问题。
本发明还要解决的技术问题是提供上述多胺-多酚修饰的氧化石墨烯载体的制备方法。
本发明最后要解决的技术问题是提供上述多胺-多酚修饰的氧化石墨烯载体在交联酶聚体领域中的应用。
技术方案：为解决现有技术问题，本发明采用如下技术方案：
一种多胺-多酚修饰的氧化石墨烯载体的制备方法，将氧化石墨烯分散在缓冲液中，然后向缓冲液中加入多酚类溶液和多氨基聚合物溶液，反应得到多胺-多酚修饰的氧化石墨烯。
作为优选，所述多氨基聚合物包括聚赖氨酸、聚乙烯亚胺、聚丙烯酰胺、多聚精氨酸、聚醚胺、糖胺聚糖、四乙烯五胺中任一种或几种的混合物，优选聚乙烯亚胺。
作为优选，所述多酚类包括多巴胺、单宁酸、邻苯二酚、没食子酸中任一种或几种的混合物，优选多巴胺。
作为优选，所述的缓冲液为pH为7～10的Tris-HCl缓冲液。
作为优选，所述氧化石墨烯在缓冲液中的浓度为0.5～20mg/mL，优选1mg/mL。
作为优选，所述多酚类溶液为多酚类浓度为0.1～5mg/mL的Tris-HCl溶液，优选0.3mg/mL；所述多氨基聚合物溶液为多氨基聚合物的浓度为0.1～5mg/mL的Tris-HCl溶液，优选0.9mg/mL。
作为优选，所述的反应是在10～30℃条件下震荡反应2～24h。
上述多胺-多酚修饰的氧化石墨烯载体的制备方法制备得到的多胺-多酚修饰的氧化石墨烯载体在本发明的保护范围之内。
所述的酶包括腺苷酸环化酶、核酸酶P1、过氧化氢酶、葡萄糖氧化酶、脂肪酶、纤维素酶中任一种或几种的混合物；
其中，所述的交联酶聚体与多胺-多酚氧化石墨烯载体通过亲和纯化耦合共价交联相结合；
所述亲和纯化耦合共价交联的方法如下：
(1)将浓度为20～100mM的金属螯合剂1mL与浓度为20～100mM金属离子1mL螯合后吸附0.5～5mL酶溶液，所述酶溶液中蛋白浓度为3～5mg/ml，反应0.5～2h后离心，向其中加入5～10mL交联剂，反应2～12h后得到交联酶聚体；
(2)取1～5mL多胺-多酚氧化石墨烯，其中，氧化石墨烯的浓度是0.5～20mg/mL，并加入按步骤(1)获得的交联酶聚体反应1～4h，然后离心，洗涤，获得固定在多胺-多酚氧化石墨烯载体上的交联酶聚体。
步骤(1)中，所述的交联剂包括戊二醛、己二胺、顺丁烯二酸酐、二重氮联苯胺-2,2’-二磺酸、4,4’-二氟-3,3’-二硝基二苯砜、酚-2,4-二磺酰氯中任一种或几种的混合物。
步骤(1)中，所述金属螯合剂包括亚氨基二乙酸、Nα,Nα-二(羧甲基)-L-赖氨酸水合物、三(羧甲基)乙二胺、羧甲基天冬氨酸、羧甲基α，β-二氨基丁二酸中的任一种或几种的混合物。
步骤(1)中，所述金属离子溶液为NiCl2溶液。
本发明中氧化石墨烯是使用Hummers方法制备得到的。在250mL的反应瓶中加入10-100mL浓硫酸，冰浴中搅拌加入石墨粉和硝酸钠的固体混合物，分次加入高锰酸钾，控制反应温度不超过20℃，一段时间后升温到35℃左右，继续搅拌20-40min，再缓慢加入去离子水，续拌10-30min后，并加入5-10％双氧水还原残留的氧化剂，使溶液变为亮黄色。趁热过滤，并用4-6％HCl溶液和去离子水洗涤直到滤液中无硫酸根被检测到为止。将滤饼在50-70℃下真空干燥，得到制备好的GO。
本发明制备得到的修饰后的氧化石墨烯是一种表面有PDA/PEI涂层的二维氧化石墨烯片层材料，上述方法修饰后的多胺-多酚共沉积的氧化石墨烯材料表面有丰富的氨基、酚羟基、醌基等，可用于交联酶聚体的载体。GO表面的氨基、酚羟基、醌基等主要由沉积在材料表面的PDA/PEI提供。
有益效果：本发明具有如下突出的技术效果：
本发明使用多氨基聚合物与多酚类共沉积于GO表面，从而对GO进行修饰的方法，获得多胺-多酚氧化石墨烯。DA在碱性有氧溶液中会发生自聚，从而在固体材料表面形成一层具有粘附性的聚多巴胺层，能够改善材料表面的亲水性和生物相容性，同时引入丰富的氨基、酚羟基和醌基基团。使用PEI与DA共沉积可以大大缩短DA自聚的时间，提高修饰速度，而且PEI的加入可以提高涂层的稳定性。多巴胺属于邻苯二酚的衍生物，邻苯二酚作为一种强还原剂易被氧化为邻苯醌。聚赖氨酸与聚乙烯亚胺一样富含阳离子，而GO表面带有大量负电荷，所以聚赖氨酸与GO具有强的静电相互作用。聚丙烯酰胺是一种水溶性的线性高分子聚合物，具有很高的化学活性，易于通过接枝或交联改性材料。
修饰后的多胺-多酚氧化石墨烯是一种有利的交联酶聚体载体。将交联酶聚体与多胺-多酚氧化石墨烯载体固定化结合不仅可以提升交联酶聚体的机械强度，而且可以增强交联酶聚体的稳定性，提升其在工业生产中应用的可能性。
附图说明
图1.(A)GO和(B)GO-PDA/PEI的SEM图。
图2.不同PEI分子量的交联酶聚体酶活对比图。
图3.不同PDA/PEI比例的交联酶聚体的酶活图。
图4.以PDA/PEI共修饰GO为载体的交联酶聚体的温度耐受性图。
图5.以PDA/PEI共修饰GO为载体的交联酶聚体的pH耐受性图。
图6.以PDA/PEI共修饰GO为载体的交联酶聚体的可重复使用性。
具体实施方式
根据下述实施例，可以更好地理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的内容仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发明。
实施例1：多巴胺-聚乙烯亚胺共修饰氧化石墨烯(GO)为载体的腺苷酸环化酶(AC)交联酶聚体的制备
1、多巴胺-聚乙烯亚胺共修饰GO的制备
将100mg的GO溶于100ml的Tris-HCL缓冲液(pH8.5)中，通过超声使其均匀分散，制成1mg/mL的GO分散液。用Tris-HCL缓冲液配制2mg/ml的PEI溶液，量取50mg的DA加入PEI溶液中，并用容量瓶定容到50ml，得到DA/PEI混合溶液。取5ml氧化石墨烯分散液(1mg/mL)，加入2mlTris-HCL缓冲液和3ml DA/PEI混合溶液。最终体系为10ml，多巴胺浓度为0.3mg/ml，其中DA:PEI＝1:2。将混合液在25℃的摇床中反应16h，然后进行离心、洗涤、干燥，得到修饰后的载体GO-PEI/PDA。取等量的氧化石墨烯和GO-PEI/PDA固体，研磨成粉末，根据SEM图，证明GO得到修饰，如图1。
2、以多巴胺-聚乙烯亚胺共修饰GO为载体的交联酶聚体的制备
浓度为50mM的Nα,Nα-二(羧甲基)-L-赖氨酸水合物(NTA)溶液1mL与1mL浓度为50mM的NiCl2反应2h，然后与5mLAC酶溶液反应1h，所述AC酶溶液中蛋白浓度为4mg/mL，然后向其中加入2％戊二醛溶液5mL反应2h后得到AC酶交联酶聚体。取上述制得的1mg/mL的PDA-PEI氧化石墨烯5mL，与获得的交联酶聚体反应2h后离心洗涤，获得固定在多巴胺-聚乙烯亚胺GO载体上的交联酶聚体。
3、不同分子量PEI对固定在多巴胺-聚乙烯亚胺GO载体上的交联酶聚体性能的影响
按照获得PEI/PDA共修饰的GO载体的方法，改变其中的PEI分子量分别为600、1800、10000、70000，得到了GO-PDA/PEI 600、GO-PDA/PEI 1800、GO-PDA/PEI 10000、GO-PDA/PEI 70000。并将交联酶聚体固定在改性剂PEI分子量不同的氧化石墨烯载体上。
交联酶聚体催化反应：用5ml Tris-HCL(pH8.0)缓冲液将得到的腺苷酸环化酶的交联酶聚体分散取其中1mL。将9mL ATP反应液在30℃下预热一段时间加入1ml的腺苷酸环化酶的交联酶聚体，在30℃下摇床200rpm反应1h。反应后上清取出灭活，进行液相检测并计算相对酶活，结果如图2。
AC酶活定义：在特定条件下，每分钟生成1μmol产物所需的酶量为一个酶活单位(U)。
相对酶活和酶活回收率计算方式如下：
Figure BDA0002656157500000061
4、PDA与PEI单独修饰GO作为载体的交联酶聚体与共修饰GO为载体的交联酶聚体的性能对比
取5mlGO分散液(1mg/mL)，加入2mlTris-HCL缓冲液和3ml浓度为1mg/mL的DA溶液，最终体系为10ml，多巴胺浓度为0.3mg/ml。反应16h后获得PDA单独修饰的GO，将交联酶聚体固定在载体上并催化底物ATP反应。按照相同方法制备PEI单独修饰的GO并催化反应。最终PDA与PEI单独修饰GO作为载体的交联酶聚体相对酶活分别为24％和41％，与此同时的共修饰GO为载体的交联酶聚体的相对酶活可以达到95％。
5、修饰剂PDA/PEI比例变化对腺苷酸环化酶交联酶聚体性能的影响
配置PDA/PEI的混合溶液，使得PDA/PEI的比例分别为1:1，1:2。并按照实施例1所述方法制备修饰剂比例不同的氧化石墨烯载体。反应后获得固定在修饰剂比例不同的氧化石墨烯载体上的交联酶聚体。交联酶聚体催化反应后上清取出灭活，进行液相检测并计算相对酶活，结果如图3。
6、PDA/PEI共修饰GO上的腺苷酸环化酶交联酶聚体的稳定性
(1)温度稳定性：将交联酶聚体分别在反应温度为25℃，30℃，35℃，40℃，45℃，50℃，55℃，60℃，65℃下，按照上述实例中的方法催化反应，并计算相对酶活，结果如图4。
(2)pH稳定性：将交联酶聚体分别在pH为7.5，8.0，8.5，9.0，9.5以及10.0条件下的缓冲液中，按照上述实例中的方法催化反应，并计算相对酶活，结果如图5。
(3)可重复使用性：按上述方法制得的交联酶聚体，在催化反应后取出离心洗涤，重复催化反应的过程，一共重复五次，检测并计算交联酶聚体的相对酶活，结果如图6所示。
实施例2：多巴胺-聚赖氨酸共修饰GO为载体制备AC交联酶聚体
使用pH为8.5的Tris-HCL缓冲液配置5mg/mL的聚赖氨酸(EPL)溶液，在EPL溶液中溶解DA，使得溶液中的DA与EPL的比例为1：1，取5mL混合溶液加入5ml氧化石墨烯分散液(20mg/mL)，在30℃的摇床中反应24h，然后进行离心、洗涤、干燥，最终得到多巴胺-聚赖氨酸共修饰的GO。
将制备得到的多巴胺-聚赖氨酸共修饰的GO，按照实施例1的交联酶聚体制备方法进行处理，最终得到固定在多巴胺-聚赖氨酸氧化石墨烯上的AC交联酶聚体。
参照上述实施例1的腺苷酸环化酶酶活测定方法，测定结果表明，多巴胺-聚赖氨酸共修饰GO为载体的交联酶聚体的相对酶活依然达到90％左右。
使用DA和EPL分别单独修饰GO，DA溶液和EPL溶液使用缓冲液配置且浓度都为5mg/mL，载体修饰以及交联酶聚体的制备方法与上述方法相同。进行酶活检测后，PDA和EPL分别单独修饰的GO为载体的交联酶聚体的相对酶活分别为15％和5％。
在催化反应后将固定化交联酶聚体取出离心洗涤，重复催化反应的过程，一共重复五次，检测并计算交联酶聚体的相对酶活，重复利用5次后相对酶活依然能达到50％。
实施例3：单宁酸-聚醚胺共修饰GO为载体制备AC交联酶聚体
使用Tris-HCL缓冲液(pH7.5)配置2mg/mL的聚醚胺溶液，在聚醚胺溶液中溶解单宁酸，使得溶液中的单宁酸与聚醚胺的比例为1：1，取5mL混合溶液加入5ml氧化石墨烯分散液(1mg/mL)，在10℃的摇床中反应16h，然后进行离心、洗涤、干燥，最终得到单宁酸-聚醚胺共修饰的氧化石墨烯。
参照上述方法在体系中单独加入单宁酸、聚醚胺，分别制备单宁酸修饰的GO、聚醚胺修饰的GO。
浓度为100mM的三(羧甲基)乙二胺溶液1mL与1mL浓度为100mM的NiCl2反应1h，然后与5mLAC酶溶液反应1h，所述AC酶溶液中蛋白浓度为4mg/mL，然后向其中加入50mM的顺丁烯二酸酐5mL反应12h后得到交联酶聚体。取修饰后的1mg/mL的氧化石墨烯5mL，与获得的交联酶聚体反应2h后离心洗涤，获得固定在单宁酸-聚醚胺GO载体上的AC交联酶聚体。
参照上述方法制备固定在单宁酸修饰GO载体上的AC交联酶聚体和固定在聚醚胺修饰GO载体上的AC交联酶聚体。
参照实施例1中AC酶活测定方法，测定结果表明，单宁酸-聚醚胺共修饰GO为载体的交联酶聚体的相对酶活依然达到92％左右，而固定在单宁酸修饰GO载体上的AC交联酶聚体、固定在聚醚胺修饰GO载体上的AC交联酶聚体的相对酶活分别为10％和5％。
在催化反应后将固定化交联酶聚体取出离心洗涤，重复催化反应的过程，一共重复3次，检测并计算交联酶聚体的相对酶活，重复利用3次后相对酶活依然能达到50％左右。
实施例4：邻苯二酚-聚丙烯酰胺(PAM)共修饰GO为载体制备核酸酶P1交联酶聚体
在pH8.0的Tris-HCL缓冲液体系中，配置邻苯二酚与PAM的混合溶液，最终溶液中邻苯二酚的浓度为1mg/mL，而邻苯二酚与PAM的比例为1：2。使用配置好的混合溶液5mL与5mLGO溶液(5mg/mL)混合，在20℃的摇床中反应10h，然后进行离心、洗涤、干燥，最终得到固定在邻苯二酚-PAM共修饰的GO。
1mL浓度为20mM的亚氨基二乙酸(IDA)溶液与1mL浓度为20mM的NiCl2反应1h，然后与5mL核酸酶P1酶液反应2h，所述酶溶液中蛋白浓度为5mg/mL，然后向其中加入2％(v/v)己二胺溶液5mL反应10h后得到交联酶聚体。取修饰后的5mg/mL的氧化石墨烯5mL，与获得的交联酶聚体反应4h后离心洗涤，获得固定在邻苯二酚-聚丙烯酰胺GO载体上的核酸酶P1交联酶聚体。
在70℃恒温水浴9mL的底物溶液(质量分数为5％的RNA与0.2mol/L pH 5.0的醋酸缓冲液1:1混合)10min，用5ml Tris-HCL(pH8.0)缓冲液分散核酸酶P1交联酶聚体取其中1mL加入底物溶液，70℃反应15min后加入等体积核酸沉淀剂(0.25％钼酸铵-2.5％过氯酸)，冰水浴10min后离心、取上清，用纯水稀释，测定其260nm处的吸光值A260，其催化核糖核酸水解率达95％。
使用邻苯二酚和PAM分别单独修饰GO，邻苯二酚溶液和PAM溶液使用缓冲液配置且浓度分别为1mg/mL和2mg/mL，载体修饰以及交联酶聚体的制备方法与上述方法相同。进行酶活检测后，PDA和EPL分别单独修饰的GO为载体的交联酶聚体的核酸水解率分别为25％和5％。
在催化反应后将固定化交联酶聚体取出离心洗涤，重复催化反应的过程，一共重复5次，检测并计算交联酶聚体的相对酶活，重复利用5次后相对酶活依然能达到55％。
实施例5：没食子酸-四乙烯五胺共修饰GO为载体制备葡萄糖氧化酶/过氧化氢酶(CAT/GOx)交联酶聚体
在Tris-HCL缓冲液中，配置没食子酸与四乙烯五胺的混合溶液，最终溶液中没食子酸的浓度为0.5mg/mL，而没食子酸与四乙烯五胺的比例为1：2，溶液pH为7.0。使用配置好的混合溶液5mL与5mLGO溶液(10mg/mL)混合，进行共修饰步骤，得到固定在没食子酸-四乙烯五胺共修饰的GO。
参照上述方法在反应体系中单独加入没食子酸或四乙烯五胺制备没食子酸修饰的GO、四乙烯五胺修饰的GO。
将2.5mLGOx与2.5mLCAT混合得到混合酶液，酶活力比为1：5。1mL浓度为100mM的羧甲基天冬氨酸溶液与1mL浓度为50mM的NiCl2反应30min，然后与5mL混合酶液反应2h，然后向其中加入20mM的二重氮联苯胺-2,2’-二磺酸溶液5mL反应2h后得到交联酶聚体。取修饰后的10mg/mL的氧化石墨烯5mL，与获得的交联酶聚体反应2h后离心洗涤，获得固定在没食子酸-四乙烯五胺GO载体上的CAT/GOx交联酶聚体，酶活回收率为100％。
固定在没食子酸修饰的GO载体上的CAT/GOx交联酶聚体、固定在四乙烯五胺修饰的GO载体上的的CAT/GOx交联酶聚体的酶活回收率为5％和15％。
在催化反应后将固定化交联酶聚体取出离心洗涤，重复催化反应的过程，一共重复5次，检测并计算交联酶聚体的相对酶活，重复利用5次后相对酶活依然能达到95％。
实施例6：多巴胺-多聚精氨酸共修饰GO为载体制备脂肪酶交联酶聚体
在pH8.5的Tris-HCL缓冲液中，配置DA与多聚精氨酸的混合溶液，最终溶液中DA的浓度为0.1mg/mL，而DA与多聚精氨酸的比例为1：2。将配置的混合溶液5mL与5mLGO溶液(0.5mg/mL)混合，进行共修饰步骤,得到多巴胺-多聚精氨酸共修饰的GO。
参照上述方法在反应体系中单独加入多巴胺、多聚精氨酸分别制备多巴胺多修饰的GO、多聚精氨酸修饰的GO。
1mL浓度为50mM的亚氨基二乙酸溶液与1mL浓度为50mM的NiCl2反应2h，然后与1.2mg/mL的5mL脂肪酶溶液反应3h，然后向其中加入50mM的酚-2,4-二磺酰氯溶液5mL反应8h后得到交联酶聚体。取修饰后的0.5mg/mL的氧化石墨烯5mL，与获得的交联酶聚体反应1h后离心洗涤，获得固定在多巴胺-多聚精氨酸GO载体上的脂肪酶交联酶聚体。
取9mL棕榈酸对硝基苯酯，50℃预热5min，用5ml Tris-HCL(pH8.0)缓冲液分散脂肪酶交联酶聚体取其中1mL，加入预热后的底物溶液中，反应20min后，取出稀释5倍，测定其410nm处的吸光值。对应浓度的游离酶也催化相同反应，并进行紫外检测，比较两者的酶活，相对酶活达到98％。
固定在多巴胺多修饰的GO载体上的脂肪酶交联酶聚体、固定在多聚精氨酸修饰的GO载体上的脂肪酶交联酶聚体的相对酶活分别为30％和25％。
在催化反应后将固定化交联酶聚体取出离心洗涤，重复催化反应的过程，一共重复5次，检测并计算交联酶聚体的相对酶活，重复利用5次后相对酶活依然能达到65％。
实施例7：邻苯二酚-糖胺聚糖共修饰GO为载体制备纤维素酶交联酶聚体
在pH8.0的Tris-HCL缓冲液中，配置邻苯二酚、糖胺聚糖的混合溶液，最终溶液中邻苯二酚的浓度为2mg/mL，而邻苯二酚、糖胺聚糖的比例为1：2。将配置的5mL混合溶液与5mL GO溶液(10mg/mL)混合，进行共修饰步骤，得到邻苯二酚-糖胺聚糖共修饰的GO。
参照上述方法在体系中单独加入邻苯二酚或糖胺聚糖制备邻苯二酚修饰的GO、糖胺聚糖修饰的GO。
1mL浓度为50mM的羧甲基α，β-二氨基丁二酸溶液与1mL浓度为50mM的NiCl2反应2h，与5mg/mL的5mL纤维素酶溶液反应2h，然后向其中加入50mM的4,4’-二氟-3,3’-二硝基二苯砜溶液5mL反应10h后得到交联酶聚体。取共修饰后的10mg/mL的氧化石墨烯5mL，与获得的交联酶聚体反应1h后离心洗涤，获得固定在邻苯二酚-糖胺聚糖GO载体上的纤维素酶交联酶聚体。
取5mL的0.2g/mL的银杏叶植物材料，45℃预热10min后加入5mL纤维素酶交联酶聚体，反应2h后，测定银杏叶黄酮类化合物的提取率，以游离纤维素酶处理的银杏叶黄酮类化合物提取率为对照，可知相对酶活达到90％。
固定在邻苯二酚修饰的GO载体上的纤维素酶交联酶聚体、固定在糖胺聚糖修饰的GO载体上的纤维素酶交联酶聚体的相对酶活为20％和5％。
在催化反应后将固定化交联酶聚体取出离心洗涤，重复催化反应的过程，一共重复3次，检测并计算交联酶聚体的相对酶活，重复利用3次后相对酶活依然能达到45％。

Claims (1)

1.多胺-多酚修饰的氧化石墨烯载体在交联酶聚体领域中的应用，其特征在于，在Tris-HCL缓冲液中，配置没食子酸与四乙烯五胺的混合溶液，最终溶液中没食子酸的浓度为0.5 mg/mL，而没食子酸与四乙烯五胺的摩尔比为1：2，溶液pH为7.0，使用配置好的混合溶液5 mL与5 mL氧化石墨烯溶液混合，所述氧化石墨烯溶液中氧化石墨烯的浓度为10 mg/mL，得到没食子酸-四乙烯五胺共修饰的氧化石墨烯，即多胺-多酚修饰的氧化石墨烯载体；
将2.5 mL过氧化氢酶与2.5mL葡萄糖氧化酶混合得到混合酶液，酶活力比为1：5；1 mL浓度为100 mM的羧甲基天冬氨酸溶液与1 mL浓度为50 mM的NiCl2反应30 min，然后与5 mL混合酶液反应2h，然后向其中加入20 mM的二重氮联苯胺-2,2’-二磺酸溶液5 mL反应2h后得到交联酶聚体；取10 mg/mL的没食子酸-四乙烯五胺共修饰的氧化石墨烯 5 mL，与获得的交联酶聚体反应2 h后离心洗涤，获得固定在没食子酸-四乙烯五胺修饰的氧化石墨烯载体上的葡萄糖氧化酶/过氧化氢酶交联酶聚体。
CN202010888129.6A 2020-08-28 2020-08-28 一种多胺-多酚修饰的氧化石墨烯载体及其制备方法与应用 Active CN111961660B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010888129.6A CN111961660B (zh) 2020-08-28 2020-08-28 一种多胺-多酚修饰的氧化石墨烯载体及其制备方法与应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010888129.6A CN111961660B (zh) 2020-08-28 2020-08-28 一种多胺-多酚修饰的氧化石墨烯载体及其制备方法与应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN111961660A CN111961660A (zh) 2020-11-20
CN111961660B true CN111961660B (zh) 2022-12-06

Family

ID=73400912

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202010888129.6A Active CN111961660B (zh) 2020-08-28 2020-08-28 一种多胺-多酚修饰的氧化石墨烯载体及其制备方法与应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN111961660B (zh)

Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109234263A (zh) * 2018-09-27 2019-01-18 福建海峡石墨烯产业技术研究院有限公司 一种基于单磷酸腺苷与石墨烯的交联作用固定酶的方法
CN112877321A (zh) * 2021-02-05 2021-06-01 南京工业大学 一种制备石墨烯固定化酶的方法及其应用
CN114437927A (zh) * 2022-02-25 2022-05-06 重庆大学 一种仿生连续水解反应系统及其进行酶解的方法
CN114806025B (zh) * 2022-05-11 2023-03-14 无锡市金华屹圆科技有限公司 一种耐冷型水管及其加工工艺
CN115041154B (zh) * 2022-05-16 2023-11-07 山东大学 一种高密度氨基聚合物修饰氧化石墨烯吸附剂及其制备方法与应用
CN115069099B (zh) * 2022-07-04 2023-09-26 东华大学 具有高效核酸分离纯化功能的聚合物亲和膜的制法和应用
CN116570735B (zh) * 2023-07-13 2023-10-13 四川大学华西医院 一种药物纳米多级结构涂层及其制备方法

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US11208330B2 (en) * 2016-11-16 2021-12-28 The Regents Of The University Of California Identification and optimization of carbon radicals on hydrated graphene oxide for ubiquitous antibacterial coatings
CN107670654B (zh) * 2017-11-14 2020-06-05 齐鲁工业大学 一种高效去除六价铬离子的复合材料吸附剂及其制备方法
CN109456955B (zh) * 2018-08-28 2022-01-07 安徽医学高等专科学校 一种固定化右旋糖酐酶的制备方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN111961660A (zh) 2020-11-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN111961660B (zh) 一种多胺-多酚修饰的氧化石墨烯载体及其制备方法与应用
Sadeghzadeh et al. Removal of bisphenol A in aqueous solution using magnetic cross-linked laccase aggregates from Trametes hirsuta
Bilal et al. Magnetic nanoparticles as versatile carriers for enzymes immobilization: A review
Li et al. Enhancing enzyme activity and enantioselectivity of Burkholderia cepacia lipase via immobilization on melamine-glutaraldehyde dendrimer modified magnetic nanoparticles
Xia et al. Improved performance of immobilized laccase on amine-functioned magnetic Fe3O4 nanoparticles modified with polyethylenimine
Feng et al. Enhancement of the catalytic activity and stability of immobilized aminoacylase using modified magnetic Fe3O4 nanoparticles
Ling et al. Covalent immobilization of penicillin G acylase onto Fe 3 O 4@ chitosan magnetic nanoparticles
Fang et al. Preparation of magnetic chitosan nanoparticles and immobilization of laccase
IT8322155A1 (it) Procedimento per immobilizzare materie biologiche e composto di materie biologiche adsorbite in vermiculite
CN106929500A (zh) 葡萄糖氧化酶/过氧化氢酶的交联酶聚体的制备方法及其应用
CN114107275B (zh) 酶固定化载体及其制备方法、固定化酶及其制备方法
Pan et al. Crosslinking of enzyme coaggregate with polyethyleneimine: A simple and promising method for preparing stable biocatalyst of Serratia marcescens lipase
EP4144842A1 (en) Pei immobilized enzyme, and preparation method therefor and use thereof
Gao et al. Studies on characters of immobilizing penicillin G acylase on a novel composite support PEI/SiO2
CN110540986A (zh) 聚胺辅助天然多酚快速、稳定修饰磁性纳米固定化酶载体及应用
JP2023533280A (ja) Ｐｖａ膜固定化酵素及びその製造方法
JP7441953B2 (ja) 変性エポキシ樹脂固定化酵素、製造方法及び使用
Ayhan et al. Highly biocompatible enzyme aggregates crosslinked by L-lysine
Zhang et al. Studies on the co-immobilized GOD/CAT on cross-linked chitosan microsphere modified by lysine
Xiao et al. Surface activation of hierarchically porous diatomite modified with polyethyleneimine for immobilizing d-allulose 3-epimerase
CN106148319B (zh) 基于反应吸附法制备固定化酶的方法
Yu et al. A chemo-enzymatic process for sequential kinetic resolution of (R, S)-2-octanol under microwave irradiation
CN114525269A (zh) 一种基于聚乙二醇和超顺磁性氧化铁纳米颗粒共价结合固定化漆酶的方法
Zhang et al. Immobilization of laccase on organic-inorganic nanocomposites and its application in the removal of phenolic pollutants
CN113789320A (zh) 以磁性淀粉为载体的固定化酶制备方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant