CN111961653A - 一种新型冠状病毒鼠适应株SARS-CoV-2/WBP-1及应用 - Google Patents
一种新型冠状病毒鼠适应株SARS-CoV-2/WBP-1及应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明属于微生物技术领域，具体涉及一种新型冠状病毒鼠适应株SARS‑CoV‑2/WBP‑1及应用，所述的鼠适应株的保藏编号为CCTCC NO:V202031。该毒株在普通小鼠体内能够有效复制，并引发严重急性呼吸综合征的症状，包括引起小鼠死亡，体重极度下降，肺功能损伤，弥补了现有技术的不足，为疫苗研制、抗病毒药物研发、病毒感染机制和机体免疫反应等研究提供了有力的动物模型。
Description
技术领域
本发明属于微生物技术领域，具体涉及一种新型冠状病毒鼠适应株SARS-CoV-2/WBP-1及应用。
背景技术
严重急性呼吸综合征冠状病毒2型(severe acute respiratory syndromecoronavirus 2,SARS-CoV-2)简称新型冠状病毒，其引起的新型冠状病毒肺炎(coronavirus disease 19,COVID-19)于2019年底出现并呈现全球爆发，严重危害人类健康和公共卫生安全，给世界社会和经济带来巨大负担，引发全球范围内的高度关注。截止到2020年8月中旬，全球累计新冠肺炎确诊病例超过2000万例，死亡人数超过76万。目前关于新冠肺炎的研究主要集中在病毒流行病学调查、病毒检测方法、临床分离毒株序列比对和分析等方面，关于新型冠状病毒的入侵、复制、致病机制、免疫调控机制及抗病毒等研究还处于探索阶段。许多国内外学者推测新冠病毒或将类似于流感病毒，与人类长期共存。已有的研究报道和数据表明SARS-CoV-2的致死率远高于流感，然而到目前为止还没有专门针对新型冠状病毒治疗和预防的制剂或疫苗可以使用，因此亟需找到针对SARS-CoV-2的有效预防和治疗方法。研制新型冠状病毒疫苗及药物，有效控制新冠肺炎疫情，是摆在全世界科研工作者面前的一个重大使命，但目前新冠疫苗和药物研究中存在的一个难题就是缺少临床试验前的动物评价模型，包括对疫苗和药物安全性和有效性等的评估。
根据已有的文献报道，用于研究病毒发病机制的小动物模型如小鼠、仓鼠和豚鼠等对SARS类冠状病毒具有天然抗性，动物感染后不致病，冠状病毒诱发的严重呼吸系统疾病模型一直难以获得。目前主要使用人类血管紧张素转换酶2(hACE2)转基因小鼠进行药物和疫苗效果的动物评价，虽然hACE2转基因小鼠表现出一定的症状，但症状轻微、不致死，而且hACE2转基因小鼠价格昂贵，不易获得。因此，亟需一株对普通小鼠具有高致病性的新型冠状病毒毒株。SARS-CoV-2小鼠适应性毒株能够加快疫苗研制、抗病毒药物研发以及致病机理等研究。SARS-CoV-2动物模型构建对于评估抗病毒治疗和疫苗效果以及了解COVID-19的发病机制具有重要意义。但是关于能够有效感染小鼠产生适应性突变的新冠病毒毒株目前还未见报道。
发明内容
本发明的一个目的在于提供了一种新型冠状病毒鼠适应株SARS-CoV-2/WBP-1，所述的病毒的保藏编号为CCTCC NO:V202031。
本发明的另一个目的是提供一种新型冠状病毒鼠适应株SARS-CoV-2/WBP-1的应用。
为了达到上述目的，本发明采用以下技术措施：
一种新型冠状病毒鼠适应株SARS-CoV-2/WBP-1，将人源新型冠状病毒毒株感染小鼠，获得肺脏组织病毒匀浆液，将获得的组织病毒液再次感染小鼠，直至小鼠出现因病毒感染而死亡，从感染死亡小鼠体内分离病毒，进行RT-PCR检测和病毒空斑纯化；最终获得了对小鼠稳定致死的鼠适应株WBP-1，该毒株已于2020年8月17日送至中国典型培养物保藏中心(CCTCC)保藏，分类命名：新型冠状病毒SARS-CoV-2/WBP-1，保藏编号为CCTCC NO：V202031，地址：中国武汉武汉大学。将纯化获得的SARS-CoV-2/WBP-1鼠适应毒株进行全基因组测序，其序列为SEQ ID NO.1所示。该毒株本发明简称为WBP-1或鼠适应株WBP-1。
WBP-1鼠适应株可以在VERO细胞中增值并产生细胞病变。WBP-1在VERO细胞上增殖时，感染病毒后，37℃5％CO2恒温培养箱培养48-72h，80％以上细胞出现病变。
一种新型冠状病毒鼠适应株SARS-CoV-2/WBP-1的应用，包括：
1)利用该毒株制备成新型冠状病毒鼠模型，包括利用本领域的常规方式将该病毒感染鼠，以获得患病动物模型；
2)或是用于制备成新型冠状病毒药物筛选模型，包括利用本领域的常规方式将该病毒感染鼠构建得到动物模型后，用于筛选预防或治疗新冠肺炎的药物；
3)或是用于制备新型冠状病毒鼠适应株对照品，包括利用SEQ ID NO.1所示的序列进行对照，与新的鼠适应株进行比对；
4)或是制备成新型冠状病毒疫苗，包括利用本领域的常规方式，制备成灭活疫苗；或是利用本发明毒株中的一段特异性突变序列制备成疫苗；
5)或是用于制备成新型冠状病毒鼠适应株的突变株；包括利用本领域的常规方式，通过突变本发明的鼠适应株的基因序列后，获得新的鼠适应株的突变株。
6)或是用于制备成用于研究新型冠状病毒病毒学或是免疫学的试剂中的应用。
以上所述的应用中，优选的，所述的鼠为小鼠；
以上所述的应用中，优选的，所述的小鼠为Balb/c小鼠。
与现有技术相比，本发明具有以下优点：
本发明首次报道了一株鼠适应性新型冠状病毒毒株WBP-1，该毒株在普通小鼠体内能够有效复制，并引发严重急性呼吸综合征的症状，包括引起小鼠死亡，体重极度下降，肺功能损伤，弥补了现有技术的不足，为疫苗研制、抗病毒药物研发、病毒感染机制和机体免疫反应等研究提供了有力的动物模型。
附图说明
图1为本发明实验技术路线图。
图2为SARS-CoV-2鼠适应株WPB-1对小鼠存活率的影响示意图。
图3为SARS-CoV-2鼠适应株WPB-1对小鼠体重的影响示意图。
图4SARS-CoV-2鼠适应株WPB-1感染小鼠肺脏组织病理切片图；
其中，A，C为感染SARS-CoV-2鼠适应株WPB-1病毒组；B，D为DMEM对照组；黑色箭头表示肺泡间质增宽，淋巴细胞侵润，肺泡萎缩；灰色箭头表示有大量纤维素样渗出物。(A，B为放大200×；C，D为放大400×)。
具体实施方式
本发明实施例中的试验方法和条件如无特殊说明，均为常规方法。这些实施例仅用于说明本发明，本发明的保护范围不受这些实施例的限制。本发明所述的技术方案，如无特殊说明，均为领域的常规方案；所述试剂或材料如无特殊说明，均来源于商业渠道。本发明中所有与严重急性呼吸综合征冠状病毒(SARS-CoV-2)活病毒相关的试验均在生物安全三级实验室(ABSL3)完成。以下具体实施例对本发明做进一步阐述：
实施例1：
SARS-CoV-2毒株鼠适应株的获得：
将人源样品中分离获得的SARS-CoV-2毒株(wuhan-hu-1，NC_045512.2)滴鼻接种于10月龄雌性BALB/c小鼠，感染剂量为50ul，病毒含量为2.3×105PFU。感染3天后，解剖小鼠收集肺脏组织，匀浆，12000rpm离心5min，收集上清作为鼠适应性传代新冠病毒第1代。第1代肺脏组织匀浆液接种4-6周龄小鼠，3天后收获肺脏并且匀浆，得到第2代病毒液。以此在4-6周龄小鼠连续传代，得到第11代病毒液。在传代过程中，第9代小鼠第一次出现因病毒感染而死亡，连续传至14代，每代都会引起小鼠死亡。
将第11代肺脏组织匀浆上清液稀释103、104倍接种于VERO细胞，37℃孵育1h，弃去病毒液，对细胞进行冲洗后覆盖1％的琼脂糖凝胶无酚红DMEM培养基，培养2d，用无菌枪头挑取细胞空斑获得纯化的病毒，将纯化的毒株再次接种细胞进行空斑纯化，最终获得了对小鼠稳定致死的鼠适应株WBP-1，将第11代鼠适应性稳定毒株进行保藏。该毒株已于2020年8月17日送至中国典型培养物保藏中心(CCTCC)保藏，分类命名：新型冠状病毒SARS-CoV-2/WBP-1，保藏编号为CCTCC NO：V202031，地址：中国武汉武汉大学。
将纯化获得的SARS-CoV-2/WBP-1鼠适应毒株进行全基因组测序，其序列为SEQ IDNO.1所示。
新型冠状病毒RT-PCR检测鉴定引物如下：
F：5’-CCAGATGATTTTACAGGCTGCGTTA-3’
R：5’-TGTCAAGAATCTCAAGTGTCTGTGGATC-3’
扩增产物片段长度为484bp。
将保藏的鼠适应株WBP-1在VERO细胞上纯化3次，之后在VERO细胞上连续传代3次，每代病毒均会对小鼠致死，经PCR未发生突变，传代稳定，在本发明中，将该病毒简称为鼠适应株WBP-1。
实施例2：
鼠适应株WBP-1与人源野毒株比较突变位点的获得：
利用生物信息学手段，本发明通过对鼠适应株WBP-1全基因组测序及序列比对，得到了WBP-1与人源毒株wuhan-hu-1的序列比对，发现5个基因突变位点(见表1)，结果显示这些突变位点可能是导致鼠适应株的高致病性的原因，可利用这些位点进行其他的鼠适应株的开发或研究。
表1 SARS-CoV-2/WBP-1鼠适应株氨基酸突变位点
实施例3：
SARS-CoV-2鼠适应株WBP-1小鼠模型的构建以及WBP-1的毒力测定：
使用4-6周龄雌性BALB/c小鼠测定鼠适应株WBP-1的半数致死剂量。20只小鼠随机分为4组，每组5只，分别滴鼻感染50ul不同含量的病毒液，4个组中50ul病毒液中WBP-1病毒含量分别为102、103、104、105PFU，感染后每天观察并记录小鼠的体重和症状，连续观察10天，计算半数致死剂量LD50。对所有体重下降超过25％并且伴随有严重呼吸窘迫症状的小鼠进行解剖，取肺部组织进行组织切片观察。
结果如图2所示，感染后5天，感染剂量为102、103PFU时，小鼠全部死亡；104PFU感染组小鼠60％死亡，105PFU感染组小鼠全部存活，根据计算确定WBP-1对小鼠的半数致死剂量(LD50)为103.84PFU。由图3可知，病毒感染后小鼠的体重下降程度和病毒浓度呈正相关，随着病毒含量的的降低，体重下降趋势降低，图3中小鼠体重百分比的计算方式为感染病毒后不同时间各组小鼠体重平均值/感染第0天各组小鼠体重平均值*100％。如图4所示，小鼠感染WBP-1后，肺部组织切片显示肺泡间质增宽，淋巴细胞侵润，肺泡萎缩，有大量纤维素样渗出物。
因此，本发明提供的鼠适应株可以构建小鼠模型，用于疫苗研制、抗病毒药物研发、病毒感染机制和机体免疫反应等研究。
序列表
<110> 华中农业大学
<120> 一种新型冠状病毒鼠适应株SARS-CoV-2/WBP-1及应用
<160> 3
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 29218
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
tgagtgcact aagcatgcag ccgagtgaca gccacacaga ttttaaagtt cgtttagaga 60
acagatctac aagagatcga aagttggttg gtttgttacc tgggaaggta taaaccaacc 120
aactttcgat ctcttgtaga tctgttctct aaacgaactt taaaatctgt gtggctgtca 180
ctcggctgca tgcttagtgc actcacgcag tataattaat aactaattac tgtcgttgac 240
aggacacgag taactcgtct atcttctgca ggctgcttac ggtttcgtcc gtgttgcagc 300
cgatcatcag cacatctagg tttcgtccgg gtgtgaccga aaggtaagat ggagagcctt 360
gtccctggtt tcaacgagaa aacacacgtc caactcagtt tgcctgtttt acaggttcgc 420
gacgtgctcg tacgtggctt tggagactcc gtggaggagg tcttatcaga ggcacgtcaa 480
catcttaaag atggcacttg tggcttagta gaagttgaaa aaggcgtttt gcctcaactt 540
gaacagccct atgtgttcat caaacgttcg gatgctcgaa ctgcacctca tggtcatgtt 600
atggttgagc tggtagcaga actcgaaggc attcagtacg gtcgtagcgg tgagacactt 660
ggtgtccttg tccctcatgt gggcgaaata ccagtggctt accgcaaggt tcttcttcgt 720
aagaacggta ataaaggagc tggtggccat agttacggcg ccgatctaaa gtcatttgac 780
ttaggcgacg agcttggcac tgatccttat gaagattttc aagaaaactg gaacactaaa 840
catagcagtg gtgttacccg tgaactcatg cgtgagctta acggaggggc atacactcgc 900
tatgtcgata acaacttctg tggccctgat ggctaccctc ttgagtgcat taaagacctt 960
ctagcacgtg ctggtaaagc ttcatgcact ttgtccgaac aactggactt tattgacact 1020
aagaggggtg tatactgctg ccgtgaacat gagcatgaaa ttgcttggta cacggaacgt 1080
tctgaaaaga gctatgaatt gcagacacct tttgaaatta aattggcaaa gaaatttgac 1140
accttcaatg gggaatgtcc aaattttgta tttcccttaa attccataat caagactatt 1200
caaccaaggg ttgaaaagaa aaagcttgat ggctttatgg gtagaattcg atctgtctat 1260
ccagttgcgt caccaaatga atgcaaccaa atgtgccttt caactctcat gaagtgtgat 1320
cattgtggtg aaacttcatg gcagacgggc gattttgtta aagccacttg cgaattttgt 1380
ggcactgaga atttgactaa agaaggtgcc actacttgtg gttacttacc ccaaaatgct 1440
gttgttaaaa tttattgtcc agcatgtcac aattcagaag taggacctga gcatagtctt 1500
gccgaatacc ataatgaatc tggcttgaaa accattcttc gtaagggtgg tcgcactatt 1560
gcctttggag gctgtgtgtt ctcttatgtt ggttgccata acaagtgtgc ctattgggtt 1620
ccacgtgcta gcgctaacat aggttgtaac catacaggtg ttgttggaga aggttccgaa 1680
ggtcttaatg acaaccttct tgaaatactc caaaaagaga aagtcaacat caatattgtt 1740
ggtgacttta aacttaatga agagatcgcc attattttgg catctttttc tgcttccaca 1800
agtgcttttg tggaaactgt gaaaggtttg gattataaag cattcaaaca aattgttgaa 1860
tcctgtggta attttaaagt tacaaaagga aaagctaaaa aaggtgcctg gaatattggt 1920
gaacagaaat caatactgag tcctctttat gcatttgcat cagaggctgc tcgtgttgta 1980
cgatcaattt tctctcgcac tcttgaaact gctcaaaatt ctgtgcgtgt tttacagaag 2040
gccgctataa caatactaga tggaatttca cagtattcac tgagactcat tgatgctatg 2100
atgttcacat ctgatttggc tactaacaat ctagttgtaa tggcctacat tacaggtggt 2160
gttgttcagt tgacttcgca gtggctaact aacatctttg gcactgttta tgaaaaactc 2220
aaacccgtcc ttgattggct tgaagagaag tttaaggaag gtgtagagtt tcttagagac 2280
ggttgggaaa ttgttaaatt tatctcaacc tgtgcttgtg aaattgtcgg tggacaaatt 2340
gtcacctgtg caaaggaaat taaggagagt gttcagacat tctttaagct tgtaaataaa 2400
tttttggctt tgtgtgctga ctctatcatt attggtggag ctaaacttaa agccttgaat 2460
ttaggtgaaa catttgtcac gcactcaaag ggattgtaca gaaagtgtgt taaatccaga 2520
gaagaaactg gcctactcat gcctctaaaa gccccaaaag aaattatctt cttagaggga 2580
gaaacacttc ccacagaagt gttaacagag gaagttgtct tgaaaactgg tgatttacaa 2640
ccattagaac aacctactag tgaagctgtt gaagctccat tggttggtac accagtttgt 2700
attaacgggc ttatgttgct cgaaatcaaa gacacagaaa agtactgtgc ccttgcacct 2760
aatatgatgg taacaaacaa taccttcaca ctcaaaggcg gtgcaccaac aaaggttact 2820
tttggtgatg acactgtgat agaagtgcaa ggttacaaga gtgtgaatat cacttttgaa 2880
cttgatgaaa ggattgataa agtacttaat gagaagtgct ctgcctatac agttgaactc 2940
ggtacagaag taaatgagtt cgcctgtgtt gtggcagatg ctgtcataaa aactttgcaa 3000
ccagtatctg aattacttac accactgggc attgatttag atgagtggag tatggctaca 3060
tactacttat ttgatgagtc tggtgagttt aaattggctt cacatatgta ttgttctttc 3120
taccctccag atgaggatga agaagaaggt gattgtgaag aagaagagtt tgagccatca 3180
actcaatatg agtatggtac tgaagatgat taccaaggta aacctttgga atttggtgcc 3240
acttctgctg ctcttcaacc tgaagaagag caagaagaag attggttaga tgatgatagt 3300
caacaaactg ttggtcaaca agacggcagt gaggacaatc agacaactac tattcaaaca 3360
attgttgagg ttcaacctca attagagatg gaacttacac cagttgttca gactattgaa 3420
gtgaatagtt ttagtggtta tttaaaactt actgacaatg tatacattaa aaatgcagac 3480
attgtggaag aagctaaaaa ggtaaaacca acagtggttg ttaatgcagc caatgtttac 3540
cttaaacatg gaggaggtgt tgcaggagcc ttaaataagg ctactaacaa tgccatgcaa 3600
gttgaatctg atgattacat agctactaat ggaccactta aagtgggtgg tagttgtgtt 3660
ttaagcggac acaatcttgc taaacactgt cttcatgttg tcggcccaaa tgttaacaaa 3720
ggtgaagaca ttcaacttct taagagtgct tatgaaaatt ttaatcagca cgaagttcta 3780
cttgcaccat tattatcagc tggtattttt ggtgctgacc ctatacattc tttaagagtt 3840
tgtgtagata ctgttcgcac aaatgtctac ttagctgtct ttgataaaaa tctctatgac 3900
aaacttgttt caagcttttt ggaaatgaag agtgaaaagc aagttgaaca aaagatcgct 3960
gagattccta aagaggaagt taagccattt ataactgaaa gtaaaccttc agttgaacag 4020
agaaaacaag atgataagaa aatcaaagct tgtgttgaag aagttacaac aactctggaa 4080
gaaactaagt tcctcacaga aaacttgtta ctttatattg acattaatgg caatcttcat 4140
ccagattctg ccactcttgt tagtgacatt gacatcactt tcttaaagaa agatgctcca 4200
tatatagtgg gtgatgttgt tcaagagggt gttttaactg ctgtggttat acctactaaa 4260
aaggctggtg gcactactga aatgctagcg aaagctttga gaaaagtgcc aacagacaat 4320
tatataacca cttacccggg tcagggttta aatggttaca ctgtagagga ggcaaagaca 4380
gtgcttaaaa agtgtaaaag tgccttttac attctaccat ctattatctc taatgagaag 4440
caagaaattc ttggaactgt ttcttggaat ttgcgagaaa tgcttgcaca tgcagaagaa 4500
acacgcaaat taatgcctgt ctgtgtggaa actaaagcca tagtttcaac tatacagcgt 4560
aaatataagg gtattaaaat acaagagggt gtggttgatt atggtgctag attttacttt 4620
tacaccagta aaacaactgt agcgtcactt atcaacacac ttaacgatct aaatgaaact 4680
cttgttacaa tgccacttgg ctatgtaaca catggcttaa atttggaaga agctgctcgg 4740
tatatgagat ctctcaaagt gccagctaca gtttctgttt cttcacctga tgctgttaca 4800
gcgtataatg gttatcttac ttcttcttct aaaacacctg aagaacattt tattgaaacc 4860
atctcacttg ctggttccta taaagattgg tcctattctg gacaatctac acaactaggt 4920
atagaatttc ttaagagagg tgataaaagt gtatattaca ctagtaatcc taccacattc 4980
cacctagatg gtgaagttat cacctttgac aatcttaaga cacttctttc tttgagagaa 5040
gtgaggacta ttaaggtgtt tacaacagta gacaacatta acctccacac gcaagttgtg 5100
gacatgtcaa tgacatatgg acaacagttt ggtccaactt atttggatgg agctgatgtt 5160
actaaaataa aacctcataa ttcacatgaa ggtaaaacat tttatgtttt acctaatgat 5220
gacactctac gtgttgaggc ttttgagtac taccacacaa ctgatcctag ttttctgggt 5280
aggtacatgt cagcattaaa tcacactaaa aagtggaaat acccacaagt taatggttta 5340
acttctatta aatgggcaga taacaactgt tatcttgcca ctgcattgtt aacactccaa 5400
caaatagagt tgaagtttaa tccacctgct ctacaagatg cttattacag agcaagggct 5460
ggtgaagctg ctaacttttg tgcacttatc ttagcctact gtaataagac agtaggtgag 5520
ttaggtgatg ttagagaaac aatgagttac ttgtttcaac atgccaattt agattcttgc 5580
aaaagagtct tgaacgtggt gtgtaaaact tgtggacaac agcagacaac ccttaagggt 5640
gtagaagctg ttatgtacat gggcacactt tcttatgaac aatttaagaa aggtgttcag 5700
ataccttgta cgtgtggtaa acaagctaca aaatatctag tacaacagga gtcacctttt 5760
gttatgatgt cagcaccacc tgctcagtat gaacttaagc atggtacatt tacttgtgct 5820
agtgagtaca ctggtaatta ccagtgtggt cactataaac atataacttc taaagaaact 5880
ttgtattgca tagacggtgc tttacttaca aagtcctcag aatacaaagg tcctattacg 5940
gatgttttct acaaagaaaa cagttacaca acaaccataa aaccagttac ttataaattg 6000
gatggtgttg tttgtacaga aattgaccct aagttggaca attattataa gaaagacaat 6060
tcttatttca cagagcaacc aattgatctt gtaccaaacc aaccatatcc aaacgcaagc 6120
ttcgataatt ttaagtttgt atgtgataat atcaaatttg ctgatgattt aaaccagtta 6180
actggttata agaaacctgc ttcaagagag cttaaagtta catttttccc tgacttaaat 6240
ggtgatgtgg tggctattga ttataaacac tacacaccct cttttaagaa aggagctaaa 6300
ttgttacata aacctattgt ttggcatgtt aacaatgcaa ctaataaagc cacgtataaa 6360
ccaaatacct ggtgtatacg ttgtctttgg agcacaaaac cagttgaaac atcaaattcg 6420
tttgatgtac tgaagtcaga ggacgcgcag ggaatggata atcttgcctg cgaagatcta 6480
aaaccagtct ctgaagaagt agtggaaaat cctaccatac agaaagacgt tcttgagtgt 6540
aatgtgaaaa ctaccgaagt tgtaggagac attatactta aaccagcaaa taatagttta 6600
aaaattacag aagaggttgg ccacacagat ctaatggctg cttatgtaga caattctagt 6660
cttactatta agaaacctaa tgaattatct agagtattag gtttgaaaac ccttgctact 6720
catggtttag ctgctgttaa tagtgtccct tgggatacta tagctaatta tgctaagcct 6780
tttcttaaca aagttgttag tacaactact aacatagtta cacggtgttt aaaccgtgtt 6840
tgtactaatt atatgcctta tttctttact ttattgctac aattgtgtac ttttactaga 6900
agtacaaatt ctagaattaa agcatctatg ccgactacta tagcaaagaa tactgttaag 6960
agtgtcggta aattttgtct agaggcttca tttaattatt tgaagtcacc taatttttct 7020
aaactgataa atattataat ttggttttta ctattaagtg tttgcctagg ttctttaatc 7080
tactcaaccg ctgctttagg tgttttaatg tctaatttag gcatgccttc ttactgtact 7140
ggttacagag aaggctattt gaactctact aatgtcacta ttgcaaccta ctgtactggt 7200
tctatacctt gtagtgtttg tcttagtggt ttagattctt tagacaccta tccttcttta 7260
gaaactatac aaattaccat ttcatctttt aaatgggatt taactgcttt tggcttagtt 7320
gcagagtggt ttttggcata tattcttttc actaggtttt tctatgtact tggattggct 7380
gcaatcatgc aattgttttt cagctatttt gcagtacatt ttattagtaa ttcttggctt 7440
atgtggttaa taattaatct tgtacaaatg gccccgattt cagctatggt tagaatgtac 7500
atcttctttg catcatttta ttatgtatgg aaaagttatg tgcatgttgt agacggttgt 7560
aattcatcaa cttgtatgat gtgttacaaa cgtaatagag caacaagagt cgaatgtaca 7620
actattgtta atggtgttag aaggtccttt tatgtctatg ctaatggagg taaaggcttt 7680
tgcaaactac acaattggaa ttgtgttaat tgtgatacat tctgtgctgg tagtacattt 7740
attagtgatg aagttgcgag agacttgtca ctacagttta aaagaccaat aaatcctact 7800
gaccagtctt cttacatcgt tgatagtgtt acagtgaaga atggttccat ccatctttac 7860
tttgataaag ctggtcaaaa gacttatgaa agacattctc tctctcattt tgttaactta 7920
gacaacctga gagctaataa cactaaaggt tcattgccta ttaatgttat agtttttgat 7980
ggtaaatcaa aatgtgaaga atcatctgca aaatcagcgt ctgtttacta cagtcagctt 8040
atgtgtcaac ctatactgtt actagatcag gcattagtgt ctgatgttgg tgatagtgcg 8100
gaagttgcag ttaaaatgtt tgatgcttac gttaatacgt tttcatcaac ttttaacgta 8160
ccaatggaaa aactcaaaac actagttgca actgcagaag ctgaacttgc aaagaatgtg 8220
tccttagaca atgtcttatc tacttttatt tcagcagctc ggcaagggtt tgttgattca 8280
gatgtggaaa ctaaagatgt tgttgaatgt cttaaattgt cacatcaatc tgacatagaa 8340
gttactggcg atagttgtaa taactatatg ctcacctata acaaagttga aaacatgaca 8400
ccccgtgacc ttggtgcttg tattgactgt agtgcgcgtc atattaatgc gcaggtagca 8460
aaaagtcaca acattgcttt gatatggaac gttaaagatt tcatgtcatt gtctgaacaa 8520
ctacgaaaac aaatacgtag tgctgctaaa aagaataact taccttttaa gttgacatgt 8580
gcaactacta gacaagttgt taatgttgta acaacaaaga tagcacttaa gggtggtaaa 8640
attgttaata attggttgaa gcagttaatt aaagttacac ttgtgttcct ttttgttgct 8700
gctattttct atttaataac acctgttcat gtcatgtcta aacatactga cttttcaagt 8760
gaaatcatag gatacaaggc tattgatggt ggtgtcactc gtgacatagc atctacagat 8820
acttgttttg ctaacaaaca tgctgatttt gacacatggt ttagccagcg tggtggtagt 8880
tatactaatg acaaagcttg cccattgatt gctgcagtca taacaagaga agtgggtttt 8940
gtcgtgcctg gtttgcctgg cacgatatta cgcacaacta atggtgactt tttgcatttc 9000
ttacctagag tttttagtgc agttggtaac atctgttaca caccatcaaa acttatagag 9060
tacactgact ttgcaacatc agcttgtgtt ttggctgctg aatgtacaat ttttaaagat 9120
gcttctggta agccagtacc atattgttat gataccaatg tactagaagg ttctgttgct 9180
tatgaaagtt tacgccctga cacacgttat gtgctcatgg atggctctat tattcaattt 9240
cctaacacct accttgaagg ttctgttaga gtggtaacaa cttttgattc tgagtactgt 9300
aggcacggca cttgtgaaag atcagaagct ggtgtttgtg tatctactag tggtagatgg 9360
gtacttaaca atgattatta cagatcttta ccaggagttt tctgtggtgt agatgctgta 9420
aatttactta ctaatatgtt tacaccacta attcaaccta ttggtgcttt ggacatatca 9480
gcatctatag tagctggtgg tattgtagct atcgtagtaa catgccttgc ctactatttt 9540
atgaggttta gaagagcttt tggtgaatac agtcatgtag ttgcctttaa tactttacta 9600
ttccttatgt cattcactgt actctgttta acaccagttt actcattctt acctggtgtt 9660
tattctgtta tttacttgta cttgacattt tatcttacta atgatgtttc ttttttagca 9720
catattcagt ggatggttat gttcacacct ttagtacctt tctggataac aattgcttat 9780
atcatttgta tttccacaaa gcatttctat tggttcttta gtaattacct aaagagacgt 9840
gtagtcttta atggtgtttc ctttagtact tttgaagaag ctgcgctgtg cacctttttg 9900
ttaaataaag aaatgtatct aaagttgcgt agtgatgtgc tattacctct tacgcaatat 9960
aatagatact tagctcttta taataagtac aagtatttta gtggagcaat ggatacaact 10020
agctacagag aagctgcttg ttgtcatctc gcaaaggctc tcaatgactt cagtaactca 10080
ggttctgatg ttctttacca accaccacaa acctctatca cctcagctgt tttgcagagt 10140
ggttttagaa aaatggcatt cccatctggt aaagttgagg gttgtatggt acaagtaact 10200
tgtggtacaa ctacacttaa cggtctttgg cttgatgacg tagtttactg tccaagacat 10260
gtgatctgca cctctgaaga catgcttaac cctaattatg aagatttact cattcgtaag 10320
tctaatcata atttcttggt acaggctggt aatgttcaac tcagggttat tggacattct 10380
atgcaaaatt gtgtacttaa gcttaaggtt gatacagcca atcctaagac acctaagtat 10440
aagtttgttc gcattcaacc aggacagact ttttcagtgt tagcttgtta caatggttca 10500
ccatctggtg tttaccaatg tgctatgagg cccaatttca ctattaaggg ttcattcctt 10560
aatggttcat gtggtagtgt tggttttaac atagattatg actgtgtctc tttttgttac 10620
atgcaccata tggaattacc aactggagtt catgctggca cagacttaga aggtaacttt 10680
tatggacctt ttgttgacag gcaaacagca caagcagctg gtacggacac aactattaca 10740
gttaatgttt tagcttggtt gtacgctgct gttataaatg gagacaggtg gtttctcaat 10800
cgatttacca caactcttaa tgactttaac cttgtggcta tgaagtacaa ttatgaacct 10860
ctaacacaag accatgttga catactagga cctctttctg ctcaaactgg aattgccgtt 10920
ttagatatgt gtgcttcatt aaaagaatta ctgcaaaatg gtatgaatgg acgtaccata 10980
ttgggtagtg ctttattaga agatgaattt acacctcttg atgttgttag acaatgctca 11040
ggtgttactt tccaaagtgc agtgaaaaga acaaccaagg gtacacacca ctggttgtta 11100
ctcacaattt tgacttcact tttagtttta gtccagagta ctcaatggtc tttgttcttt 11160
tttttgtatg aaaatgcctt tttacctttt gctatgggta ttattgctat gtctgctttt 11220
gcaatgatgt ttgtcaaaca taagcatgca tttctctgtt tgtttttgtt accttctctt 11280
gccactgtag cttattttaa tatggtctat atgcctgcta gttgggtgat gcgtattatg 11340
acatggttgg atatggttga tactagtttg tctggtttta agctaaaaga ctgtgttatg 11400
tatgcatcag ctgtagtgtt actaatcctt atgacagcaa gaactgtgta tgatgatggt 11460
gctaggagag tgtggacact tatgaatgtc ttgacactcg tttataaagt ttattatggt 11520
aatgctttag atcaagccat ttccatgtgg gctcttataa tctctgttac ttctaactac 11580
tcaggtgtag ttacaactgt catgtttttg gccagaggta ttgtttttat gtgtgttgag 11640
tattgcccta ttttcttcat aactggtaat acacttcagt gtataatgct agtttattgt 11700
ttcttaggct atttttgtac ttgttacttt ggcctctttt gtttactcaa ccgctacttt 11760
agactgactc ttggtgttta tgattactta gtttctacac aggagtttag atatatgaat 11820
tcacagggac tactcccacc caagaatagc atagatgcct tcaaactcaa cattaaattg 11880
ttgggtgttg gtggcaaacc ttgtatcaaa gtagccactg tacagtctaa aatgtcagat 11940
gtaaagtgca catcagtagt cttactctca gttttgcaac aactcagagt agaatcatca 12000
tctaaattgt gggctcaatg tgtccagtta cacaatgaca ttctcttagc taaagatact 12060
actgaagcct ttgaaaaaat ggtttcacta ctttctgttt tgctttccat gcagggtgct 12120
gtagacataa acaagctttg tgaagaaatg ctggacaaca gggcaacctt acaagctata 12180
gcctcagagt ttagttccct tccatcatat gcagcttttg ctactgctca agaagcttat 12240
gagcaggctg ttgctaatgg tgattctgaa gttgttctta aaaagttgaa gaagtctttg 12300
aatgtggcta aatctgaatt tgaccgtgat gcagccatgc aacgtaagtt ggaaaagatg 12360
gctgatcaag ctatgaccca aatgtataaa caggctagat ctgaggacaa gagggcaaaa 12420
gttactagtg ctatgcagac aatgcttttc actatgctta gaaagttgga taatgatgca 12480
ctcaacaaca ttatcaacaa tgcaagagat ggttgtgttc ccttgaacat aatacctctt 12540
acaacagcag ccaaactaat ggttgtcata ccagactata acacatataa aaatacgtgt 12600
gatggtacaa catttactta tgcatcagca ttgtgggaaa tccaacaggt tgtagatgca 12660
gatagtaaaa ttgttcaact tagtgaaatt agtatggaca attcacctaa tttagcatgg 12720
cctcttattg taacagcttt aagggccaat tctgctgtca aattacagaa taatgagctt 12780
agtcctgttg cactacgaca gatgtcttgt gctgccggta ctacacaaac tgcttgcact 12840
gatgacaatg cgttagctta ctacaacaca acaaagggag gtaggtttgt acttgcactg 12900
ttatccgatt tacaggattt gaaatgggct agattcccta agagtgatgg aactggtact 12960
atctatacag aactggaacc accttgtagg tttgttatag acacacctaa aggtcctaaa 13020
gtgaagtatt tatactttat taaaggatta aacaacctaa atagaggtat ggtacttggt 13080
agtttagctg ccacagtacg tctacaagct ggtaatgcaa cagaagtgcc tgccaattca 13140
actgtattat ctttctgtgc ttttgctgta gatgctgcta aagcttacaa agattatcta 13200
gctagtgggg gacaaccaat cactaattgt gttaagatgt tgtgtacaca cactggtact 13260
ggtcaggcaa taacagttac accggaagcc aatatggatc aagaatcctt tggtggtgca 13320
tcgtgttgtc tgtactgccg ttgccacata gatcatccaa atcctaaagg attttgtgac 13380
ttaaaaggta agtatgtaca aatacctaca acttgtgcta atgaccctgt gggttttaca 13440
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cctgtttacc ttttacaatt aattgccagg aacctaaatt gggtagtctt gtagtgcgtt 27540
gttcgttcta tgaagacttt ttagagtatc atgacgttcg tgttgtttta gatttcatct 27600
aaacgaacaa actaaaatgt ctgataatgg accccaaaat cagcgaaatg caccccgcat 27660
tacgtttggt ggaccctcag attcaactgg cagtaaccag aatggagaac gcagtggggc 27720
gcgatcaaaa caacgtcggc cccaaggttt acccaataat actgcgtctt ggttcaccgc 27780
tctcactcaa catggcaagg aagaccttaa attccctcga ggacaaggcg ttccaattaa 27840
caccaatagc agtccagatg accaaattgg ctactaccga agagctacca gacgaattcg 27900
tggtggtgac ggtaaaatga aagatctcag tccaagatgg tatttctact acctaggaac 27960
tgggccagaa gctggacttc cctatggtgc taacaaagac ggcatcatat gggttgcaac 28020
tgagggagcc ttgaatacac caaaagatca cattggcacc cgcaatcctg ctaacaatgc 28080
tgcaatcgtg ctacaacttc ctcaaggaac aacattgcca aaaggcttct acgcagaagg 28140
gagcagaggc ggcagtcaag cctcttctcg ttcctcatca cgtagtcgca acagttcaag 28200
aaattcaact ccaggcagca gtaggggaac ttctcctgct agaatggctg gcaatggcgg 28260
tgatgctgct cttgctttgc tgctgcttga cagattgaac cagctcgaga gcaaaatgtc 28320
tggtaaaggc caacaacaac aaggccaaac tgtcactaag aaatctgctg ctgaggcttc 28380
taagaagcct cggcaaaaac gtactgccac taaagcatac aatgtaacac aagctttcgg 28440
cagacgtggt ccagaacaaa cccaaggaaa ttttggggac caggaactaa tcagacaagg 28500
aactgattac aaacattggc cgcaaattgc acaatttgcc cccagcgctt cagcgttctt 28560
cggaatgtcg cgcattggca tggaagtcac accttcggga acgtggttga cctacacagg 28620
tgccatcaaa ttggatgaca aagatccaaa tttcaaagat caagtcattt tgctgaataa 28680
gcatattgac gcatacaaaa cattcccacc aacagagcct aaaaaggaca aaaagaagaa 28740
ggctgatgaa actcaagcct taccgcagag acagaagaaa cagcaaactg tgactcttct 28800
tcctgctgca gatttggatg atttctccaa acaattgcaa caatccatga gcagtgctga 28860
ctcaactcag gcctaaactc atgcagacca cacaaggcag atgggctata taaacatttt 28920
cgcttttccg tttacgatat atagtctact cttgtgcaga atgaattctc gtaactacat 28980
agcacaagta gatgtagtta actttaatct cacatagcaa tctttaatca gtgtgtaaca 29040
ttagggagga cttgaaagag ccaccacatt ttcaccgagg ccacgcggag tacgatcgag 29100
tgtacagtga acaatgctag ggagagctgc ctatatggaa gagccctaat gtgtaaaatt 29160
aattttagta gtgctatccc catgtgattt taatagcttc ttaggagaat gacaaaaa 29218
<210> 2
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
ccagatgatt ttacaggctg cgtta 25
<210> 3
<211> 28
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
tgtcaagaat ctcaagtgtc tgtggatc 28
Claims (9)
1.一种新型冠状病毒鼠适应株，所述的鼠适应株的保藏编号为CCTCC NO:V202031。
2.权利要求1所述的新型冠状病毒鼠适应株在制备新型冠状病毒鼠模型中的应用。
3.权利要求1所述的新型冠状病毒鼠适应株在用于制备新型冠状病毒药物筛选模型中的应用。
4.权利要求1所述的新型冠状病毒鼠适应株在制备新型冠状病毒鼠适应株对照品中的应用。
5.权利要求1所述的新型冠状病毒鼠适应株在制备新型冠状病毒疫苗中的应用。
6.权利要求1所述的新型冠状病毒鼠适应株在在制备新型冠状病毒鼠适应株的突变株中的应用。
7.权利要求1所述的新型冠状病毒鼠适应株在制备研究新型冠状病毒病毒学或是免疫学的试剂中的应用。
8.根据权利要求2所述的应用，所述的鼠为小鼠。
9.根据权利要求所述的新型冠状病毒鼠适应株的核苷酸序列为SEQ ID NO.1所示。
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