CN111961129A - 一种卵白蛋白酶解物及其制备方法和应用 - Google Patents

一种卵白蛋白酶解物及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种卵白蛋白酶解物及其制备方法和应用，该卵白蛋白酶解物由木瓜蛋白酶、胰蛋白酶和短小芽孢杆菌蛋白酶三种酶组合酶解而得，该卵白蛋白酶解物在改善肝功能方面具有较好的效果；本发明将该卵白蛋白酶解物与灵芝提取物进行复配，能够协同增效增强免疫力。

Description

一种卵白蛋白酶解物及其制备方法和应用
技术领域
本发明具体涉及一种卵白蛋白酶解物及其制备方法和应用。
背景技术
卵白中属于白蛋白部分的蛋白质。通常指的是其主要成分(约占卵白的65％)的卵清蛋白。除此外卵白中还存在着少量(约14％)的称为伴清蛋白的白蛋白。然而卵白蛋白在应用时不易直接被机体和皮肤吸收，必须将它水解成氨基酸和多肽才能被机体吸收。酶解卵白蛋白多肽作为一种生物活性肽，具有抗突变、防辐射、抗疲劳、保护肝脏、抗氧化、降血脂、降血压等生理功能，在食品、化妆品、医疗、化工等领域有巨大的开发和应用价值。现有技术中有很多方法将卵白蛋白酶解，但得到的酶解产物的功能不够理想。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术存在的不足而提供了一种卵白蛋白酶解物及其制备方法和应用，本发明采用由木瓜蛋白酶、胰蛋白酶和短小芽孢杆菌蛋白酶组成的复合蛋白酶对卵白蛋白酶解，得到的卵白蛋白酶解物具有良好的保肝效果。本发明还提供了一种组合物，该组合物能够显著增强免疫力。
为实现上述目的，所采取的技术方案：一种卵白蛋白酶解物的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
(1)将卵白蛋白粉溶解于蒸馏水中，得到卵白蛋白溶液；
(2)将步骤(1)得到的卵白蛋白溶液的pH值调节为7-10，加入复合蛋白酶，所述复合蛋白酶为木瓜蛋白酶、胰蛋白酶和短小芽孢杆菌蛋白酶的混合物，在搅拌状态下进行酶解反应，得到酶解液；
(3)将步骤(2)得到的酶解液在90-100℃下灭酶；
(4)将灭酶后的酶解液进行离心，收集上清液，将上清液灭菌、浓缩、干燥后得干粉，即为所述卵白蛋白酶解物。
优选地，所述步骤(1)中卵白蛋白粉与蒸馏水的质量比为1:1-1:10；更优选地，所述卵白蛋白粉与蒸馏水的质量比为1:2.5。
优选地，所述步骤(2)中将卵白蛋白溶液的pH值调节为8.5。
优选地，所述步骤(2)中复合酶与卵白蛋白的质量比为0.5:1000-5:1000；更优选地，所述复合酶与卵白蛋白的质量比为1.5:1000。
优选地，所述步骤(2)中酶解反应的温度为30-55℃，酶解反应的时间为6-12小时；更优选地，酶解反应的温度为50℃，酶解反应的时间为8小时。
优选地，所述步骤(2)中木瓜蛋白酶、胰蛋白酶和短小芽孢杆菌蛋白酶的质量比为1-10:1-10:1-10。更优选地，所述木瓜蛋白酶、胰蛋白酶和短小芽孢杆菌蛋白酶的质量比为2:2:1。
优选地，所述步骤(3)中干燥为冷冻干燥。
本发明提供了采用上述所述的方法制备得到的卵白蛋白酶解物。
本发明提供了上述所述的卵白蛋白酶解物在制备治疗肝病的药物中的应用。
本发明提供了一种用于增强免疫力的组合物，包括以下重量份的组分：上述所述的卵白蛋白酶解物1-10重量份、灵芝提取物1-10重量份。
优选地，所述卵白蛋白酶解物和灵芝提取物的重量比为2:1。
有益效果：本发明提供了一种卵白蛋白酶解物，该卵白蛋白酶解物由木瓜蛋白酶、胰蛋白酶和短小芽孢杆菌蛋白酶三种酶组合酶解而得，该卵白蛋白酶解物在改善肝功能方面具有较好的效果；本发明将该卵白蛋白酶解物与灵芝提取物进行复配，能够协同增效增强免疫力。
具体实施方式
为更好的说明本发明的目的、技术方案和优点，下面将结合具体实施例对本发明作进一步说明。
实施例1
本实施例提供了一种卵白蛋白酶解物的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
(1)将1kg卵白蛋白粉溶解于2.5kg蒸馏水中，得到卵白蛋白溶液；
(2)调节步骤(1)得到的卵白蛋白溶液的pH值至8.5，加入1.5g复合蛋白酶，在50℃、搅拌状态下酶解8小时，得到酶解液；所述复合蛋白酶是质量比为2:2:1的木瓜蛋白酶、胰蛋白酶和短小芽孢杆菌蛋白酶的混合物；
(3)将步骤(2)得到的酶解液在90-100℃下灭酶10分钟；
(4)将灭酶后的酶解液以5000r/min的转速离心10分钟，收集上清液，将上清液在121℃下湿热灭菌20分钟，然后减压浓缩、冷冻干燥后得到干粉，即为卵白蛋白酶解物。
实施例2
本实施例提供了一种卵白蛋白酶解物的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
(1)将1kg卵白蛋白粉溶解于2.5kg蒸馏水中，得到卵白蛋白溶液；
(2)调节步骤(1)得到的卵白蛋白溶液的pH值至7，加入1.5g复合蛋白酶，在50℃、搅拌状态下酶解8小时，得到酶解液；所述复合蛋白酶是质量比为2:2:1的木瓜蛋白酶、胰蛋白酶和短小芽孢杆菌蛋白酶的混合物；
(3)将步骤(2)得到的酶解液在90-100℃下灭酶10分钟；
(4)将灭酶后的酶解液以5000r/min的转速离心10分钟，收集上清液，将上清液在121℃下湿热灭菌20分钟，然后减压浓缩、冷冻干燥后得到干粉，即为卵白蛋白酶解物。
实施例3
本实施例提供了一种卵白蛋白酶解物的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
(1)将1kg卵白蛋白粉溶解于2.5kg蒸馏水中，得到卵白蛋白溶液；
(2)调节步骤(1)得到的卵白蛋白溶液的pH值至10，加入1.5g复合蛋白酶，在50℃、搅拌状态下酶解8小时，得到酶解液；所述复合蛋白酶是质量比为2:2:1的木瓜蛋白酶、胰蛋白酶和短小芽孢杆菌蛋白酶的混合物；
(3)将步骤(2)得到的酶解液在90-100℃下灭酶10分钟；
(4)将灭酶后的酶解液以5000r/min的转速离心10分钟，收集上清液，将上清液在121℃下湿热灭菌20分钟，然后减压浓缩、冷冻干燥后得到干粉，即为卵白蛋白酶解物。
实施例4
本实施例提供了一种卵白蛋白酶解物的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
(1)将1kg卵白蛋白粉溶解于2.5kg蒸馏水中，得到卵白蛋白溶液；
(2)调节步骤(1)得到的卵白蛋白溶液的pH值至8.5，加入1.5g复合蛋白酶，在50℃、搅拌状态下酶解8小时，得到酶解液；所述复合蛋白酶是质量比为4:1:2的木瓜蛋白酶、胰蛋白酶和短小芽孢杆菌蛋白酶的混合物；
(3)将步骤(2)得到的酶解液在90-100℃下灭酶10分钟；
(4)将灭酶后的酶解液以5000r/min的转速离心10分钟，收集上清液，将上清液在121℃下湿热灭菌20分钟，然后减压浓缩、冷冻干燥后得到干粉，即为卵白蛋白酶解物。
实施例5
本实施例提供了一种卵白蛋白酶解物的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
(1)将1kg卵白蛋白粉溶解于2.5kg蒸馏水中，得到卵白蛋白溶液；
(2)调节步骤(1)得到的卵白蛋白溶液的pH值至8.5，加入1.5g复合蛋白酶，在50℃、搅拌状态下酶解8小时，得到酶解液；所述复合蛋白酶是质量比为1:2:4的木瓜蛋白酶、胰蛋白酶和短小芽孢杆菌蛋白酶的混合物；
(3)将步骤(2)得到的酶解液在90-100℃下灭酶10分钟；
(4)将灭酶后的酶解液以5000r/min的转速离心10分钟，收集上清液，将上清液在121℃下湿热灭菌20分钟，然后减压浓缩、冷冻干燥后得到干粉，即为卵白蛋白酶解物。
实施例6
本实施例提供了一种增强免疫力的组合物，包括以下重量份的组分：实施例1的卵白蛋白酶解物2重量份、灵芝提取物1重量份。将卵白蛋白酶解物和灵芝提取物混合即可。
实施例7
本实施例提供了一种增强免疫力的组合物，包括以下重量份的组分：实施例1的卵白蛋白酶解物4重量份、灵芝提取物1重量份。将卵白蛋白酶解物和灵芝提取物混合即可。
实施例8
本实施例提供了一种增强免疫力的组合物，包括以下重量份的组分：实施例1的卵白蛋白酶解物1重量份、灵芝提取物2重量份。将卵白蛋白酶解物和灵芝提取物混合即可。
对比例1
本实施例提供了一种卵白蛋白酶解物的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
(1)将1kg卵白蛋白粉溶解于2.5kg蒸馏水中，得到卵白蛋白溶液；
(2)调节步骤(1)得到的卵白蛋白溶液的pH值至8.5，加入1.5g复合蛋白酶，在50℃、搅拌状态下酶解8小时，得到酶解液；所述复合蛋白酶是质量比为2:2的木瓜蛋白酶和胰蛋白酶的混合物；
(3)将步骤(2)得到的酶解液在90-100℃下灭酶10分钟；
(4)将灭酶后的酶解液以5000r/min的转速离心10分钟，收集上清液，将上清液在121℃下湿热灭菌20分钟，然后减压浓缩、冷冻干燥后得到干粉，即为卵白蛋白酶解物。
对比例2
本实施例提供了一种卵白蛋白酶解物的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
(1)将1kg卵白蛋白粉溶解于2.5kg蒸馏水中，得到卵白蛋白溶液；
(2)调节步骤(1)得到的卵白蛋白溶液的pH值至8.5，加入1.5g复合蛋白酶，在50℃、搅拌状态下酶解8小时，得到酶解液；所述复合蛋白酶是质量比为2:1的木瓜蛋白酶和短小芽孢杆菌蛋白酶的混合物；
(3)将步骤(2)得到的酶解液在90-100℃下灭酶10分钟；
(4)将灭酶后的酶解液以5000r/min的转速离心10分钟，收集上清液，将上清液在121℃下湿热灭菌20分钟，然后减压浓缩、冷冻干燥后得到干粉，即为卵白蛋白酶解物。
对比例3
本实施例提供了一种卵白蛋白酶解物的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
(1)将1kg卵白蛋白粉溶解于2.5kg蒸馏水中，得到卵白蛋白溶液；
(2)调节步骤(1)得到的卵白蛋白溶液的pH值至8.5，加入1.5g复合蛋白酶，在50℃、搅拌状态下酶解8小时，得到酶解液；所述复合蛋白酶是质量比为2:1的胰蛋白酶和短小芽孢杆菌蛋白酶的混合物；
(3)将步骤(2)得到的酶解液在90-100℃下灭酶10分钟；
(4)将灭酶后的酶解液以5000r/min的转速离心10分钟，收集上清液，将上清液在121℃下湿热灭菌20分钟，然后减压浓缩、冷冻干燥后得到干粉，即为卵白蛋白酶解物。
对比例4
本实施例提供了一种卵白蛋白酶解物的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
(1)将1kg卵白蛋白粉溶解于2.5kg蒸馏水中，得到卵白蛋白溶液；
(2)调节步骤(1)得到的卵白蛋白溶液的pH值至8.5，加入1.5g木瓜蛋白酶，在50℃、搅拌状态下酶解8小时，得到酶解液；
(3)将步骤(2)得到的酶解液在90-100℃下灭酶10分钟；
(4)将灭酶后的酶解液以5000r/min的转速离心10分钟，收集上清液，将上清液在121℃下湿热灭菌20分钟，然后减压浓缩、冷冻干燥后得到干粉，即为卵白蛋白酶解物。
实施例9
一、本发明卵白蛋白酶解物改善肝功能功效评价
将实施例1-5以及对比例1-4得到的卵白蛋白酶解物分别加水配制成口服液，卵白蛋白酶解物与水的重量比为1:9。
大鼠110只，体重170～250g，随机分为11组，每组10只，除空白对照组外，其余各组动物均每周皮下注射10％的CCl4(5ml/Kg)1次，连续12周，构建大鼠慢性肝损伤模型。
按体重灌胃给药，每天一次，卵白蛋白酶解物口服液的剂量为50ml/kg，空白对照组和模型对照组以50ml/kg体重灌胃水。给药8周后测定血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、血清总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)的含量，结果如表1所示。
从表1结果可知，本发明卵白蛋白酶解物将木瓜蛋白酶、胰蛋白酶和短小芽孢杆菌蛋白酶三种酶组合使用对卵白蛋白进行酶解，获得的卵白蛋白酶解物在修复肝损伤方面明显优于由其中两种或者单种酶酶解获得的卵白蛋白酶解物，本发明卵白蛋白酶解物能够明显降低肝损伤大鼠血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)的水平，能明显增加白蛋白(ALB))水平，尤其是实施例1的卵白蛋白酶解物。
表1肝功能结果
Figure BDA0002652008840000071
二、本发明组合物增强免疫力功效评价
120只小鼠，体重18g～22g，随机分为12组，每组10只。
实验组:分别将实施例1的卵白蛋白酶解物(实验组1)、实施例6的组合物(实验组2)、实施例7的组合物(实验组3)、实施例8的组合物(实验组4)分别加99倍重量的水配制成口服液，灌胃给予小鼠，灌胃量为50mL/kg，每天一次，共计30天。
对照组：灵芝提取物加99倍重量的水配制成口服液，灌胃给予小鼠，灌胃量为50mL/kg，每天一次，共计30天。
空白对照组:水灌胃给予小鼠，灌胃量为50mL/kg，每天一次，共计30天。
按照卫生部《保健食品检验与技术评价规范》(2003年)，进行小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验(半体内法)，结果如表2所示；测定小鼠NK细胞活性(LDH测定法)，结果如表3所示。
从表2和表3结果可知，本发明组合物可以显著提升小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力、小鼠NK细胞活性，从而改善免疫能力。本发明将卵白蛋白酶解物与灵芝提取物进行复配，协同增效增强免疫力，优于单独使用卵白蛋白酶解物或者灵芝提取物，其中实施例6的组合物增强免疫力效果最好。
表2巨噬细胞吞噬测定结果
组别 动物数(只) 吞噬指数
实验组1 10 0.64±0.03
实验组2 10 0.84±0.02
实验组3 10 0.76±0.03
实验组4 10 0.71±0.04
对照组 10 0.61±0.02
空白对照组 10 0.51±0.04
表3小鼠NK细胞活性
Figure BDA0002652008840000081
Figure BDA0002652008840000091
最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。

Claims (10)

1.一种卵白蛋白酶解物的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：
(1)将卵白蛋白粉溶解于蒸馏水中，得到卵白蛋白溶液；
(2)将步骤(1)得到的卵白蛋白溶液的pH值调节为7-10，加入复合蛋白酶，所述复合蛋白酶为木瓜蛋白酶、胰蛋白酶和短小芽孢杆菌蛋白酶的混合物，在搅拌状态下进行酶解反应，得到酶解液；
(3)将步骤(2)得到的酶解液在90-100℃下灭酶；
(4)将灭酶后的酶解液进行离心，收集上清液，将上清液灭菌、浓缩、干燥后得干粉，即为所述卵白蛋白酶解物。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中卵白蛋白粉与蒸馏水的质量比为1:1-1:10；优选地，所述卵白蛋白粉与蒸馏水的质量比为1:2.5。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中将卵白蛋白溶液的pH值调节为8.5。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中复合酶与卵白蛋白的质量比为0.5:1000-5:1000；优选地，所述复合酶与卵白蛋白的质量比为1.5:1000。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中酶解反应的温度为30-55℃，酶解反应的时间为6-12小时；优选地，酶解反应的温度为50℃，酶解反应的时间为8小时。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中木瓜蛋白酶、胰蛋白酶和短小芽孢杆菌蛋白酶的质量比为1-10:1-10:1-10；优选地，所述木瓜蛋白酶、胰蛋白酶和短小芽孢杆菌蛋白酶的质量比为2:2:1。
7.一种采用如权利要求1-6任一所述的方法制备得到的卵白蛋白酶解物。
8.如权利要求7所述的卵白蛋白酶解物在制备治疗肝病的药物中的应用。
9.一种用于增强免疫力的组合物，其特征在于，包括以下重量份的组分：如权利要求7所述的卵白蛋白酶解物1-10重量份、灵芝提取物1-10重量份。
10.根据权利要求9所述的组合物，其特征在于，所述卵白蛋白酶解物和灵芝提取物的重量比为2:1。
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