CN111954681A - 抗叶酸受体1抗体及其用途 - Google Patents

抗叶酸受体1抗体及其用途 Download PDF

Info

Publication number
CN111954681A
CN111954681A CN201980019246.4A CN201980019246A CN111954681A CN 111954681 A CN111954681 A CN 111954681A CN 201980019246 A CN201980019246 A CN 201980019246A CN 111954681 A CN111954681 A CN 111954681A
Authority
CN
China
Prior art keywords
seq
chain variable
variable region
ser
polypeptide sequence
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201980019246.4A
Other languages
English (en)
Other versions
CN111954681B (zh
Inventor
王明晗
邹晖
贾海群
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Dongguan Fanshi Biomedical Co ltd
Original Assignee
Dongguan Fanshi Biomedical Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Dongguan Fanshi Biomedical Co ltd filed Critical Dongguan Fanshi Biomedical Co ltd
Priority to CN202211567226.0A priority Critical patent/CN115925952A/zh
Publication of CN111954681A publication Critical patent/CN111954681A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN111954681B publication Critical patent/CN111954681B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57484—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites
    • G01N33/57492—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites involving compounds localized on the membrane of tumor or cancer cells
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/577—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor involving monoclonal antibodies binding reaction mechanisms characterised by the use of monoclonal antibodies; monoclonal antibodies per se are classified with their corresponding antigens
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6872—Intracellular protein regulatory factors and their receptors, e.g. including ion channels
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/32—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency specific for a neo-epitope on a complex, e.g. antibody-antigen or ligand-receptor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C07K2317/732—Antibody-dependent cellular cytotoxicity [ADCC]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/705—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

描述了抗FOLR1抗体及其抗原结合片段。还描述了编码抗体的核酸，包含所述抗体的组合物，产生所述抗体的方法以及使用所述抗体治疗或预防疾病，例如癌症的方法。

Description

抗叶酸受体1抗体及其用途
相关申请的交叉引用
本申请要求于2018年3月13日提交的美国临时申请号62/642,213的优先权，其全部公开内容通过引用合并于此。
发明领域
本发明涉及单克隆抗叶酸受体1(FOLR1)抗体，编码该抗体的核酸和表达载体，包含该载体的重组细胞以及包含该抗体的组合物。还提供了制备该抗体的方法，以及使用该抗体治疗包括癌症在内的疾病的方法。
对以电子形式提交的序列表的引用
本申请包含一个序列表，该序列表通过EFS-Web以ASCII格式的序列表电子提交，文件名为“689204-11WO序列表(689204-11WO Sequence Listing)”，创建日期为2019年3月6日，大小为64kb，通过EFS-Web提交的序列表是本说明书的一部分，在此全文引入作为参考。
发明背景
叶酸受体1(FOLR1)，也称为叶酸受体α(FRα)或叶酸结合蛋白(FBP)，是细胞表面上的糖基磷脂酰肌醇(GPI)锚定的膜蛋白，对叶酸的活性形式——5-甲基四氢叶酸(5-MTF)及其衍生物具有很高的亲和力，并将它们转运进入细胞(Salazar和Ratnam，CancerMetastasis Rev 2007；26：141-52)。FOLR1已成为肿瘤学的靶标，因为它在某些实体瘤如卵巢癌，肺癌和乳腺癌中过表达(Toffoli等人，Int J Cancer 1997；74：193-198和Boogerd等人，Oncotarget2016；7：17442-17454)，但在有限的正常人类组织中其表达水平较低(Weitman等人，Cancer Res 1992；52：3396-3401)。与该结果一致的是，到目前为止，针对FOLR1的小分子和大分子进行的1期临床试验显示出良好的药物耐受性(Cheung等人，Oncotarget 2016；7：52553-52574)。因此，FOLR1是一种肿瘤相关/肿瘤特异性抗原，抗FOLR1单克隆抗体(mAb)可用作潜在的抗癌治疗剂。
发明概述
在一个总的方面，本发明涉及特异性结合FOLR1的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段。
所提供的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含重链互补决定区1(HCDR1)、HCDR2、HCDR3，轻链互补决定区1(LCDR1)、LCDR2和LCDR3，其具有以下多肽序列：
a.分别为SEQ ID NO：38、39、40、62、63和64；
b.分别为SEQ ID NO：17、18、19、41、42和43；
c.分别为SEQ ID NO：20、21、22、44、45和46；
d.分别为SEQ ID NO：23、24、25、47、48和49；
e.分别为SEQ ID NO：26、27、28、50、51和52；
f.分别为SEQ ID NO：29、30、31、53、54和55；
g.分别为SEQ ID NO：32、33、34、56、57和58；或者
h.分别为SEQ ID NO：35、36、37、59、60和61；
其中所述抗体或其抗原结合片段特异性结合FOLR1，优选人FOLR1。
所提供的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含重链互补决定区1(HCDR1)、HCDR2、HCDR3，轻链互补决定区1(LCDR1)、LCDR2和LCDR3，其具有以下多肽序列：
a.分别为SEQ ID NO：86、87、88、110、111和112；
b.分别为SEQ ID NO：65、66、67、89、90和91；
c.分别为SEQ ID NO：68、69、70、92、93和94；
d.分别为SEQ ID NO：71、72、73、95、96和97；
e.分别为SEQ ID NO：74、75、76、98、99和100；
f.分别为SEQ ID NO：77、78、79、101、102和103；
g.分别为SEQ ID NO：80、81、82、104、105和106；或者
h.分别为SEQ ID NO：83、84、85、107、108和109；
其中所述抗体或其抗原结合片段特异性结合FOLR1，优选人FOLR1。
在某些实施方式中，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含重链可变区，其具有与SEQ ID NO：15、1、3、5、7、9、11或13至少95％，至少96％，至少97％，至少98％或至少99％相同的多肽序列，或轻链可变区，其具有与SEQ ID NO：16，2，4，6，8，10，12或14至少95％，至少96％，至少97％，至少98％或至少99％相同的多肽序列。
在某些实施方式中，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包括：
a.具有SEQ ID NO：15的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：16的多肽序列的轻链可变区；
b.具有SEQ ID NO：1的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：2的多肽序列的轻链可变区；
c.具有SEQ ID NO：3的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：4的多肽序列的轻链可变区；
d.具有SEQ ID NO：5的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：6的多肽序列的轻链可变区；
e.具有SEQ ID NO：7的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：8的多肽序列的轻链可变区；
f.具有SEQ ID NO：9的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：10的多肽序列的轻链可变区；
g.具有SEQ ID NO：11的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：12的多肽序列的轻链可变区；或者
h.具有SEQ ID NO：13的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：14的多肽序列的轻链可变区。
在某些实施方式中，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段是嵌合的。
在某些实施方式中，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段是人的或人源化的。在某些实施方式中，人源化的单克隆抗体或其抗原结合片段包括：
(1)具有SEQ ID NO：113的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：117的多肽序列的轻链可变区；
(2)具有SEQ ID NO：113的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：118的多肽序列的轻链可变区；
(3)具有SEQ ID NO：114的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：117的多肽序列的轻链可变区；
(4)具有SEQ ID NO：114的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：118的多肽序列的轻链可变区；
(5)具有SEQ ID NO：115的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：117的多肽序列的轻链可变区；
(6)具有SEQ ID NO：115的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：118的多肽序列的轻链可变区；
(7)具有SEQ ID NO：116的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：117的多肽序列的轻链可变区；
(8)具有SEQ ID NO：116的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：118的多肽序列的轻链可变区；
(9)具有SEQ ID NO：119的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：121的多肽序列的轻链可变区；
(10)具有SEQ ID NO：119的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：122的多肽序列的轻链可变区；
(11)具有SEQ ID NO：119的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：123的多肽序列的轻链可变区；
(12)具有SEQ ID NO：120的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：121的多肽序列的轻链可变区；
(13)具有SEQ ID NO：120的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：122的多肽序列的轻链可变区；
(14)具有SEQ ID NO：120的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：123的多肽序列的轻链可变区；
(15)具有SEQ ID NO：124的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：126的多肽序列的轻链可变区；
(16)具有SEQ ID NO：124的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：127的多肽序列的轻链可变区；
(17)具有SEQ ID NO：128的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：131的多肽序列的轻链可变区；
(18)具有SEQ ID NO：128的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：132的多肽序列的轻链可变区；
(19)具有SEQ ID NO：128的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：133的多肽序列的轻链可变区；
(20)具有SEQ ID NO：128的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：134的多肽序列的轻链可变区；
(21)具有SEQ ID NO：129的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：131的多肽序列的轻链可变区；
(22)具有SEQ ID NO：129的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：132的多肽序列的轻链可变区；
(23)具有SEQ ID NO：129的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：133的多肽序列的轻链可变区；
(24)具有SEQ ID NO：129的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：134的多肽序列的轻链可变区；
(25)具有SEQ ID NO：130的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：131的多肽序列的轻链可变区；
(26)具有SEQ ID NO：130的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：132的多肽序列的轻链可变区；
(27)具有SEQ ID NO：130的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：133的多肽序列的轻链可变区；要么
(28)具有SEQ ID NO：130的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：134的多肽序列的轻链可变区。
在某些实施方式中，所述分离的单克隆抗体或其抗原结合片段与FOLR1结合并且能够诱导效应子介导的肿瘤细胞裂解。
还提供了编码本发明所述单克隆抗体或其抗原结合片段的分离的核酸。
还提供了包含编码本发明所述单克隆抗体或其抗原结合片段的分离的核酸的载体。
还提供了包含载体的宿主细胞，所述载体包含编码本发明所述单克隆抗体或其抗原结合片段的分离的核酸。
在某些实施方式中，提供了一种药物组合物，其包含本发明所述分离的单克隆抗体或其抗原结合片段和药学上可接受的载体。
还提供了在有此需要的受试者中治疗癌症的方法，包括向受试者施用本发明的药物组合物。所述癌症可以是任何液体或实体癌，例如，其可以选自但不限于肺癌、胃癌、结肠癌、肝细胞癌、肾细胞癌、膀胱尿路上皮癌、转移性黑色素瘤、乳腺癌、卵巢癌、子宫颈癌、头颈癌、胰腺癌、胶质瘤、胶质母细胞瘤和其他实体瘤，以及非霍奇金淋巴瘤(NHL)、急性淋巴细胞白血病(ALL)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、慢性粒细胞性白血病(CML)、多发性骨髓瘤(MM)、急性髓性白血病(AML)和其它液体肿瘤。
还提供了产生本发明所述单克隆抗体或其抗原结合片段的方法。所述方法包括在产生单克隆抗体或其抗原结合片段的条件下培养包含编码单克隆抗体或其抗原结合片段的核酸的细胞，并从细胞或培养物中回收单克隆抗体或其抗原结合片段。
还提供了制备包含本发明所述单克隆抗体或抗原结合片段的药物组合物的方法。所述方法包括将单克隆抗体或抗原结合片段与药学上可接受的载体结合以获得药物组合物。
还提供了确定受试者体内FOLR1水平的方法。该方法包括：(a)从受试者获得样品；(b)使该样品与本发明分离的单克隆抗体或其抗原结合片段接触；(c)确定受试者体内FOLR1水平。样品可以是例如组织样品或血液样品。组织样品可以是例如癌组织样品。
附图说明
当结合附图阅读时，将更好地理解本发明的前述内容以及以下对本申请的优选实施例的详细描述。然而，应当理解，本申请不限于附图中所示的明确实施方式。
图1A-1B显示了纯化的小鼠抗FOLR1 mAb与稳定表达人FOLR1的CHO细胞的结合，通过FACS(流式细胞荧光分选技术)分析所证实。
图2A-2C显示了在ELISA测定中嵌合抗FOLR1 mAb与固定的FOLR1胞外域的剂量依赖性结合的结果。
图3A-3D显示了在FACS测定中嵌合抗FOLR1 mAb与SK-OV-3细胞的剂量依赖性结合的结果。
图4A-4C显示了在ELISA测定中人源化的F5 mAb与固定的FOLR1胞外域的剂量依赖性结合的结果。
图5A-5B显示了在ELISA测定中人源化的F10 mAb与固定的FOLR1胞外域的剂量依赖性结合的结果。
图6A-6B显示了在ELISA测定中人源化的F17 mAb与固定的FOLR1胞外域的剂量依赖性结合的结果。
图7A-7D显示了在ELISA测定中人源化的F20 mAb与固定的FOLR1胞外域的剂量依赖性结合的结果。
图8A-8J显示了人源化mAb与SK-OV-3细胞的剂量依赖性结合的结果。图8A为人源化F5 mAb的数据；图8B-8D为人源化F10 mAb的数据；图8E为人源化F17 mAb的数据；图8F-8J为人源化F20 mAb的数据。
图9显示了四种人源化抗FOLR1 mAb的抗体依赖性细胞毒性(ADCC)活性的结果。
具体实施方式
背景技术和整个说明书中引用或描述了各种出版物、文章和专利，这些参考文献中的每一个均通过引用整体并入本文。本说明书中所包括的对文件、行为、材料，装置或物品等的讨论是为了提供本发明的背景。此类讨论并不是承认任何或所有这些问题构成了关于本公开或声明的任何发明的现有技术的一部分。
除非另有定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常所理解的相同含义。否则，本文中使用的某些术语具有说明书中阐述的含义。
应注意的是，如本文和所附权利要求书中所使用的，单数形式的“一个”、“一种”和“该”包括复数形式，除非上下文另外明确指出。
除非另有说明，否则任何数值，例如本文所述的浓度或浓度范围，在所有情况下均应理解为由术语“约”修饰。因此，数值通常包括所述值的±10％。例如，1mg/mL的浓度包括0.9mg/mL至1.1mg/mL。同样地，浓度范围为1％至10％(w/v)包括0.9％(w/v)至11％(w/v)。如本文所用，除非上下文另外明确指出，否则数值范围的使用明确地包括所有可能的子范围，该范围内的所有单个数值，包括该范围内的整数以及该值的分数。
除非另有说明，否则一系列要素之前的术语“至少”应理解为是指该系列中的每个元素。仅使用常规实验，本领域技术人员将认识到或能够确定本文所述的本发明的具体实施方式的许多等同方式。此等同方式将被本发明所涵盖。
如本文所用，术语“包含”，“包含有”，“包括”，“包括有”，“有”，“具有”，“含有”或“含有的”或其任何其他变型将被理解为意味着包含指定的整数或整数组，但不排除任何其他整数或整数组，并且旨在为非排他性的或开放式的。例如，包含一系列要素的组合物、混合物、过程、方法、物品或设备不一定仅限于那些所列出的要素，而是可以包括未明确列出或此类组合物、混合物、过程、方法、物品或设备固有的其他要素。此外，除非明确指出相反的意思，否则“或”是指包含性的或而不是排他性的或。例如，以下任一条件都满足条件A或B：A为真(或存在)和B为假(或不存在)，A为假(或不存在)和B为真(或存在)，以及A和B都为真(或存在)。
如本文所用，多个列举的要素之间的连接术语“和/或”应理解为涵盖单独的和组合的选项。例如，在两个要素由“和/或”连接的情况下，第一个选项是指第一个要素适用而没有第二个要素。第二个选项是指第二个要素适用而没有第一个要素。第三种选项是指第一个和第二个要素一起适用。这些选项中的任何一个应理解为落入该含义内，并因此满足本文所用术语“和/或”的要求。同时适用一种以上的选项也应理解为落入该含义内，并因此满足术语“和/或”的要求。
如本文所用，在整个说明书和权利要求书中使用的术语“由……组成”或诸如“由……构成”或“由……组成”的变体表示包括任何所述整数或整数组，但是没有附加的整数或整数组可以添加到指定的方法、结构或组成中。
如本文所用，在整个说明书和权利要求书中使用的术语“基本上由...组成”或诸如“基本上由...构成”或“基本上由...组成”等变体表示包括任何所述整数或整数组，并且可选地包含不会实质上改变指定方法、结构或组成的基本或新颖性质的任何所述整数或整数组。见M.P.E.P.§2111.03。
如本文所用，“受试者”是指任何动物，优选地为哺乳动物，最优选地为人。如本文所用，术语“哺乳动物”涵盖任何哺乳动物。哺乳动物的示例包括但不限于牛、马、绵羊、猪、猫、狗、小鼠、大鼠、兔子、豚鼠、猴子和人等，但更优选地为人。
单词“右”、“左”、“下”和“上”表示附图中的参考方向。
还应当理解，当提及优选发明的部件的尺寸或特性时，本文所用的术语“约”、“大约”、“通常”、“基本上”和类似术语表示所描述的尺寸/特性不是严格的边界或参数，并且不排除其在功能上如本领域普通技术人员所理解的相同或相似的微小变化。至少，包括数值参数的此类引用包括使用本领域公认的数学和工业原理(例如，四舍五入，测量或其他系统误差，制造公差等)不会改变最低有效数字的变化。。
在两个或两个以上核苷酸或多肽序列(例如，抗FOLR1抗体和编码它们的多核苷酸，FOLR1多肽和编码它们的FOLR1多核苷酸)的上下文中，术语“同一的”或“同一性”百分比是指，当使用以下序列比较算法之一或通过目视检查进行比较和比对以获得最大对应性时，两个或多个序列或子序列是相同的或具有特定百分比的氨基酸残基或核苷酸相同。
为了进行序列比较，通常将一个序列用作参比序列，将其与测试序列进行比较。使用序列比较算法时，将测试序列和参比序列输入计算机，必要时指定子序列坐标，并指定序列算法程序参数。然后，序列比较算法根据指定的程序参数，计算测试序列相对于参比序列的序列同一性百分比。
用于比较的序列最佳比对可以通过以下方法进行：例如Smith和Waterman，Adv.Appl.Math.2：482(1981)的局部同调算法，通过Needleman和Wunsch，J.Mol.Biol.48：443(1970)的同源性比对算法，通过Pearson和Lipman，Proc.Nat’l.Acad.Sci.USA 85:2444(1988)的相似性搜索方法，通过计算机实现这些算法(GAP、BESTFIT、FASTA和TFASTA位于威斯康星州的575科学Madison博士的遗传学计算机组的遗传学软件包中)或通过目视检查实现(通常参见，FM Ausubel等人编辑的分子生物学当前技术(Current Protocols inMolecular Biology)，格林联合出版公司(Greene Publ ishing Associates，Inc.)和约翰威利父子公司(John Wiley&Sons，Inc.)的合资企业(1995增刊)(Ausubel))。
适用于确定序列同一性和序列相似性百分比的算法的示例是BLAST和BLAST 2.0算法，这些算法分别在Altschul等人(1990)J.Mol.Biol.215:403-410和Altschul等人(1997)Nucleic Acids Res.25:3389-3402中进行了描述。可通过国家生物技术信息中心公开获得进行BLAST分析的软件。该算法涉及首先通过识别查询序列中长度为W的短序列来识别高分序列对(HSP)，这些短序列在与数据库序列中相同长度的单词对齐时匹配或满足一些正值阈值T。T被称为邻近词分数阈值(Altschul等人，同上)。这些最初的邻近词命中充当启动搜索的种子，以查找包含它们的较长的HSP的种子。然后沿着两个方向将序列的命中在每个序列延伸至累积比对得分不再增加。
对于核苷酸序列，使用参数M(一对匹配残基的奖励分数；始终>0)和N(错配残基的罚分；始终<0)来计算累积分数。对于氨基酸序列，使用得分矩阵来计算累积得分。在以下情况下，将停止序列命中在每个方向上的扩展：累积对齐分数比其最大实现值减少X；由于一个或多个负得分残基比对的累积，累积得分变为零或更低；或到达任一序列的末尾。BLAST算法参数W、T和X确定比对的灵敏度和速度。BLASTN程序(用于核苷酸序列)默认使用字长(W)为11，期望(E)为10，M＝5，N＝-4以及两条链的比较作为默认值。对于氨基酸序列，BLASTP程序默认使用字长(W)为3，期望(E)为10，和BLOSUM62评分矩阵作为默认值(参见Henikoff和Henikoff，Proc.Natl.Acad.Sci.USA89:10915(1989))。
除了计算序列同一性百分比外，BLAST算法还对两个序列之间的相似性进行统计分析(参见，例如，Karlin和Altschul，Proc.Natl.Acad.Sci.USA90:5873-5787(1993))。BLAST算法提供的一种相似性度量是最小总和概率(P(N))，它提供了偶然发生两个核苷酸或氨基酸序列匹配的概率的指示。例如，如果在测试核酸与参比核酸的比较中最小的总和概率小于约0.1，更优选地小于约0.01，最优选地小于约0.001，则认为核苷酸与参比序列相似。
如下所述，两个核酸序列或多肽基本上相同的进一步指示是由第一个核酸编码的多肽与由第二个核酸编码的多肽在免疫学上交叉反应。因此，一个多肽通常与第二个多肽基本相同，例如，如果两个肽仅通过保守取代而不同的话。两个核酸序列基本相同的另一个指示是两个分子在严格条件下彼此杂交。
抗体
本发明一般涉及分离的抗FOLR1抗体，编码该抗体的核酸和表达载体，包含该载体的重组细胞以及包含该抗体的组合物。还提供了制造抗体的方法以及使用该抗体治疗包括癌症在内的疾病的方法本发明的抗体具有一种或多种期望的功能特性，包括但不限于与FOLR1的高亲和力结合，对FOLR1的高特异性以及在需要其的受试者和动物模型中单独给药或结合其他抗癌治疗时抑制肿瘤生长的能力。
总体而言，本发明涉及特异性结合FOLR1的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段。
如本文所用，术语“抗体”以广义使用，并且包括免疫球蛋白或抗体分子，包括人抗体、人源化抗体、复合抗体和嵌合抗体以及单克隆或多克隆的抗体片段。通常，抗体是对特定抗原表现出结合特异性的蛋白质或肽链。抗体结构是众所周知的。根据重链恒定域氨基酸序列，免疫球蛋白可分为五个主要类别(即IgA、IgD、IgE、IgG和IgM)。IgA和IgG进一步分为IgA1、IgA2、IgG1、IgG2、IgG3和IgG4亚型。因此，本发明的抗体可以是五个主要类别或相应的亚型中的任何一个。优选地，本发明的抗体是IgG1、IgG2、IgG3或IgG4。脊椎动物物种的抗体轻链可以根据其恒定域的氨基酸序列分配为两种明显不同的类型之一，即κ(kappa)和λ(lambda)。因此，本发明的抗体可以包含κ或λ轻链恒定域。根据特定的实施例，本发明的抗体包括来自大鼠或人抗体的重链和/或轻链恒定区。除了重链和轻链恒定域外，抗体还包含由轻链可变区和重链可变区组成的抗原结合区，每个轻链可变区和重链可变区均包含三个结构域(即互补决定区1-3：CDR1、CDR2和CDR3)。轻链可变区结构域也可称为LCDR1、LCDR2和LCDR3，重链可变区结构域也可称为HCDR1、HCDR2和HCDR3。
如本文所用，术语“分离的抗体”是指基本上不含具有不同抗原特异性的其他抗体的抗体(例如，特异性结合FOLR1的分离的抗体基本上不含不结合FOLR1的抗体)。另外，分离的抗体基本上不含其他细胞物质和/或化学物质。
如本文所用，术语“单克隆抗体”是指从基本上均质的抗体群体中获得的抗体，即除了可能存在少量的可能天然存在的突变以外，构成该群体的各个抗体是完全相同的。本发明所述单克隆抗体可以通过杂交瘤方法、噬菌体展示技术、单淋巴细胞基因克隆技术或重组DNA方法来制备。例如，单克隆抗体可以由杂交瘤产生，所述杂交瘤包括获自具有人重链转基因和轻链转基因的基因组的转基因非人类动物，例如转基因小鼠或大鼠的B细胞。
如本文所用，术语“抗原结合片段”是指抗体片段，例如双抗体，Fab，Fab’，F(ab')2，Fv片段，二硫键稳定的Fv片段(dsFv)，(dsFv)2，双特异性dsFv(dsFv-dsFv’)，二硫键稳定的双抗体(ds双抗体)，单链抗体分子(scFv)，单结构域抗体(sdab)，scFv二聚体(双价双抗体)，由包含一个或多个CDR的抗体的一部分形成的多特异性抗体，骆驼源单域抗体，纳米抗体，结构域抗体，二价结构域抗体或与抗原结合但不包含完整的抗体结构的任何其它抗体片段。抗原结合片段能够结合亲本抗体或亲本抗体片段所结合的同一抗原。根据特定的实施方式，抗原结合片段包含轻链可变区，轻链恒定区和重链的Fd区段。根据其他特定的实施方式，抗原结合片段包含Fab和F(ab’)。
如本文所用，术语“单链抗体”是指本领域中的常规单链抗体，其包含通过约15至约20个氨基酸的短肽连接的重链可变区和轻链可变区。如本文所用，术语“单结构域抗体”是指本领域中常规的单结构域抗体，其包含重链可变区和重链恒定区或仅包含重链可变区。
如本文所用，术语“人抗体”是指由人产生的抗体或使用本领域已知技术制备的具有人产生的抗体相对应的氨基酸序列的抗体。此人抗体的定义包括完整或全长抗体，其片段和/或包含至少一种人重链和/或轻链多肽的抗体。
如本文所用，术语“人源化抗体”是指经修饰以增加与人抗体的序列同源性的非人抗体，从而保留了抗体的抗原结合特性，但是其抗原性在人体内减少。
如本文所用，术语“嵌合抗体”是指其中免疫球蛋白分子的氨基酸序列源自两个或更多个物种的抗体。轻链和重链的可变区通常对应于衍生自具有期望的特异性、亲和力和性能的哺乳动物(例如小鼠，大鼠，兔子等)的一种物种的抗体的可变区，而恒定区对应于衍生自另一种哺乳动物(例如人)的抗体的序列，以避免在该物种中引发免疫应答。
如本文所用，术语“多特异性抗体”是指包含多个免疫球蛋白可变域序列的抗体，其中多个可变域序列的第一免疫球蛋白可变域序列对第一表位具有结合特异性，多个可变域序列的第二免疫球蛋白可变域序列对第二表位具有结合特异性。在一实施方式中，第一和第二表位在同一抗原上，例如，在同一蛋白质(或多聚蛋白质的亚基)上。在一实施方式中，第一和第二表位重叠或基本上重叠。在一实施方式中，第一和第二表位不重叠或基本上不重叠。在一实施方式中，第一和第二表位在不同的抗原，例如，不同的蛋白质(或多聚体蛋白质的不同亚基)上。在一实施方式中，多特异性抗体包含第三、第四或第五免疫球蛋白可变域。在一实施方式中，多特异性抗体是双特异性抗体分子、三特异性抗体分子或四特异性抗体分子。
如本文所用，术语“双特异性抗体”是指结合不超过两个表位或两个抗原的多特异性抗体。双特异性抗体的特征在于具有对第一表位具有结合特异性的第一免疫球蛋白可变域序列和对第二表位具有结合特异性的第二免疫球蛋白可变域序列。在一实施方式中，第一和第二表位在同一抗原，例如同一蛋白质(或多聚体蛋白质的亚基)上。在一实施方式中，第一和第二表位重叠或基本上重叠。在一实施方式中，第一和第二表位在不同的抗原，例如不同的蛋白质(或多聚体蛋白质的不同亚基)上。在一个实施方式中，双特异性抗体包含对第一表位具有结合特异性的重链可变域序列和轻链可变域序列以及对第二表位具有结合特异性的重链可变域序列和轻链可变域序列表位。在一实施方式中，双特异性抗体包含对第一表位具有结合特异性的半抗体或其片段和对第二表位具有结合特异性的半抗体或其片段。在一实施方式中，双特异性抗体包含对第一表位具有结合特异性的scFv或其片段，以及对第二表位具有结合特异性的scFv或其片段。在一实施方式中，第一表位位于FOLR1上，第二表位位于PD-1、PD-L1、LAG-3、TIM-3、CTLA-4、EGFR、HER-2、CD19、CD20、CD33、CD47、CD73、配体(apel in)、DLL3、claudin18.2、TIP-1、CD3和/或其他与肿瘤相关的免疫抑制剂或表面抗原上。
如本文所用，术语“FOLR1”是指叶酸受体1(FOLR1)，也称为叶酸受体α(FRα)或叶酸结合蛋白(FBP)，其是细胞表面上糖基磷脂酰肌醇(GPI)-锚定的膜蛋白。对叶酸、5-甲基四氢叶酸(5-MTF)及其衍生物具有高亲和力并将其运输到细胞中(Salazar和Ratnam，CancerMetastasis Rev 2007；26：141-52)。FOLR1已成为肿瘤学的靶标，因为它在某些实体瘤如卵巢癌，肺癌和乳腺癌中过表达(Toffoli等人，Int J Cancer 1997；74：193-198和Boogerd等人，Oncotarget 2016；7：17442-17454)，但在有限的正常人类组织中其表达水平较低(Weitman等人，Cancer Res 1992；52：3396-3401)。与该结果一致的是，到目前为止，针对FOLR1的小分子和大分子进行的1期临床试验显示出良好的药物耐受性(Cheung等人，Oncotarget 2016；7：52553-52574)。因此，FOLR1是一种肿瘤相关/肿瘤特异性抗原，抗FOLR1单克隆抗体(mAbs)可能是潜在的抗癌疗法。此外，FOLR1可用于将治疗分子特异性靶向癌细胞。人FOLR1的示例性氨基酸序列如GenBank登录号No.NP_057937(SEQ ID NO：135)所示。
如本文所用，“特异性结合FOLR1”的抗体是指与结合FOLR1，优选为人FOLR1结合的抗体，其KD值小于1×10-7M，优选小于1×10-8M，更优选小于5×10-9M、小于1×10-9M，小于5×10-10M或小于1×10-10M。术语“KD”是指解离常数，其是从Kd与Ka之比(即，Kd/Ka)获得的，并表示为摩尔浓度(M)。鉴于本公开，可以使用本领域的方法确定抗体的KD值。例如，抗体的KD可以通过使用表面等离振子共振来确定，例如通过使用生物传感器系统，例如
Figure BDA0002681350090000141
系统，或通过使用生物层干涉技术，例如Octet RED96系统。
抗体的KD值越小，抗体与靶抗原结合的亲和力越高。
根据一个特定方面，本发明涉及一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含重链互补决定区1(HCDR1)、HCDR2、HCDR3，轻链互补决定区1(LCDR1)、LCDR2和LCDR3，其具有以下多肽序列：
a.分别为SEQ ID NO：38、39、40、62、63和64；
b.分别为SEQ ID NO：17、18、19、41、42和43；
c.分别为SEQ ID NO：20、21、22、44、45和46；
d.分别为SEQ ID NO：23、24、25、47、48和49；
e.分别为SEQ ID NO：26、27、28、50、51和52；
f.分别为SEQ ID NO：29、30、31、53、54和55；
g.分别为SEQ ID NO：32、33、34、56、57和58；或者
h.分别为SEQ ID NO：35、36、37、59、60和61；
其中抗体或其抗原结合片段特异性结合FOLR1，优选人FOLR1。
根据一个特定方面，本发明涉及一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含重链互补决定区1(HCDR1)、HCDR2、HCDR3，轻链互补决定区1(LCDR1)、LCDR2和LCDR3，其具有以下多肽序列：
a.分别为SEQ ID NO：86、87、88、110、111和112；
b.分别为SEQ ID NO：65、66、67、89、90和91；
c.分别为SEQ ID NO：68、69、70、92、93和94；
d.分别为SEQ ID NO：71、72、73、95、96和97；
e.分别为SEQ ID NO：74、75、76、98、99和100；
f.分别为SEQ ID NO：77、78、79、101、102和103；
g.分别为SEQ ID NO：80、81、82、104、105和106；或者
h.分别为SEQ ID NO：83、84、85、107、108和109；
其中抗体或其抗原结合片段特异性结合FOLR1，优选人FOLR1。
根据另一个特定方面，本发明涉及一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含重链可变区，其多肽序列与SEQ ID NO：15、1、3、5、7、9、11或13之一具有至少85％，优选90％，更优选95％或更多，例如95％，96％，97％，98％或99％的同一性；或轻链可变区，其多肽序列与SEQ ID NO：16，2，4，6，8，10，12或14之一具有至少85％，优选90％，更优选95％或更多，例如95％，96％，97％，98％或99％的同一性。根据一优选的实施方式，本发明的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含重链可变区，其多肽序列与SEQ ID NO：15、1、3、5、7、9、11或13之一具有至少85％，优选90％，更优选95％或更多，例如95％，96％，97％，98％或99％的同一性；或轻链可变区，其多肽序列与SEQ ID NO：16，2，4，6，8，10，12或14之一具有至少85％，优选90％，更优选95％或更多，例如95％，96％，97％，98％或99％的同一性。
根据另一个特定方面，本发明涉及本发明分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包括：
a.具有SEQ ID NO：15的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：16的多肽序列的轻链可变区；
b.具有SEQ ID NO：1的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：2的多肽序列的轻链可变区；
c.具有SEQ ID NO：3的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：4的多肽序列的轻链可变区；
d.具有SEQ ID NO：5的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：6的多肽序列的轻链可变区；
e.具有SEQ ID NO：7的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：8的多肽序列的轻链可变区；
f.具有SEQ ID NO：9的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：10的多肽序列的轻链可变区；
g.具有SEQ ID NO：11的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：12的多肽序列的轻链可变区；或者
h.具有SEQ ID NO：13的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：14的多肽序列的轻链可变区。
在一实施方式中，本发明涉及一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含分别具有SEQ ID NO：38、39、40、62、63和64的多肽序列的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3。在另一实施方式中，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有与SEQ ID NO：15至少85％，优选90％，更优选95％或更多，例如95％、96％、97％、98％或99％同一性的多肽序列的重链可变区，以及具有与SEQ ID NO：16至少85％，优选90％，更优选95％或更多，例如95％、96％、97％、98％或99％同一性的多肽序列的轻链可变区。优选地，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有SEQ ID NO：15的多肽序列的重链可变区；和具有SEQ IDNO：16的多肽序列的轻链可变区。
在一实施方式中，本发明涉及一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含分别具有SEQ ID NO：17、18、19、41、42和43的多肽序列的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3。在另一实施方式中，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有与SEQ ID NO：1至少85％，优选90％，更优选95％或更多，例如95％、96％、97％、98％或99％同一性的多肽序列的重链可变区，以及具有与SEQ ID NO：2至少85％，优选90％，更优选95％或更多，例如95％、96％、97％、98％或99％同一性的多肽序列的轻链可变区。优选地，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有SEQ ID NO：1的多肽序列的重链可变区；和具有SEQ ID NO：2的多肽序列的轻链可变区。
在一实施方式中，本发明涉及一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含分别具有SEQ ID NO：20、21、22、44、45和46的多肽序列的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3。在另一实施方式中，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有与SEQ ID NO：3至少85％，优选90％，更优选95％或更多，例如95％、96％、97％、98％或99％同一性的多肽序列的重链可变区，以及具有与SEQ ID NO：4至少85％，优选90％，更优选95％或更多，例如95％、96％、97％、98％或99％同一性的多肽序列的轻链可变区。优选地，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有SEQ ID NO：3的多肽序列的重链可变区；和具有SEQ ID NO：4的多肽序列的轻链可变区。
在一实施方式中，本发明涉及一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含分别具有SEQ ID NO：23、24、25、47、48和49的多肽序列的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3。在另一实施方式中，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有与SEQ ID NO：5至少85％，优选90％，更优选95％或更多，例如95％、96％、97％、98％或99％同一性的多肽序列的重链可变区，以及具有与SEQ ID NO：6至少85％，优选90％，更优选95％或更多，例如95％、96％、97％、98％或99％同一性的多肽序列的轻链可变区。优选地，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有SEQ ID NO：5的多肽序列的重链可变区；和具有SEQ ID NO：6的多肽序列的轻链可变区。
在一实施方式中，本发明涉及一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含分别具有SEQ ID NO：26、27、28、50、51和52的多肽序列的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3。在另一实施方式中，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有与SEQ ID NO：7至少85％，优选90％，更优选95％或更多，例如95％、96％、97％、98％或99％同一性的多肽序列的重链可变区，以及具有与SEQ ID NO：8至少85％，优选90％，更优选95％或更多，例如95％、96％、97％、98％或99％同一性的多肽序列的轻链可变区。优选地，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有SEQ ID NO：7的多肽序列的重链可变区；和具有SEQ ID NO：8的多肽序列的轻链可变区。
在一实施方式中，本发明涉及一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含分别具有SEQ ID NO：29、30、31、53、54和55的多肽序列的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3。在另一实施方式中，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有与SEQ ID NO：9至少85％，优选90％，更优选95％或更多，例如95％、96％、97％、98％或99％同一性的多肽序列的重链可变区，以及具有与SEQ ID NO：10至少85％，优选90％，更优选95％或更多，例如95％、96％、97％、98％或99％同一性的多肽序列的轻链可变区。优选地，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有SEQ ID NO：9的多肽序列的重链可变区；和具有SEQ ID NO：10的多肽序列的轻链可变区。
在一实施方式中，本发明涉及一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含分别具有SEQ ID NO：32、33、34、56、57和58的多肽序列的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3。在另一实施方式中，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有与SEQ ID NO：11至少85％，优选90％，更优选95％或更多，例如95％、96％、97％、98％或99％一源性的多肽序列的重链可变区，以及具有与SEQ ID NO：12至少85％，优选90％，更优选95％或更多，例如95％、96％、97％、98％或99％同一性的多肽序列的轻链可变区。优选地，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有SEQ ID NO：11的多肽序列的重链可变区；和具有SEQ IDNO：12的多肽序列的轻链可变区。
在一实施方式中，本发明涉及一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含分别具有SEQ ID NO：35、36、37、59、60和61的多肽序列的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3。在另一实施方式中，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有与SEQ ID NO：13至少85％，优选90％，更优选95％或更多，例如95％、96％、97％、98％或99％同一性的多肽序列的重链可变区，以及具有与SEQ ID NO：14至少85％，优选90％，更优选95％或更多，例如95％、96％、97％、98％或99％同一性的多肽序列的轻链可变区。优选地，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有SEQ ID NO：13的多肽序列的重链可变区；和具有SEQ IDNO：14的多肽序列的轻链可变区。
在一实施方式中，本发明涉及一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含分别具有SEQ ID NO：86、87、88、110、111和112的多肽序列的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3。在另一实施方式中，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有与SEQID NO：15至少85％，优选90％，更优选95％或更多，例如95％、96％、97％、98％或99％同一性的多肽序列的重链可变区，以及具有与SEQ ID NO：16至少85％，优选90％，更优选95％或更多，例如95％、96％、97％、98％或99％同一性的多肽序列的轻链可变区。优选地，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有SEQ ID NO：15的多肽序列的重链可变区；和具有SEQ ID NO：16的多肽序列的轻链可变区。
在一实施方式中，本发明涉及一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含分别具有SEQ ID NO：65、66、67、89、90和91的多肽序列的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3。在另一实施方式中，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有与SEQ ID NO：1至少85％，优选90％，更优选95％或更多，例如95％、96％、97％、98％或99％同一性的多肽序列的重链可变区，以及具有与SEQ ID NO：2至少85％，优选90％，更优选95％或更多，例如95％、96％、97％、98％或99％同一性的多肽序列的轻链可变区。优选地，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有SEQ ID NO：1的多肽序列的重链可变区；和具有SEQ ID NO：2的多肽序列的轻链可变区。
在一实施方式中，本发明涉及一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含分别具有SEQ ID NO：68、69、70、92、93和94的多肽序列的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3。在另一实施方式中，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有与SEQ ID NO：3至少85％，优选90％，更优选95％或更多，例如95％、96％、97％、98％或99％同一性的多肽序列的重链可变区，以及具有与SEQ ID NO：4至少85％，优选90％，更优选95％或更多，例如95％、96％、97％、98％或99％同一性的多肽序列的轻链可变区。优选地，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有SEQ ID NO：3的多肽序列的重链可变区；和具有SEQ ID NO：4的多肽序列的轻链可变区。
在一实施方式中，本发明涉及一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含分别具有SEQ ID NO：71、72、73、95、96和97的多肽序列的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3。在另一实施方式例中，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有与SEQ IDNO：5至少85％，优选90％，更优选95％或更多，例如95％、96％、97％、98％或99％同一性的多肽序列的重链可变区，以及具有与SEQ ID NO：6至少85％，优选90％，更优选95％或更多，例如95％、96％、97％、98％或99％同一性的多肽序列的轻链可变区。优选地，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有SEQ ID NO：5的多肽序列的重链可变区；和具有SEQ IDNO：6的多肽序列的轻链可变区。
在一实施方式中，本发明涉及一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含分别具有SEQ ID NO：74、75、76、98、99和100的多肽序列的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3。在另一实施方式中，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有与SEQID NO：7至少85％，优选90％，更优选95％或更多，例如95％、96％、97％、98％或99％同一性的多肽序列的重链可变区，以及具有与SEQ ID NO：8至少85％，优选90％，更优选95％或更多，例如95％、96％、97％、98％或99％同一性的多肽序列的轻链可变区。优选地，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有SEQ ID NO：7的多肽序列的重链可变区；和具有SEQID NO：8的多肽序列的轻链可变区。
在一实施方式中，本发明涉及一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含分别具有SEQ ID NO：77、78、79、101、102和103的多肽序列的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3。在另一实施方式中，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有与SEQID NO：9至少85％，优选90％，更优选95％或更多，例如95％、96％、97％、98％或99％同一性的多肽序列的重链可变区，以及具有与SEQ ID NO：10至少85％，优选90％，更优选95％或更多，例如95％、96％、97％、98％或99％同一性的多肽序列的轻链可变区。优选地，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有SEQ ID NO：9的多肽序列的重链可变区；和具有SEQID NO：10的多肽序列的轻链可变区。
在一实施方式中，本发明涉及一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含分别具有SEQ ID NO：80、81、82、104、105和106的多肽序列的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3。在另一实施方式中，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有与SEQID NO：11至少85％，优选90％，更优选95％或更多，例如95％、96％、97％、98％或99％同一性的多肽序列的重链可变区，以及具有与SEQ ID NO：12至少85％，优选90％，更优选95％或更多，例如95％、96％、97％、98％或99％同一性的多肽序列的轻链可变区。优选地，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有SEQ ID NO：11的多肽序列的重链可变区；和具有SEQ ID NO：12的多肽序列的轻链可变区。
在一实施方式中，本发明涉及一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含分别具有SEQ ID NO：83、84、85、107、108和109的多肽序列的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3。在另一实施方式中，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有与SEQID NO：13至少85％，优选90％，更优选95％或更多，例如95％、96％、97％、98％或99％同一性的多肽序列的重链可变区，以及具有与SEQ ID NO：14至少85％，优选90％，更优选95％或更多，例如95％、96％、97％、98％或99％同一性的多肽序列的轻链可变区。优选地，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有SEQ ID NO：13的多肽序列的重链可变区；和具有SEQ ID NO：14的多肽序列的轻链可变区。
根据另一个特定方面，本发明涉及分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段是嵌合的。
根据另一个特定方面，本发明涉及分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段是人的或人源化的。
根据另一个特定方面，所述人源化单克隆抗体或其抗原结合片段包括：
(1)具有SEQ ID NO：113的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：117的多肽序列的轻链可变区；
(2)具有SEQ ID NO：113的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：118的多肽序列的轻链可变区；
(3)具有SEQ ID NO：114的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：117的多肽序列的轻链可变区；
(4)具有SEQ ID NO：114的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：118的多肽序列的轻链可变区；
(5)具有SEQ ID NO：115的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：117的多肽序列的轻链可变区；
(6)具有SEQ ID NO：115的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：118的多肽序列的轻链可变区；
(7)具有SEQ ID NO：116的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：117的多肽序列的轻链可变区；
(8)具有SEQ ID NO：116的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：118的多肽序列的轻链可变区；
(9)具有SEQ ID NO：119的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：121的多肽序列的轻链可变区；
(10)具有SEQ ID NO：119的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：122的多肽序列的轻链可变区；
(11)具有SEQ ID NO：119的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：123的多肽序列的轻链可变区；
(12)具有SEQ ID NO：120的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：121的多肽序列的轻链可变区；
(13)具有SEQ ID NO：120的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：122的多肽序列的轻链可变区；
(14)具有SEQ ID NO：120的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：123的多肽序列的轻链可变区；
(15)具有SEQ ID NO：124的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：126的多肽序列的轻链可变区；
(16)具有SEQ ID NO：124的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：127的多肽序列的轻链可变区；
(17)具有SEQ ID NO：128的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：131的多肽序列的轻链可变区；
(18)具有SEQ ID NO：128的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：132的多肽序列的轻链可变区；
(19)具有SEQ ID NO：128的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：133的多肽序列的轻链可变区；
(20)具有SEQ ID NO：128的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：134的多肽序列的轻链可变区；
(21)具有SEQ ID NO：129的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：131的多肽序列的轻链可变区；
(22)具有SEQ ID NO：129的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：132的多肽序列的轻链可变区；
(23)具有SEQ ID NO：129的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：133的多肽序列的轻链可变区；
(24)具有SEQ ID NO：129的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：134的多肽序列的轻链可变区；
(25)具有SEQ ID NO：130的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：131的多肽序列的轻链可变区；
(26)具有SEQ ID NO：130的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：132的多肽序列的轻链可变区；
(27)具有SEQ ID NO：130的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：133的多肽序列的轻链可变区；要么
(28)具有SEQ ID NO：130的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：134的多肽序列的轻链可变区。
在另一个一般方面，本发明涉及编码本发明的单克隆抗体或其抗原结合片段的分离的核酸。本领域技术人员可以理解，可以在不改变蛋白质的氨基酸序列的情况下改变蛋白质的编码序列(例如，替换，缺失，插入等)。因此，本领域技术人员应理解，可以改变编码本发明的单克隆抗体或其抗原结合片段的核酸序列，而无需改变蛋白质的氨基酸序列。
在另一个一般方面，本发明涉及包含编码本发明的单克隆抗体或其抗原结合片段的分离的核酸的载体。鉴于本公开，可以使用本领域技术人员已知的任何载体，例如质粒、粘粒、噬菌体载体或病毒载体。在一些实施方式中，载体是重组表达载体，例如质粒。载体可以包括建立表达载体的常规功能的任何元件，例如启动子、核糖体结合元件、终止子、增强子、选择标记和复制起点。该启动子可以是组成型，诱导型或阻遏型启动子。能够将核酸递送至细胞的许多表达载体是本领域已知的，并且可以在本文中用于在细胞中产生抗体或其抗原结合片段。常规的克隆技术或人工基因合成可用于产生根据本发明的实施例的重组表达载体。鉴于本公开，这样的技术对于本领域技术人员是众所周知的。
在另一个一般方面，本发明涉及包含编码本发明的单克隆抗体或其抗原结合片段的分离的核酸的宿主细胞。鉴于本公开，本领域技术人员已知的任何宿主细胞均可用于重组表达本发明的抗体或其抗原结合片段。在一些实施方式中，宿主细胞是大肠杆菌TG1或BL21细胞(用于表达例如scFv或Fab抗体)，CHO-DG44或CHO-K1细胞或HEK293细胞(用于表达例如完整长度的IgG抗体)。根据特定的实施方式，通过常规方法，例如化学转染，热休克或电穿孔，将重组表达载体转化入宿主细胞，在其中将其稳定地整合到宿主细胞基因组中，从而有效地表达重组核酸。
在另一个一般方面，本发明涉及产生本发明的单克隆抗体或其抗原结合片段的方法，包括在产生单克隆抗体或其抗原结合片段的条件下培养包含编码单克隆抗体或其抗原结合片段的核酸的细胞，并从细胞或培养物(例如从上清中)中回收单克隆抗体或其抗原结合片段。可以从细胞中收获表达的抗体或其抗原结合片段，并根据本领域已知的和本文所述的常规技术进行纯化。
药物组合物
在另一个一般方面，本发明涉及一种药物组合物，其包含本发明的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段和药学上可接受的运载体。如本文所用，术语“药物组合物”是指包含本发明的抗体和药学上可接受的运载体的产品。本发明的抗体和包含它们的组合物也可用于制备本文所述的治疗应用的药物。
如本文所用，术语“运载体”是指任何赋形剂、稀释剂、填充剂、盐、缓冲剂、稳定剂、增溶剂、油、脂质、包含脂质的囊泡、微球、脂质体包囊或本领域公知的用于药物制剂的其他物质。应当理解，运载体，赋形剂或稀释剂的特性将取决于特定应用的给药途径。如本文所用，术语“药学上可接受的运载体”是指不干扰本发明所述组合物的有效性或本发明所述组合物的生物活性的无毒材料。根据特定的实施方式，鉴于本公开，适合用于抗体药物组合物中的任何药学上可接受的运载体均可用于本发明。
用药学上可接受的运载体配制药物活性成分是本领域已知的，例如《雷明顿：药学的科学与实践》(例如，第21版(2005年)以及任何更高版本)。其他成分的非限制性实例包括：缓冲剂、稀释剂、溶剂、张力调节剂、防腐剂、稳定剂和螯合剂。一种或多种药学上可接受的运载体可以用于配制本发明的药物组合物。
在本发明的一种实施方式中，所述药物组合物是液体制剂。液体制剂的优选实例是水性制剂，即包含水的制剂。液体制剂可以包含溶液、悬浮液、乳液、微乳液、凝胶等。水性制剂通常包含至少50％w/w的水，或至少60％、70％、75％、80％、85％、90％或至少95％w/w的水。
在一种实施方式中，药物组合物可以被配制成可以注射的，例如通过注射装置(例如注射器或输液泵)注射的注射剂。例如，可以皮下、肌肉内、腹膜内、玻璃体内或静脉内递送注射剂。
在另一种实施方式中，所述药物组合物是固体制剂，例如冷冻干燥或喷雾干燥的组合物，其可以原样使用，或在使用前由医师或患者向其添加溶剂和/或稀释剂。固体剂型可包括片剂，例如压制片剂和/或包衣片剂，以及胶囊剂(例如，硬或软明胶胶囊剂)。药物组合物也可以为例如小包装、糖衣丸、粉末、颗粒、锭剂或用于重构的粉末形式。
剂型可以是立即释放的，在这种情况下，它们可以包含水溶性或分散性载体，或者可以是延迟释放，持续释放或调节释放，在这种情况下，它们可以包含调节剂型在胃肠道或皮肤下的溶解速率的水不溶性聚合物。
在其他实施方式中，药物组合物可以通过鼻内、颊内或舌下递送。
水性制剂中的pH可以在pH 3和pH 10之间。在本发明的一种实施方式中，制剂的pH为约7.0至约9.5。在本发明的另一种实施方式中，制剂的pH为约3.0至约7.0。
在本发明的另一种实施方式中，所述药物组合物包含缓冲剂。缓冲剂的非限制性实例包括：精氨酸、天冬氨酸、双辛酸、柠檬酸盐、磷酸氢二钠、富马酸、甘氨酸、甘氨酰甘氨酸、组氨酸、赖氨酸、马来酸、苹果酸、乙酸钠、碳酸钠、磷酸二氢钠、磷酸钠、琥珀酸酯、酒石酸、三辛胺和三(羟甲基)-氨基甲烷及其混合物。缓冲剂可以总计约0.01mg/ml至约50mg/ml的浓度，例如约0.1mg/ml至约20mg/ml的浓度单独存在，或组合存在。包含这些特定缓冲剂中的每一种的药物组合物构成本发明的替代实施方式。
在本发明的另一种实施方式中，所述药物组合物包含防腐剂。防腐剂的非限制性实例包括：苄索氯铵、苯甲酸、苯甲醇、溴酚、4-羟基苯甲酸丁酯、氯丁醇、氯甲酚、氯己定、氯酚丁酮、邻甲酚、间甲酚、对甲酚、4-羟基苯甲酸乙酯、丙二脲、4-羟基苯甲酸甲酯、苯酚、2-苯氧基乙醇、2-苯基乙醇、4-羟基苯甲酸丙酯、脱氢乙酸钠、硫柳汞及其混合物。防腐剂可以总计约0.01mg/ml至约50mg/ml，例如约0.1mg/ml至约20mg/ml的浓度单独存在，或组合存在。包含这些特定防腐剂中的每一种的药物组合物构成本发明的替代实施方式。
在本发明的另一种实施方式中，所述药物组合物包含等渗剂。该实施方式的非限制性实例包括盐(例如氯化钠)、氨基酸(例如甘氨酸、组氨酸、精氨酸、赖氨酸、异亮氨酸、天冬氨酸、色氨酸和苏氨酸)、糖醇(例如甘油、1,2-丙二醇丙二醇、1,3-丙二醇和1,3-丁二醇)、聚乙二醇(例如PEG400)及其混合物。等渗剂的另一个实例包括糖。糖的非限制性实例可以是单糖、二糖或多糖，或水溶性葡聚糖，包括例如果糖、葡萄糖、甘露糖、山梨糖、木糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖、海藻糖、右旋糖酐、支链淀粉、糊精、环糊精、α和β-HPCD、可溶性淀粉、羟乙基淀粉和羧甲基纤维素钠。等渗剂的另一个实例是糖醇，其中术语“糖醇”定义为具有至少一个-OH基团的C(4-8)烃。糖醇的非限制性实例包括甘露糖醇、山梨糖醇、肌醇、半乳糖醇、二甘醇、木糖醇和阿拉伯糖醇。等渗剂可以总计约0.01mg/ml至约50mg/ml，例如约0.1mg/ml至约20mg/ml的浓度单独存在，或组合存在。包含这些特定等渗剂的每一种的药物组合物构成本发明的替代实施方式。
在本发明的另一种实施方式中，所述药物组合物包含螯合剂。螯合剂的非限制性实例包括柠檬酸、天冬氨酸、乙二胺四乙酸(EDTA)的盐及其混合物。螯合剂可以总计约0.01mg/ml至约50mg/ml，例如约0.1mg/ml至约20mg/ml的浓度单独存在，或组合存在。包含这些特定螯合剂的每一种的药物组合物构成本发明的替代实施方式。
在本发明的另一种实施方式中，所述药物组合物包含稳定剂。稳定剂的非限制性实例包括一种或多种聚集抑制剂，一种或多种氧化抑制剂，一种或多种表面活性剂和/或一种或多种蛋白酶抑制剂。
在本发明的另一种实施方式中，所述药物组合物包含稳定剂，其中所述稳定剂是羧基-/羟基纤维素及其衍生物(例如HPC、HPC-SL、HPC-L和HPMC)、环糊精、2-甲基硫代乙醇、聚乙二醇(例如PEG 3350)、聚乙烯醇(PVA)、聚乙烯吡咯烷酮、盐(例如氯化钠)、含硫物质(例如单硫代甘油)或巯基乙酸。稳定剂可以总计约0.01mg/ml至约50mg/ml，例如约0.1mg/ml至约20mg/ml的浓度单独存在，或组合存在。包含这些特定稳定剂的每一种的药物组合物构成本发明的替代实施方式。
在本发明的其他实施方式中，药物组合物包含一种或多种表面活性剂，优选一种表面活性剂、至少一种表面活性剂、或两种不同的表面活性剂。术语“表面活性剂”是指由水溶性(亲水性)部分和脂溶性(亲脂性)部分组成的任何分子或离子。表面活性剂可以选自例如阴离子表面活性剂、阳离子表面活性剂、非离子表面活性剂和/或两性离子表面活性剂。表面活性剂可以总计约0.1mg/ml至约20mg/ml的浓度单独存在，或组合存在。包含这些特定表面活性剂的每一种的药物组合物构成本发明的替代实施方式。
在本发明的另一种实施方式中，所述药物组合物包含一种或多种蛋白酶抑制剂，例如EDTA和/或盐酸(HCl)苯甲脒。蛋白酶抑制剂可以总计约0.1mg/ml至约20mg/ml的浓度单独存在，或组合存在。包含这些特异性蛋白酶抑制剂的每一种的药物组合物构成本发明的替代实施方式。
在另一个一般方面，本发明涉及生产包含本发明的单克隆抗体或其抗原结合片段的药物组合物的方法，该方法包括将单克隆抗体或其抗原结合片段与药学上可接受的载体组合以获得药物组合物。
使用方法
在另一个一般方面，本发明涉及靶向受试者的癌细胞表面FOLR1的方法，该方法包括向受试者施用与FOLR1特异性结合的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段或本发明的药物组合物。单克隆抗体或其抗原结合片段与FOLR1的结合可介导补体依赖性细胞毒性(CDC)，抗体依赖性吞噬作用(ADPC)和/或抗体依赖性细胞毒性(ADCC)或其他导致被靶向的癌细胞死亡的作用。单克隆抗体或其抗原结合片段可以例如用于募集缀合的药物，和/或可以与另一种单克隆抗体形成双特异性抗体以介导被靶向癌细胞的死亡。
结合FOLR1的抗体及其抗原结合片段的功能活性可以通过本领域已知的和本文所述的方法来表征。表征结合FOLR1的抗体及其抗原结合片段的方法包括但不限于亲和力和特异性测定法，包括Biacore、ELISA和OctetRed分析；结合测定法，以检测癌细胞或通过FACS重组表达FOLR1的细胞上的抗体与FOLR1的结合。根据特定的实施方式，表征与FOLR1结合的抗体及其抗原结合片段的方法包括以下所述的方法。
在另一个一般方面，本发明涉及一种在有需要的受试者中治疗癌症的方法，该方法包括向该受试者施用与FOLR1特异性结合的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，或本发明的药物组合物。癌症可以例如选自但不限于肺癌、胃癌、结肠癌、肝细胞癌、肾细胞癌、膀胱尿路上皮癌、转移性黑素瘤、乳腺癌、卵巢癌、子宫颈癌、头颈癌、胰腺癌、神经胶质瘤、胶质母细胞瘤和其他实体瘤，以及非霍奇金淋巴瘤(NHL)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、慢性粒细胞性白血病(CML)、多发性骨髓瘤(MM)、急性髓性白血病(AML)和其他液体肿瘤。
根据本发明的实施方式，药物组合物包含治疗有效量的抗FOLR1抗体或其抗原结合片段。如本文所用，术语“治疗有效量”是指在受试者中引起期望的生物学或医学反应的活性成分或组分的量。相对于所述目的，可以凭经验和以常规方式确定治疗有效量。
如本文中针对抗FOLR1抗体或其抗原结合片段所使用的，治疗有效量是指在有需要的受试者中调节免疫应答的抗FOLR1抗体或其抗原结合片段的量。
根据特定的实施方式，治疗有效量是指足以实现以下一种、两种、三种、四种或更多种作用的治疗量：(i)降低或改善要治疗的疾病、病症或病状或与之相关的症状的严重程度；(ii)减少待治疗的疾病、病症或病状或与之相关的症状的持续时间；(iii)预防待治疗的疾病、病症或病状的发展，或与之相关的症状；(iv)使待治疗的疾病、病症或病状或与之相关的症状消退；(v)预防待治疗的疾病、病症或病状或与之相关的症状的发展或发作；(vi)防止待治疗的疾病、病症或病状或与其相关的症状的复发；(vii)减少患有具有待治疗的疾病、病症或病状或与之相关的症状的受试者的住院；(viii)减少患有要治疗的疾病、病症或病状或与之相关的症状的受试者的住院时间；(ix)增加患有要治疗的疾病、病症或病状或与之相关的症状的受试者的存活率；(xi)在受试者中抑制或减轻要治疗的疾病、病症或病状或与之相关的症状；和/或(xii)增强或改善另一种疗法的预防或治疗作用。
治疗有效量或剂量可以根据各种因素而变化，例如要治疗的疾病、病症或病状，给药方式，靶位点，受试者的生理状态(包括例如年龄、体重、健康)，受试者是人还是动物，是否已施用其他药物，以及治疗是预防性还是治疗性。调整最佳治疗剂量以优化安全性和功效。
根据特定的实施方式，本文所述的组合物被配制以适合于向受试者的预期施用途径。例如，本文所述的组合物可以配制成适合于静脉内、皮下或肌内施用。
如本文所用，术语“治疗”、“治疗的”和“治疗方法”均是指改善或逆转与癌症有关的至少一种可测量的物理参数，其在受试者中不一定是可辨别的，但是在受试者中是可以辨别的。术语“治疗”、“治疗的”和“治疗方法”还可以指引起疾病消退，防止疾病进展，或至少减慢疾病、病症或病状的进展。在特定的实施方式中，“治疗”是指减轻、预防与该疾病、病症或病状相关的一种或多种症状的发展或发作，或减少其持续时间，例如一种肿瘤或更优选地为一种癌症。在特定的实施方式中，“治疗”是指预防疾病、病症或病状的复发。在特定的实施方式中，“治疗”是指患有疾病、病症或病状的受试者的存活率的增加。在特定的实施方式中，“治疗”是指消除受试者的疾病、病症或病状。
根据特定的实施方式，提供了用于治疗癌症的组合物。对于癌症疗法，该组合物可以与另一种疗法组合使用，包括但不限于化学疗法、抗CD20 mAb、抗CD47 mAb、抗TIM-3mAb、抗LAG-3mAb、抗CD73 mAb、抗apelin mAb、抗CTLA-4mAb、抗PD-L1 mAb、抗PD-1mAb、PD-1/PD-L1治疗、其他免疫-肿瘤药物、抗血管生成剂、放射疗法、抗体-药物偶联物(ADC)、靶向疗法或其他抗癌药物。抗FOLR1抗体可用于与伴侣单克隆抗体构建具有针对PD-1、PD-L1、LAG3、TIM-3、CTLA-4、EGFR、HER-2、CD19、CD20、CD33、CD73、CD47、CD3、apelin、DLL-3，TIP-1，CLDN18.2和/或其他肿瘤表面抗原的双特异性抗体，以治疗表达FOLR1和特定肿瘤相关抗原的癌症/肿瘤。
如本文所用，在对受试者施用两种或更多种疗法的上下文中，术语“组合”是指使用一种以上疗法。术语“组合”的使用不限制对受试者施用疗法的顺序。例如，可以在对受试者施用第二种疗法之前(例如，5分钟、15分钟、30分钟、45分钟、1小时、2小时、4小时、6小时、12小时、16小时、24小时、48小时、72小时、96小时、1周、2周、3周、4周、5周、6周、8周或12周)，同时，或之后(例如，5分钟、15分钟、30分钟、45分钟、1小时、2小时、4小时、6小时、12小时、16小时、24小时、48小时、72小时、96小时、1周、2周、3周、4周、5周、6周、8周或12周)施用第一疗法(例如本文所述的组合物)。
在另一个一般方面，本发明涉及一种确定受试者体内FOLR1水平的方法。该方法包括(a)从受试者获得样品；(b)使样品与本发明的单克隆抗体或其抗原结合片段接触；(c)确定受试者体内的FOLR1水平。
如本文所用，“样品”是指从受试者分离的生物样品，并且可以包括但不限于全血、血清、血浆、血细胞、内皮细胞、组织活检组织(例如癌组织)、淋巴管液体、腹水、组织液、骨髓、脑脊液、唾液、粘液、痰、汗液、尿液或任何其他分泌物，排泄物或其他体液。“血液样本”是指全血或其任何部分，包括血细胞、血清和血浆。
在某些实施方式中，可以使用选自但不限于蛋白质免疫印迹测定、ELISA测定和/或免疫组织化学(IHC)的测定来确定受试者体内的FOLR1水平。相对蛋白水平可以通过蛋白质免疫印迹分析和免疫组织化学(IHC)来确定，绝对蛋白水平可以通过ELISA分析来确定。当确定FOLR1的相对水平时，可以确定至少两个样品之间的FOLR1水平，例如，在不同时间点来自同一受试者的样品之间，来自同一受试者的不同组织的样品之间和/或来自两个受试者的不同的组织样品之间。可替代地，当例如通过ELISA测定法确定FOLR1的绝对水平时，可以通过在测试样品之前为ELISA测定法创建标准来确定样品中的FOLR1的绝对水平。本领域技术人员将理解，利用本发明的抗体或其抗原结合片段使用哪种分析技术确定来自受试者的样品中的FOLR1水平。
利用确定受试者样本中FOLR1水平的方法可指导诊断疾病中FOLR1水平异常(升高、降低或不足)，并做出适当的治疗决策。此类疾病可能包括，例如，癌症。另外，通过监测受试者中FOLR1的水平，可以基于对特定疾病中和/或在特定疾病的进展期间的FOLR1水平的了解，来确定发生上述疾病的风险。
实施方式
本发明提供以下非限制性实施方式。
实施方式1是一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含重链互补决定区1(HCDR1)、HCDR2、HCDR3，轻链互补决定区1(LCDR1)、LCDR2和LCDR3，其具有以下多肽序列：
a.分别为SEQ ID NO：38、39、40、62、63和64；
b.分别为SEQ ID NO：17、18、19、41、42和43；
c.分别为SEQ ID NO：20、21、22、44、45和46；
d.分别为SEQ ID NO：23、24、25、47、48和49；
e.分别为SEQ ID NO：26、27、28、50、51和52；
f.分别为SEQ ID NO：29、30、31、53、54和55；
g.分别为SEQ ID NO：32、33、34、56、57和58；或者
h.分别为SEQ ID NO：35、36、37、59、60和61；
其中抗体或其抗原结合片段特异性结合FOLR1，优选人FOLR1。
实施方式2是一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含重链互补决定区1(HCDR1)、HCDR2、HCDR3，轻链互补决定区1(LCDR1)、LCDR2和LCDR3，其具有以下多肽序列：
a.分别为SEQ ID NO：86、87、88、110、111和112；
b.分别为SEQ ID NO：65、66、67、89、90和91；
c.分别为SEQ ID NO：68、69、70、92、93和94；
d.分别为SEQ ID NO：71、72、73、95、96和97；
e.分别为SEQ ID NO：74、75、76、98、99和100；
f.分别为SEQ ID NO：77、78、79、101、102和103；
g.分别为SEQ ID NO：80、81、82、104、105和106；或者
h.分别为SEQ ID NO：83、84、85、107、108和109；
其中抗体或其抗原结合片段特异性结合FOLR1，优选人FOLR1。
实施方式3是实施方式1或2的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含含有与SEQ ID NO：15、1、3、5、7、9、11或13具有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的多肽序列的重链可变区，或含有与SEQ ID NO：16，2，4，6，8，10，12或14具有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的多肽序列的轻链可变区。
实施方式4是实施方式1-3的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包括：
a.具有SEQ ID NO：15的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：16的多肽序列的轻链可变区；
b.具有SEQ ID NO：1的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：2的多肽序列的轻链可变区；
c.具有SEQ ID NO：3的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：4的多肽序列的轻链可变区；
d.具有SEQ ID NO：5的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：6的多肽序列的轻链可变区；
e.具有SEQ ID NO：7的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：8的多肽序列的轻链可变区；
f.具有SEQ ID NO：9的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：10的多肽序列的轻链可变区；
g.具有SEQ ID NO：11的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：12的多肽序列的轻链可变区；或者
h.具有SEQ ID NO：13的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：14的多肽序列的轻链可变区。
实施方式5是实施方式1-4中任一项的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段是嵌合的。
实施方式6是实施方式1-5中任一项的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段是人的或人源化的。
实施方式7是实施方式6中任一项的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中人源化单克隆抗体或其抗原结合片段包括：
(1)具有SEQ ID NO：113的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：117的多肽序列的轻链可变区；
(2)具有SEQ ID NO：113的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：118的多肽序列的轻链可变区；
(3)具有SEQ ID NO：114的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：117的多肽序列的轻链可变区；
(4)具有SEQ ID NO：114的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：118的多肽序列的轻链可变区；
(5)具有SEQ ID NO：115的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：117的多肽序列的轻链可变区；
(6)具有SEQ ID NO：115的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：118的多肽序列的轻链可变区；
(7)具有SEQ ID NO：116的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：117的多肽序列的轻链可变区；
(8)具有SEQ ID NO：116的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：118的多肽序列的轻链可变区；
(9)具有SEQ ID NO：119的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：121的多肽序列的轻链可变区；
(10)具有SEQ ID NO：119的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：122的多肽序列的轻链可变区；
(11)具有SEQ ID NO：119的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：123的多肽序列的轻链可变区；
(12)具有SEQ ID NO：120的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：121的多肽序列的轻链可变区；
(13)具有SEQ ID NO：120的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：122的多肽序列的轻链可变区；
(14)具有SEQ ID NO：120的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：123的多肽序列的轻链可变区；
(15)具有SEQ ID NO：124的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：126的多肽序列的轻链可变区；
(16)具有SEQ ID NO：124的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：127的多肽序列的轻链可变区；
(17)具有SEQ ID NO：128的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：131的多肽序列的轻链可变区；
(18)具有SEQ ID NO：128的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：132的多肽序列的轻链可变区；
(19)具有SEQ ID NO：128的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：133的多肽序列的轻链可变区；
(20)具有SEQ ID NO：128的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：134的多肽序列的轻链可变区；
(21)具有SEQ ID NO：129的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：131的多肽序列的轻链可变区；
(22)具有SEQ ID NO：129的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：132的多肽序列的轻链可变区；
(23)具有SEQ ID NO：129的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：133的多肽序列的轻链可变区；
(24)具有SEQ ID NO：129的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：134的多肽序列的轻链可变区；
(25)具有SEQ ID NO：130的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：131的多肽序列的轻链可变区；
(26)具有SEQ ID NO：130的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：132的多肽序列的轻链可变区；
(27)具有SEQ ID NO：130的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：133的多肽序列的轻链可变区；或
(28)具有SEQ ID NO：130的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：134的多肽序列的轻链可变区。
实施方式8是实施方式1-7中任一项的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述单克隆抗体或其抗原结合片段能够结合FOLR1并诱导效应子介导的肿瘤细胞裂解。
实施方式9是分离的核酸，其编码实施方式1-8中任一项的单克隆抗体或其抗原结合片段。
实施方式10是包含实施方式9的分离的核酸的载体。
实施方式11是包含实施方式10的载体的宿主细胞。
实施方式12是药物组合物，其包含实施方式1-8中任一项的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段和药学上可接受的运载体。
实施方式13是在有此需要的受试者中治疗癌症的方法，其包括向受试者施用实施方式12的药物组合物。
实施方式14是在有此需要的受试者中靶向癌细胞表面FOLR1的方法，该方法包括向受试者施用实施方式12的药物组合物。
实施方式15是产生实施方式1-8中任一项的单克隆抗体或其抗原结合片段的方法，其包括在产生单克隆抗体或其抗原结合片段下培养包含编码该单克隆抗体或其抗原结合片段的核酸的细胞，并从细胞或培养物中回收单克隆抗体或其抗原结合片段。
实施方式16是生产包含实施方式1-8中任一项的单克隆抗体或其抗原结合片段的药物组合物的方法，该方法包括将单克隆抗体或其抗原结合片段与药学上可接受的运载体组合以获得该药物组合物。
实施方式17是确定受试者体内FOLR1水平的方法，该方法包括：
a.从受试者获得样品；
b.使样品与实施方式1-8中任一项的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段接触；
c.确定受试者体内FOLR1水平。
实施方式18是实施方式17的方法，其中所述样品是组织样品。
实施方式19是实施方式18的方法，其中所述组织样品是癌组织样品。
实施方式20是实施方式17的方法，其中所述样品是血液样品。
实施例
实施例1：抗FOLR1单克隆抗体的鉴定
用含有人FOLR1(Arg25至Met233)的融合蛋白免疫小鼠，所述融合蛋白在C末端与人Fc融合(huFOLR1-huFc)。血浆滴度通过ELISA确定。小鼠安乐死后，收集淋巴结和脾脏以产生杂交瘤。杂交瘤在96孔组织培养板中生长，并使用稳定表达全长人FOLR1的CHO细胞通过ELISA和FACS筛选单个孔的上清液。分离顶端阳性克隆并测序。
表1和2提供了抗FOLR1单克隆抗体的重链和轻链可变区的序列，表3-6提供了抗FOLR1单克隆抗体的CDR区。
表1：抗FOLR1 mAb的重链可变区序列
Figure BDA0002681350090000351
VH：重链可变区；ID：序列号(SEQ ID NO)
表2：抗FOLR1 mAb的轻链可变区序列
Figure BDA0002681350090000361
VL：轻链可变区；ID：序列号(SEQ ID NO)
表3：抗FOLR1 mAb的重链CDR区1-3
mAb克隆 HC CDR1 ID HC CDR2 ID HC CDR3 ID
F4 GFTFSDYG 17 ISSGSNTI 18 ARLAEWDVAY 19
F5 GFTFSNYG 20 ISSGGSYT 21 STQGSSGYVGY 22
F7 GYSFTDYN 23 IDPNYGTT 24 AIKGYGNPAAY 25
F8 GFTLSTYA 26 ISGGGGDT 27 ARQSHYGSSYYFDN 28
F10 GYAFSSSW 29 IYPGDGYT 30 TRHGDFPYWYFDV 31
F17 GFTFSDFG 32 MSYTPGTF 33 ARVHVGTVDY 34
F19 GFTFSDYW 35 IGNKFHNYET 36 TKLGRGYYVMDY 37
F20 GYTFASYY 38 INPRSGGT 39 SRSGRLRGFYTMDY 40
HC：重链；CDR：互补决定区；ID：序列号(SEQ ID NO)
使用IMGT方法确定了抗FOLR1 mAb的HC CDR(Lefranc，M.-P.等，Nucleic AcidsRes.1999；27:209-212)。
表4：抗FOLR1单克隆抗体的轻链CDR区1-3
Figure BDA0002681350090000362
Figure BDA0002681350090000371
LC：轻链；CDR：互补决定区；ID：序列号(SEQ ID NO)
使用IMGT方法确定了抗FOLR1 mAb的LC CDR(Lefranc，M.-P.等，Nucleic AcidsRes.1999；27:209-212)。
表5：抗FOLR1 mAb的重链CDR区1-3
Figure BDA0002681350090000372
HC：重链；CDR：互补决定区；ID：序列号(SEQ ID NO)
使用Kabat方法确定了抗FOLR1 mAb的HC CDR(Elvin A.Kabat等，《免疫学蛋白质序列》第5版(1991))。
表6：抗FOLR1单克隆抗体的轻链CDR区1-3
Figure BDA0002681350090000373
LC：轻链；CDR：互补决定区；ID：序列号(SEQ ID NO)
使用Kabat方法确定了抗FOLR1 mAb的LC CDR(Elvin A.Kabat等，《免疫学蛋白质序列》第5版(1991))。
实施例2：从杂交瘤上清液生产和纯化单克隆抗体
使用A蛋白亲和色谱法从阳性克隆的杂交瘤培养基/上清液中纯化小鼠抗FOLR1mAb。
实施例3：纯化的抗FOLR1小鼠抗体的FACS结合分析
将用全长人FOLR1稳定转染的CHO细胞以200,000个细胞/孔转移到96孔板中，用FACS缓冲液(1×PBS，pH6.8+2％FBS)洗涤一次，并与不同浓度的从杂交瘤上清液纯化的小鼠抗FOLR1 mAb在冰上孵育15分钟。然后将细胞以1,000rpm离心5分钟，并用FACS缓冲液洗涤3次。将细胞与缀合PE的山羊抗小鼠IgG多克隆抗体一起孵育，并在冰上另外孵育15分钟。然后将细胞用FACS缓冲液洗涤3次，然后重悬于含有0.1μg/ml PI(碘化丙啶)的FACS缓冲液中，以进行活/死细胞门控。然后将细胞通过FACS Caliber仪器运行，并通过Flowjo软件分析数据。纯化的小鼠抗FOLR1mAb与稳定表达人FOLR1的CHO细胞结合的结果显示在图1A-1B中。MFI，平均荧光强度。
实施例4：从转染的293E细胞培养基中生产和纯化嵌合抗FOLLR1 mAb
为了获得重组嵌合抗FOLR1 mAb，将分别含有与人IgG1重链和κ轻链恒定区融合的小鼠可变区(VH和VL)的表达载体瞬时转染到293E细胞中。使用A蛋白亲和层析纯化在转染细胞的悬浮液中产生的重组抗体。
实施例5：纯化的嵌合抗FOLR1单克隆抗体的ELISA结合分析
在ELISA分析中测试了纯化的嵌合mAb与固定化人FOLR1结合的能力。将碳酸盐包被缓冲液中的人FOLR1的重组胞外域(近岸蛋白公司，目录号：C784)在室温下包被在96孔板上1小时。在室温下，用TBST配制的5％BSA封闭该板1小时。在各平板的每个孔中，将各种浓度的mAb在室温下孵育1小时。洗涤平板，并通过与辣根过氧化物酶(hIgG-HRP)缀合的抗人IgG(赛默飞世尔科技公司，目录号：H10007)，在室温下孵育1小时,检测与FOLR1的结合。在洗涤后，使用一步检测溶液(赛默飞世尔科技公司，目录号：34028)建立ELISA，并在450nm处测量吸光度。结果显示在图2A-2C中。
实施例6：纯化的嵌合抗FOLR1单克隆抗体的FACS结合分析
为了评估嵌合抗FOLR1 mAb与已知表达FOLR1的细胞的结合，将SK-OV-3(
Figure BDA0002681350090000391
HTB-77TM)细胞以每孔80,000个细胞接种在96孔非结合U底板中(葛莱娜第一生化有限公司，目录号：650901)。在一些实验中，每孔使用90,000个细胞。将细胞在含有不同浓度单克隆抗体的50μL FACS缓冲液(含0.1％BSA和0.05％叠氮化钠的HBSS)中冰上孵育15分钟。洗涤后，将细胞在50μLFACS缓冲液中避光冰上孵育15分钟，该缓冲液包含3.5μg/mL与
Figure BDA0002681350090000392
488(英杰公司，目录号：H10120)偶联的F(ab')2-山羊抗人IgG Fc，然后再次洗涤。使用Attune NxT流式细胞仪分析细胞。嵌合抗FOLR1mAb与SK-OV-3细胞结合的结果显示于图3A-3D。MFI，平均荧光强度。
实施例7：嵌合抗FOLR1 mAb的Biacore测定
通过表面等离振子共振(SPR)(Biacore 8k，GE医疗公司)测量嵌合抗FOLR1 mAb与FOLR1的相互作用。简而言之，将抗FOLR1 mAb在HBS-P缓冲液(0.01M HEPES pH 7.4，0.15MNaCl，0.05％v/v表面活性剂P20)中固定于A蛋白传感器芯片上(GE医疗公司，目录号：29-1275-56)，进样流速为10μL/ml。不同浓度的重组FOLR1(近岸蛋白公司，目录号：C784)在HBS-P缓冲液中以30μL/min的流速被加载。抗原加载后，表面用10mM甘氨酸-HCl(pH 1.5)再生。使用Biacore 8k评估软件(GE医疗公司)将传感器克数1：1与结合模型拟合。表7显示了抗FOLR1 mAb的结合亲和力结果。
表7：来自Biacore分析的抗FOLR1 mAb的KD值
嵌合mAb KD(nM)
F4 0.547
F5 0.352
F7 2.33
F8 0.721
F10 0.704
F17 0.265
F19 11.8
F20 1.00
实施例8：抗FOLR1单克隆抗体的人源化
小鼠抗FOLR1 mAb被人源化以降低用于人类患者时的免疫原性。将重链和轻链可变区(VH和VL)的序列与蛋白质数据库(PDB)数据库中的人抗体序列进行比较，并建立同源性模型。将小鼠mAb的重链和轻链中的CDR移植到人框架中，该框架最有可能维持抗原结合所需的适当结构。在必要时，设计了从人类残基到小鼠残基的反突变或其他突变。表8显示了人源化VH和VL区的序列。人源化的VH和VL区分别与人IgG1重链和κ轻链的恒定区融合。将对应于mAb序列的构建体用于CHO细胞中的瞬时转染，并采用ELISA分析纯化的mAb与固定化FOLR1细胞胞外域结合的能力。在测定中测试了同种型对照，以确认在测定背景以上没有非特异性结合。人源化的F5克隆的结果显示在图4A-4C；人源化的F10克隆的结果示于图5A-5B；人源化的F17克隆的结果示于图6A-6B；人源化的F20克隆的结果示于图7A-7D。
使用FACS分析测试了人源化的抗FOLR1 mAb与SK-OV-3细胞结合的能力。数据显示在8A-8J中。
根据制造商提供的方案，使用ADCC报告生物测量核心试剂盒(普洛麦格公司，目录号G7010)测量单克隆抗体的抗体依赖性细胞毒性(ADCC)。简而言之，在半区96孔微孔板(康宁公司，目录号3696)中，将每孔约12,500个SK-OV-3细胞与不同浓度的测试抗体在ADCC测定缓冲液中混合。然后，每孔加入约37,500个ADCC生物测定效应细胞至最终体积为37.5μL并混合。将板在37℃孵育6小时而不摇动。为了测量萤光素酶的活性，从每个孔中取出12.5μL的测定混合物，并加入25μL的Bio-Glo萤光素酶测定试剂。将板在室温下振荡孵育10分钟。将每孔30μL的混合物转移至白板(布兰德公司，目录号781621)，在EnVision 2102多模式读板器上测量发光。4种人源化单克隆抗体的ADCC活性结果如图9所示。RLU，相对光单位。
表8：人源化抗FOLR1 mAb重链和轻链可变区的序列
Figure BDA0002681350090000401
Figure BDA0002681350090000411
本领域技术人员将认识到，可以在不脱离本发明的广泛发明构思的情况下对上述实施例进行改变。因此，应当理解，本发明不限于所公开的特定实施例，而是旨在涵盖在本说明书所限定的本发明的精神和范围内的修改。
序列表
<110> 凡恩世制药公司
<120> 抗叶酸受体1抗体及其用途
<130> 689204-11WO
<150> 62/642,213
<151> 2018-03-13
<160> 135
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Phe Ile Ser Ser Gly Ser Asn Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ile Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Ala Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Phe
65 70 75 80
Leu Gln Met Ala Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Leu Ala Glu Trp Asp Val Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ala
115
<210> 2
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Asp Arg Ile Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asn Ile Asn Asn Asn
20 25 30
Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Lys Phe Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile Asn Gly Val Glu Thr
65 70 75 80
Glu Asp Phe Gly Met Tyr Phe Cys Gln Gln Ile Tyr Ser Trp Pro Gln
85 90 95
Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Arg Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 3
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Glu Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Asp Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Ser Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Asp Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ser Thr Gln Gly Ser Ser Gly Tyr Val Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 4
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Phe Leu Gly
1 5 10 15
Gly Lys Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Ile Thr Asn Phe
20 25 30
Ile Gly Trp Tyr Gln His Lys Pro Gly Lys Gly Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Ser Tyr Thr Ser Ile Leu Glu Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Arg Asp Tyr Ser Phe Ser Ile Ser Asn Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Tyr Asn Leu Trp Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 5
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
Glu Phe Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Asn Met Asn Trp Val Lys Gln Ser Asn Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Val Ile Asp Pro Asn Tyr Gly Thr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Val Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Gln Ser Ser Ile Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ala Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Ile Lys Gly Tyr Gly Asn Pro Ala Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ala
115
<210> 6
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 6
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gly Lys Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asn Lys Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln His Glu Pro Gly Lys Gly Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Arg Tyr Thr Ser Ile Leu Glu Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Arg Asp Tyr Ser Phe Ser Ile Ser Asn Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Tyr Asn Leu Trp Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 7
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 7
Glu Val Met Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Leu Ser Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Gly Gly Gly Gly Asp Thr Tyr His Leu Asp Thr Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gln Ser His Tyr Gly Ser Ser Tyr Tyr Phe Asp Asn Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 8
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 8
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Ile Val Thr Ile Ile Cys Arg Val Ser Glu Asn Ile Asp Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val
35 40 45
Tyr Ala Ala Thr Asn Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Ser Gln Tyr Ser Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Arg Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Tyr Thr Thr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Asp Ile Lys
100 105
<210> 9
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 9
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Ser
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Arg Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Tyr Thr His Tyr Asn Gly Met Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Gly Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Thr Arg His Gly Asp Phe Pro Tyr Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Thr
100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 10
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 10
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Ser Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Asp Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val
35 40 45
Tyr Ala Ala Thr Asn Leu Ala Val Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Gln Tyr Thr Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Arg Tyr Tyr Cys Gln His His Tyr Ser Thr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 11
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 11
Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Arg Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Phe
20 25 30
Gly Met His Trp Ile Arg Gln Ala Pro Glu Arg Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Tyr Met Ser Tyr Thr Pro Gly Thr Phe His Tyr Ala Asp Thr Val
50 55 60
Lys Asp Arg Phe Phe Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Phe
65 70 75 80
Leu Gln Met Thr Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Val His Val Gly Thr Val Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 12
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 12
Asp Val Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Asp Ser Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asn Ile Asn Asn Asn
20 25 30
Leu His Trp Phe Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Asn Val Glu Thr
65 70 75 80
Glu Asp Phe Gly Ile Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Asn Ser Trp Pro Ala
85 90 95
Leu Thr Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Glu Leu Lys
100 105
<210> 13
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 13
Glu Val Lys Leu Asp Glu Thr Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Pro Met Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ser Pro Asp Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Gln Ile Gly Asn Lys Phe His Asn Tyr Glu Thr Tyr Tyr Ser Asp
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ser
65 70 75 80
Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Val Glu Asp Thr Gly Ile Tyr
85 90 95
Tyr Cys Thr Lys Leu Gly Arg Gly Tyr Tyr Val Met Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 14
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 14
Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Leu Asn Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Thr Asn His
20 25 30
Leu Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Phe Gln Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Asp Ser Gln His Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 15
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 15
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Gln Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ala Ser Tyr
20 25 30
Tyr Leu Tyr Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Asn Pro Arg Ser Gly Gly Thr Asn Phe Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Ser Lys Ala Thr Val Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ser Arg Ser Gly Arg Leu Arg Gly Phe Tyr Thr Met Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 16
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 16
Asn Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Lys Ser Met Ser Val Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Thr Leu Ser Cys Lys Ala Gly Glu Asn Val Gly Ser Tyr
20 25 30
Val Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Gln Ser Pro Glu Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Asn Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Ala Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala
65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Gln Thr Tyr Arg Phe Leu Thr
85 90 95
Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 17
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 17
Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Gly
1 5
<210> 18
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 18
Ile Ser Ser Gly Ser Asn Thr Ile
1 5
<210> 19
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 19
Ala Arg Leu Ala Glu Trp Asp Val Ala Tyr
1 5 10
<210> 20
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 20
Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Gly
1 5
<210> 21
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 21
Ile Ser Ser Gly Gly Ser Tyr Thr
1 5
<210> 22
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 22
Ser Thr Gln Gly Ser Ser Gly Tyr Val Gly Tyr
1 5 10
<210> 23
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 23
Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr Asn
1 5
<210> 24
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 24
Ile Asp Pro Asn Tyr Gly Thr Thr
1 5
<210> 25
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 25
Ala Ile Lys Gly Tyr Gly Asn Pro Ala Ala Tyr
1 5 10
<210> 26
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 26
Gly Phe Thr Leu Ser Thr Tyr Ala
1 5
<210> 27
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 27
Ile Ser Gly Gly Gly Gly Asp Thr
1 5
<210> 28
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 28
Ala Arg Gln Ser His Tyr Gly Ser Ser Tyr Tyr Phe Asp Asn
1 5 10
<210> 29
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 29
Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Ser Trp
1 5
<210> 30
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 30
Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Tyr Thr
1 5
<210> 31
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 31
Thr Arg His Gly Asp Phe Pro Tyr Trp Tyr Phe Asp Val
1 5 10
<210> 32
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 32
Gly Phe Thr Phe Ser Asp Phe Gly
1 5
<210> 33
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 33
Met Ser Tyr Thr Pro Gly Thr Phe
1 5
<210> 34
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 34
Ala Arg Val His Val Gly Thr Val Asp Tyr
1 5 10
<210> 35
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 35
Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Trp
1 5
<210> 36
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 36
Ile Gly Asn Lys Phe His Asn Tyr Glu Thr
1 5 10
<210> 37
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 37
Thr Lys Leu Gly Arg Gly Tyr Tyr Val Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 38
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 38
Gly Tyr Thr Phe Ala Ser Tyr Tyr
1 5
<210> 39
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 39
Ile Asn Pro Arg Ser Gly Gly Thr
1 5
<210> 40
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 40
Ser Arg Ser Gly Arg Leu Arg Gly Phe Tyr Thr Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 41
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 41
Gln Asn Ile Asn Asn Asn
1 5
<210> 42
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 42
Phe Ala Ser
1
<210> 43
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 43
Gln Gln Ile Tyr Ser Trp Pro Gln Leu Thr
1 5 10
<210> 44
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 44
Gln Asp Ile Thr Asn Phe
1 5
<210> 45
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 45
Tyr Thr Ser
1
<210> 46
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 46
Leu Gln Tyr Tyr Asn Leu Trp Thr
1 5
<210> 47
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 47
Gln Asp Ile Asn Lys Tyr
1 5
<210> 48
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 48
Tyr Thr Ser
1
<210> 49
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 49
Leu Gln Tyr Tyr Asn Leu Trp Thr
1 5
<210> 50
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 50
Glu Asn Ile Asp Ser Tyr
1 5
<210> 51
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 51
Ala Ala Thr
1
<210> 52
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 52
Gln His Tyr Tyr Thr Thr Pro Pro Thr
1 5
<210> 53
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 53
Glu Asn Ile Asp Ser Tyr
1 5
<210> 54
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 54
Ala Ala Thr
1
<210> 55
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 55
Gln His His Tyr Ser Thr Pro Pro Thr
1 5
<210> 56
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 56
Gln Asn Ile Asn Asn Asn
1 5
<210> 57
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 57
Tyr Ala Ser
1
<210> 58
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 58
Gln Gln Ser Asn Ser Trp Pro Ala Leu Thr
1 5 10
<210> 59
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 59
Gln Asp Ile Thr Asn His
1 5
<210> 60
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 60
Tyr Thr Ser
1
<210> 61
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 61
Gln Gln Asp Ser Gln His Pro Trp Thr
1 5
<210> 62
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 62
Glu Asn Val Gly Ser Tyr
1 5
<210> 63
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 63
Gly Ala Ser
1
<210> 64
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 64
Gly Gln Thr Tyr Arg Phe Leu Thr
1 5
<210> 65
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 65
Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Gly Met His
1 5 10
<210> 66
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 66
Phe Ile Ser Ser Gly Ser Asn Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ile Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 67
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 67
Ala Arg Leu Ala Glu Trp Asp Val Ala Tyr
1 5 10
<210> 68
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 68
Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Gly Met Ser
1 5 10
<210> 69
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 69
Thr Ile Ser Ser Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 70
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 70
Ser Thr Gln Gly Ser Ser Gly Tyr Val Gly Tyr
1 5 10
<210> 71
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 71
Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr Asn Met Asn
1 5 10
<210> 72
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 72
Val Ile Asp Pro Asn Tyr Gly Thr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe Val
1 5 10 15
Gly
<210> 73
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 73
Ala Ile Lys Gly Tyr Gly Asn Pro Ala Ala Tyr
1 5 10
<210> 74
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 74
Gly Phe Thr Leu Ser Thr Tyr Ala Met Ser
1 5 10
<210> 75
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 75
Thr Ile Ser Gly Gly Gly Gly Asp Thr Tyr His Leu Asp Thr Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 76
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 76
Ala Arg Gln Ser His Tyr Gly Ser Ser Tyr Tyr Phe Asp Asn
1 5 10
<210> 77
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 77
Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Ser Trp Met Asn
1 5 10
<210> 78
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 78
Arg Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Tyr Thr His Tyr Asn Gly Met Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 79
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 79
Thr Arg His Gly Asp Phe Pro Tyr Trp Tyr Phe Asp Val
1 5 10
<210> 80
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 80
Gly Phe Thr Phe Ser Asp Phe Gly Met His
1 5 10
<210> 81
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 81
Tyr Met Ser Tyr Thr Pro Gly Thr Phe His Tyr Ala Asp Thr Val Lys
1 5 10 15
Asp
<210> 82
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 82
Ala Arg Val His Val Gly Thr Val Asp Tyr
1 5 10
<210> 83
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 83
Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Trp Met Asn
1 5 10
<210> 84
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 84
Gln Ile Gly Asn Lys Phe His Asn Tyr Glu Thr Tyr Tyr Ser Asp Ser
1 5 10 15
Val Lys Gly
<210> 85
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 85
Thr Lys Leu Gly Arg Gly Tyr Tyr Val Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 86
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 86
Gly Tyr Thr Phe Ala Ser Tyr Tyr Leu Tyr
1 5 10
<210> 87
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 87
Glu Ile Asn Pro Arg Ser Gly Gly Thr Asn Phe Asn Glu Lys Phe Lys
1 5 10 15
Ser
<210> 88
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 88
Ser Arg Ser Gly Arg Leu Arg Gly Phe Tyr Thr Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 89
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 89
Arg Ala Ser Gln Asn Ile Asn Asn Asn Leu His
1 5 10
<210> 90
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 90
Phe Ala Ser Gln Ser Ile Ser
1 5
<210> 91
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 91
Gln Gln Ile Tyr Ser Trp Pro Gln Leu Thr
1 5 10
<210> 92
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 92
Lys Ala Ser Gln Asp Ile Thr Asn Phe Ile Gly
1 5 10
<210> 93
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 93
Tyr Thr Ser Ile Leu Glu Ser
1 5
<210> 94
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 94
Leu Gln Tyr Tyr Asn Leu Trp Thr
1 5
<210> 95
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 95
Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asn Lys Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 96
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 96
Tyr Thr Ser Ile Leu Glu Ser
1 5
<210> 97
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 97
Leu Gln Tyr Tyr Asn Leu Trp Thr
1 5
<210> 98
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 98
Arg Val Ser Glu Asn Ile Asp Ser Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 99
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 99
Ala Ala Thr Asn Leu Ala Asp
1 5
<210> 100
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 100
Gln His Tyr Tyr Thr Thr Pro Pro Thr
1 5
<210> 101
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 101
Arg Ala Ser Glu Asn Ile Asp Ser Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 102
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 102
Ala Ala Thr Asn Leu Ala Val
1 5
<210> 103
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 103
Gln His His Tyr Ser Thr Pro Pro Thr
1 5
<210> 104
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 104
Arg Ala Ser Gln Asn Ile Asn Asn Asn Leu His
1 5 10
<210> 105
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 105
Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser
1 5
<210> 106
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 106
Gln Gln Ser Asn Ser Trp Pro Ala Leu Thr
1 5 10
<210> 107
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 107
Arg Ala Ser Gln Asp Ile Thr Asn His Leu Asn
1 5 10
<210> 108
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 108
Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser
1 5
<210> 109
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 109
Gln Gln Asp Ser Gln His Pro Trp Thr
1 5
<210> 110
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 110
Lys Ala Gly Glu Asn Val Gly Ser Tyr Val Ser
1 5 10
<210> 111
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 111
Gly Ala Ser Asn Arg Tyr Thr
1 5
<210> 112
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 112
Gly Gln Thr Tyr Arg Phe Leu Thr
1 5
<210> 113
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 113
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Ser Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ser Thr Gln Gly Ser Ser Gly Tyr Val Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 114
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 114
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Ser Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ser Thr Gln Gly Ser Ser Gly Tyr Val Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 115
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 115
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Ser Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ser Thr Gln Gly Ser Ser Gly Tyr Val Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 116
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 116
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Ser Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Asp Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ser Thr Gln Gly Ser Ser Gly Tyr Val Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 117
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 117
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Ile Thr Asn Phe
20 25 30
Ile Gly Trp Tyr Gln His Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Ser Tyr Thr Ser Ile Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Arg Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Tyr Asn Leu Trp Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 118
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 118
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Ile Thr Asn Phe
20 25 30
Ile Gly Trp Tyr Gln His Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Ser Tyr Thr Ser Ile Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Tyr Asn Leu Trp Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 119
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 119
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Ser
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Tyr Thr His Tyr Asn Gly Met Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Ala Ser Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Gly Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Phe Phe Cys
85 90 95
Thr Arg His Gly Asp Phe Pro Tyr Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Arg
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Pro
115 120
<210> 120
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 120
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Ser
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Tyr Thr His Tyr Asn Gly Met Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Ala Ser Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Gly Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Phe Phe Cys
85 90 95
Thr Arg His Gly Asp Phe Pro Tyr Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Arg
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 121
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 121
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Asp Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Arg Ala Pro Lys Leu Leu Val
35 40 45
Tyr Ala Ala Thr Asn Leu Ala Val Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His His Tyr Ser Thr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 122
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 122
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Asp Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Arg Ala Pro Lys Leu Leu Val
35 40 45
Tyr Ala Ala Thr Asn Leu Ala Val Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His His Tyr Ser Thr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 123
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 123
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Asp Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Arg Ala Pro Lys Leu Leu Val
35 40 45
Tyr Ala Ala Thr Asn Leu Ala Val Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His His Tyr Ser Thr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 124
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 124
Glu Val Gln Leu Val Glu Thr Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Phe
20 25 30
Gly Met His Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Tyr Met Ser Tyr Thr Pro Gly Thr Phe His Tyr Ala Asp Thr Val
50 55 60
Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Val His Val Gly Thr Val Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 125
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 125
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Phe
20 25 30
Gly Met His Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Tyr Met Ser Tyr Thr Pro Gly Thr Phe His Tyr Ala Asp Thr Val
50 55 60
Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Val His Val Gly Thr Val Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 126
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 126
Glu Val Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asn Ile Asn Asn Asn
20 25 30
Leu His Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Asn Ser Trp Pro Ala
85 90 95
Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 127
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 127
Glu Val Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asn Ile Asn Asn Asn
20 25 30
Leu His Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Thr
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Asn Ser Trp Pro Ala
85 90 95
Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 128
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 128
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ala Ser Tyr
20 25 30
Tyr Leu Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Asn Pro Arg Ser Gly Gly Thr Asn Phe Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Ser Arg Ala Thr Val Thr Val Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ser Arg Ser Gly Arg Leu Arg Gly Phe Tyr Thr Met Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 129
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 129
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ala Ser Tyr
20 25 30
Tyr Leu Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Asn Pro Arg Ser Gly Gly Thr Asn Phe Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Ser Arg Ala Thr Val Thr Val Asp Ala Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ser Arg Ser Gly Arg Leu Arg Gly Phe Tyr Thr Met Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 130
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 130
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ala Ser Tyr
20 25 30
Tyr Leu Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Asn Pro Arg Ser Gly Gly Thr Asn Phe Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Ser Lys Ala Thr Val Thr Val Asp Lys Ser Thr Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ser Arg Ser Gly Arg Leu Arg Gly Phe Tyr Thr Met Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 131
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 131
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ala Gly Glu Asn Val Gly Ser Tyr
20 25 30
Val Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Asn Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Ala Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gly Gln Thr Tyr Arg Phe Leu Thr
85 90 95
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 132
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 132
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ala Gly Glu Asn Val Gly Ser Tyr
20 25 30
Val Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Asn Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Ala Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gly Gln Thr Tyr Arg Phe Leu Thr
85 90 95
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 133
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 133
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Gly Glu Asn Val Gly Ser Tyr
20 25 30
Val Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Asn Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Ala Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gly Gln Thr Tyr Arg Phe Leu Thr
85 90 95
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Val Lys
100 105
<210> 134
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 134
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Gly Glu Asn Val Gly Ser Tyr
20 25 30
Val Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Asn Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Ala Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gly Gln Thr Tyr Arg Phe Leu Thr
85 90 95
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Val Lys
100 105
<210> 135
<211> 257
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 135
Met Ala Gln Arg Met Thr Thr Gln Leu Leu Leu Leu Leu Val Trp Val
1 5 10 15
Ala Val Val Gly Glu Ala Gln Thr Arg Ile Ala Trp Ala Arg Thr Glu
20 25 30
Leu Leu Asn Val Cys Met Asn Ala Lys His His Lys Glu Lys Pro Gly
35 40 45
Pro Glu Asp Lys Leu His Glu Gln Cys Arg Pro Trp Arg Lys Asn Ala
50 55 60
Cys Cys Ser Thr Asn Thr Ser Gln Glu Ala His Lys Asp Val Ser Tyr
65 70 75 80
Leu Tyr Arg Phe Asn Trp Asn His Cys Gly Glu Met Ala Pro Ala Cys
85 90 95
Lys Arg His Phe Ile Gln Asp Thr Cys Leu Tyr Glu Cys Ser Pro Asn
100 105 110
Leu Gly Pro Trp Ile Gln Gln Val Asp Gln Ser Trp Arg Lys Glu Arg
115 120 125
Val Leu Asn Val Pro Leu Cys Lys Glu Asp Cys Glu Gln Trp Trp Glu
130 135 140
Asp Cys Arg Thr Ser Tyr Thr Cys Lys Ser Asn Trp His Lys Gly Trp
145 150 155 160
Asn Trp Thr Ser Gly Phe Asn Lys Cys Ala Val Gly Ala Ala Cys Gln
165 170 175
Pro Phe His Phe Tyr Phe Pro Thr Pro Thr Val Leu Cys Asn Glu Ile
180 185 190
Trp Thr His Ser Tyr Lys Val Ser Asn Tyr Ser Arg Gly Ser Gly Arg
195 200 205
Cys Ile Gln Met Trp Phe Asp Pro Ala Gln Gly Asn Pro Asn Glu Glu
210 215 220
Val Ala Arg Phe Tyr Ala Ala Ala Met Ser Gly Ala Gly Pro Trp Ala
225 230 235 240
Ala Trp Pro Phe Leu Leu Ser Leu Ala Leu Met Leu Leu Trp Leu Leu
245 250 255
Ser

Claims (20)

1.一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含重链互补决定区1(HCDR1)、HCDR2、HCDR3，轻链互补决定区1(LCDR1)、LCDR2和LCDR3，其具有以下多肽序列：
a.分别为SEQ ID NO：38、39、40、62、63和64；
b.分别为SEQ ID NO：17、18、19、41、42和43；
c.分别为SEQ ID NO：20、21、22、44、45和46；
d.分别为SEQ ID NO：23、24、25、47、48和49；
e.分别为SEQ ID NO：26、27、28、50、51和52；
f.分别为SEQ ID NO：29、30、31、53、54和55；
g.分别为SEQ ID NO：32、33、34、56、57和58；或者
h.分别为SEQ ID NO：35、36、37、59、60和61；
其中所述抗体或其抗原结合片段特异性结合FOLR1，优选人FOLR1。
2.一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含重链互补决定区1(HCDR1)、HCDR2、HCDR3，轻链互补决定区1(LCDR1)、LCDR2和LCDR3，其具有以下多肽序列：
a.分别为SEQ ID NO：86、87、88、110、111和112；
b.分别为SEQ ID NO：65、66、67、89、90和91；
c.分别为SEQ ID NO：68、69、70、92、93和94；
d.分别为SEQ ID NO：71、72、73、95、96和97；
e.分别为SEQ ID NO：74、75、76、98、99和100；
f.分别为SEQ ID NO：77、78、79、101、102和103；
g.分别为SEQ ID NO：80、81、82、104、105和106；或者
h.分别为SEQ ID NO：83、84、85、107、108和109；
其中所述抗体或其抗原结合片段特异性结合FOLR1，优选人FOLR1。
3.根据权利要求1或2所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含含有与SEQID NO：15、1、3、5、7、9、11或13具有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的多肽序列的重链可变区，或含有与SEQ ID NO：16，2，4，6，8，10，12或14具有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的多肽序列的轻链可变区。
4.根据权利要求1-3中任一项的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包括：
a.具有SEQ ID NO：15的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：16的多肽序列的轻链可变区；
b.具有SEQ ID NO：1的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：2的多肽序列的轻链可变区；
c.具有SEQ ID NO：3的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：4的多肽序列的轻链可变区；
d.具有SEQ ID NO：5的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：6的多肽序列的轻链可变区；
e.具有SEQ ID NO：7的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：8的多肽序列的轻链可变区；
f.具有SEQ ID NO：9的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：10的多肽序列的轻链可变区；
g.具有SEQ ID NO：11的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：12的多肽序列的轻链可变区；或者
h.具有SEQ ID NO：13的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：14的多肽序列的轻链可变区。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段是嵌合的。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段是人的或人源化的。
7.权利要求6所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述人源化单克隆抗体或其抗原结合片段包括：
(1)具有SEQ ID NO：113的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：117的多肽序列的轻链可变区；
(2)具有SEQ ID NO：113的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：118的多肽序列的轻链可变区；
(3)具有SEQ ID NO：114的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：117的多肽序列的轻链可变区；
(4)具有SEQ ID NO：114的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：118的多肽序列的轻链可变区；
(5)具有SEQ ID NO：115的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：117的多肽序列的轻链可变区；
(6)具有SEQ ID NO：115的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：118的多肽序列的轻链可变区；
(7)具有SEQ ID NO：116的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：117的多肽序列的轻链可变区；
(8)具有SEQ ID NO：116的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：118的多肽序列的轻链可变区；
(9)具有SEQ ID NO：119的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：121的多肽序列的轻链可变区；
(10)具有SEQ ID NO：119的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：122的多肽序列的轻链可变区；
(11)具有SEQ ID NO：119的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：123的多肽序列的轻链可变区；
(12)具有SEQ ID NO：120的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：121的多肽序列的轻链可变区；
(13)具有SEQ ID NO：120的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：122的多肽序列的轻链可变区；
(14)具有SEQ ID NO：120的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：123的多肽序列的轻链可变区；
(15)具有SEQ ID NO：124的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：126的多肽序列的轻链可变区；
(16)具有SEQ ID NO：124的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：127的多肽序列的轻链可变区；
(17)具有SEQ ID NO：128的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：131的多肽序列的轻链可变区；
(18)具有SEQ ID NO：128的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：132的多肽序列的轻链可变区；
(19)具有SEQ ID NO：128的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：133的多肽序列的轻链可变区；
(20)具有SEQ ID NO：128的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：134的多肽序列的轻链可变区；
(21)具有SEQ ID NO：129的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：131的多肽序列的轻链可变区；
(22)具有SEQ ID NO：129的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：132的多肽序列的轻链可变区；
(23)具有SEQ ID NO：129的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：133的多肽序列的轻链可变区；
(24)具有SEQ ID NO：129的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：134的多肽序列的轻链可变区；
(25)具有SEQ ID NO：130的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：131的多肽序列的轻链可变区；
(26)具有SEQ ID NO：130的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：132的多肽序列的轻链可变区；
(27)具有SEQ ID NO：130的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：133的多肽序列的轻链可变区；或
(28)具有SEQ ID NO：130的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：134的多肽序列的轻链可变区。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述单克隆抗体或其抗原结合片段能够结合FOLR1并诱导效应子介导的肿瘤细胞裂解。
9.一种分离的核酸，其编码权利要求1-8中任一项的单克隆抗体或其抗原结合片段。
10.一种包含权利要求9所述的分离的核酸的载体。
11.一种包含权利要求10所述的载体的宿主细胞。
12.一种药物组合物，其包含权利要求1-8中任一项的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段和药学上可接受的运载体。
13.一种在有此需要的受试者中治疗癌症的方法，包括向所述受试者施用权利要求12所述的药物组合物。
14.一种在有此需要的受试者中靶向癌细胞表面FOLR1的方法，该方法包括向该受试者施用权利要求12所述的药物组合物。
15.根据权利要求1至8中任一项所述的单克隆抗体或其抗原结合片段的制造方法，包括在产生所述单克隆抗体或其抗原结合片段的条件下，培养包含编码所述单克隆抗体或其抗原结合片段的核酸的细胞，并从细胞或培养物中回收抗体或抗原结合片段。
16.一种制备包含权利要求1-8中任一项的单克隆抗体或其抗原结合片段的药物组合物的方法，包括将所述单克隆抗体或其抗原结合片段与药学上可接受的运载体组合以获得所述药物组合物。
17.一种确定受试者体内FOLR1水平的方法，所述方法包括：
a.从受试者获得样品；
b.使所述样品与权利要求1-8中任一项的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段接触；和
c.确定受试者体内FOLR1水平。
18.根据权利要求17所述的方法，其中，所述样品是组织样品。
19.根据权利要求18所述的方法，其中，所述组织样品是癌组织样品。
20.根据权利要求17所述的方法，其中，所述样品是血液样品。
CN201980019246.4A 2018-03-13 2019-03-07 抗叶酸受体1抗体及其用途 Active CN111954681B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202211567226.0A CN115925952A (zh) 2018-03-13 2019-03-07 抗叶酸受体1抗体及其用途

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201862642213P 2018-03-13 2018-03-13
US62/642,213 2018-03-13
PCT/US2019/021084 WO2019177854A1 (en) 2018-03-13 2019-03-07 Anti-folate receptor 1 antibodies and uses thereof

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202211567226.0A Division CN115925952A (zh) 2018-03-13 2019-03-07 抗叶酸受体1抗体及其用途

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN111954681A true CN111954681A (zh) 2020-11-17
CN111954681B CN111954681B (zh) 2022-12-06

Family

ID=67906883

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201980019246.4A Active CN111954681B (zh) 2018-03-13 2019-03-07 抗叶酸受体1抗体及其用途
CN202211567226.0A Pending CN115925952A (zh) 2018-03-13 2019-03-07 抗叶酸受体1抗体及其用途

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202211567226.0A Pending CN115925952A (zh) 2018-03-13 2019-03-07 抗叶酸受体1抗体及其用途

Country Status (13)

Country Link
US (1) US11873335B2 (zh)
EP (1) EP3765521A4 (zh)
JP (2) JP7433236B2 (zh)
KR (1) KR20200132900A (zh)
CN (2) CN111954681B (zh)
AU (1) AU2019236091A1 (zh)
BR (1) BR112020016469A2 (zh)
CA (1) CA3091683A1 (zh)
EA (1) EA202092125A1 (zh)
IL (1) IL276949A (zh)
MX (1) MX2020009522A (zh)
SG (1) SG11202007494TA (zh)
WO (1) WO2019177854A1 (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115491358A (zh) * 2021-06-17 2022-12-20 复星凯特生物科技有限公司 一种靶向b7-h3和folr1双打靶点car t的制备及应用

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR102275930B1 (ko) * 2018-03-14 2021-07-12 (주)알테오젠 Folr1에 특이적으로 결합하는 항체 및 그의 용도
TW202233684A (zh) * 2020-11-18 2022-09-01 美商泰尼歐生物公司 結合於葉酸受體α之重鏈抗體
CN116462768B (zh) * 2023-06-13 2023-09-22 浙江时迈药业有限公司 针对folr1的双特异性抗体及其用途

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103037900A (zh) * 2010-02-24 2013-04-10 伊缪诺金公司 叶酸受体1抗体与免疫缀合物以及其用途
CN103687618A (zh) * 2010-11-05 2014-03-26 莫福特克公司 叶酸受体α作为用于表达叶酸受体α的癌症的诊断和预后标记
CN103747802A (zh) * 2011-04-01 2014-04-23 伊缪诺金公司 用于增加folr1癌症治疗的功效的方法
CN105814079A (zh) * 2013-08-30 2016-07-27 伊缪诺金公司 用于检测叶酸受体1的抗体和测定
CN107074955A (zh) * 2014-11-20 2017-08-18 豪夫迈·罗氏有限公司 针对FolR1和CD3的T细胞活化性双特异性抗原结合分子
CN107206072A (zh) * 2014-11-20 2017-09-26 豪夫迈·罗氏有限公司 T细胞活化性双特异性抗原结合分子CD3 ABD叶酸受体1(FolR1)和PD‑1轴结合拮抗剂的组合疗法

Family Cites Families (27)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2556027C (en) * 2004-02-12 2015-11-24 Morphotek, Inc. Monoclonal antibodies that specifically block biological activity of a tumor antigen
JP2009521206A (ja) 2005-04-22 2009-06-04 モルフォテック、インク． 免疫エフェクター活性を有する葉酸受容体アルファ陽性細胞に内部移行する抗体
EP1900752A1 (en) 2006-09-15 2008-03-19 DOMPE' pha.r.ma s.p.a. Human anti-folate receptor alpha antibodies and antibody fragments for the radioimmunotherapy of ovarian carcinoma
WO2008145136A1 (en) 2007-05-30 2008-12-04 Aarhus Universitet Stat3 inactivation by inhibition of the folate receptor pathway
FR2929946B1 (fr) * 2008-04-11 2010-05-28 Pf Medicament Nouveaux anticorps anti-cd151 et leur utilisation pour le traitement du cancer
US9487582B2 (en) * 2010-01-08 2016-11-08 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) Methods for treating pancreatic cancer
BR112013009275A2 (pt) 2010-10-20 2017-06-20 Morphotek Inc glicoformas de anticorpo alfa de receptor anti-folato
CA2824997C (en) 2011-01-18 2023-01-17 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions and methods for treating cancer
SG10201605278PA (en) 2011-07-15 2016-08-30 Eisai R&D Man Co Ltd Anti-folate receptor alpha antibodies and uses thereof
US9512223B2 (en) 2012-05-15 2016-12-06 Morphotek, Inc. Methods for treatment of gastric cancer
PL2890717T3 (pl) * 2012-08-31 2020-08-10 Immunogen, Inc. Testy i zestawy diagnostyczne do wykrywania receptora folianu
WO2014055771A1 (en) 2012-10-05 2014-04-10 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Human alpha-folate receptor chimeric antigen receptor
AU2013355931B2 (en) * 2012-12-07 2019-03-14 Kyowa Kirin Co., Ltd. Anti-FOLR1 antibody
US9522196B2 (en) 2012-12-25 2016-12-20 Kagoshima University Antibody recognizing folate receptors α and β
US20140302037A1 (en) 2013-03-15 2014-10-09 Amgen Inc. BISPECIFIC-Fc MOLECULES
CN105308072A (zh) 2013-05-14 2016-02-03 伊缪诺金公司 抗folr1免疫缀合物给药方案
US20160311921A1 (en) 2013-06-20 2016-10-27 Morphotek ,Inc. Methods for treatment of ovarian cancer
JP6463744B2 (ja) 2013-10-08 2019-02-06 イミュノジェン， インコーポレイテッド 抗ｆｏｌｒ１免疫抱合体投薬レジメン
EP3077522A1 (en) 2013-12-04 2016-10-12 Immunogen, Inc. Compositions and methods for antibody production
JP2017528418A (ja) 2014-06-20 2017-09-28 バイオアライアンス コマンディテール フェンノートシャップ 抗葉酸受容体アルファ（ｆｒａ）抗体−薬物コンジュゲート及びその使用方法
US10988531B2 (en) 2014-09-03 2021-04-27 Immunogen, Inc. Conjugates comprising cell-binding agents and cytotoxic agents
US11161907B2 (en) 2015-02-02 2021-11-02 Novartis Ag Car-expressing cells against multiple tumor antigens and uses thereof
MX2017013390A (es) 2015-04-17 2018-06-13 Morphotek Inc Método para el tratamiento de cáncer pulmonar.
MA42844A (fr) 2015-09-17 2018-07-25 Immunogen Inc Combinaisons thérapeutiques comprenant des immunoconjugués anti-folr1
US20190233512A1 (en) 2016-10-12 2019-08-01 Sutro Biopharma, Inc. Anti-folate receptor antibodies, compositions comprising anti-folate receptor antibodies and methods of making and using anti-folate receptor antibodies
JP7072571B2 (ja) 2016-11-23 2022-05-20 エーザイ・アール・アンド・ディー・マネジメント株式会社 抗葉酸受容体アルファ抗体およびその使用
EP3625262A4 (en) 2017-05-16 2021-03-03 ImmunoGen, Inc. ANTI-FOLR1 IMMUNOCONJUGATES AND ANTI-PD-1 ANTIBODY COMBINATIONS

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103037900A (zh) * 2010-02-24 2013-04-10 伊缪诺金公司 叶酸受体1抗体与免疫缀合物以及其用途
CN105777907A (zh) * 2010-02-24 2016-07-20 伊缪诺金公司 叶酸受体1抗体与免疫缀合物以及其用途
CN103687618A (zh) * 2010-11-05 2014-03-26 莫福特克公司 叶酸受体α作为用于表达叶酸受体α的癌症的诊断和预后标记
CN103747802A (zh) * 2011-04-01 2014-04-23 伊缪诺金公司 用于增加folr1癌症治疗的功效的方法
CN105814079A (zh) * 2013-08-30 2016-07-27 伊缪诺金公司 用于检测叶酸受体1的抗体和测定
CN107074955A (zh) * 2014-11-20 2017-08-18 豪夫迈·罗氏有限公司 针对FolR1和CD3的T细胞活化性双特异性抗原结合分子
CN107206072A (zh) * 2014-11-20 2017-09-26 豪夫迈·罗氏有限公司 T细胞活化性双特异性抗原结合分子CD3 ABD叶酸受体1(FolR1)和PD‑1轴结合拮抗剂的组合疗法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
LIN等: "The antitumor activity of the human FOLR1-specific monoclonal antibody, farletuzumab, in an ovarian cancer mouse model is mediated by antibody-dependent cellular cytotoxicity", 《CANCER BIOLOGY & THERAPY》 *
NECELA等: "Folate Receptor-α (FOLR1) Expression and Function in Triple Negative Tumors", 《PLOS ONE》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115491358A (zh) * 2021-06-17 2022-12-20 复星凯特生物科技有限公司 一种靶向b7-h3和folr1双打靶点car t的制备及应用

Also Published As

Publication number Publication date
SG11202007494TA (en) 2020-09-29
JP2021517459A (ja) 2021-07-26
KR20200132900A (ko) 2020-11-25
EP3765521A1 (en) 2021-01-20
JP7433236B2 (ja) 2024-02-19
AU2019236091A1 (en) 2020-09-03
WO2019177854A1 (en) 2019-09-19
BR112020016469A2 (pt) 2020-12-15
IL276949A (en) 2020-10-29
CN115925952A (zh) 2023-04-07
CN111954681B (zh) 2022-12-06
EA202092125A1 (ru) 2020-12-15
EP3765521A4 (en) 2022-03-23
CA3091683A1 (en) 2019-09-19
US11873335B2 (en) 2024-01-16
MX2020009522A (es) 2020-10-22
US20210002363A1 (en) 2021-01-07
JP2024056787A (ja) 2024-04-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU2019232762B2 (en) Anti-claudin 18.2 antibodies and uses thereof
CN111183155B (zh) 抗cd47抗体及其用途
JP7334177B2 (ja) 抗ｃｄ７３抗体及びその使用
CN111954681B (zh) 抗叶酸受体1抗体及其用途
CN111050797B (zh) 抗tim-3抗体及其用途
CN112584860A (zh) 抗dll3抗体及其用途
US11306151B2 (en) Anti-TIP-1 antibodies and uses thereof
CN111050792B (zh) 抗lag-3抗体及其用途
EA046422B1 (ru) Антитела против рецептора фолата 1 и их применения
EA043281B1 (ru) Анти-cd47 антитела и их применение
EA043284B1 (ru) Антитела против cd73 и их применения
CN111050792A (zh) 抗lag-3抗体及其用途

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
REG Reference to a national code

Ref country code: HK

Ref legal event code: DE

Ref document number: 40033064

Country of ref document: HK

GR01 Patent grant
GR01 Patent grant