CN111893046A

CN111893046A - 一株棘孢木霉tz312及其应用、棘孢木霉tz312的挥发性代谢产物及其应用

Info

Publication number: CN111893046A
Application number: CN201910372385.7A
Authority: CN
Inventors: 黄穗萍; 莫贱友; 李其利; 郭堂勋; 唐利华
Original assignee: Institute Of Plant Protection Guangxi Academy Of Agricultural Sciences
Current assignee: Institute Of Plant Protection Guangxi Academy Of Agricultural Sciences
Priority date: 2019-05-06
Filing date: 2019-05-06
Publication date: 2020-11-06
Anticipated expiration: 2039-05-06
Also published as: CN111893046B

Abstract

本发明提供一株棘孢木霉TZ312及其应用、棘孢木霉TZ312的挥发性代谢产物及其应用，涉及微生物技术领域，所述棘孢木霉TZ312，保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号：GDMCC NO:60253。所述棘孢木霉TZ312平板上能完全抑制和覆盖香蕉枯萎病菌的菌丝生长；温室盆栽试验中，能明显降低香蕉枯萎病的发生率，防效在65％以上。所述棘孢木霉TZ312还可抑制黄瓜枯萎病菌、番茄灰霉病菌、柚木溃疡病菌、香蕉鞘腐病菌、稻瘟病菌、拟茎点霉、拟盘多毛孢、葡萄座腔菌或炭疽菌等，抑菌谱广。棘孢木霉TZ312的挥发性代谢产物可用于抑制储藏性病害的发生。

Description

一株棘孢木霉TZ312及其应用、棘孢木霉TZ312的挥发性代谢产物及其应用

技术领域

本发明涉及微生物技术领域，尤其涉及一株棘孢木霉TZ312及其应用、棘孢木霉TZ312的挥发性代谢产物及其应用。

背景技术

香蕉是世界重要的粮食作物之一。在我国，香蕉是一种重要的热带、亚热带水果，经济效益显著，是农民脱贫致富的主要产业之一。香蕉枯萎病被喻为“香蕉的癌症”，其病原菌尖孢镰刀菌古巴专化型(Fusarium oxysporium f.sp.cubense)的分生孢子能通过流水、农具等传播，能以厚垣孢子形式在土壤存活数十年。受为害的香蕉当代或者次代没有商品果，受感染的土地数年内不能再种植香蕉。自1996年广州市番禺区首次发现由4号生理小种引起香蕉枯萎病以来，该病害迅速向我国香蕉主产区扩散蔓延，目前在海南、广东、广西、云南等香蕉种植区的蕉园病株率达10％～40％，严重的在90％以上(韦绍龙,孙嘉曼,卢江,等.二倍体野生蕉种质对枯萎病的抗性评价[J].西南农业学报,2015,28(6):2532-2536.)可见香蕉枯萎病已严重威胁我国香蕉产业发展，成为香蕉产业发展的瓶颈。因此，迫切需要寻找有效防治香蕉枯萎病的方法为我国香蕉产业的发展保驾护航。

然而香蕉枯萎病是一种真菌性土传病害，缺乏有效的化学药剂。目前文献报道的抗(耐)枯萎病香蕉品种主要有洪都拉斯系列、GCTCV系列、‘抗枯5号’、‘农科1号’、‘宝岛蕉’、‘金手指’、‘桂蕉9号’等(韦绍龙，黄素梅，韦莉萍，等.香蕉抗(耐)枯萎病新品种桂蕉9号的选育及其高产栽培技术[J].南方农业学报，2016，47(4)：530-536.)这些抗性品种对香蕉枯萎病4号生理小种不表现完全的抗性，与传统香蕉品种相比，其园艺性状存在缺陷。

此外，一些农业措施虽可一定程度减轻病害发生，但不能从根本上控制病害。目前尚没有彻底、高效防治香蕉枯萎病的方法。多种措施相结合的综合防治技术是防控香蕉枯萎病的重要策略。开发利用有益微生物及其产生的活性物质来防治香蕉枯萎病是其中重要防控措施之一。

发明内容

本发明为了克服现有香蕉枯萎病防治效果较差的缺陷，提供了一株能够用于防治香蕉枯萎病菌的棘孢木霉TZ312及其应用、棘孢木霉TZ312的挥发性代谢产物及其应用，所述棘孢木霉TZ312可抑制香蕉枯萎病等多种土传病害，棘孢木霉TZ312的挥发性代谢产物能够显著抑制储藏性病害的发生。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一株棘孢木霉Trichoderma asperellum TZ312，保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号：GDMCC NO:60253。

本发明还提供了上述技术方案所述棘孢木霉TZ312在抑制香蕉枯萎病菌中的应用。

本发明还提供了前述技术方案所述棘孢木霉TZ312在抑制黄瓜枯萎病菌、番茄灰霉病菌、柚木溃疡病菌、香蕉鞘腐病菌、稻瘟病菌、拟茎点霉、拟盘多毛孢、葡萄座腔菌或炭疽菌中的应用。

本发明提供了一种棘孢木霉TZ312的挥发性代谢产物，将棘孢木霉 TZ312接种于麦粒中培养，得到麦粒培养物；收集接种后3～10d麦粒培养物产生的挥发性物质，即得棘孢木霉TZ312的挥发性代谢产物。

优选的，所述挥发性代谢产物包括2,6,10,14-四甲基十七烷、β-姜黄素和叔丁基对甲酚。

优选的，所述培养的温度为25℃，所述培养的时间为4～10d。

本发明还提供了上述技术方案所述棘孢木霉TZ312的挥发性代谢产物在抑制储藏性病害发生中的应用。

优选的，所述储藏性病害包括采后果实炭疽病或采后果实蒂腐病。

本发明还提供了前述技术方案所述棘孢木霉TZ312的挥发性代谢产物在制备生物熏蒸剂中的应用。

本发明还提供了前述技术方案所述棘孢木霉TZ312的挥发性代谢产物在抑制香蕉枯萎病菌中的应用。

与现有技术相比，本发明的有益效果：

本发明提供了一株棘孢木霉Trichoderma asperellum TZ312，保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号：GDMCC NO:60253。所述棘孢木霉TZ312 分离于植物根际土壤，是一种土壤习居菌，根际定植能力强，平板上能完全抑制和覆盖香蕉枯萎病菌的菌丝生长；温室盆栽试验中，能明显降低香蕉枯萎病的发生率，防效在65％以上。所述棘孢木霉TZ312还可抑制黄瓜枯萎病菌、番茄灰霉病菌、柚木溃疡病菌、香蕉鞘腐病菌、稻瘟病菌、拟茎点霉、拟盘多毛孢、葡萄座腔菌或炭疽菌等，抑菌谱广。

本发明还提供了一种棘孢木霉TZ312的挥发性代谢产物，以麦粒为培养基接种棘孢木霉TZ312发酵得到麦粒培养物，收集接种后3～10d麦粒培养物产生的挥发性物质，即为棘孢木霉TZ312的挥发性代谢产物。所述棘孢木霉 TZ312的挥发性代谢产物具有显著的抑菌作用，是棘孢木霉TZ312的重要生防机理之一，可用于香蕉枯萎病菌以及抑制储藏性病害的发生。

生物保藏信息

棘孢木霉Trichoderma asperellum TZ312，2017年10月25日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏地址为广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，保藏编号：GDMCC NO:60253。

附图说明

图1为棘孢木霉TZ312的菌落图；

图2为棘孢木霉TZ312的分生孢子图；

图3为棘孢木霉TZ312抑制香蕉枯萎病菌菌丝生长的对照图；其中，图左为空白对照，图右为对峙平板；

图4为棘孢木霉TZ312对香蕉枯萎病的防治效果对照图；其中，左图为处理组的香蕉组培苗生长情况，右图为CK1组和CK2的香蕉组培苗生长情况；

图5为棘孢木霉TZ312产生的挥发性物质抑制香蕉枯萎病菌菌丝生长的对照图；

图6为棘孢木霉TZ312的抑菌谱测定图；其中，图6-1为棘孢木霉TZ312对黄瓜枯萎病的抑菌效果图，图6-2为棘孢木霉TZ312对番茄灰霉病菌的抑菌效果图，图6-3为棘孢木霉TZ312对柚木溃疡病菌的抑菌效果图，图6-4为棘孢木霉TZ312对香蕉鞘腐病菌的抑菌效果图，图6-5为棘孢木霉TZ312对稻瘟病菌的抑菌效果图，图6-6为棘孢木霉TZ312对拟茎点霉的抑菌效果图，图6-7为棘孢木霉TZ312 对拟盘多毛孢的抑菌效果图，图6-8为棘孢木霉TZ312对葡萄座腔菌属的抑菌效果图，图6-9为棘孢木霉TZ312对炭疽菌的抑菌效果图；

图7为棘孢木霉TZ312产生的挥发性物质抑制储藏性病害发生的对照图；其中，图7-1为TZ312麦粒培养物与接种有炭疽菌香蕉非直接接触后的发病情况，图7-2为TZ312麦粒培养物与接种有蒂腐病的芒果非直接接触后的发病情况。

具体实施方式

本发明提供了一株棘孢木霉Trichoderma asperellum TZ312，保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号：GDMCC NO:60253。所述棘孢木霉TZ312 从香蕉枯萎病发病的香蕉园中的健康香蕉植株根际土壤中分离得到的，其菌落如图1所示，菌落形成同心环，在同心环上产生稠密的分生孢子，接近中央的分生孢子暗绿色，边缘的分生孢子才刚刚形成,菌丝紧密，气生菌丝缺；其分生孢子的显微图如图2所示，分生孢子呈圆形或卵形。

本发明所述棘孢木霉TZ312的ITS(核糖体DNA内转录间隔区)序列共563bp，如SEQID NO.1所示。

SEQ ID NO.1：

AGGGATCATTACCGAGTTTACAACTCCCAAACCCAATGTGAACGTT ACCAAACTGTTGCCTCGGCGGGGTCACGCCCCGGGTGCGTCGCAGCC CCGGAACCAGGCGCCCGCCGGAGGAACCAACCAAACTCTTTCTGTAG TCCCCTCGCGGACGTATTTCTTACAGCTCTGAGCAAAAATTCAAAATGA ATCAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTGGCATCGATGAAGAA CGCAGCGAAATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCAT CGAATCTTTGAACGCACATTGCGCCCGCCAGTATTCTGGCGGGCATGCC TGTCCGAGCGTCATTTCAACCCTCGAACCCCTCCGGGGGATCGGCGTT GGGGATCGGGACCCCTCACACGGGTGCCGGCCCCGAAATACAGTGGC GGTCTCGCCGCAGCCTCTCCTGCGCAGTAGTTTGCACAACTCGCACCG GGAGCGCGGCGCGTCCACGTCCGTAAAACACCCAACTTTCTGAAATGT TGACCTCGGATCAGGTAGGAATACCCGCTGAACTTAA。

本发明所述棘孢木霉TZ312的EF-1α(翻译延伸因子1-α)序列共 310bp，如SEQ IDNO.2所示。

SEQ ID NO.2：

TAAGCTCATTTCACTGCTTTTCCCATCAATTTTTGGCACAATCATAT GCCCGACAATTCTGCTCTCAGTTTTTGTCTTTTTTTTCCAGCGTCACCC CGCTTTGCCAGTCTACCTACCCCTCCTTTGGCACAGCAAAAATTTTCTG GCTGCCTTGTTTGGCTTTTAGTGGGTTGTCAAATTTTTTGGCAGCAACC CCGCTATCGCCACTGCACCTCTTCCATCACCCACCACATGCTATTTGCTC AATCGCGTCGTCTTTTTTTGTTCATTATGCTGATCATGCTTCAATCAATA GGAAGCCGCCGAACTC。

在NCBI的数据库对比显示，棘孢木霉TZ312的ITS序列与KY231190.1 序列的相似性为100％，棘孢木霉TZ312的EF-1α序列与KU301710.1序列的相似性为100％，而KY231190.1序列和KU301710.1序列均为棘孢木霉属真菌。

在本发明中，所述棘孢木霉TZ312的培养基可选择马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)、马铃薯蔗糖琼脂培养基(PSA)或马丁氏培养基。在本发明中，所述棘孢木霉TZ312的培养温度优选为24～30℃，更优选为30℃。在本发明中，所述棘孢木霉TZ312对培养湿度没有特殊要求。

本发明还提供了上述技术方案所述棘孢木霉TZ312在抑制香蕉枯萎病菌中的应用。如本发明的具体实施例所示，在PDA平板上接种了棘孢木霉 TZ312和香蕉枯萎病菌，棘孢木霉TZ312生长迅速，其墨绿色的包子将香蕉枯萎病病菌菌丝覆盖，疑似寄生其上，强烈抑制了香蕉枯萎病菌菌丝生长。在接种了香蕉枯萎病菌的土壤中接种棘孢木霉TZ312，再种植香蕉组培苗，结果显示棘孢木霉TZ312对香蕉枯萎病的防治效果为65％。可见，本发明提供的棘孢木霉TZ312能够显著抑制香蕉枯萎病菌的菌丝生长以及香蕉枯萎病的发生。

本发明还提供了前述技术方案所述棘孢木霉TZ312在抑制黄瓜枯萎病菌、番茄灰霉病菌、柚木溃疡病菌、香蕉鞘腐病菌、稻瘟病菌、拟茎点霉、拟盘多毛孢、葡萄座腔菌或炭疽菌中的应用。本发明所述棘孢木霉TZ312 对多种土传病害均有显著的抑制作用，抗菌谱广。

在本发明中，所述棘孢木霉TZ312接种麦粒后培养的温度优选为为 25℃；培养的时间优选为4～10d。

在本发明中，所述麦粒培养物产生的挥发性物质包括2,6,10,14-四甲基十七烷、β-姜黄素和叔丁基对甲酚等。麦粒培养物发酵3天后，产生的挥发性物质，收集3天～10天的挥发性代谢产物即得。

本发明还提供了上述技术方案所述棘孢木霉TZ312的挥发性代谢产物在抑制储藏性病害发生中的应用。本发明优选的，所述储藏性病害包括但不限于采后果实炭疽病或采后果实蒂腐病。如本发明的具体实施例所示，将制备的麦粒培养物不接触的与接种炭疽病菌的香蕉放置时，香蕉炭疽病的发病率与对照组相比有显著降低。

本发明还提供了前述技术方案所述棘孢木霉TZ312的挥发性代谢产物在制备生物熏蒸剂中的应用。所述生物熏蒸剂主要用于消毒杀菌。

本发明还提供了前述技术方案所述棘孢木霉TZ312的挥发性代谢产物在抑制香蕉枯萎病菌中的应用。如本发明的具体实施例所示，将制备得到的麦粒培养物与接种了香蕉枯萎病的平板不接触的放置在一起，结果显示香蕉枯萎病菌的菌丝生长明显收到抑制，抑制率在90％以上。

下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。

实施例1

1、菌株分离

将同一蕉园的5个点的样本，靠近根的泥土样本(摇动根抖落)碾碎，过2mm的灭菌筛(10目)然后混匀。土壤混合物转移到灭菌的锥形烧瓶中，按1:9(v/v)比例加进无菌的0.85％NaCl溶液(同时将表面含土的根段放进烧瓶中)。一个蕉园三次重复。所有土壤悬浮液在旋转摇床150rpm摇30分钟， 25℃，然后静止5分钟。用0.85％NaCl溶液将得到的土壤悬浮液连续10倍梯度稀释，吸取稀释倍数为10^-2、10^-3的土壤悬浮液0.2ml溶液到Martinmedium培养基(10g葡萄糖，5g蛋白胨，1g KH₂PO₄，3.3ml 1％(w/v)玫瑰红溶液，0.5gMgSO₄.7H₂O，15g琼脂，1000ml dH₂O，100mg链霉素)，涂布棒混匀，每个梯度3个重复，25℃黑暗培养3～5天。

结果：分离到的棘孢木霉TZ312菌株置于PDA平板培养5d后，用PDA 培养基做成的斜面4℃保存备用。

2、木霉的属种鉴定

2.1、形态学鉴定

方法：在PDA平板中央接种TZ312的菌体，25℃培养6d，观察菌落形态；在光学显微镜下观察分生孢子形态。

结果：TZ312菌落图见附图1，TZ312分生孢子显微图见附图2。

2.2、分子生物学鉴定

方法：用天根DNA提取试剂盒(DP305)提取菌株DNA，具体操作参照天根DNA提取试剂盒说明书。经1.0％琼脂糖凝胶电泳检测所提取的DNA 完整性后，再用超微量紫外可见分光光度计(Thermo Nanodrop ND2000C) 检测其纯度与浓度，并将其稀释至10ng.μL^-1，-20℃贮存备用。

扩增棘孢木霉TZ312菌株核糖体DNA内转录间隔区(ITS)和翻译延伸因子1-alpha基因(EF-1α)。扩增产物送上海生工生物有限公司测序。

ITS测试引物：

ITS1(SEQ ID NO.3)：TCCGTAGGTGAACCTGCGC；

ITS4(SEQ ID NO.4)：TCCTCCGCTTATTGATATGC。

EF-1α测试引物：

Ef728F(SEQ ID NO.5)CATCGAGAAGTTCGAGAAGG；

Ef986R(SEQ ID NO.6)TACTTGAAGGAACCCTTACC；

扩增体系：Taq PCR MasterMix

扩增程序：94℃变性2min，30循环(94℃变性1min，55℃退火2min， 72℃延伸2min)，72℃延伸10min；

结果：得到563bp的ITS序列(SEQ ID NO.1)和310bp的EF-1α序列 (SEQ ID NO.2)，在NCBI的DNA数据库里比对，分别与KY231190.1序列和KU301710.1序列的相似性为100％，KY231190.1序列和KU301710.1 序列均为棘孢木霉(Trichoderma asperellum)属真菌。故TZ312鉴定为棘孢木霉(Trichoderma asperellum)，并进行生物保藏。

实施例2棘孢木霉TZ312抑制香蕉枯萎病菌菌丝生长

方法：在9cm的PDA平板东南西北四个方位，距离平板边缘0.5cm处接种棘孢木霉TZ312，PDA平板中央接种香蕉枯萎病菌，置于25℃培养箱培养6d。以不接种TZ312为空白对照。待空白对照的香蕉枯萎病菌菌落生长直径到达皿边缘时，观察处理平板对峙情况。

结果：如图3所示，在对峙平板(图3右侧平板)中，棘孢木霉TZ312 生长迅速，其墨绿色的孢子将香蕉枯萎病菌菌丝覆盖，疑似寄生在上面，强烈抑制了香蕉枯萎病菌菌丝生长。

实施例3棘孢木霉TZ312抑制香蕉枯萎病的发生

方法：在土中(粘土：营养基质＝1：5，V:V)接种香蕉枯萎病菌(浓度为1.0×10⁶个/g)；1d后在土壤中接种棘孢木霉TZ312菌株(浓度1.0×10⁶个/g)，遮阴处理2d后种高度约30cm的香蕉组培苗，作为处理组。种植前，香蕉组培苗用棘孢木霉TZ312菌液浸泡30min。

空白对照1(CK1)接种香蕉枯萎病菌菌液，空白对照2(CK2)不接种任何菌液，其他处理均与处理组相同。

每个菌株种9棵香蕉组培苗。温室大棚28～32℃培养45d～60d。待CK1 明显发病时调查病情指数。

(1)香蕉枯萎病菌孢子悬浮液制备

将香蕉枯萎病菌接种在PDA平板上，25℃培养7d；然后挑新鲜菌丝到马铃薯葡萄糖液体(PDB)培养基中25℃，150rpm振荡培养5-6d。最后用血球计数板计算孢子液浓度。

(2)棘孢木霉TZ312菌株孢子悬浮液制备

将棘孢木霉TZ312菌株接种在PDA平板上，25℃培养10d，产生墨绿色的孢子。

(3)病情分级标准见表1。

表1 香蕉枯萎病的病情分级标准

病情指数＝∑(各级病株数×该病级值)/(调查总株数×最高级值)×100；

防治效果(％)＝(对照病情指数-处理病情指数)/对照病情指数×100。

结果：与对照相比，棘孢木霉TZ312菌株对香蕉枯萎病的防治效果为 65％，防治效果图见图4。

实施例4棘孢木霉TZ312产生的挥发性气体抑制香蕉枯萎病菌菌丝生长

方法：在直径11cm的大皿中放进4个直径6cm小皿，其中三个小皿放进高温灭菌麦粒13g。在麦粒中接种棘孢木霉TZ312菌株，25℃培养3天。将第四个小皿制成PDA平板，中央接上5mm香蕉枯萎病菌菌饼。以不接种棘孢木霉TZ312菌株的麦粒为空白对照。25℃培养4天，待空白对照刚长满整皿后调查。每个处理4个重复。

结果：如图5所示，棘孢木霉TZ312菌株与香蕉枯萎病菌菌株在同一个皿中共同培养，但是不相互接触。与对照相比，处理中的香蕉枯萎病菌菌丝生长明显受到抑制，抑制率在90％以上。故说明棘孢木霉TZ312菌株用麦粒培养后产生的挥发性物质能强烈抑制香蕉枯萎病菌菌丝生长。

实施例5棘孢木霉TZ312抑菌谱测定

方法：抑菌谱菌株包括黄瓜枯萎病菌Fusarium oxysporum f.sp.cucumerinum、番茄灰霉病菌Botrytis cinerea、柚木溃疡病菌Fusarium solani、香蕉鞘腐病菌Fusariumproliferatum、稻瘟病菌Magnaporthe oryzae、拟茎点霉Phomopsis sp.、拟盘多毛孢Pestalotiopsis sp.、葡萄座腔菌 Botryosphaeria dothidea、炭疽菌Colletotrichumgloeosporioides。

在PDA平板中央接种5mm抑菌谱菌株菌碟，在距离抑菌谱菌株菌碟 3cm处接种TZ312菌碟5mm，置于25℃下培养，每个抑菌谱菌株3个重复。以只接种抑菌谱菌株为对照。待对照菌株长满整皿时测量处理组的病原菌菌落直径。

结果如图6所示：棘孢木霉TZ312生长迅速，覆盖了抑菌谱菌株菌丝生长。可见，棘孢木霉TZ312菌株能强烈抑制抑菌谱菌株菌丝生长。

实施例6木霉产生的挥发性气体抑制储藏性病害发生

1.木霉产生的挥发性气体抑制香蕉采后果实炭疽病发生

方法：

1)棘孢木霉TZ312菌株活化，25℃培养5d；

2)麦粒高温灭菌后，接种棘孢木霉TZ312菌株，25℃培养约13d，得到麦粒培养物；

3)活化炭疽病菌(25℃培养7d)；

4)在密封器下层装上棘孢木霉TZ312的麦粒培养物，上层装香蕉，麦粒培养物与香蕉不接触，在香蕉果面刺伤接种5mm炭疽病菌的菌饼，以不接种TZ312的麦粒培养基为对照，每个处理3个重复。待对照发病明显时，观察结果。

结果：如图7-1所示，TZ312麦粒培养物与接种了炭疽菌的香蕉没有直接接触。但是当对照香蕉炭疽病发病明显时，用TZ312麦粒培养物处理的香蕉基本没发病，说明TZ312麦粒培养物产生的挥发性物质抑制了香蕉炭疽病的发生。

2.木霉产生的挥发性气体抑制芒果采后果实蒂腐病发生

方法：

1)棘孢木霉TZ312菌株活化，25℃培养5d；

3)活化蒂腐病菌(25℃培养7d)；

4)在密封器下层装上棘孢木霉TZ312的麦粒培养物，上层装芒果，麦粒培养物与芒果不接触，在芒果果面刺伤接种5mm蒂腐病菌的菌饼，以不接种棘孢木霉TZ312的麦粒培养基为对照，每个处理3个重复。待对照发病明显时，观察结果。

结果如图7-2所示：棘孢木霉TZ312的麦粒培养物与接种了蒂腐病的香蕉没有直接接触。但是当对照杧果蒂腐病发病严重时，用棘孢木霉TZ312 的麦粒培养物处理的芒果轻度发病，说明棘孢木霉TZ312的麦粒培养物产生的挥发性物质抑制了芒果蒂腐病的发生。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

序列表

<110> 广西壮族自治区农业科学院植物保护研究所

<120> 一株棘孢木霉TZ312及其应用、棘孢木霉TZ312的挥发性代谢产物及其应用

<160> 6

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 563

<212> DNA

<213> Trichoderma asperellum

<400> 1

agggatcatt accgagttta caactcccaa acccaatgtg aacgttacca aactgttgcc 60

tcggcggggt cacgccccgg gtgcgtcgca gccccggaac caggcgcccg ccggaggaac 120

caaccaaact ctttctgtag tcccctcgcg gacgtatttc ttacagctct gagcaaaaat 180

tcaaaatgaa tcaaaacttt caacaacgga tctcttggtt ctggcatcga tgaagaacgc 240

agcgaaatgc gataagtaat gtgaattgca gaattcagtg aatcatcgaa tctttgaacg 300

cacattgcgc ccgccagtat tctggcgggc atgcctgtcc gagcgtcatt tcaaccctcg 360

aacccctccg ggggatcggc gttggggatc gggacccctc acacgggtgc cggccccgaa 420

atacagtggc ggtctcgccg cagcctctcc tgcgcagtag tttgcacaac tcgcaccggg 480

agcgcggcgc gtccacgtcc gtaaaacacc caactttctg aaatgttgac ctcggatcag 540

gtaggaatac ccgctgaact taa 563

<210> 2

<211> 310

<212> DNA

<213> Trichoderma asperellum

<400> 2

taagctcatt tcactgcttt tcccatcaat ttttggcaca atcatatgcc cgacaattct 60

gctctcagtt tttgtctttt ttttccagcg tcaccccgct ttgccagtct acctacccct 120

cctttggcac agcaaaaatt ttctggctgc cttgtttggc ttttagtggg ttgtcaaatt 180

ttttggcagc aaccccgcta tcgccactgc acctcttcca tcacccacca catgctattt 240

gctcaatcgc gtcgtctttt tttgttcatt atgctgatca tgcttcaatc aataggaagc 300

cgccgaactc 310

<210> 3

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

tccgtaggtg aacctgcgc 19

<210> 4

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 4

tcctccgctt attgatatgc 20

<210> 5

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 5

catcgagaag ttcgagaagg 20

<210> 6

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 6

tacttgaagg aacccttacc 20

Claims

1.一株棘孢木霉Trichoderma asperellum TZ312，其特征在于，保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号：GDMCC NO:60253。

2.权利要求1所述棘孢木霉TZ312在抑制香蕉枯萎病菌中的应用。

3.权利要求1所述棘孢木霉TZ312在抑制黄瓜枯萎病菌、番茄灰霉病菌、柚木溃疡病菌、香蕉鞘腐病菌、稻瘟病菌、拟茎点霉、拟盘多毛孢、葡萄座腔菌或炭疽菌中的应用。

4.一种棘孢木霉TZ312的挥发性代谢产物，其特征在于，将棘孢木霉TZ312接种于麦粒中培养，得到麦粒培养物；收集接种后3～10d麦粒培养物产生的挥发性物质，即得棘孢木霉TZ312的挥发性代谢产物。

5.根据权利要求4所述的挥发性代谢产物，其特征在于，所述挥发性代谢产物包括2,6,10,14-四甲基十七烷、β-姜黄素和叔丁基对甲酚。

6.根据权利要求4所述棘孢木霉TZ312的挥发性代谢产物，其特征在于，所述培养的温度为25℃，所述培养的时间为4～10d。

7.权利要求4～6任意一项所述棘孢木霉TZ312的挥发性代谢产物在抑制储藏性病害发生中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述储藏性病害包括采后果实炭疽病或采后果实蒂腐病。

9.权利要求4～6任意一项所述棘孢木霉TZ312的挥发性代谢产物在制备生物熏蒸剂中的应用。

10.权利要求4～6任意一项所述棘孢木霉TZ312的挥发性代谢产物在抑制香蕉枯萎病菌中的应用。