CN111870688A - ACE2蛋白与IL-6或TNFα拮抗剂组合及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及生物医药工程技术领域，提供了ACE2蛋白与IL‑6或TNFα拮抗剂组合物及其应用，所述应用具体为ACE2蛋白与IL‑6拮抗剂及TNFα拮抗剂中的任意一种或两种联合在制备治疗ACE2表达水平或功能异常介导的炎症介质紊乱相关疾病药物中的用途。所述药物为以ACE2蛋白以及IL‑6拮抗剂和TNFα拮抗剂中的任意一种或两种为活性组分的药物组合物，或者为ACE2蛋白与IL‑6拮抗剂和TNFα拮抗剂中的任意一种或两种形成的融合多肽。该组合物或形成的融合多肽均意外的可以介导ACE2依赖的免疫细胞清除作用、减少ACE2‑Ig的ADE效应，降低的免疫细胞分泌作用。在动物模型中，能够减少脏器炎症介质过度表达释放、减轻脏器炎症损伤、增强脏器抗应激能力、抵抗脏器损伤。
Description
技术领域
本发明涉及生物医药工程技术领域，具体涉及ACE2蛋白及变体、IL-6和/或TNFα拮抗剂组合物、多聚体融合多肽以及用途。
背景技术
在动物中，当细胞或组织受到细菌、外伤、毒素、物理或化学因素(其可以统称为“炎性物质，inflammatoryagent”)损伤时，会发生炎性应答。炎症应答的病理生理特征受到由细胞合成并释放的多种促炎或抗炎剌激物或介质的复杂相互作用的调节。一些己知种类的促炎、抗炎剌激物或介质包括细胞因子、氧化亚氮、血栓皖(thromboxane)、自兰烯、磷脂样血小板活化因子、前列腺素、激肤、补体因子、凝血因子、超抗原、单核因子、趋化因子、干扰素、自由基、蛋白酶、花生四烯酸代谢物、环前列腺素、β内啡肽、心肌抑制因子(myocardial depressant factor)、anadamide，2-花生酷甘油(2-arachidonoylglycerol)、四氢生物蝶岭、细胞碎片以及化学物质(包括组胺、缓激肽和血清素)等。
根据被侵袭的位置、炎性物质的性质以及所涉及的促炎或抗炎剌激物或介质的相互作用，炎性应答的性质和强度不同。当受到调节并且为局限性时，炎性应答是有益的。但是，如果不受调节并且广泛化时，炎性应答可造成显著的组织损伤甚至死亡。
近年来，高度耐药的微生物感染成为临床常见的棘手问题。由于患者救治时间延长，微生物在体内进一步进化，产生如耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(methicillin-resist-ant Staphylococcus aureus，MRSA)等“超级耐药菌”，耐药微生物在体内持续存在，使得参与炎症的细胞因子网络调控紊乱，因此开发能抑制整个微生物-免疫系统作用的药物成为前沿热点。利用超剂量的抗生素可以杀灭微生物，但死亡微生物可以进一步介导炎症因子风暴，且大剂量抗生素造成患者肝肾损害，依然无法对抗疾病。
ACE2是组织肾素-血管紧张素系统的关键酶，且是部分病原微生物如冠状病毒等的关键受体，近年来的一些报道也认为在多种病理过程中，ACE2的下调可以导致组织内部炎症介质的进一步紊乱。但目前尚未有如何针对ACE2下调或功能障碍介导的病理状况系统性的治疗研究。一些基于ACE2的重组蛋白类候选药物在动物模型的急性炎症损伤研究中显示了一些治疗效果，但这些候选药物的在相关疾病治疗的确切地位尚未明确。
发明内容
本发明的目的在于，依托上述研究背景，对ACE2蛋白与IL-6或TNFα拮抗剂组合应用进行探索，并对组合物形式进行探究。
本发明的第一方面，提供了ACE2蛋白与IL-6拮抗剂及TNFα拮抗剂中的一种或两种形成的组合物。该组合物包括两部分：(i)天然ACE2蛋白、其功能变体或片段、或其与免疫球蛋白的融合体；(ii)IL-6和/或TNFα拮抗剂。
天然ACE2蛋白(UniProt编号:Q9BYF1)优选其细胞外结构域，即第1-740位氨基酸，更优选其第18-740位氨基酸。此外，ACE2蛋白还包括利用基因工程和抗体工程手段制备的ACE2融合蛋白，如具有酶活核心的片段多肽或ACE2细胞外结构域与免疫球蛋白Fc区域的融合而制备成的免疫球蛋白融合体，这些融合体在在非专利文献[Lei C,etal..Naturecommunications,2020,11(1):1-5.]中已有详细描述，本说明书不再赘述。在本发明中，最优选ACE2(18-740位氨基酸)和IgG1Fc区域的融合体，下述为ACE2-Ig。
IL-6或TNFα拮抗剂优选拮抗IL-6或TNFα生物活性的单克隆抗体或免疫融合蛋白，如olamkicept、siltuximab、olokizumab、sirukumab、clazakizumab、satralizumab、levilimab、tulinercept、onercept、lenercept、infliximab、etanercept、pegsunercept、ozoralizumab、adalimumab、crizanlizumab等。
在本发明一些优选的具体实施方案中，所述组合物方案包括：包含ACE2-Ig、olamkicept的方案；ACE2-Ig、olokizumab的方案；包含ACE2-Ig、olamkicept、etanercept的方案；包含ACE2-Ig、olokizumab、adalimumab的方案。
本发明的第二方面，提供了ACE2蛋白与IL-6拮抗剂及TNFα拮抗剂中的一种或两种形成的融合多肽，利用基因工程方法进行双特异性或者多特异性的融合构建而形成双特异性或多特异性融合多肽。
该融合多肽包含ACE2蛋白以及拮抗剂两种组分。在本发明的一些具体优选实施方案中，所述融合多肽包含多聚化的的第一多肽链、第二多肽链、和部分实施方案中的第三多肽链，第一多肽链的结构通式为X1-X2，第二多肽链的结构通式为Y1-Y2，第三多肽链为Z。
其中，X1是天然ACE2蛋白的细胞外结构域或其功能变体或片段，X2是二聚化结构域或其功能变体或片段；Y1是(i)IL-6和/或TNFα天然受体细胞外结构域或其功能变体或片段；(ii)IL-6和/或TNFα拮抗性抗体的重链可变区(VH)及人IgG第一恒定区(CH1)。Y2是二聚化结构域或其功能变体或片段。当Y1是IL-6和/或TNFα拮抗性抗体的重链可变区(VH)及人IgG第一恒定区(CH1)时，融合蛋白包括第三多肽链Z，Z链是IL-6和/或TNFα拮抗性抗体的轻链。
其中，IL-6天然受体包括IL6R(UniProt编号：P08887)或IL6ST(UniProt编号：P40189)；TNFα天然受体包括TNFRSF1A(UniProt编号：P19438)或TNFRSF1B(UniProt编号：P20333)。所述的二聚化结构域或其功能变体或片段指基因工程技术常用的免疫球蛋白同源二聚化或异源二聚化技术，如专利文献。
在本发明的一些具体的实施方案中，融合多聚体多肽包含两条肽链，其中X1是天然ACE2蛋白的细胞外结构域或其功能变体或片段；Y1是IL6ST蛋白的细胞外结构域或其功能变体或片段。例如，所述所述X1-X2多肽链包含与下述的SEQ ID NO.2所示的ACE2-IgG-Knob氨基酸序列一致的序列或具有至少60％、优选至少65％、优选至少70％、更优选至少75％、更优选至少80％、更优选至少85％、甚至更优选至少90％、甚至更优选至少95％和最优选至少99％同一性；所述Y1-Y2多肽链包含与下述的SEQ ID NO.3所示的IL6ST-hole氨基酸序列一致的序列或具有至少60％、优选至少65％、优选至少70％、更优选至少75％、更优选至少80％、更优选至少85％、甚至更优选至少90％、甚至更优选至少95％和最优选至少99％同一性。
在本发明的一些具体的实施方案中，所述融合多聚体多肽包含两条肽链，其中X1是天然ACE2蛋白的细胞外结构域或其功能变体或片段；Y1是TNFRSF1B蛋白的细胞外结构域或其功能变体或片段。例如，所述所述X1-X2多肽链包含与下述的SEQ ID NO.2所示的ACE2-IgG-Knob氨基酸序列一致的序列或具有至少60％、优选至少65％、优选至少70％、更优选至少75％、更优选至少80％、更优选至少85％、甚至更优选至少90％、甚至更优选至少95％和最优选至少99％同一性；所述Y1-Y2多肽链包含与下述的SEQ ID NO.4所示的TNFRSF1B-hole氨基酸序列一致的序列或具有至少60％、优选至少65％、优选至少70％、更优选至少75％、更优选至少80％、更优选至少85％、甚至更优选至少90％、甚至更优选至少95％和最优选至少99％同一性。
在本发明的一些具体的实施方案中，所述融合多聚体多肽包含三条肽链，其中X1是天然ACE2蛋白的细胞外结构域或其功能变体或片段；Y1是olokizumab重链可变区及人IgG第一恒定区；Z链是olokizumab轻链；例如，所述所述X1-X2多肽链包含与下述的SEQ IDNO.5所示的ACE2-hole氨基酸序列一致的序列或具有至少60％、优选至少65％、优选至少70％、更优选至少75％、更优选至少80％、更优选至少85％、甚至更优选至少90％、甚至更优选至少95％和最优选至少99％同一性；所述Y1-Y2多肽链包含与下述的SEQ ID NO.6所示的Olokizumab-knob氨基酸序列一致的序列或具有至少60％、优选至少65％、优选至少70％、更优选至少75％、更优选至少80％、更优选至少85％、甚至更优选至少90％、甚至更优选至少95％和最优选至少99％同一性；所述Z肽链包含与下述的SEQ ID NO.7所示的OlokizumabL chain氨基酸序列一致的序列或具有至少60％、优选至少65％、优选至少70％、更优选至少75％、更优选至少80％、更优选至少85％、甚至更优选至少90％、甚至更优选至少95％和最优选至少99％同一性。
在本发明的一些具体的实施方案中，所述融合多聚体多肽包含三条肽链，其中X1是天然ACE2蛋白的细胞外结构域或其功能变体或片段；Y1是adalimumab重链可变区及人IgG第一恒定区；Z链是adalimumab轻链；例如，所述所述X1-X2多肽链包含与下述的SEQ IDNO.5所示的ACE2-hole氨基酸序列一致的序列或具有至少60％、优选至少65％、优选至少70％、更优选至少75％、更优选至少80％、更优选至少85％、甚至更优选至少90％、甚至更优选至少95％和最优选至少99％同一性；所述Y1-Y2多肽链包含与下述的SEQ ID NO.8所示的adalimumab-knob氨基酸序列一致的序列或具有至少60％、优选至少65％、优选至少70％、更优选至少75％、更优选至少80％、更优选至少85％、甚至更优选至少90％、甚至更优选至少95％和最优选至少99％同一性；所述Z肽链包含与下述的SEQ ID NO.9所示的AdalimumabL chian氨基酸序列一致的序列或具有至少60％、优选至少65％、优选至少70％、更优选至少75％、更优选至少80％、更优选至少85％、甚至更优选至少90％、甚至更优选至少95％和最优选至少99％同一性。
利用基因工程的方法制备多特异性的融合多肽是本领域的常规技术，如专利文献所述的多特异性融合蛋白-抗体构建方法和双特异性融合蛋白的构建方法，本发明对此不进行限定。
值得说明的是，在本发明的某些实施方案中，采用动物源性的ACE2蛋白以及动物源性的IL-6和/或TNFα拮抗剂。这些动物源性制剂可以方便在动物模型中评估本发明所描述的组合物和融合多肽的治疗价值，也可以直接用于动物疾病诊断和治疗产品。
因此，本发明的第三方面提供了一种药物组合物，该药物组合物的活性组分可以是第一方面的组合物，也可以是第二方面的融合多肽。
根据后续实验证明，该药物组合物为治疗由ACE2表达水平或功能异常介导的炎症介质紊乱相关疾病的药物组合物，其功能如下：1)介导ACE2依赖的免疫细胞清除作用，如实施例1-2；2)减少免疫细胞过度渗出和炎症因子过度释放，如实施例3。3)减少脏器炎症介质过度表达释放、减轻脏器炎症损伤、增强脏器抗应激能力、抵抗脏器损伤等，如实施例5-7；4)降低自身免疫应答，如实施例8。
由此，本发明的第四方面，提供了上述药物组合物的用途，即ACE2蛋白与IL-6拮抗剂及TNFα拮抗剂中的任意一种或两种联合在制备治疗ACE2表达水平或功能异常介导的炎症介质紊乱相关疾病药物中的用途。
所述ACE2表达水平或功能异常介导的炎症介质紊乱相关疾病指在特定病理情况下由ACE2表达水平下调或功能异常介导的疾病病理，包括：全身性炎性应答综合征(SIRS)或脓毒症(例如源自病毒、细菌、真菌或寄生虫感染)、自身免疫病、外科手术、细胞毒性化疗、骨髓操作、大的组织损伤或外伤、肠系膜灌注不足、肠粘膜损伤、疟疾、胃肠道炎性疾病、肠道感染、宫腔感染、流行性感冒、急性肺炎如急性呼吸窘迫综合症或急性肺损伤、肺栓塞、胰腺炎、自身免疫和胶原血管病、输血相关疾病、烧伤、烟或吸入肺损伤、移植物抗宿主病、缺血或梗死、再灌注损伤、出血、过敏反应、药物过量、辐射损伤或化学损伤。
在一些实施方案中，所述ACE2表达水平或功能异常介导的炎症介质紊乱相关疾病还包括由生物战的病原体、毒素或制剂导致的ACE2下调或功能紊乱。例如病毒性出血热、水母毒素、汉坦病毒心肺综合征(汉坦病毒)、霍乱毒素、肉毒杆菌毒素、草麻毒素、Q热[博纳特氏立克次氏体(Coxiella burnetii)]、斑痊伤寒症(Rickettsia prowaszekii)或鹦鹉热[鹦鹉热衣原体(Chlamydia psittaci)]。病毒感染相关疾病药物、试剂、试剂盒用途中的任意一种或至少两种的组合。
此外，本发明的第五方面，提供了编码本发明第一方面所述组合物的各组分、第二方面所述多肽的多核苷酸、运载该核苷酸的载体以及包含这种载体的细胞。
本发明提供的表达载体包含下述可操作地连接的元件：转录启动子、编码上述组合物和融合多肽的DNA区和转录终止子。
通过培养包含载体的细胞，用于生产本发明第一方面所述组合物的各组分、第二方面所述多肽，包括：(i)培养包含如上公开的表达载体的细胞，其中细胞表达由所述DNA区段编码的本发明第一方面所述组合物的各组分、第二方面所述多肽，并生产编码的产物；(ii)回收可溶性的产物。采用通用的蛋白表达和纯化手段进行蛋白质的表达和纯化。
本发明的有益保障及效果：
本发明独创性的将ACE2蛋白与IL-6拮抗剂及TNFα拮抗剂中的一种或两种联合应用，其组成的组合物或形成的融合多肽均意外的可以介导ACE2依赖的免疫细胞清除作用、减少ACE2-Ig的ADE效应，降低的免疫细胞分泌作用，而单独使用两种成分均无类似作用。在动物模型中，组合物和组合性多肽能够减少脏器炎症介质过度表达释放、减轻脏器炎症损伤、增强脏器抗应激能力、抵抗脏器损伤。通过单独应用或与其他相关病症药物联用，能有效治疗ACE2下调和或功能紊乱导致的炎性介质相关性疾病，具备广阔的临床应用前景。
附图说明
图1为本发明实施例所述融合多肽的结构示意图：A为二聚体融合多肽，B为三聚体融合多肽。
具体实施方式
以下实施例、实验例对本发明进行进一步的说明，不应理解为对本发明的限制。实施例不包括对传统方法的详细描述，如常用的抗体工程方法、那些用于构建载体和质拉的方法，将编码蛋白的基因插入到这样的载体和质拉的方法或将质粒引入宿主细胞的方法、合成细胞、装置、基因回路的构建方法等。这样的方法对于本领域中具有普通技术的人员是众所周知的，并且在许多出版物中都有所描述，包括董志伟，王琰主编《抗体工程》第二版，北京医科大学出版社，2002；Sambrook,J.,Fritsch,E.F.and Maniais,T.(1989)MolecularCloning:A Laboratory Manual,2nd edition,Cold spring Harbor Laboratory Press；Phage Display:A laboratory Manual,Cold spring Harbor Laboratory Press等。
实施例1.重组多肽制备
(1)委托基因合成商(苏州金维智公司)针对本实施例需要的组合物组分、融合多肽氨基酸序列进行编码核苷酸密码子优化和全基因合成，优化后的核苷酸序列直接装载到PCDNA3.4载体上，所有载体编码后的氨基酸序列描述见表1。olamkicept由辉凌制药提供、olokizumab由R-Pharm公司提供、adalimumab购自Selleck公司。
(2)委托蛋白质制备商(义翘神州公司)针对本实施例需要对组合物组分和融合多肽进行表达纯化。采用文献Finck B K.Science,265.；Mihara M et al..Journal ofClinical Investigation.2000；106:91-101；Yu X,etal.NatureImmunology.2009；10:48-57.Liu S,et al.Clin Immunol.2019 Jun；203:72-80.)方法，利用293F系统进行瞬时转染表达技术进行蛋白表达，然后利用protein A和离子交换的方法获取大量的重组多肽，SDS-PAGE、western blot、质谱证实目的蛋白。
(3)测定组合物组分和融合多肽对配体结合能力
利用ELISA方法检测组合物组分和融合多肽对特定配体的结合能力，如表2所示。
表1多肽信息
表2多肽结合能力检测
*+++：结合力达PM级别；++结合力达NM级别
实施例2.组合物和融合多肽对ACE2依赖的吞噬作用
细胞表面表达SARS-CoV-2 spike蛋白的293T细胞(293-S细胞)制备同文献[LeiC,et al..Nature communications,2020,11(1):1-5.，外周单核细胞的制备、外周单核细胞对293-S细胞吞噬能力检测同文献[Klichinsky M,Ruella M,Shestova O,et al.NatureBiotechnology,2020:1-7.]。在各处理组中施用本发明所述的组合物和融合多肽的代表物，各组代表物处理的总浓度为3μg/ml，结果如表3:
表3巨噬细胞的吞噬能力
结果显示，相比各组分，组合物和融合多肽显著增加ACE2Ig介导的免疫细胞清除作用。
实施例3组合物和融合多肽对巨噬细胞抗炎活性
Raw264.7巨噬细胞(中科院细胞库)在含有10％的胎牛血清(FBS；GibcoLaboratories)的DMEM培养基培养，培养条件为在37℃和5％CO2。以1×106个细胞/mL的密度将Raw 264.7细胞接种至96孔板中并贴壁培养过夜；次日，用新鲜的DMEM培养基替换上述培养基，并将实施例2所述的3μg/mL的多种组合物加至细胞中，对照组加入对照人IgG(Sigma)。将细胞与蛋白孵育30分钟后，培养基添加LPS(终浓度1μg/mL)，并将细胞再温育24小时后进行检测实验。
1)NO水平测试
使用Griess试剂系统(Promega，USA)测量上述Raw 264.7细胞培养基中的中的一氧化氮(NO)水平。将50μL培养基加入96孔板，接着加入相同量的Griess试剂I(NED)溶液和Griess试剂II(对氨基苯磺酰胺溶液)，孵育10分钟，之后，使用微孔板读取仪(MolecularDevices，USA)在30分钟内测量540nm下的光密度。使用亚硝酸钠标准曲线(0～100μM)来计算NO的浓度。
如下表4所示，以LPS刺激细胞增加了NO的表达，ACE2重组蛋白不能降低LPS诱导的NO表达，IL-6和TNFα拮抗剂可以少量降低NO的表达；LPS与本发明所述的组合物和融合多肽共同处理时，上述NO表达水平显著的降低了。支持了组合物和融合多肽减少巨噬细胞自身炎性渗出的效果。
表4相对NO含量
2)细胞因子检测
收集含有细胞培养基的上清液样品，并使用HMGB1、IFN-γ和IL-1βELISA试剂盒(eBioscience，San Diego)分析细胞因子的水平。在4℃下用100μL捕获抗体(在涂布缓冲液中稀释至制造商的操作规程所建议的浓度)涂布96孔板过夜。接着，在洗涤该板5次之后，每孔中加入200μL测定稀释液，并于室温下温育1小时以进行封闭。在用洗涤缓冲液洗涤各孔5次之后，将细胞培养物样品或每个细胞因子标准蛋白样品稀释，并在每孔中加入100μL各样品。在4℃下过夜温育含有样品的板。接着，在用洗涤缓冲液洗涤该板5次之后，加入100μL与抗生物素蛋白偶联的二抗，并在室温下温育1小时。在与二抗温育之后，洗涤该板5次，并在室温下与100μL抗生物素蛋白-HRP(BDBioscience)温育30分钟。在洗涤该板7次之后，加入100μLTMB溶液(Pierce)并在室温下温育15分钟。在各孔中加入50μl硫酸来终止反应。使用微孔板读取仪测量450nm下的光密度。使用SPSS程序的ANOVA操作进行方差分析，从而进行统计学分析，并使用邓肯氏多变域检验法来验证分析之间的显著性。检测结果如表5～7所示：
表5各处理组HMGB1水平
表6各处理组IFN-γ水平
表7各处理组IL-1β水平
结果显示，ACE2重组蛋白、IL-6和TNFα拮抗剂并不能降低HMGB1、IFN-γ和IL-1β的分泌水平。而组合物和融合多肽显著降低上述细胞因子的水平，证实组合物和融合多肽具有显著的抗炎性渗出作用。
实施例4用于动物模型的组合物和融合多肽制备
为了在小鼠模型中评估组合物和融合多肽的治疗价值，必须制备鼠源对应的组合物成分和融合多肽，制备的方法同实施例1，具体信息如表8～9.
表8用于动物模型的组合物和融合多肽制备
表9多肽结合能力检测
*+++：结合力达PM级别；++结合力达NM级别
实施例5组合物及融合多肽对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌作用
BALB/c小鼠，SPF级，雌性，6～8周龄，体重18～20g，国际标准株MRSA-252，购自美国组织培养库(American Tissue Culture Collection，ATCC)。建立小鼠模型，经尾静脉注射0.1mL洗涤后的菌液(菌液浓度为1×109CFU/mL)，空白组小鼠经尾静脉注射等量无菌生理盐水。然后将小鼠分为对照组和处理组，每组10只，对照组给与对照IgG，处理组给与本发明所述的组合物和融合多肽的代表物，剂量为10mg/kg，静脉注射一天一次，连续观察10d。如有小鼠死亡或最后一天实验结束处死全部老鼠，立即无菌条件下取血液铺板计数细菌，同时无菌取肾脏、脾脏、肝脏全器官，取部分组织用玻璃匀浆器磨碎后铺板计数细菌，同时进行病理检查。同时利用Western Blot检测空白组和模型组血液、肝脏、脾脏、肾脏、肺组织内的ACE2表达水平，结果如表10～15所示。
表10模型组小鼠各组织ACE2表达水平
| 组织 | ACE2表达水平(％相对正常小鼠组) | SD | P值(相对于空白组) |
| 全血细胞 | 54.892 | 6.194 | P＜0.05 |
| 肝脏 | 35.245 | 12.980 | P＜0.05 |
| 脾脏 | 40.054 | 16.332 | P＜0.05 |
| 肾脏 | 50.728 | 28.028 | P＜0.05 |
| 肺 | 13.432 | 4.130 | P＜0.05 |
结果显示，严重感染导致多脏器ACE2表达下降，符合本发明所述组合物及融合多肽的应用范围。
表11小鼠生存率％
表12各组小鼠死亡前血液相对菌落数
表13各组小鼠死亡前肝脏相对菌落数
表14各组小鼠死亡前脾脏相对菌落数
表15各组小鼠死亡前肾脏相对菌落数
这些结果表明，相比各组分单独应用，本发明所述的组合物和融合多肽具有较强的微生物抵抗作用、抗感染作用、减少脏器菌落数量，有效对抗耐甲氧西林金黄色葡萄球。
实施例6组合物和融合多肽治疗的动物系统性真菌感染实验
选用雌性C57BL/6小鼠作为实验动物(20g左右)，经尾静脉注射给予5×106CFU/ml浓度的新生隐球菌0.1ml(5×105CFU/ml)，造成系统性真菌感染模型。然后进行分组，每组10只小鼠，处理组分别经脉施用总剂量为10mg/kg的本发明所述组合物或融合蛋白，每日一次，对照组给予对照IgG，给药共5天，在第5天将小鼠处死、取脑、将脑组织匀浆均匀，将匀浆液稀释一定倍数后加入到蛋白胨琼脂基涂板，将培养基上的菌落计数，计算小鼠脑部真菌荷菌量，同时检测模型组和正常小鼠全血ACE2表达水平。结果如表16～17所示。
表16模型组小鼠各组织ACE2表达水平
结果显示，严重感染导致全血ACE2表达下降，符合本发明所述组合物及融合多肽的应用范围。
表17脑组织来源菌落计数
这些结果显示，相较各组分单独应用，组合物和融合多肽系统性给药可以有效的抑制脑组织内的真菌生长，达到真菌杀灭效果疗效明显。
实施例7.组合物和融合多肽治疗急性肺损伤
BALB/c小鼠进行分组(n＝12)，空白组和假手术组均给与PBS，对照组给与对照IgG，各处理组给与本发明所述的组合物和融合多肽代表物，以按照10mg/kg的给药剂量尾静脉注射小鼠，每天一次连续给药3天，末次给药1h后开始造模，2％异戊巴比妥钠腹腔注射麻醉小鼠，仰卧固定于37℃恒温手术台。参照专利文献(111018999A)方法造模，造模主要步骤如下：小心剃去颈部正中毛发，酒精消毒，正中切开颈部皮肤约2cm，暴露及分离气管，利用胰岛素注射器于气管内慢慢滴注LPS5mg/kg(0.5mL/kg)，假手术组气管内滴注等量生理盐水，碘伏消毒伤口并缝合皮肤，建立小鼠急性肺损伤模型。
造模24h后摘眼球取血，4℃冰箱静置3h后，3500r/min离心15min,分离血清，液氮保存，待测。各组小鼠小心剪开颈部皮肤并分离气管，行气管插管。剖开胸部，结扎右支气管，用磷酸缓冲液灌洗左肺，共3次，2mL/次，收集支气管肺泡灌洗液并离心(4℃，1300r/min,5min)。
首先检测模型组和假手术组肺组织内ACE2表达水平，然后检测如下指标：1)BCA蛋白定量试剂盒(碧云天)检测支气管肺泡灌洗液中蛋白含量,实验操作均按照试剂盒说明书进行。2)支气管肺泡灌洗液白细胞水平，用800μL0.01mol/L(pH7.4)的PBS缓冲液重悬支气管肺泡灌洗液沉淀物,吹打均匀后,取400μL于血液分析仪中检测白细胞数目。3)肺湿干质量比(W/D)：称取左肺上叶为湿质量,将左肺上叶放入恒温干燥箱(105℃)烤72h，干燥至恒质量，并称取记录为干质量，按下列公式计算:肺湿干质量比＝湿质量/干质量。4)肺组织病理形态评分：取右肺下叶,10％
中性甲醛浸泡固定24h,流水冲洗12h,常规石蜡包埋,切片,苏木精伊红染色,封片,显微镜下进行病理观察。选择不同视野按照标准肺炎症评分进行病理评分，评分方法参考文献[朱珊,潘灵辉,林飞,等.临床麻醉学杂志,2013,29(6).]。5)血生化指标检测血清中SOD活性和MDA的含量测定严格按照相应检测试剂盒说明书步骤进行检测。6)肺组织TGF-β1和Smad2的表达水平检测：BCA试剂盒检测肺组织匀浆总蛋白浓度,加入等量样品于电泳槽进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳。经过转膜、封闭、孵育TGF-β1(1:3000)、Smad2(1:2000)一抗过夜；洗膜、孵育二抗(1:7000)(抗体均购自CST公司)、洗膜、显影,使用ImageJ软件半定量分析各条带灰度值。结果如表18～24所示：
表18模型组小鼠各组织ACE2表达水平
结果显示，严重感染导致肺组织内ACE2表达显著下降，符合本发明所述组合物及融合多肽的应用范围。
表19各组支气管肺泡灌洗液蛋白含量
表20各组支气管肺泡灌洗液中性粒细胞数量
表21各组肺组织湿干质量比
表22各组肺损伤评分
表23各组血清SOD活性
表24各组血清MDA含量(μmol/L)活性
这些实验证实，相比各组分单独应用，本发明所描述的组合物和融合多肽具有降低急性炎症渗出、抑制白细胞渗出、减少组织水肿、减轻组织损伤、增强SOD活性、降低血清MDA含量的作用，有效增加组织对炎症损伤的抵抗。
实施例8:组合物和融合多肽对狼疮小鼠模型的治疗作用
狼疮性肾炎作为一种代表性免疫系统疾病，发病率约为50/10万，在我国约占人口的0.7‰。90％以上狼疮性肾炎见于女性，主要为青、中年女性，一般认为30岁以下者肾脏受累率高，约有70％病人有不同程度的肾损害临床表现，以程度不等的蛋白尿、镜下血尿为多见，常伴有管型尿及肾功能损害，严重影响患者的正常生活。
狼疮小鼠模型多采用NZB雌鼠与NZW雄鼠杂交产生，杂交第一代(NZB×NZW)F1，能产生包括狼疮性肾炎在内的典型狼疮症状，是目前公认的研究狼疮性肾炎动物模型之一。模型的建立参考非专利文献Brinks et al.Circ Res(2010)107:1140-1149。然后将小鼠分组进行分组，每组n＝10。组合物和融合多肽的施用剂量为:10mg/kg，一周两次尾静脉注射，连续注射十周。对照组注射对照IgG，剂量同处理组。
于第30周，首先检测模型组和正常组全血细胞的ACE2表达水平，结果见表25。然后分别检测各处理组自身抗体水平，各处理组较对照组抗dsDNA抗体、抗组蛋白抗体显著减少，而总IgG水平不变，证实处理对自身免疫性抗体有抑制生成的作用。如表26～28所示。
于40周统计蛋白尿发生率，50周统计存活率，小鼠死亡立即进行组织学研究做病理评分，存活小鼠在50周同一处死，肾脏组织学研究进行病理评分，评分方法参考文献[LiuS,et al.Clinical Immunology,2019,203:72-80.]。如表29～31所示，各处理组较对照组有效减少蛋白尿水平、减轻肾脏炎症和病理破坏、提高狼疮小鼠存活力。
表25模型组小鼠各组织ACE2表达水平
表26 30周各组小鼠血清抗dsDNA抗体
表27 30周各组小鼠血清抗组蛋白抗体
表28 30周各组小鼠血清总IgG水平
表29 40周各组小鼠蛋白尿发生率
| 组别 | 蛋白尿发生率％ | P值 |
| 模型组(空白对照) | 100 | |
| 对照IgG | 100 | |
| rmACE2(10/kg) | 80 | P＞0.05 |
| mACE2-Ig(10/kg) | 70 | P＞0.05 |
| mIL6ST-Ig(10/kg) | 80 | P＞0.05 |
| mTNFRSF1B-Ig(10/kg) | 80 | P＞0.05 |
| mACE2-Ig(5/kg)+mIL6ST-Ig(5/kg) | 30 | P＜0.05 |
| mACE2-Ig(5/kg)+mTNFRSF1B-Ig(5/kg) | 20 | P＜0.05 |
| mIL6ST-Ig(5/kg)+mTNFRSF1B-Ig(5/kg) | 70 | P＞0.05 |
| mACE2-mIL6ST-Ig(10/kg) | 30 | P＜0.05 |
| mACE2-mTNFRSF1B-Ig(10/kg) | 30 | P＜0.05 |
| mACE2-mIL6ST-Ig(5/kg)+mACE2-mTNFRSF1B-Ig(5/kg) | 30 | P＜0.05 |
表30 50周各组小鼠存活率
表31各组肾脏病理评分
综上，在狼疮小鼠模型中，相比各组分单独应用，本发明所述的组合物和融合多肽可以减少自身免疫抗体、减少脏器病理性炎症渗出、对于自身免疫系统疾病均具有良好的治疗效果，有利于后续的临床试验的开展。
实施例9向暴露于未知病原体的患者施用二聚体融合蛋白举例
在突发公共安全事件或生物恐怖主义袭击中，人们暴露于未知的病原体或毒素。暴露模式为很多不同方式中的一种，例如食物或水摄取、气雾剂吸入或皮肤接触。病原体为众多中的一种，例如新型冠状病毒，炭疽杆菌(炭疽热)、流感病毒、天花病毒、鼠疫耶尔森菌(鼠疫)、埃博拉病毒或马尔堡病毒、土拉弗朗西斯菌(野兔病)、汉坦病毒、登革病毒、霍乱毒素、肉毒杆菌毒素、蓖麻毒素、沙门氏菌、大肠杆菌如E.coli 0157:H7、志贺氏杆菌、李斯特菌等。
当威胁性的微生物尚未确定时，一些病人已经迅速开始患有相似症状的严重疾病，包括高烧、寒颤、咳嗽、严重疲劳和腹泻。患者可接受标准治疗，例如抗病毒药、抗生素、抗毒素、免疫球蛋白。
可以通过组织或血液检测评估患者组织内的ACE2表达和功能情况，一旦发现ACE2下调或功能紊乱，即可以利用本发明所述的组合物或融合多肽，如作为发生感染症状和炎症体征的患者的预防措施或治疗手段，向患者静脉施用本发明所述组合物或融合多肽，例如包含活性成分为50mg/kg ACE2-Ig、50mg/kg olamkicept；50mg/kg ACE2-Ig、50mg/kgadalimumab；100mg/kg ACE2-olokizumab等如实施例2中的组合物和融合多肽的药物组合物。一旦药物分布到体液中，组合物或融合多肽可以增强巨噬细胞对病理因素的清除作用，减少异常调控的炎性介质，从而防止或限制细胞因子或其他炎性介质诱导的细胞死亡、器官损伤、多器官衰竭和潜在死亡的发生。
本发明中涉及的未说明部分与现有技术相同或采用现有技术加以实现。申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的详细方法，但本发明并不局限于上述详细方法，即不意味着本发明必须依赖上述详细方法才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。
序列表
<110> 沣潮医药科技（上海）有限公司
<120> ACE2蛋白与IL-6或TNFα拮抗剂组合及其应用
<130> 权利要求书 说明书
<160> 10
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 955
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
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1 5 10 15
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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Thr Val Asp Tyr Ser Thr Val Tyr Phe Val Asn Ile Glu Val Trp Val
165 170 175
Glu Ala Glu Asn Ala Leu Gly Lys Val Thr Ser Asp His Ile Asn Phe
180 185 190
Asp Pro Val Tyr Lys Val Lys Pro Asn Pro Pro His Asn Leu Ser Val
195 200 205
Ile Asn Ser Glu Glu Leu Ser Ser Ile Leu Lys Leu Thr Trp Thr Asn
210 215 220
Pro Ser Ile Lys Ser Val Ile Ile Leu Lys Tyr Asn Ile Gln Tyr Arg
225 230 235 240
Thr Lys Asp Ala Ser Thr Trp Ser Gln Ile Pro Pro Glu Asp Thr Ala
245 250 255
Ser Thr Arg Ser Ser Phe Thr Val Gln Asp Leu Lys Pro Phe Thr Glu
260 265 270
Tyr Val Phe Arg Ile Arg Cys Met Lys Glu Asp Gly Lys Gly Tyr Trp
275 280 285
Ser Asp Trp Ser Glu Glu Ala Ser Gly Ile Thr Tyr Glu Asp Arg Pro
290 295 300
Ser Lys Ala Pro Ser Phe Trp Tyr Lys Ile Asp Pro Ser His Thr Gln
305 310 315 320
Gly Tyr Arg Thr Val Gln Leu Val Trp Lys Thr Leu Pro Pro Phe Glu
325 330 335
Ala Asn Gly Lys Ile Leu Asp Tyr Glu Val Thr Leu Thr Arg Trp Lys
340 345 350
Ser His Leu Gln Asn Tyr Thr Val Asn Ala Thr Lys Leu Thr Val Asn
355 360 365
Leu Thr Asn Asp Arg Tyr Leu Ala Thr Leu Thr Val Arg Asn Leu Val
370 375 380
Gly Lys Ser Asp Ala Ala Val Leu Thr Ile Pro Ala Cys Asp Phe Gln
385 390 395 400
Ala Thr His Pro Val Met Asp Leu Lys Ala Phe Pro Lys Asp Asn Met
405 410 415
Leu Trp Val Glu Trp Thr Thr Pro Arg Glu Ser Val Lys Lys Tyr Ile
420 425 430
Leu Glu Trp Cys Val Leu Ser Asp Lys Ala Pro Cys Ile Thr Asp Trp
435 440 445
Gln Gln Glu Asp Gly Thr Val His Arg Thr Tyr Leu Arg Gly Asn Leu
450 455 460
Ala Glu Ser Lys Cys Tyr Leu Ile Thr Val Thr Pro Val Tyr Ala Asp
465 470 475 480
Gly Pro Gly Ser Pro Glu Ser Ile Lys Ala Tyr Leu Lys Gln Ala Pro
485 490 495
Pro Ser Lys Gly Pro Thr Val Arg Thr Lys Lys Val Gly Lys Asn Glu
500 505 510
Ala Val Leu Glu Trp Asp Gln Leu Pro Val Asp Val Gln Asn Gly Phe
515 520 525
Ile Arg Asn Tyr Thr Ile Phe Tyr Arg Thr Ile Ile Gly Asn Glu Thr
530 535 540
Ala Val Asn Val Asp Ser Ser His Thr Glu Tyr Thr Leu Ser Ser Leu
545 550 555 560
Thr Ser Asp Thr Leu Tyr Met Val Arg Met Ala Ala Tyr Thr Asp Glu
565 570 575
Gly Gly Lys Asp Gly Pro Glu Phe Thr Phe Thr Thr Pro Lys Phe Ala
580 585 590
Gln Gly Glu Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro
595 600 605
Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro
610 615 620
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
625 630 635 640
Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn
645 650 655
Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg
660 665 670
Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val
675 680 685
Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser
690 695 700
Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
705 710 715 720
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp
725 730 735
Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe
740 745 750
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
755 760 765
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
770 775 780
Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
785 790 795 800
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
805 810 815
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
820 825
<210> 4
<211> 467
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
Leu Pro Ala Gln Val Ala Phe Thr Pro Tyr Ala Pro Glu Pro Gly Ser
1 5 10 15
Thr Cys Arg Leu Arg Glu Tyr Tyr Asp Gln Thr Ala Gln Met Cys Cys
20 25 30
Ser Lys Cys Ser Pro Gly Gln His Ala Lys Val Phe Cys Thr Lys Thr
35 40 45
Ser Asp Thr Val Cys Asp Ser Cys Glu Asp Ser Thr Tyr Thr Gln Leu
50 55 60
Trp Asn Trp Val Pro Glu Cys Leu Ser Cys Gly Ser Arg Cys Ser Ser
65 70 75 80
Asp Gln Val Glu Thr Gln Ala Cys Thr Arg Glu Gln Asn Arg Ile Cys
85 90 95
Thr Cys Arg Pro Gly Trp Tyr Cys Ala Leu Ser Lys Gln Glu Gly Cys
100 105 110
Arg Leu Cys Ala Pro Leu Arg Lys Cys Arg Pro Gly Phe Gly Val Ala
115 120 125
Arg Pro Gly Thr Glu Thr Ser Asp Val Val Cys Lys Pro Cys Ala Pro
130 135 140
Gly Thr Phe Ser Asn Thr Thr Ser Ser Thr Asp Ile Cys Arg Pro His
145 150 155 160
Gln Ile Cys Asn Val Val Ala Ile Pro Gly Asn Ala Ser Met Asp Ala
165 170 175
Val Cys Thr Ser Thr Ser Pro Thr Arg Ser Met Ala Pro Gly Ala Val
180 185 190
His Leu Pro Gln Pro Val Ser Thr Arg Ser Gln His Thr Gln Pro Thr
195 200 205
Pro Glu Pro Ser Thr Ala Pro Ser Thr Ser Phe Leu Leu Pro Met Gly
210 215 220
Pro Ser Pro Pro Ala Glu Gly Ser Thr Gly Asp Glu Pro Lys Ser Cys
225 230 235 240
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
245 250 255
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
260 265 270
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
275 280 285
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
290 295 300
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
305 310 315 320
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
325 330 335
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
340 345 350
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
355 360 365
Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
370 375 380
Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
385 390 395 400
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
405 410 415
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val
420 425 430
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
435 440 445
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
450 455 460
Pro Gly Lys
465
<210> 5
<211> 955
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
Gln Ser Thr Ile Glu Glu Gln Ala Lys Thr Phe Leu Asp Lys Phe Asn
1 5 10 15
His Glu Ala Glu Asp Leu Phe Tyr Gln Ser Ser Leu Ala Ser Trp Asn
20 25 30
Tyr Asn Thr Asn Ile Thr Glu Glu Asn Val Gln Asn Met Asn Asn Ala
35 40 45
Gly Asp Lys Trp Ser Ala Phe Leu Lys Glu Gln Ser Thr Leu Ala Gln
50 55 60
Met Tyr Pro Leu Gln Glu Ile Gln Asn Leu Thr Val Lys Leu Gln Leu
65 70 75 80
Gln Ala Leu Gln Gln Asn Gly Ser Ser Val Leu Ser Glu Asp Lys Ser
85 90 95
Lys Arg Leu Asn Thr Ile Leu Asn Thr Met Ser Thr Ile Tyr Ser Thr
100 105 110
Gly Lys Val Cys Asn Pro Asp Asn Pro Gln Glu Cys Leu Leu Leu Glu
115 120 125
Pro Gly Leu Asn Glu Ile Met Ala Asn Ser Leu Asp Tyr Asn Glu Arg
130 135 140
Leu Trp Ala Trp Glu Ser Trp Arg Ser Glu Val Gly Lys Gln Leu Arg
145 150 155 160
Pro Leu Tyr Glu Glu Tyr Val Val Leu Lys Asn Glu Met Ala Arg Ala
165 170 175
Asn His Tyr Glu Asp Tyr Gly Asp Tyr Trp Arg Gly Asp Tyr Glu Val
180 185 190
Asn Gly Val Asp Gly Tyr Asp Tyr Ser Arg Gly Gln Leu Ile Glu Asp
195 200 205
Val Glu His Thr Phe Glu Glu Ile Lys Pro Leu Tyr Glu His Leu His
210 215 220
Ala Tyr Val Arg Ala Lys Leu Met Asn Ala Tyr Pro Ser Tyr Ile Ser
225 230 235 240
Pro Ile Gly Cys Leu Pro Ala His Leu Leu Gly Asp Met Trp Gly Arg
245 250 255
Phe Trp Thr Asn Leu Tyr Ser Leu Thr Val Pro Phe Gly Gln Lys Pro
260 265 270
Asn Ile Asp Val Thr Asp Ala Met Val Asp Gln Ala Trp Asp Ala Gln
275 280 285
Arg Ile Phe Lys Glu Ala Glu Lys Phe Phe Val Ser Val Gly Leu Pro
290 295 300
Asn Met Thr Gln Gly Phe Trp Glu Asn Ser Met Leu Thr Asp Pro Gly
305 310 315 320
Asn Val Gln Lys Ala Val Cys His Pro Thr Ala Trp Asp Leu Gly Lys
325 330 335
Gly Asp Phe Arg Ile Leu Met Cys Thr Lys Val Thr Met Asp Asp Phe
340 345 350
Leu Thr Ala His His Glu Met Gly His Ile Gln Tyr Asp Met Ala Tyr
355 360 365
Ala Ala Gln Pro Phe Leu Leu Arg Asn Gly Ala Asn Glu Gly Phe His
370 375 380
Glu Ala Val Gly Glu Ile Met Ser Leu Ser Ala Ala Thr Pro Lys His
385 390 395 400
Leu Lys Ser Ile Gly Leu Leu Ser Pro Asp Phe Gln Glu Asp Asn Glu
405 410 415
Thr Glu Ile Asn Phe Leu Leu Lys Gln Ala Leu Thr Ile Val Gly Thr
420 425 430
Leu Pro Phe Thr Tyr Met Leu Glu Lys Trp Arg Trp Met Val Phe Lys
435 440 445
Gly Glu Ile Pro Lys Asp Gln Trp Met Lys Lys Trp Trp Glu Met Lys
450 455 460
Arg Glu Ile Val Gly Val Val Glu Pro Val Pro His Asp Glu Thr Tyr
465 470 475 480
Cys Asp Pro Ala Ser Leu Phe His Val Ser Asn Asp Tyr Ser Phe Ile
485 490 495
Arg Tyr Tyr Thr Arg Thr Leu Tyr Gln Phe Gln Phe Gln Glu Ala Leu
500 505 510
Cys Gln Ala Ala Lys His Glu Gly Pro Leu His Lys Cys Asp Ile Ser
515 520 525
Asn Ser Thr Glu Ala Gly Gln Lys Leu Phe Asn Met Leu Arg Leu Gly
530 535 540
Lys Ser Glu Pro Trp Thr Leu Ala Leu Glu Asn Val Val Gly Ala Lys
545 550 555 560
Asn Met Asn Val Arg Pro Leu Leu Asn Tyr Phe Glu Pro Leu Phe Thr
565 570 575
Trp Leu Lys Asp Gln Asn Lys Asn Ser Phe Val Gly Trp Ser Thr Asp
580 585 590
Trp Ser Pro Tyr Ala Asp Gln Ser Ile Lys Val Arg Ile Ser Leu Lys
595 600 605
Ser Ala Leu Gly Asp Lys Ala Tyr Glu Trp Asn Asp Asn Glu Met Tyr
610 615 620
Leu Phe Arg Ser Ser Val Ala Tyr Ala Met Arg Gln Tyr Phe Leu Lys
625 630 635 640
Val Lys Asn Gln Met Ile Leu Phe Gly Glu Glu Asp Val Arg Val Ala
645 650 655
Asn Leu Lys Pro Arg Ile Ser Phe Asn Phe Phe Val Thr Ala Pro Lys
660 665 670
Asn Val Ser Asp Ile Ile Pro Arg Thr Glu Val Glu Lys Ala Ile Arg
675 680 685
Met Ser Arg Ser Arg Ile Asn Asp Ala Phe Arg Leu Asn Asp Asn Ser
690 695 700
Leu Glu Phe Leu Gly Ile Gln Pro Thr Leu Gly Pro Pro Asn Gln Pro
705 710 715 720
Pro Val Ser Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro
725 730 735
Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro
740 745 750
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
755 760 765
Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn
770 775 780
Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg
785 790 795 800
Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val
805 810 815
Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser
820 825 830
Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
835 840 845
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp
850 855 860
Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe
865 870 875 880
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
885 890 895
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
900 905 910
Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
915 920 925
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
930 935 940
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
945 950 955
<210> 6
<211> 450
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 6
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Phe Asn Asp Tyr
20 25 30
Phe Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Gln Met Arg Asn Lys Asn Tyr Gln Tyr Gly Thr Tyr Tyr Ala Glu
50 55 60
Ser Leu Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Ala Arg Glu Ser Tyr Tyr Gly Phe Thr Ser Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210 215 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325 330 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340 345 350
Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365
Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
Gly Lys
450
<210> 7
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 7
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asp Ile Gly Ile Ser
20 25 30
Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asn Ala Asn Asn Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Asn Ser Ala Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 8
<211> 451
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 8
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Thr Trp Asn Ser Gly His Ile Asp Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
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65 70 75 80
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85 90 95
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100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
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Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
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Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
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325 330 335
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340 345 350
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355 360 365
Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
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385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly Lys
450
<210> 9
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 9
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1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Tyr
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Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Arg Tyr Asn Arg Ala Pro Tyr
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Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 10
<211> 955
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 10
Gln Ser Thr Ile Glu Glu Gln Ala Lys Thr Phe Leu Asp Lys Phe Asn
1 5 10 15
His Glu Ala Glu Asp Leu Phe Tyr Gln Ser Ser Leu Ala Ser Trp Asn
20 25 30
Tyr Asn Thr Asn Ile Thr Glu Glu Asn Val Gln Asn Met Asn Asn Ala
35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
Gln Ala Leu Gln Gln Asn Gly Ser Ser Val Leu Ser Glu Asp Lys Ser
85 90 95
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100 105 110
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115 120 125
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130 135 140
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145 150 155 160
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165 170 175
Asn His Tyr Glu Asp Tyr Gly Asp Tyr Trp Arg Gly Asp Tyr Glu Val
180 185 190
Asn Gly Val Asp Gly Tyr Asp Tyr Ser Arg Gly Gln Leu Ile Glu Asp
195 200 205
Val Glu His Thr Phe Glu Glu Ile Lys Pro Leu Tyr Glu His Leu His
210 215 220
Ala Tyr Val Arg Ala Lys Leu Met Asn Ala Tyr Pro Ser Tyr Ile Ser
225 230 235 240
Pro Ile Gly Cys Leu Pro Ala His Leu Leu Gly Asp Met Trp Gly Arg
245 250 255
Phe Trp Thr Asn Leu Tyr Ser Leu Thr Val Pro Phe Gly Gln Lys Pro
260 265 270
Asn Ile Asp Val Thr Asp Ala Met Val Asp Gln Ala Trp Asp Ala Gln
275 280 285
Arg Ile Phe Lys Glu Ala Glu Lys Phe Phe Val Ser Val Gly Leu Pro
290 295 300
Asn Met Thr Gln Gly Phe Trp Glu Asn Ser Met Leu Thr Asp Pro Gly
305 310 315 320
Asn Val Gln Lys Ala Val Cys His Pro Thr Ala Trp Asp Leu Gly Lys
325 330 335
Gly Asp Phe Arg Ile Leu Met Cys Thr Lys Val Thr Met Asp Asp Phe
340 345 350
Leu Thr Ala His His Glu Met Gly His Ile Gln Tyr Asp Met Ala Tyr
355 360 365
Ala Ala Gln Pro Phe Leu Leu Arg Asn Gly Ala Asn Glu Gly Phe His
370 375 380
Glu Ala Val Gly Glu Ile Met Ser Leu Ser Ala Ala Thr Pro Lys His
385 390 395 400
Leu Lys Ser Ile Gly Leu Leu Ser Pro Asp Phe Gln Glu Asp Asn Glu
405 410 415
Thr Glu Ile Asn Phe Leu Leu Lys Gln Ala Leu Thr Ile Val Gly Thr
420 425 430
Leu Pro Phe Thr Tyr Met Leu Glu Lys Trp Arg Trp Met Val Phe Lys
435 440 445
Gly Glu Ile Pro Lys Asp Gln Trp Met Lys Lys Trp Trp Glu Met Lys
450 455 460
Arg Glu Ile Val Gly Val Val Glu Pro Val Pro His Asp Glu Thr Tyr
465 470 475 480
Cys Asp Pro Ala Ser Leu Phe His Val Ser Asn Asp Tyr Ser Phe Ile
485 490 495
Arg Tyr Tyr Thr Arg Thr Leu Tyr Gln Phe Gln Phe Gln Glu Ala Leu
500 505 510
Cys Gln Ala Ala Lys His Glu Gly Pro Leu His Lys Cys Asp Ile Ser
515 520 525
Asn Ser Thr Glu Ala Gly Gln Lys Leu Phe Asn Met Leu Arg Leu Gly
530 535 540
Lys Ser Glu Pro Trp Thr Leu Ala Leu Glu Asn Val Val Gly Ala Lys
545 550 555 560
Asn Met Asn Val Arg Pro Leu Leu Asn Tyr Phe Glu Pro Leu Phe Thr
565 570 575
Trp Leu Lys Asp Gln Asn Lys Asn Ser Phe Val Gly Trp Ser Thr Asp
580 585 590
Trp Ser Pro Tyr Ala Asp Gln Ser Ile Lys Val Arg Ile Ser Leu Lys
595 600 605
Ser Ala Leu Gly Asp Lys Ala Tyr Glu Trp Asn Asp Asn Glu Met Tyr
610 615 620
Leu Phe Arg Ser Ser Val Ala Tyr Ala Met Arg Gln Tyr Phe Leu Lys
625 630 635 640
Val Lys Asn Gln Met Ile Leu Phe Gly Glu Glu Asp Val Arg Val Ala
645 650 655
Asn Leu Lys Pro Arg Ile Ser Phe Asn Phe Phe Val Thr Ala Pro Lys
660 665 670
Asn Val Ser Asp Ile Ile Pro Arg Thr Glu Val Glu Lys Ala Ile Arg
675 680 685
Met Ser Arg Ser Arg Ile Asn Asp Ala Phe Arg Leu Asn Asp Asn Ser
690 695 700
Leu Glu Phe Leu Gly Ile Gln Pro Thr Leu Gly Pro Pro Asn Gln Pro
705 710 715 720
Pro Val Ser Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro
725 730 735
Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro
740 745 750
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
755 760 765
Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn
770 775 780
Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg
785 790 795 800
Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val
805 810 815
Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser
820 825 830
Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
835 840 845
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp
850 855 860
Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
865 870 875 880
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
885 890 895
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
900 905 910
Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
915 920 925
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
930 935 940
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
945 950 955
Claims (9)
1.ACE2蛋白与IL-6拮抗剂及TNFα拮抗剂中的任意一种或两种联合在制备治疗ACE2表达水平或功能异常介导的炎症介质紊乱相关疾病药物中的用途。
2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：
其中，所述药物为介导ACE2依赖的免疫细胞清除作用的药物；减少免疫细胞过度渗出和炎症因子过度释放的药物；减少脏器炎症介质过度表达释放、减轻脏器炎症损伤、增强脏器抗应激能力、抵抗脏器损伤的药物；或降低自身免疫应答的药物。
3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：
其中，所述药物为以ACE2蛋白以及IL-6拮抗剂和TNFα拮抗剂中的任意一种或两种为活性组分的药物组合物，或者为ACE2蛋白与IL-6拮抗剂和TNFα拮抗剂中的任意一种或两种形成的融合多肽。
4.根据权利要求3所述的用途，其特征在于：
其中，所述ACE2蛋白选自天然ACE2蛋白、其功能变体、片段或与免疫球蛋白的融合蛋白；所述IL-6或TNFα拮抗剂选自拮抗IL-6或TNFα生物活性的单克隆抗体或免疫融合蛋白，
所述融合多肽包含多聚化的第一多肽链和第二多肽链，所述第一多肽链的结构通式为X1-X2，所述第二多肽链的结构通式为Y1-Y2，
其中，X1是天然ACE2蛋白或其功能变体或片段，X2是二聚化结构域或其功能变体或片段；Y1为(i)IL-6和/或TNFα天然受体细胞外结构域或其功能变体或片段，或(ii)IL-6和/或TNFα拮抗性抗体的重链可变区及人IgG第一恒定区，Y2是二聚化结构域或其功能变体或片段。
5.根据权利要求4所述的用途，其特征在于：
其中，当Y1为IL-6和/或TNFα拮抗性抗体的重链可变区及人IgG第一恒定区时，所述融合多肽还包括第三多肽链Z，该第三多肽链为IL-6和/或TNFα拮抗性抗体的轻链。
6.根据权利要求5所述的用途，其特征在于：
其中，所述天然ACE2蛋白选自其胞外结构域第18～740位氨基酸，ACE2融合蛋白为该第18～740位氨基酸与IgG1 Fc区域的融合体；
所述IL-6天然受体包括IL6R或IL6ST，TNFα天然受体包括TNFRSF1A或TNFRSF1B；
所述融合多肽选自以下其中一种情况：
所述融合多肽包含两条肽链，其中X1是天然ACE2蛋白的细胞外结构域或其功能变体或片段，Y1是IL6ST蛋白的细胞外结构域或其功能变体或片段；X1-X2多肽链具有如SEQ IDNO.2所示的ACE2-IgG-Knob氨基酸序列；Y1-Y2多肽链具有如SEQ ID NO.3所示的IL6ST-hole氨基酸序列；
所述融合多肽包含两条肽链，其中X1是天然ACE2蛋白的细胞外结构域或其功能变体或片段，Y1是TNFRSF1B蛋白的细胞外结构域或其功能变体或片段；X1-X2多肽链具有如SEQ IDNO.2所示的ACE2-IgG-Knob氨基酸序列，Y1-Y2多肽链具有如SEQ ID NO.4所示的TNFRSF1B-hole氨基酸序列；
所述融合多肽包含三条肽链，其中X1是天然ACE2蛋白的细胞外结构域或其功能变体或片段，Y1是olokizumab重链可变区及人IgG第一恒定区，Z链是olokizumab轻链；X1-X2多肽链具有如SEQ ID NO.5所示的ACE2-hole氨基酸序列，Y1-Y2多肽链具有与如SEQ ID NO.6所示的Olokizumab-knob氨基酸序列一致，Z肽链具有如SEQ ID NO.7所示的Olokizumab Lchain氨基酸序列一致的序列；
所述融合多肽包含三条肽链，其中X1是天然ACE2蛋白的细胞外结构域或其功能变体或片段，Y1是adalimumab重链可变区及人IgG第一恒定区，Z链是adalimumab轻链；X1-X2多肽链具有如SEQ ID NO.5所示的ACE2-hole氨基酸序列，Y1-Y2多肽链具有如SEQ ID NO.8所示的adalimumab-knob氨基酸序列，Z肽链具有如SEQ ID NO.9所示的Adalimumab L chian氨基酸序列。
7.一种ACE2表达水平或功能异常介导的炎症介质紊乱相关疾病治疗药物组合物，其特征在于，所述药物组合物的活性组分为以ACE2蛋白以及IL-6拮抗剂和TNFα拮抗剂中的任意一种或两种组合形成的组合体，或者为ACE2蛋白与IL-6拮抗剂和TNFα拮抗剂中的任意一种或两种形成的融合多肽，还包括医学或药学用途的稀释剂或赋形剂。
8.根据权利要求7所述的ACE2表达水平或功能异常介导的炎症介质紊乱相关疾病治疗药物组合物，其特征在于：
其中，所述组合体中，ACE2蛋白与IL-6拮抗剂或TNFα拮抗剂的质量比为1:1。
9.编码权利要求7所述的药物组合物各组分或融合多肽的多核苷酸、运载该多核苷酸的载体以及包含该载体的细胞。
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