CN111870554A

CN111870554A - 一种美白组合物及其制备方法

Info

Publication number: CN111870554A
Application number: CN202011036972.8A
Authority: CN
Inventors: 劳树权; 王银娟; 周康夫
Original assignee: Dezhixin Shanghai Co ltd
Current assignee: Dezhixin Shanghai Co ltd
Priority date: 2020-09-28
Filing date: 2020-09-28
Publication date: 2020-11-03
Anticipated expiration: 2040-09-28
Also published as: CN111870554B

Abstract

本发明公开了一种美白组合物及其制备方法。本发明提供了一种美白组合物的制备方法，其包括下述步骤：（1）将油相加入到水相中，得到混合物A；（2）将1 wt.%~20 wt.%助乳化剂加入到步骤（1）制得的混合物A中，得混合物B；（3）将步骤（2）制得的混合物B进行剪切乳化，得到分散体C；（4）将步骤（3）制得的分散体C进行高压均质或高速微射流，得到美白组合物即可；所述的wt.%是指某一组分相对于所述的美白组合物中的所有组分的质量百分比。该美白组合物具有较佳的包封率、较佳的黑色素抑制作用、较佳的皮肤透过性和滞留性、较低的毒性，而且其中的组分之间具有协同作用。

Description

一种美白组合物及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种美白组合物及其制备方法。

背景技术

美白一直是东方女性永恒的追求，市售美白产品层出不穷。

然而，美白活性成分直接加入护肤品体系中存在诸多弊端：(1)大多数美白活性成分稳定性差，在产品放置过程中易氧化变质、变色而失去美白作用；(2)部分美白活性成分还会引起皮肤刺激、过敏等现象；(3)由于皮肤自有屏障，美白活性成分难以透过角质层进入皮肤基底层，大大降低美白功效。

为了解决美白活性成分的应用和皮肤吸收问题，研究者将一种或者多种美白活性成分进行纳米包载，不仅提高其稳定性，降低刺激性，还能有效透过皮肤，充分发挥其美白功效。

专利CN201810690938.9提供了一种苯乙基间苯二酚的共输送纳米组合物，将苯乙基间苯二酚与抗氧化剂、剥脱角质类活性物质、抑制黑素小体转移类活性物质、抗糖化类活性物质以及抗敏剂中的至少两种共同包载，取得了一定的美白效果。

发明内容

本发明要解决的技术问题是现有的美白活性成分种类较为单一的缺点，为此，本发明提供了一种美白组合物及其制备方法。该美白组合物具有较佳的包封率、较佳的黑色素抑制作用、较佳的皮肤透过性和滞留性、较低的毒性，而且其中的组分之间具有协同作用。

本发明提供了一种美白组合物的制备方法，其包括下述步骤：

（1）将油相加入到水相中，得到混合物A；

所述的油相为0.5 wt.%~20 wt.%苯乙基间苯二酚、1 wt.%~20 wt.%油脂、1 wt.%~30wt.%乳化剂和0.1 wt.%~5 wt.%稳定剂的混合物；

所述的水相为0.01 wt.%~5 wt.%肌肽、0.5 wt.%~20 wt.%烟酰胺、0.5 wt.%~30 wt.%白松露菌提取物、0.5 wt.%~30 wt.%桑白皮提取物和余量的水的混合物；

（2）将1 wt.%~20 wt.%助乳化剂加入到步骤（1）制得的混合物A中，得混合物B；

（3）将步骤（2）制得的混合物B进行剪切乳化，得到分散体C；

（4）将步骤（3）制得的分散体C进行高压均质或高速微射流，得到美白组合物即可；

所述的wt.%是指某一组分相对于所述的美白组合物中的所有组分的质量百分比。

在所述的制备方法的某一方案中，所述的油相可为澄清溶液。

在所述的制备方法的某一方案中，所述的油相的温度可为本领域该类方法中常规的油相温度，例如40℃~70℃，又例如50℃~60℃，还例如50℃~55℃。

在所述的制备方法的某一方案中，所述的油相的制备过程中可伴随搅拌。

在所述的制备方法的某一方案中，所述的水相可为澄清溶液。

在所述的制备方法的某一方案中，所述的水相的温度可为本领域该类方法中常规的水相温度，例如40℃~70℃，又例如50℃~60℃，还例如50℃~55℃。

在所述的制备方法的某一方案中，所述的水相的制备过程中可伴随搅拌。

在所述的制备方法的某一方案中，所述的油相的温度可与所述的水相的温度相同。

在所述的制备方法的某一方案中，所述的步骤（1）里，所述的加入的速度可为1、2、3、4、5或6滴/秒。

在所述的制备方法的某一方案中，所述的油相加入到所述的水相时的温度可为本领域该类方法中常规的混合温度，例如40℃~70℃，又例如50℃~60℃，还例如50℃~55℃。

在所述的制备方法的某一方案中，所述的油相加入到所述的水相时可伴随搅拌。所述搅拌的速率可为500 rpm ~1000 rpm（例如600 rpm、650 rpm、700 rpm、750 rpm、800rpm或900 rpm），又可为600 rpm ~800 rpm。

在所述的制备方法的某一方案中，所述的苯乙基间苯二酚的用量可为2 wt.%~17wt.%（例如5 wt.%、6 wt.%、8 wt.%、9 wt.%、10 wt.%、12 wt.% 或15 wt.%），又可为5 wt.%~10 wt.%。

在所述的制备方法的某一方案中，所述的油脂的用量可为化妆品领域常规的用量，例如2 wt.%~18 wt.% （比如3 wt.%、5 wt.%、7 wt.%、8 wt.%、10 wt.%、12 wt.%或15wt.%），又例如5 wt.%~10 wt.%。

在所述的制备方法的某一方案中，所述的油脂可为化妆品领域常规的油脂，例如辛酸癸酸甘油三酯、中链甘油三酯、棕榈酸异丙酯、肉豆蔻酸异丙酯、甘油三（乙基己酸）酯、椰油酸乙基己酯、硬脂酸乙基己酯、月桂酸异戊酯、葵花籽油、二甲基硅油和亚油酸甘油酯中的一种或几种；又例如辛酸癸酸甘油三酯、中链甘油三酯、棕榈酸异丙酯、肉豆蔻酸异丙酯、甘油三（乙基己酸）酯和月桂酸异戊酯中的一种或几种。

在所述的制备方法的某一方案中，所述的油脂可为“辛酸癸酸甘油三酯”、“棕榈酸异丙酯”、“椰油酸乙基己酯”、“辛酸癸酸甘油三酯和甘油三（乙基己酸）酯”、“葵花籽油和亚油酸甘油酯”、“二甲基硅油和中链甘油三酯”、“中链甘油三酯”、“肉豆蔻酸异丙酯”、“肉豆蔻酸异丙酯和月桂酸异戊酯”或“硬脂酸乙基己酯”。

在所述的制备方法的某一方案中，所述的油脂的种类可为1种或2种。当所述的油脂的种类为1种时，所述的油脂可为辛酸癸酸甘油三酯、棕榈酸异丙酯或肉豆蔻酸异丙酯。当所述的油脂的种类为2种时，所述的油脂可为“辛酸癸酸甘油三酯和甘油三（乙基己酸）酯”或“肉豆蔻酸异丙酯和月桂酸异戊酯”。

在本发明中，对油脂中各成分的质量百分含量比没有限制。

在所述的制备方法的某一方案中，所述的乳化剂的用量可为化妆品领域常规的用量，例如5 wt.%~25 wt.%（比如6 wt.%、8 wt.%、11 wt.%、13 wt.%、15 wt.%、17 wt.%或20wt.%），又例如15 wt.%~25 wt.%。

在所述的制备方法的某一方案中，所述的乳化剂可为化妆品领域常规的乳化剂，例如PEG-8辛酸/癸酸甘油酯类、硬脂酰乳酰乳酸钠、三山嵛精 PEG-20 酯类、聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酯、聚氧乙烯氢化蓖麻油、聚甘油-6 二硬脂酸酯、聚甘油-3二异硬脂酸酯、聚甘油-6异硬脂酸酯、聚甘油-6二油酸酯和椰油基葡糖苷中的一种或几种；又例如PEG-8辛酸/癸酸甘油酯类、聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酯、聚氧乙烯氢化蓖麻油、聚甘油-6 二硬脂酸酯、聚甘油-6二油酸酯和椰油基葡糖苷中的一种或几种。

在所述的制备方法的某一方案中，所述的乳化剂可为“硬脂酰乳酰乳酸钠”、“PEG-8辛酸/癸酸甘油酯类、和、三山嵛精PEG-20酯类”、“聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酯、聚氧乙烯氢化蓖麻油、和、椰油基葡糖苷”、“聚甘油-6异硬脂酸酯、和、椰油基葡糖苷”、“PEG-8辛酸/癸酸甘油酯类、和、聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酯”、“聚甘油-6二油酸酯、和、椰油基葡糖苷”、“PEG-8辛酸/癸酸甘油酯类、聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酯、和、聚氧乙烯氢化蓖麻油”、“聚氧乙烯氢化蓖麻油、和、聚甘油-6 二硬脂酸酯”、“PEG-8聚甘油-6-二硬脂酸酯、和、聚甘油-3二异硬脂酸酯”、“聚甘油-6二油酸酯、聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酯、和、聚氧乙烯氢化蓖麻油”、或、“聚甘油-6 二硬脂酸酯、和、聚甘油-6二油酸酯”。

在所述的制备方法的某一方案中，所述的乳化剂的种类可为2种或3种。当所述的乳化剂的种类为2种时，所述的乳化剂为“PEG-8辛酸/癸酸甘油酯类和聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酯”、“聚氧乙烯氢化蓖麻油和聚甘油-6 二硬脂酸酯”或“聚甘油-6二油酸酯和椰油基葡糖苷”。

在本发明中，对乳化剂中各成分的质量百分含量比没有限制。

在所述的制备方法的某一方案中，所述的稳定剂的用量可为化妆品领域常规的用量，例如0.2 wt.%~2.3 wt.% （比如0.3 wt.%、0.5 wt.%、0.6 wt.%、0.8 wt.%、1 wt.%或2wt.%），又例如0.5 wt.%~2.0 wt.%。

在所述的制备方法的某一方案中，所述的稳定剂可为化妆品领域常规的稳定剂，例如丁羟甲苯、维生素E醋酸酯和丁基羟基茴香醚中的一种或几种，又例如丁羟甲苯和/或维生素E醋酸酯。

在本发明中，对稳定剂中各成分的质量百分含量比没有限制。

在所述的制备方法的某一方案中，所述的肌肽的用量可为0.05 wt.%~4 wt.%（例如0.1 wt.%、0.5 wt.%、0.6 wt.%、0.8 wt.%、1 wt.%、1.5 wt.%或2 wt.%），又可为0.05wt.%~2 wt.%。

在所述的制备方法的某一方案中，所述的烟酰胺的用量可为1.5 wt.%~15 wt.%（例如2 wt.%、5 wt.%、6 wt.%、7 wt.%、8 wt.%、9 wt.%、10 wt.%或12 wt.%），又可为5 wt.%~10 wt.%。

在所述的制备方法的某一方案中，所述的白松露菌提取物的提取方法可为本领域常规的提取方法，例如：用水提取白松露菌，浓缩，加入麦芽糊精，喷雾干燥，之后在甘油，水和防腐剂中熟化后过滤。

在所述的制备方法的某一方案中，所述的白松露菌提取物中，每公斤可包含相当于大约65克新鲜白松露菌的亲水成分。

在所述的制备方法的某一方案中，所述的白松露菌提取物可为本领域常规的白松露菌提取物，本申请特别选择symrise公司生产的Actipone® White Truffle GW，又例如symrise公司生产的Actipone® White Truffle GW，产品编号为437789。

在所述的制备方法的某一方案中，所述的白松露菌提取物的用量可为1 wt.%~20wt.%（例如5 wt.%、6 wt.%、10 wt.%、12 wt.%或15 wt.%），又可为10 wt.%~20 wt.%。

在所述的制备方法的某一方案中，所述的桑白皮提取物的提取方法可为本领域常规的提取方法，例如：用水和乙醇提取桑白皮，色谱柱层析和过滤，浓缩，之后在甘油，水和防腐剂中熟化后过滤。

在所述的制备方法的某一方案中，所述的桑白皮提取物中，每公斤可含有可溶于水和乙醇的、约280克干物质。

在所述的制备方法的某一方案中，所述的桑白皮提取物可为本领域常规的桑白皮提取物，本申请特别选择symrise公司生产的Actipone® Mulberry GW，又例如symrise公司生产的Actipone® Mulberry GW，产品编号为399898。

在所述的制备方法的某一方案中，所述的桑白皮提取物的用量可为5 wt.%~20wt.% （例如6 wt.%、10 wt.%、12 wt.%或15 wt.%），又可为10 wt.%~20 wt.%。

在所述的制备方法的某一方案中，所述的水的用量可为13.9 wt.%~45 wt.%，又可为17.5 wt.%~ 32.7 wt.%，还可为17.7 wt.%、18 wt.%、19 wt.%、19.2 wt.%、19.5 wt.%、20.4 wt.%、22 wt.%、22.39 wt.%、22.4 wt.%、26.35 wt.%、27.2 wt.%或28.8 wt.%。

在所述的制备方法的某一方案中，所述的水可为纯化水。

在所述的制备方法的某一方案中，所述的助乳化剂的用量可为5 wt.%~15 wt.%（例如6 wt.%、8 wt.%或10 wt.%），又可为10 wt.%~15 wt.%。

在所述的制备方法的某一方案中，所述的助乳化剂可为化妆品领域常规的助乳化剂，本申请特别选择乙氧基二甘醇、1,2-戊二醇、辛基十二醇、丙二醇、PPG-26-丁醇聚醚-26、甘油、1,2-己二醇、辛甘醇和1,3-丁二醇中的一种或几种；例如1,2-戊二醇、丙二醇、PPG-26-丁醇聚醚-26、甘油、1,3-丁二醇和辛基十二醇中的一种或几种。

在所述的制备方法的某一方案中，所述的助乳化剂可为“乙氧基二甘醇和甘油”、“丙二醇和辛基十二醇”、“PPG-26-丁醇聚醚-26”、“1,2-己二醇”、“1,2-戊二醇和1,3-丁二醇”、“1,2-戊二醇”或“1,3-丁二醇”。

所述的助乳化剂的种类可为1种或2种。当所述的助乳化剂的种类为1种时，所述的助乳化剂为1,2-戊二醇、丙二醇或PPG-26-丁醇聚醚-26。当所述的助乳化剂的种类为2种时，所述的助乳化剂为“1,2-戊二醇和1,3-丁二醇”或“丙二醇和辛基十二醇”。

在本发明中，对助乳化剂中各成分的质量百分含量比没有限制。

在所述的制备方法的某一方案中，所述的美白组合物的组分如下述任一方案所述：

方案1：

以质量百分含量计，0.5%苯乙基间苯二酚、1%辛酸癸酸甘油三酯、1%硬脂酰乳酰乳酸钠、0.1%丁基羟基茴香醚；

5%肌肽、10%烟酰胺、30%白松露菌提取物、10%桑白皮提取物与22.4%水；

10%乙氧基二甘醇、10%甘油；

方案2：

以质量百分含量计，5%苯乙基间苯二酚、5%棕榈酸异丙酯、5%PEG-8辛酸/癸酸甘油酯类、10%三山嵛精PEG-20酯类、0.3%丁羟甲苯；

2%肌肽、20%烟酰胺、10%白松露菌提取物、0.5%桑白皮提取物与27.2%水；

5%丙二醇、10%辛基十二醇；

方案3：

以质量百分含量计，12%苯乙基间苯二酚、15%棕榈酸异丙酯、5%聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酯、10%聚氧乙烯氢化蓖麻油、5%椰油基葡糖苷、2%维生素E醋酸酯；

0.8%肌肽、6%烟酰胺、5%白松露菌提取物、10%桑白皮提取物与19.2%水；

10%PPG-26-丁醇聚醚-26；

方案4：

以质量百分含量计，10%苯乙基间苯二酚、10%椰油酸乙基己酯、5%聚甘油-6异硬脂酸酯、8%椰油基葡糖苷、0.5%丁羟甲苯；

1%肌肽、8%烟酰胺、15%白松露菌提取物、15%桑白皮提取物与17.5%水；

10%1,2-己二醇；

方案5：

以质量百分含量计，8%苯乙基间苯二酚、10%辛酸癸酸甘油三酯、6%PEG-8辛酸/癸酸甘油酯类、5%聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酯、0.2%丁羟甲苯；

1%肌肽、6%烟酰胺、10%白松露菌提取物、15%桑白皮提取物与28.8%水；

5%1,2-戊二醇、5%1,3-丁二醇；

方案6：

以质量百分含量计，6%苯乙基间苯二酚、8%棕榈酸异丙酯、10%聚甘油-6二油酸酯、5%椰油基葡糖苷、2%维生素E醋酸酯；

0.1%肌肽、5%烟酰胺、20%白松露菌提取物、20%桑白皮提取物与13.9%水；

10%1,2-戊二醇；

方案7：

以质量百分含量计，20%苯乙基间苯二酚、10%辛酸癸酸甘油三酯、10%甘油三（乙基己酸）酯、10%PEG-8辛酸/癸酸甘油酯类、10%聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酯、10%聚氧乙烯氢化蓖麻油、0.1%丁基羟基茴香醚；

0.01%肌肽、0.5%烟酰胺、1%白松露菌提取物、5%桑白皮提取物与22.39%水；

1%1,3-丁二醇；

方案8：

以质量百分含量计，8%苯乙基间苯二酚、5%葵花籽油、5%亚油酸甘油酯、5%PEG-8辛酸/癸酸甘油酯类、8%聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酯、2%维生素E醋酸酯；

2%肌肽、8%烟酰胺、15%白松露菌提取物、15%桑白皮提取物与19%水；

8%丙二醇；

方案9：

以质量百分含量计，5%苯乙基间苯二酚、2%二甲基硅油、5%中链甘油三酯、5%聚氧乙烯氢化蓖麻油、3%聚甘油-6 二硬脂酸酯、0.8%丁羟甲苯；

1.5%肌肽、9%烟酰胺、10%白松露菌提取物、20%桑白皮提取物与32.7%水；

3%1,2-戊二醇、3%1,3-丁二醇；

方案10：

以质量百分含量计，2%苯乙基间苯二酚、2%中链甘油三酯、2%PEG-8聚甘油-6 二硬脂酸酯、3%聚甘油-3二异硬脂酸酯、5%维生素E醋酸酯；

0.5%肌肽、5%烟酰胺、0.5%白松露菌提取物、30%桑白皮提取物与45%水；

5%甘油；

方案11：

以质量百分含量计，9%苯乙基间苯二酚、10%肉豆蔻酸异丙酯、10%PEG-8辛酸/癸酸甘油酯类、10%聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酯、0.3%丁羟甲苯、2%维生素E醋酸酯；

1%肌肽、12%烟酰胺、10%白松露菌提取物、10%桑白皮提取物与17.7%水；

8%1,2-戊二醇；

方案12：

以质量百分含量计，17%苯乙基间苯二酚、10%肉豆蔻酸异丙酯、8%月桂酸异戊酯、10%聚氧乙烯氢化蓖麻油、15%聚甘油-6 二硬脂酸酯、0.5%丁基羟基茴香醚；

0.6%肌肽、1.5%烟酰胺、6%白松露菌提取物、6%桑白皮提取物与20.4%水；

5%辛基十二醇；

方案13：

以质量百分含量计，15%苯乙基间苯二酚、10%肉豆蔻酸异丙酯、5%月桂酸异戊酯、5%聚甘油-6二油酸酯、10%聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酯、5%聚氧乙烯氢化蓖麻油、2%维生素E醋酸酯；

0.5%肌肽、5%烟酰胺、5%白松露菌提取物、10%桑白皮提取物与19.5%水；

8%辛甘醇；

方案14：

以质量百分含量计，10%苯乙基间苯二酚、8%辛酸癸酸甘油三酯、4%甘油三（乙基己酸）酯、11%聚氧乙烯氢化蓖麻油、6%聚甘油-6 二硬脂酸酯、0.6%丁羟甲苯；

0.05%肌肽、2%烟酰胺、12%白松露菌提取物、12%桑白皮提取物与26.35%水；

5%丙二醇、3%辛基十二醇；

方案15：

以质量百分含量计，2%苯乙基间苯二酚、3%硬脂酸乙基己酯、3%聚甘油-6二油酸酯、3%椰油基葡糖苷、2%维生素E醋酸酯；

4%肌肽、15%烟酰胺、20%白松露菌提取物、20%桑白皮提取物与22%水；

6%1,2-戊二醇；

方案16：

以质量百分含量计，8%苯乙基间苯二酚、10%肉豆蔻酸异丙酯、10%聚甘油-6 二硬脂酸酯、5%聚甘油-6二油酸酯、1%维生素E醋酸酯；

1%肌肽、7%烟酰胺、15%白松露菌提取物、15%桑白皮提取物与18%水；

5%1,2-戊二醇、5%1,3-丁二醇。

在所述的制备方法的某一方案中，所述的制备方法如下述任一方案所述：

方案1：

以质量百分含量计，0.5%苯乙基间苯二酚、1%辛酸癸酸甘油三酯、1%硬脂酰乳酰乳酸钠、0.1%丁基羟基茴香醚为油相；

5%肌肽、10%烟酰胺、30%白松露菌提取物、10%桑白皮提取物与22.4%水为水相；

将油相加入到水相中，加入10%乙氧基二甘醇、10%甘油，剪切乳化，高压均质，得到美白组合物；

方案2：

以质量百分含量计，5%苯乙基间苯二酚、5%棕榈酸异丙酯、5%PEG-8辛酸/癸酸甘油酯类、10%三山嵛精PEG-20酯类、0.3%丁羟甲苯为油相；

2%肌肽、20%烟酰胺、10%白松露菌提取物、0.5%桑白皮提取物与27.2%水为水相；

将油相加入到水相中，加入5%丙二醇、10%辛基十二醇，剪切乳化，高压均质，得到美白组合物；

方案3：

以质量百分含量计，12%苯乙基间苯二酚、15%棕榈酸异丙酯、5%聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酯、10%聚氧乙烯氢化蓖麻油、5%椰油基葡糖苷、2%维生素E醋酸酯为油相；

0.8%肌肽、6%烟酰胺、5%白松露菌提取物、10%桑白皮提取物与19.2%水为水相；

将油相加入到水相中，加入10%PPG-26-丁醇聚醚-26，剪切乳化，高压均质，得到美白组合物；

方案4：

以质量百分含量计，10%苯乙基间苯二酚、10%椰油酸乙基己酯、5%聚甘油-6异硬脂酸酯、8%椰油基葡糖苷、0.5%丁羟甲苯为油相；

1%肌肽、8%烟酰胺、15%白松露菌提取物、15%桑白皮提取物与17.5%水为水相；

将油相加入到水相中，加入10%1,2-己二醇，剪切乳化，高压均质，得到美白组合物；

方案5：

以质量百分含量计，8%苯乙基间苯二酚、10%辛酸癸酸甘油三酯、6%PEG-8辛酸/癸酸甘油酯类、5%聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酯、0.2%丁羟甲苯为油相；

1%肌肽、6%烟酰胺、10%白松露菌提取物、15%桑白皮提取物与28.8%水为水相；

将油相加入到水相中，加入5%1,2-戊二醇、5%1,3-丁二醇，剪切乳化，高压均质，得到美白组合物；

方案6：

以质量百分含量计，6%苯乙基间苯二酚、8%棕榈酸异丙酯、10%聚甘油-6二油酸酯、5%椰油基葡糖苷、2%维生素E醋酸酯为油相；

0.1%肌肽、5%烟酰胺、20%白松露菌提取物、20%桑白皮提取物与13.9%水为水相；

将油相加入到水相中，加入10%1,2-戊二醇，剪切乳化，高压均质，得到美白组合物；

方案7：

以质量百分含量计，20%苯乙基间苯二酚、10%辛酸癸酸甘油三酯、10%甘油三（乙基己酸）酯、10%PEG-8辛酸/癸酸甘油酯类、10%聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酯、10%聚氧乙烯氢化蓖麻油、0.1%丁基羟基茴香醚为油相；

0.01%肌肽、0.5%烟酰胺、1%白松露菌提取物、5%桑白皮提取物与22.39%水为水相；

将油相加入到水相中，加入1%1,3-丁二醇，剪切乳化，高压均质，得到美白组合物；

方案8：

以质量百分含量计，8%苯乙基间苯二酚、5%葵花籽油、5%亚油酸甘油酯、5%PEG-8辛酸/癸酸甘油酯类、8%聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酯、2%维生素E醋酸酯为油相；

2%肌肽、8%烟酰胺、15%白松露菌提取物、15%桑白皮提取物与19%水为水相；

将油相加入到水相中，加入8%丙二醇，剪切乳化，高压均质，得到美白组合物；

方案9：

以质量百分含量计，5%苯乙基间苯二酚、2%二甲基硅油、5%中链甘油三酯、5%聚氧乙烯氢化蓖麻油、3%聚甘油-6 二硬脂酸酯、0.8%丁羟甲苯为油相；

1.5%肌肽、9%烟酰胺、10%白松露菌提取物、20%桑白皮提取物与32.7%水为水相；

将油相加入到水相中，加入3%1,2-戊二醇、3%1,3-丁二醇，剪切乳化，高压均质，得到美白组合物；

方案10：

以质量百分含量计，2%苯乙基间苯二酚、2%中链甘油三酯、2%PEG-8聚甘油-6 二硬脂酸酯、3%聚甘油-3二异硬脂酸酯、5%维生素E醋酸酯为油相；

0.5%肌肽、5%烟酰胺、0.5%白松露菌提取物、30%桑白皮提取物与45%水为水相；

将油相加入到水相中，加入5%甘油，剪切乳化，高压均质，得到美白组合物；

方案11：

以质量百分含量计，9%苯乙基间苯二酚、10%肉豆蔻酸异丙酯、10%PEG-8辛酸/癸酸甘油酯类、10%聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酯、0.3%丁羟甲苯、2%维生素E醋酸酯为油相；

1%肌肽、12%烟酰胺、10%白松露菌提取物、10%桑白皮提取物与17.7%水为水相；

将油相加入到水相中，加入8%1,2-戊二醇，剪切乳化，高压均质，得到美白组合物；

方案12：

以质量百分含量计，17%苯乙基间苯二酚、10%肉豆蔻酸异丙酯、8%月桂酸异戊酯、10%聚氧乙烯氢化蓖麻油、15%聚甘油-6 二硬脂酸酯、0.5%丁基羟基茴香醚为油相；

0.6%肌肽、1.5%烟酰胺、6%白松露菌提取物、6%桑白皮提取物与20.4%水为水相；

将油相加入到水相中，加入5%辛基十二醇，剪切乳化，高压均质，得到美白组合物；

方案13：

以质量百分含量计，15%苯乙基间苯二酚、10%肉豆蔻酸异丙酯、5%月桂酸异戊酯、5%聚甘油-6二油酸酯、10%聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酯、5%聚氧乙烯氢化蓖麻油、2%维生素E醋酸酯为油相；

0.5%肌肽、5%烟酰胺、5%白松露菌提取物、10%桑白皮提取物与19.5%水为水相；

将油相加入到水相中，加入8%辛甘醇，剪切乳化，高压均质，得到美白组合物；

方案14：

以质量百分含量计，10%苯乙基间苯二酚、8%辛酸癸酸甘油三酯、4%甘油三（乙基己酸）酯、11%聚氧乙烯氢化蓖麻油、6%聚甘油-6 二硬脂酸酯、0.6%丁羟甲苯为油相；

0.05%肌肽、2%烟酰胺、12%白松露菌提取物、12%桑白皮提取物与26.35%水为水相；

将油相加入到水相中，加入5%丙二醇、3%辛基十二醇，剪切乳化，高压均质，得到美白组合物；

方案15：

以质量百分含量计，2%苯乙基间苯二酚、3%硬脂酸乙基己酯、3%聚甘油-6二油酸酯、3%椰油基葡糖苷、2%维生素E醋酸酯为油相；

4%肌肽、15%烟酰胺、20%白松露菌提取物、20%桑白皮提取物与22%水为水相；

将油相加入到水相中，加入6%1,2-戊二醇，剪切乳化，高压均质，得到美白组合物；

方案16：

以质量百分含量计，8%苯乙基间苯二酚、10%肉豆蔻酸异丙酯、10%聚甘油-6 二硬脂酸酯、5%聚甘油-6二油酸酯、1%维生素E醋酸酯为油相；

1%肌肽、7%烟酰胺、15%白松露菌提取物、15%桑白皮提取物与18%水为水相；

将油相加入到水相中，加入5%1,2-戊二醇、5%1,3-丁二醇，剪切乳化，高压均质，得到美白组合物。

在所述的制备方法的某一方案中，所述的剪切乳化的转速可为化妆品领域该类方法常规的转速，本申请特别选择5000 rpm ~10000 rpm，又例如6000 rpm ~9000 rpm，还例如7000 rpm ~8000 rpm。

在所述的制备方法的某一方案中，所述的剪切乳化的时间可为化妆品领域该类方法常规的时间，本申请特别选择1 min ~10 min（比如2 min、3 min、4 min、5 min、6 min、7min或8 min），又例如3 min ~8 min，还例如5 min ~7 min。

在所述的制备方法的某一方案中，所述的高压均质的压力可为化妆品领域该类方法常规的压力，本申请特别选择200 bar ~2000 bar（比如500 bar、600 bar、700 bar、800bar、900 bar、1000 bar、1100 bar、1200 bar、1300 bar或1600 bar），又例如500 bar ~1600 bar，还例如600 bar ~1200 bar。

在所述的制备方法的某一方案中，所述的高压均质的温度可为化妆品领域该类方法常规的温度，本申请特别选择40℃~70℃，又例如50℃~60℃，还例如50~55℃。

在所述的制备方法的某一方案中，所述的高压均质的次数可为化妆品领域该类方法常规的次数，本申请特别选择1次~10次（比如2次、3次、4次、5次、6次、7次、8次或9次），又例如2次~7次，又例如3次~5次。

在所述的制备方法的某一方案中，所述的高速微射流的压力可为化妆品领域该类方法常规的压力，本申请特别选择10000 psi ~15000 psi，又例如12000 psi ~14000 psi。

在所述的制备方法的某一方案中，所述的高速微射流的次数可为化妆品领域该类方法常规的次数，本申请特别选择1次~10次，又例如2次~6次。

在所述的制备方法的某一方案中，所述的美白组合物中，（分散相的）粒径可为10nm ~300 nm（例如10 nm、20 nm、25.5 nm、30 nm、43.6 nm、53.2 nm、59.4 nm、71.8 nm、84.6nm、100 nm、120.6 nm、150.2 nm、180.5 nm、200 nm、255.2 nm或300 nm），又可为20 nm ~200 nm，还可为30 nm ~100 nm。

本发明还提供了一种美白组合物，其按照上述的美白组合物的制备方法制得。

本发明还提供了一种上述的美白组合物在制备化妆品中的应用。

在所述的应用的某一方案中，所述的化妆品可为美容护肤品。

本发明还提供了一种化妆品，其包括上述的美白组合物和化妆品基质。

在所述的化妆品的某一方案中，所述美白组合物的质量百分含量可为0.5 wt.%~50 wt.%，又可为1 wt.%~10 wt.%。

在所述的化妆品的某一方案中，所述的化妆品基质可为霜剂、乳液、爽肤水、精华或喷雾

在所述的化妆品的某一方案中，所述的化妆品基质的组分可如下述任一方案所述：

方案1：

6%辛酸癸酸甘油三酯、3%十六十八醇、2%硬脂醇聚醚-2、2%硬脂醇聚醚-21、1%单硬脂酸甘油酯；

5%甘油、5%丙二醇、0.15%卡波姆和75.2%纯化水；

0.15%三乙醇胺、0.5%苯氧乙醇；

方案2：

3%甘油、3%丙二醇、3%丁二醇、0.1%卡波姆、90.3%纯化水、0.1%三乙醇胺和0.5%苯氧乙醇。

在不违背本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。

本发明所用试剂和原料均市售可得。

本发明的积极进步效果在于：

（1）应用了纳米药物靶向载体制剂技术，苯乙基间苯二酚、肌肽、烟酰胺、白松露菌提取物、桑白皮提取物五种美白活性成分共同包载，实现多靶点多机制美白活性成分的透皮共输送，能有效透过皮肤，并在皮肤中长时间滞留，缓释、控释，提高生物利用度。

（2）该组合物显著增加美白活性成分的稳定性，并且载药量高，能增加护肤品中的添加量。

（3）细胞毒性实验表明，该组合物能显著降低美白活性成分的刺激性；皮肤刺激性实验表明，该组合物安全性高，温和无刺激。

（4）该组合物水分散性好，可直接与霜剂、乳液、爽肤水、精华、喷雾等复配，使用方便。

（5）加速贮存试验结果表明，本发明提供的美白共输送纳米组合物和化妆品基质复配样品在常温、4℃、45℃、10℃紫外线辐照(光照度4000 lux)各放置2个月后，美白共输送纳米组合物外观及粒径、粒径分布PDI、包封率未发生显著性变化，说明纳米组合物稳定性良好；化妆品基质复配样品均未出现变色、分层、析出现象，说明美白共输送纳米组合物配伍性好，能与不同化妆品基质稳定复配。

（6）与专利CN201810690938.9的美白功效对比实验可以看出本发明制备的纳米组合物降低人体黑色素含量效果、抑制细胞内酪氨酸酶活性效果以及细胞抗氧化效果均优于专利CN201810690938.9制备的纳米组合物。

（7）本发明的美白功效评价试验结果表明，美白共输送纳米组合物可有效抑制细胞内酪氨酸酶活性、减少细胞黑色素含量，且效果优于游离苯乙基间苯二酚；美白共输送纳米组合物可有效抑制黑素小体转移，且效果优于游离烟酰胺；美白共输送纳米组合物有优异的抗氧化效果，且效果优于游离肌肽。

附图说明

图1为本发明实施例4美白共输送纳米组合物和游离原料经多巴染色对黑色素生成影响的结果；

图2为本发明实施例4美白共输送纳米组合物和游离原料抑制黑素小体迁移的实验结果；

图3为本发明实施例2美白共输送纳米组合物的透射电镜图。

具体实施方式

下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。

下述实施例中，白松露菌提取物为symrise公司生产的Actipone® WhiteTruffle GW，产品编号为437789。其制备方法为：将白松露菌磨碎，用水萃取并过滤。通过缩合除去水，并加入麦芽糊精。将提取物喷雾干燥以除去残留的水。提取物在甘油，水和防腐剂中制备，经过单独的熟化时间后澄清过滤。1公斤Actipone®White Truffle GW包含相当于大约65克新鲜白松露菌的亲水成分。

桑白皮提取物为symrise公司生产的Actipone® Mulberry GW，产品编号为399898。其制备方法为：将根干燥，必要时粉碎，用水和乙醇萃取，随后进行色谱和过滤。通过蒸馏浓缩滤液，从而完全除去乙醇。在甘油，水和防腐剂的混合物中制备浓缩的提取物，并在单独的熟化时间后将其澄清过滤。1公斤Actipone®Mulberry GW含有可溶于水和乙醇的、约280克干物质（或约1900克新鲜的根）。

实施例1

以质量百分含量计：

将0.5%苯乙基间苯二酚、1%辛酸癸酸甘油三酯、1%硬脂酰乳酰乳酸钠、0.1%丁基羟基茴香醚在温度为40℃水浴条件下搅拌溶解，得到油相，备用；

将5%肌肽、10%烟酰胺、30%白松露菌提取物、10%桑白皮提取物与22.4%水在温度为40℃水浴条件下搅拌溶解，得到水相，备用；

得到油相和水相后，于40℃水浴条件下将油相以2滴/秒的速度滴加至水相中，滴加过程中控制搅拌速率为600 rpm，混合完成后，加入10%乙氧基二甘醇、10%甘油，在5000 rpm条件下高速剪切乳化10 min，制成微米级分散体。

将微米级分散体在压力为1600 bar、温度为40℃的条件下进行高压均质处理，循环2次，得到美白共输送纳米组合物。

对美白共输送纳米组合物进行检测，可得该纳米组合物粒径为25.5 nm，包封率为91.3%。

实施例2

以质量百分含量计：

将5%苯乙基间苯二酚、5%棕榈酸异丙酯、5%PEG-8辛酸/癸酸甘油酯类、10%三山嵛精PEG-20酯类、0.3%丁羟甲苯在温度为50℃水浴条件下搅拌溶解，得到油相，备用；

将2%肌肽、20%烟酰胺、10%白松露菌提取物、0.5%桑白皮提取物与27.2%水在温度为50℃水浴条件下搅拌溶解，得到水相，备用；

得到油相和水相后，于50℃水浴条件下将油相以6滴/秒的速度滴加至水相中，滴加过程中控制搅拌速率为500 rpm，混合完成后，加入5%丙二醇、10%辛基十二醇，在6000 rpm条件下高速剪切乳化3 min，制成微米级分散体。

将微米级分散体在压力为1200 bar、温度为50℃的条件下进行高压均质处理，循环3次，得到美白共输送纳米组合物。

对美白共输送纳米组合物进行检测，可得该纳米组合物粒径为59.4 nm，包封率为88.4%。

实施例3

以质量百分含量计：

将12%苯乙基间苯二酚、15%棕榈酸异丙酯、5%聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酯、10%聚氧乙烯氢化蓖麻油、5%椰油基葡糖苷、2%维生素E醋酸酯在温度为55℃水浴条件下搅拌溶解，得到油相，备用；

将0.8%肌肽、6%烟酰胺、5%白松露菌提取物、10%桑白皮提取物与19.2%水在温度为55℃水浴条件下搅拌溶解，得到水相，备用；

得到油相和水相后，于55℃水浴条件下将油相以5滴/秒的速度滴加至水相中，滴加过程中控制搅拌速率为900 rpm，混合完成后，加入10%PPG-26-丁醇聚醚-26，在7000 rpm条件下高速剪切乳化6 min，制成微米级分散体。

将微米级分散体在压力为1100 bar、温度为55℃的条件下进行高压均质处理，循环3次，得到美白共输送纳米组合物。

对美白共输送纳米组合物进行检测，可得该纳米组合物粒径为84.6 nm，包封率为92.8%。

实施例4

以质量百分含量计：

将10%苯乙基间苯二酚、10%椰油酸乙基己酯、5%聚甘油-6异硬脂酸酯、8%椰油基葡糖苷、0.5%丁羟甲苯在温度为70℃水浴条件下搅拌溶解，得到油相，备用；

将1%肌肽、8%烟酰胺、15%白松露菌提取物、15%桑白皮提取物与17.5%水在温度为70℃水浴条件下搅拌溶解，得到水相，备用；

得到油相和水相后，于70℃水浴条件下将油相以1滴/秒的速度滴加至水相中，滴加过程中控制搅拌速率为1000 rpm，混合完成后，加入10%1,2-己二醇，在8000 rpm条件下高速剪切乳化5 min，制成微米级分散体。

将微米级分散体在压力为500 bar、温度为70℃的条件下进行高压均质处理，循环5次，得到美白共输送纳米组合物。

对美白共输送纳米组合物进行检测，可得该纳米组合物粒径为100.0 nm，包封率为89.6%。

实施例5

以质量百分含量计：

将8%苯乙基间苯二酚、10%辛酸癸酸甘油三酯、6%PEG-8辛酸/癸酸甘油酯类、5%聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酯、0.2%丁羟甲苯在温度为50℃水浴条件下搅拌溶解，得到油相，备用；

将1%肌肽、6%烟酰胺、10%白松露菌提取物、15%桑白皮提取物与28.8%水在温度为50℃水浴条件下搅拌溶解，得到水相，备用；

得到油相和水相后，于50℃水浴条件下将油相以3滴/秒的速度滴加至水相中，滴加过程中控制搅拌速率为700 rpm，混合完成后，加入5%1,2-戊二醇、5%1,3-丁二醇，在8000 rpm条件下高速剪切乳化6 min，制成微米级分散体。

将微米级分散体在压力为800 bar、温度为50℃的条件下进行高压均质处理，循环3次，得到美白共输送纳米组合物。

对美白共输送纳米组合物进行检测，可得该纳米组合物粒径为150.2 nm，包封率为85.9%。

实施例6

以质量百分含量计：

将6%苯乙基间苯二酚、8%棕榈酸异丙酯、10%聚甘油-6二油酸酯、5%椰油基葡糖苷、2%维生素E醋酸酯在温度为55℃水浴条件下搅拌溶解，得到油相，备用；

将0.1%肌肽、5%烟酰胺、20%白松露菌提取物、20%桑白皮提取物与13.9%水在温度为55℃水浴条件下搅拌溶解，得到水相，备用；

得到油相和水相后，于55℃水浴条件下将油相以5滴/秒的速度滴加至水相中，滴加过程中控制搅拌速率为800 rpm，混合完成后，加入10%1,2-戊二醇，在8000 rpm条件下高速剪切乳化6 min，制成微米级分散体。

将微米级分散体在压力为800 bar、温度为55℃的条件下进行高压均质处理，循环4次，得到美白共输送纳米组合物。

对美白共输送纳米组合物进行检测，可得该纳米组合物粒径为53.2 nm，包封率为93.1%。

实施例7

以质量百分含量计：

将20%苯乙基间苯二酚、10%辛酸癸酸甘油三酯、10%甘油三（乙基己酸）酯、10%PEG-8辛酸/癸酸甘油酯类、10%聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酯、10%聚氧乙烯氢化蓖麻油、0.1%丁基羟基茴香醚在温度为50℃水浴条件下搅拌溶解，得到油相，备用；

将0.01%肌肽、0.5%烟酰胺、1%白松露菌提取物、5%桑白皮提取物与22.39%水在温度为50℃水浴条件下搅拌溶解，得到水相，备用；

得到油相和水相后，于50℃水浴条件下将油相以4滴/秒的速度滴加至水相中，滴加过程中控制搅拌速率为750 rpm，混合完成后，加入1%1,3-丁二醇，在10000 rpm条件下高速剪切乳化1 min，制成微米级分散体。

将微米级分散体在压力为2000 bar、温度为50℃的条件下进行高压均质处理，循环1次，得到美白共输送纳米组合物。

对美白共输送纳米组合物进行检测，可得该纳米组合物粒径为300.0 nm，包封率为88.9%。

实施例8

以质量百分含量计：

将8%苯乙基间苯二酚、5%葵花籽油、5%亚油酸甘油酯、5%PEG-8辛酸/癸酸甘油酯类、8%聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酯、2%维生素E醋酸酯在温度为50℃水浴条件下搅拌溶解，得到油相，备用；

将2%肌肽、8%烟酰胺、15%白松露菌提取物、15%桑白皮提取物与19%水在温度为50℃水浴条件下搅拌溶解，得到水相，备用；

得到油相和水相后，于50℃水浴条件下将油相以3滴/秒的速度滴加至水相中，滴加过程中控制搅拌速率为800 rpm，混合完成后，加入8%丙二醇，在7000 rpm条件下高速剪切乳化6 min，制成微米级分散体。

对美白共输送纳米组合物进行检测，可得该纳米组合物粒径为43.6 nm，包封率为93.1%。

实施例9

以质量百分含量计：

将5%苯乙基间苯二酚、2%二甲基硅油、5%中链甘油三酯、5%聚氧乙烯氢化蓖麻油、3%聚甘油-6 二硬脂酸酯、0.8%丁羟甲苯在温度为55℃水浴条件下搅拌溶解，得到油相，备用；

将1.5%肌肽、9%烟酰胺、10%白松露菌提取物、20%桑白皮提取物与32.7%水在温度为55℃水浴条件下搅拌溶解，得到水相，备用；

得到油相和水相后，于55℃水浴条件下将油相以2滴/秒的速度滴加至水相中，滴加过程中控制搅拌速率为650 rpm，混合完成后，加入3%1,2-戊二醇、3%1,3-丁二醇，在8000 rpm条件下高速剪切乳化5 min，制成微米级分散体。

将微米级分散体在压力为1000 bar、温度为55℃的条件下进行高压均质处理，循环2次，得到美白共输送纳米组合物。

对美白共输送纳米组合物进行检测，可得该纳米组合物粒径为10.0 nm，包封率为86.9%。

实施例10

以质量百分含量计：

将2%苯乙基间苯二酚、2%中链甘油三酯、2%PEG-8聚甘油-6 二硬脂酸酯、3%聚甘油-3二异硬脂酸酯、5%维生素E醋酸酯在温度为60℃水浴条件下搅拌溶解，得到油相，备用；

将0.5%肌肽、5%烟酰胺、0.5%白松露菌提取物、30%桑白皮提取物与45%水在温度为60℃水浴条件下搅拌溶解，得到水相，备用；

得到油相和水相后，于60℃水浴条件下将油相以4滴/秒的速度滴加至水相中，滴加过程中控制搅拌速率为800 rpm，混合完成后，加入5%甘油，在7000 rpm条件下高速剪切乳化8min，制成微米级分散体。

将微米级分散体在压力为200 bar、温度为60℃的条件下进行高压均质处理，循环10次，得到美白共输送纳米组合物。

对美白共输送纳米组合物进行检测，可得该纳米组合物粒径为200.0 nm，包封率为91.6%。

实施例11

以质量百分含量计：

将9%苯乙基间苯二酚、10%肉豆蔻酸异丙酯、10%PEG-8辛酸/癸酸甘油酯类、10%聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酯、0.3%丁羟甲苯、2%维生素E醋酸酯在温度为60℃水浴条件下搅拌溶解，得到油相，备用；

将1%肌肽、12%烟酰胺、10%白松露菌提取物、10%桑白皮提取物与17.7%水在温度为60℃水浴条件下搅拌溶解，得到水相，备用；

得到油相和水相后，于60℃水浴条件下将油相以3滴/秒的速度滴加至水相中，滴加过程中控制搅拌速率为700 rpm，混合完成后，加入8%1,2-戊二醇，在6000 rpm条件下高速剪切乳化5 min，制成微米级分散体。

将微米级分散体在压力为900 bar、温度为60℃的条件下进行高压均质处理，循环4次，得到美白共输送纳米组合物。

对美白共输送纳米组合物进行检测，可得该纳米组合物粒径为71.8 nm，包封率为88.2%。

实施例12

以质量百分含量计：

将17%苯乙基间苯二酚、10%肉豆蔻酸异丙酯、8%月桂酸异戊酯、10%聚氧乙烯氢化蓖麻油、15%聚甘油-6 二硬脂酸酯、0.5%丁基羟基茴香醚在温度为60℃水浴条件下搅拌溶解，得到油相，备用；

将0.6%肌肽、1.5%烟酰胺、6%白松露菌提取物、6%桑白皮提取物与20.4%水在温度为60℃水浴条件下搅拌溶解，得到水相，备用；

得到油相和水相后，于60℃水浴条件下将油相以5滴/秒的速度滴加至水相中，滴加过程中控制搅拌速率为900 rpm，混合完成后，加入5%辛基十二醇，在7000 rpm条件下高速剪切乳化6 min，制成微米级分散体。

将微米级分散体在压力为1300 bar、温度为60℃的条件下进行高压均质处理，循环2次，得到美白共输送纳米组合物。

对美白共输送纳米组合物进行检测，可得该纳米组合物粒径为120.6 nm，包封率为87.8%。

实施例13

以质量百分含量计：

将15%苯乙基间苯二酚、10%肉豆蔻酸异丙酯、5%月桂酸异戊酯、5%聚甘油-6二油酸酯、10%聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酯、5%聚氧乙烯氢化蓖麻油、2%维生素E醋酸酯在温度为55℃水浴条件下搅拌溶解，得到油相，备用；

将0.5%肌肽、5%烟酰胺、5%白松露菌提取物、10%桑白皮提取物与19.5%水在温度为55℃水浴条件下搅拌溶解，得到水相，备用；

得到油相和水相后，于55℃水浴条件下将油相以3滴/秒的速度滴加至水相中，滴加过程中控制搅拌速率为700 rpm，混合完成后，加入8%辛甘醇，在9000 rpm条件下高速剪切乳化2 min，制成微米级分散体。

将微米级分散体在压力为600 bar、温度为55℃的条件下进行高压均质处理，循环7次，得到美白共输送纳米组合物。

对美白共输送纳米组合物进行检测，可得该纳米组合物粒径为30.0 nm，包封率为93.5%。

实施例14

以质量百分含量计：

将10%苯乙基间苯二酚、8%辛酸癸酸甘油三酯、4%甘油三（乙基己酸）酯、11%聚氧乙烯氢化蓖麻油、6%聚甘油-6 二硬脂酸酯、0.6%丁羟甲苯在温度为55℃水浴条件下搅拌溶解，得到油相，备用；

将0.05%肌肽、2%烟酰胺、12%白松露菌提取物、12%桑白皮提取物与26.35%水在温度为55℃水浴条件下搅拌溶解，得到水相，备用；

得到油相和水相后，于55℃水浴条件下将油相以4滴/秒的速度滴加至水相中，滴加过程中控制搅拌速率为800 rpm，混合完成后，加入5%丙二醇、3%辛基十二醇，在7000 rpm条件下高速剪切乳化4 min，制成微米级分散体。

将微米级分散体在压力为700 bar、温度为55℃的条件下进行高压均质处理，循环2次，得到美白共输送纳米组合物。

对美白共输送纳米组合物进行检测，可得该纳米组合物粒径为255.2 nm，包封率为92.7%。

实施例15

以质量百分含量计：

将2%苯乙基间苯二酚、3%硬脂酸乙基己酯、3%聚甘油-6二油酸酯、3%椰油基葡糖苷、2%维生素E醋酸酯在温度为60℃水浴条件下搅拌溶解，得到油相，备用；

将4%肌肽、15%烟酰胺、20%白松露菌提取物、20%桑白皮提取物与22%水在温度为60℃水浴条件下搅拌溶解，得到水相，备用；

得到油相和水相后，于60℃水浴条件下将油相以2滴/秒的速度滴加至水相中，滴加过程中控制搅拌速率为600 rpm，混合完成后，加入6%1,2-戊二醇，在7000 rpm条件下高速剪切乳化7 min，制成微米级分散体。

将微米级分散体在压力为700 bar、温度为60℃的条件下进行高压均质处理，循环3次，得到美白共输送纳米组合物。

对美白共输送纳米组合物进行检测，可得该纳米组合物粒径为20.0 nm，包封率为90.9%。

实施例16

以质量百分含量计：

将8%苯乙基间苯二酚、10%肉豆蔻酸异丙酯、10%聚甘油-6 二硬脂酸酯、5%聚甘油-6二油酸酯、1%维生素E醋酸酯在温度为50℃水浴条件下搅拌溶解，得到油相，备用；

将1%肌肽、7%烟酰胺、15%白松露菌提取物、15%桑白皮提取物与18%水在温度为50℃水浴条件下搅拌溶解，得到水相，备用；

得到油相和水相后，于50℃水浴条件下将油相以3滴/秒的速度滴加至水相中，滴加过程中控制搅拌速率为600 rpm，混合完成后，加入5%1,2-戊二醇、5%1,3-丁二醇，在6000 rpm条件下高速剪切乳化8 min，制成微米级分散体。

将微米级分散体在压力为900 bar、温度为50℃的条件下进行高压均质处理，循环3次，得到美白共输送纳米组合物。

对美白共输送纳米组合物进行检测，可得该纳米组合物粒径为180.5 nm，包封率为90.4%。

效果实施例1

将实施例1~6所制得的美白共输送纳米组合物置于密闭容器中，在常温、4℃、45℃、10℃紫外线辐照（光照度4000 lux）条件下各放置60天，检查美白组合物在贮存前后各条件下的性状，测试美白组合物在贮存前后各条件下的粒径、包封率，实验结果如表1所示。

表1 实施例1~6美白共输送纳米组合物稳定性试验结果

由表1可知，在常温、4℃、45℃、10℃紫外线辐照（光照度4000 lux）条件下各放置60天后，实施例1~6制得的美白组合物的粒径、包封率未发生显著性变化，尤其在纳米组合物载药量高的情况下仍然较稳定。同时，经观察，美白组合物也未出现变色、分层、析出现象，无活性成分泄漏。因此，本发明的美白组合物具有良好的稳定性，满足实际应用要求。

空白例1

以质量百分含量计：

空白膏霜的制备：

将6%辛酸癸酸甘油三酯、3%十六十八醇、2%硬脂醇聚醚-2、2%硬脂醇聚醚-21、1%单硬脂酸甘油酯于75 ℃水浴中加热熔融，得到油相；

将5%甘油、5%丙二醇、0.15%卡波姆和75.2%纯化水于75 ℃水浴中溶解，得到水相；

将油相滴加至水相搅拌混合，于10000 rpm转速下剪切乳化3 min，加入0.15%三乙醇胺，继续剪切2 min，冷却，加入0.5%苯氧乙醇，搅拌均匀，即得空白膏霜。

实施例17

将空白例1中的空白膏霜与实施例4制备的美白共输送纳米组合物按照质量比99:1进行复配，得到纳米组合物复合膏霜。

实施例18

将空白例1中的空白膏霜与实施例5制备的美白共输送纳米组合物按照质量比99:1进行复配，得到纳米组合物复合膏霜。

对比例1 CN201810690938.9的实施例2

将15.0％聚氧乙烯蓖麻油、2.0％聚氧乙烯氢化蓖麻油、7.0％1,2-己二醇、3.0％肉豆蔻酸异丙酯、1.0％苯乙基间苯二酚、0.5％甘草次酸、1.0％姜黄素、2.0％水杨酸于45℃水浴条件下搅拌溶解，得到油相，备用；

将6.0％烟酰胺、6.0％维生素C乙基醚、10.0％甘油和46.5％水，于45℃水浴条件下搅拌溶解，得到水相，备用；

得到油相和水相后，于45℃水浴条件下将油相以2滴/秒的速度滴加至水相中，滴加过程中控制搅拌速率为10rpm，混合完成后，在6000rpm条件下高速剪切乳化3min，制成微米级分散体；

将微米级分散体在压力为1000bar的条件下进行高压均质处理，循环2次，得到苯乙基间苯二酚的共输送纳米组合物。

对苯乙基间苯二酚的共输送纳米组合物的粒径进行检测，可得该苯乙基间苯二酚的共输送纳米组合物粒径为25.1nm。

对比例2 CN201810690938.9的实施例3

将8.0％聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酯、3.0％聚氧乙烯氢化蓖麻油、2.0％鲸蜡硬脂醇聚醚、5.0％丁醇聚醚-26、5.0％1,2-戊二醇、10.0％二乙二醇单乙基醚、1.0％聚乙二醇月桂酸甘油酯、3.0％亚油酸甘油酯、1.0％丙二醇单辛酸酯、1.0％癸二酸二乙酯、1.0％苯乙基间苯二酚、2.0％辛酰水杨酸、1％红没药醇和1.0％姜黄素，于45℃水浴条件下搅拌溶解，得到油相，备用；

将1.0％烟酰胺、6.0％维生素C乙基醚，15.0％甘油和34％的水，于45℃水浴条件下搅拌溶解，得到水相，备用；

得到油相和水相后，于45℃水浴条件下将油相以3滴/秒的速度滴加至水相中，滴加过程中控制搅拌速率为20rpm，混合完成后，在4000rpm条件下高速剪切乳化10min，制成微米级分散体；

将微米级分散体在压力为300bar的条件下进行高压均质处理，循环10次，得到苯乙基间苯二酚的共输送纳米组合物。

对苯乙基间苯二酚的共输送纳米组合物的粒径进行检测，可得该苯乙基间苯二酚的共输送纳米组合物粒径为242.2nm。

对比例3

将空白例1中的空白膏霜与对比例1制备的苯乙基间苯二酚共输送纳米组合物按照质量比9:1进行复配，得到纳米组合物复合膏霜。

对比例4

将空白例1中的空白膏霜与对比例2制备的苯乙基间苯二酚共输送纳米组合物按照质量比9:1进行复配，得到纳米组合物复合膏霜。

空白例2

以质量百分含量计：

空白精华的制备：将3%甘油、3%丙二醇、3%丁二醇、0.1%卡波姆和90.3%纯化水于75 ℃水浴中溶解，降温至45℃，加入0.1%三乙醇胺、0.5%苯氧乙醇，搅拌均匀，即得空白精华。

实施例19

将空白例2中的空白精华与实施例4制备的美白共输送纳米组合物按照质量比9:1进行复配，得到纳米组合物复合精华。

此纳米组合物复合精华中活性物含量分别为1%苯乙基间苯二酚、0.1%肌肽、0.8%烟酰胺、1.5%白松露菌提取物、1.5%桑白皮提取物。

对比例5

以质量百分含量计：

游离原料精华的制备：将1%苯乙基间苯二酚、0.1%肌肽、0.8%烟酰胺、1.5%白松露菌提取物、1.5%桑白皮提取物、3%甘油、3%丙二醇、3%丁二醇、0.1%卡波姆和85.4%纯化水于75 ℃水浴中溶解，降温至45℃，加入0.1%三乙醇胺、0.5%苯氧乙醇，搅拌均匀，即得游离原料精华。

游离原料精华中活性物含量与实施例19中纳米组合物复合精华活性物含量相同。

对比例6

将实施例4中的美白活性成分去掉，制备相应的空白纳米组合物，制备方法如下：

以质量百分含量计：

将10%椰油酸乙基己酯、5%聚甘油-6异硬脂酸酯、8%椰油基葡糖苷、0.5%丁羟甲苯在温度为70℃水浴条件下搅拌溶解，得到油相，备用；

将66.5%水在温度为70℃水浴条件下加热，得到水相，备用；

得到油相和水相后，于70℃水浴条件下将油相以1滴/秒的速度滴加至水相中，滴加过程中控制搅拌速率为1000 rpm，混合完成后，加入10% 1,2-己二醇，在8000 rpm条件下高速剪切乳化5 min，制成微米级分散体。

将微米级分散体在压力为500 bar、温度为70℃的条件下进行高压均质处理，循环5次，得到空白纳米组合物。

效果实施例2

将实施例1~6所制得的美白共输送纳米组合物，分别与空白例1中的空白膏霜和空白例2中的空白精华按照质量比1:9进行复配，复配膏霜和精华置于密闭容器中，在常温、4℃、45℃、10℃紫外线辐照（光照度4000 lux）条件下各放置60天，检查复配膏霜和精华在贮存前后各条件下的性状，实验结果如表2所示。

表2 美白共输送纳米组合物复合膏霜及复合精华稳定性试验结果

注释：“稳定”是指未出现变色、分层、析出现象。

由表2可知，在常温、4℃、45℃、10℃紫外线辐照（光照度4000 lux）条件下各放置60天后，复配膏霜和精华均无变色、分层、析出现象，无活性成分泄漏，尤其在美白活性成分浓度高的情况下仍然较稳定。因此，本发明的美白组合物配伍性好，能与不同化妆品基质稳定复配，满足实际应用要求。

效果实施例3

将实施例1~6所制得的美白共输送纳米组合物样品，分别与空白例1中的空白膏霜按照质量比3:7进行复配，进行皮肤刺激性试验：

取健康家兔56只，体重(2.0±0.2) kg，随机分为7组，每组动物8只，于实验前24 h将家兔背部皮肤两侧去毛，去毛后24 h检查去毛皮肤是否受伤，受伤皮肤不宜做皮肤刺激性试验。每天涂抹使用实施例1~6所制得的美白共输送纳米组合物复配的复合膏霜3次，连续涂抹7天，同时涂抹空白膏霜（不给予任何药物）进行对照，观察试验结果，将试验结果列于表3中。

表3 美白共输送纳米组合物复合膏霜及空白组皮肤刺激性实验观察结果

注：“+”家兔皮肤充血、红肿；“+ +”表示充血、红肿现象仍在，但有增加趋势；“—”表示无充血、红肿现象。

根据表3中的实验结果可以看出，使用实施例1~6的美白共输送纳米组合物复配的复合膏霜及空白膏霜涂抹于家兔皮肤后均无充血、红肿现象，美白共输送纳米组合物含量高达30%仍安全无刺激，说明本发明提供的美白共输送纳米组合物对皮肤没有刺激性。

效果实施例4

专利CN201810690938.9人体黑色素含量测试结果显示多种美白功效成分复配使用比单一功效成分美白效果更加显著，并且其实施例18、19（由专利CN201810690938.9中实施例2、3的纳米组合物与膏霜的复配样品）抑制黑色素生成效果最好。

本发明与专利CN201810690938.9实施例2、3纳米组合物对黑色素含量影响试验如下：

取实施例17、实施例18、对比例3（即含CN201810690938.9实施例2纳米组合物的膏霜）、对比例4（即含CN201810690938.9实施例3纳米组合物的膏霜）中的纳米组合物复合膏霜作为对比样品，空白例1制备的空白膏霜作为空白组，进行皮肤黑色素含量测试，测试仪器为德国CK公司生产的皮肤黑色素和血红素测试仪Mexameter MX18。

选取30名皮肤健康、无化妆品过敏史的志愿者作为受试者，选择受试者左、右手臂内侧距手掌基部5 cm处为试验部位，试验面积为5×5 cm²。试验前，受试者清洁双手前臂内侧，测试受试者试验区域的起始值。然后在8周内每天早晚在同一测试区域内涂抹相应等量的空白例1、实施例17、实施例18、对比例3、对比例4的空白膏霜和纳米组合物复合膏霜，在第7天、14天、21天、28天、60天测试皮肤中黑色素含量，计算平均值，将试验结果列于表4中。

表4 皮肤黑色素含量测试结果（P＜0.05）

注：仪器的测量范围是0～999，测量数值越高，说明皮肤中黑素的含量越高。

根据表4实验结果可以看出，空白组的膏霜对黑色素含量几乎无影响，实施例17、实施例18为含本发明实施例4、实施例5制备的纳米组合物的复合膏霜，对黑色素抑制作用显著，8周后皮肤黑色素含量明显降低，并且抑制黑色素生成作用明显强于对比例3、对比例4（含专利CN201810690938.9实施例2、3制备的纳米组合物的复合膏霜），说明本专利的美白共输送纳米组合物降低黑色素含量效果及美白效果优于专利CN201810690938.9。

效果实施例5

专利CN201810690938.9酪氨酸酶活性抑制实验结果显示实施例2、3制备的苯乙基间苯二酚共输送纳米组合物能很好的抑制酪氨酸酶的活性。

本发明实施例4、5制得的纳米组合物与专利CN201810690938.9实施例2、3纳米组合物（即本发明对比例1、2）对酪氨酸酶活性抑制试验如下：

测试样品：以本发明实施例4、5纳米组合物和对比例1、2为例，用培养基稀释至苯乙基间苯二酚终浓度为10mg/L加入到细胞中。

实验方法：采用L-Dopa氧化法测定细胞内酪氨酸酶的活性。取B16F10细胞以1×10⁵个/mL接种于12孔板中，每孔1 mL，培养24 h。每孔加入100 nM α-MSH进行诱导（除空白对照组），构建α-MSH诱导的黑色素高表达模型，再加入上述测试样品，每组设3个复孔。培养48 h后，弃去上清液，用PBS清洗3次，每孔加入含1% TritonX-100的PBS缓冲液300 μL，置于-80℃冰箱中冷冻1 h，随后室温融化，将细胞裂解液在12000 rpm离心20 min，收集上清液。取上清液60 μL于96孔板中，加入140 μL的0.1% L-Dopa，37℃孵育1 h，于490 nm波长处测各孔的吸光度（A），计算相对酪氨酸酶活性，实验结果如表5所示。

表5 相对酪氨酸酶活性

注：与对比例1比较，*p＜0.05；与对比例2比较，^# p＜0.05

根据实验结果表5可以看出，与模型组比较，本发明实施例4、5纳米组合物和对比例1、2的纳米组合物均能显著抑制酪氨酸酶的活性；与对比例1、2的纳米组合物比较，本发明实施例4、5纳米组合物抑制酪氨酸酶活性具有显著性差异（P＜0.05），说明本专利的美白共输送纳米组合物抑制B16F10细胞内酪氨酸酶活性的效果优于专利CN201810690938.9。

效果实施例6

专利CN201810690938.9抗氧化性实验结果显示，实施例3制备的苯乙基间苯二酚共输送纳米组合物具有显著的抗氧化能力。

本发明实施例4、5纳米组合物与专利CN201810690938.9实施例3（即本发明对比例2）纳米组合物抗氧化性实验如下：

测试样品：以本发明实施例4、5纳米组合物和对比例2纳米组合物为例，用培养基稀释至苯乙基间苯二酚终浓度为10mg/L加入到细胞中。

实验方法：将HaCaT细胞以2×10⁵个/mL的密度接种到96孔细胞培养板内，每孔100μL，培养24 h。实验分为空白对照组、模型组、实验组，除了空白对照组外每孔加入终浓度为1.0 mmol/L的H₂O₂，继续培养24 h后测定各孔的吸光度（A），计算细胞存活率，实验结果如表6所示。

表6 HaCaT细胞存活率（%）

注：与对比例2比较，*p＜0.05

根据实验结果表6可以看出，与氧化损伤的模型组比较，本发明实施例4、5纳米组合物和对比例2的纳米组合物均能显著增加细胞的存活率；与对比例2的纳米组合物比较，本发明实施例4、5纳米组合物对细胞存活率的增加具有显著性差异（P＜0.05），说明本专利的美白共输送纳米组合物抗氧化效果优于专利CN201810690938.9。

效果实施例7

本发明实施例4、5与对比例1、2的抗炎试验如下。

测试样品：以本发明实施例4、5纳米组合物和对比例1、2的纳米组合物为例，用培养基稀释至苯乙基间苯二酚终浓度为10mg/L加入到细胞中。

实验方法：取HaCaT细胞以5×10⁴个/mL接种于24孔板中，每孔0.5 mL，培养24 h。实验分为空白对照组、模型组、实验组，除空白对照组外，每孔加入2 mg/L LPS制备细胞炎症模型，再加入上述测试样品，每组设3个复孔。培养48 h后，细胞培养上清液，采用Elisa试剂盒测定TNF-α和IL-1β，结果如表7和表8所示。

表7 TNF-α含量

注：与对比例2比较，*p＜0.05

表8 IL-1β含量

注：与对比例2比较，*p＜0.05

根据实验结果表7和表8可以看出，与模型组比较，本发明实施例4、5纳米组合物和对比例1、2的纳米组合物均能显著抑制细胞炎症；与对比例1、2的纳米组合物比较，本发明实施例5纳米组合物抑制炎症因子TNF-α和IL-1β具有显著性差异（P＜0.05），实施例4降低TNF-α具有显著性差异（P＜0.05），说明本专利的美白共输送纳米组合物抗炎效果优于专利CN201810690938.9。

效果实施例8

本发明中白松露菌提取物和桑白皮提取物可协同增加皮肤美白效果，体外酪氨酸酶抑制能力和抗氧能力的检测如下。

测试样品：苯乙基间苯二酚、烟酰胺和肌肽质量比例为0.5%、0.5%和0.01%，白松露菌提取物和桑白皮提取物的质量比例见表9，添加PBS至100%，用PBS稀释500倍作为最终样品进行测试。

酪氨酸酶抑制能力检测：将100 μL不同浓度样品溶液和50 μL的200 U/mL酪氨酸酶依次加入到96孔板中，37 ℃孵育10 min，之后加入50 μL 的质量分数0.05% L - 酪氨酸，混匀，在37 ℃温育30 min，在490 nm处测量其吸光度。以样品溶剂作为空白对照。

酪氨酸酶抑制率（%）=（A空白对照-A样品）/ A空白对照×100%

DPPH自由基清除能力检测：将0.25 mM DPPH 溶液100 μL和不同浓度样品溶液100 μL依次加入到96孔板中，暗处静置30 min，490 nm处测定其吸光度，以样品溶剂作为空白对照。

自由基清除率（%）=（A空白对照-A样品）/ A空白对照×100%

表9 白松露菌提取物和桑白皮提取物协同美白作用的体外测试结果

根据实验结果表9可以看出，白松露菌提取物和桑白皮提取物同时添加可协同增效，与添加5%或10%单一提取配方相比，添加5%白松露菌提取物和5%桑白皮提取物配方的酪氨酸酶抑制率和自由基清除率均增加，说明本专利美白共输送纳米组合物中添加的白松露菌提取物和桑白皮提取物可协同增加皮肤美白效果。

效果实施例9

透皮吸收实验

以体重为160~220 g 雄性SD大鼠腹部皮肤为透皮试验的障碍层进行透皮试验。将完整无破损的皮肤固定于接收池和供给池之间(皮肤内层面向接收池)；扩散池参数为：有效扩散面积3.14 cm²，接收池容积约7.0 mL，磁力搅拌速度600 rpm；在接收池内充满释放介质，排除气泡，开启搅拌，并恒温至(37.0 ± 0.5)℃，向皮肤表面分别均匀涂布实施例19中纳米组合物精华和对比例5中的游离原料精华各约1 g，于1 h、2 h、4 h、6 h、8 h、10 h、24 h吸取接收液0.5 mL，并补充释放介质0.5 mL，接收液使用0.22 μm有机滤膜过滤，使用高效液相色谱测定经过滤的接收液中活性成分苯乙基间苯二酚、烟酰胺和肌肽的浓度，计算苯乙基间苯二酚、烟酰胺和肌肽的累积透过量，实验结果如表10所示。按以下公式计算单位面积累积透过量：

其中：Q_s为累积透过量；S为有效扩散面积；V为接收池中生理盐水体积；Ci为第1次至上次取样时接收液中活性成分的浓度；Vi为每次取样的量；Cn为该次取样时接收液中活性成分的浓度。

表10 皮肤累积透过量

根据实验结果表10可以看出，对比例5中单位面积苯乙基间苯二酚、烟酰胺及肌肽的皮肤累积透过量分别为32.03 μg/cm²、85.98 μg/cm²、29.27 μg/cm²，实施例19中单位面积苯乙基间苯二酚的皮肤累积透过量分别为61.35 μg/cm²、152.21 μg/cm²、39.43 μg/cm²。由实验结果可见，24 h时美白共输送纳米组合物复合精华中苯乙基间苯二酚、烟酰胺及肌肽的皮肤累积透过量大于游离原料精华中的皮肤累积透过量，其累积透过量分别增加了91.54%、77.03%、34.11%。说明美白共输送纳米组合物具有良好的皮肤透过性。

透皮实验结束后，取下鼠皮，轻轻刮去皮肤表面的实验样品，用生理盐水彻底清洗皮肤后用滤纸吸干皮肤表面水分，用剪刀将皮肤剪成小块，用研钵充分研磨皮肤至乳糜状，加入1 mL乙醇萃取活性成分，全部转移至离心管，再用9 mL乙醇溶液清洗研钵数次，全部转移至离心管，5000 r/min 离心15 min，取上清液经过0.45μm的滤器过滤，HPLC法测定苯乙基间苯二酚、烟酰胺和肌肽含量，即为苯乙基间苯二酚、烟酰胺和肌肽的皮肤累积滞留量，实验结果如表11所示。按以下公式计算单位面积累积滞留量：

Q_z = C_zV_z/ S

其中：Q_z为单位面积累积滞留量；C_z为鼠皮中活性成分的浓度；V_z为研磨中加入乙醇体积；S为有效扩散面积。

表11 皮肤滞留量

根据实验结果表11可以看出，对比例5中单位面积苯乙基间苯二酚、烟酰胺和肌肽的皮肤滞留量分别为8.91μg/cm²、12.20 μg/cm²、11.52 μg/cm²；实施例19中单位面积苯乙基间苯二酚、烟酰胺和肌肽的皮肤滞留量分别为21.31μg/cm²、19.85 μg/cm²、18.48 μg/cm²；由实验结果可见，24 h时美白共输送纳米组合物复合精华中苯乙基间苯二酚、烟酰胺及肌肽的皮肤滞留量大于游离原料精华中的皮肤滞留量，分别增加了139.17%、62.70%、60.42%。说明活性成分经纳米包裹后能增加其皮肤滞留能力，具有缓释控释的功能，该特性可以使其在化妆品应用中达到稳定的活性物缓释效果，同时还可以延长活性成分的功效作用时间。

效果实施例10

细胞毒性实验

测试样品：将实施例4所得美白共输送纳米组合物用培养基稀释100、200、400、800、1600倍，得到的稀释液中苯乙基间苯二酚的浓度分别为100、50、25、12.5、6.25 mg/L，烟酰胺浓度分别为80、40、20、10、5 mg/L；游离原料组同时用培养基溶解稀释相应的游离苯乙基间苯二酚和烟酰胺，使游离原料组与美白共输送纳米组合物组中苯乙基间苯二酚和烟酰胺浓度相同，加入到细胞中。

收集对数生长期的人角质形成细胞（HaCaT）和人成纤维细胞（HSF），HaCaT细胞以1×10⁵个/mL、HSF细胞以5×10⁴个/mL的密度接种于96孔板中，每孔100 μL，于5%CO₂、37℃条件下培养24 h。待细胞贴壁后，空白对照组加培养基，实验组分别加入100 μL不同浓度的测试样品，继续培养24 h，每孔加入10 μL CCK-8溶液，孵育2 h后于450 nm处测量各孔的吸光度（A）。计算细胞存活率，实验结果如表12和表13所示。

细胞存活率（%）= (A样品-A空白) / (A正常对照-A空白)×100%

表12 HaCaT细胞存活率

表13 HSF细胞存活率

根据实验结果表12和表13可以看出，HaCaT细胞在苯乙基间苯二酚浓度为100 mg/L时存活率仅为19.67 ± 1.93%，而将其制备成美白共输送纳米组合物后，细胞存活率提高到70.44 ± 3.66%；HSF细胞在苯乙基间苯二酚浓度为100 mg/L时存活率仅为26.18 ±1.31%，而将其制备成美白共输送纳米组合物后，细胞存活率提高到64.35 ± 3.28%；在其他实验浓度下，美白共输送纳米组合物和游离原料对HSF细胞的毒性没有明显差异。该结果表明，美白共输送纳米组合物可减少游离原料对人角质形成细胞和人皮肤成纤维细胞的毒性。

效果实施例11

酪氨酸酶活性抑制实验

测试样品：将实施例4所得美白共输送纳米组合物用培养基稀释400倍，得到的稀释液中各活性物浓度为：25 mg/L苯乙基间苯二酚、2.5 mg/L肌肽、20 mg/L烟酰胺、37.5 mg/L白松露菌提取物、37.5 mg/L桑白皮提取物；游离原料组用培养基溶解稀释相应的游离活性成分，使游离原料组与美白共输送纳米组合物组中活性物浓度相同；同时将对比例6所得空白纳米组合物用培养基稀释400倍加入到细胞中。

取B16F10细胞以1×10⁵个/mL接种于12孔板中，每孔1 mL，培养24 h。每孔加入100nM α-MSH进行诱导（除正常对照组），构建α-MSH诱导的黑色素高表达模型，再加入测试样品，每组设3个复孔。培养48 h后，弃去上清液，用PBS清洗3次，每孔加入含1% TritonX-100的PBS缓冲液300 μL，置于-80℃冰箱中冷冻1 h，随后室温融化，将细胞裂解液在12000 rpm离心20 min，收集上清液。取上清液60 μL于96孔板中，加入140 μL的0.1% L-Dopa，37℃孵育1 h，于490 nm波长处测各孔的吸光度（A）。计算相对酪氨酸酶活性，实验结果如表14所示。

相对酪氨酸酶活性（%）=（A样品 / A模型）×100%

表14 相对酪氨酸酶活性

注：与游离原料组比较，**p＜0.01

根据实验结果表14可以看出，苯乙基间苯二酚浓度为25 mg/L时，与模型组比较，游离原料和美白共输送纳米组合物均能显著抑制酪氨酸酶的活性；与游离原料组比较，美白共输送纳米组合物对细胞酪氨酸酶活性的抑制具有极显著性（P＜0.01）。说明美白共输送纳米组合物抑制B16F10细胞内酪氨酸酶活性的效果优于游离原料。

效果实施例12

细胞内黑色含量抑制实验

测试样品：同效果实施例11。

采用NaOH裂解法测定细胞内黑色的含量。取B16F10细胞以1×10⁵个/mL密度接种于6孔板中，每孔2 mL，培养24 h。每孔加入100 nM α-MSH进行诱导（除正常对照组），构建α-MSH诱导的黑色素高表达模型，再加入测试样品，每组设3个复孔。培养48 h后，弃去上清液，用PBS清洗3次后，每孔加入1.0 mmol/L的NaOH溶液（含10%DMSO）300 μL，在80 ℃充分裂解细胞1 h，于405 nm波长处测各孔吸光度（A）。计算相对黑素含量，实验结果见表15所示。

相对黑素含量（%）= (A样品 / A模型)×100%

表15 相对黑素含量

注：与游离原料组比较，*p＜0.05

根据实验结果表15可以看出，模型组加入100 nM α-MSH后黑素含量明显增加，加入游离原料和美白共输送纳米组合物后，黑素含量显著下降；与游离原料比较，美白共输送纳米组合物对B16F10细胞黑素含量的降低具有显著性差异（P＜0.05），说明美白共输送纳米组合物降低B16F10细胞黑素含量的效果优于游离原料。

效果实施例13

抑制黑色素生成实验

测试样品：同效果实施例11。

采用多巴染色法观察黑色素生成情况。取B16F10细胞以1×10⁵个/mL密度接种于6孔板中，每孔2 mL，培养24 h。每孔加入100 nM α-MSH进行诱导（除正常对照组），构建α-MSH诱导的黑色素高表达模型，再加入测试样品，每组设3个复孔。48 h后倾去培养液，用PBS缓冲液洗涤2次，采用L-多巴染色：①用4%多聚甲醛PBS溶液固定细胞1 h；②用去离子水冲洗3次后；③加入0.1%多巴溶液染色3.5 h；④用PBS和去离子水各冲洗一次，用倒置显微镜拍照，实验结果见图1所示。

根据实验结果图1可以看出，模型组和空白纳米组合物组的B16F10细胞经多巴染色后较黑，游离原料组染色后细胞黑色变浅。添加美白共输送纳米组合物后，B16F10细胞颜色明显较游离原料浅，说明美白共输送纳米组合物能减少B16F10细胞产生黑色素，从而达到美白的效果。

效果实施例14

抑制黑素小体转运实验

测试样品：同效果实施例11。

取对数生长期的B16F10细胞，调整细胞浓度为1×10⁶个/mL，弃去培养基，以PBS洗涤3次，弃PBS，加入2 μmol/L的CFDA-SE溶液1mL，置于37℃培养箱中孵育20 min，用PBS洗涤3次，去除细胞表面的CFDA-SE。另取对数生长期的HaCaT细胞，调整细胞浓度为1×10⁶个/mL。将已经被CFDA-SE荧光标记的黑素瘤细胞与角质细胞按照1:2浓度混合接种至6孔板中，至5%CO₂、37℃培养箱中培养24 h后加入测试样品，于培养的第3天在荧光显微镜下观察各组荧光情况。实验结果见图2所示。图2中，M为B16F10细胞，K为HaCaT细胞。

根据实验结果图2可以看出，光镜下发现各组的B16F10细胞及HaCaT细胞均存活良好。荧光显微镜下发现模型组和空白组合物组的B16F10细胞向周围HaCaT细胞输送呈绿色荧光的黑素小体，故HaCaT细胞的荧光强度逐渐增强；美白共输送纳米组合物组的B16F10细胞荧光强度较游离原料强，而HaCaT细胞几乎无荧光，说明B16F10细胞产生的黑色素向HaCaT细胞转运较少，抑制黑素小体转运的效果更明显。

效果实施例15

细胞抗氧化性实验

测试样品：同效果实施例11。

将HaCaT细胞以2×10⁵个/mL的密度接种到96孔细胞培养板内，每孔100 μL，培养24 h。实验分为正常对照组、模型组、空白组合物组、游离原料组和美白共输送纳米组合物组，除了正常对照组外每孔加入终浓度为1.0 mmol/L的H₂O₂，继续培养24 h后测定细胞存活率。实验结果见表16所示。

表16 细胞存活率

注：与游离原料组比较，**p＜0.01

根据实验结果表16可以看出，HaCaT细胞经1.0 mmol/L的H₂O₂处理后，细胞存活率降低到35.12 ± 1.86%，加入游离原料组作用后细胞存活率增加到48.26 ± 2.82%；与游离原料组比较，美白共输送纳米组合物作用后细胞存活率增加到66.18 ± 3.51%，且具有显著性差异（P＜0.05），说明美白共输送纳米组合物抗氧化效果优于游离原料。

效果实施例16

流式细胞仪检测细胞摄取实验

将实施例4中的美白共输送纳米组合物用FITC荧光染料标记，稀释400倍后将其与B16F10细胞共孵育，同时将游离FITC配制为相同的浓度与B16F10细胞共孵育，再借助流式细胞术观测B16F10细胞对样品的摄取量，荧光强度越大表明摄取量越多，亦表明该样品更容易被皮肤细胞吸收，从而发挥更好的美白和抗氧化功效。

具体实施方法如下：

将B16F10细胞用胰酶消化后，以2×10⁵个/孔的细胞密度接种于6孔板中，贴壁培养24h。将培养液弃去，然后加入包裹荧光染料的本发明美白共输送纳米组合物的无血清培养液继续培养l h，2h，4 h。实验结束后将纳米组合物溶液弃去，冷的PBS洗涤细胞三次，用胰酶消化，然后用含血清的培养液吹散细胞，收集细胞后以1000 r/min低温离心。弃去上清液，然后用PBS洗涤，再离心，如此洗涤、离心三次以除去细胞表面吸附的纳米组合物。最后用0.3 mL的PBS悬浮细胞，进行流式细胞术的测定。收集10000个细胞测定其荧光强度，以X-mean值来比较不同组之间的细胞摄取差别，实验结果见表17。

表17 平均荧光强度

注：与游离FITC组比较，**p＜0.01

根据实验结果表17可以看出，流式细胞仪测得游离FITC和包载FITC美白共输送纳米组合物的细胞内荧光强度，荧光细胞所占比例随着摄取时间的增加而增加，且美白共输送纳米组合物的荧光强度显著强于游离的荧光强度（P＜0.01），说明B16F10细胞对本发明美白共输送纳米组合物的摄取明显高于游离药物的摄取吸收。

效果实施例17

测试助乳化剂添加顺序工艺对纳米组合物包封率影响。

测试样品1：将5% 苯乙基间苯二酚、20% PEG-8辛酸/癸酸甘油酯类和5%辛酸癸酸甘油三酯、5%甘油三（乙基己酸）酯在温度为40℃水浴条件下搅拌溶解，得到油相；于40℃水浴条件下将油相以2滴/秒的速度滴加至55%水中，滴加过程中控制搅拌速率为600 rpm，混合完成后，加入5%丙二醇和5%辛基十二醇，在5000 rpm条件下高速剪切乳化10 min，制成微米级分散体。再在压力为800 bar、温度为40℃的条件下进行高压均质处理，循环2次，得到美白组合物1。

对比样品1：将5%苯乙基间苯二酚、20% PEG-8辛酸/癸酸甘油酯类和5%辛酸癸酸甘油三酯、5%甘油三（乙基己酸）酯在温度为40℃水浴条件下搅拌溶解，得到油相；将55%水、5%丙二醇和5%辛基十二醇于40℃水浴条件下搅拌溶解，得到水相；得到油相和水相后，于40℃水浴条件下将油相以2滴/秒的速度滴加至水相中，滴加过程中控制搅拌速率为600 rpm，混合完成后，在5000 rpm条件下高速剪切乳化10 min，制成微米级分散体。再在压力为800bar、温度为40℃的条件下进行高压均质处理，循环2次，得到美白组合物2。

对比样品2：

以质量百分含量计，将10%苯乙基间苯二酚、10%椰油酸乙基己酯、5%聚甘油-6异硬脂酸酯、8%椰油基葡糖苷、0.5%丁羟甲苯在温度为70℃水浴条件下搅拌溶解，得到油相，备用；

将1%肌肽、8%烟酰胺、15%白松露菌提取物、15%桑白皮提取物、10% 1,2-己二醇与17.5%水在温度为70℃水浴条件下搅拌溶解，得到水相，备用；

得到油相和水相后，于70℃水浴条件下将油相以1滴/秒的速度滴加至水相中，滴加过程中控制搅拌速率为1000 rpm，混合完成后，在8000 rpm条件下高速剪切乳化5 min，制成微米级分散体。

将微米级分散体在压力为500 bar、温度为70℃的条件下进行高压均质处理，循环5次，得到美白组合物3。

对美白组合物进行粒径、包封率检测。

表18 助乳化剂添加顺序对美白组合物包封率的影响

根据表18可得：本发明中助乳化剂在水油相混合步骤后加入所制得的美白组合物1包封率高于按照现有技术（CN201810690938.9）制得的美白组合物2，粒径差别不大。说明助乳化剂添加顺序对美白组合物包封率有显著影响，可能是因为后加助乳化剂能使美白组合物具有更优越的柔顺性和变形能力，使得美白组合物的双分子层膜弯曲度更大，包封率更高。

效果实施例18

测试纳米组合物微观结构。

将实施例2制得的美白共输送纳米组合物用超纯水稀释300倍，超声分散20 min，取1滴滴于铜网上，用1%的磷钨酸溶液染色，室温下晾干，于TEM下观察其微观形貌。经拍摄得到的电镜图如图3所示：该工艺制备的美白共输送纳米组合物粒径在60nm左右，粒径大小与激光粒度仪测得的结果相近，呈椭圆或圆球形，大小均一。

综上所述，本发明提供的美白共输送纳米组合物稳定性好、皮肤滞留性高、美白、抗氧化和抗炎效果显著，用于化妆品时更容易被皮肤细胞吸收。

本发明制得的具有美白功能的纳米载体，可直接用于膏霜、乳液、精华等化妆品的开发。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围。

Claims

1.一种美白组合物的制备方法，其特征在于，其包括下述步骤：

（1）将油相加入到水相中，得到混合物A；

2.如权利要求1所述的美白组合物的制备方法，其特征在于，所述的油相为澄清溶液；

和/或，所述的油相的温度为40℃~70℃；

和/或，所述的油相的制备过程中伴随搅拌；

和/或，所述的水相为澄清溶液；

和/或，所述的水相的温度为40℃~70℃；

和/或，所述的水相的制备过程中伴随搅拌；

和/或，所述的油相的温度与所述的水相的温度相同；

和/或，所述的步骤（1）里，所述的加入的速度为1、2、3、4、5或6滴/秒；

和/或，所述的油相加入到所述的水相时的温度为40℃~70℃；

和/或，所述的油相加入到所述的水相时伴随搅拌；

和/或，所述的苯乙基间苯二酚的用量为2 wt.%~17 wt.%；

和/或，所述的油脂的用量为2 wt.%~18 wt.%；

和/或，所述的油脂为辛酸癸酸甘油三酯、中链甘油三酯、棕榈酸异丙酯、肉豆蔻酸异丙酯、甘油三（乙基己酸）酯、椰油酸乙基己酯、硬脂酸乙基己酯、月桂酸异戊酯、葵花籽油、二甲基硅油和亚油酸甘油酯中的一种或几种；

和/或，所述的乳化剂的用量为5 wt.%~25 wt.%；

和/或，所述的乳化剂为PEG-8辛酸/癸酸甘油酯类、硬脂酰乳酰乳酸钠、三山嵛精 PEG-20 酯类、聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酯、聚氧乙烯氢化蓖麻油、聚甘油-6 二硬脂酸酯、聚甘油-3二异硬脂酸酯、聚甘油-6异硬脂酸酯、聚甘油-6二油酸酯和椰油基葡糖苷中的一种或几种；

和/或，所述的稳定剂的用量为0.2 wt.%~2.3 wt.%；

和/或，所述的稳定剂为丁羟甲苯、维生素E醋酸酯和丁基羟基茴香醚中的一种或几种；

和/或，所述的肌肽的用量为0.05 wt.%~4 wt.%；

和/或，所述的烟酰胺的用量为1.5 wt.%~15 wt.%；

和/或，所述的白松露菌提取物的提取方法为：用水提取白松露菌，浓缩，加入麦芽糊精，喷雾干燥，之后在甘油，水和防腐剂中熟化后过滤；

和/或，所述的白松露菌提取物的用量为1 wt.%~20 wt.%；

和/或，所述的桑白皮提取物的提取方法为：用水和乙醇提取桑白皮，色谱柱层析和过滤，浓缩，之后在甘油，水和防腐剂中熟化后过滤；

和/或，所述的桑白皮提取物的用量为5 wt.%~20 wt.%；

和/或，所述的水的用量为13.9 wt.%~45 wt.%；

和/或，所述的水为纯化水；

和/或，所述的助乳化剂的用量为5 wt.%~15 wt.%；

和/或，所述的助乳化剂为乙氧基二甘醇、1,2-戊二醇、辛基十二醇、丙二醇、PPG-26-丁醇聚醚-26、甘油、1,2-己二醇、辛甘醇和1,3-丁二醇中的一种或几种；

和/或，所述的剪切乳化的转速为5000 rpm ~10000 rpm；

和/或，所述的剪切乳化的时间为1 min ~10 min；

和/或，所述的高压均质的压力为200 bar ~2000 bar；

和/或，所述的高压均质的温度为40℃~70℃；

和/或，所述的高压均质的次数为1次~10次；

和/或，所述的高速微射流的压力为10000 psi ~15000 psi；

和/或，所述的高速微射流的次数为1次~10次；

和/或，所述的美白组合物中，粒径为10 nm ~300 nm。

3.如权利要求2所述的美白组合物的制备方法，其特征在于，所述的油相的温度为50℃~60℃；

和/或，所述的水相的温度为50℃~60℃；

和/或，所述的油相加入到所述的水相时的温度为50℃~60℃；

和/或，当所述的油相加入到所述的水相时伴随搅拌时，所述搅拌的速率为500 rpm ~1000 rpm；

和/或，所述的苯乙基间苯二酚的用量为5 wt.%~10 wt.%；

和/或，所述的油脂的用量为5 wt.%~10 wt.%；

和/或，所述的油脂为“辛酸癸酸甘油三酯”、“棕榈酸异丙酯”、“椰油酸乙基己酯”、“辛酸癸酸甘油三酯和甘油三（乙基己酸）酯”、“葵花籽油和亚油酸甘油酯”、“二甲基硅油和中链甘油三酯”、“中链甘油三酯”、“肉豆蔻酸异丙酯”、“肉豆蔻酸异丙酯和月桂酸异戊酯”或“硬脂酸乙基己酯”；

和/或，所述的乳化剂的用量为15 wt.%~25 wt.%；

和/或，所述的乳化剂为“硬脂酰乳酰乳酸钠”、“PEG-8辛酸/癸酸甘油酯类、和、三山嵛精PEG-20酯类”、“聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酯、聚氧乙烯氢化蓖麻油、和、椰油基葡糖苷”、“聚甘油-6异硬脂酸酯、和、椰油基葡糖苷”、“PEG-8辛酸/癸酸甘油酯类、和、聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酯”、“聚甘油-6二油酸酯、和、椰油基葡糖苷”、“PEG-8辛酸/癸酸甘油酯类、聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酯、和、聚氧乙烯氢化蓖麻油”、“聚氧乙烯氢化蓖麻油、和、聚甘油-6 二硬脂酸酯”、“PEG-8聚甘油-6-二硬脂酸酯、和、聚甘油-3二异硬脂酸酯”、“聚甘油-6二油酸酯、聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酯、和、聚氧乙烯氢化蓖麻油”、或、“聚甘油-6二硬脂酸酯、和、聚甘油-6二油酸酯”；

和/或，所述的稳定剂的用量为0.5 wt.%~2.0 wt.%；

和/或，所述的稳定剂为丁羟甲苯和/或维生素E醋酸酯；

和/或，所述的肌肽的用量为0.05 wt.%~2 wt.%；

和/或，所述的烟酰胺的用量为5 wt.%~10 wt.%；

和/或，所述的白松露菌提取物为symrise公司生产的Actipone® White Truffle GW；

和/或，所述的白松露菌提取物的用量为10 wt.%~20 wt.%；

和/或，所述的桑白皮提取物为symrise公司生产的Actipone® Mulberry GW；

和/或，所述的桑白皮提取物的用量为10 wt.%~20 wt.%；

和/或，所述的水的用量为17.5 wt.%~ 32.7 wt.%；

和/或，所述的助乳化剂的用量为10 wt.%~15 wt.%；

和/或，所述的助乳化剂为“乙氧基二甘醇和甘油”、“丙二醇和辛基十二醇”、“PPG-26-丁醇聚醚-26”、“1,2-己二醇”、“1,2-戊二醇和1,3-丁二醇”、“1,2-戊二醇”或“1,3-丁二醇”；

和/或，所述的剪切乳化的转速为6000 rpm ~9000 rpm；

和/或，所述的剪切乳化的时间为3 min ~8 min；

和/或，所述的高压均质的压力为500 bar ~1600 bar；

和/或，所述的高压均质的温度为50℃~60℃；

和/或，所述的高压均质的次数为2次~7次；

和/或，所述的高速微射流的压力为12000 psi ~14000 psi；

和/或，所述的高速微射流的次数为2次~6次；

和/或，所述的美白组合物中，粒径为20 nm ~200 nm。

4.如权利要求3所述的美白组合物的制备方法，其特征在于，所述的油相的温度为50℃~55℃；

和/或，所述的水相的温度为50℃~55℃；

和/或，所述的油相加入到所述的水相时的温度为50℃~55℃；

和/或，当所述的油相加入到所述的水相时伴随搅拌时，所述搅拌的速率为600 rpm ~800 rpm；

和/或，所述的白松露菌提取物为symrise公司生产的Actipone® White Truffle GW，产品编号为437789；

和/或，所述的桑白皮提取物为symrise公司生产的Actipone® Mulberry GW，产品编号为399898；

和/或，所述的剪切乳化的转速为7000 rpm ~8000 rpm；

和/或，所述的剪切乳化的时间为5 min ~7 min；

和/或，所述的高压均质的压力为600 bar ~1200 bar；

和/或，所述的高压均质的温度为50℃~55℃；

和/或，所述的高压均质的次数为3次~5次；

和/或，所述的美白组合物中，粒径为30 nm ~100 nm。

5.如权利要求1~4中任一项所述的美白组合物的制备方法，其特征在于，所述的美白组合物的组分如下述任一方案所述：

方案1：

10%乙氧基二甘醇、10%甘油；

方案2：

5%丙二醇、10%辛基十二醇；

方案3：

10%PPG-26-丁醇聚醚-26；

方案4：

10%1,2-己二醇；

方案5：

5%1,2-戊二醇、5%1,3-丁二醇；

方案6：

10%1,2-戊二醇；

方案7：

1%1,3-丁二醇；

方案8：

8%丙二醇；

方案9：

3%1,2-戊二醇、3%1,3-丁二醇；

方案10：

5%甘油；

方案11：

8%1,2-戊二醇；

方案12：

5%辛基十二醇；

方案13：

8%辛甘醇；

方案14：

5%丙二醇、3%辛基十二醇；

方案15：

6%1,2-戊二醇；

方案16：

5%1,2-戊二醇、5%1,3-丁二醇。

6.如权利要求1~4中任一项所述的美白组合物的制备方法，其特征在于，所述的制备方法如下述任一方案所述：

方案1：

方案2：

方案3：

方案4：

方案5：

方案6：

方案7：

方案8：

方案9：

方案10：

方案11：

方案12：

方案13：

方案14：

方案15：

方案16：

7.一种美白组合物，其按照如权利要求1~6中任一项所述的美白组合物的制备方法制得。

8.一种如权利要求7所述的美白组合物在制备化妆品中的应用。

9.一种化妆品，其包括如权利要求7所述的美白组合物和化妆品基质。

10.如权利要求9所述的化妆品，其特征在于，所述的美白组合物的质量百分含量为1wt.%~10 wt.%；

和/或，所述的化妆品基质的组分如下述任一方案所述：

方案1：6%辛酸癸酸甘油三酯、3%十六十八醇、2%硬脂醇聚醚-2、2%硬脂醇聚醚-21、1%单硬脂酸甘油酯；5%甘油、5%丙二醇、0.15%卡波姆和75.2%纯化水；0.15%三乙醇胺、0.5%苯氧乙醇；

方案2：3%甘油、3%丙二醇、3%丁二醇、0.1%卡波姆、90.3%纯化水、0.1%三乙醇胺和0.5%苯氧乙醇。