CN111855848A - 盐酸莫西沙星起始原料中基因毒性杂质的分析方法 - Google Patents

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Abstract

本发明属于药物分析技术领域，具体涉及一种盐酸莫西沙星起始原料1‑环丙基‑6,7‑二氟‑1,4‑二氢‑8‑甲氧基‑4‑氧代‑3‑喹啉羧酸乙酯中潜在基因毒性杂质的定量分析方法，潜在基因毒性杂质的结构类型包括酰卤类、不饱和酮类。本发明采用无水乙醇与2,4,5‑三氟‑3‑甲氧基苯甲酰氯进行衍生化反应生成2,4,5‑三氟‑3‑甲氧基苯甲酸乙酯，采用（5%苯基）‑甲基聚硅氧烷为固定相对衍生物2,4,5‑三氟‑3‑甲氧基苯甲酸乙酯及杂质3‑(N,N‑二甲基氨基)丙烯酸乙酯进行分离，质谱分析检测。该方法不仅能够实现起始原料中潜在基因毒性杂质的有效分离，且能对所述的基因毒性杂质定量检测，操作简便快速，专属性强，灵敏度高，准确、可靠，对盐酸莫西沙星原料及制剂的质量控制和用药安全具有重要意义。

Description

盐酸莫西沙星起始原料中基因毒性杂质的分析方法
技术领域
本发明涉及药物分析技术领域，具体涉及一种潜在基因毒性杂质的衍生化气相色谱质谱联用分析方法，用于盐酸莫西沙星起始原料1-环丙基-6,7-二氟-1,4-二氢-8-甲氧基-4-氧代-3-喹啉羧酸乙酯中潜在基因毒性杂质2,4,5-三氟-3-甲氧基苯甲酰氯及3-(N,N-二甲基氨基)丙烯酸乙酯的分析检测。
背景技术
盐酸莫西沙星（Moxifloxacin hydrochloride），化学名为1-环丙基-7-｛S,S-2,8-重氮-二环[4.3.0]壬烷-8-基｝-6-氟-8-甲氧-1,4-二氢-4-氧-3-喹啉羧酸盐酸盐，分子式为C21H24FN3O4·HCl，其结构式为：
Figure 272671DEST_PATH_IMAGE001
盐酸莫西沙星是一种广谱和具有抗菌活性的8-甲氧基氟喹诺酮类抗菌药，主要用于治疗上呼吸道和下呼吸道感染（如：急性鼻窦炎、慢性支气管炎急性发作、社区获得性肺炎以及皮肤和软组织感染），由于其吸收快，体内分布广，临床上对绝大多数致病菌的综合疗效已达到或超过β-内酰胺类抗生素。其抗菌作用机制为干扰Ⅱ、Ⅳ拓扑异构酶，拓扑异构酶是控制DNA拓扑和在DNA复制、修复和转录中的关键酶。到目前为止，SFDA已批准2家制药企业生产盐酸莫西沙星原料药，共22家制药企业获准生产其片、注射液、氯化钠注射液等多种剂型的制剂。
关于盐酸莫西沙星的合成，文献报道多数以1-环丙基-6,7-二氟-1,4-二氢-8-甲氧基-4-氧代-3-喹啉羧酸乙酯和(s, s)-2,8-二氮杂双环[4,3,0]壬烷为起始原料。
其中，起始原料1-环丙基-6,7-二氟-1,4-二氢-8-甲氧基-4-氧代-3-喹啉羧酸乙酯常用的合成工艺路线如下：
Figure DEST_PATH_IMAGE002
2,4,5-三氟-3-甲氧基苯甲酰氯及3-(N,N-二甲基氨基)丙烯酸乙酯是合成盐酸莫西沙星起始原料1-环丙基-6,7-二氟-1,4-二氢-8-甲氧基-4-氧代-3-喹啉羧酸乙酯的起始物，分别属于酰卤类及不饱和酮类化合物，均为潜在基因毒性杂质。因此，按照药品注册法规及ICH M7指导原则的相关规定，需要在盐酸莫西沙星起始原料中监测杂质2,4,5-三氟-3-甲氧基苯甲酰氯及3-(N,N-二甲基氨基)丙烯酸乙酯含量是否超过限度。根据盐酸莫西沙星的最大日剂量为400 mg/天，以基因毒性杂质限度水平小于1.5 μg/天计算，分别将2,4,5-三氟-3-甲氧基苯甲酰氯及3-(N,N-二甲基氨基)丙烯酸乙酯的控制限度定为0.0003%、0.005%。
酰卤类化合物性质极其不稳定，遇水、高温极易分解，因此，本发明开发了一种柱前衍生气质联用分析方法，用于盐酸莫西沙星起始原料1-环丙基-6,7-二氟-1,4-二氢-8-甲氧基-4-氧代-3-喹啉羧酸乙酯中潜在基因毒性杂质2,4,5-三氟-3-甲氧基苯甲酰氯及3-(N,N-二甲基氨基)丙烯酸乙酯的分离、检测。目前，关于盐酸莫西沙星起始原料中基因毒性杂质的测定方法未见有公开的报道。因此，本发明对盐酸莫西沙星原料药的质量控制及其制剂的用药安全保证具有极其重要的意义，同时为其它药物中酰卤类、不饱和酮类化合物的定量分析提供了参考。
发明内容
本发明的目的在于提供一种具有较高灵敏度和准确度的分析方法，用于盐酸莫西沙星起始原料1-环丙基-6,7-二氟-1,4-二氢-8-甲氧基-4-氧代-3-喹啉羧酸乙酯中潜在基因毒性杂质2,4,5-三氟-3-甲氧基苯甲酰氯及3-(N,N-二甲基氨基)丙烯酸乙酯的含量检测。通过对样品前处理方法、色谱条件等进行反复筛选，最终探索出了最优的柱前衍生气质联用分析方法。
本发明采用无水乙醇作为衍生试剂，与杂质2,4,5-三氟-3-甲氧基苯甲酰氯进行衍生化反应，采用气质联用分析方法对衍生物2,4,5-三氟-3-甲氧基苯甲酸乙酯及杂质3-(N,N-二甲基氨基)丙烯酸乙酯进行分离、检测，有效实现了对盐酸莫西沙星起始原料1-环丙基-6,7-二氟-1,4-二氢-8-甲氧基-4-氧代-3-喹啉羧酸乙酯中潜在基因毒性杂质的控制，进一步保证了盐酸莫西沙星原料药的质量及制剂的用药安全。
本发明的技术方案如下：
一种盐酸莫西沙星起始原料中潜在基因毒性杂质的分析测定方法，包括以下步骤：
步骤1. 采用衍生化法制备供试品溶液：
取盐酸莫西沙星起始原料约1g，精密称定，置50ml量瓶中，精密加入衍生试剂无水乙醇5ml，置30℃水浴加热10分钟，使无水乙醇与盐酸莫西沙星起始原料中的杂质2,4,5-三氟-3-甲氧基苯甲酰氯反应，生成衍生物2,4,5-三氟-3-甲氧基苯甲酸乙酯，用二氯甲烷稀释至刻度，摇匀，滤过，作为供试品溶液。反应过程如下：
Figure 861915DEST_PATH_IMAGE003
进一步，所述潜在基因毒性杂质分别选自酰卤类化合物、不饱和酮类化合物。
进一步，所述衍生温度为30℃，衍生时间为10min。
进一步，所述衍生试剂与盐酸莫西沙星起始原料的体积质量比为5 ml:1 g。
步骤2. 对照品溶液的制备：
分别取3-(N,N-二甲基氨基)丙烯酸乙酯对照品约50mg、2,4,5-三氟-3-甲氧基苯甲酰氯对照品约30mg，精密称定，加无水乙醇5ml，置30℃水浴加热10分钟，用二氯甲烷溶解并定量稀释制成每1ml中约含3-(N,N-二甲基氨基)丙烯酸乙酯1 μg、杂质2,4,5-三氟-3-甲氧基苯甲酰氯0.06 μg的溶液，作为对照品溶液。
步骤3. 检测：
分别精密量取供试品溶液和对照品溶液1μl，注入气相色谱仪，色谱柱为以（5%苯基）-甲基聚硅氧烷为固定液的毛细管柱，载气为氦气，在程序升温条件下，对所述杂质及衍生物进行分离，采用质谱检测器进行分析检测；按外标法以峰面积计算供试品溶液中杂质2,4,5-三氟-3-甲氧基苯甲酰氯及3-(N,N-二甲基氨基)丙烯酸乙酯的含量。
进一步，所述色谱分离采用（5%苯基）-甲基聚硅氧烷为固定液的毛细管柱，规格为30m×0.25mm×0.25μm。
进一步，所述程序升温条件为初始温度100℃，维持5分钟，以每分钟10℃的速率升温至150℃，维持5分钟；以每分钟20℃的速率升温至300℃，维持5分钟；载气为氦气，流速为0.8ml/min～1.2ml/min，分流比为1:5；进样口温度为260℃～300℃，进样体积为1µl。
进一步，所述质谱检测器进行分析检测时，采用电子轰击离子化离子源，选择离子监测模式，根据杂质3-(N,N-二甲基氨基)丙烯酸乙酯及衍生物2,4,5-三氟-3-甲氧基苯甲酸乙酯的化学结构，选择m/z 143、m/z 234的分子离子进行定量分析。
进一步，按外标法以峰面积计算所述供试品溶液中各潜在基因毒性杂质含量。
含量（ppm）= Ai×Cs/As/Ci×106
式中：Ai为供试品溶液色谱图中各杂质的峰面积；
As为对照品溶液色谱图中各杂质的峰面积；
Ci为供试品的浓度，mg/ml；
Cs为对照品的浓度，ng/ml。
为准确检测盐酸莫西沙星起始原料中杂质2,4,5-三氟-3-甲氧基苯甲酰氯的含量，本发明采用无水乙醇作为衍生试剂，与杂质2,4,5-三氟-3-甲氧基苯甲酰氯进行衍生化反应，并且对反应温度、反应时间及衍生试剂与样品的体积质量比进行了筛选，最终确定了最优的衍生化反应条件。
本发明提供了一种柱前衍生气质联用分析方法，用于盐酸莫西沙星起始原料中潜在基因毒性杂质2,4,5-三氟-3-甲氧基苯甲酰氯及3-(N,N-二甲基氨基)丙烯酸乙酯的分离及准确定量分析。实现了对盐酸莫西沙星起始原料1-环丙基-6,7-二氟-1,4-二氢-8-甲氧基-4-氧代-3-喹啉羧酸乙酯中潜在基因毒性杂质的有效控制，减少了患者的用药副反应发生，一定程度保证了患者用药安全。
本发明的有益效果在于：
1. 本发明所述衍生化方法操作简单、快速、回收率高，所用衍生试剂无水乙醇经济易得、毒性低，且不干扰盐酸莫西沙星起始原料1-环丙基-6,7-二氟-1,4-二氢-8-甲氧基-4-氧代-3-喹啉羧酸乙酯中潜在基因毒性杂质环丙胺的检测，因此本发明检测方法的供试品溶液可用于检测杂质环丙胺，很大程度上提高了工作效率、节约了工作成本。
2. 本发明检测方法的灵敏度高，可有效检出杂质3-(N,N-二甲基氨基)丙烯酸乙酯及衍生物2,4,5-三氟-3-甲氧基苯甲酸乙酯，检测限浓度分别为4.11 ng/ml、8.07 ng/ml，定量限浓度分别为13.69 ng/ml、26.90 ng/ml。
3. 本发明检测方法专属性强，准确可靠，两杂质的平均回收率分别为97.9%、91.5%；重复性RSD分别为5.6%、5.1%；仪器精密度RSD分别为4.4%、3.3%。
4. 本发明检测方法操作简便快速，检测成本低廉、经济适用。
5. 本发明方法经过方法学验证，结果均符合要求，证明本发明可用于盐酸莫西沙星起始原料1-环丙基-6,7-二氟-1,4-二氢-8-甲氧基-4-氧代-3-喹啉羧酸乙酯中潜在基因毒性杂质2,4,5-三氟-3-甲氧基苯甲酰氯及3-(N,N-二甲基氨基)丙烯酸乙酯的分离和定量分析。
附图说明
图1为空白溶液总离子流图；
图2为最佳条件下对照品溶液总离子流图；
图3为最佳条件下供试品溶液总离子流图；
图4为最佳条件下供试品溶液中添加杂质2,4,5-三氟-3-甲氧基苯甲酰氯及3-(N,N-二甲基氨基)丙烯酸乙酯的总离子流图；
图中：色谱峰（左）为3-(N,N-二甲基氨基)丙烯酸乙酯；色谱峰（右）为2,4,5-三氟-3-甲氧基苯甲酸乙酯。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步阐述，所举实施例是为了更好地对本发明的内容进行说明，而不是对本发明进行限制。实施例中所用实验方法如无特殊说明，均为常规方法；所使用的材料、试剂等如无特殊说明，均可以从商业途径得到。因此熟悉本领域的技术人员根据上述发明内容进行非本质的改进和调整，仍属于本发明的保护范围。
实施例1 衍生温度的考察
1.样品前处理
供试品（100%限度加标）溶液：取盐酸莫西沙星起始原料1-环丙基-6,7-二氟-1,4-二氢-8-甲氧基-4-氧代-3-喹啉羧酸乙酯1 g，精密称定，置50 ml量瓶中，精密加入杂质2,4,5-三氟-3-甲氧基苯甲酰氯的贮备液（1.68 μg/ml）2 ml，混匀，再精密加入无水乙醇10 ml，混匀。同法制备3份，分别于25℃、30℃、35℃条件下放置30 min，用二氯甲烷溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
2.色谱条件
仪器：气相-质谱联用仪；色谱柱：TG-5 ms（30 m×0.25 mm×0.25 μm）；程序升温，起始温度100℃，维持5分钟，以每分钟10℃的速率升温至150℃，维持5分钟，以每分钟20℃的速率升温至300℃，维持5分钟；氦气为载气；流速为1.0 mL/min；进样口温度为280℃。检测器为质谱检测器，用电子轰击离子化（EI）离子源，选择离子监测模式（SIM）进行测定。
3.结果与结论
表1 衍生温度筛选结果
衍生温度 25℃ 30℃ 35℃
衍生物峰面积 44828 44984 44886
结论：由表1可知，衍生温度在25–35℃之间，衍生物峰面积无明显差异，考虑到环境温度对反应温度的影响，最终选择30℃作为衍生温度。
实施例2 衍生时间的考察
1.样品前处理
供试品（100%限度加标）溶液：取盐酸莫西沙星起始原料1-环丙基-6,7-二氟-1,4-二氢-8-甲氧基-4-氧代-3-喹啉羧酸乙酯1 g，精密称定，置50 ml量瓶中，精密加入杂质2,4,5-三氟-3-甲氧基苯甲酰氯的贮备液（1.68 μg/ml）2 ml，混匀，再精密加入无水乙醇10ml，混匀。同法制备3份，于30℃水浴条件下分别放置5分钟、10分钟、15分钟后，用二氯甲烷溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
按照实施例1中设定的色谱条件进行测定。
2.结果与结论
表2 衍生时间筛选结果
Figure DEST_PATH_IMAGE005A
结论：由表2可知，衍生时间越长，衍生物峰面积越大，衍生反应越彻底，且衍生时间为15分钟时衍生物峰面积较衍生时间为10分钟无明显差异，故选择10分钟作为最终衍生时间。
实施例3 衍生试剂与盐酸莫西沙星起始原料体积质量比的考察
1.样品前处理
供试品（100%限度加标）溶液：取盐酸莫西沙星起始原料1-环丙基-6,7-二氟-1,4-二氢-8-甲氧基-4-氧代-3-喹啉羧酸乙酯1g，精密称定，置50ml量瓶中，精密加入杂质2,4,5-三氟-3-甲氧基苯甲酰氯的贮备液（1.68 μg/ml）2ml，混匀，同法制备3份，再分别精密加入无水乙醇2ml、5ml、10ml，混匀。于30℃水浴加热10分钟，用二氯甲烷溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
按照实施例1中确定的色谱条件进行测定。
2.结果与结论
表3 衍生试剂与底物体积质量比筛选结果
体积质量比 2ml：1g 5ml：1g 10ml：1g
衍生物峰面积 38746 44679 44762
结论：由表3可知，体积质量比越大，衍生物峰面积最大，衍生反应越彻底，且体积质量比为10ml：1g时衍生物峰面积较体积质量比为5ml：1g无明显差异，认为杂质2,4,5-三氟-3-甲氧基苯甲酰氯已基本反应完全，故选择5ml：1g作为最终衍生试剂与盐酸莫西沙星起始原料的体积质量比。
实施例4 色谱柱的选择
1.样品前处理
按照确定的步骤进行样品前处理，制备供试品100%限度加标溶液。
2.色谱条件
选择三种不同的色谱柱，按照设定色谱条件，分别进行测定。
色谱柱1：TG-5 ms（30m×0.25mm×0.25μm）；色谱柱2：TG-624 ms（30m×0.25mm×0.25μm）；色谱柱3：TG-WAX ms（30m×0.25mm×0.25μm）。
3.结果与结论
采用TG-624ms和TG-WAX ms两种色谱柱，色谱峰出现峰前沿、保留时间不够等问题，而使用TG-5 ms色谱柱，色谱峰的保留时间合适，峰型较好。故选择TG-5ms (30 m × 0.25 mm× 0.25 μm)作为色谱柱。
实施例5 方法学考察
专属性考察：空白溶剂不干扰杂质3-(N,N-二甲基氨基)丙烯酸乙酯及2,4,5-三氟-3-甲氧基苯甲酸乙酯衍生物的检测。
检出限/定量限考察：精密量取对照品溶液适量，分别用二氯甲烷逐级进行稀释，选择信噪比约为3的溶液作为检出限溶液，信噪比约为10的溶液作为定量限溶液。
仪器精密度考察：取对照品溶液，按照确定的色谱条件，连续进样6次，计算各杂质峰面积的RSD。
线性考察：分别取2,4,5-三氟-3-甲氧基苯甲酰氯及3-(N,N-二甲基氨基)丙烯酸乙酯对照品适量，精密称定，按照确定的步骤进行衍生化，用二氯甲烷分别定量稀释制成每1ml中约含3-(N,N-二甲基氨基)丙烯酸乙酯0.0137µg～2.7185µg、约含2,4,5-三氟-3-甲氧基苯甲酰氯0.0128 µg～0.1604 µg的7个不同浓度的混合溶液，分别以浓度对峰面积作线性回归方程。
重复性考察：按照确定的步骤制备供试品溶液6份，按照确定的色谱条件进行分析检测，计算供试品溶液中杂质3-(N,N-二甲基氨基)丙烯酸乙酯及衍生物2,4,5-三氟-3-甲氧基苯甲酸乙酯含量的RSD。
方法准确度考察：按照确定的步骤制备对照品溶液。另取供试品约1g，精密称定，置50ml量瓶中，分别精密加入每1ml中约含杂质3-(N,N-二甲基氨基)丙烯酸乙酯27.68 μg、约含2,4,5-三氟-3-甲氧基苯甲酰氯1.68 μg的混合溶液 1ml（50%限度浓度）、2ml（100%限度浓度）、3ml（150%限度浓度），再精密加入无水乙醇5ml，混匀。30℃水浴加热10分钟，用二氯甲烷溶解并稀释至刻度，作为方法准确度供试品溶液，每种浓度制备3份。按照确定的色谱条件分析检测，计算杂质3-(N,N-二甲基氨基)丙烯酸乙酯及2,4,5-三氟-3-甲氧基苯甲酰氯的回收率。
方法耐用性考察：取“方法准确度”项下100%限度加标供试品溶液，分别改变柱流速（±0.2ml/min）、进样口温度（±20℃）进行分析检测，其他色谱条件不变。结果表明，柱流速微调后，各色谱峰保留时间有微小变化，但峰形无明显差异；进样口温度微调后，各色谱峰保留时间、峰面积基本一致。
表4 方法学考察结果
Figure DEST_PATH_IMAGE007
以上实施例仅用以详细说明本发明的技术方案而非限制，本领域的专业技术人员可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的宗旨和范围，均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。

Claims (10)

1.盐酸莫西沙星起始原料中潜在基因毒性杂质的分析方法，其特征在于，所述起始原料为1-环丙基-6,7-二氟-1,4-二氢-8-甲氧基-4-氧代-3-喹啉羧酸乙酯；所述潜在基因毒性杂质选自酰卤类及不饱和酮类化合物；首先采用无水乙醇与杂质2,4,5-三氟-3-甲氧基苯甲酰氯进行衍生化反应生成2,4,5-三氟-3-甲氧基苯甲酸乙酯；其次采用以5%苯基-甲基聚硅氧烷为固定相的毛细管柱对衍生物及杂质3-(N,N-二甲基氨基)丙烯酸乙酯进行分离；最后采用质谱检测器进行分析检测。
2.根据权利要求1所述的分析方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）采用衍生化法制备供试品溶液：
取盐酸莫西沙星起始原料，精密称定，精密加入衍生试剂无水乙醇，置水浴加热，使无水乙醇与盐酸莫西沙星起始原料中的杂质2,4,5-三氟-3-甲氧基苯甲酰氯反应，生成衍生物2,4,5-三氟-3-甲氧基苯甲酸乙酯，用二氯甲烷稀释至刻度，摇匀，滤过，作为供试品溶液；反应过程如下：
Figure 790890DEST_PATH_IMAGE001
（2）对照品溶液的制备：
分别取3-(N,N-二甲基氨基)丙烯酸乙酯对照品、2,4,5-三氟-3-甲氧基苯甲酰氯对照品，精密称定，加无水乙醇， 水浴加热，用二氯甲烷溶解并定量稀释制，作为对照品溶液；
（3）检测：
分别精密量取供试品溶液和对照品溶液，注入气相色谱仪，在程序升温条件下，对所述杂质及衍生物进行分离，采用质谱检测器进行分析检测；按外标法以峰面积计算供试品溶液中杂质2,4,5-三氟-3-甲氧基苯甲酰氯及3-(N,N-二甲基氨基)丙烯酸乙酯的含量。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述酰卤类化合物选自2,4,5-三氟-3-甲氧基苯甲酰氯，所述不饱和酮类化合物选自3-(N,N-二甲基氨基)丙烯酸乙酯。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤1中，衍生化反应温度控制在30℃；衍生化反应时间控制在10分钟。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤1中，衍生试剂与盐酸莫西沙星起始原料的体积质量比为5 ml:1 g。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤3中，所述色谱分离采用5%苯基-甲基聚硅氧烷为固定液的毛细管柱，规格为30m×0.25mm×0.25μm。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤3中，所述程序升温条件为初始温度100℃，维持5分钟，以每分钟10℃的速率升温至150℃，维持5分钟；以每分钟20℃的速率升温至300℃，维持5分钟；载气为氦气，流速为0.8ml/min～1.2ml/min，分流比为1:5；进样口温度为260℃～300℃，进样体积为1µl。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤3中，采用质谱检测器进行分析检测时，采用电子轰击离子化离子源，选择离子监测模式，根据杂质3-(N,N-二甲基氨基)丙烯酸乙酯及衍生物2,4,5-三氟-3-甲氧基苯甲酸乙酯的化学结构，选择m/z 143、m/z 234的分子离子进行定量分析。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤3中，按外标法以峰面积计算供试品溶液中所述潜在基因毒性杂质的含量。
10.含量（ppm）= Ai×Cs/As/Ci×106
式中：Ai为供试品溶液色谱图中各杂质的峰面积；
As为对照品溶液色谱图中各杂质的峰面积；
Ci为供试品的浓度，mg/ml；
Cs为对照品的浓度，ng/ml。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114594188A (zh) * 2022-03-30 2022-06-07 山东省食品药品检验研究院 一种衍生化-超高效液相色谱-三重四极杆质谱法筛查未知酰基化基因毒杂质的方法
CN115598271A (zh) * 2022-10-20 2023-01-13 苏州天马医药集团天吉生物制药有限公司（Cn） 一种3，5-二氯-4-甲氧基苯甲酸的分析方法

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20120157397A1 (en) * 2009-05-28 2012-06-21 Hazen Stanley L Trimethylamine-containing compounds for diagnosis and prediction of disease
CN103543230A (zh) * 2012-07-09 2014-01-29 北大方正集团有限公司 一种盐酸莫西沙星及其对映异构体的分离测定方法
CN110794046A (zh) * 2019-09-30 2020-02-14 珠海润都制药股份有限公司 莫西沙星中间体中2,4,5-三氟-3-甲氧基苯甲酰氯的检验方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20120157397A1 (en) * 2009-05-28 2012-06-21 Hazen Stanley L Trimethylamine-containing compounds for diagnosis and prediction of disease
CN103543230A (zh) * 2012-07-09 2014-01-29 北大方正集团有限公司 一种盐酸莫西沙星及其对映异构体的分离测定方法
CN110794046A (zh) * 2019-09-30 2020-02-14 珠海润都制药股份有限公司 莫西沙星中间体中2,4,5-三氟-3-甲氧基苯甲酰氯的检验方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
RAZZAQ S N 等: "Simultaneous determination of dexamethasone and moxifloxacin in pharmaceutical formulations using stability indicating HPLC method", 《ARABIAN JOURNAL OF CHEMISTRY》 *
吴文良: "加替沙星环合酯及其去甲基衍生物的合成研究", 《中国优秀博硕士学位论文全文数据库(硕士)医药卫生科技辑》 *
聂忠莉 等: "莫西沙星侧链的残留溶剂测定", 《成都大学学报(自然科学版)》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114594188A (zh) * 2022-03-30 2022-06-07 山东省食品药品检验研究院 一种衍生化-超高效液相色谱-三重四极杆质谱法筛查未知酰基化基因毒杂质的方法
CN115598271A (zh) * 2022-10-20 2023-01-13 苏州天马医药集团天吉生物制药有限公司（Cn） 一种3，5-二氯-4-甲氧基苯甲酸的分析方法

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