CN111838439A - 一种四角蛤蜊多肽在猪肠道健康中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种四角蛤蜊多肽在猪肠道健康中的应用，属于猪饲料及其添加剂技术领域。本发明通过实验证明，四角蛤蜊多肽能够促进猪小肠上皮细胞的增殖，并能够促进猪小肠上皮细胞中连接蛋白Occludin和ZO‑1的蛋白表达，因此，可将四角蛤蜊多肽用于饲料和生物制剂中，用于促进猪小肠发育和增加猪小肠的屏蔽作用。

Description

一种四角蛤蜊多肽在猪肠道健康中的应用
技术领域
本发明属于猪饲料及其添加剂技术领域，尤其涉及一种四角蛤蜊多肽在猪肠道健康中的应用。
背景技术
肠道是猪机体免疫中的重要屏障，其能够有效的阻止肠道中致病原侵入猪体内，因此对于猪的健康、生产和发育都有着重要的作用。同时，肠道是猪机体与环境之间进行分子交换和保证动物膳食营养吸收的桥梁。当猪肠道发生问题时，会出现腹泻等一系列健康问题，严重时甚至会导致猪死亡。猪肠道的健康和猪肠道细胞的发育和猪肠道细胞的连接蛋白息息相关。
目前，多使用抗生素来治疗猪肠道问题，但是长期大量的使用抗生素会导致细菌耐药等副作用，因此如何健康有效的提高猪肠道健康是目前急需解决的问题。
发明内容
本发明的目的在于提供一种四角多肽在猪肠道健康中的应用。
为实现上述目的，本发明提供了如下技术方案：
本发明提供了一种四角蛤蜊多肽在促进猪肠道健康中的应用。
优选地，所述四角蛤蜊多肽的制备方法如下：
（1）将干燥的四角蛤蜊清洗干净后，晾干，加入到研磨器中，加入液氮研磨为粉末；
（2）加10-15倍量的水溶解四角蛤蜊粉末，搅拌得到四角蛤蜊匀浆液；
（3）加入0.05-0.2倍量的复合蛋白酶，调节PH为7.5-8.5，温度为35-50℃，处理1-1.5h后，得到四角蛤蜊酶解液A；所述复合蛋白酶为胰蛋白酶和碱性蛋白酶的混合物；按照比计，所述胰蛋白酶:所述碱性蛋白酶为6:4；
（4）95-100℃ 加热20-30min，冷却至室温，得到四角蛤蜊酶解液B；
（5）将四角蛤蜊酶解液B置于离心机中，5000-6000rpm离心，30-40min；
（6）使用1-2μm超滤膜进行过滤，得到四角蛤蜊多肽液；
（7）将所述四角蛤蜊多肽液置于真空冷冻干燥机中进行干燥，得到四角蛤蜊多肽。
此外，本发明提供了四角蛤蜊多肽在促进猪小肠发育中的应用，所述四角多肽的制备方法如下：
（1）将干燥的四角蛤蜊清洗干净后，晾干，加入到研磨器中，加入液氮研磨为粉末；
（2）加10-15倍量的水溶解四角蛤蜊粉末，搅拌得到四角蛤蜊匀浆液；
（3）加入0.05-0.2倍量的复合蛋白酶，调节PH为7.5-8.5，温度为35-50℃，处理1-1.5h后，得到四角蛤蜊酶解液A；所述复合蛋白酶为胰蛋白酶和碱性蛋白酶的混合物；按照比计，所述胰蛋白酶:所述碱性蛋白酶为6:4；
（4）95-100℃ 加热20-30min，冷却至室温，得到四角蛤蜊酶解液B；
（5）将四角蛤蜊酶解液B置于离心机中，5000-6000rpm离心，30-40min；
（6）使用1-2μm超滤膜进行过滤，得到四角蛤蜊多肽液；
（7）将所述四角蛤蜊多肽液置于真空冷冻干燥机中进行干燥，得到四角蛤蜊多肽。
此外，本发明提供了四角蛤蜊多肽在促进猪小肠屏障功能中的应用，所述四角多肽的制备方法如下：
（1）将干燥的四角蛤蜊清洗干净后，晾干，加入到研磨器中，加入液氮研磨为粉末；
（2）加10-15倍量的水溶解四角蛤蜊粉末，搅拌得到四角蛤蜊匀浆液；
（3）加入0.05-0.2倍量的复合蛋白酶，调节PH为7.5-8.5，温度为35-50℃，处理1-1.5h后，得到四角蛤蜊酶解液A；所述复合蛋白酶为胰蛋白酶和碱性蛋白酶的混合物；按照比计，所述胰蛋白酶:所述碱性蛋白酶为6:4；
（4）95-100℃ 加热20-30min，冷却至室温，得到四角蛤蜊酶解液B；
（5）将四角蛤蜊酶解液B置于离心机中，5000-6000rpm离心，30-40min；
（6）使用1-2μm超滤膜进行过滤，得到四角蛤蜊多肽液；
（7）将所述四角蛤蜊多肽液置于真空冷冻干燥机中进行干燥，得到四角蛤蜊多肽。
除此之外，本发明提供了一种促进猪小肠发育和增强猪小肠屏障功能的饲料，所述生物饲料包括四角蛤蜊多肽。
优选地，所述四角蛤蜊多肽的制备方法如下：
（1）将干燥的四角蛤蜊清洗干净后，晾干，加入到研磨器中，加入液氮研磨为粉末；
（2）加10-15倍量的水溶解四角蛤蜊粉末，搅拌得到四角蛤蜊匀浆液；
（3）加入0.05-0.2倍量的复合蛋白酶，调节PH为7.5-8.5，温度为35-50℃，处理1-1.5h后，得到四角蛤蜊酶解液A；所述复合蛋白酶为胰蛋白酶和碱性蛋白酶的混合物；按照比计，所述胰蛋白酶:所述碱性蛋白酶为6:4；
（4）95-100℃ 加热20-30min，冷却至室温，得到四角蛤蜊酶解液B；
（5）将四角蛤蜊酶解液B置于离心机中，5000-6000rpm离心，30-40min；
（6）使用1-2μm超滤膜进行过滤，得到四角蛤蜊多肽液；
（7）将所述四角蛤蜊多肽液置于真空冷冻干燥机中进行干燥，得到四角蛤蜊多肽。
优选地，所述饲料用于促进猪小肠发育和增强猪小肠屏蔽功能。
本发明的有益效果在于：
本发明证明本发明所制备的四角蛤蜊多肽，能够显著的促进小肠上皮细胞增殖，并且能够促进小肠屏蔽功能相关连接蛋白Occludin和ZO-1的表达，因此本发明所制备的四角蛤蜊多肽能够起到促进猪小肠发育和增强小肠屏障功能的作用，从而为将四角蛤蜊多肽用于制备促进猪小肠发育和增殖小肠屏蔽功能的饲料提供基础。
附图说明
图1 四角蛤蜊多肽对于猪小肠上皮细胞细胞增殖的影响
图2 四角蛤蜊多肽对于猪小肠上皮细胞连接蛋白Occludin mRNA表达的影响
图3 四角蛤蜊多肽对于猪小肠上皮细胞连接蛋白ZO-1 mRNA表达的影响
图4 四角蛤蜊多肽对于猪小肠上皮细胞连接蛋白Occludin和ZO-1蛋白表达的影响。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步的说明，以下所述，仅是对本发明的较佳实施例而已，并非对本发明做其他形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更为同等变化的等效实施例。凡是未脱离本发明方案内容，依据本发明的技术实质对以下实施例所做的任何简单修改或等同变化，均落在本发明的保护范围内。
实施例1
（1）将干燥的四角蛤蜊清洗干净后，晾干，加入到研磨器中，加入液氮研磨为粉末；
（2）加12倍量的水溶解四角蛤蜊粉末，搅拌得到四角蛤蜊匀浆液；
（3）加入0.1倍量的复合蛋白酶，调节PH为8.0，温度为50℃，处理1.5h后，得到四角蛤蜊酶解液A；复合蛋白酶为胰蛋白酶和碱性蛋白酶；胰蛋白酶的添加量:碱性蛋白酶的添加量为6:4；
（4）100℃ 加热20min，冷却至室温，得到四角蛤蜊酶解液B；
（5）将四角蛤蜊酶解液B置于离心机中，5000rpm离心， 40min；
（6）使用2μm超滤膜进行过滤，得到四角蛤蜊多肽液；
（7）将所述四角蛤蜊多肽液置于真空冷冻干燥机中进行干燥，得到四角蛤蜊多肽A。
实施例2
（1）将干燥的四角蛤蜊清洗干净后，晾干，加入到研磨器中，加入液氮研磨为粉末；
（2）加10倍量的水溶解四角蛤蜊粉末，搅拌得到四角蛤蜊匀浆液；
（3）加入0.2倍量的复合蛋白酶，调节PH为7.5，温度为35℃，处理1.5h后，得到四角蛤蜊酶解液A；复合蛋白酶为胰蛋白酶和碱性蛋白酶；胰蛋白酶的添加量:碱性蛋白酶的添加量为6:4；
（4）100℃ 加热20min，冷却至室温，得到四角蛤蜊酶解液B；
（5）将四角蛤蜊酶解液B置于离心机中， 6000rpm离心，30min；
（6）使用1μm超滤膜进行过滤，得到四角蛤蜊多肽液；
（7）将所述四角蛤蜊多肽液置于真空冷冻干燥机中进行干燥，得到四角蛤蜊多肽B。
实施例3
（1）将干燥的四角蛤蜊清洗干净后，晾干，加入到研磨器中，加入液氮研磨为粉末；
（2）加15倍量的水溶解四角蛤蜊粉末，搅拌得到四角蛤蜊匀浆液；
（3）加入0.05倍量的复合蛋白酶，调节PH为8.5，温度为50℃，处理1后，得到四角蛤蜊酶解液A；复合蛋白酶为胰蛋白酶和碱性蛋白酶；胰蛋白酶的添加量:碱性蛋白酶的添加量为6:4；
（4）96℃ 加热30min，冷却至室温，得到四角蛤蜊酶解液B；
（5）将四角蛤蜊酶解液B置于离心机中，5000rpm离心， 40min；
（6）使用1μm超滤膜进行过滤，得到四角蛤蜊多肽液；
（7）将所述四角蛤蜊多肽液置于真空冷冻干燥机中进行干燥，得到四角蛤蜊多肽C。
实施例4
（1）将IPEC-J2细胞接种于96孔板中，每孔8000个,100μL，置于细胞培养箱中；
（2）待细胞贴壁后，实验组1更换为含有50μg/mL四角蛤蜊多肽A的培养基,实验组2更换为含有100μg/mL四角蛤蜊多肽A的培养基；
（3）分别在培养24h，48h，72h时使用CCK-8检测450nm OD值。
实验结果
如图1所示，从图中可以看出，培养72h后对照组的OD值为0.542±0.012,50μg/mL四角蛤蜊多肽A组的OD值为0.616±0.014,100μg/mL四角蛤蜊A组的OD值为0.766±0.026μg/mL，差异具有统计学意义。根据结果可以看出四角蛤蜊多肽能够显著的促进猪小肠上皮细胞IPEC-J2的增殖。
实施例5
实时荧光定量PCR检测猪上皮细胞连接蛋白的mRNA表达
1. 细胞分组
（1）将IPEC-J2细胞接种于6孔板中，对照组不做处理，实验组1加入含50μg/mL四角蛤蜊多肽A的培养基，实验组2加入100μg/mL四角蛤蜊多肽A的培养基，处理48h后提取RNA。
2.RNA提取
（1）弃去培养基，加入1ml TriQuick Reagent，使用移液器吹打细胞，使细胞充分裂解，室温放置5min后将细胞转移至离心管中；
（2）将0.2ml氯仿加入到离心管中，混匀，室温反应5min，12000g 4℃离心 10min；
（3）吸取上层的水相至新的离心管中，加入0.5ml异丙醇，颠倒混匀；
（4）室温放置10min，12000g 4℃离心10min；
（5）加入1ml 75%乙醇（DEPC水配置）溶解沉淀，12000g 4℃ 离心5min，去除上清；
（6）加入50μL DEPC水溶解RNA。
3.逆转录反应
（1）根据天根逆转录试剂盒去除gDNA
gDNA反应体系
组成成分 使用量
5×gDNA Buffer 2μL
TotaL RNA 1μg
RNase-Free ddH2O 补足到10μL
（2）小型离心机离心后，置于PCR仪中，42℃，孵育3min，置于冰上放置；
（3）配置逆转录反应体系
试剂 使用量
FastKing RT Enzyme Mix 2μL
步骤1产物 1μL
10×King RT Buffer 2μL
FQ-RT Primer Mix 2μL
RNase-Free ddH2O 3μL
（4）将混合液置于普通PCR仪中，42℃，15min；95℃，3min。
4.实时荧光定量PCR
引物序列如下:
Gene名称 引物序列
Occludin GAAAGTGAACGAGAAGCGGC
ACGCCTCCAAGTTACCACTG
ZO-1 AGAGCCTGCCAAGTCAGTTC
TTGCCTGCAGTGGGTCATAG
GAPDH GGAGAACGGGAAGCTTGTCA
GCCTTCTCCATGGTCGTGAA
反应体系如下：
试剂 使用量
cDNA 1μL
上游引物 0.5μL
下游引物 0.5μL
SYBR Mix 5μL
ddH2O 3μL
反应系统：
95℃ 1min；95℃ 15s，60℃ 1min，35个循环。
实验结果如图2和图3所示，50μg/mL四角蛤蜊多肽A组的Occludin相对表达量为1.336±0.069，100μg/mL四角蛤蜊多肽A组的相对表达量为1.743±0.099；50μg/mL四角蛤蜊多肽A组的ZO-1的相对表达量为1.372±0.044，,100μg/mL四角蛤蜊多肽A组的ZO-1的相对表达量为1.983±0.113，差异具有统计学意义。从上述结果可以看出，四角蛤蜊多肽能够显著的增加紧密连接蛋白Occludin和ZO-1的mRNA表达。
实施例6
1. 细胞分组
（1）将IPEC-J2细胞接种于6孔板中，对照组不做处理，实验组1加入含50μg/mL四角蛤蜊多肽A的培养基，实验组2加入100μg/mL四角蛤蜊多肽A的培养基，处理48h后提取蛋白。
2.蛋白提取
（1）弃去培养基，加入1mlPBS清洗细胞，加入100μl使用细胞刮刀将细胞刮下，使用移液枪将细胞转移到EP管；
（2）冰上裂解30min，置于离心机中，4℃，12000rpm/min，离心15min；
（3）离心结束后，小心吸取上清，得到蛋白样品；
（4）使用BCA法测量蛋白浓度，并调整蛋白样品浓度为2μg/μl。
3.蛋白电泳
（1）配制12%分离胶，5%浓缩胶，每孔加入10μl蛋白样品和蛋白Marker；
（2）浓缩胶恒压90V，分离胶恒压120V，当溴酚蓝跑至凝胶的底部时停止电泳；
（3）小心取出凝胶，按照海绵垫，三层滤纸，PAGE胶，PVDF膜，三层滤纸，海绵垫的模式安装转印夹，将转印夹放入电转槽中，室温电转1.5小时；
（4）电转结束后，将PVDF膜取出，放入5%脱脂奶粉中，室温摇床封闭1h。
（5）封闭完成后，使用TBST洗膜3次，每次10分钟；
（6）根据相应蛋白条带大小，裁切PVDF膜，孵育Occludin，ZO-1和β-actin一抗，4℃，孵育过夜；
（7）一抗孵育结束后，使用TBST洗膜3次，每次10分钟，孵育相应的2抗，室温孵育1h；
（8）二抗孵育结束后，使用TBST洗膜3次，进行显影曝光。
从图3中可以看出，使用四角蛤蜊多肽处理猪小肠上皮细胞后，能够显著的提高猪小肠上皮细胞连接蛋白Occludin和ZO-1的蛋白表达。说明四角蛤蜊多肽能够有效的促进猪小肠上皮细胞的屏障功能，维持猪肠道的健康。
综上所述，四角蛤蜊多肽能够有效的促进猪小肠上皮细胞增殖，并且能够促进猪小肠上皮细胞连接蛋白Occludin和ZO-1的表达来促进猪小肠上皮细胞的屏障功能，因此，四角蛤蜊多肽能够有效的促进猪小肠的发育和增强猪小肠的屏蔽功能,从而增强猪肠道健康。

Claims (7)

1.一种四角蛤蜊多肽在促进猪肠道健康中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述四角蛤蜊多肽的制备方法如下：
（1）将干燥的四角蛤蜊清洗干净后，晾干，加入到研磨器中，加入液氮研磨为粉末；
（2）加10-15倍量的水溶解四角蛤蜊粉末，搅拌得到四角蛤蜊匀浆液；
（3）加入0.05-0.2倍量的复合蛋白酶，调节PH为7.5-8.5，温度为35-50℃，处理1-1.5h后，得到四角蛤蜊酶解液A；所述复合蛋白酶为胰蛋白酶和碱性蛋白酶的混合物；按照比计，所述胰蛋白酶:所述碱性蛋白酶为6:4；
（4）95-100℃ 加热20-30min，冷却至室温，得到四角蛤蜊酶解液B；
（5）将四角蛤蜊酶解液B置于离心机中，5000-6000rpm离心，30-40min；
（6）使用1-2μm超滤膜进行过滤，得到四角蛤蜊多肽液；
（7）将所述四角蛤蜊多肽液置于真空冷冻干燥机中进行干燥，得到四角蛤蜊多肽。
3.四角蛤蜊多肽在促进猪小肠发育中的应用，其特征在于，所述四角多肽的制备方法如下：
（1）将干燥的四角蛤蜊清洗干净后，晾干，加入到研磨器中，加入液氮研磨为粉末；
（2）加10-15倍量的水溶解四角蛤蜊粉末，搅拌得到四角蛤蜊匀浆液；
（3）加入0.05-0.2倍量的复合蛋白酶，调节PH为7.5-8.5，温度为35-50℃，处理1-1.5h后，得到四角蛤蜊酶解液A；所述复合蛋白酶为胰蛋白酶和碱性蛋白酶的混合物；按照比计，所述胰蛋白酶:所述碱性蛋白酶为6:4；
（4）95-100℃ 加热20-30min，冷却至室温，得到四角蛤蜊酶解液B；
（5）将四角蛤蜊酶解液B置于离心机中，5000-6000rpm离心，30-40min；
（6）使用1-2μm超滤膜进行过滤，得到四角蛤蜊多肽液；
（7）将所述四角蛤蜊多肽液置于真空冷冻干燥机中进行干燥，得到四角蛤蜊多肽。
4.四角蛤蜊多肽在促进猪小肠屏障功能中的应用，其特征在于，所述四角多肽的制备方法如下：
（1）将干燥的四角蛤蜊清洗干净后，晾干，加入到研磨器中，加入液氮研磨为粉末；
（2）加10-15倍量的水溶解四角蛤蜊粉末，搅拌得到四角蛤蜊匀浆液；
（3）加入0.05-0.2倍量的复合蛋白酶，调节PH为7.5-8.5，温度为35-50℃，处理1-1.5h后，得到四角蛤蜊酶解液A；所述复合蛋白酶为胰蛋白酶和碱性蛋白酶的混合物；按照比计，所述胰蛋白酶:所述碱性蛋白酶为6:4；
（4）95-100℃ 加热20-30min，冷却至室温，得到四角蛤蜊酶解液B；
（5）将四角蛤蜊酶解液B置于离心机中，5000-6000rpm离心，30-40min；
（6）使用1-2μm超滤膜进行过滤，得到四角蛤蜊多肽液；
（7）将所述四角蛤蜊多肽液置于真空冷冻干燥机中进行干燥，得到四角蛤蜊多肽。
5.一种促进猪小肠发育和增强猪小肠屏障功能的饲料，其特征在于，所述生物饲料包括四角蛤蜊多肽。
6.根据权利要求4所述的生物制剂，其特征在于，所述四角蛤蜊多肽的制备方法如下：
（1）将干燥的四角蛤蜊清洗干净后，晾干，加入到研磨器中，加入液氮研磨为粉末；
（2）加10-15倍量的水溶解四角蛤蜊粉末，搅拌得到四角蛤蜊匀浆液；
（3）加入0.05-0.2倍量的复合蛋白酶，调节PH为7.5-8.5，温度为35-50℃，处理1-1.5h后，得到四角蛤蜊酶解液A；所述复合蛋白酶为胰蛋白酶和碱性蛋白酶的混合物；按照比计，所述胰蛋白酶:所述碱性蛋白酶为6:4；
（4）95-100℃ 加热20-30min，冷却至室温，得到四角蛤蜊酶解液B；
（5）将四角蛤蜊酶解液B置于离心机中，5000-6000rpm离心，30-40min；
（6）使用1-2μm超滤膜进行过滤，得到四角蛤蜊多肽液；
（7）将所述四角蛤蜊多肽液置于真空冷冻干燥机中进行干燥，得到四角蛤蜊多肽。
7.根据权利要求4所述的饲料，其特征在于，所述饲料用于促进猪小肠发育和增强猪小肠屏蔽功能。
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Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113718058A (zh) * 2021-09-04 2021-11-30 百沃特(天津)生物技术有限公司 一种鉴别非洲猪瘟病毒的流行株和基因缺失株的引物探针组、试剂盒及其使用方法和应用
CN115039841A (zh) * 2020-09-02 2022-09-13 青岛隆和生物科技有限公司 一种促猪骨骼肌卫星细胞分化的促进剂
CN117695370A (zh) * 2023-12-19 2024-03-15 青岛市畜牧工作站(青岛市畜牧兽医研究所) 一种寡肽在制备猪流行性腹泻病毒抑制药物中的应用
CN118266531A (zh) * 2024-06-04 2024-07-02 潍坊新希望六和饲料科技有限公司 一种多肽在制备促进肠道健康的饲料辅助制剂中的应用

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101979652A (zh) * 2010-10-12 2011-02-23 南京中医药大学 一种具有抗氧化活性的四角蛤蜊蛋白多肽及其制备方法和应用
CN102293319A (zh) * 2010-06-23 2011-12-28 郁丽华 利用四角蛤蜊加工废弃物分段酶解生产饲料添加剂的方法
CN106387398A (zh) * 2016-08-30 2017-02-15 淮北正洋生物科技有限公司 一种促进仔猪生长发育并增强机体免疫力的饲料酵母添加剂及其制备方法
CN108185176A (zh) * 2017-11-30 2018-06-22 兰溪市酉泽饲料技术服务有限公司 具有提高免疫性能的生猪饲料

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102293319A (zh) * 2010-06-23 2011-12-28 郁丽华 利用四角蛤蜊加工废弃物分段酶解生产饲料添加剂的方法
CN101979652A (zh) * 2010-10-12 2011-02-23 南京中医药大学 一种具有抗氧化活性的四角蛤蜊蛋白多肽及其制备方法和应用
CN106387398A (zh) * 2016-08-30 2017-02-15 淮北正洋生物科技有限公司 一种促进仔猪生长发育并增强机体免疫力的饲料酵母添加剂及其制备方法
CN108185176A (zh) * 2017-11-30 2018-06-22 兰溪市酉泽饲料技术服务有限公司 具有提高免疫性能的生猪饲料

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CESARETTI,M ET AL: "Isolation and characterization of a heparin with high anticoagulant activity from the clam Tapes phylippinarum: evidence for the presence of a high content of antithrombin III binding site", 《GLYCOBIOLOGY》 *
HONGJIAN CHEN ET AL: "The involvement of cysteine-rich intestinal protein in early development and innate immunity of Asiatic hard clam, Meretrix meretrix", 《FISH SHELLFISH IMMUNOL》 *
姜文等: "抗菌肽替代抗生素在仔猪生产上的应用", 《今日养猪业》 *
宦海琳等: "抗菌肽对仔猪血清生化指标、肠黏膜形态结构及空肠上皮紧密连接蛋白基因相对表达量的影响", 《动物营养学报》 *
陈琛: "文蛤生物活性多肽 /蛋白研究进展", 《海洋渔业》 *

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115039841A (zh) * 2020-09-02 2022-09-13 青岛隆和生物科技有限公司 一种促猪骨骼肌卫星细胞分化的促进剂
CN115039841B (zh) * 2020-09-02 2024-03-08 青岛普兴生物科技有限公司 一种促猪骨骼肌卫星细胞分化的促进剂
CN113718058A (zh) * 2021-09-04 2021-11-30 百沃特(天津)生物技术有限公司 一种鉴别非洲猪瘟病毒的流行株和基因缺失株的引物探针组、试剂盒及其使用方法和应用
CN117695370A (zh) * 2023-12-19 2024-03-15 青岛市畜牧工作站(青岛市畜牧兽医研究所) 一种寡肽在制备猪流行性腹泻病毒抑制药物中的应用
CN118266531A (zh) * 2024-06-04 2024-07-02 潍坊新希望六和饲料科技有限公司 一种多肽在制备促进肠道健康的饲料辅助制剂中的应用
CN118266531B (zh) * 2024-06-04 2024-08-09 潍坊新希望六和饲料科技有限公司 一种多肽在制备促进肠道健康的饲料辅助制剂中的应用

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