CN111838141B - 一种针对碳氮同位素检测的桑叶及桑枝真空抗菌贮存方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及文物检测技术领域，公开了一种针对碳氮同位素检测的桑叶及桑枝真空抗菌贮存方法，包括1）将纳米二氧化钛包覆于碳酸钙块体表面；2）将纳米二氧化钛包覆的碳酸钙块体煅烧后获得纳米二氧化钛包覆的氧化钙块体；3）大叶黄杨叶挥发性油的制备；4）利用纳米二氧化钛包覆的氧化钙块体吸附大叶黄杨叶挥发性油；5）将步骤4）所得产物置于聚丙烯无纺布袋中；6）选取桑叶和桑枝并进行洁净处理；7）将桑叶和桑枝装入贮存袋中，加入聚丙烯无纺布袋，真空封口。本发明通过解决对产地的桑叶及桑枝处理之前的贮存问题，可排除微生物对样品的影响，减少碳氮元素的自然分馏，降低产地同位素信息的流失，确保碳氮同位素检测的准确性。

Description

一种针对碳氮同位素检测的桑叶及桑枝真空抗菌贮存方法

技术领域

本发明涉及文物检测技术领域，尤其涉及一种针对碳氮同位素检测的桑叶及桑枝真空抗菌贮存方法。

背景技术

我国是世界上最早植桑、养蚕、缫丝、织绸的国家，但浩瀚的文献资料只能见证丝绸的生产及传播在古代制造业和奢侈品贸易中独领风骚；而关于丝绸的起源和传播的神话传说却不能令人信服。在这种情况下，我们需要建立一种稳定、有效的、科学的丝绸溯源的方法，而同位素溯源技术目前被证实是非常有效的溯源技术。

同位素溯源技术主要是与产地建立联系，既能区分不同种类、不同来源的生物产品，又是判断地域来源比较直接而有效的一种方法。同位素是指原子核中质子数相同，但中子数不同的一系列原子。碳氮稳定同位素作为最常用的轻稳定同位素，可以通过同位素质谱分析法测得。要进行同位素质谱分析法测试的样品需要进行一系列的前处理，从而制备成符合测试条件的样品。而样品的保存好坏与否则会严重的影响轻稳定同位素含量及比例测试的结果。在野外采集新鲜的桑叶桑枝样品后，考虑到自然界中各类微生物(需氧菌、厌氧菌等)会以含碳氮元素的桑叶桑枝作为其生长繁殖所需的碳源氮源，而通常情况下，在采集到新鲜桑枝桑叶样品后又很难马上进行测试，甚至需要放置很多天后才能集中处理，这些新鲜桑枝桑叶很容易就会因会受微生物攻击等原因发生腐败变质，影响同位素数据的准确性。因此在采集到这些样品后，急需当即对样品进行处理，防止微生物(需氧菌、厌氧菌等)对其进行侵蚀，影响样品碳氮同位素的值使同位素溯源数据产生误差，并且减少碳氮同位素的自然分馏，尽可能保留产地信息。因此进行碳氮稳定同位素检测之前，需要先解决样品在处理之前的贮存问题。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供了一种针对碳氮同位素检测的桑叶及桑枝真空抗菌贮存方法，本发明通过解决对产地的桑叶及桑枝处理之前的贮存问题，可排除微生物对样品的影响，减少碳氮元素的自然分馏，降低产地同位素信息的流失，进而可确保碳氮同位素检测的准确性。

本发明的具体技术方案为：一种针对碳氮同位素检测的桑叶及桑枝真空抗菌贮存方法，包括以下步骤：

1)取碳酸钙块体和纳米二氧化钛粉末，与去离子水以及分散剂一同加入到氧化锆球磨罐中以200-400r/min转速球磨30-45min，获得纳米二氧化钛包覆的碳酸钙块体；其中，碳酸钙块体和纳米二氧化钛的质量比为(6-6.5)∶(3.5-4)，分散剂占原料总质量的0.2-0.3％，去离子水占原料总质量的20-25％，

步骤1)中，放置在球磨机中，通过机械力化学包覆改性的方法，将纳米二氧化钛包覆在碳酸钙表面。

2)将纳米二氧化钛包覆的碳酸钙块体置于精密真空气氛炉中进行煅烧；煅烧终温度为825-910℃，在升温阶段，升温速率为20-30℃/min，保温时间为30-60min，获得纳米二氧化钛包覆的氧化钙块体。

步骤2)中，通过煅烧的方法，使得碳酸钙分解为氧化钙和二氧化碳，而二氧化钛则包覆于氧化钙的表面，且二氧化碳的逃逸是的氧化钙具有多孔疏松结构，有利于后续提取液的吸附。

3)取干燥粉碎的大叶黄杨叶，装入到料筒中，放入超临界二氧化碳萃取装置内萃取2-4h后，收集萃取物；萃取物经减压蒸馏后以环己烷萃取，用N₂吹去溶剂，得到大叶黄杨叶挥发性油。

4)将步骤2)所得纳米二氧化钛包覆的氧化钙块体浸泡于步骤3)中所得大叶黄杨叶挥发性油中，随后待氧化钙块体干燥，获得表面负载大叶黄杨叶挥发性油的纳米二氧化钛包覆的氧化钙块体；

上述步骤所得材料中，纳米二氧化钛本身具有无毒，抗菌能力强，抗菌范围广，抗菌效果持久的优点，能够有效除去厌氧微生物。另一方面，当真空封口袋中桑叶桑枝有微量水分产生时，由于氧化钙具有出色的吸湿性，因此水分会被氧化钙迅速吸收。进一步的，氧化钙在吸水后释放出热量，导致材料表面升温，促进氧化钙表面吸附的具有杀菌功能的大叶黄杨叶挥发性油物质挥发，同时温度升高后纳米二氧化钛的抗菌活性也得到了增强，从而提高材料总体的杀菌效果(潮湿环境下容易滋生微生物，因此需要加强杀菌效果)，而当水分被吸收后，则氧化钙反应结束，不再放热，大叶黄杨叶挥发性油不被加速释放，从而起到长效杀菌的功能。

5)将步骤4)所得产物置于聚丙烯无纺布袋中，热封封口。

6)选取自产地采集的新鲜、色泽饱满、无虫蛀、无病斑的桑叶和桑枝，分别对其表面进行洁净处理。

选取新鲜、色泽饱满、无虫蛀、无病斑的桑叶、桑枝，在相同条件下，相对于有虫蛀，病斑的桑叶桑枝，能够保存更长久，并且对于检测桑叶桑枝本身的碳氮同位素时，可以排除一些外源性的影响，例如虫蛀后的桑叶桑枝的同位素影响和病斑带来的桑叶桑枝自身的同位素变化

7)将洁净处理后的桑叶和桑枝装入贮存袋中，加入步骤5)所得聚丙烯无纺布袋，然后利用真空封口机对贮存袋进行真空封口处理。

与用自封袋贮存样品进行收集相比，本发明用真空封口机进行真空封口后，能够将样品和空气隔绝开来，一方面排除需氧微生物的影响，一方面有利于样品的贮存。在真空状态下，样品的贮存时间会延长，并且内部的桑叶桑枝不易变质导致同位素的变化，影响之后的碳氮稳定同位素的检测。

作为优选，步骤1)中，所述碳酸钙块体的粒径为2-3cm。

作为优选，步骤3)中，萃取压力为35-45MPa，萃取温度28-32℃，萃取流量15-25L/h。

作为优选，步骤3)中，所述有机萃取溶剂为环己烷。

作为优选，步骤4)中，浸泡时间为2-3h，在室温下使其成为干燥体。

作为优选，步骤6)中，洁净处理所用的材料为无尘纸，洁净处理所用溶剂为75％的乙醇。

用无尘纸进行除杂操作，顺着桑叶的纹理进行擦拭，能够除去粘附在桑叶表面的灰尘等易除去的杂质，无尘纸柔软不会损伤样品，而且不会在桑叶片上留下微粒和线头等杂质，同时又具有良好的保水效果，而75％的乙醇溶液是医用消毒酒精，用它进行擦拭，能够除去桑叶表面的部分微生物以及一些微小的灰尘。

作为优选，步骤7)中，贮存袋抽真空后的真空度为-0.15-0MPa。

作为优选，步骤7)中，所述真空封口机，包括底座和与底座可翻转连接的上翻盖。

所述底座的顶面设有凸起的中控台、储水槽、下密封圈和加热条；所述中控台集成有集成芯片以及与集成芯片联接的抽真空机构、温度控制板、温度显示屏、电量显示屏、真空度检测感应器和操作按钮；所述集成芯片上集成有电池；所述储水槽可拆卸式安装于底座上位于中控台的外侧，储水槽的周侧设有下密封圈；所述抽真空机构的抽气口设于下密封圈的内测边沿；所述加热条设于底座上位于储水槽的外侧，加热条与集成芯片联接。

底座的边侧设有与集成芯片联接的充电口和与温度控制板联接的调温旋钮。

所述上翻盖的内侧对应中控台的位置为镂空结构、对应下密封圈的位置设有与下密封圈配合的上密封圈、对应加热条的位置设有耐热压条。

目前并未有专门适用于户外使用的便携式真空封口机，现有的真空封口机需要连接电源通电使用，并且由于其热封温度不可设置，因此只能配合特定材质的真空封口袋。这对于科研工作者在野外进行易腐败样品采集来说，使用极为不便利。因此需要一种携带方便、适合户外使用、并且不需要特制封口袋的真空封口机。

本发明真空封口机的工作原理为：翻起上翻盖，将贮存袋未密封的一侧开口放置在密封圈范围内，保证贮存袋开口的一侧完全在密封圈内后(凸起的中控台可起到限位作用)，合上上翻盖，上下密封圈接触。根据贮存袋的材质调节调温旋钮，点击操作按钮，开始抽真空，抽真空完毕后进行加热条对调温旋钮进行加热封口。

储水槽的作用是当样品中带有少量液体时，在抽真空时可能会有少量的液体被抽出，储水槽可用于容纳被抽出的液体。储水槽为可拆卸安装方式，方便装卸。

作为优选，所述抽真空机构包括微型真空泵以及与微型真空泵连接的抽气管和排气管；所述排气管通向底座外部；所述抽气管与抽气口连通。

微型真空泵抽为市购产品，其抽真空原理为：电机的圆周运动，通过机械装置使泵内部的隔膜做往复式运动，从而对固定容积的泵腔内的空气进行压缩、拉伸形成真空(负压)，在泵抽气口处与外界大气压产生压力差，在压力差的作用下，将气体压(吸)入泵腔，再从排气口排出。

作为优选，所述上翻盖的内侧和底座的顶面上分别设有相配合的卡扣和卡槽。底座的两个边侧设有锁扣。底座的底面设有散热口。

作为优选，所述底座的底部四角设有防滑橡胶垫。所述上密封圈和下密封圈为海绵材质。所述耐热压条为橡胶材质。所述上翻盖和底座使用环保工程ABS防水材料；电量显示屏和温度显示屏采用防水屏幕。

作为优选，所述调温旋钮设有四挡温度调节。

作为优选，所述上翻盖的活动角度设计为75°。

与现有技术对比，本发明的有益效果是：

(1)本发明将样品贮存于抽真空的贮存袋中，可隔绝空气，使得需氧微生物无法影响桑叶桑枝，可更好保存样品。在做同位素检测时，对于需要减少物质分馏的样品尤其有效，能够尽可能保留相关同位素信息。

(2)本发明制备的表面负载大叶黄杨叶挥发性油的纳米二氧化钛包覆的氧化小块体，用无纺布包裹后，放置在贮存袋中。其中，纳米二氧化钛本身具有无毒，抗菌能力强，抗菌范围广，抗菌效果持久的优点，能够有效的除去厌氧微生物。另一方面，当真空封口袋中桑叶桑枝有微量水分产生时，由于氧化钙具有出色的吸湿性，因此水分会被氧化钙迅速吸收。进一步的，氧化钙在吸水后释放出热量，导致材料表面升温，促进氧化钙表面吸附的具有杀菌功能的大叶黄杨叶挥发性油挥发，同时温度升高后纳米二氧化钛的抗菌活性也得到了增强，从而提高材料总体的杀菌效果(潮湿环境下容易滋生微生物，因此需要加强杀菌效果)，而当水分被吸收后，则氧化钙反应结束，不再放热，大叶黄杨叶挥发性油不被加速释放，从而起到长效杀菌的功能。

(3)本发明用无尘纸对采集的桑叶桑枝样品洁净处理时，对样品的破坏少，并且没有残留的微粒和线头，不会对样品的测试结果造成影响，用75％的酒精溶液擦拭，可以除去部分的微生物，并且75％的酒精溶液易挥发，不会残留在样品的表面。

(4)本发明的真空封口机结构紧凑，轻便易携带，并且可插电及电池供电两用，便于户外使用，可满足户外采集科研工作者采集一些特殊科研样品时需要真空包装的需求。此外还设有电量显示屏，便于信息交互。设有4档温度可调，可满足不同材质的贮存袋的封口要求，无需使用特质的封口袋，极大方便了户外采集工作者在收集样品时，可以针对不同体积的样品，选取合适其体积的不同材质的封口袋。

附图说明

图1是本发明真空封口机的一种结构示意图(上翻盖开启状态)；

图2是本发明真空封口机的一种外观结构示意图(上翻盖合上状态)；

图3是本发明真空封口机的一种底座内部结构示意图；

图4是本发明真空封口机的一种侧视图；

图5是本发明真空封口机的一种仰视图。

附图标记为：底座1、上翻盖2、中控台3、储水槽4、下密封圈5、加热条6、集成芯片7、温度控制板8、温度显示屏9、电量显示屏10、真空度检测感应器11、操作按钮12、抽气口13、充电口14、调温旋钮15、上密封圈16、耐热压条17、微型真空泵18、抽气管19、排气管20、卡扣21、卡槽22、锁扣23、防滑橡胶垫24、散热口25。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步的描述。

实施例1

1)取13g粒径为3cm左右的碳酸钙块体和7g纳米二氧化钛粉末，与4g去离子水以及0.06g分散剂一同加入到250ml氧化锆球磨罐中，用球磨机进行球磨30min(200r/min)，获得纳米二氧化钛包覆的碳酸钙块体；

2)将纳米二氧化钛包覆的碳酸钙块体放置在精密真空气氛炉中进行煅烧，其中温度设置为910℃。在升温阶段，升温速率为20℃/min，保温时间为60min，获得纳米二氧化钛包覆的氧化钙块体；

3)取干燥粉碎的大叶黄杨叶80g，装入到料筒中，放入超临界二氧化碳萃取装置萃取釜内，设置好参数(萃取压力为40MPa，萃取温度30℃，萃取流量20L/h)。萃取3h后，打开分离釜排料阀，收集萃取物。萃取物经减压蒸馏后分别以环己烷萃取，用N₂吹去溶剂，得到大叶黄杨叶挥发性油；

4)将步骤2)中获得的纳米二氧化钛包覆的氧化钙块体浸泡在步骤3)中获得的大叶黄杨叶挥发性油中3h，随后在室温下烘干，获得表面负载大叶黄杨叶挥发性油的纳米二氧化钛包覆的氧化钙块体；

5)取边长为5cm的聚丙烯材质的无纺布，将无纺布折成可盛物的袋状，将步骤4)中的材料放置在其中，利用抽真空机的加热功能将它热封，使其成为具有吸水后会放热触发抗菌效果的材料；

6)选取自产地采集的新鲜、色泽饱满、无虫蛀、无病斑的桑叶、桑枝，分别对其表面进行洁净处理；

7)选取20片新鲜、色泽饱满、无虫蛀、无病斑的桑叶、将桑枝折成大小适中的数段，选取尺寸大小合适的袋子，加入步骤5)所制备的材料，然后利用真空封口机进行真空封口处理。

实施例2

1)取12g粒径为2cm左右的碳酸钙块体和8g纳米二氧化钛粉末，5g去离子水以及0.04g分散剂加入到250ml氧化锆球磨罐中，用球磨机进行球磨30min(200r/min)，获得纳米二氧化钛包覆的碳酸钙块体；

2)将球磨后得到的纳米二氧化钛包覆的碳酸钙块体放置在精密真空气氛炉中进行煅烧，其中温度设置为850℃。在升温阶段，升温速率为30℃/min，保温时间为45min，获得纳米二氧化钛包覆的氧化钙块体；

3)取干燥粉碎的大叶黄杨叶90g，装入到料筒中，放入超临界二氧化碳萃取装置萃取釜内，设置好参数(萃取压力为45MPa，萃取温度30℃，萃取流量25L/h)。萃取3h后，打开分离釜排料阀，收集萃取物。萃取物经减压蒸馏后分别以环己烷萃取，用N₂吹去溶剂，得到大叶黄杨叶挥发性油；

4)将步骤2)中获得的纳米二氧化钛包覆的氧化钙块体浸泡在步骤3)中获得的大叶黄杨叶挥发性油中2h，随后在室温下烘干，获得表面负载大叶黄杨叶挥发性油的纳米二氧化钛包覆的氧化钙块体；

5)取边长为4cm的聚丙烯材质的无纺布，将无纺布折成可盛物的袋状，将步骤4)中的材料放置在其中，利用抽真空机的加热功能将它热封，使其成为具有吸水后会放热触发抗菌效果的材料；

6)选取自产地采集的新鲜、色泽饱满、无虫蛀、无病斑的桑叶、桑枝，分别对其表面进行洁净处理；

7)选取15片新鲜、色泽饱满、无虫蛀、无病斑的桑叶、将桑枝折成大小适中的数段，选取尺寸大小合适的袋子，加入步骤5)所制备的材料，然后利用真空封口机进行真空封口处理。

对比例1

1)选取自产地采集的新鲜、色泽饱满、无虫蛀、无病斑的桑叶，分别对其表面进行洁净处理；

2)对所采摘的桑叶立即进行烘干处理，再研磨成粉末，处理完毕后装在样品瓶中保存，用封口膜封住瓶盖与瓶口的连接处，隔绝空气；

对比例2

1)选取自产地采集的新鲜、色泽饱满、无虫蛀、无病斑的桑叶，分别对其表面进行洁净处理；

2)选取15片新鲜、色泽饱满、无虫蛀、无病斑的桑叶，选取尺寸大小合适的袋子，利用真空封口机进行真空封口处理，真空度达到-0.15MPa。

对比例3

1)取13g粒径为3cm左右的碳酸钙块体和7g纳米二氧化钛粉末，4g去离子水以及0.06g分散剂加入到250ml氧化锆球磨罐中，用球磨机进行球磨30min(200r/min)。

2)将球磨后得到的纳米二氧化钛包覆的碳酸钙块体放置在精密真空气氛炉中进行煅烧，其中温度设置为910℃。在升温阶段，升温速率为20℃/min，保温时间为60min，获得纳米二氧化钛包覆的氧化钙块体；

3)取干燥粉碎的大叶黄杨叶100g，装入到料筒中，放入超临界二氧化碳萃取装置萃取釜内，设置好参数(萃取压力为35MPa，萃取温度30℃，萃取流量20L/h)。萃取3h后，打开分离釜排料阀，收集萃取物。萃取物经减压蒸馏后分别以环己烷萃取，用N₂吹去溶剂，得到大叶黄杨叶挥发性油；

4)将步骤2)中获得的纳米二氧化钛包覆的氧化钙块体浸泡在步骤3)中获得的大叶黄杨叶挥发性油中3h，随后在室温下烘干，获得表面负载大叶黄杨叶挥发性油的纳米二氧化钛包覆的氧化钙块体；

5)取边长为5cm的聚丙烯材质的无纺布，将无纺布折成可盛物的袋状，将步骤4)中的材料放置在其中，利用抽真空机的加热功能将它热封，使其成为具有吸水后会放热触发抗菌效果的材料；

6)选取自产地采集的新鲜、色泽饱满、无虫蛀、无病斑的桑叶、桑枝，分别对其表面进行洁净处理；

7)选取20片新鲜、色泽饱满、无虫蛀、无病斑的桑叶、将桑枝折成大小适中的数段，选取尺寸大小合适的袋子，将步骤5)中的材料放置其中，然后用普通的自封袋进行保存。

对比例4

1)选取自产地采集的新鲜、色泽饱满、无虫蛀、无病斑的桑叶，分别对其表面进行洁净处理；

2)选取20片新鲜、色泽饱满、无虫蛀、无病斑的桑叶，选取尺寸大小合适的袋子，然后用普通的自封袋进行保存。

以上实施例或对比例采用用于文物检测样贮存的两用可调温真空封口机，如图1所示：包括底座1和与底座可翻转连接的上翻盖2。

其中，如图1所示，所述底座的顶面设有凸起的中控台3、储水槽4、下密封圈5和加热条6。图1和图3所示，所述中控台集成有集成芯片7以及与集成芯片联接的抽真空机构、温度控制板8、温度显示屏9、电量显示屏10、真空度检测感应器11和操作按钮12。所述集成芯片上集成有电池；所述储水槽可拆卸式安装于底座上位于中控台的外侧，储水槽的周侧设有下密封圈；所述抽真空机构的抽气口13设于下密封圈的内测边沿；所述加热条设于底座上位于储水槽的外侧，加热条与集成芯片联接。所述抽真空机构包括微型真空泵18以及与微型真空泵连接的抽气管19和排气管20；所述排气管通向底座外部；所述抽气管与抽气口连通。

如图4-5所示，底座的边侧设有与集成芯片联接的充电口14和与温度控制板联接的调温旋钮15(四挡温度调节)。底座的两个边侧还设有锁扣23。所述底座的底部四角设有防滑橡胶垫24，底座的底面还设有散热口25。

如图1-3所示，所述上翻盖的内侧对应中控台的位置为镂空结构、对应下密封圈的位置设有与下密封圈配合的上密封圈16、对应加热条的位置设有耐热压条17。所述上翻盖的内侧和底座的顶面上分别设有相配合的卡扣21和卡槽22。

其中，所述上密封圈和下密封圈为海绵材质。所述耐热压条为橡胶材质。

本实施例的工作原理为：翻起上翻盖，将贮存袋未密封的一侧开口放置在密封圈范围内，保证贮存袋开口的一侧完全在密封圈内后(凸起的中控台可起到限位作用)，合上上翻盖，上下密封圈接触。根据贮存袋的材质调节调温旋钮，点击操作按钮，开始抽真空，抽真空完毕后进行加热条对调温旋钮进行加热封口。

需要说明的是关于本实施例中的集成芯片、抽真空机构、温度控制板、温度显示屏、调控旋钮、电量显示屏、真空度检测感应器和操作按钮等部件以及相互之间的电路连接均为现有技术中常用的部件及电路连接关系。

储水槽的作用是当样品中带有少量液体时，在抽真空时可能会有少量的液体被抽出，储水槽可用于容纳被抽出的液体。储水槽为可拆卸安装方式，方便装卸。

本实施例的真空封口机的相关技术参数描述如下：额定电压220V，额定频率50Hz，额定功率220W，真空强度-50KPa，发热丝4mm，温度适用范围可从普通塑料袋至牛皮袋，包装尺寸300mm*120mm*80mm，封接长度长达20em，电池的电压为12V，容量为5000mAh，尺寸大小为95mm*60mm*18mm，稳定工作电流8A，最大工作电流10A，整体重量1.32kg。

以上所有实施例及对比例中的桑叶采自同一棵桑树(老熟情况差不多，从桑枝顶往下数第3叶)。对比例1的样品完成封装后一部分当天送去测试；实施例1，实施例2，对比例2，对比例3，对比例4中所贮存的桑叶样品，自然条件下(江南，5月)室内放置7天后，均进行与对比例1一样的烘干、研磨成粉末的操作后，随后与同样条件下放置同样天数的对比例1样品的另一部分一起送去统一进行C、N稳定同位素的测试，每个样测试5次，最后取平均值。其中对比例1的放置7天的样品所测数据我们以对比例5来表示。

以下是实施例和对比例的碳氮同位素的数据(其中对比例1的放置7天的样品所测数据以对比例5来表示)：

种类	δ<sup>13</sup>C	δ<sup>15</sup>N
			实施例1	-29.236±0.375	2.129±1.118
实施例2	-29.240±0.368	2.134±1.173
			对比例1	-29.243±0.379	2.135±1.212
对比例2	-28.924±0.723	2.528±3.981
			对比例3	-28.181±0.741	2.735±4.130
对比例4	-27.215±0.659	3.186±3.243
			对比例5	-29.241±0.387	2.217±1.176

对比例1为当天测试，所得的同位素数据是标准数值，最能体现当地的地理信息，保留完整的同位素信息，所以可以作为其他几个实施例和对比例的对照。从上表中可以看到，实施例1，2和对比例5的δ¹³C值和δ¹⁵N值与对比例1相比误差在0.007‰之内，而实施例1，2都采用真空贮存以及使用了抗菌材料，区别在于使用的抗菌材料的浓度不同，这说明本发明方案的效果显著，能够最大程度的保留样品产地的同位素信息。对比例2采用了真空贮存，但没有采用抗菌材料，而对比例3采用了抗菌材料，但是采用自封袋进行保存，可以看到样品的δ¹³C值在对比例2，3中趋于富集，对比例2与标准值的误差达到了0.3‰左右，对比例3与标准值的误差则达到了1.1‰左右。而δ¹⁵N值在对比例2，3中发生了贫化，对比例2，3的误差分别达到了0.4‰和0.6‰。说明在保存过程中，样品的碳氮同位素发生了分馏效应，样品所携带的产地同位素信息已经有所流失。而对比例4，既没有采用真空贮存，也没有使用抗菌材料。对比例4样品的δ¹³C值和δ¹⁵N值与标准值相比，误差分别达到了2‰和1‰，这在同位素分析中，属于巨大的误差，说明产地同位素信息流失较严重，对于科研分析有着巨大的影响。

本发明中所用原料、设备，若无特别说明，均为本领域的常用原料、设备；本发明中所用方法，若无特别说明，均为本领域的常规方法。

以上所述，仅是本发明的较佳实施例，并非对本发明作任何限制，凡是根据本发明技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、变更以及等效变换，均仍属于本发明技术方案的保护范围。

Claims (10)

1.一种针对碳氮同位素检测的桑叶及桑枝真空抗菌贮存方法，其特征在于包括以下步骤：

1）取碳酸钙块体和纳米二氧化钛粉末，与去离子水以及分散剂一同加入到氧化锆球磨罐中以200-400r/min转速球磨30-45min，获得纳米二氧化钛包覆的碳酸钙块体；其中，碳酸钙块体和纳米二氧化钛的质量比为（6-6.5）:（3.5-4），分散剂占原料总质量的0.2-0.3%，去离子水占原料总质量的20-25%；

2）将纳米二氧化钛包覆的碳酸钙块体置于精密真空气氛炉中进行煅烧；煅烧终温度为825-910℃，在升温阶段，升温速率为20-30℃/min，保温时间为30-60 min，获得纳米二氧化钛包覆的氧化钙块体；

3）取干燥粉碎的大叶黄杨叶，装入到料筒中，放入超临界二氧化碳萃取装置内萃取2-4h后，收集萃取物；萃取物经减压蒸馏后以有机萃取溶剂萃取，用N₂吹去溶剂，得到大叶黄杨叶挥发性油；

4）将步骤2）所得纳米二氧化钛包覆的氧化钙块体浸泡于步骤3）中所得大叶黄杨叶挥发性油中，随后待氧化钙块体干燥，获得表面负载大叶黄杨叶挥发性油的纳米二氧化钛包覆的氧化钙块体；

5）将步骤4）所得产物置于聚丙烯无纺布袋中，热封封口；

6）选取自产地采集的新鲜、色泽饱满、无虫蛀、无病斑的桑叶和桑枝，分别对其表面进行洁净处理；

7）将洁净处理后的桑叶和桑枝装入贮存袋中，加入步骤5）所得聚丙烯无纺布袋，然后利用真空封口机对贮存袋进行真空封口处理。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1）中，所述碳酸钙块体的粒径为2-3cm。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤3）中，所述萃取压力为35-45 MPa，萃取温度28-32 ℃，萃取流量15-25L/h。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤3）中，所述有机萃取溶剂为环己烷。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤4）中，浸泡时间为2-3h，在室温下使其成为干燥体。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤6）中，洁净处理所用的材料为无尘纸，洁净处理所用溶剂为75%的乙醇。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤7）中，贮存袋抽真空后的真空度为-0.15-0 MPa。

8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤7）中，所述真空封口机包括底座（1）和与底座可翻转连接的上翻盖（2）；

所述底座的顶面设有凸起的中控台（3）、储水槽（4）、下密封圈（5）和加热条（6）；所述中控台集成有集成芯片（7）以及与集成芯片联接的抽真空机构、温度控制板（8）、温度显示屏（9）、电量显示屏（10）、真空度检测感应器（11）和操作按钮（12）；所述集成芯片上集成有电池；所述储水槽可拆卸式安装于底座上位于中控台的外侧，储水槽的周侧设有下密封圈；所述抽真空机构的抽气口（13）设于下密封圈的内测边沿；所述加热条设于底座上位于储水槽的外侧，加热条与集成芯片联接；所述抽真空机构包括微型真空泵（18）以及与微型真空泵连接的抽气管（19）和排气管（20）；所述排气管通向底座外部；所述抽气管与抽气口连通；

底座的边侧设有与集成芯片联接的充电口（14）和与温度控制板联接的调温旋钮（15）；

所述上翻盖的内侧对应中控台的位置为镂空结构、对应下密封圈的位置设有与下密封圈配合的上密封圈（16）、对应加热条的位置设有耐热压条（17）。

9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述上翻盖的内侧和底座的顶面上分别设有相配合的卡扣（21）和卡槽（22）；底座的两个边侧设有锁扣（23）；底座的底部四角设有防滑橡胶垫（24）；底座的底面设有散热口（25）。

10.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述调温旋钮设有四挡温度调节。

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