CN111830259A - 一种α1微球蛋白测定试剂盒 - Google Patents

一种α1微球蛋白测定试剂盒 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种α1微球蛋白测定试剂盒及其制备方法，所述试剂盒包括试剂R1，所述试剂R1包括如下终浓度组分为：缓冲液50mmol/L～100mmol/L，促凝剂8g/L～12g/L，十二烷基氨基丙酸10g/L～15g/L，羧甲基纤维素钠0.5g/L～1g/L，二价金属盐15mM～25mM，无机盐0.1mol/L～0.2mol/L，防腐剂0.8g/L～1.2g/L，pH 6～8。该试剂盒能准确有效的提升中低值样本的测定，准确度高，与西门子测值比对，其偏差在10％以内；灵敏度高，灵敏度为0.12mg/L～0.14mg/L；精密度高，试剂盒精密度CV值为1.33％～1.75％。

Description

一种α1微球蛋白测定试剂盒
技术领域
本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种α1微球蛋白测定试剂盒。
背景技术
α1微球蛋白(α1-Microglobulin，简称α1-MG)广泛存在于人体各种体液及淋巴细胞膜表面，血液中的α1-MG以两种形式存在，即游离的α1-MG和与IgA结合的α1-MG(α1MG-IgA)。正常情况下，α1MG-IgA约占血液中总α1-MG的40％-70％，血液中免疫球蛋白水平对α1-MG及α1MG-IgA之间的比例有影响。血液中游离的α1-MG可自由通过肾小球滤过膜，95％-99％在肾近曲小管重吸收和代谢，只有微量从终尿排出；而结合型的α1-MG则不能通过正常的肾小球，其在正常人尿液中的浓度为零。
一般地，从蛋白结构上看，游离型的α1-MG的抗原决定簇均能被抗体特异性识别，而α1MG-IgA的结合面的抗原决定簇由于被遮盖不被暴露，无法与抗体有效结合，因此会使蛋白被不同程度的低估；而且在不同样本中结合型的α1-MG和游离型的α1-MG的比例不同，这就造成无法准确的测定样本中的α1-MG的浓度；更甚者，尿液样本中，结合型α1-MG由于肾损伤而通过肾小球，而且比例无法确定，这就造成尿液样本浓度比血液样本更难准确定量。
α1微球蛋白由167个氨基酸组成的糖蛋白，分子内72位点和169位点之间含一对二硫键的结构特征，而二硫键易受到还原剂影响断裂，导致蛋白多肽二级结构被破坏，蛋白原性降低，断裂效果受二硫键与还原剂浓度比的影响较大；联想到血液和尿液中含有较强还原剂尿素，尤其是尿液中，这就会导致血液和尿液样本低中浓度临床比对差距较大；α1-MG血液样本的参考范围一般是：10.0mg/L-30.0mg/L，尿液样本的参考范围是<10.0mg/L，所以中低端(0-30mg/L)测值准确影响临床判断，尤为重要，现有技术中的α1微球蛋白测定试剂盒的中低端(0-30mg/L)测值准确度普遍不高。
因此，如何开发一种提高血清和尿液低中值样本测值的准确性的α1微球蛋白测定试剂盒，成为亟待解决的技术问题。
发明内容
本发明目的是提供一种α1微球蛋白测定试剂盒，可提高血清和尿液低中值样本测值的准确性，在不影响试剂的灵敏度的前提下，能准确有效的提升中低值样本的测定，准确度高，与西门子测值比对，其偏差在10％以内；灵敏度高，灵敏度为0.12～0.14；精密度高，试剂盒精密度CV值为1.33～1.75。
为了实现上述目的，本发明提供了一种α1微球蛋白测定试剂盒，所述试剂盒包括试剂R1，所述试剂R1包括如下终浓度组分：缓冲液50mmol/L～100mmol/L，促凝剂8g/L～12g/L，十二烷基氨基丙酸10g/L～15g/L，羧甲基纤维素钠0.5g/L～1g/L，二价金属盐15mM～25mM，无机盐0.1mol/L～0.2mol/L，防腐剂0.8g/L～1.2g/L，pH 6～8。
进一步地，所述二价金属盐为硫酸镁或者硫酸锌中的至少一种。
进一步地，所述防腐剂为叠氮钠、PC300、CAA中的至少一种。
进一步地，所述缓冲液为MES、HEPES和柠檬酸中的一种。
进一步地，所述促凝剂为PEG4000、PEG6000、PEG8000、PEG20000中的至少一种。
进一步地，所述盐类物质为氯化钠和氯化钾中的至少一种。
进一步地，所述试剂盒还包括试剂R2，所述试剂R2的成分包括：60nm～120nm，终浓度为0.25％～0.4％聚苯乙烯羧基微球，终浓度为20mM～50mM缓冲液、使用浓度为0.75％～1％的EDC、终浓度为20ml/L～25ml/L的α1微球蛋白多克隆抗体、封闭剂和R2储存液，所述封闭剂为浓度18％～20％BSA与浓度0.8mol/L～1.2mol/L甘氨酸的混合物；所述R2储存液包含50mM～100mM缓冲液、4％～6％的保护剂和0.095％～0.1％防腐剂。
进一步地，所述试剂盒还包括不同浓度梯度的α1-MG校准品，所述α1-MG校准品包括α1-MG和基质液，所述基质液包括磷酸盐缓冲液，EDTA二钠或EDTA二钾，枸橼酸钠，肝素钠或肝素锂，尿素，尿酸，海藻糖，BSA，盐类物质，氯化钾中的至少一种。
进一步地，所述α1-MG校准品中α1-MG浓度梯度为：0.00，15.00，30.00，75.00，150.00，300.00mg/L。
本发明还提供了一种α1微球蛋白测定试剂盒的制备方法，采用所述的配方配制而得。
本发明实施例中的一个或多个技术方案，至少具有如下技术效果或优点：
本发明提供的一种α1微球蛋白测定试剂盒，通过高浓度十二烷基氨基丙酸的引入，在不受二价金属离子的影响的基础上，使得结合型的α1-MG中的α1-MG和IgA非共价键分开，充分暴露其结合面的抗原决定簇，同时用羧甲基纤维素钠来稳定蛋白，十二烷基氨基丙酸和羧甲基纤维素钠协同作用使得蛋白充分暴露其结合面的抗原决定簇；引入适当的二价金属盐氧化剂，中和血清和尿液样本的还原性物质尿素，同时保持试剂R1的pH 6～8，可以增加试剂灵敏度，使α1微球蛋白维系二级结构，较高的保持蛋白原性，使得低中值样本的测值更加精准。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作一简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其它的附图。
图1为本发明实施例1提供的一种α1微球蛋白测定试剂盒的校准曲线图。
具体实施方式
下文将结合具体实施方式和实施例，具体阐述本发明，本发明的优点和各种效果将由此更加清楚地呈现。本领域技术人员应理解，这些具体实施方式和实施例是用于说明本发明，而非限制本发明。
在整个说明书中，除非另有特别说明，本文使用的术语应理解为如本领域中通常所使用的含义。因此，除非另有定义，本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域技术人员的一般理解相同的含义。若存在矛盾，本说明书优先。
除非另有特别说明，本发明中用到的各种原材料、试剂、仪器和设备等，均可通过市场购买获得或者可通过现有方法获得。
本申请实施例的技术方案为解决上述技术问题，总体思路如下：
根据本发明一种典型的实施方式，提供一种α1微球蛋白测定试剂盒，所述试剂盒包括试剂R1，所述试剂R1包括的终浓度组分为：缓冲液50mmol/L～100mmol/L，促凝剂8g/L～12g/L，十二烷基氨基丙酸10g/L～15g/L，羧甲基纤维素钠0.5g/L～1g/L，二价金属盐15mM～25mM，无机盐0.1mol/L～0.2mol/L，防腐剂0.8g/L～1.2g/L，pH 6～8。
本发明经过试验发现，高浓度十二烷基氨基丙酸，在不受二价金属离子的影响的基础上，使得结合型的α1-MG中的α1-MG和IgA非共价键分开，充分暴露其结合面的抗原决定簇，同时羧甲基纤维素钠来稳定蛋白，十二烷基氨基丙酸和羧甲基纤维素钠协同使得蛋白充分暴露其结合面的抗原决定簇；引入适当的二价金属盐氧化剂，中和血清和尿液样本的还原性物质尿素，同时保持试剂R1的pH 6～8，可以增加试剂灵敏度，使α1微球蛋白维系二级结构，较高的保持蛋白原性，使得低中值样本的测值更加精准。
若所述十二烷基氨基丙酸的浓度小于10g/L，分散效果不理想，临床比对结果偏差较大不利影响；若所述十二烷基氨基丙酸的浓度大于15g/L，对试剂线性性能会产生不利影响。
若所述羧甲基纤维素钠的浓度小于0.5g/L，作用不明显，低值样本出现零值；若所述羧甲基纤维素钠的浓度大于1g/L，使试剂线性不足。
若所述二价金属盐的浓度若小于15mM，中和效果不足以抵消尿素的还原性不利影响；若大于25mM，则会出现非特异结合，空白反应为正值；
试剂R1的pH小于6，试剂盒线性不足，出现非特异结合不利影响；大于8，R1试剂本身不稳定响；
作为一种可选的实施方式，所述二价金属盐为硫酸镁或者硫酸锌中的至少一种。所述二价金属盐选用硫酸镁或者硫酸锌的原因在于：二价金属属于弱氧化剂，具有弱氧化性，能够中和还原剂且不对样本蛋白产生影响，而同类型的亚铁离子和铜离子会使试剂1附带颜色，影响外观；
作为一种可选的实施方式，所述防腐剂为叠氮钠、PC300、CAA中的至少一种。防腐剂主要起到防腐作用。
作为一种可选的实施方式，所述缓冲液为MES、HEPES和柠檬酸中的一种。所述MES、HEPES和柠檬酸有效缓冲范围在6.5～7.0。
作为一种可选的实施方式，所述促凝剂为PEG4000、PEG6000、PEG8000、PEG20000中的至少一种。促凝剂主要其促凝的作用。
所述盐类物质为氯化钠和氯化钾中的至少一种。所述盐类物质可使得蛋白保持较好的活性。
作为一种可选的实施方式，所述试剂盒还包括试剂R2，所述试剂R2的成分包括：60nM～120nM聚苯乙烯羧基微球、缓冲液、EDC、α1微球蛋白多克隆抗体、封闭剂和R2储存液，所述封闭剂为BSA与甘氨酸的混合物；所述聚苯乙烯微球终浓度0.25-0.4％；缓冲液浓度为20mM～50mM；EDC现配现用，使用浓度为0.75％～1％；α1微球蛋白多克隆抗体(Dako厂家)的终浓度为20ml/L～25ml/L；封闭剂BSA浓度18％～20％，甘氨酸浓度0.8mol/L～1.2mol/L；所述储存液包含50mM～100mM缓冲液、4％～6％的保护剂和0.095％～0.1％防腐剂。
所述试剂盒还包括不同浓度梯度的α1-MG校准品，所述α1-MG校准品包括α1-MG和基质液，所述基质液包括磷酸盐缓冲液，EDTA二钠或EDTA二钾，枸橼酸钠，肝素钠或肝素锂，尿素，尿酸，海藻糖，BSA，盐类物质，氯化钾中的至少一种。
所述α1-MG校准品中α1-MG浓度梯度为：0.00，15.00，30.00，75.00，150.00，300.00mg/L。所述α1-MG校准品的校准曲线如图1所示。
根据本发明一种典型的实施方式，提供一种α1微球蛋白测定试剂盒的制备方法，采用所述的配方配制而得。
本发明的一种α1微球蛋白测定试剂盒的检测原理为：
免疫比浊法是可溶性抗原、抗体在液相中特意结合，产生一定大小的复合物，形成光的折射或吸收，测定这种折射或吸收后的透射光或散射光作为计算单位，本发明采用吸收后的透射光作为计算单位。在抗原过量情况下，与待测样品中相应的Ig发生抗原-抗体反应，形成可溶性复合物，使反应介质的浊度发生改变，利用分光光度计测量被吸收的量，读数以吸收单位(A)或OD值表示，待测样品中的抗原含量与吸光度呈正比，待测物中的Ig含量可通过标准曲线计算得出。
试剂R1：样本处理液，主要作用是为了稀释样本，同时处理掉样本中的背景干扰，提高检测结果的准确性，本发明对试剂R1进行了优化，在不影响试剂的灵敏度的前提下，能准确有效的提升中低值样本的测定。
试剂R2：核心反应组分，包括包被抗体的胶乳微球颗粒、表面活性剂、防腐剂等常用组分。
校准品\质控品：主要是对试剂进行测试前的质量控制，常为液体或干粉状态。用于获得标准曲线。
本发明的一种α1微球蛋白测定试剂盒的使用方法为：
将α1微球蛋白试剂盒，用全自动生化仪进行测试，参数如下，在570nm主波长下，先加入样本3ul，再加入300ul试剂1,37℃孵育约5min，加入100ul试剂2，约30s读取吸光度A1，约4min后读取吸光度A2，计算吸光度的差值△A＝A2-A1；使用配套校准品进行多点定标，得到定标曲线并进行线性拟合，则样本浓度(单位mg/L)可通过其检测的吸光度差值在定标曲线上计算得到。
下面将结合实施例、对比例及实验数据对本申请的α1微球蛋白测定试剂盒的制备方法进行详细说明。
S1、各实施例、各对比例的R2试剂的制备均为：
取20mL 60nm-120nm聚苯乙烯羧基微球(JSR LifeSciences公司)于EP管，加80mL50mM pH5.0 MES缓冲液，加入1％EDC(赛默飞)0.5mL，37℃搅拌15min，加入2mlα1微球蛋白多克隆抗体(Dako)，在37℃搅拌2h，加入1mL 10％BSA(罗氏)与4％甘氨酸(国药)混合所得封闭剂，15000rpm离心分离30min，用适量R2储存液超声重悬得试剂R2；
S2、各实施例、各对比例的R1试剂的配方如表1所示。
表1
Figure BDA0002573875190000051
Figure BDA0002573875190000061
S3、各实施例、各对比例的α1-MG校准品包括α1-MG和基质液，所述基质液包括磷酸盐缓冲液，EDTA二钠或EDTA二钾，枸橼酸钠，肝素钠或肝素锂，尿素，尿酸，海藻糖，BSA，盐类物质，氯化钾中的至少一种。
试验例
使用各实施例和各对比例的α1微球蛋白测定试剂盒进行性能评价：
1、临床样本比对评价：使用15例血液样本，15例尿液样本，与西门子BNIIα1试剂进行比对，计算相对偏差，结果如表2-表4所示：
表2-临床样本比对评价数据(单位：mg/L)
Figure BDA0002573875190000071
Figure BDA0002573875190000081
表3-临床样本比对评价数据
Figure BDA0002573875190000082
Figure BDA0002573875190000091
表4-临床样本比对评价数据
Figure BDA0002573875190000092
由表2-表4的数据可知：
对比例1中，不含羧甲基纤维素钠，样本偏差最大高达29.86％；
对比例2中，不含十二烷基氨基丙酸，样本偏差最大高达29.22％；
对比例3中，将实施例1中的“十二烷基氨基丙酸+羧甲基纤维素钠”替换为了“Triton-100”样本偏差最大高达28.97％；
对比例4中，十二烷基氨基丙酸5g/L+羧甲基纤维素钠0.1g/L，不在本发明“十二烷基氨基丙酸10g/L～15g/L，羧甲基纤维素钠0.5g/L～1g/L”的范围内，样本偏差最大高达36.35％；
对比例5中，十二烷基氨基丙酸20g/L+羧甲基纤维素钠2g/L，不在本发明“十二烷基氨基丙酸10g/L～15g/L，羧甲基纤维素钠0.5g/L～1g/L”的范围内，样本偏差最大高达39.55％；
对比例6中，不含二价金属盐硫酸镁，样本偏差最大高达53.31％；
对比例7中，盐硫酸镁的终浓度为10mM，不在本发明的“二价金属盐15mM～25mM”范围内，样本偏差最大高达36.23％；
对比例8中，盐硫酸镁的终浓度为30mM，不在本发明的“二价金属盐15mM～25mM”范围内，样本偏差最大高达34.94％；
对比例9中，试剂R1的pH为5，不在本发明的“pH 6～8”的范围内，样本偏差最大高达38.83％；
对比例10的数据不用测，试剂R1的外观直接可以观察到沉淀产生，不符合外观性能标准，生化仪测试吸光度超限。
实施例1-4的试剂盒的标准偏差均在10％以内，准确度高。
表2-表4的数据表明，十二烷基氨基丙酸10g/L～15g/L，羧甲基纤维素钠0.5g/L～1g/L、二价金属盐氧化剂15mM～25mM、pH 6～8同时满足要求时，才能达到准确度。
2、灵敏度评价：以5％人血清白蛋白为空白样本，重复测定20次，计算平均值X和标准差SD，计算均值+2SD即为灵敏度值，结果如表5所示。
表5灵敏度评价数据
组别 均值(mg/L) 标准差(mg/L) 灵敏度(mg/L)
对比例1 0.59 0.048 0.68
对比例2 0.41 0.028 0.47
对比例3 0.39 0.021 0.43
对比例4 0.39 0.020 0.43
对比例5 0.19 0.015 0.22
对比例6 0.38 0.020 0.42
对比例7 0.25 0.018 0.29
对比例8 0.12 0.011 0.15
对比例9 0.15 0.025 0.20
对比例10 有沉淀，无法进行测试
实施例1 0.13 0.008 0.14
实施例2 0.12 0.006 0.13
实施例3 0.10 0.007 0.12
实施例4 0.10 0.007 0.12
由表5的数据可知：
对比例1中，不含羧甲基纤维素钠，标准差为0.048mg/L，灵敏度为0.68mg/L；
对比例2中，不含十二烷基氨基丙酸，标准差为0.028mg/L，灵敏度为0.47mg/L；
对比例3中，将实施例1中的“十二烷基氨基丙酸+羧甲基纤维素钠”替换为了“Triton-100”，标准差为0.021mg/L，灵敏度为0.43mg/L；
对比例4中，十二烷基氨基丙酸5g/L+羧甲基纤维素钠0.1g/L，不在本发明“十二烷基氨基丙酸10g/L～15g/L，羧甲基纤维素钠0.5g/L～1g/L”的范围内，标准差为0.020mg/L，灵敏度为0.43mg/L；
对比例5中，十二烷基氨基丙酸20g/L+羧甲基纤维素钠2g/L，不在本发明“十二烷基氨基丙酸10g/L～15g/L，羧甲基纤维素钠0.5g/L～1g/L”的范围内，标准差为0.015mg/L，灵敏度为0.22mg/L；
对比例6中，不含二价金属盐硫酸镁，标准差为0.020mg/L，灵敏度为0.42mg/L；
对比例7中，盐硫酸镁的终浓度为10mM，不在本发明的“二价金属盐15mM～25mM”范围内，标准差为0.018mg/L，灵敏度为0.29mg/L；
对比例8中，盐硫酸镁的终浓度为30mM，不在本发明的“二价金属盐15mM～25mM”范围内，标准差为0.011mg/L，灵敏度为0.15mg/L；
对比例9中，试剂R1的pH为5，不在本发明的“pH 6～8”的范围内，标准差为0.048mg/L，灵敏度为0.68mg/L；
对比例10中，试剂R1的pH为9，不在本发明的“pH 6～8”的范围内，试剂R1的外观直接可以观察到沉淀产生，不符合外观性能标准，生化仪测试吸光度超限；
实施例1-4的试剂盒标准差为0.006～0.008mg/L，灵敏度为0.12～0.14mg/L，实施例1-4的灵敏度高于对比例1-10。
表5的数据表明，十二烷基氨基丙酸10g/L～15g/L，羧甲基纤维素钠0.5g/L～1g/L、二价金属盐氧化剂15mM～25mM、pH 6～8同时满足要求时，才能达到较高的灵敏度。
3、低值精密度：取尿液样本10mg/L左右值(α1-MG尿液参考范围为12mg/L)样本10次，计算精密度CV，结果如表6所示。
表6-精密度评价数据
Figure BDA0002573875190000111
Figure BDA0002573875190000121
由表6的数据可知：
对比例1中，不含羧甲基纤维素钠，精密度CV值为4.69％；
对比例2中，不含十二烷基氨基丙酸，精密度CV值为4.37％；
对比例3中，将实施例1中的“十二烷基氨基丙酸+羧甲基纤维素钠”替换为了“Triton-100”，精密度CV值为3.23％；
对比例4中，十二烷基氨基丙酸5g/L+羧甲基纤维素钠0.1g/L，不在本发明“十二烷基氨基丙酸10g/L～15g/L，羧甲基纤维素钠0.5g/L～1g/L”的范围内，精密度CV值为3.66％；
对比例5中，十二烷基氨基丙酸20g/L+羧甲基纤维素钠2g/L，不在本发明“十二烷基氨基丙酸10g/L～15g/L，羧甲基纤维素钠0.5g/L～1g/L”的范围内，精密度CV值为4.53；
对比例6中，不含二价金属盐硫酸镁，精密度CV值为4.44％；
对比例7中，盐硫酸镁的终浓度为10mM，不在本发明的“二价金属盐15mM～25mM”范围内，精密度CV值为3.49％；
对比例8中，盐硫酸镁的终浓度为30mM，不在本发明的“二价金属盐15mM～25mM”范围内，精密度CV值为2.68％；
对比例9中，试剂R1的pH为5，不在本发明的“pH 6～8”的范围内，精密度CV值为3.84％；
对比例10中，试剂R1的pH为9，不在本发明的“pH 6～8”的范围内，试剂R1的外观直接可以观察到沉淀产生，不符合外观性能标准，生化仪测试吸光度超限；
实施例1-4的试剂盒精密度CV值为1.33～1.75，实施例1-4的精密度高于对比例1-10。
表6的数据表明，十二烷基氨基丙酸10g/L～15g/L，羧甲基纤维素钠0.5g/L～1g/L、二价金属盐氧化剂15mM～25mM、pH 6～8同时满足要求时，才能达到较高的精密度。
综上可知，实施例1-4的临床血液样本和尿液样本与西门子测值比对，其偏差在10％以内，对比例1-10中低端测值偏差较大；同时，实施例的灵敏度、精密度比对比例更好。表明十二烷基氨基丙酸10g/L～15g/L，羧甲基纤维素钠0.5g/L～1g/L、二价金属盐氧化剂15mM～25mM、pH 6～8同时满足要求时，才能达到较高的准确度、灵敏度和精密度。十二烷基氨基丙酸和羧甲基纤维素钠协同作用使得蛋白充分暴露其结合面的抗原决定簇；二价金属盐氧化剂，中和血清和尿液样本的还原性物质尿素，同时保持试剂R1的pH 6～8，可以增加试剂灵敏度，使α1微球蛋白维系二级结构，较高的保持蛋白原性，使得低中值样本的测值更加精准。
最后，还需要说明的是，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。
尽管已描述了本发明的优选实施例，但本领域内的技术人员一旦得知了基本创造性概念，则可对这些实施例作出另外的变更和修改。所以，所附权利要求意欲解释为包括优选实施例以及落入本发明范围的所有变更和修改。
显然，本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样，倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变型在内。

Claims (10)

1.一种α1微球蛋白测定试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括试剂R1，所述试剂R1包括如下终浓度组分：
缓冲液50mmol/L～100mmol/L，促凝剂8g/L～12g/L，十二烷基氨基丙酸10g/L～15g/L，羧甲基纤维素钠0.5g/L～1g/L，二价金属盐15mM～25mM，无机盐0.1mol/L～0.2mol/L，防腐剂0.8g/L～1.2g/L，pH 6～8。
2.根据权利要求1所述的一种α1微球蛋白测定试剂盒，其特征在于，所述二价金属盐为硫酸镁或者硫酸锌中的至少一种。
3.根据权利要求1所述的一种α1微球蛋白测定试剂盒，其特征在于，所述防腐剂为叠氮钠、PC300、CAA中的至少一种。
4.根据权利要求1所述的一种α1微球蛋白测定试剂盒，其特征在于，所述缓冲液为MES、HEPES和柠檬酸中的一种。
5.根据权利要求1所述的一种α1微球蛋白测定试剂盒，其特征在于，所述促凝剂为PEG4000、PEG6000、PEG8000、PEG20000中的至少一种。
6.根据权利要求1所述的一种α1微球蛋白测定试剂盒，其特征在于，所述盐类物质为氯化钠和氯化钾中的至少一种。
7.根据权利要求1所述的一种α1微球蛋白测定试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括试剂R2，所述试剂R2的成分包括：60nm～120nm，终浓度为0.25％～0.4％聚苯乙烯羧基微球，终浓度为20mM～50mM缓冲液、使用浓度为0.75％～1％的EDC、终浓度为20ml/L～25ml/L的α1微球蛋白多克隆抗体、封闭剂和R2储存液，所述封闭剂为浓度18％～20％BSA与浓度0.8mol/L～1.2mol/L甘氨酸的混合物；所述R2储存液包含50mM～100mM缓冲液、4％～6％的保护剂和0.095％～0.1％防腐剂。
8.根据权利要求1所述的一种α1微球蛋白测定试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括不同浓度梯度的α1-MG校准品，所述α1-MG校准品包括α1-MG和基质液，所述基质液包括磷酸盐缓冲液，EDTA二钠或EDTA二钾，枸橼酸钠，肝素钠或肝素锂，尿素，尿酸，海藻糖，BSA，盐类物质，氯化钾中的至少一种。
9.根据权利要求7所述的一种α1微球蛋白测定试剂盒，其特征在于，所述α1-MG校准品中α1-MG浓度梯度为：0.00，15.00mg/L，30.00mg/L，75.00mg/L，150.00mg/L，300.00mg/L。
10.一种α1微球蛋白测定试剂盒的制备方法，其特征在于，采用权利要求1-9任一所述的配方配制而得。
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