CN111826309A - 一种液体生物营养菌剂及其制备方法 - Google Patents
一种液体生物营养菌剂及其制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN111826309A CN111826309A CN202010614016.7A CN202010614016A CN111826309A CN 111826309 A CN111826309 A CN 111826309A CN 202010614016 A CN202010614016 A CN 202010614016A CN 111826309 A CN111826309 A CN 111826309A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- phage
- lysogenic
- liquid
- strain
- microbial inoculum
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 239000007788 liquid Substances 0.000 title claims abstract description 54
- 239000002068 microbial inoculum Substances 0.000 title claims abstract description 33
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 title claims description 14
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title abstract description 17
- 230000001320 lysogenic effect Effects 0.000 claims abstract description 54
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims abstract description 31
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims abstract description 22
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 claims abstract description 9
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims abstract description 5
- 241000589517 Pseudomonas aeruginosa Species 0.000 claims abstract description 5
- 241000191940 Staphylococcus Species 0.000 claims abstract description 5
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims abstract 6
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 21
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 claims description 20
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 16
- 239000002562 thickening agent Substances 0.000 claims description 12
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 claims description 11
- 230000001188 anti-phage Effects 0.000 claims description 10
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 claims description 10
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 claims description 10
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims description 9
- 241000193744 Bacillus amyloliquefaciens Species 0.000 claims description 9
- 240000006024 Lactobacillus plantarum Species 0.000 claims description 9
- 235000013965 Lactobacillus plantarum Nutrition 0.000 claims description 9
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims description 9
- 229940072205 lactobacillus plantarum Drugs 0.000 claims description 9
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 9
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims description 8
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims description 8
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 6
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 6
- 230000012010 growth Effects 0.000 claims description 6
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 6
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 claims description 5
- 238000000576 coating method Methods 0.000 claims description 5
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 5
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K potassium phosphate Substances [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 1-methyl-2,4-dioxo-1,3-diazinane-5-carboximidamide Chemical compound CN1CC(C(N)=N)C(=O)NC1=O IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- CHHHXKFHOYLYRE-UHFFFAOYSA-M 2,4-Hexadienoic acid, potassium salt (1:1), (2E,4E)- Chemical compound [K+].CC=CC=CC([O-])=O CHHHXKFHOYLYRE-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 3
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 3
- BCZXFFBUYPCTSJ-UHFFFAOYSA-L Calcium propionate Chemical compound [Ca+2].CCC([O-])=O.CCC([O-])=O BCZXFFBUYPCTSJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 3
- 102000011632 Caseins Human genes 0.000 claims description 3
- 108010076119 Caseins Proteins 0.000 claims description 3
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 claims description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 3
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 claims description 3
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 claims description 3
- HDSBZMRLPLPFLQ-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol alginate Chemical compound OC1C(O)C(OC)OC(C(O)=O)C1OC1C(O)C(O)C(C)C(C(=O)OCC(C)O)O1 HDSBZMRLPLPFLQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims description 3
- 244000275012 Sesbania cannabina Species 0.000 claims description 3
- 244000269722 Thea sinensis Species 0.000 claims description 3
- 235000010489 acacia gum Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000001785 acacia senegal l. willd gum Substances 0.000 claims description 3
- 235000010419 agar Nutrition 0.000 claims description 3
- 230000002421 anti-septic effect Effects 0.000 claims description 3
- 235000015278 beef Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 claims description 3
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 235000010331 calcium propionate Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000004330 calcium propionate Substances 0.000 claims description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 3
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 3
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 3
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 3
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 claims description 3
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 claims description 3
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 3
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 claims description 3
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 claims description 3
- 150000008442 polyphenolic compounds Chemical class 0.000 claims description 3
- 235000013824 polyphenols Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000004302 potassium sorbate Substances 0.000 claims description 3
- 235000010241 potassium sorbate Nutrition 0.000 claims description 3
- 229940069338 potassium sorbate Drugs 0.000 claims description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 3
- 239000000770 propane-1,2-diol alginate Substances 0.000 claims description 3
- 235000010409 propane-1,2-diol alginate Nutrition 0.000 claims description 3
- 235000010232 propyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000004405 propyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 claims description 3
- QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N propylparaben Chemical compound CCCOC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000008213 purified water Substances 0.000 claims description 3
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims description 3
- 235000010413 sodium alginate Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000000661 sodium alginate Substances 0.000 claims description 3
- 229940005550 sodium alginate Drugs 0.000 claims description 3
- WXMKPNITSTVMEF-UHFFFAOYSA-M sodium benzoate Chemical compound [Na+].[O-]C(=O)C1=CC=CC=C1 WXMKPNITSTVMEF-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 3
- 235000010234 sodium benzoate Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000004299 sodium benzoate Substances 0.000 claims description 3
- 229940080237 sodium caseinate Drugs 0.000 claims description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 3
- 235000013616 tea Nutrition 0.000 claims description 3
- 238000005303 weighing Methods 0.000 claims description 3
- JDLKFOPOAOFWQN-VIFPVBQESA-N Allicin Natural products C=CCS[S@](=O)CC=C JDLKFOPOAOFWQN-VIFPVBQESA-N 0.000 claims description 2
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 claims description 2
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 claims description 2
- JDLKFOPOAOFWQN-UHFFFAOYSA-N allicin Chemical compound C=CCSS(=O)CC=C JDLKFOPOAOFWQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 235000010081 allicin Nutrition 0.000 claims description 2
- 229910000396 dipotassium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 235000019797 dipotassium phosphate Nutrition 0.000 claims description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 claims description 2
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 2
- 239000002689 soil Substances 0.000 abstract description 44
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 abstract description 15
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 13
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 abstract description 11
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 abstract description 10
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 abstract description 6
- 230000002411 adverse Effects 0.000 abstract description 3
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 abstract description 3
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 abstract description 3
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 abstract description 3
- 230000008635 plant growth Effects 0.000 abstract description 3
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 abstract description 3
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 abstract description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 15
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 7
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 5
- 239000003337 fertilizer Substances 0.000 description 5
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 3
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000003124 biologic agent Substances 0.000 description 2
- 230000035558 fertility Effects 0.000 description 2
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 238000009335 monocropping Methods 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 2
- 235000004252 protein component Nutrition 0.000 description 2
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- 206010000210 abortion Diseases 0.000 description 1
- 231100000176 abortion Toxicity 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 239000003570 air Substances 0.000 description 1
- 210000003578 bacterial chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 244000000005 bacterial plant pathogen Species 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 238000007598 dipping method Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 238000009313 farming Methods 0.000 description 1
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 230000002045 lasting effect Effects 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;potassium Chemical compound [K].OP(O)(O)=O PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 239000003516 soil conditioner Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 1
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 1
- 238000009423 ventilation Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
- A01N63/20—Bacteria; Substances produced thereby or obtained therefrom
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
- A01N63/20—Bacteria; Substances produced thereby or obtained therefrom
- A01N63/22—Bacillus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
- A01N63/40—Viruses, e.g. bacteriophages
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C05—FERTILISERS; MANUFACTURE THEREOF
- C05B—PHOSPHATIC FERTILISERS
- C05B7/00—Fertilisers based essentially on alkali or ammonium orthophosphates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C05—FERTILISERS; MANUFACTURE THEREOF
- C05G—MIXTURES OF FERTILISERS COVERED INDIVIDUALLY BY DIFFERENT SUBCLASSES OF CLASS C05; MIXTURES OF ONE OR MORE FERTILISERS WITH MATERIALS NOT HAVING A SPECIFIC FERTILISING ACTIVITY, e.g. PESTICIDES, SOIL-CONDITIONERS, WETTING AGENTS; FERTILISERS CHARACTERISED BY THEIR FORM
- C05G3/00—Mixtures of one or more fertilisers with additives not having a specially fertilising activity
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C05—FERTILISERS; MANUFACTURE THEREOF
- C05G—MIXTURES OF FERTILISERS COVERED INDIVIDUALLY BY DIFFERENT SUBCLASSES OF CLASS C05; MIXTURES OF ONE OR MORE FERTILISERS WITH MATERIALS NOT HAVING A SPECIFIC FERTILISING ACTIVITY, e.g. PESTICIDES, SOIL-CONDITIONERS, WETTING AGENTS; FERTILISERS CHARACTERISED BY THEIR FORM
- C05G3/00—Mixtures of one or more fertilisers with additives not having a specially fertilising activity
- C05G3/60—Biocides or preservatives, e.g. disinfectants, pesticides or herbicides; Pest repellants or attractants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C05—FERTILISERS; MANUFACTURE THEREOF
- C05G—MIXTURES OF FERTILISERS COVERED INDIVIDUALLY BY DIFFERENT SUBCLASSES OF CLASS C05; MIXTURES OF ONE OR MORE FERTILISERS WITH MATERIALS NOT HAVING A SPECIFIC FERTILISING ACTIVITY, e.g. PESTICIDES, SOIL-CONDITIONERS, WETTING AGENTS; FERTILISERS CHARACTERISED BY THEIR FORM
- C05G3/00—Mixtures of one or more fertilisers with additives not having a specially fertilising activity
- C05G3/80—Soil conditioners
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C05—FERTILISERS; MANUFACTURE THEREOF
- C05G—MIXTURES OF FERTILISERS COVERED INDIVIDUALLY BY DIFFERENT SUBCLASSES OF CLASS C05; MIXTURES OF ONE OR MORE FERTILISERS WITH MATERIALS NOT HAVING A SPECIFIC FERTILISING ACTIVITY, e.g. PESTICIDES, SOIL-CONDITIONERS, WETTING AGENTS; FERTILISERS CHARACTERISED BY THEIR FORM
- C05G5/00—Fertilisers characterised by their form
- C05G5/20—Liquid fertilisers
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
- C09K—MATERIALS FOR MISCELLANEOUS APPLICATIONS, NOT PROVIDED FOR ELSEWHERE
- C09K17/00—Soil-conditioning materials or soil-stabilising materials
- C09K17/14—Soil-conditioning materials or soil-stabilising materials containing organic compounds only
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
- C09K—MATERIALS FOR MISCELLANEOUS APPLICATIONS, NOT PROVIDED FOR ELSEWHERE
- C09K2101/00—Agricultural use
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2795/00—Bacteriophages
- C12N2795/00011—Details
- C12N2795/00031—Uses of virus other than therapeutic or vaccine, e.g. disinfectant
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Pest Control & Pesticides (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Virology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Agronomy & Crop Science (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Dentistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Soil Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- General Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明提出了一种液体生物营养菌剂，包括微生物混合菌剂、溶原性噬菌体和液体基质，微生物混合菌剂中的各菌种均选用抗噬菌体菌株，微生物混合菌剂、溶原性噬菌体和液体基质的质量百分比分别为，微生物混合菌剂0.5％～5％和溶原性噬菌体0.3％～0.5％，余量为液体基质，溶原性噬菌体为溶原性大肠杆菌噬菌体、溶原性绿脓杆菌噬菌体和溶原性葡萄球菌噬菌体；本发明的生物制剂投入土壤后，其中的溶原性噬菌体裂解释放出广谱杀菌的噬菌体，侵染土壤内原生的病原菌并使其细胞破裂死亡，进而大幅减少了土壤内病原菌的菌群数量，有效降低了土壤毒性对植物生长的不良影响，微生物混合菌剂的有益菌种则能够快速的增殖并占领土壤环境，形成优势菌种以发挥改善土壤的效力。
Description
技术领域
本发明涉及微生物制剂技术领域，尤其是一种液体生物营养菌剂及其制备方法。
背景技术
我国传统的农耕普遍采用作物重茬方式种植，致使土壤中积累大量的有机或无机毒素，以及各种致病菌群，影响农作物产量。
为了增加土壤肥力，并改善土壤结构，以消除土壤日益板结和盐碱化的状况，帮助作物增产并提高作物抗病免疫力，近几年技术人员研究以微生物有益菌群为土壤改良剂，取得了良好的效果。
微生物对土壤进行改良的作用机理是通过调节土壤微生物活动的过程，扩大有益菌种的菌群数量，以加强有益微生物参与土壤内有机质的合成和分解并释放养分的作用，将地壳中有限的营养元素能周而复始的利用，进而保证整个植物生长发育对养分的要求。其中，土壤内微生物中的某些菌群对农业有益，而某些却是有害的。
目前的生物菌剂大多采用直接投入土壤的方式，因此无法保证菌剂内的有益菌群进入土壤后，能够在和土壤原生菌群的竞争中成长为优势菌种，进而发挥效力。甚至可以说大多数情况下，由于土壤内菌种种类繁多，菌群环境复杂，经过多代变异，适应力极强，导致外来菌群难以发挥效力，因此导致生物菌剂的效果不甚理想。
发明内容
有鉴于此，本发明提出了一种微生物菌群进入土壤后能够迅速成为优势菌种，发挥效力的效果好且效果持久的液体生物营养菌剂及其制备方法。
本发明的技术方案是这样实现的：本发明提供了一种液体生物营养菌剂，包括微生物混合菌剂、溶原性噬菌体和液体基质，微生物混合菌剂中的各菌种均选用抗噬菌体菌株，微生物混合菌剂、溶原性噬菌体和液体基质的质量百分比分别为，微生物混合菌剂0.5％～5％和溶原性噬菌体0.3％～0.5％，余量为液体基质。
在以上技术方案的基础上，优选的，微生物混合菌剂包括解淀粉芽孢杆菌和植物乳杆菌，解淀粉芽孢杆菌和植物乳杆菌的质量比为(2～3)：(2～3)。
在以上技术方案的基础上，优选的，抗噬菌体菌株的选株包括如下步骤，制备目标菌种种子液，将种子液以1％的接种量接种至新鲜培养基中，在37℃下180r/min振荡培养至OD600于0.5至0.8之间；以感染复数1.0接入噬菌体，继续培养24h，然后涂布培养基平板，37℃培养48h，挑取单菌落接种至液体培养基内培养，将培养液连续三次划线分离，获得具有噬菌体抗性的纯种菌株。
更进一步优选的，抗噬菌体菌株的鉴定包括，将纯种菌株接种至培养基中，接入噬菌体，如此传代10次，并以同等培养条件下不接入噬菌体的目标菌种菌株为对照的指示菌，观察二者形成的噬菌斑数量之比。
在以上技术方案的基础上，优选的，溶原性噬菌体为溶原性大肠杆菌噬菌体、溶原性绿脓杆菌噬菌体和溶原性葡萄球菌噬菌体。
在以上技术方案的基础上，优选的，液体基质的组分按照质量比包括，葡萄糖25份、牛肉蛋白胨10份、酵母粉10份、磷酸二氢钾3份、磷酸氢二钾3份、氯化钙1份、硫酸镁1份和纯净水80份。
在以上技术方案的基础上，优选的，还包括增稠剂，增稠剂包括酪蛋白酸钠、阿拉伯胶、田菁胶、琼脂、海藻酸钠或藻酸丙二醇酯中的一种或多种的组合，增稠剂的质量百分比为0.1％～1％。
在以上技术方案的基础上，优选的，还包括防腐剂，防腐剂包括苯甲酸钠、山梨酸钾、丙酸钙、对羟基苯甲酸丙酯、茶多酚、大蒜素和壳聚糖中的一种或多种的组合，防腐剂的质量百分比为0.1％～1％。
第二方面，提供了一种液体生物营养菌剂的制备方法，包括以下步骤，
S1将宿主菌接种至培养基中并用溶原性噬菌体侵染，在摇床内37℃恒温培养24h，得到培养液，将培养液用接种环涂于琼脂平板上，网状划线后，置于保温箱内，恒温37℃放置24h，挑选出生长粗壮的溶原性噬菌体重新接种至培养基中，在摇床中37℃继续培养24h，如此重复5次，获得单菌落的溶原性噬菌体种子液，然后放入装有培养基的反应罐内，37℃厌氧培养30h，过滤后得到溶原性噬菌体发酵液；
S2在实验室内制备各菌种的抗噬菌体菌株的摇瓶种子液，将摇瓶种子液输入灭菌后的发酵罐内进行扩繁发酵，将扩繁产物进行固液分离，并将得到潮湿的固态微生物进行干燥处理，将各菌种的干燥产物按照配比均匀混合，即可得到微生物混合菌剂；
S3按照液体基质各组分的配比称取原料，均匀混合，搅拌溶解即可；
S4将步骤S1至S3中获得的产物混合均匀即可；
S5向步骤S4的液剂中加入定量的增稠剂和防腐剂。
本发明的一种液体生物营养菌剂及其制备方法相对于现有技术具有以下有益效果：
本发明的生物制剂投入土壤后，其中的溶原性噬菌体裂解释放出广谱杀菌的噬菌体，侵染土壤内原生的病原菌并使其细胞破裂死亡，进而大幅减少了土壤内病原菌的菌群数量，有效降低了土壤毒性对植物生长的不良影响；而微生物混合菌剂的有益菌种则能够快速的增殖并占领土壤环境，形成优势菌种以发挥改善土壤的效力；液体基质一方面作为营养基质，帮助有益菌种快速增殖，另一方面液体基质内的氮磷元素及多种蛋白质成分。也能作为土壤养分被植物吸收利用，促进植物生长。
具体实施方式
下面将结合本发明实施方式，对本发明实施方式中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施方式仅仅是本发明一部分实施方式，而不是全部的实施方式。基于本发明中的实施方式，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施方式，都属于本发明保护的范围。
实施例一：
本发明提供了一种液体生物营养菌剂，包括微生物混合菌剂、溶原性噬菌体和液体基质，微生物混合菌剂中的各菌种均选用抗噬菌体菌株，微生物混合菌剂、溶原性噬菌体和液体基质的质量百分比分别为，微生物混合菌剂5％和溶原性噬菌体0.5％，余量为液体基质。
其中，微生物混合菌剂包括解淀粉芽孢杆菌和植物乳杆菌，解淀粉芽孢杆菌和植物乳杆菌的质量比为1：1。
溶原性噬菌体为溶原性大肠杆菌噬菌体、溶原性绿脓杆菌噬菌体和溶原性葡萄球菌噬菌体。
液体基质的组分按照质量比包括，葡萄糖25份、牛肉蛋白胨10份、酵母粉10份、磷酸二氢钾3份、磷酸氢二钾3份、氯化钙1份、硫酸镁1份和纯净水80份。
解淀粉芽孢杆菌和植物乳杆菌的抗噬菌体菌株的选株包括如下步骤，制备目标菌种种子液，将种子液以1％的接种量接种至新鲜培养基中，在37℃下180r/min振荡培养至OD600于0.5至0.8之间；以感染复数1.0接入噬菌体，继续培养24h，然后涂布培养基平板，37℃培养48h，挑取单菌落接种至液体培养基内培养，将培养液连续三次划线分离，获得具有噬菌体抗性的纯种菌株。
解淀粉芽孢杆菌和植物乳杆菌的抗噬菌体菌株的鉴定包括，将纯种菌株接种至培养基中，接入噬菌体，如此传代10次，并以同等培养条件下不接入噬菌体的目标菌种菌株为对照的指示菌，观察二者形成的噬菌斑数量之比。
其制备方法，包括以下步骤，
S1将宿主菌接种至培养基中并用溶原性噬菌体侵染，在摇床内37℃恒温培养24h，得到培养液，将培养液用接种环涂于琼脂平板上，网状划线后，置于保温箱内，恒温37℃放置24h，挑选出生长粗壮的溶原性噬菌体重新接种至培养基中，在摇床中37℃继续培养24h，如此重复5次，获得单菌落的溶原性噬菌体种子液，然后放入装有培养基的反应罐内，37℃厌氧培养30h，过滤后得到溶原性噬菌体发酵液；
S2在实验室内制备各菌种的抗噬菌体菌株的摇瓶种子液，将摇瓶种子液输入灭菌后的发酵罐内进行扩繁发酵，将扩繁产物进行固液分离，并将得到潮湿的固态微生物进行干燥处理，将各菌种的干燥产物按照配比均匀混合，即可得到微生物混合菌剂；
S3按照液体基质各组分的配比称取原料，均匀混合，搅拌溶解即可；
S4将步骤S1至S3中获得的产物混合均匀即可；
S5向步骤S4的液剂中加入定量的增稠剂和防腐剂。
实施例二：
将实施例一中的微生物混合菌剂、溶原性噬菌体和液体基质的质量百分比替换为微生物混合菌剂0.5％、植物免疫诱抗剂0.3％和余量为液体基质，其他条件保持不变。
实施例三：
除实施例一条件保持不变外，还包括增稠剂和防腐剂。
其中，增稠剂包括酪蛋白酸钠、阿拉伯胶、田菁胶、琼脂、海藻酸钠或藻酸丙二醇酯中的一种或多种的组合，防腐剂包括苯甲酸钠、山梨酸钾、丙酸钙、对羟基苯甲酸丙酯、茶多酚、大蒜素和壳聚糖中的一种或多种的组合，增稠剂和防腐剂的质量百分比均为0.1％。
噬菌体是一种广泛分布在土壤、空气、水和动物肠道中的病毒。其中溶原性噬菌体亦称温和噬菌体，是原噬菌体感染宿主菌后，将其自身的基因组整合进宿主菌的基因组，随细菌染色体的复制而复制，并通过细菌的分裂传给下一代，且不会引起细菌裂解。
稳定条件下，溶原性噬菌体不会产生许多子代噬菌体，宿主菌宿主细胞也不会破裂死亡。然而当把这种溶原性噬菌体细胞放入土壤样本中并暴露在空气中时，在光学显微镜下观察可以发现，由于环境突变，溶原性噬菌体转变为烈性噬菌体，侵染宿主细胞使其破裂，同时释放出许多原噬菌体子代颗粒，并迅速增殖感染土壤中的多种菌体致其死亡。
但细菌对于噬菌体的侵染也并非完全束手无策，细菌可以通过吸附抑制、流产感染、限制修饰系统和穿入阻滞的多重手段实现噬菌体抵抗。同样的，噬菌体为了侵染细菌，也会在其正常的生活周期，包括吸附、注入、繁殖和释放的过程中，产生应对抗性的策略。细菌和噬菌体就是在这样一种长久的相互竞争中进行代代相传的变异和遗传。
因此，技术人员可以通过化学或物理方式诱导细菌发生突变，以加强细菌的噬菌体抵抗能力，进而获得具有噬菌体抗性的目标菌株，即为抗噬菌体菌株。
解淀粉芽孢杆菌和植物乳杆菌是微生物制剂中经常使用的有益菌种，具有提高土壤肥力，促进植物吸收养分，抑制多种植物病原菌生长的功能。大肠杆菌、绿脓杆菌和葡萄球菌实验室中普遍使用的溶原性噬菌体的细菌载体。
本发明的生物制剂投入土壤后，其中的溶原性噬菌体裂解释放出广谱杀菌的噬菌体，侵染土壤内原生的病原菌并使其细胞破裂死亡，进而大幅减少了土壤内病原菌的菌群数量，有效降低了土壤毒性对植物生长的不良影响；而微生物混合菌剂的有益菌种则能够快速的增殖并占领土壤环境，形成优势菌种以发挥改善土壤的效力；液体基质一方面作为营养基质，帮助有益菌种快速增殖，另一方面液体基质内的氮磷元素及多种蛋白质成分。也能作为土壤养分被植物吸收利用，促进植物生长。
本发明的液体制剂，不仅能够作为土壤改良剂、生物肥料或肥料添加剂使用，还能够作为拌种剂、蘸根剂等多种用途。
试验方法和结果分析：
试验目的为验证本发明在土壤中的抑制病原菌菌群数量、促进有益菌成为优势菌种等有益效果。
选取采集常年年重茬种植玉米的土壤样本，分为两组，分别施入含有本发明实施例1的基肥和普通基肥，放置于阳光、通风条件下，经过60h后，分别取样放在光学显微镜下观察。
其土壤测试结果见表1：
表1
可以发现，施用实施例1后的土壤样本中有益菌种活性菌总量要高于施用普通基肥的土壤样本，同时实施例1的土壤样本中有机质、含氮量和含磷量也较高。
以上所述仅为本发明的较佳实施方式而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (9)
1.一种液体生物营养菌剂，其特征在于：包括微生物混合菌剂、溶原性噬菌体和液体基质，所述微生物混合菌剂中的各菌种均选用抗噬菌体菌株，所述微生物混合菌剂、溶原性噬菌体和液体基质的质量百分比分别为，微生物混合菌剂0.5％～5％和溶原性噬菌体0.3％～0.5％，余量为液体基质。
2.根据权利要求1所述的一种液体生物营养菌剂，其特征在于：所述微生物混合菌剂包括解淀粉芽孢杆菌和植物乳杆菌，所述解淀粉芽孢杆菌和植物乳杆菌的质量比为(2～3)：(2～3)。
3.根据权利要求1所述的一种液体生物营养菌剂，其特征在于：所述抗噬菌体菌株的选株包括如下步骤，
制备目标菌种种子液，将所述种子液以1％的接种量接种至新鲜培养基中，在37℃下180r/min振荡培养至OD600于0.5至0.8之间；
以感染复数1.0接入噬菌体，继续培养24h，然后涂布培养基平板，37℃培养48h，挑取单菌落接种至液体培养基内培养，将所述培养液连续三次划线分离，获得具有噬菌体抗性的纯种菌株。
4.根据权利要求3所述的一种液体生物营养菌剂，其特征在于：所述抗噬菌体菌株的鉴定包括，将所述纯种菌株接种至培养基中，接入噬菌体，如此传代10次，并以同等培养条件下不接入噬菌体的目标菌种菌株为对照的指示菌，观察二者形成的噬菌斑数量之比。
5.根据权利要求1所述的一种液体生物营养菌剂，其特征在于：所述溶原性噬菌体为溶原性大肠杆菌噬菌体、溶原性绿脓杆菌噬菌体和溶原性葡萄球菌噬菌体。
6.根据权利要求1所述的一种液体生物营养菌剂，其特征在于：所述液体基质的组分按照质量比包括，葡萄糖25份、牛肉蛋白胨10份、酵母粉10份、磷酸二氢钾3份、磷酸氢二钾3份、氯化钙1份、硫酸镁1份和纯净水80份。
7.根据权利要求1所述的一种液体生物营养菌剂，其特征在于：还包括增稠剂，所述增稠剂包括酪蛋白酸钠、阿拉伯胶、田菁胶、琼脂、海藻酸钠或藻酸丙二醇酯中的一种或多种的组合，所述增稠剂的质量百分比为0.1％～1％。
8.根据权利要求1所述的一种液体生物营养菌剂，其特征在于：还包括防腐剂，所述防腐剂包括苯甲酸钠、山梨酸钾、丙酸钙、对羟基苯甲酸丙酯、茶多酚、大蒜素和壳聚糖中的一种或多种的组合，所述防腐剂的质量百分比为0.1％～1％。
9.根据权利要求1至8任意一项所述的一种液体生物营养菌剂的制备方法，其特征在于：包括以下步骤，
S1将宿主菌接种至培养基中并用溶原性噬菌体侵染，在摇床内37℃恒温培养24h，得到培养液，将所述培养液用接种环涂于琼脂平板上，网状划线后，置于保温箱内，恒温37℃放置24h，挑选出生长粗壮的溶原性噬菌体重新接种至培养基中，在摇床中37℃继续培养24h，如此重复5次，获得单菌落的溶原性噬菌体种子液，然后放入装有培养基的反应罐内，37℃厌氧培养30h，过滤后得到溶原性噬菌体发酵液；
S2在实验室内制备所述各菌种的抗噬菌体菌株的摇瓶种子液，将所述摇瓶种子液输入灭菌后的发酵罐内进行扩繁发酵，将所述扩繁产物进行固液分离，并将得到潮湿的固态微生物进行干燥处理，将所述各菌种的干燥产物按照配比均匀混合，即可得到微生物混合菌剂；
S3按照所述液体基质各组分的配比称取原料，均匀混合，搅拌溶解即可；
S4将所述步骤S1至S3中获得的产物混合均匀即可；
S5向所述步骤S4的液剂中加入定量的增稠剂和防腐剂。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202010614016.7A CN111826309A (zh) | 2020-06-30 | 2020-06-30 | 一种液体生物营养菌剂及其制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202010614016.7A CN111826309A (zh) | 2020-06-30 | 2020-06-30 | 一种液体生物营养菌剂及其制备方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN111826309A true CN111826309A (zh) | 2020-10-27 |
Family
ID=72900733
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202010614016.7A Pending CN111826309A (zh) | 2020-06-30 | 2020-06-30 | 一种液体生物营养菌剂及其制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN111826309A (zh) |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1643139A (zh) * | 2002-03-25 | 2005-07-20 | 沃里克大学 | 抗菌剂 |
| CN104649834A (zh) * | 2015-03-04 | 2015-05-27 | 山东润银生物化工股份有限公司 | 一种含溶原性噬菌体抗病毒尿素及其制备方法 |
| CN109097298A (zh) * | 2018-08-08 | 2018-12-28 | 福建九为生物技术有限公司 | 一种富集培养法制备噬菌蛭弧菌制剂的方法 |
| CN109310722A (zh) * | 2016-04-01 | 2019-02-05 | 塔夫斯大学 | 用于预防弧菌感染的方法和组合物 |
| CN109645403A (zh) * | 2018-11-30 | 2019-04-19 | 四川东坡中国泡菜产业技术研究院 | 耐低温抗噬菌体的短乳杆菌及其在泡菜中的应用 |
-
2020
- 2020-06-30 CN CN202010614016.7A patent/CN111826309A/zh active Pending
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1643139A (zh) * | 2002-03-25 | 2005-07-20 | 沃里克大学 | 抗菌剂 |
| CN104649834A (zh) * | 2015-03-04 | 2015-05-27 | 山东润银生物化工股份有限公司 | 一种含溶原性噬菌体抗病毒尿素及其制备方法 |
| CN109310722A (zh) * | 2016-04-01 | 2019-02-05 | 塔夫斯大学 | 用于预防弧菌感染的方法和组合物 |
| CN109097298A (zh) * | 2018-08-08 | 2018-12-28 | 福建九为生物技术有限公司 | 一种富集培养法制备噬菌蛭弧菌制剂的方法 |
| CN109645403A (zh) * | 2018-11-30 | 2019-04-19 | 四川东坡中国泡菜产业技术研究院 | 耐低温抗噬菌体的短乳杆菌及其在泡菜中的应用 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 齐蕊名，等: "植物乳杆菌噬菌体Lpla的...离鉴定及抗噬菌体菌株的筛选", 《食品科学》 * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN108753664B (zh) | 一种生物防治剂、生物有机肥及其应用 | |
| CN110106102B (zh) | 耐寒短杆菌zl-2及其堆肥低温启动菌剂的制备方法与应用 | |
| CN107136122B (zh) | 一种防治马铃薯晚疫病的生防菌剂 | |
| CN111172052B (zh) | 一种改良砒砂岩土壤肥力的芽孢杆菌p75及其应用 | |
| CN114908012B (zh) | 一株利于稻渔共生的菌株及其应用 | |
| CN110195027B (zh) | 烟草节杆菌zl-1及其堆肥低温发酵菌剂的制备方法与应用 | |
| CN108865934A (zh) | 一种沙福芽孢杆菌hmd9204及其菌剂和应用 | |
| CN106190932B (zh) | 一株防治甜瓜根腐病的蜡样芽孢杆菌及培养方法与应用 | |
| CN110106101B (zh) | 赫氏草螺菌、包含该菌株的微生物菌剂及其制备方法 | |
| CN109055274B (zh) | 一株锦鸡儿根瘤菌及其发酵培养方法与应用 | |
| CN110452859B (zh) | 一株解淀粉芽孢杆菌b4216及其应用 | |
| CN108841761B (zh) | 促进三叶草生长和/或提高三叶草产量的方法及其所用菌剂 | |
| CN104774788B (zh) | 垃圾堆肥中草坪耐盐强化复合微生物菌群的制备方法及应用 | |
| CN115786163B (zh) | 一株地衣芽孢杆菌scau1602及其应用 | |
| CN114437998B (zh) | 促进水稻生长和提高幼苗耐寒能力的砖红色微杆菌及其应用 | |
| CN115959931A (zh) | 一种畜禽粪污和秸秆深度发酵制备有机肥方法 | |
| CN113897316B (zh) | 地衣芽孢杆菌BLc06及其制备的功能型瓜果育苗生物基质和应用 | |
| CN115927065A (zh) | 一种同温层芽孢杆菌及其应用 | |
| CN105018395A (zh) | 一株短小芽孢杆菌及其在防治苹果斑点落叶病中的应用 | |
| CN111826309A (zh) | 一种液体生物营养菌剂及其制备方法 | |
| CN110241040B (zh) | 一株韩国假单胞菌及其在提高设施蔬菜土壤有机氮利用率和促生长的应用 | |
| Riddech et al. | Production of plant growth promoting antagonistic Rhizobacteria to promote cucumber growth and control leaf spot disease (Corynespora cassiicola) | |
| CN109207398B (zh) | 一株施氏假单胞杆菌及其应用 | |
| CN110484463B (zh) | 一株莫海威芽孢杆菌b282及其应用 | |
| CN112322542A (zh) | 一种解淀粉芽孢杆菌及其对土壤养分含量和酶活性的影响 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20201027 |