CN110106102B - 耐寒短杆菌zl-2及其堆肥低温启动菌剂的制备方法与应用 - Google Patents

耐寒短杆菌zl-2及其堆肥低温启动菌剂的制备方法与应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一株耐寒短杆菌ZL‑2，以及耐寒短杆菌ZL‑2堆肥低温启动菌剂的制备方法，包括步骤：将有效活菌数＞1×108CFU/mL的耐寒短杆菌ZL‑2菌液与玉米芯粉按体积质量比2：1(mL/g)混合均匀；晾干至含水率≤25％，即得耐寒短杆菌ZL‑2堆肥低温启动菌剂。本发明制备的耐寒短杆菌ZL‑2堆肥低温启动菌剂可应用于新鲜粪便的秋冬季堆肥，解决寒冷环境中堆肥难以启动发酵，粪便大量堆积所造成的环境污染问题。在约为5～10℃的低温环境中，加入菌剂的堆肥堆体升温快、温度高，第5～6天进入高温期并持续7～8天，最高温度64.5℃，达到了我国堆肥处理无害化标准(NY/T 1168‑2006)。

Description

耐寒短杆菌ZL-2及其堆肥低温启动菌剂的制备方法与应用
技术领域
本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种耐寒短杆菌及其堆肥低温启动菌剂的制备与应用。
背景技术
低温微生物是指在低温条件下具有生长能力的微生物，广泛分布于各种寒冷环境中，并在生态系统中占有独特而重要的地位。低温微生物一般可分为嗜冷型和耐冷型。嗜冷菌的最适生长的温度通常≤15℃，而耐冷菌是指能够在0℃左右生长良好，但最适生长温度＞20℃的微生物。研究低温微生物，不仅可以深入了解微生物适冷机制，并且其特殊产物如抗冻蛋白、低温酶、多聚不饱和脂肪酸等在环境保护以及食品医药等众多领域中都拥有巨大的应用价值。
近年来，随着对芽孢杆菌研究的不断深入，发现芽孢杆菌具有有机质分解能力强，杀虫、抗菌等多种生物学活性，在有机肥、水体净化以及农药添加剂中有广泛应用。
堆肥技术是一种成本低，可操作性强，生物风险小的畜禽粪污资源化利用方法。此项技术利用微生物代谢活动分解有机物，并凭借其剧烈活动产生的高温杀灭病原微生物和其他有害物质，最终形成安全绿色的有机肥。然而堆肥易受环境温度的影响，当环境温度较低时，堆体难以快速升温启动，导致粪污无法有效发酵。
发明内容
本发明的目的是提供一株兼性嗜冷型细菌及包含该细菌的微生物菌剂，该菌剂接种于堆肥堆体中，可以利用其在低温环境中良好的生物活性代谢产热，从而实现堆体的低温启动和快速升温，以达到缩短发酵周期，提高有机肥品质的目的。
为了达到上述目的，本发明提供了一株耐寒短杆菌(Brevibacteriumfrigoritolerans)ZL-2，该耐寒短杆菌ZL-2于2018年8月10日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC)，保藏编号CGMCC NO.16247。CGMCC地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
本发明所述耐寒短杆菌ZL-2(Brevibacterium frigoritolerans)，基于16S-rDNA序列构建的系统发育树所示，在分类学中属细胞生物(Cellular organisms)、细菌域(Bacteria)、厚壁菌门(Firmicutes)、芽孢杆菌纲(Bacilli)、芽孢杆菌目 (Bacillales)、芽孢杆菌科(Bacillaceae)、芽孢杆菌属(Bacillus)，在土壤和其他自然环境中分布广泛。
本发明所述耐寒短杆菌ZL-2用于秋冬季堆肥时堆体在低温环境中的快速升温和启动。耐寒短杆菌ZL-2在低温环境中有良好的生物活性，利用其在低温环境中代谢所产生的热量能够实现堆体的快速升温，从而解决寒冷环境中堆体难以启动发酵，粪便大量堆积所造成的环境污染问题。
本发明还提供了一种包含上述耐寒短杆菌ZL-2堆肥低温启动菌剂的制备方法，具体步骤为：将活菌数＞108CFU/mL的耐寒短杆菌ZL-2菌液与高温灭菌(121℃，20min)玉米芯粉按体积质量比2：1(mL/g)混合均匀；晾干至含水率≤25％，即得耐寒短杆菌ZL-2堆肥菌剂。
优选方式下，所述耐寒短杆菌ZL-2菌液的制备方法，包括步骤：S1、取复壮后的耐寒短杆菌ZL-2单菌落，接种到牛肉膏蛋白胨液体培养基中，15℃摇床震荡培养48小时，得到耐寒短杆菌ZL-2种子液
S2、按体积比1％的比例将耐寒短杆菌ZL-2种子液接种到发酵培养基中， 15℃摇床震荡培养48h，得到有效活菌数>1×108CFU/mL的耐寒短杆菌ZL-2 发酵菌液；
所述牛肉膏蛋白胨液体培养基配制比例为：每1000ml中含有牛肉膏3g、蛋白胨10g、氯化钠5g，余量为水，pH7.0～7.2，121℃灭菌20分钟；
所述发酵培养基配置比例为：葡萄糖3.0％(g/ml)、蛋白胨1.0％(g/ml)、淀粉3.5％(g/ml)、氯化钠1.0％(g/ml)，余量为水，pH7.0～7.2，121℃灭菌 20分钟。
优选方式下，所述玉米芯粉能通过40目筛。
本发明还提供了所述耐寒短杆菌ZL-2堆肥低温启动菌剂在无害化堆肥中的应用。
优选方式下，上述应用为使用所述耐寒短杆菌ZL-2堆肥低温启动菌剂在 5～10℃发酵堆肥。
进一步优化，对堆肥低温启动菌剂进行应用效果评价，具体步骤为：
S1、在约为5～10℃的环境温度下，建立堆肥低温启动菌剂效果评价实验。将新鲜牛粪与秸秆按质量比4:1充分混合，调解含水量约为60％，得牛粪堆体系。将耐寒短杆菌ZL-2堆肥低温启动菌剂按重量比0.5％接种于长1m、宽 0.8m、高1.2m的牛粪堆肥体系中，同时设置未加菌剂的空白对照组。
S2、每天记录环境温度和堆体温度，堆体温度测量选用刺入式温度计，测量位置为堆体中心高度以下30cm，每天9:00和17:00测定一次堆体温度后取平均值。
综上，与现有产品相比，本发明具有的优点是：
1、本发明提供了一株兼性嗜冷型细菌，耐寒短杆菌ZL-2，细菌于冻土中筛选分离得到，其在低温环境中拥有良好的生物活性。
2、本发明利用耐寒短杆菌ZL-2在低温环境中代谢分解有机会所产生的热量实现堆体的快速升温，从而实现堆体的低温启动和堆肥的无害化处理，为堆肥技术在秋冬季的应用提供了技术支持。
3、本发明提供了一种耐寒短杆菌ZL-2堆肥低温启动菌剂，用以解决寒冷环境中堆肥堆体难以启动发酵，粪便大量堆积所造成的环境污染问题。研究结果表明，加入堆肥低温启动菌剂的堆体升温快、温度高，未加菌剂的对照组始终没有进入高温期，未达到堆肥无害化要求。由此可以证明，堆肥低温启动菌剂可以达到缩短发酵周期，提高有机肥品质的目的。
保藏说明
本发明涉及的生物材料样品的保藏信息：参据的微生物(株)为ZL-2，分类命名为耐寒短杆菌(Brevibacterium frigoritolerans)，于2018年8月10日由中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC)保藏，保藏编号CGMCC NO.16247。CGMCC地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
附图说明
图1是本发明中耐寒短杆菌ZL-2的菌落形态图；
图2是本发明中耐寒短杆菌ZL-2的生长曲线图(15℃)；
图3是使用本发明制备的耐寒短杆菌ZL-2堆肥低温启动菌剂在冬季牛粪堆肥实验的温度变化图。
具体实施方式
以下结合优选实施例对本发明的技术方案进行详细地阐述。以下实施例仅仅用于说明和解释本发明，而不构成对本发明技术方案的限制。
实施例1：耐寒短杆菌ZL-2的分离筛选及鉴定
本发明的菌株分离自大连理工大学校园冬季冻土层中。
1.耐寒短杆菌ZL-2的分离筛选
(1)称取采集的冻土层土壤样品10g加入到装有90mL PBS缓冲液的三角瓶中，并加入无菌玻璃珠(有助于样品均匀分散在PBS缓冲液中)，在室温条件下、180rpm摇床振荡20min，静置10min，制备冻土层土壤菌悬液(即10-1冻土层土壤稀释液)；然后用PBS缓冲液进行10倍梯度稀释，得到10-2、10-3、 10-4、10-5、10-6、10-7、10-8冻土层土壤稀释悬液，选取10-4、10-5、10-6、10-7、 10-8的稀释悬液各100μL，均匀涂布到牛肉膏蛋白胨固体培养基上，10℃恒温培养箱培养72h。在固体培养基平板上挑取形态不同的单菌落至新的固体培养基平板划线，在10℃恒温箱培养，如此重复三次，至微生物菌种纯化。将纯化的菌株转移到固体培养基斜面上，于4℃保存。所述牛肉膏蛋白胨固体培养基配制比例为：每1000ml中含有牛肉膏3g、蛋白胨10g、氯化钠5g、琼脂15g，余量为水，pH7.0～7.2，灭菌20分钟。
(2)经过分离纯化，共得到能够在10℃下生长的细菌5株，对5株细菌进行适温性复筛，将细菌划线接种至固体培养基平板，在不同温度下恒温培养 72h，观察菌株的生长情况。由表1不同温度下菌株的生长情况可知，编号为 ZL-2的菌株在低温环境中有最强的生物活性，因此对其进行进一步分子学鉴定。
表1不同温度下菌株的生长情况
Figure RE-GDA0002105669130000041
注：“+”表示生长，“-”表示不生长
2.耐寒短杆菌ZL-2的分子生物学鉴定
耐寒短杆菌ZL-2的分子生物学鉴定采用菌体直接扩增16S rDNA的方法。具体步骤如下：
(1)菌株基因组DNA的提取：取单菌落置于含有30μL无菌超纯水的 PCR管中(PCR管已灭菌)，放入PCR仪中煮沸10min。
(2)16S rDNA序列的PCR扩增：以提取的总DNA作为模板，以细菌 16S r DNA基因的通用引物27f(5'-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3')和 1492r(5'-TACCTTGTTACGACTT-3')对耐寒短杆菌16SrDNA基因进行PCR 扩增。
PCR反应体系：2*Taq Master Mix 20μL，DNA模板3μL，上下游引物各 1μL，ddH2O25μL，PCR反应体系为50μL。
PCR反应条件：94℃预变性4min；94℃变性30s，50℃退火30s，72℃延伸90s，循环35次；72℃5min。
(3)PCR扩增的检测及测序：取(2)PCR扩增产物用0.8％琼脂糖凝胶进行电泳检测，将PCR条带大小约为1500bp的PCR产物送上海生工生物技术有限公司测序后，将获得的DNA序列在NCBI上进行Blast比对，并选择同源性较高的序列用Neighbor-Joining法构建系统发育树。
结果表明，结合菌株的形态观察以及系统发育树中的同源性分析，菌株确定为耐寒短杆菌(Brevibacterium frigoritolerans)。
实施例2：
耐寒短杆菌ZL-2堆肥低温启动菌剂的制备方法，具体步骤为：将有效活菌数＞1×108CFU/mL的耐寒短杆菌ZL-2菌液与过40目筛的高温灭菌玉米芯粉按体积质量比2：1(mL/g)混合均匀；于室温晾干48h至含水率≤25％，即得耐寒短杆菌ZL-2堆肥菌剂。
优选方式下，所述耐寒短杆菌ZL-2菌液的制备方法，包括步骤：S1、将保存在斜面固体培养基上的耐寒短杆菌ZL-2菌株划线转接到固体培养基平板中，置于10℃恒温培养箱培养72h复壮。取复壮后的耐寒短杆菌ZL-2单菌落，接种到牛肉膏蛋白胨液体培养基中，15℃摇床震荡培养48小时，得到耐寒短杆菌ZL-2种子液
S2、按体积比1％的比例将耐寒短杆菌ZL-2种子液接种到发酵培养基中， 15℃摇床震荡培养48h，培养好的发酵菌液经平板细菌计数，得到有效活菌数>1×108CFU/mL的耐寒短杆菌ZL-2发酵菌液；
所述牛肉膏蛋白胨液体培养基配制比例为：每1000ml中含有牛肉膏3g、蛋白胨10g、氯化钠5g，余量为水，pH7.0～7.2，121℃灭菌20分钟；
所述发酵培养基配置比例为：葡萄糖3.0％(g/ml)、蛋白胨1.0％(g/ml)、淀粉3.5％(g/ml)、氯化钠1.0％(g/ml)，余量为水，pH7.0～7.2，121℃灭菌 20分钟。
实施例3：堆肥低温启动菌剂应用的效果评价
1、在5～10℃的环境温度下，建立堆肥菌剂效果评价实验。将新鲜牛粪与秸秆按质量比4:1充分混合，调解含水量约为60％，得牛粪堆肥体系。将耐寒短杆菌ZL-2堆肥菌剂按重量比0.5％接种于长1m、宽0.8m、高1.2m的牛粪堆肥体系中，同时设置未加菌剂的空白对照组。
2、每天记录环境温度和堆体温度，堆体温度测量选用刺入式温度计，测量位置为堆体中心高度以下30cm，每天9:00和17:00测定一次堆体温度后取平均值。
3、实验不进行翻堆操作，并采用强制通风来保证堆肥各部分氧气均一。其中风机风量的选择应满足最大通气速率的要求，堆肥发酵过程中通风速率为 0.07～0.1m3/(min·m3)。每次通风时间为15min，当实验组堆体进入高温期(≥ 55℃)后，每隔三天对所有堆体通风一次。。
研究结果如图3所示，在约为5～10℃的低温环境中，加入复合菌剂的堆体升温快、温度高，第5～6天进入高温期并持续7～8天，最高温度64.5℃，达到了我国堆肥处理无害化标准(NY/T 1168-2006)，未加菌剂的对照组最高温度没有超过42℃，未达到堆肥无害化要求。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明披露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
序列表
<110> 大连理工大学
<120> 耐寒短杆菌ZL-2及其堆肥低温启动菌剂的制备方法与应用
<130> 20190227
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1462
<212> DNA
<213> Brevibacterium frigoritolerans
<400> 1
gtcctttaat aagagccgac gacgtgctcg tcgagcagaa tcgatgggag cttgctccct 60
gagattagcg gcggacgggt gagtaacacg tgggcaacct gcctataaga ctgggataac 120
ttcgggaaac cggagctaat accggatacg ttcttttctc gcatgagaga agatggaaag 180
acggtttacg ctgtcactta tagatgggcc cgcggcgcat tagctagttg gtgaggtaat 240
ggctcaccaa ggcgacgatg cgtagccgac ctgagagggt gatcggccac actgggactg 300
agacacggcc cagactccta cgggaggcag cagtagggaa tcttccgcaa tggacgaaag 360
tctgacggag caacgccgcg tgaacgaaga aggccttcgg gtcgtaaagt tctgttgtta 420
gggaagaaca agtaccagag taactgctgg taccttgacg gtacctaacc agaaagccac 480
ggctaactac gtgccagcag ccgcggtaat acgtaggtgg caagcgttgt ccggaattat 540
tgggcgtaaa gcgcgcgcag gtggttcctt aagtctgatg tgaaagccca cggctcaacc 600
gtggagggtc attggaaact ggggaacttg agtgcagaag aggaaagtgg aattccaagt 660
gtagcggtga aatgcgtaga gatttggagg aacaccagtg gcgaaggcga ctttctggtc 720
tgtaactgac actgaggcgc gaaagcgtgg ggagcaaaca ggattagata ccctggtagt 780
ccacgccgta aacgatgagt gctaagtgtt agagggtttc cgccctttag tgctgcagct 840
aacgcattaa gcactccgcc tggggagtac ggccgcaagg ctgaaactca aaggaattga 900
cgggggcccg cacaagcggt ggagcatgtg gtttaattcg aagcaacgcg aagaacctta 960
ccaggtcttg acatcctctg acaaccctag agatagggct ttccccttcg ggggacagag 1020
tgacaggtgg tgcatggttg tcgtcagctc gtgtcgtgag atgttgggtt aagtcccgca 1080
acgagcgcaa cccttgatct tagttgccag cattcagttg ggcactctaa ggtgactgcc 1140
ggtgacaaac cggaggaagg tggggatgac gtcaaatcat catgcccctt atgacctggg 1200
ctacacacgt gctacaatgg atggtacaaa gggctgcaaa cctgcgaagg taagcgaatc 1260
ccataaagcc attctcagtt cggattgcag gctgcaactc gcctgcatga agccggaatc 1320
gctagtaatc gcggatcagc atgccgcggt gaatacgttc ccgggccttg tacacaccgc 1380
ccgtcacacc acgagagttt gtaacacccg aagtcggtga ggtaaccttc atggagccag 1440
ccgactagag aagagtggtc ga 1462

Claims (6)

1.一株耐寒短杆菌(Brevibacterium frigoritolerans)ZL-2，其特征在于，分类命名为耐寒短杆菌(Brevibacterium frigoritolerans)，于2018年8月10日由中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，简称CGMCC，保藏编号CGMCC NO.16247；所述耐寒短杆菌ZL-2基因序列如SEQ ID No.1所示。
2.一种包含权利要求1所述耐寒短杆菌ZL-2的堆肥低温启动菌剂的制备方法，其特征在于，包括步骤∶将有效活菌数>1×108CFU/mL的耐寒短杆菌ZL-2菌液与经过121℃高温灭菌20min的玉米芯粉按体积质量比2∶1(mL/g)混合均匀；晾干至含水率≤25％，即得耐寒短杆菌ZL-2堆肥低温启动菌剂。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述耐寒短杆菌ZL-2菌液的制备方法，包括步骤∶
S1、取耐寒短杆菌ZL-2单菌落，接种到牛肉膏蛋白胨液体培养基中，15℃摇床震荡培养48小时，得到耐寒短杆菌ZL-2种子液；所述牛肉膏蛋白胨液体培养基为：每1000ml中含有牛肉膏3g、蛋白胨10g、氯化钠5g，余量为水，pH7.0～7.2，121℃灭菌20分钟；
S2、按体积比1％的比例将耐寒短杆菌ZL-2种子液接种到发酵培养基中，15℃培养48h，得到有效活菌数>1×108CFU/mL的耐寒短杆菌ZL-2发酵菌液；所述发酵培养基为：葡萄糖3.0％(g/ml)、蛋白胨1.0％(g/ml)、淀粉3.5％(g/ml)、氯化钠1.0％(g/ml)，余量为水，pH7.0～7.2，121℃灭菌20分钟。
4.根据权利要求2所述耐寒短杆菌ZL-2堆肥低温启动菌剂的制备方法，其特征在于，所述玉米芯粉通过40目筛。
5.权利要求2-4任一方法制备的耐寒短杆菌ZL-2堆肥低温启动菌剂在无害化处理堆肥中的应用。
6.根据权利要求5所述耐寒短杆菌ZL-2堆肥低温启动菌剂在无害化处理堆肥中的应用，其特征在于，使用所述耐寒短杆菌ZL-2堆肥低温启动菌剂在5～10℃发酵堆肥。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109735466A (zh) * 2019-01-25 2019-05-10 江苏大学 一种促进低温、低氧环境植物生长的微生物制剂及其制备方法
CN110195028B (zh) * 2019-03-08 2022-03-01 大连理工大学 一种堆肥低温复合发酵菌剂的制备方法及应用
CN111424024A (zh) * 2020-05-22 2020-07-17 扬州大学 一种低温纤维素酶的制备及使用方法
CN112876299A (zh) * 2021-02-02 2021-06-01 青岛中海环境工程有限公司 一种秸秆快速降解菌剂组合物及制备方法
CN114591869B (zh) * 2022-03-30 2023-09-05 榆林市中泰农业科技有限公司 一种耐寒短杆菌sdb5的液体发酵培养基
CN116064283A (zh) * 2022-08-17 2023-05-05 中南民族大学 一种促腐保氮低温堆肥菌剂及其制备方法与应用
CN116144527A (zh) * 2022-09-20 2023-05-23 鲁东大学 一株耐寒短杆菌及其除臭剂在禽畜粪便处理中的应用

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2434019A1 (en) * 2003-08-01 2012-03-28 BASF Plant Science GmbH Process for the production of fine chemicals
CN103952348A (zh) * 2014-04-24 2014-07-30 烟台地元生物科技有限公司 耐寒短杆菌及微生物菌剂和它们的应用
CN105132314A (zh) * 2015-08-31 2015-12-09 苏州硒谷科技有限公司 耐寒短杆菌Brevibacterium frigoritolerans YLX-3及其应用
CN110195028A (zh) * 2019-03-08 2019-09-03 大连理工大学 一种堆肥低温复合发酵菌剂的制备方法及应用
CN111979152A (zh) * 2020-08-25 2020-11-24 甘肃省科学院生物研究所 一种用于畜禽粪便除臭的复合微生物菌剂及其制备方法

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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
HU231353B1 (hu) * 2014-02-10 2023-03-28 BioFil Mikrobiológiai, Géntechnológiai és Biokémiai Kft Stressztalajok oltására szolgáló talajbaktériumok

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2434019A1 (en) * 2003-08-01 2012-03-28 BASF Plant Science GmbH Process for the production of fine chemicals
CN103952348A (zh) * 2014-04-24 2014-07-30 烟台地元生物科技有限公司 耐寒短杆菌及微生物菌剂和它们的应用
CN105132314A (zh) * 2015-08-31 2015-12-09 苏州硒谷科技有限公司 耐寒短杆菌Brevibacterium frigoritolerans YLX-3及其应用
CN110195028A (zh) * 2019-03-08 2019-09-03 大连理工大学 一种堆肥低温复合发酵菌剂的制备方法及应用
CN111979152A (zh) * 2020-08-25 2020-11-24 甘肃省科学院生物研究所 一种用于畜禽粪便除臭的复合微生物菌剂及其制备方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Psychrotolerant bacteria isolated from the leaf apoplast of cold-adapted wild plants improve the cold resistance of bean (Phaseolus vulgaris L.) under low temperature;Deniz Tiryaki等;《Cryobiology》;20190228;第86卷;111-119 *
牛粪堆肥低温启动复合菌剂研制及其效果评价;张喆;《中国优秀硕士学位论文全文数据库工程科技Ⅰ辑》;20200116(第2期);B016-630 *
秦岭主峰太白山北坡5种生境中微生物区系及拮抗放线菌资源研究;王东胜;《中国博士学位论文全文数据库（电子期刊）基础科学辑》;20150116(第2期);A006-37 *

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