CN111825663A - 一种11-脱氢血栓烷素b2衍生物及其制备方法与11-脱氢血栓烷素b2检测试剂 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种用于人体生物样本中11‑脱氢血栓烷素B2含量检测的11‑脱氢血栓烷素B2衍生物及其制备方法。使用该11‑脱氢血栓烷素B2衍生物获得了3种高免疫原性的11‑脱氢血栓烷素B2免疫原与相应的3种抗11‑脱氢血栓烷素B2特异性抗体以及11‑脱氢血栓烷素B2葡萄糖‑6‑磷酸脱氢酶标记偶联物、11‑脱氢血栓烷素B2辣根过氧化物酶标记偶联物、11‑脱氢血栓烷素B2‑多聚赖氨酸偶联物、抗11‑脱氢血栓烷素B2特异性抗体3包被的胶乳颗粒等核心组份，并制备出了3种灵敏度高、特异性强、检测效果好的11‑脱氢血栓烷素B2免疫学检验试剂。本发明还提供了3种11‑脱氢血栓烷素B2免疫检验试剂的制备方法及相应的使用方法。本发明提供的3种11‑脱氢血栓烷素B2免疫检测方法操作方便、检测快速、结果准确、灵敏度高、特异性强，能够对人体血液样本中的11‑脱氢血栓烷素B2含量进行定量检测。克服了现有技术中11‑脱氢血栓烷素B2检测方法存在的操作复杂、自动化程度低等缺陷，能有效指导临床个体化合理用药。

Description

一种11-脱氢血栓烷素B2衍生物及其制备方法与11-脱氢血栓 烷素B2检测试剂
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种11-脱氢血栓烷素B2衍生物及其制备方法与11-脱氢血栓烷素B2检测试剂。
背景技术
11-脱氢血栓烷素B2（11-dehydro-thromboxane B2，11dhTXB2）的化学结构式如下述式（Ⅳ）所示：
Figure 496601DEST_PATH_IMAGE001
式（Ⅳ）。
11-脱氢血栓烷素B2是血栓烷素A2（thromboxane A2，TXA2）的终末代谢产物，主要经肾脏代谢。TXA2则是花生四烯酸在环氧合酶（cyclooxygenase，COX）作用下产生的具有促血小板聚集、收缩血管等生物活性作用的物质，在血栓形成过程中有重要作用。阿司匹林能通过不可逆地抑制COX-1活性，减少TXA2合成，从而抑制血小板聚集及其在冠状动脉粥样硬化性心脏病（冠心病）发展和急性冠状动脉综合征（acutecoronary syndrome，ACS）发生中的作用。TXA2的代谢产物11dhTXB2水平能反映血小板活性及阿司匹林的抗血小板效果。阿司匹林能通过抑制血小板COX-1活性有效抑制血小板功能，从而降低心血管事件风险。尿11dhTXB2浓度反映血栓烷素的整体合成水平，因而能直接反映阿司匹林对血栓烷素合成及对血小板功能的抑制效果。研究表明：冠心病危险人群及冠心病患者（尤其是ACS患者）基础（未应用阿司匹林时）尿11dhTXB2水平明显高于健康人群，且与危险因素水平有正相关趋势，提示血小板活性逐渐增加；性别、年龄、体重等因素也对血栓烷素代谢有一定影响；应用阿司匹林能显著降低所有人群的尿11dhTXB2水平，抑制率为60%~80%；高危人群及冠心病患者应用阿司匹林后的尿11dhTXB2水平亦明显高于健康人群，提示有更高的HAPR发生率及心血管不良事件发生风险；多数预后研究支持应用阿司匹林后尿11dhTXB2高水平所提示的HAPR与心血管事件发生率增加有关。减少尿11dhTXB2排泌的措施可改善阿司匹林反应，或可降低心血管不良事件风险。
目前11dhTXB2的检测方法包括放射免疫法（radioimmunoassay，RIA）、酶联免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）及液相色谱- 串联质谱法（liquidchromatography-tandem mass spectrometry，LC-MS/MS）。RIA法由于存在放射性污染问题已逐渐被淘汰；由于11dhTXB2的分子量较小，且在尿液中的浓度不高，目前多采用ELISA法进行测定，所使用的抗11dhTXB2抗体有单克隆抗体和多克隆抗体两种，测得的尿11dhTXB2浓度需用尿肌酸酐浓度进行校正，以排除尿液浓度和肾功能的影响，因此可用随机尿样本进行检测。但是ELISA法只能获得半定量的检测结果，无法进行精确定量。LC-MS/MS法应用时间较短，但能较为特异地检测11dhTXB2，检测结果变异率也较小，但是该方法操作复杂、检测速度较慢、且需要特殊仪器，成本较高。因此，研发一种高通量、快速化、无污染、高灵敏度、高特异性、结果精确、操作简便、成本低廉的11-脱氢血栓烷素B2检测方法具有重要意义。本发明利用新型11-脱氢血栓烷素B2衍生物研制的抗11-脱氢血栓烷素B2特异性系列抗体可以用于制备多种灵敏度高、特异性强、检测效果好的11-脱氢血栓烷素B2免疫检验试剂，能有效弥补传统方法的缺点。本发明的3种11-脱氢血栓烷素B2检测试剂，可以对11-脱氢血栓烷素B2的含量进行精确定量检测，与RIA、ELISA、LC-MS/MS等传统方法相比，本发明提供的免疫检测方法具有操作简便、检测快速、结果准确、费用低廉、安全环保等优势，有利于将来临床大规模推广应用，特别是对于缺乏昂贵仪器的基层医院具有良好的应用前景。
发明内容
为了克服现有技术的不足，本发明所采用的技术方案是：
一、提供一种11-脱氢血栓烷素B2衍生物，该衍生物为新合成物质，自然界中不存在，其结构式如式Ⅰ所示：
Figure 922028DEST_PATH_IMAGE002
式Ⅰ。
二、提供一种如上所述的11-脱氢血栓烷素B2衍生物的合成方法，该合成方法有别于常规合成方法，并具有良好的合成效果，显著提高11-脱氢血栓烷素B2衍生物的合成效率，具体合成路线如下所示：
Figure 507730DEST_PATH_IMAGE003
。
将100 mg化合物1溶解于2 mL 的二甲基甲酰胺中，然后在0℃条件下加入0.1 g化合物2、0.6 g三乙胺以及0.12 g 2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯，制成反应混合溶液，将此反应混合溶液在室温下搅拌过夜，反应结束后将固体物质过滤除去，并将滤液浓缩，最后将浓缩所得的剩余物通过快速柱层析法纯化，得到11-脱氢血栓烷素B2衍生物。
三、提供一种11-脱氢血栓烷素B2均相酶免疫检测试剂，该检测试剂由R1试剂与R2试剂组成，所述R1试剂包含抗11-脱氢血栓烷素B2特异性抗体1与R1缓冲液，所述R2试剂包含11-脱氢血栓烷素B2葡萄糖-6-磷酸脱氢酶标记偶联物与R2缓冲液；所述抗11-脱氢血栓烷素B2特异性抗体1为11-脱氢血栓烷素B2人血清白蛋白免疫原免疫实验动物后生产得到的抗体；所述的11-脱氢血栓烷素B2人血清白蛋白免疫原，由上述的11-脱氢血栓烷素B2衍生物与人血清白蛋白偶联而成，其结构式如式Ⅱ所示：
Figure 563673DEST_PATH_IMAGE004
式Ⅱ；
所述的实验动物为家兔、山羊、小鼠、绵羊、豚鼠或马中的任意一种；
所述的R1缓冲液含有酶底物、辅酶、牛血清白蛋白及Tris缓冲液，所述的酶底物为葡萄糖-6-磷酸，所述的辅酶为烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型；
所述的11-脱氢血栓烷素B2葡萄糖-6-磷酸脱氢酶标记偶联物由上述的11-脱氢血栓烷素B2衍生物与葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PDH）偶联而成；其结构式如式Ⅲ所示：
Figure 929933DEST_PATH_IMAGE005
式Ⅲ；
所述的R2缓冲液为含有牛血清白蛋白的Tris缓冲液。
四、提供一种如上所述的11-脱氢血栓烷素B2均相酶免疫检测试剂的制备方法，包含以下步骤：
（1）将0.25%牛血清白蛋白、50mmol/L葡萄糖-6-磷酸及50mmol/L烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型依次加入50mmol/L Tris缓冲液中搅拌溶解制成R1缓冲液，再将抗11-脱氢血栓烷素B2特异性抗体1以1∶500-1∶5000的体积比加入到上述R1缓冲液中混匀，再用6 mol/L的盐酸调节pH至8.0，制成R1试剂；
（2）将0.25%牛血清白蛋白加入100mmol/L Tris缓冲液中搅拌溶解制成R2缓冲液，再将11-脱氢血栓烷素B2葡萄糖-6-磷酸脱氢酶标记偶联物以1∶1000-1∶8000的体积比加入到上述R2缓冲液中混匀，再用6 mol/L的盐酸调节pH至7.6，制成R2试剂；
所述抗11-脱氢血栓烷素B2特异性抗体1的制备方法，包含以下步骤：
a. 将11-脱氢血栓烷素B2人血清白蛋白免疫原用PBS缓冲液稀释至2.0-5.0 mg/ml，得到抗原溶液，然后将2.0-5.0 ml所述抗原溶液与等量弗氏完全佐剂混合，对实验动物进行注射；
b. 1-4周后，再用2.0-5.0 ml相同的抗原溶液与等量弗氏不完全佐剂混合，对上述实验动物注射一次，之后每隔1-4周注射一次，共计注射3-8次；
c.对免疫后的实验动物取血，分离纯化抗血清，得到抗11-脱氢血栓烷素B2特异性抗体1。
所述的11-脱氢血栓烷素B2人血清白蛋白免疫原的制备方法，包含以下步骤：
a.称取2.0-5.0 g磷酸二氢钾、3.0-6.0 g磷酸氢二钠、7.5-15.0 g氯化钠、1.0-2.5 g氯化镁，共同溶解于1.0-2.5 L去离子水中，调节pH至7.8-8.3，制成缓冲溶液A；
b.称取3.0-6.0 mg人血清白蛋白，0-8℃下溶解于3.0-6.0 ml上述缓冲溶液A中，制成人血清白蛋白载体溶液；
c.称取3.0-8.0 mg权利要求1所述的11-脱氢血栓烷素B2衍生物，0-8℃下溶解于300-800 μl上述缓冲溶液A中，再加入0.2-0.5 ml二甲基甲酰胺，制成11-脱氢血栓烷素B2衍生物溶液A；
d.当上述11-脱氢血栓烷素B2衍生物溶液A刚变澄清时，将其逐滴加入上述人血清白蛋白载体溶液中，然后将此混合溶液在-18～-2℃下搅拌3-10小时；
e.将反应结束后的上述混合溶液用上述缓冲溶液A进行透析，透析后所得溶液即为11-脱氢血栓烷素B2人血清白蛋白免疫原溶液，在11-脱氢血栓烷素B2人血清白蛋白免疫原溶液中加入质量分数0.05-0.20%的叠氮钠防腐剂，于-20℃下储存；
所述的11-脱氢血栓烷素B2葡萄糖-6-磷酸脱氢酶标记偶联物的制备方法，包含以下步骤：
a.称取1.0-3.0 g磷酸二氢钾、1.0-5.0 g磷酸氢二钠、7.5-15.0 g氯化钠、1.0-3.0 g氯化镁，共同溶解于1.0-2.5 L去离子水中，调节pH至7.8-8.3，制成缓冲溶液B；
b.称取3.0-6.0 mg葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、2.0-5.0 mg还原态的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸、1.5-3.5 mg葡萄糖-6-磷酸，0-8℃下溶解于3.0-6.0 ml上述缓冲溶液B中，再加入1.0-2.0 ml二甲基亚砜，制成葡萄糖-6-磷酸脱氢酶溶液；
c.称取3.0-8.0 mg权利要求1所述的11-脱氢血栓烷素B2衍生物，0-8℃下溶解于300-800 μl上述缓冲溶液B中，再加入200-500 µl二甲基甲酰胺，制成11-脱氢血栓烷素B2衍生物溶液B；
d.当上述11-脱氢血栓烷素B2衍生物溶液B刚变澄清时，将其逐滴加入上述葡萄糖-6-磷酸脱氢酶溶液中，然后将此混合溶液在-18～-2℃下搅拌3-10小时；
e.将反应结束后的上述混合溶液用上述缓冲溶液B作为洗脱液通过G-25凝胶层析柱进行纯化，纯化后所得溶液即为11-脱氢血栓烷素B2葡萄糖-6-磷酸脱氢酶标记偶联物溶液，在11-脱氢血栓烷素B2葡萄糖-6-磷酸脱氢酶标记偶联物溶液中加入质量分数0.5-1.0%的BSA和质量分数0.05-0.20%的叠氮钠防腐剂，于0～8℃下储存。
五、提供一种如上所述的11-脱氢血栓烷素B2均相酶免疫检测试剂的使用方法，包括以下操作步骤：
（1）在全自动生化分析仪中加入校准品、R1试剂，混匀，37℃温育3-5分钟；加入R2试剂，混匀，37℃恒温5-10分钟后，340nm主波长/405nm次波长进行检测，连续监测3分钟内的吸光度变化率，由全自动生化分析仪制作校准曲线；
（2）在全自动生化分析仪中加入待测样本、R1试剂，混匀，37℃温育3-5分钟；加入R2试剂，混匀，37℃恒温5-10分钟后，340nm主波长/405nm次波长进行检测，连续监测3分钟内的吸光度变化率，由全自动生化分析仪根据步骤（1）中制作的校准曲线自动计算待测样本中11-脱氢血栓烷素B2的含量；
所述试剂R1与试剂R2按1:1～4:1的体积比使用；所述的待测样本为血清、血浆、尿液、唾液、组织液或脑脊液中的任意一种。
六、提供一种11-脱氢血栓烷素B2酶联免疫吸附（ELISA）检测试剂，该检测试剂含有：抗11-脱氢血栓烷素B2特异性抗体2、11-脱氢血栓烷素B2辣根过氧化物酶标记偶联物及反应底物；
所述抗11-脱氢血栓烷素B2特异性抗体2为11-脱氢血栓烷素B2人甲状腺球蛋白免疫原免疫实验动物后生产得到的抗体；所述的11-脱氢血栓烷素B2人甲状腺球蛋白免疫原，由上述的11-脱氢血栓烷素B2衍生物与人甲状腺球蛋白偶联而成，其结构式如式Ⅳ所示：
Figure 842874DEST_PATH_IMAGE006
式Ⅳ；
所述的实验动物为家兔、山羊、小鼠、绵羊、豚鼠或马中的任意一种；
所述的11-脱氢血栓烷素B2辣根过氧化物酶标记偶联物由上述的11-脱氢血栓烷素B2衍生物与辣根过氧化物酶（HRP）偶联而成；其结构式如式Ⅴ所示：
Figure 548661DEST_PATH_IMAGE007
式Ⅴ；
所述的反应底物为3,3',5,5'-四甲基联苯胺；
所述抗11-脱氢血栓烷素B2特异性抗体2的制备方法，包含以下步骤：
a. 将11-脱氢血栓烷素B2人甲状腺球蛋白免疫原用PBS缓冲液稀释至2.0-5.0 mg/ml，得到抗原溶液，然后将2.0-5.0 ml所述抗原溶液与等量弗氏完全佐剂混合，对实验动物进行注射；
b. 1-4周后，再用2.0-5.0 ml相同的抗原溶液与等量弗氏不完全佐剂混合，对上述实验动物注射一次，之后每隔1-4周注射一次，共计注射3-8次；
c.对免疫后的实验动物取血，分离纯化抗血清，得到抗11-脱氢血栓烷素B2特异性抗体2。
所述的11-脱氢血栓烷素B2人甲状腺球蛋白免疫原的制备方法，包含以下步骤：
a.称取2.0-5.0 g磷酸二氢钾、3.0-6.0 g磷酸氢二钠、7.5-15.0 g氯化钠、1.0-2.5 g氯化镁，共同溶解于1.0-2.5 L去离子水中，调节pH至7.8-8.3，制成缓冲溶液C；
b.称取3.0-6.0 mg人甲状腺球蛋白，0-8℃下溶解于3.0-6.0 ml上述缓冲溶液C中，制成人甲状腺球蛋白载体溶液；
c.称取3.0-8.0 mg权利要求1所述的11-脱氢血栓烷素B2衍生物，0-8℃下溶解于300-800 μl上述缓冲溶液C中，再加入0.2-0.5 ml二甲基甲酰胺，制成11-脱氢血栓烷素B2衍生物溶液C；
d.当上述11-脱氢血栓烷素B2衍生物溶液C刚变澄清时，将其逐滴加入上述人甲状腺球蛋白载体溶液中，然后将此混合溶液在-18～-2℃下搅拌3-10小时；
e.将反应结束后的上述混合溶液用上述缓冲溶液C进行透析，透析后所得溶液即为11-脱氢血栓烷素B2人甲状腺球蛋白免疫原溶液，在11-脱氢血栓烷素B2人甲状腺球蛋白免疫原溶液中加入质量分数0.05-0.20%的叠氮钠防腐剂，于-20℃下储存；
所述的11-脱氢血栓烷素B2辣根过氧化物酶标记偶联物的制备方法，包含以下步骤：
a.称取1.0-3.0 g磷酸二氢钾、1.0-5.0 g磷酸氢二钠、7.5-15.0 g氯化钠、1.0-3.0 g氯化镁，共同溶解于1.0-2.5 L去离子水中，调节pH至7.8-8.3，制成缓冲溶液D；
b.称取3.0-6.0 mg辣根过氧化物酶，0-8℃下溶解于3.0-6.0 mL上述缓冲溶液D中，再加入1.0-2.0 ml二甲基亚砜，制成辣根过氧化物酶溶液；
c.称取3.0-8.0 mg权利要求1所述的11-脱氢血栓烷素B2衍生物，0-8℃下溶解于300-800 μl上述缓冲溶液D中，再加入200-500 µl二甲基甲酰胺，制成11-脱氢血栓烷素B2衍生物溶液D；
d.当上述11-脱氢血栓烷素B2衍生物溶液D刚变澄清时，将其逐滴加入上述辣根过氧化物酶溶液中，然后将此混合溶液在-18～-2℃下搅拌3-10小时；
e.将反应结束后的上述混合溶液用上述缓冲溶液D作为洗脱液通过G-25凝胶层析柱进行纯化，纯化后所得溶液即为11-脱氢血栓烷素B2辣根过氧化物酶标记偶联物溶液，在11-脱氢血栓烷素B2辣根过氧化物酶标记偶联物溶液中加入质量分数0.5-1.0%的BSA和质量分数0.05-0.20%的叠氮钠防腐剂，于0～8℃下储存。
七、提供一种如上所述的11-脱氢血栓烷素B2的ELISA检测试剂的使用方法，包括以下操作步骤：
(a)将抗11-脱氢血栓烷素B2特异性抗体2用磷酸盐缓冲液按1∶1000-1∶20000的比例进行稀释，制成抗体溶液，将抗体溶液按 100μL/孔的用量包被在96孔酶联板上，4℃过夜；
(b)用磷酸盐缓冲液洗涤3次后，加入200μL/孔的0.5%的牛血清白蛋白溶液，4℃封闭过夜，磷酸盐缓冲液洗涤3次；
(c)加入20μL/孔的校准品及待测样本；
(d)加入100μL/孔工作浓度的11-脱氢血栓烷素B2辣根过氧化物酶标记偶联物；
(e)室温下孵育30分钟，磷酸盐缓冲液洗板5次；
(f)每孔加入100μL的3,3',5,5'-四甲基联苯胺，室温孵育30分钟；
(g)每孔加入100μL 的浓度为2mol/L的硫酸，终止反应；
(h)使用酶标仪测定450nm波长的吸光值；
(i)根据不同浓度校准品的吸光值制作校准曲线，并根据校准曲线与待测样本的吸光值计算待测样本中11-脱氢血栓烷素B2的含量；
所述的待测样本为血清、血浆、尿液、唾液、组织液或脑脊液中的任意一种。
八、提供一种11-脱氢血栓烷素B2胶乳增强免疫比浊检测试剂，该检测试剂包括：J1试剂与J2试剂；
所述J1试剂由11-脱氢血栓烷素B2-多聚赖氨酸偶联物和J1缓冲液组成，所述J2试剂由抗11-脱氢血栓烷素B2特异性抗体3包被的胶乳颗粒和J2缓冲液组成；
所述的11-脱氢血栓烷素B2-多聚赖氨酸偶联物由上述的11-脱氢血栓烷素B2衍生物与多聚赖氨酸偶联而成，其结构式如式Ⅵ所示：
Figure 509926DEST_PATH_IMAGE008
式Ⅵ；
所述J1缓冲液为含有牛血清白蛋白、氯化钠、吐温-80、丙三醇、乙二胺四乙酸、PEG-4000、叠氮钠防腐剂的磷酸钾缓冲液；
所述的抗11-脱氢血栓烷素B2特异性抗体3为11-脱氢血栓烷素B2钥孔血蓝蛋白免疫原免疫实验动物后生产得到的抗体；所述的11-脱氢血栓烷素B2钥孔血蓝蛋白免疫原，由上述的11-脱氢血栓烷素B2衍生物与钥孔血蓝蛋白偶联而成，其结构式如式Ⅶ所示：
Figure 363482DEST_PATH_IMAGE009
式Ⅶ；
所述的实验动物为家兔、山羊、小鼠、绵羊、豚鼠或马中的任意一种；
所述胶乳颗粒为表面带有羧基、氨基、羟基、酰肼基或氯甲基修饰的聚苯乙烯胶乳颗粒，直径范围为50-450nm；
所述J2缓冲液为含有牛血清白蛋白、氯化钠、吐温-80、丙三醇、乙二胺四乙酸二钠、Triton X-100、叠氮钠防腐剂的硼酸钾缓冲液；
九、提供一种如上所述的11-脱氢血栓烷素B2胶乳增强免疫比浊检测试剂的制备方法，包含以下步骤：
（1）将浓度为0.05-2.0 mg/mL的11-脱氢血栓烷素B2-多聚赖氨酸偶联物溶解于浓度为10-100 mmol/L、pH值为7.0-8.0的磷酸钾缓冲液中，然后添加质量分数为0.1%-2.0%的牛血清白蛋白、0.25%-1.0%的氯化钠、0.1%-0.5%的吐温-80、1.0%-5.0%的丙三醇、0.1%-1.0%的乙二胺四乙酸、1.0%-5.0%的PEG-4000以及0.01%-0.1%的叠氮钠防腐剂，搅拌均匀，调节pH=7.5，制成J1试剂；
（2）将质量分数为0.05-1.0%的抗11-脱氢血栓烷素B2特异性抗体3包被的胶乳颗粒加入浓度为20-100 mmol/L的硼酸钾缓冲液中，然后添加质量分数为0.1%-2.5%的牛血清白蛋白、0.25%-1.0%的氯化钠、0.1%-0.5%的吐温-80、1.0%-5.0%的丙三醇、0.1%-1.0%的乙二胺四乙酸二钠、0.1-1.0%的Triton X-100以及0.01%-0.1%的叠氮钠防腐剂，搅拌均匀，制成J2试剂；
所述的11-脱氢血栓烷素B2-多聚赖氨酸偶联物的制备方法，包含以下步骤：
a.称取2.0-5.0 g磷酸二氢钾、3.0-6.0 g磷酸氢二钠、7.5-15.0 g氯化钠、1.0-2.5 g氯化镁，共同溶解于1.0-2.5 L去离子水中，调节pH至7.8-8.3，制成缓冲溶液E；
b.称取3.0-6.0 mg多聚赖氨酸，0-8℃下溶解于3.0-6.0 ml上述缓冲溶液E中，制成多聚赖氨酸载体溶液；
c.称取3.0-8.0 mg上述的11-脱氢血栓烷素B2衍生物，0-8℃下溶解于300-800 μl上述缓冲溶液E中，再加入0.2-0.5 ml二甲基甲酰胺，制成11-脱氢血栓烷素B2衍生物溶液E；
d.当上述11-脱氢血栓烷素B2衍生物溶液E刚变澄清时，将其逐滴加入上述多聚赖氨酸载体溶液中，然后将此混合溶液在-18～-2℃下搅拌3-10小时；
e.将反应结束后的上述混合溶液用上述缓冲溶液E进行透析，透析后所得溶液即为11-脱氢血栓烷素B2-多聚赖氨酸偶联物溶液，在11-脱氢血栓烷素B2-多聚赖氨酸偶联物溶液中加入质量分数0.05-0.20%的叠氮钠防腐剂，于-20℃下储存。
所述的抗11-脱氢血栓烷素B2特异性抗体3包被的胶乳颗粒的制备方法，包含以下步骤：
a.将0.5-1.5 mg直径为50-450 nm的聚苯乙烯胶乳颗粒加入1.5-4.5 mL、0.08mol/L、pH=6.2的MES缓冲液中，然后加入2.5-7.5 mg碳二亚胺与0.5-4.5 mg N-羟基琥珀酰亚胺，在37℃下搅拌1-3小时，15000 r/min离心15分钟后去除上清液，然后用15-45mL浓度为0.1mol/L、PH=8.2的磷酸钾缓冲液将沉淀物重悬，制成胶乳颗粒溶液；
b.将0.5-1.5 mg抗11-脱氢血栓烷素B2特异性抗体3用1.5-4.5 mL、0.1mol/L、pH=8.2的硼酸钠缓冲液稀释后，立即加入到上述胶乳颗粒溶液中，在37℃下振荡反应6-24小时，然后加入1.0-3.0 mL、0.1 mol/L、pH=8.5的甘氨酸缓冲液搅拌1-3小时，反应结束后加入0.5-1.5 mg牛血清白蛋白，搅拌均匀后室温静置6-24小时，然后9000 r/mim离心15分钟，去除上清液，再将沉淀物用10-30 mL、50 mmol/L、pH=8.0的Tris-HCl缓冲液洗涤3次，最后用15-45mL、50 mmol/L、pH=8.5的甘氨酸缓冲液将沉淀物重悬，即为抗11-脱氢血栓烷素B2特异性抗体3包被的胶乳颗粒悬浊液；
所述抗11-脱氢血栓烷素B2特异性抗体3的制备方法，包含以下步骤：
a. 将11-脱氢血栓烷素B2钥孔血蓝蛋白免疫原用PBS缓冲液稀释至2.0-5.0 mg/ml，得到抗原溶液，然后将2.0-5.0 ml所述抗原溶液与等量弗氏完全佐剂混合，对实验动物进行注射；
b. 1-4周后，再用2.0-5.0 ml相同的抗原溶液与等量弗氏不完全佐剂混合，对上述实验动物注射一次，之后每隔1-4周注射一次，共计注射3-8次；
c.对免疫后的实验动物取血，分离纯化抗血清，得到抗11-脱氢血栓烷素B2特异性抗体3。
所述的11-脱氢血栓烷素B2钥孔血蓝蛋白免疫原的制备方法，包含以下步骤：
a.称取2.0-5.0 g磷酸二氢钾、3.0-6.0 g磷酸氢二钠、7.5-15.0 g氯化钠、1.0-2.5 g氯化镁，共同溶解于1.0-2.5 L去离子水中，调节pH至7.8-8.3，制成缓冲溶液F；
b.称取3.0-6.0 mg钥孔血蓝蛋白，0-8℃下溶解于3.0-6.0 ml上述缓冲溶液F中，制成钥孔血蓝蛋白载体溶液；
c.称取3.0-8.0 mg上述的11-脱氢血栓烷素B2衍生物，0-8℃下溶解于300-800 μl上述缓冲溶液F中，再加入0.2-0.5 ml二甲基甲酰胺，制成11-脱氢血栓烷素B2衍生物溶液F；
d.当上述11-脱氢血栓烷素B2衍生物溶液F刚变澄清时，将其逐滴加入上述钥孔血蓝蛋白载体溶液中，然后将此混合溶液在-18～-2℃下搅拌3-10小时；
e.将反应结束后的上述混合溶液用上述缓冲溶液F进行透析，透析后所得溶液即为11-脱氢血栓烷素B2钥孔血蓝蛋白免疫原溶液，在11-脱氢血栓烷素B2钥孔血蓝蛋白免疫原溶液中加入质量分数0.05-0.20%的叠氮钠防腐剂，于-20℃下储存。
所述的11-脱氢血栓烷素B2胶乳增强免疫比浊检测试剂的使用方法与上述的11-脱氢血栓烷素B2均相酶免疫检验试剂的使用方法基本相同。
所述的校准品是由浓度分别为0ng/ml、200ng/ml、400ng/ml、800ng/ml、1600ng/ml、3200ng/ml的11-脱氢血栓烷素B2，质量分数为0.1-1.0%的氯化钠、0.2-2.0%的牛血清白蛋白、0.25-1.5%的乙二胺四乙酸、0.01%-0.1%的叠氮钠防腐剂，50mmol/L pH=7.2的Tris-HCl缓冲液组成的一组校准品。
本发明利用一种新型11-脱氢血栓烷素B2衍生物研制的系列抗11-脱氢血栓烷素B2特异性抗体可以用于制备多种灵敏度高、特异性强、检测效果好的11-脱氢血栓烷素B2免疫检验试剂。本发明还提供了3种11-脱氢血栓烷素B2免疫检验试剂的制备方法及相应的使用方法。本发明提供的3种11-脱氢血栓烷素B2免疫检测方法操作方便、检测快速、结果准确、灵敏度高、特异性强，能够对人体血清、血浆等样本中的11-脱氢血栓烷素B2含量进行定量检测。克服了现有技术中11-脱氢血栓烷素B2检测方法存在的操作复杂、自动化程度低等缺陷，能有效指导临床个体化合理用药。
附图说明
图1是11-脱氢血栓烷素B2衍生物的化学结构鉴定图谱；
图2是11-脱氢血栓烷素B2均相酶免疫检测试剂的校准曲线；
图3是11-脱氢血栓烷素B2的ELISA检测试剂的校准曲线；
图4是11-脱氢血栓烷素B2胶乳增强免疫比浊检测试剂的校准曲线。
具体实施方式
下面结合附图以及具体实施方式，对本发明做进一步描述，这些附图均为简化的示意图，仅以示意方式说明本发明的基本结构，因此其仅显示与本发明有关的构成。除非特别指明，以下实施例中所用的试剂、仪器、设备、耗材均可从正规渠道商购买获得。
实施例1. 11-脱氢血栓烷素B2衍生物的合成
11-脱氢血栓烷素B2衍生物的化学结构如式Ⅰ所示：
Figure 301351DEST_PATH_IMAGE002
式Ⅰ。
上述11-脱氢血栓烷素B2衍生物的合成方法的具体路线如下所示：
Figure 425427DEST_PATH_IMAGE003
。
具体的合成步骤如下：
将100 mg化合物1溶解于2 mL 的二甲基甲酰胺(DMF)中，然后在0℃条件下加入0.1 g化合物2、0.6 g三乙胺(TEA)以及0.12 g 2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU)，制成反应混合溶液，将此反应混合溶液在室温下搅拌过夜，反应结束后将固体物质过滤除去，并将滤液浓缩，最后将浓缩所得的剩余物通过快速柱层析法(FCC)纯化，得到66 mg 11-脱氢血栓烷素B2衍生物(产率48%)。
实施例2. 11-脱氢血栓烷素B2均相酶免疫检测试剂的制备
11-脱氢血栓烷素B2均相酶免疫检测试剂的制备方法，具体步骤如下：
（1）将0.25%牛血清白蛋白、50mmol/L葡萄糖-6-磷酸及50mmol/L烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型依次加入50mmol/L Tris缓冲液中搅拌溶解制成R1缓冲液，再将抗11-脱氢血栓烷素B2特异性抗体1以1∶1500的体积比加入到上述R1缓冲液中混匀，再用6 mol/L的盐酸调节pH至8.0，制成R1试剂；
（2）将0.25%牛血清白蛋白加入100mmol/L Tris缓冲液中搅拌溶解制成R2缓冲液，再将11-脱氢血栓烷素B2葡萄糖-6-磷酸脱氢酶标记偶联物以1∶3000的体积比加入到上述R2缓冲液中混匀，再用6 mol/L的盐酸调节pH至7.6，制成R2试剂；
所述抗11-脱氢血栓烷素B2特异性抗体1的制备方法，包含以下步骤：
a. 将11-脱氢血栓烷素B2人血清白蛋白免疫原用PBS缓冲液稀释至3.5 mg/ml，得到抗原溶液，然后将3.5 ml所述抗原溶液与等量弗氏完全佐剂混合，对实验动物进行注射；
b. 2周后，再用3.5 ml相同的抗原溶液与等量弗氏不完全佐剂混合，对上述实验动物注射一次，之后每隔2周注射一次，共计注射5次；
c.对免疫后的实验动物取血，分离纯化抗血清，得到抗11-脱氢血栓烷素B2特异性抗体1。
所述的11-脱氢血栓烷素B2人血清白蛋白免疫原的制备方法，包含以下步骤：
a.称取3.5 g磷酸二氢钾、4.5 g磷酸氢二钠、11.25 g氯化钠、1.75 g氯化镁，共同溶解于1.75 L去离子水中，调节pH至8.1，制成缓冲溶液A；
b.称取4.5 mg人血清白蛋白，4℃下溶解于4.5 ml上述缓冲溶液A中，制成人血清白蛋白载体溶液；
c.称取5.5 mg权利要求1所述的11-脱氢血栓烷素B2衍生物，4℃下溶解于550 μl上述缓冲溶液A中，再加入3.5 ml二甲基甲酰胺，制成11-脱氢血栓烷素B2衍生物溶液A；
d.当上述11-脱氢血栓烷素B2衍生物溶液A刚变澄清时，将其逐滴加入上述人血清白蛋白载体溶液中，然后将此混合溶液在-10℃下搅拌6小时；
e.将反应结束后的上述混合溶液用上述缓冲溶液A进行透析，透析后所得溶液即为11-脱氢血栓烷素B2人血清白蛋白免疫原溶液，在11-脱氢血栓烷素B2人血清白蛋白免疫原溶液中加入质量分数0.10%的叠氮钠防腐剂，于-20℃下储存；
所述的11-脱氢血栓烷素B2葡萄糖-6-磷酸脱氢酶标记偶联物的制备方法，包含以下步骤：
a.称取2.0 g磷酸二氢钾、3.0 g磷酸氢二钠、11.25 g氯化钠、2.0 g氯化镁，共同溶解于1.75 L去离子水中，调节pH至8.1，制成缓冲溶液B；
b.称取4.5 mg葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、3.5 mg还原态的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸、2.5 mg葡萄糖-6-磷酸，4℃下溶解于4.5 ml上述缓冲溶液B中，再加入1.5 ml二甲基亚砜，制成葡萄糖-6-磷酸脱氢酶溶液；
c.称取5.5 mg权利要求1所述的11-脱氢血栓烷素B2衍生物，4℃下溶解于550 μl上述缓冲溶液B中，再加入350 µl二甲基甲酰胺，制成11-脱氢血栓烷素B2衍生物溶液B；
d.当上述11-脱氢血栓烷素B2衍生物溶液B刚变澄清时，将其逐滴加入上述葡萄糖-6-磷酸脱氢酶溶液中，然后将此混合溶液在-10℃下搅拌6小时；
e.将反应结束后的上述混合溶液用上述缓冲溶液B作为洗脱液通过G-25凝胶层析柱进行纯化，纯化后所得溶液即为11-脱氢血栓烷素B2葡萄糖-6-磷酸脱氢酶标记偶联物溶液，在11-脱氢血栓烷素B2葡萄糖-6-磷酸脱氢酶标记偶联物溶液中加入质量分数0.75%的BSA和质量分数0.15%的叠氮钠防腐剂，于4℃下储存。
实施例3.11-脱氢血栓烷素B2校准品的制备
将11-脱氢血栓烷素B2纯品粉末分别加入6份浓度为50mmol/L pH=7.2的Tris-HCl缓冲液中，搅拌溶解，至终浓度分别为0.00ng/ml、0.50ng/ml、1.50ng/ml、4.50ng/ml、13.50ng/ml、40.50ng/ml，然后在每份溶液中分别加入质量分数为0.5%的氯化钠、1.0%的牛血清白蛋白、0.75%的乙二胺四乙酸、0.05%的叠氮钠，搅拌均匀，即为11-脱氢血栓烷素B2校准品（一组6个浓度）。
实施例4. 11-脱氢血栓烷素B2均相酶免疫检测试剂校准曲线制作及质控实验
1. 制作均相酶免疫检测校准曲线：
在迈瑞 BS480全自动生化分析仪中放入R1试剂、R2试剂及校准品，然后对生化分析仪进行反应参数设置，具体参数详见表1；实际操作过程中需不断调整R1试剂和R2试剂的体积比例，同时调整测光点，最后由生化分析仪自动得出均相酶免疫检测校准曲线，如图1所示。
表1. 迈瑞 BS480全自动生化分析仪反应参数
项目名称 11-脱氢血栓烷素B2
R1试剂 160µl
R2试剂 40µl
样本量 20µl
定标方法 终点法
主波长 340nm
次波长 410nm
反应时间 10分钟
温育时间 8分钟
反应方向 上升
结果 ng/ml
结果精度 0.01
拟合方法 Polygonal
校准品浓度 0.00ng/ml、0.50ng/ml、1.50ng/ml、4.50ng/ml、13.50ng/ml、40.50ng/ml
2. 质控实验：
将11-脱氢血栓烷素B2纯品粉末溶解于甲醇中制成1mg/mL 的储存液，并将此储存液稀释于不含11-脱氢血栓烷素B2的健康人血浆中，至终浓度分别为0.00、1.00、10.00、30.00ng/mL，制成空白、低、中、高浓度的质控样本。利用上述的11-脱氢血栓烷素B2均相酶免疫检测方法，对质控样本进行测定，并根据步骤1中制作的均相酶免疫检测校准曲线，计算每个质控样本中11-脱氢血栓烷素B2的含量，每个质控样本重复测定10次，检测结果及数据分析详见表2。
表2. 11-脱氢血栓烷素B2均相酶免疫检验试剂检测结果及数据分析
质控样品 空白 低 中 高
样品浓度 (ng/ml) 0.00 1.00 10.00 30.00
测试1 0.00 1.05 10.38 30.75
测试2 0.00 1.08 10.73 31.81
测试3 0.00 0.95 10.30 30.56
测试4 0.00 0.92 10.28 31.03
测试5 0.00 1.01 10.44 29.02
测试6 0.00 0.96 9.55 29.61
测试7 0.00 0.97 10.80 32.78
测试8 0.00 0.98 10.25 29.90
测试9 0.00 1.03 10.51 30.93
测试10 0.00 1.00 9.96 30.15
平均值(ng/ml) 0.00 1.00 10.32 30.65
标准差（SD） / 0.05 0.36 1.09
精密度（CV%） / 5.00 3.49 3.56
回收率（%） / 100.00 103.20 102.16
实验结果表明：测定不同浓度质控样品中11-脱氢血栓烷素B2含量的CV值均低于5%，回收率均在95%-105%之间，说明本发明的11-脱氢血栓烷素B2均相酶免疫检测试剂测定生物样本中11-脱氢血栓烷素B2含量的精密度较高，结果准确。
实施例5. 11-脱氢血栓烷素B2 ELISA检测试剂中关键组分的制备
（1）抗11-脱氢血栓烷素B2特异性抗体2的制备方法，包含以下步骤：
a. 将11-脱氢血栓烷素B2人甲状腺球蛋白免疫原用PBS缓冲液稀释至3.75 mg/ml，得到抗原溶液，然后将3.75 ml所述抗原溶液与等量弗氏完全佐剂混合，对实验动物进行注射；
b. 3周后，再用3.75 ml相同的抗原溶液与等量弗氏不完全佐剂混合，对上述实验动物注射一次，之后每隔3周注射一次，共计注射6次；
c.对免疫后的实验动物取血，分离纯化抗血清，得到抗11-脱氢血栓烷素B2特异性抗体2。
所述的11-脱氢血栓烷素B2人甲状腺球蛋白免疫原的制备方法，包含以下步骤：
a.称取3.5 g磷酸二氢钾、4.5 g磷酸氢二钠、11.25 g氯化钠、1.75 g氯化镁，共同溶解于1.75 L去离子水中，调节pH至8.1，制成缓冲溶液C；
b.称取4.5 mg人甲状腺球蛋白，4℃下溶解于4.5 ml上述缓冲溶液C中，制成人甲状腺球蛋白载体溶液；
c.称取5.5 mg权利要求1所述的11-脱氢血栓烷素B2衍生物，4℃下溶解于550 μl上述缓冲溶液C中，再加入3.5 ml二甲基甲酰胺，制成11-脱氢血栓烷素B2衍生物溶液C；
d.当上述11-脱氢血栓烷素B2衍生物溶液C刚变澄清时，将其逐滴加入上述人甲状腺球蛋白载体溶液中，然后将此混合溶液在-10℃下搅拌6小时；
e.将反应结束后的上述混合溶液用上述缓冲溶液C进行透析，透析后所得溶液即为11-脱氢血栓烷素B2人甲状腺球蛋白免疫原溶液，在11-脱氢血栓烷素B2人甲状腺球蛋白免疫原溶液中加入质量分数0.10%的叠氮钠防腐剂，于-20℃下储存；
（2）11-脱氢血栓烷素B2辣根过氧化物酶标记偶联物的制备方法，包含以下步骤：
a.称取2.0 g磷酸二氢钾、3.0 g磷酸氢二钠、11.25 g氯化钠、2.0 g氯化镁，共同溶解于1.75 L去离子水中，调节pH至8.1，制成缓冲溶液D；
b.称取4.5 mg辣根过氧化物酶，4℃下溶解于4.5 mL上述缓冲溶液D中，再加入1.5 ml二甲基亚砜，制成辣根过氧化物酶溶液；
c.称取5.5 mg权利要求1所述的11-脱氢血栓烷素B2衍生物，4℃下溶解于550 μl上述缓冲溶液D中，再加入350 µl二甲基甲酰胺，制成11-脱氢血栓烷素B2衍生物溶液D；
d.当上述11-脱氢血栓烷素B2衍生物溶液D刚变澄清时，将其逐滴加入上述辣根过氧化物酶溶液中，然后将此混合溶液在-10℃下搅拌6小时；
e.将反应结束后的上述混合溶液用上述缓冲溶液D作为洗脱液通过G-25凝胶层析柱进行纯化，纯化后所得溶液即为11-脱氢血栓烷素B2辣根过氧化物酶标记偶联物溶液，在11-脱氢血栓烷素B2辣根过氧化物酶标记偶联物溶液中加入质量分数0.75%的BSA和质量分数0.10%的叠氮钠防腐剂，于4℃下储存。
实施例6.11-脱氢血栓烷素B2 ELISA检测试剂性能评估实验
1.11-脱氢血栓烷素B2 ELISA检测校准曲线的制作
(a)将抗11-脱氢血栓烷素B2特异性抗体2用磷酸盐缓冲液按1∶10000的比例进行稀释，制成抗体溶液，将抗体溶液按 100μL/孔的用量包被在96孔酶联板上，4℃过夜；
(b)用磷酸盐缓冲液洗涤3次后，加入200μL/孔的0.5%的牛血清白蛋白溶液，4℃封闭过夜，磷酸盐缓冲液洗涤3次；
(c)加入20μL/孔的校准品；
(d)加入100μL/孔工作浓度的11-脱氢血栓烷素B2辣根过氧化物酶标记偶联物；
(e)室温下孵育30分钟，磷酸盐缓冲液洗板5次；
(f)每孔加入100μL的3,3',5,5'-四甲基联苯胺，室温孵育30分钟；
(g)每孔加入100μL 的浓度为2mol/L的硫酸，终止反应；
(h)使用酶标仪测定450nm波长的吸光值；
(i)根据不同浓度校准品的吸光值制作校准曲线，如图2所示。
2.质控实验
将11-脱氢血栓烷素B2纯品粉末溶解于甲醇中制成1mg/mL 的储存液，并将此储存液稀释于不含11-脱氢血栓烷素B2的健康人血浆中，至终浓度分别为0.00、1.00、10.00、30.00ng/mL，制成空白、低、中、高浓度的质控样本。利用上述的11-脱氢血栓烷素B2的ELISA检测方法，测定上述空白、低、中、高浓度的质控样本在450nm 的吸光值。对照图2所示的11-脱氢血栓烷素B2的ELISA检测的校准曲线，计算每个质控样本中11-脱氢血栓烷素B2的含量，每个质控样本重复测定3次，根据测定结果计算回收率，检测数据详见表3。
表3. 11-脱氢血栓烷素B2 ELISA检测试剂性能评估数据
质控样品 空白 低 中 高
样品浓度(ng/mL) 0.00 1.00 10.00 30.00
测试1 0.00 0.97 10.54 31.30
测试2 0.00 1.06 9.60 30.97
测试3 0.00 1.03 10.33 29.08
平均值(ng/mL) 0.00 1.02 10.16 30.45
回收率(%) / 102.00 101.60 101.50
实验结果显示：本发明11-脱氢血栓烷素B2的ELISA检测试剂测定不同浓度样品中11-脱氢血栓烷素B2含量的回收率都在95%-105%的范围之内，说明本发明的11-脱氢血栓烷素B2的ELISA检测试剂测定生物样本中11-脱氢血栓烷素B2含量的准确度较高。
实施例7.11-脱氢血栓烷素B2胶乳增强免疫比浊检测试剂的制备
11-脱氢血栓烷素B2胶乳增强免疫比浊检测试剂的制备方法，包含以下步骤：
（1）将浓度为1.0 mg/mL的11-脱氢血栓烷素B2-多聚赖氨酸偶联物溶解于浓度为55mmol/L、pH值为7.5的磷酸钾缓冲液中，然后添加质量分数为1.0%的牛血清白蛋白、0.65%的氯化钠、0.3%的吐温-80、3.0%的丙三醇、0.55%的乙二胺四乙酸、3.0%的PEG-4000以及0.05%的叠氮钠防腐剂，搅拌均匀，调节pH=7.5，制成J1试剂；
（2）将质量分数为0.55%的抗11-脱氢血栓烷素B2特异性抗体3包被的胶乳颗粒加入浓度为60 mmol/L的硼酸钾缓冲液中，然后添加质量分数为1.25%的牛血清白蛋白、0.65%的氯化钠、0.3%的吐温-80、3.0%的丙三醇、0.55%的乙二胺四乙酸二钠、0.55%的Triton X-100以及0.05%的叠氮钠防腐剂，搅拌均匀，制成J2试剂；
所述的11-脱氢血栓烷素B2-多聚赖氨酸偶联物的制备方法，包含以下步骤：
a.称取3.5 g磷酸二氢钾、4.5 g磷酸氢二钠、11.25 g氯化钠、1.75 g氯化镁，共同溶解于1.75 L去离子水中，调节pH至8.0，制成缓冲溶液E；
b.称取4.5 mg多聚赖氨酸，4℃下溶解于4.5 ml上述缓冲溶液E中，制成多聚赖氨酸载体溶液；
c.称取5.5 mg上述的11-脱氢血栓烷素B2衍生物，4℃下溶解于550 μl上述缓冲溶液E中，再加入0.35 ml二甲基甲酰胺，制成11-脱氢血栓烷素B2衍生物溶液E；
d.当上述11-脱氢血栓烷素B2衍生物溶液E刚变澄清时，将其逐滴加入上述多聚赖氨酸载体溶液中，然后将此混合溶液在-10℃下搅拌6小时；
e.将反应结束后的上述混合溶液用上述缓冲溶液E进行透析，透析后所得溶液即为11-脱氢血栓烷素B2-多聚赖氨酸偶联物溶液，在11-脱氢血栓烷素B2-多聚赖氨酸偶联物溶液中加入质量分数0.10%的叠氮钠防腐剂，于-20℃下储存。
所述的抗11-脱氢血栓烷素B2特异性抗体3包被的胶乳颗粒的制备方法，包含以下步骤：
a.将1.0 mg直径为250 nm的聚苯乙烯胶乳颗粒加入3.0 mL、0.08mol/L、pH=6.2的MES缓冲液中，然后加入5.0 mg碳二亚胺与2.5 mg N-羟基琥珀酰亚胺，在37℃下搅拌2小时，15000 r/min离心15分钟后去除上清液，然后用30 mL浓度为0.1 mol/L、PH=8.2的磷酸钾缓冲液将沉淀物重悬，制成胶乳颗粒溶液；
b.将1.0 mg抗11-脱氢血栓烷素B2特异性抗体3用3.0 mL、0.1mol/L、pH=8.2的硼酸钠缓冲液稀释后，立即加入到上述胶乳颗粒溶液中，在37℃下振荡反应12小时，然后加入2.0mL、0.1 mol/L、pH=8.5的甘氨酸缓冲液搅拌2小时，反应结束后加入1.0 mg牛血清白蛋白，搅拌均匀后室温静置12小时，然后9000 r/mim离心15分钟，去除上清液，再将沉淀物用20mL、50 mmol/L、pH=8.0的Tris-HCl缓冲液洗涤3次，最后用30 mL、50 mmol/L、pH=8.5的甘氨酸缓冲液将沉淀物重悬，即为抗11-脱氢血栓烷素B2特异性抗体3包被的胶乳颗粒悬浊液；
所述抗11-脱氢血栓烷素B2特异性抗体3的制备方法，包含以下步骤：
a. 将11-脱氢血栓烷素B2钥孔血蓝蛋白免疫原用PBS缓冲液稀释至4.0 mg/ml，得到抗原溶液，然后将4.0 ml所述抗原溶液与等量弗氏完全佐剂混合，对实验动物进行注射；
b. 3周后，再用4.0 ml相同的抗原溶液与等量弗氏不完全佐剂混合，对上述实验动物注射一次，之后每隔4周注射一次，共计注射5次；
c.对免疫后的实验动物取血，分离纯化抗血清，得到抗11-脱氢血栓烷素B2特异性抗体3。
所述的11-脱氢血栓烷素B2钥孔血蓝蛋白免疫原的制备方法，包含以下步骤：
a.称取3.5 g磷酸二氢钾、4.5 g磷酸氢二钠、11.25 g氯化钠、1.75 g氯化镁，共同溶解于1.75 L去离子水中，调节pH至8.0，制成缓冲溶液F；
b.称取4.5 mg钥孔血蓝蛋白，4℃下溶解于4.5 ml上述缓冲溶液F中，制成钥孔血蓝蛋白载体溶液；
c.称取5.5 mg上述的11-脱氢血栓烷素B2衍生物，4℃下溶解于550 μl上述缓冲溶液F中，再加入3.5 ml二甲基甲酰胺，制成11-脱氢血栓烷素B2衍生物溶液F；
d.当上述11-脱氢血栓烷素B2衍生物溶液F刚变澄清时，将其逐滴加入上述钥孔血蓝蛋白载体溶液中，然后将此混合溶液在-10℃下搅拌6小时；
e.将反应结束后的上述混合溶液用上述缓冲溶液F进行透析，透析后所得溶液即为11-脱氢血栓烷素B2钥孔血蓝蛋白免疫原溶液，在11-脱氢血栓烷素B2钥孔血蓝蛋白免疫原溶液中加入质量分数0.10%的叠氮钠防腐剂，于-20℃下储存。
实施例8.11-脱氢血栓烷素B2胶乳增强免疫比浊检测试剂校准曲线制作及质控实验
1. 制作胶乳增强免疫比浊检测试剂校准曲线：
在奥林巴斯AU480全自动生化分析仪中放入J1试剂、J2试剂及校准品，然后对生化分析仪进行反应参数设置，具体参数详见表4；实际操作过程中需不断调整J1试剂和J2试剂的体积比例，同时调整测光点，最后由生化分析仪自动得出胶乳增强免疫比浊检测校准曲线，如图3所示。
表4. 奥林巴斯AU480全自动生化分析仪反应参数
项目名称 11-脱氢血栓烷素B2
J1试剂 200µl
J2试剂 50µl
样本量 20µl
定标方法 终点法
主波长 570nm
次波长 412nm
反应时间 10分钟
温育时间 8分钟
反应方向 下降
结果 ng/ml
结果精度 0.01
拟合方法 logit-log(5p)
校准品浓度 0.00ng/ml、0.50ng/ml、1.50ng/ml、4.50ng/ml、13.50ng/ml、40.50ng/ml
2. 质控实验：
将11-脱氢血栓烷素B2纯品粉末溶解于甲醇中制成1mg/mL 的储存液，并将此储存液稀释于不含11-脱氢血栓烷素B2的健康人血浆中，至终浓度分别为0.00、1.00、10.00、30.00ng/mL，制成空白、低、中、高浓度的质控样本。利用上述的胶乳增强免疫比浊检测方法，对质控样本进行测定，并根据步骤1中制作的胶乳增强免疫比浊检测校准曲线，计算每个质控样本中11-脱氢血栓烷素B2的含量，每个质控样本重复测定10次，检测结果及数据分析详见表5。
表5. 11-脱氢血栓烷素B2胶乳增强免疫比浊试剂检测结果及数据分析
质控样品 空白 低 中 高
样品浓度 (ng/ml) 0.00 1.00 10.00 30.00
测试1 0.00 1.03 10.12 30.80
测试2 0.00 1.07 10.23 30.93
测试3 0.00 0.97 10.20 29.59
测试4 0.00 0.92 10.00 30.34
测试5 0.00 1.01 10.13 31.81
测试6 0.00 1.00 9.95 29.70
测试7 0.00 1.02 10.36 29.72
测试8 0.00 1.03 10.58 29.58
测试9 0.00 0.94 10.80 30.41
测试10 0.00 0.96 10.52 30.81
平均值(ng/ml) 0.00 1.00 10.29 30.37
标准差（SD） / 0.05 0.27 0.74
精密度（CV%） / 5.00 2.62 2.44
回收率（%） / 100.00 102.90 101.23
实验结果表明：测定不同浓度质控样品中11-脱氢血栓烷素B2含量的CV值均低于5%，回收率均在95%-105%之间，说明本发明的11-脱氢血栓烷素B2胶乳增强免疫比浊检测试剂测定生物样本中11-脱氢血栓烷素B2含量的精密度较高，结果准确。
以上述依据本发明的理想实施例为启示，通过上述的说明内容，相关技术人员完全可以在不偏离本项发明技术思想的范围内，进行多样的变更以及修改。本项发明的技术性范围并不局限于说明书上的内容，必须要根据权利要求范围来确定其技术性范围。

Claims (10)

1.一种11-脱氢血栓烷素B2衍生物，其特征在于，其结构式如式Ⅰ所示：
Figure 672665DEST_PATH_IMAGE001
式Ⅰ。
2.一种如权利要求1所述的11-脱氢血栓烷素B2衍生物的合成方法，其特征在于，所述合成方法的具体路线如下所示：
Figure 717369DEST_PATH_IMAGE002
；
将100 mg化合物1溶解于2 mL 的二甲基甲酰胺中，然后在0℃条件下加入0.1 g化合物2、0.6 g三乙胺以及0.12 g 2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯，制成反应混合溶液，将此反应混合溶液在室温下搅拌过夜，反应结束后将固体物质过滤除去，并将滤液浓缩，最后将浓缩所得的剩余物通过快速柱层析法纯化，得到11-脱氢血栓烷素B2衍生物。
3.一种11-脱氢血栓烷素B2均相酶免疫检测试剂，其特征在于，由R1试剂与R2试剂组成，所述R1试剂包含抗11-脱氢血栓烷素B2特异性抗体1与R1缓冲液，所述R2试剂包含11-脱氢血栓烷素B2葡萄糖-6-磷酸脱氢酶标记偶联物与R2缓冲液；所述抗11-脱氢血栓烷素B2特异性抗体1为11-脱氢血栓烷素B2人血清白蛋白免疫原免疫实验动物后生产得到的抗体；所述的11-脱氢血栓烷素B2人血清白蛋白免疫原，由权利要求1所述的11-脱氢血栓烷素B2衍生物与人血清白蛋白偶联而成，其结构式如式Ⅱ所示：
Figure 559423DEST_PATH_IMAGE003
式Ⅱ；
所述的实验动物为家兔、山羊、小鼠、绵羊、豚鼠或马中的任意一种；
所述的R1缓冲液含有酶底物、辅酶、牛血清白蛋白及Tris缓冲液，所述的酶底物为葡萄糖-6-磷酸，所述的辅酶为烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型；
所述的11-脱氢血栓烷素B2葡萄糖-6-磷酸脱氢酶标记偶联物由权利要求1所述的11-脱氢血栓烷素B2衍生物与葡萄糖-6-磷酸脱氢酶偶联而成；其结构式如式Ⅲ所示：
Figure 79266DEST_PATH_IMAGE004
式Ⅲ；
所述的R2缓冲液为含有牛血清白蛋白的Tris缓冲液。
4.一种如权利要求3所述的11-脱氢血栓烷素B2均相酶免疫检测试剂的制备方法，其特征在于，所述的制备方法包含以下步骤：
（1）将0.25%牛血清白蛋白、50mmol/L葡萄糖-6-磷酸及50mmol/L烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型依次加入50mmol/L Tris缓冲液中搅拌溶解制成R1缓冲液，再将抗11-脱氢血栓烷素B2特异性抗体1以1∶500-1∶5000的体积比加入到上述R1缓冲液中混匀，再用6 mol/L的盐酸调节pH至8.0，制成R1试剂；
（2）将0.25%牛血清白蛋白加入100mmol/L Tris缓冲液中搅拌溶解制成R2缓冲液，再将11-脱氢血栓烷素B2葡萄糖-6-磷酸脱氢酶标记偶联物以1∶1000-1∶8000的体积比加入到上述R2缓冲液中混匀，再用6 mol/L的盐酸调节pH至7.6，制成R2试剂；
所述抗11-脱氢血栓烷素B2特异性抗体1的制备方法，包含以下步骤：
a. 将11-脱氢血栓烷素B2人血清白蛋白免疫原用PBS缓冲液稀释至2.0-5.0 mg/ml，得到抗原溶液，然后将2.0-5.0 ml所述抗原溶液与等量弗氏完全佐剂混合，对实验动物进行注射；
b. 1-4周后，再用2.0-5.0 ml相同的抗原溶液与等量弗氏不完全佐剂混合，对上述实验动物注射一次，之后每隔1-4周注射一次，共计注射3-8次；
c.对免疫后的实验动物取血，分离纯化抗血清，得到抗11-脱氢血栓烷素B2特异性抗体1；
所述的11-脱氢血栓烷素B2人血清白蛋白免疫原的制备方法，包含以下步骤：
a.称取2.0-5.0 g磷酸二氢钾、3.0-6.0 g磷酸氢二钠、7.5-15.0 g氯化钠、1.0-2.5 g氯化镁，共同溶解于1.0-2.5 L去离子水中，调节pH至7.8-8.3，制成缓冲溶液A；
b.称取3.0-6.0 mg人血清白蛋白，0-8℃下溶解于3.0-6.0 ml上述缓冲溶液A中，制成人血清白蛋白载体溶液；
c.称取3.0-8.0 mg权利要求1所述的11-脱氢血栓烷素B2衍生物，0-8℃下溶解于300-800 μl上述缓冲溶液A中，再加入0.2-0.5 ml二甲基甲酰胺，制成11-脱氢血栓烷素B2衍生物溶液A；
d.当上述11-脱氢血栓烷素B2衍生物溶液A刚变澄清时，将其逐滴加入上述人血清白蛋白载体溶液中，然后将此混合溶液在-18～-2℃下搅拌3-10小时；
e.将反应结束后的上述混合溶液用上述缓冲溶液A进行透析，透析后所得溶液即为11-脱氢血栓烷素B2人血清白蛋白免疫原溶液，在11-脱氢血栓烷素B2人血清白蛋白免疫原溶液中加入质量分数0.05-0.20%的叠氮钠防腐剂，于-20℃下储存；
所述的11-脱氢血栓烷素B2葡萄糖-6-磷酸脱氢酶标记偶联物的制备方法，包含以下步骤：
a.称取1.0-3.0 g磷酸二氢钾、1.0-5.0 g磷酸氢二钠、7.5-15.0 g氯化钠、1.0-3.0 g氯化镁，共同溶解于1.0-2.5 L去离子水中，调节pH至7.8-8.3，制成缓冲溶液B；
b.称取3.0-6.0 mg葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、2.0-5.0 mg还原态的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸、1.5-3.5 mg葡萄糖-6-磷酸，0-8℃下溶解于3.0-6.0 ml上述缓冲溶液B中，再加入1.0-2.0 ml二甲基亚砜，制成葡萄糖-6-磷酸脱氢酶溶液；
c.称取3.0-8.0 mg权利要求1所述的11-脱氢血栓烷素B2衍生物，0-8℃下溶解于300-800 μl上述缓冲溶液B中，再加入200-500 µl二甲基甲酰胺，制成11-脱氢血栓烷素B2衍生物溶液B；
d.当上述11-脱氢血栓烷素B2衍生物溶液B刚变澄清时，将其逐滴加入上述葡萄糖-6-磷酸脱氢酶溶液中，然后将此混合溶液在-18～-2℃下搅拌3-10小时；
e.将反应结束后的上述混合溶液用上述缓冲溶液B作为洗脱液通过G-25凝胶层析柱进行纯化，纯化后所得溶液即为11-脱氢血栓烷素B2葡萄糖-6-磷酸脱氢酶标记偶联物溶液，在11-脱氢血栓烷素B2葡萄糖-6-磷酸脱氢酶标记偶联物溶液中加入质量分数0.5-1.0%的BSA和质量分数0.05-0.20%的叠氮钠防腐剂，于0～8℃下储存。
5.一种如权利要求3所述的11-脱氢血栓烷素B2均相酶免疫检测试剂的使用方法，其特征在于，包括以下操作步骤：
（1）在全自动生化分析仪中加入校准品、R1试剂，混匀，37℃温育3-5分钟；加入R2试剂，混匀，37℃恒温5-10分钟后，340nm主波长/405nm次波长进行检测，连续监测3分钟内的吸光度变化率，由全自动生化分析仪制作校准曲线；
（2）在全自动生化分析仪中加入待测样本、R1试剂，混匀，37℃温育3-5分钟；加入R2试剂，混匀，37℃恒温5-10分钟后，340nm主波长/405nm次波长进行检测，连续监测3分钟内的吸光度变化率，由全自动生化分析仪根据步骤（一）中制作的校准曲线自动计算待测样本中11-脱氢血栓烷素B2的含量；
所述试剂R1与试剂R2按1:1～4:1的体积比使用；所述的待测样本为血清、血浆、尿液、唾液、组织液或脑脊液中的任意一种。
6.一种11-脱氢血栓烷素B2的ELISA检测试剂，其特征在于，该检测试剂含有：抗11-脱氢血栓烷素B2特异性抗体2、11-脱氢血栓烷素B2辣根过氧化物酶标记偶联物及反应底物；
所述抗11-脱氢血栓烷素B2特异性抗体2为11-脱氢血栓烷素B2人甲状腺球蛋白免疫原免疫实验动物后生产得到的抗体；所述的11-脱氢血栓烷素B2人甲状腺球蛋白免疫原，由权利要求1所述的11-脱氢血栓烷素B2衍生物与人甲状腺球蛋白偶联而成，其结构式如式Ⅳ所示：
Figure 955955DEST_PATH_IMAGE005
式Ⅳ；
所述的实验动物为家兔、山羊、小鼠、绵羊、豚鼠或马中的任意一种；
所述的11-脱氢血栓烷素B2辣根过氧化物酶标记偶联物由权利要求1所述的11-脱氢血栓烷素B2衍生物与辣根过氧化物酶偶联而成；其结构式如式Ⅴ所示：
Figure 903051DEST_PATH_IMAGE006
式Ⅴ；
所述的反应底物为3,3',5,5'-四甲基联苯胺；
所述抗11-脱氢血栓烷素B2特异性抗体2的制备方法，包含以下步骤：
a. 将11-脱氢血栓烷素B2人甲状腺球蛋白免疫原用PBS缓冲液稀释至2.0-5.0 mg/ml，得到抗原溶液，然后将2.0-5.0 ml所述抗原溶液与等量弗氏完全佐剂混合，对实验动物进行注射；
b. 1-4周后，再用2.0-5.0 ml相同的抗原溶液与等量弗氏不完全佐剂混合，对上述实验动物注射一次，之后每隔1-4周注射一次，共计注射3-8次；
c.对免疫后的实验动物取血，分离纯化抗血清，得到抗11-脱氢血栓烷素B2特异性抗体2；
所述的11-脱氢血栓烷素B2人甲状腺球蛋白免疫原的制备方法，包含以下步骤：
a.称取2.0-5.0 g磷酸二氢钾、3.0-6.0 g磷酸氢二钠、7.5-15.0 g氯化钠、1.0-2.5 g氯化镁，共同溶解于1.0-2.5 L去离子水中，调节pH至7.8-8.3，制成缓冲溶液C；
b.称取3.0-6.0 mg人甲状腺球蛋白，0-8℃下溶解于3.0-6.0 ml上述缓冲溶液C中，制成人甲状腺球蛋白载体溶液；
c.称取3.0-8.0 mg权利要求1所述的11-脱氢血栓烷素B2衍生物，0-8℃下溶解于300-800 μl上述缓冲溶液C中，再加入0.2-0.5 ml二甲基甲酰胺，制成11-脱氢血栓烷素B2衍生物溶液C；
d.当上述11-脱氢血栓烷素B2衍生物溶液C刚变澄清时，将其逐滴加入上述人甲状腺球蛋白载体溶液中，然后将此混合溶液在-18～-2℃下搅拌3-10小时；
e.将反应结束后的上述混合溶液用上述缓冲溶液C进行透析，透析后所得溶液即为11-脱氢血栓烷素B2人甲状腺球蛋白免疫原溶液，在11-脱氢血栓烷素B2人甲状腺球蛋白免疫原溶液中加入质量分数0.05-0.20%的叠氮钠防腐剂，于-20℃下储存；
所述的11-脱氢血栓烷素B2辣根过氧化物酶标记偶联物的制备方法，包含以下步骤：
a.称取1.0-3.0 g磷酸二氢钾、1.0-5.0 g磷酸氢二钠、7.5-15.0 g氯化钠、1.0-3.0 g氯化镁，共同溶解于1.0-2.5 L去离子水中，调节pH至7.8-8.3，制成缓冲溶液D；
b.称取3.0-6.0 mg辣根过氧化物酶，0-8℃下溶解于3.0-6.0 mL上述缓冲溶液D中，再加入1.0-2.0 ml二甲基亚砜，制成辣根过氧化物酶溶液；
c.称取3.0-8.0 mg权利要求1所述的11-脱氢血栓烷素B2衍生物，0-8℃下溶解于300-800 μl上述缓冲溶液D中，再加入200-500 µl二甲基甲酰胺，制成11-脱氢血栓烷素B2衍生物溶液D；
d.当上述11-脱氢血栓烷素B2衍生物溶液D刚变澄清时，将其逐滴加入上述辣根过氧化物酶溶液中，然后将此混合溶液在-18～-2℃下搅拌3-10小时；
e.将反应结束后的上述混合溶液用上述缓冲溶液D作为洗脱液通过G-25凝胶层析柱进行纯化，纯化后所得溶液即为11-脱氢血栓烷素B2辣根过氧化物酶标记偶联物溶液，在11-脱氢血栓烷素B2辣根过氧化物酶标记偶联物溶液中加入质量分数0.5-1.0%的BSA和质量分数0.05-0.20%的叠氮钠防腐剂，于0～8℃下储存。
7.一种如权利要求6所述的11-脱氢血栓烷素B2的ELISA检测试剂的使用方法，其特征在于，包括以下操作步骤：
(a)将抗11-脱氢血栓烷素B2特异性抗体2用磷酸盐缓冲液按1∶1000-1∶20000的比例进行稀释，制成抗体溶液，将抗体溶液按 100μL/孔的用量包被在96孔酶联板上，4℃过夜；
(b)用磷酸盐缓冲液洗涤3次后，加入200μL/孔的0.5%的牛血清白蛋白溶液，4℃封闭过夜，磷酸盐缓冲液洗涤3次；
(c)加入20μL/孔的校准品及待测样本；
(d)加入100μL/孔工作浓度的11-脱氢血栓烷素B2辣根过氧化物酶标记偶联物；
(e)室温下孵育30分钟，磷酸盐缓冲液洗板5次；
(f)每孔加入100μL的3,3',5,5'-四甲基联苯胺，室温孵育30分钟；
(g)每孔加入100μL 的浓度为2mol/L的硫酸，终止反应；
(h)使用酶标仪测定450nm波长的吸光值；
(i)根据不同浓度校准品的吸光值制作校准曲线，并根据校准曲线与待测样本的吸光值计算待测样本中11-脱氢血栓烷素B2的含量；
所述的待测样本为血清、血浆、尿液、唾液、组织液或脑脊液中的任意一种。
8.一种11-脱氢血栓烷素B2胶乳增强免疫比浊检测试剂，其特征在于，包括：J1试剂与J2试剂；
所述J1试剂由11-脱氢血栓烷素B2-多聚赖氨酸偶联物和J1缓冲液组成，所述J2试剂由抗11-脱氢血栓烷素B2特异性抗体3包被的胶乳颗粒和J2缓冲液组成；
所述的11-脱氢血栓烷素B2-多聚赖氨酸偶联物由权利要求1所述的11-脱氢血栓烷素B2衍生物与多聚赖氨酸偶联而成，其结构式如式Ⅵ所示：
Figure 966822DEST_PATH_IMAGE007
式Ⅵ；
所述J1缓冲液为含有牛血清白蛋白、氯化钠、吐温-80、丙三醇、乙二胺四乙酸、PEG-4000、叠氮钠防腐剂的磷酸钾缓冲液；
所述的抗11-脱氢血栓烷素B2特异性抗体3为11-脱氢血栓烷素B2钥孔血蓝蛋白免疫原免疫实验动物后生产得到的抗体；所述的11-脱氢血栓烷素B2钥孔血蓝蛋白免疫原，由权利要求1所述的11-脱氢血栓烷素B2衍生物与钥孔血蓝蛋白偶联而成，其结构式如式Ⅶ所示：
Figure 558865DEST_PATH_IMAGE008
式Ⅶ；
所述的实验动物为家兔、山羊、小鼠、绵羊、豚鼠或马中的任意一种；
所述胶乳颗粒为表面带有羧基、氨基、羟基、酰肼基或氯甲基修饰的聚苯乙烯胶乳颗粒，直径范围为50-450nm；
所述J2缓冲液为含有牛血清白蛋白、氯化钠、吐温-80、丙三醇、乙二胺四乙酸二钠、Triton X-100、叠氮钠防腐剂的硼酸钾缓冲液。
9.一种如权利要求8所述的11-脱氢血栓烷素B2胶乳增强免疫比浊检测试剂的制备方法，其特征在于，所述的制备方法包含以下步骤：
（1）将浓度为0.05-2.0 mg/mL的11-脱氢血栓烷素B2-多聚赖氨酸偶联物溶解于浓度为10-100 mmol/L、pH值为7.0-8.0的磷酸钾缓冲液中，然后添加质量分数为0.1%-2.0%的牛血清白蛋白、0.25%-1.0%的氯化钠、0.1%-0.5%的吐温-80、1.0%-5.0%的丙三醇、0.1%-1.0%的乙二胺四乙酸、1.0%-5.0%的PEG-4000以及0.01%-0.1%的叠氮钠防腐剂，搅拌均匀，调节pH=7.5，制成J1试剂；
（2）将质量分数为0.05-1.0%的抗11-脱氢血栓烷素B2特异性抗体3包被的胶乳颗粒加入浓度为20-100 mmol/L的硼酸钾缓冲液中，然后添加质量分数为0.1%-2.5%的牛血清白蛋白、0.25%-1.0%的氯化钠、0.1%-0.5%的吐温-80、1.0%-5.0%的丙三醇、0.1%-1.0%的乙二胺四乙酸二钠、0.1-1.0%的Triton X-100以及0.01%-0.1%的叠氮钠防腐剂，搅拌均匀，制成J2试剂；
所述的11-脱氢血栓烷素B2-多聚赖氨酸偶联物的制备方法，包含以下步骤：
a.称取2.0-5.0 g磷酸二氢钾、3.0-6.0 g磷酸氢二钠、7.5-15.0 g氯化钠、1.0-2.5 g氯化镁，共同溶解于1.0-2.5 L去离子水中，调节pH至7.8-8.3，制成缓冲溶液E；
b.称取3.0-6.0 mg多聚赖氨酸，0-8℃下溶解于3.0-6.0 ml上述缓冲溶液E中，制成多聚赖氨酸载体溶液；
c.称取3.0-8.0 mg权利要求1所述的11-脱氢血栓烷素B2衍生物，0-8℃下溶解于300-800 μl上述缓冲溶液E中，再加入0.2-0.5 ml二甲基甲酰胺，制成11-脱氢血栓烷素B2衍生物溶液E；
d.当上述11-脱氢血栓烷素B2衍生物溶液E刚变澄清时，将其逐滴加入上述多聚赖氨酸载体溶液中，然后将此混合溶液在-18～-2℃下搅拌3-10小时；
e.将反应结束后的上述混合溶液用上述缓冲溶液E进行透析，透析后所得溶液即为11-脱氢血栓烷素B2-多聚赖氨酸偶联物溶液，在11-脱氢血栓烷素B2-多聚赖氨酸偶联物溶液中加入质量分数0.05-0.20%的叠氮钠防腐剂，于-20℃下储存；
所述的抗11-脱氢血栓烷素B2特异性抗体3包被的胶乳颗粒的制备方法，包含以下步骤：
a.将0.5-1.5 mg直径为50-450 nm的聚苯乙烯胶乳颗粒加入1.5-4.5 mL、0.08mol/L、pH=6.2的MES缓冲液中，然后加入2.5-7.5 mg碳二亚胺与0.5-4.5 mg N-羟基琥珀酰亚胺，在37℃下搅拌1-3小时，15000 r/min离心15分钟后去除上清液，然后用15-45mL浓度为0.1mol/L、PH=8.2的磷酸钾缓冲液将沉淀物重悬，制成胶乳颗粒溶液；
b.将0.5-1.5 mg抗11-脱氢血栓烷素B2特异性抗体3用1.5-4.5 mL、0.1mol/L、pH=8.2的硼酸钠缓冲液稀释后，立即加入到上述胶乳颗粒溶液中，在37℃下振荡反应6-24小时，然后加入1.0-3.0 mL、0.1 mol/L、pH=8.5的甘氨酸缓冲液搅拌1-3小时，反应结束后加入0.5-1.5 mg牛血清白蛋白，搅拌均匀后室温静置6-24小时，然后9000 r/mim离心15分钟，去除上清液，再将沉淀物用10-30 mL、50 mmol/L、pH=8.0的Tris-HCl缓冲液洗涤3次，最后用15-45mL、50 mmol/L、pH=8.5的甘氨酸缓冲液将沉淀物重悬，即为抗11-脱氢血栓烷素B2特异性抗体3包被的胶乳颗粒悬浊液；
所述抗11-脱氢血栓烷素B2特异性抗体3的制备方法，包含以下步骤：
a. 将11-脱氢血栓烷素B2钥孔血蓝蛋白免疫原用PBS缓冲液稀释至2.0-5.0 mg/ml，得到抗原溶液，然后将2.0-5.0 ml所述抗原溶液与等量弗氏完全佐剂混合，对实验动物进行注射；
b. 1-4周后，再用2.0-5.0 ml相同的抗原溶液与等量弗氏不完全佐剂混合，对上述实验动物注射一次，之后每隔1-4周注射一次，共计注射3-8次；
c.对免疫后的实验动物取血，分离纯化抗血清，得到抗11-脱氢血栓烷素B2特异性抗体3；
所述的11-脱氢血栓烷素B2钥孔血蓝蛋白免疫原的制备方法，包含以下步骤：
a.称取2.0-5.0 g磷酸二氢钾、3.0-6.0 g磷酸氢二钠、7.5-15.0 g氯化钠、1.0-2.5 g氯化镁，共同溶解于1.0-2.5 L去离子水中，调节pH至7.8-8.3，制成缓冲溶液F；
b.称取3.0-6.0 mg钥孔血蓝蛋白，0-8℃下溶解于3.0-6.0 ml上述缓冲溶液F中，制成钥孔血蓝蛋白载体溶液；
c.称取3.0-8.0 mg权利要求1所述的11-脱氢血栓烷素B2衍生物，0-8℃下溶解于300-800 μl上述缓冲溶液F中，再加入0.2-0.5 ml二甲基甲酰胺，制成11-脱氢血栓烷素B2衍生物溶液F；
d.当上述11-脱氢血栓烷素B2衍生物溶液F刚变澄清时，将其逐滴加入上述钥孔血蓝蛋白载体溶液中，然后将此混合溶液在-18～-2℃下搅拌3-10小时；
e.将反应结束后的上述混合溶液用上述缓冲溶液F进行透析，透析后所得溶液即为11-脱氢血栓烷素B2钥孔血蓝蛋白免疫原溶液，在11-脱氢血栓烷素B2钥孔血蓝蛋白免疫原溶液中加入质量分数0.05-0.20%的叠氮钠防腐剂，于-20℃下储存。
10.根据权利要求5或7中任一项所述的校准品，其特征在于，所述校准品是由浓度分别为0.00ng/ml、0.50ng/ml、1.50ng/ml、4.50ng/ml、13.50ng/ml、40.50ng/ml的11-脱氢血栓烷素B2，质量分数为0.1-1.0%的氯化钠、0.2-2.0%的牛血清白蛋白、0.25-1.5%的乙二胺四乙酸、0.01%-0.1%的叠氮钠防腐剂，50mmol/L pH=7.2的Tris-HCl缓冲液组成的一组校准品。
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