CN111821320A - 用以提升运动表现与抗疲劳的食品组合物以及医药组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种用以提升运动表现与抗疲劳的食品组合物以及医药组合物。本发明提供一种具有提升运动表现与抗疲劳的经分离的乳酸菌菌株：长双歧杆菌长亚种(Bifidobacterium longum subsp.longum)OLP‑01菌株。经由动物实验证实，OLP‑01菌株能够有效提升肌力及游泳耐力外，也能够显著降低疲劳相关的生化指标包括血乳酸、血尿素氮浓度以及肌酸激酶活性。

Description

用以提升运动表现与抗疲劳的食品组合物以及医药组合物
技术领域
本发明是关于一种食品组合物以及医药组合物，特别是一种用以提升运动表现及抗疲劳的含乳酸菌菌株的食品组合物以及医药组合物。
背景技术
现代人生活繁忙，竞争压力大，各种压力常造成人们处于疲劳或过劳的状态，进而可能危害到健康。疲劳(Fatigue)系指动作或运动表现失去正常水准，而疲劳感则为主观的感受，通常与组织损伤以及能源短缺有关。疲劳或疲劳感是在承受运动或其他类型的压力挑战后所发生，其恢复时间的长短会受到不同的挑战模式与营养品介入方式而有所差异。
益生菌(Probiotics)为一种或多种微生物当喂食人类或动物时可增进其肠内菌丛的品质。益生菌必须作用于其宿主，增进宿主的健康。依据卫生福利部资料显示，目前经抗疲劳功效认证的商品中尚未有任何益生菌相关的商品(https://consumer.fda.gov.tw/Food/InfoHealthFood.aspx？nodeID＝162#)。
乳酸菌一般来说是安全的，找出具有提升运动表现及抗疲劳功能的乳酸菌菌株，并发展出安全且可长期使用的营养补充品便是目前极需努力的目标。
发明内容
本发明提供一种包含乳酸菌菌株的食品组合物及医药组合物，其可提升人体运动能力并增强身体组成，以达到提升运动表现及抗疲劳的功效。
本发明的一实施例提供一种含乳酸菌菌株的食品组合物，包含具有提升运动能力与抗疲劳的活性效果的经分离乳酸菌菌株，其中该乳酸菌菌株为长双歧杆菌长亚种(Bifidobacterium longum subsp.longum)OLP-01菌株，保藏编号为CGMCC No.17345，上述菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)(保藏日期2019年03月18日)；以及生理上可接受的赋形剂、稀释剂或载体。
本发明另一实施例的一种含乳酸菌菌株的医药组合物，包含具有提升运动能力与抗疲劳的活性效果的经分离乳酸菌菌株，其中该乳酸菌菌株为长双歧杆菌长亚种(Bifidobacterium longum subsp.longum)OLP-01菌株，保藏编号为CGMCC No.17345，上述菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；以及医药上可接受的赋形剂、稀释剂或载体。
以下藉由具体实施例配合附图详加说明，当更容易了解本发明的目的、技术内容、特点及其所达成的功效。
附图说明
图1为一长条图，显示补充本发明的OLP-01菌株对于前肢抓力表现的影响。
图2为一长条图，显示补充本发明的OLP-01菌株对于游泳运动力竭时间表现的影响。
图3为一长条图，显示补充本发明的OLP-01菌株对于游泳10分钟后血液中葡萄糖浓度的影响。
图4为一长条图，显示补充本发明的OLP-01菌株对于游泳10分钟后血氨浓度的影响。
图5为一长条图，显示补充本发明的OLP-01菌株对于单次90分钟游泳运动并休息60分钟后血液中尿素氮浓度的影响。
图6为一长条图，显示补充本发明的OLP-01菌株对于单次90分钟游泳运动并休息60分钟后血液中肌酸激酶活性的影响。
图7为一长条图，显示补充本发明的OLP-01菌株对于肝脏以及肌肉部位肝糖含量的影响。
图8为补充本发明的OLP-01菌株对于各项组织器官的病理切片。
图9为补充本发明的OLP-01菌株对于腓肠肌的免疫染色切片。
用于专利程序的微生物保存：
本发明的OLP-01菌株
保藏日期：2019年03月18日
保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)
保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所
保藏编号：CGMCC No.17345
分类命名：长双歧杆菌长亚种(Bifidobacterium longum subsp.longum)
具体实施方式
以下将详述本发明的各实施例，并配合附图作为例示。除了这些详细说明之外，本发明亦可广泛地施行于其它的实施例中，任何所述实施例的轻易替代、修改、等效变化都包含在本发明的范围内，并以申请专利范围为准。在说明书的描述中，为了使读者对本发明有较完整的了解，提供了许多特定细节；然而，本发明可能在省略部分或全部特定细节的前提下，仍可实施。此外，众所周知的步骤或元件并未描述于细节中，以避免对本发明形成不必要的限制。附图中相同或类似的元件将以相同或类似符号来表示。特别注意的是，附图仅为示意之用，并非代表元件实际的尺寸或数量，有些细节可能未完全绘出，以求附图的简洁。
本发明所述的乳酸菌菌株是从健康人体肠道筛选出的长双歧杆菌长亚种(Bifidobacterium longum subsp.longum)OLP-01菌株，又称龙根菌，其冷冻干燥培养物已于2019年03月18日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号)。保藏的详细资料如以下表1所示。
表1乳酸菌菌株的保藏资料
菌株名 分类 保藏编号 保藏日期
OLP-01 长双歧杆菌长亚种 CGMCC No.17345 2019年03月18日
如表1所列已保藏的乳酸菌，保藏编号为CGMCC No.17345的长双歧杆菌长亚种(Bifidobacterium longum subsp.longum)OLP-01菌株具有提升人体运动能力、增强身体组成，进而达到提升运动表现及抗疲劳的功效。
本发明包含具有提升运动能力与抗疲劳的活性效果的经分离乳酸菌菌株，其为长双歧杆菌长亚种(Bifidobacterium longum subsp.longum)OLP-01菌株，保藏编号为CGMCCNo.17345，上述菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；以及生理上可接受的赋形剂、稀释剂或载体所组成的食品组合物，或医药上可接受的赋形剂、稀释剂或载体所组成的医药组合物。其中乳酸菌菌株为具有活性或失去活性的菌株。
于食品组合物的实施例中，生理上可接受的赋形剂、稀释剂或载体可为一食品。举例而言，食品可包含但不限于乳制饮品、茶、咖啡、口香糖、洁牙糖(例如口含片、咀嚼锭、软糖等)或以上的组合，其中乳制饮品可包含发酵乳、优格、乳酪或乳制饮品乳粉等。医药组合物可为口服剂型。举例而言，口服剂型可为锭剂、胶囊、溶液剂及粉剂等。
于食品组合物或医药组合物的实施例中，乳酸菌菌株的数量为106CFU以上；较佳者，乳酸菌菌株的数量为1010CFU以上。
实例1：本发明的乳酸菌菌株的形态学以及一般性质
根据16S rDNA序列分析以及API细菌鉴定系统分析结果，确认菌株在分类学上的特征，上述菌株在形态学及一般性质上的特征详细如表2所列：
表2本发明的乳酸菌菌株的形态学及一般性质特征
Figure BDA0002128670300000041
本发明的OLP-01菌株投予剂量的计算是以60公斤成人每日建议量为1×1010CFU加以换算。依据2005年美国食品药物管理局所公告的估算方法(Estimating the maximumsafe starting dose in initial clinical trials for therapeutics in adulthealthy volunteers)(US FDA,2005)，人体与小鼠的换算系数为12.3倍，故小鼠的1倍剂量组为2.05×109CFU/kg/day，2倍剂量组为4.10×109CFU/kg/day，5倍剂量组为1.03×1010CFU/kg/day，空白对照组给予等体积的磷酸盐缓冲生理盐水(Phosphate bufferedsaline，PBS)。
实验动物购入6周大、雄性ICR品系小鼠(购自乐斯科生物科技股份有限公司)，共计40只，以动物饲料(Chow5001)与水提供予小鼠自由摄食，动物房温度控制在24±2℃、湿度60％～70％，光照与黑暗各12小时。动物预养两周适应环境，且所有小鼠皆为8周大成鼠。挑选体重相近的ICR小鼠40只，以随机的方式将小鼠分为四组，分别为(a)空白对照组(Vehicle)；(b)喂食1倍剂量组(OLP-01-1X)：2.05×109CFU/kg mouse/day；(c)喂食2倍剂量组(OLP-01-2X)：4.10×109CFU/kg mouse/day；(d)喂食5倍剂量组(OLP-01-5X)：1.03×1010CFU/kg mouse/day。
表3、饲料配置流程表：
Figure BDA0002128670300000051
本次动物试验期间共计四周，第一周至第四周试验期间，于每日早上9点依组别管灌喂食受试小鼠，连续四周补充本发明的OLP-01菌株后，依序进行各项运动能力与疲劳相关生化指标分析。基于符合动物福祉的实验设计，运动挑战的强度与时间，由低强度至高强度、由短时间至长时间，并抽血进行各项试验。
实例2：喂食本发明的乳酸菌菌株的动物试验：前肢抓力测试
根据本发明的一实施例评估补充不同剂量的本发明OLP-01菌株对于小鼠前肢抓力(forelimb grip strength)表现的影响。本试验使用动物前肢抓力测量装置分析各组动物间前肢抓力的变化，其是依据Huang、Wu及Yeh所提及的试验设计(Huang WC,Lin CI,ChiuCC,Lin YT,Huang WK,Huang HY,Huang CC.(2014).Chicken essence improves exerciseperformance and ameliorates physical fatigue.Nutrients.6(7):2681-2696)；(WuRE,Huang WC,Liao CC,Chang YK,Kan NW,Huang CC.(2013).Resveratrol protectsagainst physical fatigue and improves exercise performance in mice.Molecules18(4):4689-4702)；(Yeh TS,Chuang HL,Huang WC,Chen YM,Huang CC,Hsu MC.(2014).Astragalusmembranaceus Improves Exercise Performance and AmelioratesExercise-Induced Fatigue in Trained Mice.Molecules 19(3):2793-2807)，藉以了解肌力提升情形。于第29天喂食本发明的OLP-01菌株后30分钟即进行前肢抓力测试。
结果如图1中的图片(A)所示，空白对照组、1倍(1X)、2倍(2X)以及5倍(5X)剂量本发明的OLP-01菌株补充组的前肢抓力数值，依序为110±16(g)、133±8(g)、144±11(g)以及152±13(g)。条状图上方英文字母(a,b,c)相异者代表具有显著差异(p<0.05)。相较于空白对照组，1倍(1X)、2倍(2X)以及5倍(5X)剂量本发明的OLP-01菌株补充组的前肢抓力表现分别显著提升1.21倍(p＝0.0002)、1.31倍(p<0.0001)与1.38倍(p<0.0001)。此外，根据趋势统计分析结果(Trend analysis，p<0.0001)进一步显示，随着本发明的OLP-01菌株补充剂量的增加，其前肢抓力的提升效果是具有显著的剂量效应。
由于抓力表现可能受到个别动物体重不同而影响，故本研究除检测绝对抓力表现之外，为了消除个别体重对前肢抓力的影响，进一步计算各组相对抓力(相对抓力＝前肢抓力/体重×100％)表现。结果如图1中的图片(B)所示，空白对照组、1倍(1X)、2倍(2X)以及5倍(5X)剂量本发明OLP-01菌株补充组的相对前肢抓力(％)，依序为297±52(％)、360±29(％)、387±49(％)以及406±44(％)。条状图上方英文字母(a,b,c)相异者代表具有显著差异(p<0.05)。相较于空白对照组，1倍(1X)、2倍(2X)以及5倍(5X)剂量本发明OLP-01菌株补充组的相对抓力表现依序显著提升1.21倍(p＝0.0029)、1.30倍(p<0.0001)与1.37倍(p<0.0001)。此外，根据趋势统计分析结果(Trend analysis,p<0.0001)进一步显示，随着本发明OLP-01菌株补充剂量的增加，其相对抓力的提升效果同样具有显著的剂量效应。
实例3：喂食本发明的乳酸菌菌株的动物试验：耐力运动表现
根据本发明的一实施例评估补充本发明OLP-01菌株四周后对于耐力运动表现是否具有提升的效果。试验前一周(第21天)喂食本发明的OLP-01菌株后30分钟，先让动物在直径28cm、水深25cm以及水温27±1℃条件下进行游泳适应。试验满四周，于第31天进行负重游泳力竭试验(小鼠体重5％，Wu et al.,2013)，游泳前禁食12小时，并以单只游泳方式进行试验，将小鼠放入水缸中，强迫试验动物进行游泳运动。试验过程中水温控制在27±1℃之间。此外，在整个实验过程中应使试验动物四肢保持运动，如果试验动物漂浮在水面四肢不动，可用搅拌棒在其附近搅动。记录试验动物头部完全没入水中持续8秒不浮出水面为止的时间。
结果如图2所示，所有数值以Mean±SD表示。在负重游泳运动表现的结果部分，空白对照组、1倍(1X)、2倍(2X)以及5倍(5X)剂量本发明OLP-01菌株补充组的负重游泳力竭时间依序为4.74±1.33(min)、8.36±1.42(min)、11.20±3.65(min)、15.98±6.20(min)。条状图上方英文字母(a,b,c)相异者代表具有显著差异(p<0.05)。相较于空白对照组，1倍(1X)、2倍(2X)以及5倍(5X)剂量本发明OLP-01菌株补充组的力竭时间表现分别显著提升1.77倍(p＝0.036)、2.37倍(p＝0.0004)与3.37倍(p<0.0001)。此外，根据趋势统计分析结果(Trend analysis,p<0.0001)进一步显示，1倍(1X)、2倍(2X)以及5倍(5X)剂量本发明OLP-01菌株补充组对于提升负重游泳力竭时间具有显著的剂量效应。
实例4：喂食本发明的乳酸菌菌株的动物试验：血乳酸分析
根据本发明的一实施例，检测与疲劳相关的血乳酸变化情形。游泳测试当日(试验第33天)喂食本发明的OLP-01菌株30分钟后采血，然后不负重在温度为27±1℃的水中游泳10分钟后停止。在游泳后及休息20分钟后亦分别采血0.2mL，共采三个时间点血液进行血乳酸分析。
表4、补充本发明的OLP-01菌株对血乳酸浓度的升高与消除比值的影响
Figure BDA0002128670300000071
所有数值以Mean±SD表示。同一列数据上方英文字母(a,b)相异者代表具有显著差异(p<0.05)。
单次游泳10分钟后，空白对照组、1倍(1X)、2倍(2X)以及5倍(5X)剂量本发明OLP-01菌株补充组的血乳酸浓度依序为6.74±0.28mmol/L、5.64±0.57mmol/L、5.40±0.83mmol/L、5.12±0.59mmol/L。相较于空白对照组，1倍(1X)、2倍(2X)以及5倍(5X)剂量本发明OLP-01菌株补充组的血乳酸浓度依序显著降低16.38％(p＝0.0002)、19.82％(p<0.0001)与24.02％(p<0.0001)，如表4所示。而趋势统计分析结果(Trend analysis,p<0.0001)也显示，随着本发明的OLP-01菌株补充剂量的增加具有明显降低游泳后血乳酸浓度的效果。因此，补充本发明的OLP-01菌株可显著降低运动后血乳酸浓度升高的效果。
根据上述游泳前与10分钟游泳后这两个时间点的血乳酸浓度，可以计算出乳酸升高比值，结果如表4所示。空白对照组、1倍(1X)、2倍(2X)以及5倍(5X)剂量本发明OLP-01菌株补充组的乳酸升高比值依序为1.99±0.23、1.64±0.05、1.58±0.12、1.49±0.10。相较于空白对照组，1倍(1X)、2倍(2X)以及5倍(5X)剂量本发明OLP-01菌株补充组的乳酸升高比值依序显著减少17.52％、20.84％与25.20％(三组皆p<0.0001)。而趋势统计分析结果(Trend analysis,p<0.0001)也显示，随着本发明的OLP-01菌株补充剂量的增加具有明显降低乳酸升高比值的效果。
此外，本发明也分析游泳10分钟后再休息20分钟的血乳酸浓度，空白对照组、1倍(1X)、2倍(2X)以及5倍(5X)剂量本发明OLP-01菌株补充组的血乳酸浓度依序为6.05±0.25mmol/L、5.04±0.65mmol/L、4.76±0.67mmol/L、4.53±0.57mmol/L。相较于空白对照组，1倍(1X)、2倍(2X)以及5倍(5X)剂量本发明OLP-01菌株补充组的血乳酸浓度依序显著减少16.79％(p＝0.0003)、21.30％(p<0.0001)与25.14％(p<0.0001)，如表4所示。而趋势统计分析结果(Trend analysis,p<0.0001)也显示，随着本发明的OLP-01菌株补充剂量的增加具有明显降低运动后休息20分钟的血乳酸浓度的效果。因此，补充本发明的OLP-01菌株可显著降低运动后休息20分钟的血乳酸浓度的效果。
另一方面，藉由比较游泳10分钟及休息20分钟后这两个时间点的血乳酸浓度，可以计算出乳酸消除比值。空白对照组、1倍(1X)、2倍(2X)以及5倍(5X)剂量本发明OLP-01菌株补充组的乳酸消除比值依序为0.10±0.02、0.11±0.06、0.12±0.03、0.12±0.02。相较于空白对照组，1倍(1X)、2倍(2X)以及5倍(5X)剂量本发明OLP-01菌株补充组的乳酸消除比值，依序上升1.1倍(p＝0.7712)、1.2倍(p＝0.4174)与1.2倍(p＝0.3852)。虽各组间未达显著，但趋势统计分析结果(Trend analysis,p＝0.0222)仍显示，随着本发明的OLP-01菌株补充剂量的增加具有显著提升乳酸消除比值的效果。
另外，测试游泳10分钟后补充本发明的OLP-01菌株，其各组葡萄糖浓度的变化。如图3所示，所有数值以Mean±SD表示，空白对照组、1倍(1X)、2倍(2X)以及5倍(5X)剂量本发明OLP-01菌株补充组的葡萄糖浓度依序为109±13mg/dL、113±28mg/dL、112±18mg/dL、127±13mg/dL。条状图上方英文字母(a,b)相异者代表具有显著差异(p<0.05)。相较于空白对照组，1倍(1X)、2倍(2X)以及5倍(5X)剂量本发明OLP-01菌株补充组的葡萄糖浓度依序显著提升1.04倍(p＝0.6179)、1.03倍(p＝0.7016)与1.17(p＝0.0411)。而趋势统计分析结果(Trend analysis,p＝0.0078)也显示，随着本发明的OLP-01菌株补充剂量的增加具有明显增加游泳后葡萄糖浓度的效果。因此，补充本发明的OLP-01菌株可显著增加运动后葡萄糖浓度。
此外，单次游泳10分钟后补充本发明的OLP-01菌株，其血氨浓度的变化如图4所示，所有数值以Mean±SD表示。空白对照组、1倍(1X)、2倍(2X)以及5倍(5X)剂量本发明OLP-01菌株补充组的血氨浓度依序为159±31μmol/L、139±23μmol/L、127±19μmol/L、114±17μmol/L。条状图上方英文字母(a,b)相异者代表具有显著差异(p<0.05)。相较于空白对照组、1倍(1X)、2倍(2X)以及5倍(5X)剂量本发明OLP-01菌株补充组的血氨浓度依序显著降低12.30％(p＝0.0710)、20.11％(p＝0.0044)与28.18％(p＝0.0001)。而趋势统计分析结果也显示(Trend analysis,p<0.0001)，随着本发明的OLP-01菌株补充剂量的增加具有明显降低游泳后血氨浓度的效果。因此，补充本发明的OLP-01菌株可显著降低运动后血氨浓度的效果。
实例5：喂食本发明的乳酸菌菌株的动物试验：血尿素氮及肌酸激酶活性分析
根据本发明的一实施例，检测另一项运动挑战后各组老鼠血尿素氮(Blood ureanitrogen,BUN)浓度变化情形。游泳测试当日(试验第35天)喂食本发明的OLP-01菌株后30分钟在水中不负重游泳90分钟，休息60分钟后采血0.3mL，进行血尿素氮浓度分析，并取部分血液检体进行肌酸激酶(Creatine kinase，CK)活性分析，其可作为肌肉损伤指标，如Huang、Wang、Wu、Su及Yeh所提及的试验指标分析(Huang CC,Hsu MC,Huang WC,Yang HR,Hou CC.(2012).Triterpenoid-rich extract from Antrodiacamphorata improvesphysical fatigue and exercise performance in mice.Evid Based ComplementAlternat Med.2012:364741)；(Wang SY,Huang WC,Liu CC,Wang MF,Ho CS,Huang WP,HouCC,Chuang HL,Huang CC.(2012).Pumpkin(Cucurbita moschata)fruit extractimproves physical fatigue and exercise performance in mice.Molecules 17(10):11864-11876)；(Wu RE,Huang WC,Liao CC,Chang YK,Kan NW,Huang CC.(2013).Resveratrol protects against physical fatigue and improves exerciseperformance in mice.Molecules 18(4):4689-4702)；(Su KY,Yu CY,Chen YW,Huang YT,Chen CT,Wu HF,Chen YL.(2014).Rutin,a flavonoidand principal component ofSaussureainvolucrata,attenuates physical fatigue in a forced swimming mousemodel.Int J Med Sci.11(5):528-537)；(Yeh TS,Chuang HL,Huang WC,Chen YM,HuangCC,Hsu MC.(2014).Astragalusmembranaceus Improves Exercise Performance andAmeliorates Exercise-Induced Fatigue in Trained Mice.Molecules 19(3):2793-2807)，藉以同步了解测试样品是否会具有保护长时间运动肌肉损伤的效果。本次血清样品是采用血液自动分析仪(Hitachi 7060,Hitachi,Tokyo,Japan)进行检验。
如图5所示，所有数值以Mean±SD表示。空白对照组、1倍(1X)、2倍(2X)以及5倍(5X)剂量本发明OLP-01菌株补充组的血尿素氮浓度依序为44.3±3.6mg/dL、39.1±5.1mg/dL、38.6±4.3mg/dL、37.1±2.2mg/dL。条状图上方英文字母(a,b)相异者代表具有显著差异(p<0.05)。相较于空白对照组，1倍(1X)、2倍(2X)以及5倍(5X)剂量本发明OLP-01菌株补充组的血尿素氮浓度分别显著减少11.77％(p＝0.0054)、12.81％(p＝0.0027)与16.13％(p＝0.0003)。而趋势统计分析结果(Trend analysis,p<0.0001)也显示，随着本发明的OLP-01菌株补充剂量的增加具有明显降低血尿素氮浓度的效果。因此，补充本发明的OLP-01菌株可显著下降运动后血尿素氮浓度。
另外，如图6所示，各组小鼠单次90分钟不负重游泳后休息60分钟的血中肌酸激酶活性变化情形，所有数值以Mean±SD表示。空白对照组、1倍(1X)、2倍(2X)以及5倍(5X)剂量本发明OLP-01菌株补充组的血中肌酸激酶活性依序为900±144U/L、784±182U/L、704±185U/L、612±236U/L。条状图上方英文字母(a,b)相异者代表具有显著差异(p<0.05)。相较于空白对照组，1倍(1X)、2倍(2X)以及5倍(5X)剂量本发明OLP-01菌株补充组的血中肌酸激酶活性分别显著降低12.83％(p＝0.1814)、21.81％(p＝0.0264)与32.01％(p＝0.0017)。趋势统计分析结果(Trend analysis,p＝0.0004)也显示，随着本发明的OLP-01菌株补充剂量的增加具有显著降低血中肌酸激酶活性的效果。
实例6：喂食本发明的乳酸菌菌株的动物试验：肝糖含量分析
根据本发明的一实施例，检测补充本发明的OLP-01菌株对增加体内组织中重要能量储存物质肝糖的含量的影响。在90分钟游泳测试后，让所有动物进行休息2日之后(试验第37天)，于末次喂食30分钟后将所有动物进行牺牲，采集血液进行临床血液分析。另外，采集小鼠肝脏与后肢小腿肌肉，并以生理盐水清洗后拭干秤重。于组织相同位置处剪取组织并分装冻存于-80℃供后续分析组织肝糖含量使用。分析方法是依照Chamberland及Rioux所采用的化学分析法直接针对肝糖进行定量(Chamberland V,Rioux P.(2010).Not onlystudents can express alcohol dehydrogenase:goldfish can too！AdvPhysiolEduc 34(4):222-227)。取出待测的组织样品加入5倍体积(w/v)的组织均质液，使用组织均质机Bullet Blender(Next Advance,Cambridge,MA,USA)将不同组织进行均质化。将组织均质液分装至微量离心管，于4℃、12,000×g条件下离心15分钟，取出上层萃取液的部分，直接进行如Huang所提及的肝糖含量分析(Huang WC,Lin CI,Chiu CC,Lin YT,Huang WK,HuangHY,Huang CC.(2014).Chicken essence improves exercise performance andameliorates physical fatigue.Nutrients.6(7):2681-2696)。另以市售肝糖(GlycogenSigma)标准品进行检量线的制作，藉以计算不同组别动物肝脏与肌肉组织中肝糖储存量的变化情形。
首先，在肝脏部位肝糖含量的结果如图7中的图片(A)所示，所有数值以Mean±SD表示。空白对照组、1倍(1X)、2倍(2X)以及5倍(5X)剂量本发明OLP-01菌株补充组的肝脏部位肝糖含量依序为12.81±3.44mg/g、17.95±2.93mg/g、22.17±6.45mg/g、30.49±10.02mg/g。条状图上方英文字母(a,b,c)相异者代表具有显著差异(p<0.05)。相较于空白对照组，1倍(1X)、2倍(2X)以及5倍(5X)剂量本发明OLP-01菌株补充组的肝脏肝糖含量依序显著提升1.40倍(p＝0.0769)、1.73倍(p＝0.0023)与2.38倍(p<0.0001)。根据趋势统计分析结果(Trend analysis,p<0.0001)进一步显示，随着本发明的OLP-01菌株补充剂量的增加，肝脏肝糖含量的提升效果也是同样具有显著的剂量效应。
在腿部肌肉的肝糖含量结果如图7中的图片(B)所示，所有数值以Mean±SD表示，空白对照组、1倍(1X)、2倍(2X)以及5倍(5X)剂量本发明OLP-01菌株补充组的肌肉肝糖含量依序为1.62±0.34mg/g、2.77±0.86mg/g、3.32±0.43mg/g、3.33±0.85mg/g。条状图上方英文字母(a,b,c)相异者代表具有显著差异(p<0.05)。相较于空白对照组，1倍(1X)、2倍(2X)以及5倍(5X)剂量本发明OLP-01菌株补充组的肌肉肝糖含量依序显著提升1.71倍(p＝0.0004)、2.05倍(p<0.0001)与2.05倍(p<0.0001)。根据趋势统计分析结果(Trendanalysis,p<0.0001)进一步显示，随着本发明的OLP-01菌株补充剂量的增加，其肌肉肝糖含量的提升效果亦具有显著的剂量效应。
实例7：喂食本发明的乳酸菌菌株的动物试验：病理切片分析
根据本发明的一实施例，为了了解补充本发明的OLP-01菌株是否对于组织器官产生变化及病理上不良影响，于实验末最后一次喂食结束1小时之后，将4组小鼠牺牲并取其各项组织器官进行秤重及病理切片分析。
如图8所示，在病理染色切片上，空白对照组、1倍(1X)、2倍(2X)以及5倍(5X)剂量本发明OLP-01菌株补充组的肝脏(A)、肌肉(B)、股四头肌(C)、心脏(D)、肾脏(E)、肺脏(F)、副睪脂肪(Epididymal Fat Pad，EFP)(G)以及棕色脂肪组织(Brown Adipose Tissue，BAT)(H)等组织器官皆无任何差异及病变状况的产生。
如图9所示，在腓肠肌中发现到1倍(1X)、2倍(2X)以及5倍(5X)剂量本发明OLP-01菌株补充组的肌纤维束的数量较空白对照组多。在肌肉IHC免疫染色中也可看到1倍(1X)、2倍(2X)以及5倍(5X)剂量本发明OLP-01菌株补充组的肌纤维束较空白对照组大，TypeI的慢肌数量也较空白对照组多。
依据上述动物试验结果，使用本发明的OLP-01菌株的人体建议剂量(每人每日建议补充1×1010CFU)的1、2及5倍量能显著增加提升肌力、提升负重游泳力竭时间、增加血乳酸清除率、降低血液中尿素氮浓度、增加肝脏及肌肉中肝糖的储存量，增加运动耐力并延缓疲劳。需说明的是，仅有少数的乳酸菌菌株经实验过程发现具备有改善身体疲劳以及提升运动表现的保健功效，且在生体内(in vivo)被确认。而乳酸菌对身体健康的功能在于菌株(strain)的特异性而非菌种(species)，此种对于人的身体健康有特殊功效的菌株称为功能性益生菌(Guidelines for the evaluation of probiotics in food；Report ofjoint FAO/WHO working group on drafting guidelines for the evaluation ofprobiotics in food；London Ontario,Canada April 30and May 1,2002：1-7)。另需强调的是，本案所请求保护的菌株仅包含保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的长双歧杆菌长亚种(Bifidobacterium longum subsp.longum)OLP-01菌株，保藏编号为CGMCC No.17345，并非广泛地包含所有的比菲德氏龙根菌菌株。
以上所述的实施例仅是为说明本发明的技术思想及特点，其目的在使熟习此项技艺的人士能够了解本发明的内容并据以实施，当不能以之限定本发明的专利范围，即大凡依本发明所揭示的精神所作的均等变化或修饰，仍应涵盖在本发明的专利范围内。

Claims (17)

1.一种含乳酸菌菌株的食品组合物，包含：
具有提升运动能力与抗疲劳的活性效果的经分离乳酸菌菌株，其中该乳酸菌菌株为长双歧杆菌长亚种(Bifidobacterium longum subsp.longum)OLP-01菌株，保藏编号为CGMCCNo.17345，上述菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；以及生理上可接受的赋形剂、稀释剂或载体。
2.如权利要求1所述的含乳酸菌菌株的食品组合物，其中所述乳酸菌菌株为具有活性的菌株。
3.如权利要求1所述的含乳酸菌菌株的食品组合物，其中所述乳酸菌菌株为失去活性的菌株。
4.如权利要求1所述的含乳酸菌菌株的食品组合物，其中所述赋形剂、稀释剂或载体为食品。
5.如权利要求4所述的含乳酸菌菌株的食品组合物，其中所述食品包含发酵乳、优格、乳酪、乳制饮品乳粉、茶、咖啡、口香糖、洁牙糖或以上的组合。
6.如权利要求1所述的含乳酸菌菌株的食品组合物，其中所述运动能力包含肌肉力量以及肌肉耐力。
7.如权利要求6所述的含乳酸菌菌株的食品组合物，其中所述肌肉力量为前肢抓力。
8.如权利要求6所述的含乳酸菌菌株的食品组合物，其中所述肌肉耐力为负重游泳耐力。
9.如权利要求1所述的含乳酸菌菌株的食品组合物，其中所述抗疲劳的活性效果包含降低运动后血乳酸、降低血氨、降低尿素氮、降低肌酸激酶、提升肝脏及肌肉中肝糖储存量至少其中之一。
10.一种含乳酸菌菌株的医药组合物，包含：
具有提升运动能力与抗疲劳的活性效果的经分离乳酸菌菌株，其中该乳酸菌菌株为长双歧杆菌长亚种(Bifidobacterium longum subsp.longum)OLP-01菌株，保藏编号为CGMCCNo.17345，上述菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；以及医药上可接受的赋形剂、稀释剂或载体。
11.如权利要求10所述的含乳酸菌菌株的医药组合物，其中所述乳酸菌菌株为具有活性的菌株。
12.如权利要求10所述的含乳酸菌菌株的医药组合物，其中所述乳酸菌菌株为失去活性的菌株。
13.如权利要求10所述的含乳酸菌菌株的医药组合物，其为口服剂型。
14.如权利要求10所述的含乳酸菌菌株的医药组合物，其中所述运动能力包含肌肉力量以及肌肉耐力。
15.如权利要求14所述的含乳酸菌菌株的医药组合物，其中所述肌肉力量为前肢抓力。
16.如权利要求14所述的含乳酸菌菌株的医药组合物，其中所述肌肉耐力为负重游泳耐力。
17.如权利要求10所述的含乳酸菌菌株的医药组合物，其中所述抗疲劳的活性效果包含降低运动后血乳酸、降低血氨、降低尿素氮、降低肌酸激酶、提升肝脏及肌肉中肝糖储存量至少其中之一。
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