TWI737987B - 一種乳酸菌菌株在製備提升運動能力與抗疲勞之組合物之用途 - Google Patents

一種乳酸菌菌株在製備提升運動能力與抗疲勞之組合物之用途 Download PDF

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Abstract

一種具有提升運動表現與抗疲勞之經分離的乳酸菌菌株:長雙歧桿菌長雙歧亞種(Bifidobacterium longum subsp.longum)OLP-01菌株。經由動物實驗證實,OLP-01菌株能夠有效提升肌力及游泳耐力外,也能夠顯著降低疲勞相關之生化指標包括血乳酸、血尿素氮濃度以及肌酸激酶活性。

Description

一種乳酸菌菌株在製備提升運動能力與抗疲勞之組合物之用途
本發明是關於一種食品組合物以及醫藥組合物,特別是一種用以提升運動表現及抗疲勞之含乳酸菌菌株之食品組合物以及醫藥組合物。
現代人生活繁忙,競爭壓力大,各種壓力常造成我們處於疲勞或過勞的狀態,進而可能危害到健康。疲勞(Fatigue)係指動作或運動表現失去正常水準,而疲勞感則為主觀之感受,通常與組織損傷以及能源短缺有關。疲勞或疲勞感是在承受運動或其他類型的壓力挑戰後所發生,其恢復時間的長短會受到不同的挑戰模式與營養品介入方式而有所差異。
益生菌(Probiotics)為一種或多種微生物當餵食人類或動物時可增進其腸內菌叢之品質。益生菌必須作用於其宿主,增進宿主之健康。依據衛生福利部資料顯示,目前經抗疲勞功效認證之商品中尚未有任何益生菌相關之商品(https://consumer.fda.gov.tw/Food/InfoHealthFood.aspx?nodeID=162#)。
乳酸菌一般來說是安全的,找出具有提升運動表現及抗疲勞功能的乳酸菌菌株,並發展出安全且可長期使用之營養補充品便是目前極需努力的目標。
本發明提供一種包含乳酸菌菌株的食品組合物及醫藥組合物,其可提升人體運動能力並增強身體組成,以達到提升運動表現及抗疲勞之功效。
本發明一實施例之一種乳酸菌菌株在製備提升運動能力與抗疲勞之組合物之用途,其中組合物包含具有提升運動能力與抗疲勞之活性效果之經分離乳酸菌菌株,其中該乳酸菌菌株為長雙歧桿菌長雙歧亞種(Bifidobacterium longum subsp.longum)OLP-01菌株,寄存編號為BCRC 910875,上述菌株寄存於財團法人食品工業發展研究所;以及生理上或醫藥上可接受之賦形劑、稀釋劑或載體。
以下藉由具體實施例配合所附的圖式詳加說明,當更容易瞭解本發明之目的、技術內容、特點及其所達成之功效。
圖1一長條圖,顯示補充本發明之OLP-01菌株對於前肢抓力表現之影響。
圖2一長條圖,顯示補充本發明之OLP-01菌株對於游泳運動力竭時間表現之影響。
圖3一長條圖,顯示補充本發明之OLP-01菌株對於游泳10分鐘後血液中葡萄糖濃度之影響。
圖4一長條圖,顯示補充本發明之OLP-01菌株對於游泳10分鐘後血氨濃度之影響。
圖5一長條圖,顯示補充本發明之OLP-01菌株對於單次90分鐘游泳運動並休息60分鐘後血液中尿素氮濃度之影響。
圖6一長條圖,顯示補充本發明之OLP-01菌株對於單次90分鐘游泳運動並休息60分鐘後血液中肌酸激酶活性之影響。
圖7一長條圖,顯示補充本發明之OLP-01菌株對於肝臟以及肌肉部位肝醣含量之影響。
圖8為補充本發明之OLP-01菌株對於各項組織器官之病理切片。
圖9為補充本發明之OLP-01菌株對於腓腸肌之免疫染色切片。
以下將詳述本發明之各實施例,並配合圖式作為例示。除了這些詳細說明之外,本發明亦可廣泛地施行於其它的實施例中,任何所述實施例的輕易替代、修改、等效變化都包含在本發明之範圍內,並以申請專利範圍為準。在說明書的描述中,為了使讀者對本發明有較完整的瞭解,提供了許多特定細節;然而,本發明可能在省略部分或全部特定細節的前提下,仍可實施。此外,眾所周知的步驟或元件並未描述於細節中,以避免對本發明形成不必要之限制。圖式中相同或類似之元件將以相同或類似符號來表示。特別注意的是,圖式僅為示意之用,並非代表元件實際之尺寸或數量,有些細節可能未完全繪出,以求圖式之簡潔。
本發明所述之乳酸菌菌株是從健康人體腸道篩選出之長雙歧桿菌長雙歧亞種(Bifidobacterium longum subsp.longum)OLP-01菌株,又稱龍根菌, 其冷凍乾燥培養物已於2019年02月22日寄存於財團法人食品工業發展研究所(地址為新竹市食品路331號)。保藏的詳細資料如以下表1所示。
Figure 108114165-A0305-02-0005-1
如表1所列已寄存之乳酸菌,寄存編號為BCRC 910875的長雙歧桿菌長雙歧亞種(Bifidobacterium longum subsp.longum)OLP-01菌株具有提升人體運動能力、增強身體組成,進而達到提升運動表現及抗疲勞的功效。
本發明包含具有提升運動能力與抗疲勞之活性效果之經分離乳酸菌菌株,其為長雙歧桿菌長雙歧亞種(Bifidobacterium longum subsp.longum)OLP-01菌株,寄存編號為BCRC 910875,上述菌株寄存於財團法人食品工業發展研究所;以及生理上可接受之賦形劑、稀釋劑或載體所組成之食品組合物,或醫藥上可接受之賦形劑、稀釋劑或載體所組成之醫藥組合物。其中乳酸菌菌株為具有活性或失去活性的菌株。
於食品組合物之實施例中,生理上可接受之賦形劑、稀釋劑或載體可為一食品。舉例而言,食品可包含但不限於乳製飲品、茶、咖啡、口香糖、潔牙糖(例如口含片、咀嚼錠、軟糖等)或以上之組合,其中乳製飲品可包含醱酵乳、優格、乳酪或乳製飲品乳粉等。醫藥組合物可為口服劑型。舉例而言,口服劑型可為錠劑、膠囊、溶液劑及粉劑等。
於食品組合物或醫藥組合物之實施例中,乳酸菌菌株之數量為106CFU以上;較佳者,乳酸菌菌株之數量為1010CFU以上。
實例1:本發明之乳酸菌菌株之形態學以及一般性質
根據16S rDNA序列分析以及API細菌鑑定系統分析結果,確認菌株在分類學上的特徵,上述菌株在形態學及一般性質上的特徵詳細如表2所列:
Figure 108114165-A0305-02-0006-2
本發明之OLP-01菌株投予劑量之計算是以60公斤成人每日建議量為1×1010CFU加以換算。依據2005年美國食品藥物管理局所公告之估算方法(Estimating the maximum safe starting dose in initial clinical trials for therapeutics in adult healthy volunteers)(US FDA,2005),人體與小鼠之換算系數為12.3倍,故小鼠之1倍劑量組為2.05×109CFU/kg/day,2倍劑量組為4.10×109CFU/kg/day,5倍劑量組為1.03×1010CFU/kg/day,空白對照組給予等體積之磷酸鹽緩衝生理鹽水(Phosphate buffered saline,PBS)。
實驗動物購入6週大、雄性ICR品系小鼠(購自樂斯科生物科技股份有限公司),共計40隻,以動物飼料(Chow5001)與水提供予小鼠自由攝食,動物房溫度控制在24±2℃、溼度60%~70%,光照與黑暗各12小時。動物預養兩週適應環境,且所有小鼠皆為8週大成鼠。挑選體重相近的ICR小鼠40隻,以隨機的方式將小鼠分為四組,分別為(a)空白對照組(Vehicle);(b)餵食1倍劑量組(OLP- 01-1X):2.05×109CFU/kg mouse/day;(c)餵食2倍劑量組(OLP-01-2X):4.10×109CFU/kg mouse/day;(d)餵食5倍劑量組(OLP-01-5X):1.03×1010CFU/kg mouse/day。
Figure 108114165-A0305-02-0007-3
本次動物試驗期間共計四週,第一週至第四週試驗期間,於每日早上9點依組別管灌餵食受試小鼠,連續四週補充本發明之OLP-01菌株後,依序進行各項運動能力與疲勞相關生化指標分析。基於符合動物福祉之實驗設計,運動挑戰的強度與時間,由低強度至高強度、由短時間至長時間,並抽血進行各項試驗。
實例2:餵食本發明之乳酸菌菌株之動物試驗:前肢抓力測試
根據本發明之一實施例評估補充不同劑量之本發明OLP-01菌株對於小鼠前肢抓力(forelimb grip strength)表現之影響。本試驗使用動物前肢抓力測量裝置分析各組動物間前肢抓力之變化,其是依據Huang、Wu及Yeh所提及之試驗設計(Huang WC,Lin CI,Chiu CC,Lin YT,Huang WK,Huang HY,Huang CC.(2014).Chicken essence improves exercise performance and ameliorates physical fatigue.Nutrients.6(7):2681-2696);(Wu RE,Huang WC,Liao CC,Chang YK,Kan NW,Huang CC.(2013).Resveratrol protects against physical fatigue and improves exercise performance in mice.Molecules 18(4):4689-4702);(Yeh TS,Chuang HL,Huang WC,Chen YM,Huang CC,Hsu MC.(2014).Astragalus membranaceus Improves Exercise Performance and Ameliorates Exercise-Induced Fatigue in Trained Mice.Molecules 19(3):2793-2807),藉以瞭解肌力提升情形。於第29天餵食本發明之OLP-01菌株後30分鐘即進行前肢抓力測試。
結果如圖1(A)所示,空白對照組、1倍(1X)、2倍(2X)以及5倍(5X)劑量本發明之OLP-01菌株補充組之前肢抓力數值,依序為110±16(g)、133±8(g)、144±11(g)以及152±13(g)。條狀圖上方英文字母(a,b,c)相異者代表具有顯著差異(p<0.05)。相較於空白對照組,1倍(1X)、2倍(2X)以及5倍(5X)劑量本發明之OLP-01菌株補充組的前肢抓力表現分別顯著提升1.21倍(p=0.0002)、1.31倍(p<0.0001)與1.38倍(p<0.0001)。此外,根據趨勢統計分析結果(Trend analysis,p<0.0001)進一步顯示,隨著本發明之OLP-01菌株補充劑量之增加,其前肢抓力的提升效果是具有顯著的劑量效應。
由於抓力表現可能受到個別動物體重不同而影響,故本研究除檢測絕對抓力表現之外,為了消除個別體重對前肢抓力的影響,進一步計算各組相對抓力(相對抓力=前肢抓力/體重×100%)表現。結果如圖1(B)所示,空白對照組、1倍(1X)、2倍(2X)以及5倍(5X)劑量本發明OLP-01菌株補充組之相對前肢抓力(%),依序為297±52(%)、360±29(%)、387±49(%)以及406±44(%)。條狀圖上方英文字母(a,b,c)相異者代表具有顯著差異(p<0.05)。相較於空白對照組,1倍(1X)、2倍(2X)以及5倍(5X)劑量本發明OLP-01菌株補充組的相對抓力表現依序顯著提升1.21倍(p=0.0029)、1.30倍(p<0.0001)與1.37倍(p<0.0001)。此 外,根據趨勢統計分析結果(Trend analysis,p<0.0001)進一步顯示,隨著本發明OLP-01菌株補充劑量之增加,其相對抓力的提升效果同樣具有顯著的劑量效應。
實例3:餵食本發明之乳酸菌菌株之動物試驗:耐力運動表現
根據本發明之一實施例評估補充本發明OLP-01菌株四週後對於耐力運動表現是否具有提升之效果。試驗前一週(第21天)餵食本發明之OLP-01菌株後30分鐘,先讓動物在直徑28cm、水深25cm以及水溫27±1℃條件下進行游泳適應。試驗滿四週,於第31天進行負重游泳力竭試驗(小鼠體重5%,Wu et al.,2013),游泳前禁食12小時,並以單隻游泳方式進行試驗,將小鼠放入水缸中,強迫試驗動物進行游泳運動。試驗過程中水溫控制在27±1℃之間。此外,在整個實驗過程中應使試驗動物四肢保持運動,如果試驗動物漂浮在水面四肢不動,可用攪拌棒在其附近攪動。記錄試驗動物頭部完全沒入水中持續8秒不浮出水面為止的時間。
結果如圖2所示,所有數值以Mean±SD表示。在負重游泳運動表現的結果部分,空白對照組、1倍(1X)、2倍(2X)以及5倍(5X)劑量本發明OLP-01菌株補充組之負重游泳力竭時間依序為4.74±1.33(min)、8.36±1.42(min)、11.20±3.65(min)、15.98±6.20(min)。條狀圖上方英文字母(a,b,c)相異者代表具有顯著差異(p<0.05)。相較於空白對照組,1倍(1X)、2倍(2X)以及5倍(5X)劑量本發明OLP-01菌株補充組之力竭時間表現分別顯著提升1.77倍(p=0.036)、2.37倍(p=0.0004)與3.37倍(p<0.0001)。此外,根據趨勢統計分析結果(Trend analysis,p<0.0001)進一步顯示,1倍(1X)、2倍(2X)以及5倍(5X)劑量本發明OLP-01菌株補充組對於提升負重游泳力竭時間具有顯著的劑量效應。
實例4:餵食本發明之乳酸菌菌株之動物試驗:血乳酸分析
根據本發明之一實施例,檢測與疲勞相關之血乳酸變化情形。游泳測試當日(試驗第33天)餵食本發明之OLP-01菌株30分鐘後採血,然後不負重在溫度為27±1℃的水中游泳10分鐘後停止。在游泳後及休息20分鐘後亦分別採血0.2mL,共採三個時間點血液進行血乳酸分析。
Figure 108114165-A0305-02-0010-4
所有數值以Mean±SD表示。同一列數據上方英文字母(a,b)相異者代表具有顯著差異(p<0.05)。
單次游泳10分鐘後,空白對照組、1倍(1X)、2倍(2X)以及5倍(5X)劑量本發明OLP-01菌株補充組之血乳酸濃度依序為6.74±0.28mmol/L、5.64±0.57mmol/L、5.40±0.83mmol/L、5.12±0.59mmol/L。相較於空白對照組,1倍(1X)、2倍(2X)以及5倍(5X)劑量本發明OLP-01菌株補充組之血乳酸濃度依序顯著降低16.38%(p=0.0002)、19.82%(p<0.0001)與24.02%(p<0.0001),如表4所示。而趨勢統計分析結果(Trend analysis,p<0.0001)也顯示,隨著本發明之OLP-01菌株補充劑量之增加具有明顯降低游泳後血乳酸濃度之效果。因此,補充本發明之OLP-01菌株可顯著降低運動後血乳酸濃度升高的效果。
根據上述游泳前與10分鐘游泳後這兩個時間點的血乳酸濃度,可以計算出乳酸升高比值,結果如表4所示。空白對照組、1倍(1X)、2倍(2X)以及5倍(5X)劑量本發明OLP-01菌株補充組之乳酸升高比值依序為1.99±0.23、1.64±0.05、1.58±0.12、1.49±0.10。相較於空白對照組,1倍(1X)、2倍(2X)以及5倍(5X)劑量本發明OLP-01菌株補充組的乳酸升高比值依序顯著減少17.52%、20.84%與25.20%(三組皆p<0.0001)。而趨勢統計分析結果(Trend analysis,p<0.0001)也顯示,隨著本發明之OLP-01菌株補充劑量之增加具有明顯降低乳酸升高比值之效果。
此外,我們也分析游泳10分鐘後再休息20分鐘之血乳酸濃度,空白對照組、1倍(1X)、2倍(2X)以及5倍(5X)劑量本發明OLP-01菌株補充組的血乳酸濃度依序為6.05±0.25mmol/L、5.04±0.65mmol/L、4.76±0.67mmol/L、4.53±0.57mmol/L。相較於空白對照組,1倍(1X)、2倍(2X)以及5倍(5X)劑量本發明OLP-01菌株補充組的血乳酸濃度依序顯著減少16.79%(p=0.0003)、21.30%(p<0.0001)與25.14%(p<0.0001),如表4所示。而趨勢統計分析結果(Trend analysis,p<0.0001)也顯示,隨著本發明之OLP-01菌株補充劑量之增加具有明顯降低運動後休息20分鐘之血乳酸濃度之效果。因此,補充本發明之OLP-01菌株可顯著降低運動後休息20分鐘之血乳酸濃度的效果。
另一方面,藉由比較游泳10分鐘及休息20分鐘後這兩個時間點的血乳酸濃度,可以計算出乳酸消除比值。空白對照組、等熱量對照組、1倍(1X)、2倍(2X)以及5倍(5X)劑量本發明OLP-01菌株補充組的乳酸消除比值依序為0.08±0.05、0.04±0.04、0.12±0.05、0.13±0.04、0.13±0.05。相較於空白對照組,1倍(1X)、2倍(2X)以及5倍(5X)劑量本發明OLP-01菌株補充組的乳酸消除比值,依序上升1.05倍(p=0.7712)、1.15倍(p=0.4174)與1.14倍(p=0.3852)。雖各組間未達 顯著,但趨勢統計分析結果(Trend analysis,p=0.0222)仍顯示,隨著本發明之OLP-01菌株補充劑量之增加具有顯著提升乳酸消除比值之效果。
另外,測試游泳10分鐘後補充本發明之OLP-01菌株,其各組葡萄糖濃度之變化。如圖3所示,所有數值以Mean±SD表示,空白對照組、1倍(1X)、2倍(2X)以及5倍(5X)劑量本發明OLP-01菌株補充組之葡萄糖濃度依序為109±13mg/dL、113±28mg/dL、112±18mg/dL、127±13mg/dL。條狀圖上方英文字母(a,b)相異者代表具有顯著差異(p<0.05)。相較於空白對照組,1倍(1X)、2倍(2X)以及5倍(5X)劑量本發明OLP-01菌株補充組之葡萄糖濃度依序顯著提升1.04倍(p=0.6179)、1.03倍(p=0.7016)與1.17(p=0.0411)。而趨勢統計分析結果(Trend analysis,p=0.0078)也顯示,隨著本發明之OLP-01菌株補充劑量之增加具有明顯增加游泳後葡萄糖濃度之效果。因此,補充本發明之OLP-01菌株可顯著增加運動後葡萄糖濃度。
此外,單次游泳10分鐘後補充本發明之OLP-01菌株,其血氨濃度之變化如圖4所示,所有數值以Mean±SD表示。空白對照組、1倍(1X)、2倍(2X)以及5倍(5X)劑量本發明OLP-01菌株補充組之血氨濃度依序為159±31μmol/L、139±23μmol/L、127±19μmol/L、114±17μmol/L。條狀圖上方英文字母(a,b)相異者代表具有顯著差異(p<0.05)。相較於空白對照組、1倍(1X)、2倍(2X)以及5倍(5X)劑量本發明OLP-01菌株補充組之血氨濃度依序顯著降低12.30%(p=0.0710)、20.11%(p=0.0044)與28.18%(p=0.0001)。而趨勢統計分析結果也顯示(Trend analysis,p<0.0001),隨著本發明之OLP-01菌株補充劑量之增加具有明顯降低游泳後血氨濃度之效果。因此,補充本發明之OLP-01菌株可顯著降低運動後血氨濃度的效果。
實例5:餵食本發明之乳酸菌菌株之動物試驗:血尿素氮及肌酸激酶活性分析
根據本發明之一實施例,檢測另一項運動挑戰後各組老鼠血尿素氮(Blood urea nitrogen,BUN)濃度變化情形。游泳測試當日(試驗第35天)餵食本發明之OLP-01菌株後30分鐘在水中不負重游泳90分鐘,休息60分鐘後採血0.3mL,進行血尿素氮濃度分析,並取部分血液檢體進行肌酸激酶(Creatine kinase,CK)活性分析,其可作為肌肉損傷指標,如Huang、Wang、Wu、Su及Yeh所提及之試驗指標分析(Huang CC,Hsu MC,Huang WC,Yang HR,Hou CC.(2012).Triterpenoid-rich extract from Antrodia camphorata improves physical fatigue and exercise performance in mice.Evid Based Complement Alternat Med.2012:364741);(Wang SY,Huang WC,Liu CC,Wang MF,Ho CS,Huang WP,Hou CC,Chuang HL,Huang CC.(2012).Pumpkin(Cucurbita moschata)fruit extract improves physical fatigue and exercise performance in mice.Molecules 17(10):11864-11876);(Wu RE,Huang WC,Liao CC,Chang YK,Kan NW,Huang CC.(2013).Resveratrol protects against physical fatigue and improves exercise performance in mice.Molecules 18(4):4689-4702);(Su KY,Yu CY,Chen YW,Huang YT,Chen CT,Wu HF,Chen YL.(2014).Rutin,a flavonoidand principal component of Saussurea involucrata,attenuates physical fatigue in a forced swimming mouse model.Int J Med Sci.11(5):528-537);(Yeh TS,Chuang HL,Huang WC,Chen YM,Huang CC,Hsu MC.(2014).Astragalus membranaceus Improves Exercise Performance and Ameliorates Exercise-Induced Fatigue in Trained Mice.Molecules 19(3):2793-2807),藉以同步瞭解測試樣品是否會具有保護長時間運動肌肉損傷之效果。本次血清樣品是採用血液自動分析儀(Hitachi 7060,Hitachi,Tokyo,Japan)進行檢驗。
如圖5所示,所有數值以Mean±SD表示。空白對照組、1倍(1X)、2倍(2X)以及5倍(5X)劑量本發明OLP-01菌株補充組之血尿素氮濃度依序為44.3±3.6mg/dL、39.1±5.1mg/dL、38.6±4.3mg/dL、37.1±2.2mg/dL。條狀圖上方英文字母(a,b)相異者代表具有顯著差異(p<0.05)。相較於空白對照組,1倍(1X)、2倍(2X)以及5倍(5X)劑量本發明OLP-01菌株補充組之血尿素氮濃度分別顯著減少11.77%(p=0.0054)、12.81%(p=0.0027)與16.13%(p=0.0003)。而趨勢統計分析結果(Trend analysis,p<0.0001)也顯示,隨著本發明之OLP-01菌株補充劑量之增加具有明顯降低血尿素氮濃度之效果。因此,補充本發明之OLP-01菌株可顯著下降運動後血尿素氮濃度。
另外,如圖6所示,各組小鼠單次90分鐘不負重游泳後休息60分鐘之血中肌酸激酶活性變化情形,所有數值以Mean±SD表示。空白對照組、1倍(1X)、2倍(2X)以及5倍(5X)劑量本發明OLP-01菌株補充組之血中肌酸激酶活性依序為900±144U/L、784±182U/L、704±185U/L、612±236U/L。條狀圖上方英文字母(a,b)相異者代表具有顯著差異(p<0.05)。相較於空白對照組,1倍(1X)、2倍(2X)以及5倍(5X)劑量本發明OLP-01菌株補充組之血中肌酸激酶活性分別顯著降低12.83%(p=0.1814)、21.81%(p=0.0264)與32.01%(p=0.0017)。趨勢統計分析結果(Trend analysis,p=0.0004)也顯示,隨著本發明之OLP-01菌株補充劑量之增加具有顯著降低血中肌酸激酶活性之效果。
實例6:餵食本發明之乳酸菌菌株之動物試驗:肝醣含量分析
根據本發明之一實施例,檢測補充本發明之OLP-01菌株對增加體內組織中重要能量儲存物質肝醣之含量的影響。在90分鐘游泳測試後,讓所有動物進行休息2日之後(試驗第37天),於末次餵食30分鐘後將所有動物進行犧牲,採集血液進行臨床血液分析。另外,採集小鼠肝臟與後肢小腿肌肉,並以生理鹽 水清洗後拭乾秤重。於組織相同位置處剪取組織並分裝凍存於-80℃供後續分析組織肝醣含量使用。分析方法是依照Chamberland及Rioux所採用之化學分析法直接針對肝醣進行定量(Chamberland V,Rioux P.(2010).Not only students can express alcohol dehydrogenase:goldfish can too! Adv Physiol Educ 34(4):222-227)。取出待測的組織樣品加入5倍體積(w/v)的組織均質液,使用組織均質機Bullet Blender(Next Advance,Cambridge,MA,USA)將不同組織進行均質化。將組織均質液分裝至微量離心管,於4℃、12,000×g條件下離心15分鐘,取出上層萃取液的部分,直接進行如Huang所提及之肝醣含量分析(Huang WC,Lin CI,Chiu CC,Lin YT,Huang WK,Huang HY,Huang CC.(2014).Chicken essence improves exercise performance and ameliorates physical fatigue.Nutrients.6(7):2681-2696)。另以市售肝醣(Glycogen Sigma)標準品進行檢量線之製作,藉以計算不同組別動物肝臟與肌肉組織中肝醣儲存量之變化情形。
首先,在肝臟部位肝醣含量的結果如圖7(A)所示,所有數值以Mean±SD表示。空白對照組、1倍(1X)、2倍(2X)以及5倍(5X)劑量本發明OLP-01菌株補充組的肝臟部位肝醣含量依序為12.81±3.44mg/g、17.95±2.93mg/g、22.17±6.45mg/g、30.49±10.02mg/g。條狀圖上方英文字母(a,b,c)相異者代表具有顯著差異(p<0.05)。相較於空白對照組,1倍(1X)、2倍(2X)以及5倍(5X)劑量本發明OLP-01菌株補充組的肝臟肝醣含量依序顯著提升1.40倍(p=0.0769)、1.73倍(p=0.0023)與2.38倍(p<0.0001)。根據趨勢統計分析結果(Trend analysis,p<0.0001)進一步顯示,隨著本發明之OLP-01菌株補充劑量之增加,肝臟肝醣含量的提升效果也是同樣具有顯著的劑量效應。
在腿部肌肉的肝醣含量結果如圖7(B)所示,所有數值以Mean±SD表示,空白對照組、1倍(1X)、2倍(2X)以及5倍(5X)劑量本發明OLP-01菌株補充組之肌肉肝醣含量依序為1.62±0.34mg/g、2.77±0.86mg/g、3.32±0.43mg/g、 3.33±0.85mg/g。條狀圖上方英文字母(a,b,c)相異者代表具有顯著差異(p<0.05)。相較於空白對照組,1倍(1X)、2倍(2X)以及5倍(5X)劑量本發明OLP-01菌株補充組的肌肉肝醣含量依序顯著提升1.71倍(p=0.0004)、2.05倍(p<0.0001)與2.05倍(p<0.0001)。根據趨勢統計分析結果(Trend analysis,p<0.0001)進一步顯示,隨著本發明之OLP-01菌株補充劑量之增加,其肌肉肝醣含量的提升效果亦具有顯著的劑量效應。
實例7:餵食本發明之乳酸菌菌株之動物試驗:病理切片分析
根據本發明之一實施例,為了瞭解補充本發明之OLP-01菌株是否對於組織器官產生變化及病理上不良影響,於實驗末最後一次餵食結束1小時之後,將4組小鼠犧牲並取其各項組織器官進行秤重及病理切片分析。
如圖8所示,在病理染色切片上,空白對照組、1倍(1X)、2倍(2X)以及5倍(5X)劑量本發明OLP-01菌株補充組之肝臟(A)、肌肉(B)、股四頭肌(C)、心臟(D)、腎臟(E)、肺臟(F)、副睪脂肪(Epididymal Fat Pad,EFP)(G)以及棕色脂肪組織(Brown Adipose Tissue,BAT)(H)等組織器官皆無任何差異及病變狀況的產生。
如圖9所示,在腓腸肌中發現到1倍(1X)、2倍(2X)以及5倍(5X)劑量本發明OLP-01菌株補充組之肌纖維束的數量較空白對照組多。在肌肉IHC免疫染色中也可看到1倍(1X)、2倍(2X)以及5倍(5X)劑量本發明OLP-01菌株補充組之肌纖維束較空白對照組大,Type I的慢肌數量也較空白對照組多。
依據上述動物試驗結果,使用本發明之OLP-01菌株之人體建議劑量(每人每日建議補充1*1010CFU)的1、2及5倍量能顯著增加提升肌力、提升負重游泳力竭時間、增加血乳酸清除率、降低血液中尿素氮濃度、增加肝臟及肌肉中肝醣的儲存量,增加運動耐力並延緩疲勞。需說明的是,僅有少數的乳酸菌菌株 經實驗過程發現具備有改善身體疲勞以及提升運動表現之保健功效,且在生體內(in vivo)被確認。而乳酸菌對身體健康的功能在於菌株(strain)的特異性而非菌種(species),此種對於人之身體健康有特殊功效之菌株稱為功能性益生菌(Guidelines for the evaluation of probiotics in food;Report of joint FAO/WHO working group on drafting guidelines for the evaluation of probiotics in food;London Ontario,Canada April 30 and May 1,2002:1-7)。另需強調的是,本案所請求保護的菌株僅包含寄存於財團法人食品工業發展研究所的長雙歧桿菌長雙歧亞種(Bifidobacterium longum subsp.longum)OLP-01菌株,寄存編號為BCRC 910875,並非廣泛地包含所有的比菲德氏龍根菌菌株。
以上所述之實施例僅是為說明本發明之技術思想及特點,其目的在使熟習此項技藝之人士能夠瞭解本發明之內容並據以實施,當不能以之限定本發明之專利範圍,即大凡依本發明所揭示之精神所作之均等變化或修飾,仍應涵蓋在本發明之專利範圍內。
【生物材料寄存】
財團法人食品工業發展研究所、2019年02月22日、BCRC 910875

Claims (10)

  1. 一種乳酸菌菌株在製備提升運動能力與抗疲勞之組合物之用途,其中該組合物包含:具有提升運動能力與抗疲勞之活性效果之經分離乳酸菌菌株,其中該乳酸菌菌株為長雙歧桿菌長雙歧亞種(Bifidobacterium longum subsp.longum)OLP-01菌株,寄存編號為BCRC 910875,上述菌株寄存於財團法人食品工業發展研究所;以及生理上或醫藥上可接受之賦形劑、稀釋劑或載體。
  2. 如請求項1所述之乳酸菌菌株在製備提升運動能力與抗疲勞之組合物之用途,其中該乳酸菌菌株為具有活性的菌株。
  3. 如請求項1所述之乳酸菌菌株在製備提升運動能力與抗疲勞之組合物之用途,其中該乳酸菌菌株為失去活性的菌株。
  4. 如請求項1所述之乳酸菌菌株在製備提升運動能力與抗疲勞之組合物之用途,其中該賦形劑、稀釋劑或載體為一食品。
  5. 如請求項4所述之乳酸菌菌株在製備提升運動能力與抗疲勞之組合物之用途,其中該食品包含醱酵乳、優格、乳酪、乳製飲品乳粉、茶、咖啡、口香糖、潔牙糖或以上之組合。
  6. 如請求項1所述之乳酸菌菌株在製備提升運動能力與抗疲勞之組合物之用途,其中該組合物為口服劑型之一醫藥組合物。
  7. 如請求項1所述之乳酸菌菌株在製備提升運動能力與抗疲勞之組合物之用途,其中該運動能力包含肌肉力量以及肌肉耐力。
  8. 如請求項7所述之乳酸菌菌株在製備提升運動能力與抗疲勞之組合物之用途,其中該肌肉力量為前肢抓力。
  9. 如請求項7所述之乳酸菌菌株在製備提升運動能力與抗疲勞之組合物之用途,其中該肌肉耐力為負重游泳耐力。
  10. 如請求項1所述之乳酸菌菌株在製備提升運動能力與抗疲勞之組合物之用途,其中該抗疲勞之活性效果包含降低運動後血乳酸、降低血氨、降低尿素氮、降低肌酸激酶、提升肝臟及肌肉中肝醣儲存量至少其中之一。
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