CN111820342B - (2-羧乙基)二甲基溴化锍在制备增强草鱼皮肤屏障功能的混合物中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了(2‑羧乙基)二甲基溴化锍在制备增强草鱼皮肤屏障功能的混合物中的应用，本发明通过将(2‑羧乙基)二甲基溴化锍作为增强剂添加在草鱼饲料中，可以调控草鱼皮肤屏障功能因子的表达，增强鱼皮肤屏障功能，提高鱼皮肤抗荧光假单胞菌引起赤皮病的能力，从而促进草鱼生长，提高饲料转化效率。

Description

(2-羧乙基)二甲基溴化锍在制备增强草鱼皮肤屏障功能的混 合物中的应用
技术领域
本发明涉及淡水鱼类养殖领域，具体涉及(2-羧乙基)二甲基溴化锍在制备增强草鱼皮肤屏障功能的混合物中的应用。
背景技术
草鱼是我国主要养殖淡水鱼类，具有悠久的养殖历史，养殖产量高，肉味鲜美、营养丰富，是深受广大消费者喜爱的淡水鱼产品之一。草鱼具有生长快、饲料来源广、产量高等特点。因此，我国养殖草鱼的面积和规模占淡水鱼养殖的35％左右。但在草鱼养殖生产中，经常出现细菌性赤皮病等传染性疾病，该病在鱼种和成鱼阶段常见，是草鱼养殖中的主要病害之一。在我国各养殖地区均有流行，且终年可见，严重危害养殖生产安全，养殖经济效应受到严重的影响。
赤皮病的病原为荧光假单胞菌，是在草鱼养殖过程中的常见疾病，每年由于放养捕捞或严冬造成鱼体受伤或冻伤时容易发生此病，患此病后8～10天就死亡。
目前主要通过以下方式进行预防：(1)采用生石灰或漂白粉彻底清塘，用漂白粉进行食场消毒；(2)用磺胺胍、磺胺嘧啶拌料饲喂进行药物预防；(3)鱼种放养时用呋喃唑酮药液浸洗预防。但这些预防产品和清塘消毒药物长期使用会出现副作用和药物残留，破坏养殖环境和污染水质，细菌耐药性增强，危害人类食品和公共卫生安全。
(2-羧乙基)二甲基溴化锍是中华人民共和国农业部公告第2519号公布的新饲料添加剂，以二甲硫醚、丙烯酸和氢溴酸为原料经化学合成制得，适用于淡水鱼。其分子式为C5H11BrO2S，分子量为215.1086，熔点为112℃，分子结构式如下：
Figure BDA0002606346570000011
目前的研究表明：(2-羧乙基)二甲基溴化锍具有调味作用，可以提高淡水鱼的摄食频次。
发明内容
针对上述技术问题，本发明提供了解决上述问题的(2-羧乙基)二甲基溴化锍在制备增强草鱼皮肤屏障功能的混合物中的应用。
本发明通过下述技术方案实现：
(2-羧乙基)二甲基溴化锍在制备增强草鱼皮肤屏障功能的混合物中的应用。
皮肤紧密连接蛋白的表达可以调控皮肤肠上皮细胞间屏障功能。其中，Occludin、ZO-1、ZO-2、claudin-c、claudin-f和claudin-11的表达量提高会增强皮肤上皮细胞间屏障功能；claudin-12、claudin-15a和claudin-15b的表达量提高会增加皮肤上皮细胞间屏障的通透性，降低细胞间屏障功能。通过添加(2-羧乙基)二甲基溴化锍的饲料喂养草鱼，可以调节皮肤紧密连接蛋白的表达，增强皮肤上皮细胞间紧密连接结构完整性，从而提高鱼类皮肤物理屏障功能。
进一步优选，(2-羧乙基)二甲基溴化锍用于制备草鱼用皮肤抗荧光假单胞菌感染的混合物。
进一步优选，(2-羧乙基)二甲基溴化锍用于制备防治荧光假单胞菌引起的草鱼赤皮病的混合物。
赤皮病是由荧光假单胞菌引起的细菌性鱼病。主要危害草鱼、青鱼和锦鲤鱼种及成鱼阶段。症状为病鱼体表局部或大部出血发炎，鳞片脱落，尤以鱼体两侧和腹部最明显。
进一步优选，所述混合物包括饲料、饲料预混料、药物、饲料或饲料预混料中的载体或基质。
进一步优选，所述(2-羧乙基)二甲基溴化锍的添加方式包括固体混合、溶剂溶解后喷洒混合。如将(2-羧乙基)二甲基溴化锍添加到草鱼饲料中制备新的饲料时，可采用的添加方式包括将其以固体混合的方式直接与饲料混合，搅匀；或是加水溶解后以喷雾形式均匀喷洒在饲料中或是其他添加方法。如果适当的话，(2-羧乙基)二甲基溴化锍可以和通常的鱼类饲料预混料一起添加，如维生素、矿物质、微量元素等。
本发明具有如下的优点和有益效果：
1、现有技术中(2-羧乙基)二甲基溴化锍用于饲料中的调味剂，主要通过其特殊的味道改善饲料的口味，刺激鱼类增加采食量。本发明提供的(2-羧乙基)二甲基溴化锍在制备防治草鱼赤皮病混合物中的用途，利用其可以促进皮肤紧密连接蛋白的表达，提高皮肤屏障功能，可有效的防治草鱼赤皮病的发生。
2、本发明通过将(2-羧乙基)二甲基溴化锍作为增强剂添加在草鱼饲料中，可以提高草鱼皮肤屏障功能因子的表达，增强鱼皮肤屏障功能，提高鱼皮肤抗荧光假单胞菌引起赤皮病的能力，从而促进草鱼生长，提高饲料转化效率。
附图说明
此处所说明的附图用来提供对本发明实施例的进一步理解，构成本申请的一部分，并不构成对本发明实施例的限定。在附图中：
图1为基础饲料组饲养的草鱼皮肤状况图，图中直线指示部位为赤皮病病患区域。
图2为本发明饲料组饲养的草鱼皮肤状图。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明白，下面结合实施例和附图，对本发明作进一步的详细说明，本发明的示意性实施方式及其说明仅用于解释本发明，并不作为对本发明的限定。
实施例1
本实施例研究(2-羧乙基)二甲基溴化锍对草鱼生长性能的影响。
1、试验材料：(2-羧乙基)二甲基溴化锍购自广州市科虎生物科技开发研究中心，纯度95.0％。
2、试验地点：四川农业大学水产动物营养研究室试验基地。
3、试验分组及试验饲料：选取平均体重223g的健康草鱼180尾，随机分为两个处理组，分别为对照组和(2-羧乙基)二甲基溴化锍添加组(本发明饲料组)，每组处理3个重复，每个重复30尾，分别饲喂基础日粮和本发明饲料日粮。
1)草鱼基础日粮为根据草鱼配合饲料营养标准(GB/T 36205-2018)配制，其组成及营养水平见表1：
表1草鱼基础日粮
日粮组份 质量百分含量％ 营养指标 质量百分含量％
大豆浓缩蛋白 4.28 粗蛋白 28.75
棉粕 16.20 粗脂肪 5.44
菜粕 17.68 n-3脂肪酸 1.04
大米浓缩蛋白 19.35 n-6脂肪酸 0.96
玉米淀粉 4.63 有效磷 0.40
α-淀粉 27.00 \ \
鱼油 3.05 \ \
大豆油 0.69 \ \
Ca(H2PO4)2 1.54 \ \
L-色氨酸(98％) 0.02 \ \
苏氨酸(98.5％) 0.08 \ \
DL-蛋氨酸(99％) 0.43 \ \
乙氧基喹啉(30％) 0.05 \ \
复合预混料 5.00 \ \
注：5％的复合预混料提供草鱼生长所需维生素和微量元素。
2)本发明饲料日粮为每1kg饲料中用0.26g(2-羧乙基)二甲基溴化锍替代基础日粮中相应质量的玉米淀粉。
3)饲料配制：配制试验饲料时，每种饲料原料粉碎至全部通过40目筛，60目筛上物低于20％，按比例混合并搅拌均匀，制成直径2mm、长度3mm的硬颗粒，在室温下风干后4℃冰箱贮存备用。
4、试验饲养方法：试验草鱼分别饲养于1.4m×1.4m×1.4m网箱中，为期60天。分别于每日上午7点、11点和下午3点和7点进行饱食投喂，摄食30min后收集剩料，烘干并称重用于计算采食量。并每天观察草鱼的健康状况。整个试验期水温为28.0±2.0℃，pH为7.4±0.3，溶解氧高于5.0mg/L。饲养试验结束后，停食24h，氨基苯甲酸乙酯麻醉，以箱为单位称重。
5、试验结果：从下表2可知，草鱼饲喂本发明添加有(2-羧乙基)二甲基溴化锍的饲料后，末重提高21.55％～32.70％，采食量提高23.87％～24.29％，饲料利用率提高6.67％～36.67％，增重率提高35.60％～49.00％。说明：(2-羧乙基)二甲基溴化锍能显著促进草鱼摄食、生长，提高饲料转化利用效率。
表2(2-羧乙基)二甲基溴化锍对草鱼生长性能的影响
项目 基础饲料组 本发明饲料组
平均初始重(g) 223.32±0.43 223.44±0.32
平均末重(g) 598.74±12.23 764.45±21.83*
平均采食量(g/尾) 694.36±0.62 861.71±0.84*
饲料利用率 0.56±0.04 0.69±0.05*
增重率(％) 178.71±4.56 256.24±7.72*
注：同行数据中本发明饲料组标有*表示其与基础饲料组差异显著(P＜0.05)，下同。
实施例2
本实施例研究(2-羧乙基)二甲基溴化锍提高草鱼皮肤抗荧光假单胞菌攻毒的能力
1、试验材料、试验地点、试验分组及试验饲料同实施例1所述。
2、试验饲养方法在实施例1的基础上，继续如下操作：
饲养试验(60天)结束后，每个重复处理的30尾鱼中选取接近处理均重的24尾鱼，每尾鱼采用载玻片在鱼体左侧相同位置刮去4片鳞片后，放入含有1.0×108CFU的荧光假单胞菌中，充气浸泡4min后，转移至新的网箱中，攻毒饲养14天。
攻毒试验期间同生长试验管理条件一样，每日观察并记录试验鱼活动情况和健康状况。攻毒试验结束后，所有试验草鱼均用对氨基苯甲酸乙酯麻醉，对赤皮状况评估并打分后，并迅速解剖分离皮肤样品，将其快速放入液氮中冷冻，置于-80℃的超低温冰箱保存。
3、试验结果：从下表3和图1可知，基础饲料组草鱼明显出现皮肤糜烂和出血等赤皮症状，本发明饲料组草鱼皮肤正常，未出现赤皮症状，荧光假单胞菌攻毒引起的赤皮发病率较基础饲料组降低了50.09％～67.58％。
皮肤紧密连接蛋白的表达，其中，Occludin、ZO-1、ZO-2、claudin-c、claudin-f和claudin-11分别提高了36.00％～153.33％、68.85％～157.38％、50.00％～171.21％、53.03％～231.82％、100.00％～271.43％、138.60％～317.54％；claudin-12、claudin-15a和claudin-15b分别降低了9.18％～65.22％、27.78％～65.15％、24.78％～75.22％。从而说明：(2-羧乙基)二甲基溴化锍能显著提高草鱼皮肤的细胞间屏障功能，提高皮肤抗荧光假单胞菌引起赤皮病的能力。
表3(2-羧乙基)二甲基溴化锍对草鱼皮肤紧密连接蛋白表达和赤皮发病率的影响
项目 基础饲料组 本发明饲料组
赤皮发病率(％) 27.02±2.14 9.87±0.42*
occludin 0.63±0.12 1.34±0.32*
ZO-1 0.52±0.09 1.21±0.18*
ZO-2 0.55±1.11 1.28±0.29*
claudin-c 0.48±0.18 1.42±0.41*
claudin-f 0.46±0.17 1.63±0.37*
claudin-11 0.42±0.15 1.72±0.36*
claudin-12 1.75±0.32 0.98±0.26*
claudin-15a 1.73±0.25 0.81±0.12*
claudin-15b 1.92±0.34 0.79±0.23*
以上所述的具体实施方式，对本发明的目的、技术方案和有益效果进行了进一步详细说明，所应理解的是，以上所述仅为本发明的具体实施方式而已，并不用于限定本发明的保护范围，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (4)

1.(2-羧乙基)二甲基溴化锍在制备增强草鱼皮肤屏障功能的混合物中的应用，其特征在于，(2-羧乙基)二甲基溴化锍用于制备草鱼用皮肤抗荧光假单胞菌感染的混合物。
2.根据权利要求1所述的(2-羧乙基)二甲基溴化锍在制备增强草鱼皮肤屏障功能的混合物中的应用，其特征在于，(2-羧乙基)二甲基溴化锍用于制备防治荧光假单胞菌引起的草鱼赤皮病的混合物。
3.根据权利要求1至2任一项所述的(2-羧乙基)二甲基溴化锍在制备增强草鱼皮肤屏障功能的混合物中的应用，其特征在于，所述混合物包括饲料、饲料预混料、药物、饲料中的载体、饲料预混料中的载体、饲料中的基质、饲料预混料中的基质。
4.根据权利要求3所述的(2-羧乙基)二甲基溴化锍在制备增强草鱼皮肤屏障功能的混合物中的应用，其特征在于，所述(2-羧乙基)二甲基溴化锍的添加方式包括固体混合、溶剂溶解后喷洒混合。
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