CN111808911A - 一种用于观察金针菇菌丝生长形态结构的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种用于观察金针菇菌丝生长形态结构的方法，包括如下步骤，步骤一、载玻片培养小室的制作；步骤二、对载玻片培养小室进行灭菌；步骤三、琼脂块制备；步骤四、接种，步骤五、培养；所述培养是将接种好的载玻片培养小室，置于培养箱19±0.5℃培养，3‑5天后取出用显微镜观察并记录结果；步骤六、镜检；本发明操作方法简单，通过采用本发明对金针菇菌丝生长形态进行观察不会将金针菇菌丝挑乱或破坏，与传统观察方法相比，能更清晰地观察到金针菇菌丝在自然生长状态下的形态结构。
Description
技术领域
本发明涉及金针菇技术领域，具体涉及一种用于观察金针菇菌丝生长形态结构的方法。
背景技术
食用菌菌丝是由管状细胞组成的丝状物，是由孢子吸水后萌发芽管，芽管的管状细胞不断分裂伸长发育而形成的。菌丝体是由无数菌丝交织而成的丝状体，一般呈白色绒毛状，菌丝中有横隔，大多是多细胞，每个菌丝细胞都有细胞壁、细胞质和细胞核；菌丝前端不断地生长，分枝并交织形成的菌丝群，通常称为菌丝体，即食用菌的营养体，是形成子实体（出菇）的基础。菌丝体质量的好坏，对是否出菇、产量高低、品质好坏起到决定性作用，按发育的顺序，菌丝体可以分为初生菌丝体、次生菌丝体和三生菌丝体；初生菌丝体是刚从担孢子萌发而成的菌丝体，开始时含有许多核，随后细胞产生横隔，使每个细胞各具一个核，所以也叫单核菌丝体或同核体，初生菌丝发育到一定阶段，由两个单核菌丝细胞发生质配，称为双核细胞，我们把这种具有双核细胞的菌丝体称为次生菌丝体又叫做双核菌丝体；双核菌丝体的菌体粗壮，生长也快，在菌丝的顶端细胞上有锁状联合的结构，凡具有锁状联合的菌丝就可以断定它是双核的，但反之则不然；三生菌丝又叫结实性双核菌丝体，是双核菌丝体发育到一定阶段，在适宜条件下，相互扭结形成双核菌丝团，发育成子实体原基，然后进一步发育成子实体。
目前常用的食用菌菌丝生长形态观察方法，是在洁净的载玻片中央滴一滴蒸馏水，然后用接种针从试管斜面或培养料内挑取少许菌丝体置于载玻片液滴中，接着再用接种针将菌丝体挑开使其分散，用镊子加盖玻片，然后再借助显微镜进行观察。而金针菇作为我国乃至全球重要的食用菌之一，关于其菌丝生长形态结构的观察方法，也是先用接种针挑取少许菌丝体，置于载玻片液滴中，再用接种针挑散开，然后借助显微镜进行观察。此法虽然可以看到菌丝的形态，但由于在制片过程中，菌丝已被挑乱，故所看到的菌丝形态与菌丝自然生长状态下的形态存在差异，失去了逼真性，对了解菌丝的真实性状存在较大弊端。
发明内容
本发明针对背景技术中的不足，设计一种用于观察金针菇菌丝生长形态结构的方法，该方法操作简单、能清晰地观察到金针菇菌丝在自然生长状态下的形态结构。
为实现上述目的，本发明技术解决方案如下：
一种用于观察金针菇菌丝生长形态结构的方法，包括如下步骤，步骤一、载玻片培养小室的制作；步骤二、对载玻片培养小室进行灭菌；步骤三、琼脂块制备；步骤四、接种；所述接种是在超净工作台，通过无菌操作，用尖细的接种针从待观察菌种的PDA培养基上挑取小块培养基，将其接种于载玻片培养小室中琼脂块边缘上，随后用无菌镊子夹着斜立在载玻片旁的盖玻片盖在琼脂块上，用移液枪吸取2mL灭菌的20%甘油，注入接过种的载玻片培养小室滤纸片上，保湿，盖上平板盖，用封口膜封好；步骤五、培养；所述培养是将接种好的载玻片培养小室，置于培养箱19±0.5℃培养，3-5天后取出用显微镜观察并记录结果；步骤六、镜检；所述镜检是培养3-5天后，取出载玻片，置于显微镜下观察；所述观察是先在显微镜低倍镜下观察，先将需要观察的菌丝部位调到中心，调节粗准焦螺旋找到物象，再用精准焦螺旋调节直至物象清晰，然后再转动物镜，换成高倍镜观察，调节精准焦螺旋直至物象清晰；观察结束后，可以再放回去培养，直至观察完成。
所述载玻片培养小室的制作是在平板培养皿底铺一张小于皿底的圆形滤纸片，在其上面放一个支撑装置，在支撑装置上放一块洁净的载玻片，然后将两块盖玻片分别斜立在载玻片的两侧，之后盖上平板盖。
对所述载玻片培养小室进行灭菌是将多个制作好的载玻片培养小室置于灭菌锅中用121℃灭菌30min，烘干备用。
所述支撑装置为U形玻棒或支撑架。
所述琼脂块制备包括步骤一、用注射器吸取5~6mLPDA培养基，装入试管中；步骤二、重复步骤一，制作多支试管，然后塞上试管塞，之后用纸包扎好，放入灭菌锅中121℃灭菌20min，灭菌后冷却至60℃左右取出放置至超净工作台，逐个倒入直径为90mm的灭菌平板中；步骤三、晃动灭菌平板使培养基均匀平摊在灭菌平板上，待其凝固成薄层后用无菌解剖刀切成0.5~1cm2的琼脂块，用刀尖铲起琼脂块放在已灭菌的载玻片培养小室的载玻片上，每块载玻片上放两块琼脂块。
所述接种包括如下步骤：步骤一、用75%酒精棉擦拭超净工作台的操作台面及接种用具进行消毒灭菌；步骤二、将需要观察的菌种试管种从培养箱取出，逐个使用75%酒精进行表面消毒后放入超净工作台；步骤三、将用75%酒精擦拭过的接种针放在酒精灯或燃气喷灯火焰的外焰上灼烧至接种针发红，之后冷却；步骤四、将菌种试管口放在酒精灯或燃气喷灯外焰灼烧灭菌后，旋转拔出试管塞灼烧表面，试管口向下倾斜，始终置于火焰附近；步骤五、再次将接种针置于酒精灯或燃气喷灯外焰充分灼烧，在试管培养基尖端冷却后，刮去试管壁和培养基上的气生菌丝，用接种针挑取试管近口端培养基内的菌丝，挑取厚度为0.3-0.6mm；步骤六、将接载玻片培养小室放在酒精灯或燃气喷灯外焰灼烧灭菌后打开平板盖，用灼烧后的接种针将挑取好的接种块接种于载玻片培养小室的琼脂块边缘上，随后用无菌镊子夹着斜立在载玻片旁的盖玻片盖在琼脂块上；步骤七、用移液枪吸取2mL灭菌的20%甘油，注入接过种的载玻片培养小室滤纸片上，保湿，盖上平板盖，用封口膜封好。
所述PDA培养基包括以下重量份的各组分：马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂15-20g、蒸馏水1000mL、自然PH。
本发明的有益效果：
本发明操作方法简单，通过采用本发明对金针菇菌丝生长形态进行观察不会将金针菇菌丝挑乱或破坏，与传统观察方法相比，能更清晰地观察到金针菇菌丝在自然生长状态下的形态结构。
附图说明
图1为本发明载玻片培养小室的主视结构示意图。
图2为本发明载玻片培养小室的平板培养皿、圆形滤纸片、支撑装置、载玻片连接后的立体结构示意图。
图中：1、平板培养皿，2、圆形滤纸片，3、支撑装置，4、载玻片，5、盖玻片，6、平板盖。
具体实施方式
实施例1
如图1至图2所示，本发明公开了一种用于观察金针菇菌丝生长形态结构的方法，包括如下步骤，步骤一、载玻片培养小室的制作；步骤二、对载玻片培养小室进行灭菌；步骤三、琼脂块制备；步骤四、接种；步骤五、培养；步骤六、镜检；所述载玻片培养小室的制作是在平板培养皿底铺一张小于皿底的圆形滤纸片，在其上面放一个支撑装置，在支撑装置上放一块洁净的载玻片，然后将两块盖玻片分别斜立在载玻片的两侧，之后盖上平板盖；对所述载玻片培养小室进行灭菌是将多个制作好的载玻片培养小室置于灭菌锅中用121℃灭菌30min，烘干备用；所述支撑装置为U形玻棒或支撑架；所述琼脂块制备包括步骤一、用注射器吸取5~6mLPDA培养基，装入试管中；步骤二、重复步骤一，制作多支试管，然后塞上试管塞，之后用牛皮纸包扎好，放入灭菌锅中121℃灭菌20min，灭菌后冷却至60℃左右取出放置至超净工作台，逐个倒入直径为90mm的灭菌平板中；步骤三、晃动灭菌平板使培养基均匀平摊在灭菌平板上，待其凝固成薄层后用无菌解剖刀切成0.5~1cm2的琼脂块，用刀尖铲起琼脂块放在已灭菌的载玻片培养小室的载玻片上，每块载玻片上放两块琼脂块，所述接种是在超净工作台，通过无菌操作，用尖细的接种针从待观察菌种的PDA培养基上挑取小块培养基，将其接种于载玻片培养小室中琼脂块边缘上，随后用无菌镊子夹着斜立在载玻片旁的盖玻片盖在琼脂块上，用移液枪吸取2mL灭菌的20%甘油，注入接过种的载玻片培养小室滤纸片上，保湿，盖上平板盖，用封口膜封好，所述PDA培养基包括以下重量份的各组分：马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂15-20g、蒸馏水1000mL、自然PH，所述培养是将接种好的载玻片培养小室，置于培养箱19±0.5℃培养，3-5天后取出用显微镜观察并记录结果；所述镜检是培养3-5天后，取出载玻片，置于显微镜下观察；所述观察是先在显微镜低倍镜下观察，先将需要观察的菌丝部位调到中心，调节粗准焦螺旋找到物象，再用精准焦螺旋调节直至物象清晰，然后再转动物镜，换成高倍镜观察，调节精准焦螺旋直至物象清晰。观察结束后，可以再放回去培养，直至观察完成。
实施例2
如图1至图2所示，本发明公开了一种用于观察金针菇菌丝生长形态结构的方法，包括如下步骤，步骤一、载玻片培养小室的制作；步骤二、对载玻片培养小室进行灭菌；步骤三、琼脂块制备；步骤四、接种；步骤五、培养；步骤六、镜检；所述载玻片培养小室的制作是在平板培养皿底铺一张小于皿底的圆形滤纸片，在其上面放一个支撑装置，在支撑装置上放一块洁净的载玻片，然后将两块盖玻片分别斜立在载玻片的两侧，之后盖上平板盖，对所述载玻片培养小室进行灭菌是将多个制作好的载玻片培养小室置于灭菌锅中用121℃灭菌30min，烘干备用，所述支撑装置为U形玻棒或支撑架，所述琼脂块制备包括步骤一、用注射器吸取5mLPDA培养基，装入试管中；步骤二、重复步骤一，制作多支试管，然后塞上试管塞，之后用纸包扎好，放入灭菌锅中121℃灭菌20min，灭菌后冷却至60℃左右取出放置至超净工作台，逐个倒入直径为90mm的灭菌平板中；步骤三、晃动灭菌平板使培养基均匀平摊在灭菌平板上，待其凝固成薄层后用无菌解剖刀切成0.5cm2的琼脂块，用刀尖铲起琼脂块放在已灭菌的载玻片培养小室的载玻片上，每块载玻片上放两块琼脂块，所述接种包括如下步骤：步骤一、用75%酒精棉擦拭超净工作台的操作台面及接种用具进行消毒灭菌；步骤二、将需要观察的菌种试管种从培养箱取出，逐个使用75%酒精进行表面消毒后放入超净工作台；步骤三、将用75%酒精擦拭过的接种针放在酒精灯或燃气喷灯火焰的外焰上灼烧至接种针发红，之后冷却；步骤四、将菌种试管口放在酒精灯或燃气喷灯外焰灼烧灭菌后，旋转拔出试管塞灼烧表面，试管口向下倾斜，始终置于火焰附近；步骤五、再次将接种针置于酒精灯或燃气喷灯外焰充分灼烧，在试管培养基尖端冷却后，刮去试管壁和培养基上的气生菌丝，用接种针挑取试管近口端培养基内的菌丝，挑取厚度为0.3mm；步骤六、将接载玻片培养小室放在酒精灯或燃气喷灯外焰灼烧灭菌后打开平板盖，用灼烧后的接种针将挑取好的接种块接种于载玻片培养小室的琼脂块边缘上，随后用无菌镊子夹着斜立在载玻片旁的盖玻片盖在琼脂块上；步骤七、用移液枪吸取2mL灭菌的20%甘油，注入接过种的载玻片培养小室滤纸片上，保湿，盖上平板盖，用封口膜封好；所述PDA培养基包括以下重量份的各组分：马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂15g、蒸馏水1000mL、自然PH；所述培养是将接种好的载玻片培养小室，置于培养箱19±0.5℃培养，3天后取出用显微镜观察并记录结果；所述镜检是培养3天后，取出载玻片，置于显微镜下观察；所述观察是先在显微镜低倍镜下观察，先将需要观察的菌丝部位调到中心，调节粗准焦螺旋找到物象，再用精准焦螺旋调节直至物象清晰，然后再转动物镜，换成高倍镜观察，调节精准焦螺旋直至物象清晰。观察结束后，可以再放回去培养，直至观察完成。
实施例3
如图1至图2所示，本发明公开了一种用于观察金针菇菌丝生长形态结构的方法，包括如下步骤，步骤一、载玻片培养小室的制作；步骤二、对载玻片培养小室进行灭菌；步骤三、琼脂块制备；步骤四、接种；步骤五、培养；步骤六、镜检；所述载玻片培养小室的制作是在平板培养皿底铺一张略小于皿底的圆形滤纸片，在其上面放一个支撑装置，在支撑装置上放一块洁净的载玻片，然后将两块盖玻片分别斜立在载玻片的两侧，之后盖上平板盖，对所述载玻片培养小室进行灭菌是将多个制作好的载玻片培养小室置于灭菌锅中用121℃灭菌30min，烘干备用；所述支撑装置为U形玻棒或支撑架，所述琼脂块制备包括步骤一、用注射器吸取6mLPDA培养基，装入试管中；步骤二、重复步骤一，制作多支试管，然后塞上试管塞，之后用纸包扎好，放入灭菌锅中121℃灭菌20min，灭菌后冷却至60℃左右取出放置至超净工作台，逐个倒入直径为90mm的灭菌平板中；步骤三、用手晃动灭菌平板使培养基均匀平摊在灭菌平板上，待其凝固成薄层后用无菌解剖刀切成1cm2的琼脂块，用刀尖铲起琼脂块放在已灭菌的载玻片培养小室的载玻片上，每块载玻片上放两块琼脂块；所述接种包括如下步骤：步骤一、用75%酒精棉擦拭超净工作台的操作台面及接种用具进行消毒灭菌；步骤二、将需要观察的菌种试管种从培养箱取出，逐个使用75%酒精进行表面消毒后放入超净工作台；步骤三、将用75%酒精擦拭过的接种针放在酒精灯或燃气喷灯火焰的外焰上灼烧至接种针发红，之后冷却；步骤四、将菌种试管口放在酒精灯或燃气喷灯外焰灼烧灭菌后，旋转拔出试管塞灼烧表面，试管口向下倾斜，始终置于火焰附近；步骤五、再次将接种针置于酒精灯或燃气喷灯外焰充分灼烧，在试管培养基尖端冷却后，刮去试管壁和培养基上的气生菌丝，用接种针挑取试管近口端培养基内的菌丝，挑取厚度为0.6mm；步骤六、将接载玻片培养小室放在酒精灯或燃气喷灯外焰灼烧灭菌后打开平板盖，用灼烧后的接种针将挑取好的接种块接种于载玻片培养小室的琼脂块边缘上，随后用无菌镊子夹着斜立在载玻片旁的盖玻片盖在琼脂块上；步骤七、用移液枪吸取2mL灭菌的20%甘油，注入接过种的载玻片培养小室滤纸片上，保湿，盖上平板盖，用封口膜封好，所述PDA培养基包括以下重量份的各组分：马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂20g、蒸馏水1000mL、自然PH，所述培养是将接种好的载玻片培养小室，置于培养箱19±0.5℃培养，5天后取出用显微镜观察并记录结果，所述镜检是培养5天后，取出载玻片，置于显微镜下观察；所述观察是先在显微镜低倍镜下观察，先将需要观察的菌丝部位调到中心，调节粗准焦螺旋找到物象，再用精准焦螺旋调节直至物象清晰，然后再转动物镜，换成高倍镜观察，调节精准焦螺旋直至物象清晰。观察结束后，可以再放回去培养，直至观察完成。
Claims (7)
1.一种用于观察金针菇菌丝生长形态结构的方法，其特征在于：包括如下步骤，步骤一、载玻片培养小室的制作；步骤二、对载玻片培养小室进行灭菌；步骤三、琼脂块制备；步骤四、接种，所述接种是在超净工作台，通过无菌操作，用尖细的接种针从待观察菌种的PDA培养基上挑取小块培养基，将其接种于载玻片培养小室中琼脂块边缘上，随后用无菌镊子夹着斜立在载玻片旁的盖玻片盖在琼脂块上，用移液枪吸取2mL灭菌的20%甘油，注入接过种的载玻片培养小室滤纸片上，保湿，盖上平板盖，用封口膜封好；步骤五、培养；所述培养是将接种好的载玻片培养小室，置于培养箱19±0.5℃培养，3-5天后取出用显微镜观察并记录结果；步骤六、镜检；所述镜检是培养3-5天后，取出载玻片，置于显微镜下观察；所述观察是先在显微镜低倍镜下观察，先将需要观察的菌丝部位调到中心，调节粗准焦螺旋找到物象，再用精准焦螺旋调节直至物象清晰，然后再转动物镜，换成高倍镜观察，调节精准焦螺旋直至物象清晰；观察结束后，可以再放回去培养，直至观察完成。
2.根据权利要求1所述的一种用于观察金针菇菌丝生长形态结构的方法，其特征在于：所述载玻片培养小室的制作是在平板培养皿底铺一张小于皿底的圆形滤纸片，在其上面放一个支撑装置，在支撑装置上放一块洁净的载玻片，然后将两块盖玻片分别斜立在载玻片的两侧，之后盖上平板盖。
3.根据权利要求2所述的一种用于观察金针菇菌丝生长形态结构的方法，其特征在于：对所述载玻片培养小室进行灭菌是将多个制作好的载玻片培养小室置于灭菌锅中用121℃灭菌30min，烘干备用。
4.根据权利要求2或3所述的一种用于观察金针菇菌丝生长形态结构的方法，其特征在于：所述支撑装置为U形玻棒或支撑架。
5.根据权利要求4所述的一种用于观察金针菇菌丝生长形态结构的方法，其特征在于：所述琼脂块制备包括步骤一、用注射器吸取5~6mLPDA培养基，装入试管中；步骤二、重复步骤一，制作多支试管，然后塞上试管塞，之后用纸包扎好，放入灭菌锅中121℃灭菌20min，灭菌后冷却至60℃左右取出放置至超净工作台，逐个倒入直径为90mm的灭菌平板中；步骤三、晃动灭菌平板使培养基均匀平摊在灭菌平板上，待其凝固成薄层后用无菌解剖刀切成0.5~1cm2的琼脂块，用刀尖铲起琼脂块放在已灭菌的载玻片培养小室的载玻片上，每块载玻片上放两块琼脂块。
6.根据权利要求5所述的一种用于观察金针菇菌丝生长形态结构的方法，其特征在于：所述接种包括如下步骤：步骤一、用75%酒精棉擦拭超净工作台的操作台面及接种用具进行消毒灭菌；步骤二、将需要观察的菌种试管种从培养箱取出，逐个使用75%酒精进行表面消毒后放入超净工作台；步骤三、将用75%酒精擦拭过的接种针放在酒精灯或燃气喷灯火焰的外焰上灼烧至接种针发红，之后冷却；步骤四、将菌种试管口放在酒精灯或燃气喷灯外焰灼烧灭菌后，旋转拔出试管塞灼烧表面，试管口向下倾斜，始终置于火焰附近；步骤五、再次将接种针置于酒精灯或燃气喷灯外焰充分灼烧，在试管培养基尖端冷却后，刮去试管壁和培养基上的气生菌丝，用接种针挑取试管近口端培养基内的菌丝，挑取厚度为0.3-0.6mm；步骤六、将接载玻片培养小室放在酒精灯或燃气喷灯外焰灼烧灭菌后打开平板盖，用灼烧后的接种针将挑取好的接种块接种于载玻片培养小室的琼脂块边缘上，随后用无菌镊子夹着斜立在载玻片旁的盖玻片盖在琼脂块上；步骤七、用移液枪吸取2mL灭菌的20%甘油，注入接过种的载玻片培养小室滤纸片上，保湿，盖上平板盖，用封口膜封好。
7.根据权利要求6所述的一种用于观察金针菇菌丝生长形态结构的方法，其特征在于：所述PDA培养基包括以下重量份的各组分：马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂15-20g、蒸馏水1000mL、自然PH。
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