CN111808773B - 一株嗜酸氧化亚铁硫杆菌及其应用和浸矿方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一株嗜酸氧化亚铁硫杆菌512SCK‑Af‑17,属于微生物技术领域,所述嗜酸氧化亚铁硫杆菌保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物菌种保藏中心,保藏号为CGMCC19885。本发明提供的嗜酸氧化亚铁硫杆菌能够在低温、低pH值环境下生长,并且在低温、低pH值条件下具有较强的铁氧化能力,在微生物冶金工业中可以得到广泛应用。
Description
技术领域
本发明属于微生物技术领域,尤其涉及一株嗜酸氧化亚铁硫杆菌及其应用和浸矿方法。
背景技术
微生物地浸技术常用于攻克含硫化矿物的中低品位金属矿石中金属难浸问题。传统化学法浸出中常人为加入氧化剂和硫酸,在较高酸度条件下将难溶金属转化成可溶状态使其进入溶液,从而加以回收。但是,工艺往往需要较大用量的氧化剂和硫酸,大大提高工艺成本且浸采效果不如生物浸出,利用微生物冶金技术能够大幅度提高我国矿产资源的开发利用率。硫化矿浸出微生物一般为化能自养菌,嗜酸性化能自养菌主要有氧化亚铁硫杆菌(Acidithiobacillus ferrooxidans)、氧化硫硫杆菌(Acidithiobacillusthiooxidans)、氧化铁铁杆菌(Ferrobacillus ferrooxidans)和氧化亚铁钩端螺旋菌(Leptospirillum ferrooxidans)等,它们的最适pH范围在2.0~3.0之间,最适温度范围在30~45℃。在生物冶金过程中,pH值在2.0以上时就会有三价铁沉淀产生,且部分沉淀包裹在矿石颗粒表面(RaLph P.Hackl et al.,Bacteria for oxidizing multimetallicsulphide ores,US 5089412);在pH值>1.6的细菌浸出系统中总铁浓度为5~8g/L时便有黄钾铁钒类物质产生,因此造成氧化剂含量减少,影响金属的浸出率。目前新疆铀矿地浸地下环境温度常年在17℃左右,内蒙古铀矿生产的气候环境也是低温环境,微生物地浸工艺较难维持在最适温度范围。筛选分离在低pH、低温环境条件下具有高氧化效率的冶金菌具有极大的应用前景。
发明内容
为了解决上述问题,本发明提供了一株嗜酸氧化亚铁硫杆菌及其应用和浸矿方法。本发明提供的嗜酸氧化亚铁硫杆菌,在低pH值、较低温度环境条件下生长,具有较强的铁氧化能力,可以在微生物冶金工业中广泛应用。
为了实现上述目的,本发明提供如下技术方案:
本发明提供了一株嗜酸氧化亚铁硫杆菌512SCK-Af-17,拉丁文为Acidithiobacillus ferrooxidans,保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物菌种保藏中心,保藏号为CGMCC19885。
本发明还提供了所述嗜酸氧化亚铁硫杆菌512SCK-Af-17在浸矿中的应用。
优选的,所述矿的种类包括含硫化矿。
优选的,所述含硫化矿包括中低品位含硫金属矿;所述中低品位含硫金属矿的金属质量百分含量为0.05%~0.5%。
更优选的,所述含硫金属矿包括含硫铀矿和/或含硫铜矿。
本发明提供了一种浸矿方法,包括:将矿石与接种了所述嗜酸氧化亚铁硫杆菌512SCK-Af-17的溶浸液混合后浸泡。
优选的,所述溶浸液的体积与矿石的质量比为3ml:1g。
优选的,所述溶浸液中嗜酸氧化亚铁硫杆菌512SCK-Af-17的活菌数为3.5×107CFU/mL。
优选的,所述溶浸液的pH值为1.5~1.9,所述浸泡的温度为15~20℃,所述浸泡的时间为24~240h。
优选的,在浸泡过程中充氧,所述充氧的压力为0.10~0.30MPa。
有益效果:本发明提供的嗜酸氧化亚铁硫杆菌能够在低温、低pH值环境下生长,并且在低温、低pH值条件下具有较强的铁氧化能力,在微生物冶金工业中可以得到广泛应用。
生物保藏说明
嗜酸氧化亚铁硫杆菌512SCK-Af-17,拉丁文为Acidithiobacillusferrooxidans,保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物菌种保藏中心,保藏编号:CGMCC19885,保藏日期2020年05月28日,保藏地址北京市朝阳区北辰路西路1号院3号。
附图说明
图1为嗜酸氧化亚铁硫杆菌512SCK-Af-17的电镜图;
图2为嗜酸氧化亚铁硫杆菌512SCK-Af-17的菌落图;
图3为不同温度条件下嗜酸氧化亚铁硫杆菌512SCK-Af-17菌株培养中Fe2+浓度随时间变化曲线;
图4为14℃、17℃条件下嗜酸氧化亚铁硫杆菌512SCK-Af-17菌株以50t尾液为培养基中Fe2+浓度随时间变化曲线;
图5为不同载体上嗜酸氧化亚铁硫杆菌512SCK-Af-17在8~12℃条件下的Fe2+氧化速率作图;
图6为浸泡过程中铀浓度随时间变化图。
具体实施方式
本发明提供了一株嗜酸氧化亚铁硫杆菌512SCK-Af-17,拉丁文为Acidithiobacillus ferrooxidans,保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物菌种保藏中心,保藏号为CGMCC19885。本发明提供的嗜酸氧化亚铁硫杆菌能够在14~20℃、pH1.5~1.9环境下生长,并且在这样的低温、低pH值条件下具有较强的铁氧化能力,在微生物冶金工业中可以得到广泛应用。
本发明还提供了所述嗜酸氧化亚铁硫杆菌512SCK-Af-17在浸矿中的应用。在本发明中,所述矿的种类优选包括含硫化矿;所述含硫化矿优选包括中低品位含硫金属矿;所述中低品位含硫金属矿的金属质量百分含量为0.05%~0.5%;所述含硫金属矿优选包括含硫铀矿和/或含硫铜矿;所述含硫铀矿和/或含硫铜矿的金属质量百分含量优选为0.05%~0.5%的含硫铀矿和/或含硫铜。
本发明还提供了一种浸矿方法,包括:将矿石与接种了上述技术方案所述嗜酸氧化亚铁硫杆菌512SCK-Af-17的溶浸液混合后浸泡。本发明将嗜酸氧化亚铁硫杆菌512SCK-Af-17接种到溶浸液中与矿石混合后浸泡,可显著提高对金属矿石的浸矿能力。
在本发明中,所述溶浸液的体积与矿石的质量比优选为3~5mL:1g;更优选为3mL:1g;所述溶浸液中嗜酸氧化亚铁硫杆菌512SCK-Af-17的活菌数优选为0.2~3.5×107CFU/mL;进一步优选为3.5×107CFU/mL;所述溶浸液的pH值优选为1.5~1.9,进一步优选为1.8。
在本发明中,所述浸泡的温度优选为14~20℃,进一步优选为17℃;所述浸泡的时间优选为24~240h,进一步优选为120h。
本发明在浸泡过程中优选进行充氧,所述充氧的压力优选为0.1~0.3Mpa,进一步优选为0.1Mpa。充氧可以促进嗜酸氧化亚铁硫杆菌512SCK-Af-17的生长,进一步提高浸矿能力。
为了进一步说明本发明,下面结合实施例对本发明提供的嗜酸氧化亚铁硫杆菌及其应用和浸矿方法进行详细地描述,但不能将它们理解为对本发明保护范围的先定。
实施例1
嗜酸氧化亚铁硫杆菌512SCK-Af-17分离纯化及鉴定
本发明的嗜酸氧化亚铁硫杆菌512SCK-Af-17是从位于中国新疆伊犁512铀矿床岩芯样品中分离纯化得到的。具体地,将岩芯样品用pH1.8的9K+S培养基,在30℃条件下振荡富集培养,多次转接后待其氧化活性稳定后分离纯化,即得到嗜酸氧化亚铁硫杆菌512SCK-Af-17。
嗜酸氧化亚铁硫杆菌512SCK-Af-17生物富集方法
针对液体样品或矿石样品的来源、组成等性质,选择9K+S液体培养基进行嗜酸性微生物的选育,具体操作步骤如下:
(1)称取10g矿石。
(2)培养基配制
9K+S培养基成分如下:
9K培养基成分:A液:(NH4)2SO4 3g/L,KCl 0.1g/L,K2HPO4 0.5g/L,MgSO4·7H2O0.5g/L,Ca(NO3)2 0.01g/L,pH1.8;B液:FeSO4·7H2O 25g/L(二价铁5g/L),pH1.8;
9K+S培养基成分:在9K液体培养基中加1g/L硫粉。
上述选择性培养基使用自来水配制,采用高压蒸汽灭菌锅120℃灭菌20min,冷却至室温备用;B液FeSO4采用滤膜法灭菌,硫粉采用乙醇间歇灭菌法灭菌。
(3)接种培养
矿石样品按10%质量体积比接种到培养基中,无菌操作。富集过程中采用100mL体系,装于300mL三角瓶中。培养温度按25℃、20℃,17℃,15℃,14℃梯度下降,在相应温度下培养至Fe2+浓度低于0.5g/L时,取20mL菌液接种到80mL的9K+S培养基中,如此转代接种培养,至铁氧化活性稳定后降低培养温度,铁氧化活性稳定是指Fe2+浓度至0.5g/L以下所需要的培养时间连续接种2~3次相接近。
将培养液三角瓶置于选定温度、160r/min气浴恒温振荡器中振荡培养。
接种后测定培养液起始Fe2+浓度。矿石样品接种后需振荡30min再测定培养液Fe2+浓度。培养液的起始pH调整至1.5~1.8。
b酸氧化亚铁硫杆菌512SCK-Af-17分离纯化方法
嗜酸性微生物分离纯化有赖于双层固体平板。针对未富集的矿石样品、液体样品或富集得到的培养液,使用稀释涂布法或划线法利用iFeO选择性固体平板进行嗜酸性微生物的分离纯化。具体步骤如下:
(1)固体培养基配制
iFeO:A液:50×HBS 8ml、TES 0.4ml、H2O 276ml,pH 2.5;
B液:agarose2.8g,H2O 100ml;
C液:FeSO4·7H2O 1mol/L1ml;
其中,HBS为50×异养基础盐类培养基(HeterotrophicBasalSalts solution以下简称HBS),用时稀释50倍,其组分如下:Na2SO4·10H2O 7.5g/L,(NH4)2SO4 22.5g/L,KCl2.5g/L,MgSO4·7H2O 25g/L,KH2PO4 2.5g/L,Ca(NO3)2·4H2O 0.7g/L,用时高压蒸汽灭菌。
1000×TES(Trace Elements Solution):H2SO4 0.01mol/L、ZnSO4·7H20 10g/L、CuSO4·5H2O 1g/L、MnSO4·4H2O 1g/L、CoSO4·7H2O 1g/L、Cr2(SO4)3·15H2O 0.5g/L、H3BO30.6g/L、NaMoO4·2H2O 0.5g/L、NiSO4·6H2O 1g/L、Na2SeO4·10H2O 1g/L、Na2WO4·2H2O0.1g/L、NaVO3 0.1g/L;
如无特殊要求,培养基配制用自来水。
iFeO为双层固体平板,分上、下两层,除下层培养基中添加SJH菌(Acidiphiliumsp,化能异养型菌)外,其它成分相同。SIH菌可以还原三价铁,消除嗜酸氧化亚铁硫杆菌512SCK-Af-17的代谢产物生长抑制作用。
A液与B液分别经高压蒸汽灭菌后冷却至50℃左右混合,分别加入所需量的经滤膜法灭菌的C液。下层培养基在45℃时接种入5%SJH,充分混匀,迅速倒入平板,待凝固后倒入上层。通常平板制备好后需室温放置两至三天,后置入冰箱冷藏备用。
(2)固体平板分离纯化
针对富集得到的培养液,采用划线法分别接种至iFeO固体培养基,选择富集培养过程中的相应温度静置培养,定期观察菌落生长情况,并记录菌落形成及特征。一般在15~20天后,菌落形态稳定,菌落形态稳定,在体视显微镜下观察并拍照。
(3)纯化菌株液体培养
通过菌落形态、固体培养基类型等信息初步判断菌种属性,选择相应液体培养基进行纯化菌株液体培养。在体视显微镜下挑取形态相同的纯化菌落3-5个,置于1-5mL 9K+S液体培养基中在相应温度下静止培养7-14天,监测培养液参数变化,达到二价铁氧化至浓度低于0.5g/L时,扩大培养。
c分子生物学鉴定
取扩大培养后的菌培液,离心后收集菌体,采用FastDNA SPIN Kit(美国Mpbio公司)提取DNA。由上海生工生物工程技术服务有限公司进行序列测定,将测得的序列在GenBank数据库中进行比对,以同源性最高的序列确定菌株。对该菌株的16SrRNA基因序列进行系统学分析表明,它与Acidithiobacillus ferrooxidans菌同源性达95%以上,故命名为嗜酸氧化亚铁硫杆菌。
d.形态学特性
本申发明的嗜酸氧化亚铁硫杆菌512SCK-Af-17具有如下形态学特征:所述嗜酸氧化亚铁硫杆菌具有如下形态学特征,细胞呈短杆状,长1.5~3μm,宽0.2~0.3μm,见图1。
e.菌落形态特性
本发明的嗜酸氧化亚铁硫杆菌512SCK-Af-17在iFeO培养基上生长形成铁锈红圆形,中心向上隆起,表面湿润有光泽,见图2。
实施例2
嗜酸氧化亚铁硫杆菌512SCK-Af-17在低温条件下的生长特性
使用9K+S培养基,以Fe2+为能源,起始pH为1.8,在温度为14~20℃范围内分别同时振荡培养20h,以Fe2+氧化率和菌密度表示细菌的生长情况,Fe2+浓度以乙二胺四乙酸二钠络合滴定法测定,菌密度以最大可能数(MPN)法测定,最大可能数法参见王立平(最大可能数法计数乳品中双歧杆菌数量的研究,食品安全与检测,2011,36卷第5期)。结果见表1和表2。
表1不同温度条件下菌株培养20小时Fe2+氧化率
温度/℃ | 培养20hFe<sup>2+</sup>氧化率/% |
14 | 17.84 |
15 | 27.57 |
17 | 21.23 |
20 | 65.86 |
表2不同温度条件下菌株氧化Fe3+/ΣFe至90%以上时的菌密度
温度/℃ | 菌密度/×10<sup>5</sup>cell/mL |
14 | 7 |
15 | 11 |
17 | 300 |
20 | 1500 |
由表1可知,嗜酸氧化亚铁硫杆菌512SCK-Af-17菌株在14~20℃均能生长。
表2为不同温度条件下嗜酸氧化亚铁硫杆菌512SCK-Af-17菌株氧化Fe3+/ΣFe至90%以上时的菌密度,在14~20℃的条件下,氧化Fe3+/ΣFe至90%以上时的菌密度在7~1500×105cell/mL。
实施例3
嗜酸氧化亚铁硫杆菌512SCK-Af-17在低温条件下的氧化能力
使用9K+S培养基,以Fe2+为能源,初始Fe2+浓度为5g/L,温度为14~20℃、初始pH为1.8。以对数生长期的Fe2+氧化速率表示菌株的Fe2+氧化能力,其培养过程中Fe2+浓度随时间变化曲线见图3。由图3可知,20℃的停滞期最短,对数生长期的Fe2+氧化速率最快,达0.165g/L·h。该菌株在14、15、17℃的低温环境在对数生长期也保持了较高的Fe2+氧化速率,分别为0.125g/L·h、0.156g/L·h、0.155g/L·h,表明该菌株具有强的铁氧化能力。
选定14℃和17℃两个低温环境,将菌株的培养基更换为50t级尾液,50t级尾液中各成分的含量见表3,培养中Fe2+浓度随时间变化曲线见图4。从图4中可以看出,17℃环境下对数生长期中Fe2+氧化速率为0.106g/L·h,14℃时Fe2+氧化速率为0.077g/L·h。
表3 50t尾液培养基水化学组成表
实施例4
嗜酸氧化亚铁硫杆菌512SCK-Af-17低温连续培养性能
使用50t级尾液培养基,以Fe2+为能源,菌种在复合铁氧化柱中进行连续运行培养,Fe2+氧化速率表示细菌的生长情况,其中复合铁氧化柱使用不同载体进行填充,分别为100%环状填料填充YHZ-1柱、1/3改性聚氨酯泡沫填料+2/3环状填料填充YHZ-2柱、填充1/3环状填料+2/3改性聚氨酯泡沫填料填充YHZ-3柱;填充100%改性聚氨酯泡沫填料填充YHZ-4柱;以不同载体上菌种在8~12℃条件下的Fe2+氧化速率作图,结果如图5所示。
由图5可知,随着菌种对温度的适应,不同载体上的微生物达到较好的状态,其中,不同载体的复合铁氧化柱YHZ-1、YHZ-2、YHZ-3、YHZ-4中微生物铁氧化率分别平均为176.61mg/h、220.83mg/h、204.52mg/h和329.02mg/h。此外,温度的变化会对菌种的铁氧化能力产生影响,但是,在短暂的适应期后又能恢复到之前的状态。由此可见,菌种在低温条件下能保持较良好的铁氧化能力。
实施例5浸矿能力
取200g铀矿石放入高压釜反应器中,加入600mL溶浸液,溶浸液分别为接种0%与30%的512SCK-Af-17菌液,接种量为30%的溶浸液中活菌数为3.5×107cell/mL,[Fe3+]=1.2mg/L,pH=1.51,在室温下充氧压力为0.1MPa,浸泡过程中铀浓度随时间变化如图6所示,浸泡120h铀浓度分别为78.13mg/L与88.36mg/L,铀矿浸出能力提高了13.1%。由此可见,该菌具有较强浸矿能力,可应用于铀矿、铜矿等硫化矿物的生物浸出中。
由实施例的结果可知,本发明提供的嗜酸氧化亚铁硫杆菌能够在低温、低pH值环境下生长,并且在低温、低pH值条件下具有较强的铁氧化能力,在微生物冶金工业中可以得到广泛应用。
尽管上述实施例对本发明做出了详尽的描述,但它仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部实施例,人们还可以根据本实施例在不经创造性前提下获得其他实施例,这些实施例都属于本发明保护范围。
Claims (10)
1.一株嗜酸氧化亚铁硫杆菌512SCK-Af-17,拉丁文为Acidithiobacillus ferrooxidans,保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物菌种保藏中心,保藏号为CGMCC19885。
2.权利要求1所述的嗜酸氧化亚铁硫杆菌512SCK-Af-17在浸矿中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用,其特征在于,所述矿的种类包括含硫化矿。
4.根据权利要求3所述的应用,其特征在于,所述含硫化矿包括中低品位含硫金属矿,所述中低品位含硫金属矿的金属质量百分含量为0.05%~0.5%。
5.根据权利要求4所述的应用,其特征在于,所述含硫金属矿包括含硫铀矿和/或含硫铜矿。
6.一种浸矿方法,其特征在于,包括:将矿石与接种了权利要求1所述嗜酸氧化亚铁硫杆菌512SCK-Af-17的溶浸液混合后浸泡。
7.根据权利要求6所述的浸矿方法,其特征在于,所述溶浸液的体积与矿石的质量比为3ml:1g。
8.根据权利要求6或7所述的浸矿方法,其特征在于,所述溶浸液中嗜酸氧化亚铁硫杆菌512SCK-Af-17的活菌数为0.2~3.5×107CFU/mL。
9.根据权利要求6所述的浸矿方法,其特征在于,所述溶浸液的pH值为1.5~1.9,所述浸泡的温度为15~20℃,所述浸泡的时间为24~240h。
10.根据权利要求6所述的浸矿方法,其特征在于,在浸泡过程中充氧,所述充氧的压力为0.10~0.30MPa。
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